ISeminarioPeruanoBrasilerodeCooperacinen

Ciencia,TecnologaeInnovacin
EstructuradeC,T&IdeBrasilyPer

Aplicaciones de las interacciones microorganismo-planta

en la agricultura:
frijol, pallar, papa, quinua, cafe
DORIS ZIGA DVILA
LEMYB-UNALM
dzuniga@lamolina.edu.pe

Lima, diciembre 2014

 Introduccin

Contenido:
Protena (20%)
Distribucin Aminocidos
geogrfica del esenciales (Lisina
cultivo de frijol y triptfano)
y centro de Carbohidratos
origen Minerales
 Distribucin de enfermedades de
frijol a nivel nacional
Cercospora
Mycovellosiella U. Ascochyta Botrytis sp
cajani appendiculatussp sp

E. polygoniU. appendiculatus C.
Cercospora
gloeosporioides
sp
Colletotrichum C. lindemutianum
gloeosporioides
C. Cercospora sp Loreto
lindemutianumU. phaseoli
Piura
Amazonas

Lambayeque
Alternaria Uredo cajani R. solani
Cajamarca
alternata San Martn
Uromyces La Libertad
appendiculatus
C. gloeosporioides
Ancash Hunuco
Uredo cajani Pasco

Phaeoisariopsis R. solani Lima

griceola Phytophthora
Cusco nicotianae
Bipolaris sp Ayacucho

Sclerotinia E. polygoni
sclerotiorum
Arequipa Cercospora sp

Moquegua
Fusarium Botrytis sp U. Erysiphe
Senasa oxysporum
Rizoctonia solani appendiculatus polygoni
 Daos causado en plantas y granos de frijol var.
caraota en el campo de Leguminosas en Pachacmac
- UNALM

Campo de frijol con plantas muertas en focos

Plantas con pudricin por Plantas con marchitamiento por Semillas de frejol daadas por
Sclerotinia sclerotiorum Rhizoctonia solani Sclerotinia sclerotiorum
 Rol de bacterias PGPRs y micorrizas en el
control de enfermedades, rendimiento y calidad
de grano
Bacterias PGPRs: Bacterias habitantes de rizsfera
promotora del crecimiento vegetal de la planta, as como,
con un alto potencial de accin en el control de hongos
fitopatgenos (Olalde & Aguirre 1998).
Alto contenido de
nutrientes
Caractersticas
agronmicas (Altura,
Peso, etc.)
Rendimiento
Calidad de grano (sin
daos por patgenos y
sin residuos de
plaguicidas)
 Objetivos
Seleccin de bacterias PGPRs del banco de cepas
del LEMYB Marino Tabusso.

Evaluacin del efecto de bacterias PGPRs en el

control de hongos fitopatgenos y en el peso de
granos en una variedad de frijol a nivel de campo.
 Metodologa
Seleccin de bacterias PGPRs

Rhizobium
etli
Gonzles E.,
Kohashikawa N., lvarez
A. & Ziga D. 2006.

Bacillus
amiloquefascie
Calvo P., Ormeo E.,
ns E. & Ziga D.
Martnez
2010.

Micorrizas
(Clarum
intrarradicus)
 Metodologa
Preparacin del inculo microbiano
Tratamiento Dosis
40 ml de inculo / 35 kg de
Solo bacteria
semilla / Ha.
Interaccin doble o triple 20 ml por cada bacteria / 35
entre bacterias kg de semilla / Ha
1 kg de micorrizas (suelo y
Micorriza races) / 35 kg de semilla /
Ha.
20 ml por cada bacteria / 1
Interaccin Micorriza y
kg de micorrizas / 35 kg de
bacteria
semilla / Ha.

Instalacin del ensayo

Lugar: Pachacmac, frijol var.
caraota
Diseo: DBCA con 3 repeticiones

Reinoculacin y evaluacin
Germinacin, Pre-floracin y Cosecha
 Resultados y Discusin
Efecto de Bacterias PGPRs en la reduccin de la incidencia de la
enfermedad en plantas de frijol var. caraota
50
c
45 b
40
abc c
Incidencia de la enfermedad

a a
35
a
abc b ab ab
30
a b
25

20 a
15

10

0
Rizobium E10 Bacillus Rhizobium E10 Micorrizas Rhizobium E15 Testigo
+ + + Bacillus +
Bacillus Bacillus Micorrizas

Inicio Pre-floracin Cosecha

Tratamientos
Nivel de confianza: 95% Letras diferentes representan diferencias estadsticamente significativas
 Resultados y Discusin
Efecto de Bacterias PGPRs en el peso de granos de frijol var.
caraota
Tratamientos PG (g) Anlisis LSD
Rhizobium (E10) 25.50 a
Rhizobium (E15) + Bacillus (Bac15mb)
25.67 a
+Micorrizas
Testigo 26.40 a
Rhizobium (E15) + Bacillus (Bac15mb) 28.43 ab
Micorrizas+ Bacillus (Bac15mb) 29.00 ab
Qumico (HOMAI) 29.17 abc
Bacillus (Bac15mb) 33.73 abcd
Micorrizas 35.57 abcd
Rhizobium (E10)+ Bacillus (Bac15mb) +
37.50 bcd
Micorrizas
Rhizobium (E15) 39.37 cd
Rhizobium (E10)+ Bacillus (Bac15mb) 39.60 d
PG: Peso de grano
Nivel de confianza: 95% Letras diferentes representan diferencias estadsticamente significativas
Ubicacin de bacterias fijadoras de nitrgeno y
PGPRs

circular Lineal
 Fijacin simbitica

Sym

N M L E F D AB C I J

L
D B A E
C

Rhizobium
Flavonoides
OH
HO O
Nod
OH O
 CO O
Fotosintato 2 CITOSOL 2
LbO2
O2
FLOEMA
CO2 Lb
Bacteroide
PEPC MDH aspartato
PHB
Glucosa PEP AOA malato AOA ATC
RF

ATP
e- Bacteroides
NH4 N2
XILEMA Mitocondria N
ATP
ATC
ATC cetocidos N2
NH4

aminocidos
H
Leghemoglobina
 Nitrgeno fijado por diferentes cultivos

Segn Dakora y Keya (1997) P. vulgaris 24 - 65 Kg N/ha

Leguminosas de rboles 43-581 Kg N/ha v. soya 54 -248 KgN/ha
Leguminosas de grano 15-210 Kg N/ha

Sesbania sesban cultivado con cereales en una ha: N qumico 20 100

448 Kg N, 31 Kg P, 125 Kg K, 114 Kg Ca y 27.3
Kg Mg. Haba FN 75% 65%

Ibewiro et al (2000) Garbanzo 30% 15%

Mucuna pruriens cultivado con Zea mays

Factores: gentica bacteria, gentica planta,

medio ambiente, manejo agrcola

Haba mucho mejor en un sistema de policultivo

 Cultivo de P. lunatus

Tarwi
Frijol
Habas
Arvejas
Pallar
Garbanzo
PRUEBA DE ANTIBIOTICO EN DISCO CRECIMIENTO A pH
8.8

DIFERENCIAS ENTRE UNA RAIZ SIN

NODULOS Y UNA RAIZ CON NODULOS
FORMADOS POR LA CEPA PSNC4N2 EN COLORACION INTERNA DEL
RAIZ DE PALLAR CRIOLLO NODULO
CEPA
PSNC4N2
 65 S1, S4, S5
Arbol filogentico del 87 S6 V. faba
Gen rpoB 99
S13
98 S11
98 S22
100
100 R. leguminosarum USDA 2370
R. indigoferae
R. etli CFN42T
89 100 E10, E18, E13, E15 P. vulgaris
54 95 E17
99 E16, E14, E26
E1
P2N3
100 93 R yanglingense CCBAU71623
100 R. gallicum R602sp
R. mongolense USDA1844
R. loessense CCBAU7190B
100 A. rhizogenes Kag3
55 R. tropici CFN299
A. rhizogenes Chag4
100 R. huautlense SO2
79 E5
100 R. galegae
51
R. undicola LMG11875
94 A. tumefaciens C58
100 R3, R5
R6 P. lunatus
Mesorhizobium loti USDA3471
0.02
Ormeo-Orrillo et al. (2006) Syst. Appl. Microbiol. 29: 253 262.
RESULTADOS PROMEDIOS DE LOS CARACTERES EVALUADOS EN EL
FRIJOL CANARIO CENTENARIO INOCULADOS CON CEPAS DE
RHIZOBIUM, APLICACIN DE BIOESTIMULANTES Y FERTILIZACIN .

Rhizobium y Rhizobium + bioestimulante a la floracin presentaron

mayores rendimientos
 RENTABILIDAD DE LOS TRATAMIENTOS EVALUADOS

Rhizobium y Bioestimulantes en prefloracin y en floracin alcanzaron mayores

valores de rentabilidad que el tratamiento qumico 5 -
 Control de fitopatgenos

Anlisis
microbiolgico

Muestreo de rizosfera del

Cultivo de papa

Aislamiento de Bacterias del gnero

Bacillus spp. Actinomycetos spp. Azotobacter spp.

Pseudomona spp.
Bacterias y control de fitopatgenos

2
3

Control de Rhizoctonia solani por cepas de Bacillus

4 5

6
 Solubilizacin de fosfato

National Botanical Research

Institute's phosphate growth Azotobacter
medium (NBRIP) Nautiyal C. S.
1999.
 Producin de AIA

Control negativo
Control positivo

Hall et al., 1996 and Glick et al., 1998

Pruebas de Promocin de crecimiento en invernadero
 T1 T2
BA BA
C
C

Variedad Desiree
Variedad Unica
T3 T4
BA BA
C C

Variedad Yungay
Variedad Canchan
 Peso de tubrculo y de la planta

Variedad Yungay Variedad Canchan

25 30

25
20
20
15

peso (gr)
peso (gr)

15
10 10

5 5

0
0
ol B.A 1 IB1
ntr 7M
B.A

o
l

1a

C
ntro

8+

C c
Ba
cE

7M
Co

Ba

c1
Ba

Peso seco de tuberculo Peso seco planta Peso seco tuberculo Peso seco de planta

Prueba de Tukey HSD

 Perfil Box de cepas de Bacillus

DNA
1Kb

1200
0

2000
1650

1000
850

500
200
100 Plus 2g 2p 6 8 10 12 26 27 9 21 22 23 24 25 + 14 15 19 20
Box-PCR 17 30
A A B C C C C C C1 C1 C1 C1 C1 C1 D E E E F
G
Eric-PCR A B C C C C C D C C C C C E F F F G H

Anlisis tipo fingerprint o huella

Total de cepas 20 genmica con alta reproducibilidad
Perfiles Box 8 encontrada en S. pneumoniae
(secuencia repetida conservada)
Perfiles Erick 8 Caja:boxA, boxB y boxC, 59,45,50
pb
Tabla 4. Capacidad de cepas aisladas Cultivo de Cafe
de la Filsfera de caf para inhibir el
crecimiento del hongo Mycena citricolor,
un fitopatgeno foliar del caf.
CEPA Porcentaje de inhibicin
Control 0 a A B
TS FL T7 9 b
CS ED T6 12 b
CS ED T5 13 b
CS ED T9 15.5 b
CRS FL T5 31 c
CS ED T7 31 c
TS FL T8 33 cd
TS FL T10 33 cd
TS FL T4 33 cd
CS FL T6 35.5 cd
A B
CRR FL T6 35.5 cd Figura 3. Actividad
C
TS FL T3 35.5 cd antagnica de cepas
TR FL T8 36.5 cde obtenidas de la filsfera
TS FL T2 38 cde de plantas de caf frente
CRR FL T8 39 cde a M. citricolor.
CRR FL T5 39 cde A: M. citricolor (control)
CRR FL T7 39 cde y B y C: Interaccin M.
citricolor cepa.
CS FL T7 40 de
CS FL T5 44 e
CS FL T4 44 e

Prueba estadstica ANOVA LSD (p value <

0.05)
Ensayo a nivel de campo cultivo de quinua

Efecto de la Inoculacin en
el crecimiento del cultivo
de Quinua en los campos
de Santa Rita (Arequipa) y
Salcedo (Puno) utilizando
cepas PGPR

Donde
C32:
Pseudomona
aislada de la
rizsfera de
maca;

PS44, AC4,
RH27: Son cepas
aisladas de la
Instituciones que producen inoculantes

Universidad Nacional
Pedro Ruiz Gallo

Universidad Nacional
de Cajamarca Rizocaj

Universidad Nacional
Agraria La Molina Ecorizo

Universidad Nacional
San Cristbal de Huamanga
Rizomack
Universidad Nacional
San Agustn de Arequipa

Universidad Nacional Agraria

de la Selva, Tingo Mara Amazona

Andes
Estacin Ecolgica de Andahuaylas (micorrizas)
Costa
IDEMA, Instituto de Defensa del Medio Ambiente
Azotolam y Rizolam
 Control de calidad de inoculantes Anlisis Moleculares
comercializados Plsmidos simbiticos
Instituciones recomiendan: Perfiles Box

Soporte slidos* y lquidos
Control Microbiolgico
Recuento de hetertrofos
Recuento de mohos y
levaduras
Recuento de actinomycetos
Recuento de Escherichia coli
Anaerobios totales
Recuento de Rhizobium,
Azotobacter, segn el caso
NMP de Rhizobium en plantas
Definicin de parmetros
Para lmites permisibles
Control fsico qumico
Mnimos para Rhizobium
Ph 108 cel/ml o 108 cel/ g
Mximos para el resto de mo.
CE
Humedad
Metales pesados*
otros Interaccin del inoculante con otros
productos

NORMATIVA EN BRASIL, URUGUAY Y

ARGENTINA, EN PERU INSIPIENTE
 PLAGUICIDAS BIOLOGICOS DE USO
AGRICOLA REGISTRADOS EN SENASA -
40 2013
36.68

35

30

25

20.46
20

15
11.97

10 9.27 8.88

PQ, 545 0
PB, 250 Productos Biolgicos
- Bacterias
Productos12.74
Biolgicos
- extractos vegetales
Feromonas

Bacterias: Bacillus thurigiensis, B. subtilis Hongos: Trichoderma spp., Paecilomyces lilacinus

Extractos vegetales: aceites de ricinus, ficus Bioestimulantes: Giberelinas, Auxinas
Feromonas: Gossyplure Otros: c. Ascrbico, quitosano, etc.
 Conclusiones
Segn la Dra Hungra , se aproxima una dcada de oro para la microbiologa del suelo en la industria,
agricultores y la sociedad.
Para el 2040, 2 billones de personas necesitan ser alimentadas, pero a su vez el mapa concetracin
demografica coincide con el mapa de degradacin de suelos, tornandose mas critico la produccin de
alimentos en lugares mas vulnerables.
El consumo de fertilizantes es cuantioso, 173 millones de toneladas y sigue creciendo, y resulta muy
costoso para los paises que lo importan.
Hay contribuciones significativas por Arachis, Censtrosema, Desmodium y Lupinus por ej, entre 200 a
520 kg de N ha. Por ello las bfn son fundamentales en la agricultura.
Todos estos estudios nos permite hacer una seleccin integral de las mejores cepas bacterianas capaces
de promover el crecimiento de la planta aun en condiciones de estres para una aplicacin en el campo.
Se han encontrado respuestas positivas en cultivos de frijol, pallar, papa, maca, aguaymanto, quinua
entre otros, aplicando inoculantes microbianos.
Los parmetros mejorados son, rendimiento, materia seca, contenido de nutrientes, acido arcorbico,
glucosinolatos.
Tambin baja la incidencia de dao causado por agentes fitopatgenos, Rhizoctonia, Fusarium,
nematodes entre otros.
Los microorganismos claves funcionan en condiciones de estres por frio, deficiencia de humedad, suelos
salinos, entre otros.
formulacin de un biofertilizante/controlador biolgico que sea econmico cuyo uso este orientado hacia
la agricultura sustentable y aplicable en diferentes regiones del pais.
 Colaboraciones, Redes
Instituciones Internacionales
CCG, U Nacional Autnoma de Mxico, Cuernavaca-Mxico, Dra. E.
Martnez.
Universidad de Salamanca. Espaa, Dra. E. Velsquez.
CSIC, Granada Espaa, Dr. J. Sanjuan
U Central de Venezuela, Dra. M. Toro
U. Estadual de Londrina-Brasil, Dr. G.Andrade
CNR-Italia, Dra. M. Finetti
CERELA, Tucumn Argentina. Dra. Graciela Vignolo
Instituciones Nacionales
. UNALM Programa de tuberosas, Programa de leguminosas, Ind.
Alimentarias
. INIA-Ministerio de Agricultura, Estacin Experimental Ilpa-Puno. Estacin
Experimental Santa Rita Arequipa
. UNSLGI-Ica
.UNSCH-Ayacucho
Otros: Ecoandino SAC, AA Ica, AA Ocucaje, AA Aymara
Redes: BIOFAG, Cyted-Espaa (2004-2011), Comclara-Alice2 (2009-2011)
R Peruana de Biofertilizantes, Concytec-UNALM
 Publicaciones en Libros

2012. Manual de Microbiologa Agrcola. Rhizobium, PGPRs, indicadores de

fertilidad e Inocuidad. D. Ziga Dvila. Universidad Nacional Agraria La
Molina.

2011. Microorganisms in Industry and Environment. D. Ziga Dvila, J.

Tolentino Macalup, M. Garca Wong, W. Prez Porras, M. Matsubara Bautista,
L. Ramos Pajuelo & K. Ogata. Characterization of rhizospheric bacteria isolated
from maca (Lepidium meyenii W.) in the highlands of Junin-Peru. From
scientific and industrial research to consumer products. Antonio Mendez Vilas
(ed) World Scientific Pub Co. Chapter: 21-25.

2011. Microorganisms in Industry and Environment. D. Yino Oshiro, L.

Ramos Pajuelo, M. Matsubara Bautista, L. Espinoza Melgar and D. Ziga
Dvila. Effect of different rhizospheric bacterias in the growth of Gossypium
barbadense L. in Per. From scientific and industrial research to consumer
products. Antonio Mendez Vilas (ed) World Scientific Pub Co. Chapter: 41-44.
 Publicaciones en Revistas Cientficas
2014. Ormeo et al. cepas nuevas de bradyrhizobium aisladas de pallar
2014. Arcos y Ziga. Rizobacterias en el cultivo de papa
2014. Ziga et al. rizobacterias en el cultivo de quinua en zona de arequipa
2013. Ramos et al. P. punonensis aisladas de la zona de Puno
2010. Annals of Applied Biology. 157: 259-271. Oswald A, Calvo P, Ziga D, Arcos J. 2010.
Evaluating soil rhizobacteria for their ability to enhance plant growth and tuber yield in potato
2010. Braziliam Journal of Microbiology 41: 899-906. Calvo, P. Ormeo, E. Martnez, E.,
Ziga, D. 2010. Characterization of Bacillus isolates of potato rhizosphere from Andean soils of
Peru and their potential PGPR characteristics.
2010. Biological Nitrogen Fixation and Plant Associated Microorganisms. Ogata K, Lorite M J,
Sanjuan J, Ziga D. Growth and motility of plant growth promoting rhizobacteria isolated from
maca rhizophere. In XIII Sefin. 15 18 June. Ed. M Becana. Zaragoza. Spain. Pag 35-36.
2010. Ecologa Aplicada 9: 31-39. Calvo, P. y Ziga, D. 2010. Caracterizacin bioqumica y
fisiolgica de cepas de Bacillus spp. aislados de la rizosfera de papa (Solanum tuberosum).
2009. Archives of Microbiology 191: 659 668. Alvarez-Martinez, E; Valverde, A; Ramirez-
Bahena, M; Garcia-Fraile, P; Tejedor, C; Mateos, P; Santillana, N; Ziga, D; Peix, A; Velzquez,
E. 2009. The analysis of core and symbiotic genes of Vicia sativa and Vicia faba rhizobial
endosymbionts from different continents reveals their common phylogenetic origin and suggests
the distribution of R. leguminosarum strains together with Vicia seeds in the world.
2008. Ecologa Aplicada 7: 141-148. Calvo, P., Reymundo, L. y Ziga, D.. Estudio de las
Poblaciones Microbianas de la rizosfera del cultivo de papa (Solanum tuberosum) en zonas
altoandinas.
2008. Ecologa Aplicada 7: 131-139. Ramos, E. y Ziga, D. Efecto de diferentes inoculantes
sobre la actividad microbiana en la rizsfera del cultivo de pallar (Phaseolus lunatus var. sieva) en
condiciones de campo.
 Proyectos de Investigacin
Proyectos
Procyt-Concytec, Especial-Concytec, Protec-Concytec, Procom-Concytec
Loreal-Unesco-Concytec, Proyecto bilateral CSIC- Concytec, Proyecto
bilateral Mincyt Concytec, Proyecto Fincyt, Proyecto Fidecom,
Fondecyt Itunalm.
Profesores
UNALM: Dra. C. Velezmoro, Dr. F. Camarena, Biol. K. Ogatta Ing. R.
Egzquiza, Dr. F. Camarena, Ing. A. Huaringa, Ing. E. Mostaceros. M.Sc.
M. Memenza (UNMSM)

Tesis de Biologa
P Calvo, N Kohashikawa, C la Torre, M Garca, W Prez, J Tolentino, L
Ramos, C Arango, P Ortiz, C Ayaipoma, J Mayo, JC Fernandez, F. Ysla, L
Flores, C Chumpitaz, M Liceta, I Vergani.
Tesis de Maestra y Doctorado
E Ramos, M. Memenza, M Matsubara, K Ogata, R Santos
N Santillana, J Arcos, L Reymundo, L Espinoza,
 Universidad Nacional
Agraria
La Molina
Lima - Per

Laboratorio de Ecologa
Microbiana
Y Biotecnologa

Haga clic para modificar el estilo

Segundo nivel
Tercer nivel
ENTREGADO EL 17 DE JULIO 2014
Cuarto nivel
 Organizacin del
laboratorio

Profesores del dpto. de Biologa, D Ziga, K Ogata-Unalm

Un post doctorando, dr. Prashant (India)-Concytec 2014-2016
Un investigador repatriado, dr. E Ormeo-Fincyt 2015-2017
Un investigador visitante, dra. M Finetti-CNR, Italia, Fincyt 2015
Dos maestrandos
Cinco doctorandos
7 asistentes de investigacin
10 tesis de pregrado
Dos bilogos para anlisis de control de calidad microbiolgica
Un tcnico
Practicantes de otras instituciones
 Proyecto Internacional 2014-2018
Red AgroMicroBios, Cyted-Espaa
USO DE LA BIODIVERSIDAD REGIONAL PARA EL DESARROLLO
E IMPLEMENTACIN DE PRCTICAS SUSTENTABLES DE
BIOFERTILIZACIN EN CULTIVOS DE IMPORTANCIA
AGROALIMENTARIA EN IBEROAMRICA.
Coordinador: Dr. A. Lagares de la UN la Plata-Argentina

Paises : 12
Per, Brasil, Uruguay, Argentina, Venezuela, Bolivia, Colombia, Chile,
Cuba, Mxico, Espaa, Portugal.

N grupos que participan en la propuesta: 25

N de personas que participan en la propuesta: 131
N total de investigadores que participan en la propuesta: 67
N total de empresas que participan en la propuesta como un grupo /
socio ms: 9
 Prximos eventos 2015-2017

2015. 1. PrimerTaller Itinerante sobre biofertilizacin - TIB (Red

Agromicrobios/Cyted)-XXVII Relar. Dra. M. Hungria-Dr. A Lagares.
UNLPlata.

2015. 2. XXVII RELAR. Brasil. Dra. M Hungria-Embrapa.

2016. IX ENCUENTRO LATINOAMERICANO Y DEL CARIBE DE

BIOTECNOLOGIA, REDBIO 2016 PERU. BIOTECNOLOGIA PARA
EL DESARROLLO Y USO SOSTENIBLE DE LA BIODIVERSIDAD
Lima, Junio 27-Julio 1, Dr. E Fernndez-UNALM.

2017. III IBEMPA, XXVIII RELAR. Lima, Per. Dra. D Ziga-UNALM.

Otros cursos
2015. Curso terico-practico internacional, interaccin planta
microorganismo y talleres de bioinformatica
2016. Talleres sobre biofertilizacion
Muchas Gracias