Universidad Nacional de Colombia

Laboratorio de Fisicoqumica II
Descomposicin enzimtica de perxido de hidrogeno
Fecha de realizacin: 18 de Mayo de 2017
Silvia Lorena Ramrez Marn Cdigo: 01175110
Jonathan Andrs Ortiz Forero Cdigo: 01175086

Abstract: In this practice, the hydrogen peroxide decomposition was analyzed from the action of
the catalase enzyme present in two varieties of potato: Criolla and Pastusa. From the measurement
of the generated oxygen, was posibble to obtain data of the velocity of the enzyme-catalazied
reaction at different concentrations of hidrogen peroxide. With the data obtained, the Michaelis-
Menten model associated with enzymatic kinetics was applied, thus obtaining the maximum
reaction rate and the KM (Michaelis constant).
Introduccin
La descomposicin del perxido de hidrogeno es de gran importancia a nivel biolgico debido a que
los peroxisomas generan perxido de hidrogeno despus de realizar la degradacin de cidos grasos
donde tambin hay liberacin de energa en forma de calor. Debido a la alta toxicidad del perxido
de hidrogeno para las clulas vivas, en la clula se activa una enzima oxidoreductasa llamada
catalasa que est encargada de la descomposicin del perxido de hidrogeno como se muestra a
continuacin. [1]
22 2() + 22 () + 2() (1)
Teniendo en cuenta lo anterior, en esta experiencia se busc estudiar de manera cuantitativa la
descomposicin enzimtica del perxido de hidrogeno medida por la enzima catalasa, la cual fue
extrada de dos tipos de papa (criolla y pastusa) para establecer una comparacin. De igual modo,
se busca evaluar el modelo para cintica enzimtica de Michaelis-Menten, el cual permite describir
la cintica de la reaccin catalizada mediante dos parmetros trascendentales como lo son la
velocidad mxima y la constante de Michaelis (KM) que se obtienen a partir del ajuste de la siguiente
ecuacin que lleva el nombre del modelo mismo. De manera adicional, la informacin antes
registrada permite mostrar la importancia de la catalasa como catalizador biolgico el cual de
manera efectiva, permite aumentar la velocidad de descomposicin del perxido de hidrogeno.
[]
= (2)
+ []
Donde representa la velocidad de produccin del producto, [S] la concentracin del sustrato y
y representan de manera respectiva el valor de la velocidad mxima y la concentracin de
sustrato en la cual la velocidad de la reaccin es la mitad de la velocidad mxima, respectivamente.
A partir de la ecuacin de Michaelis-Menten se tiene que vara la velocidad linealmente segn la
concentracin del sustrato a bajas concentraciones siendo as la cintica de primer orden,
hacindose independiente de la concentracin del sustrato a concentraciones ms altas obteniendo
la siguiente ecuacin:
1 2
+ 2 2 + 2 + 2 (3)
1

Cuando la concentracin de sustrato es mucho mayor que la de la enzima se puede aplicar el

tratamiento para obtener la velocidad de la reaccin. Es importante tener en cuenta que el cambio
en la concentracin del sustrato respecto al tiempo ser muy pequea debido a la baja
concentracin del complejo ES, por lo cual, se obtiene la velocidad en funcin del complejo ES como
se observa a continuacin:
[]
= 1 [][] 1 [] 2 [] = 0 (4)

Por lo cual, [ES] ser equivalente a la siguiente expresin:
1 [] []
[] = (5)
1 + 1 + 2 []
De acuerdo a lo anterior, podemos afirmar que la velocidad estar dada por la siguiente expresin:
2 [] []
= 2 [] = (6)
(1+2 ) + []
1

Teniendo en cuenta que:

= 2 [] (7)
1 + 2
= (8)
1
Para obtener de este modo la expresin de velocidad de descomposicin:
[2 2 ]
= (9)
+ [2 2 ]

Materiales y mtodos
Se coloca el kitasato con un agitador magntico sobre una plancha de agitacin y se conecta la
manguera lateral del kitasato al sensor de presin, el cual se encuentra unido al labquest y este al
computador en donde se registrar el aumento de la presin respecto al tiempo. Previamente se
debe realizar la extraccin de la enzima para lo cual se toma una cantidad de papa pastusa y criolla
previamente pesada, se licuan cada una de las especies en una pequea cantidad de agua y se filtra
cada una, cada uno de los filtrados se llevan a un volumen conocido (solucin de catalasa).
Luego de esto, se agrega al kitasato los volmenes de perxido de hidrogeno y agua, se coloca en la
jeringa 1,0 ml de la solucin de catalasa (unida al tapn) y se tapa con el tapn hermticamente. Se
comienza a tomar datos de presin en funcin del tiempo hasta que la presin se estabiliza, luego,
se agrega los 1,0 ml de la solucin de catalasa en la jeringa y tomar datos hasta que se puede
determinar la pendiente de velocidad inicial.
Toxicidad de reactivos
El perxido de hidrogeno es capaz de actuar como agente reductor u oxidante. Las disoluciones de
perxido hasta el 6% son reconocidas como seguras y se usan como agente microbiano, agente
oxidante y blanqueador. Produce radicales libres que atacan una amplia variedad de compuestos
orgnicos, como lpidos y protenas, el contacto directo con la piel puede generar irritaciones en
caso que se tengan pequeas cortaduras y puede blanquear la queratina del pelo de manera
irreversible. La ingestin puede provocar ardor en la garganta, dolor en el pecho y vmito, la
formacin espontanea de oxgeno en el esfago o estomago puede ocasionar heridas.
Resultados y anlisis

Conclusiones

Bibliografa