Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Prctica:Determinacin de aminocidos terminales con grupo alfa amino libre. Mtodo

de Sanger.
Diego Vargas Gloria Paola.
Lpez Portillo Felipe de Jess.
Laboratorio de Bioqumica deQ.B.P.Seccin 3,Semestre 2/17; Grupo: 4QM1
Prolongacin Manuel Carpio y Plan de Ayala s/n, Miguel Hidalgo, Santo Toms, 11350 Ciudad de Mxico.
Objetivos. Esquema a escala del cromatograma obtenido y su
interpretacin. Escribir las condiciones del
Identificar el aminocido alfa-amino terminal de las cromatograma.
cadenas de la molcula de hemoglobina mediante el
mtodo de Sanger.

Resultados.

Interpretacin de cada paso efectuado en la

preparacin del derivado de dinitrofenilado.

PROCEDIMIENTO OBJETIVO
Disolver hemoglobina en Mantener el medio alcalino ( 8-9 de
NaHCO3 al 4.2% pH), ya que el FDNB reacciona en
solucin dbilmente alcalina

DNFB Unin con los grupo amino libres;

reacciona con los grupo amino,
imidazol y fenoles libres, dando los
correspondientes dinitrofenilados

HCl 3N Terminar la reaccin de la

dinitrofenilacin

ter saturado con solucin Eliminar el DNFB Juanque no haya

acuosa de FeSO4 reaccionado. Evita la proyeccin del
DNFB.
Bao mara Evaporar los residuos de ter restantes.

Centrifugar Separar el precipitado.

5 ml HCl 6 N + 121 C + 15 Condiciones necesarias para una
lb/in2 hidrolisis acida.
Resultados de valores de Rf obtenidos en forma de
Serie de extracciones Extraccin del alfa aminocido de la tabla.
hidrolizado hemoglobina dinitrofenilado.

Cromatografa Observar el aminocido principal de la MANCHA Rf prctico Rf terico

hemoglobina Val 0.71 0.49
Phe 0.62 0.35
Ala 0.61 0.27
DNFB 0.47 ----
PROBLEMA 0.44 ----
 0.73 ----
Clculos del Relacin frente (Rf).
Bibliografia.

Garrido, A. Teijn, J. (2006). Fundamentos

de bioqumica estructural. Madrid: TEBAR.
Pg(s). 165
Klein, D. (2013). Qumicaorgnica. Madrid:
Medica Panamericana. Pg(s). 420.
Plummer, D. (1994). Introduccin a la
bioqumica prctica. Madrid: Universidad de
Barcelona. Pg(s). 148-150.

23.6
DNP-Alanina Rf = = 0.61
38.6
23.8
DNP-Fenilalanina Rf = = 0.62
38.6
.
DNP-Valina Rf = = 0.71
.
19.2
DNFB Rf = = 0.47
38.6
.
Muestra Problema Rf = = 0.73
.

Discusin.

El anlisis cromatogrfco de los dintrofenilados N-

terminales y de los otros aminocidos libres y de los
DNP-sustituidos facilitan ciertos datos acerca de la
secuencia de aminocidos en la hemoglobina.

Debido a la similitud existente entre las relaciones

frente (Rf) de la valina y la muestra problema con
valores de 0.71 y 0.73 respectivamente se deduce que
el aminocido alfa terminal de la muestra de
hemoglobina es la valina. Durante la realizacin de la
cromatografa hubo restos de DNFB que se observa con
un Rf de 0.44 dicho valor puede existir por un error en
la realizacin de la cromatografa o por residuos que
quedaron despus de las extracciones con ter.

Conclusiones.

Se determin el grupo alfa amino terminal mediante la

reaccin de Sanger de acuerdo a los resultado se
deduce que el aminocido es la valina.