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Prctica 6: Cromatografa en columna

Laboratorio de principios de qumica orgnica


Universidad Nacional de Colombia
Profesor Carlos A. Guerrero
05 de octubre del 2017

Grupo 3: Marien Alejandra Aparicio Crdoba 25492916


Nicols Cuadrado Caro

1. OBJETIVOS

1.1. GENERAL
1.1.1. Conocer las cromatografa de columna como tcnica de separacin de
mezclas de sustancias, sus caractersticas y los factores que en ella
intervienen.

1.2. ESPECFICOS
1.2.1. Separar una mezcla de componentes orgnicos mediante la tcnica de
cromatografa de columna, usando acetato de isopropilo como eluyente.
1.2.2. Empacar una columna de cromatografa.
1.2.3. Entender y analizar el efecto de la polaridad en la cromatografa de columna.
1.2.4. Caracterizar una mezcla que contiene varios componentes mediante los
conocimientos tericos adquiridos.

2. DIAGRAMAS DE FLUJO DEL PROCEDIMIENTO

2.1. Preparacin de la columna


2.2 Cromatografa en columna

3. DATOS EXPERIMENTALES

El montaje obtenido para la cromatografa de columna se muestra en la figura 1, donde se


puede evidenciar la columna ya preparada y en donde la mezcla ya se ha aplicado sobre la
columna y se puede proceder a agregar acetato de isoproplo.

Figura 1, Montaje de la columna empacada con muestra.

Una vez realizado el montaje, procurando que la columna de slice este bien empacada, se
procede a agregar el acetato de isoproplo, el cual es un disolvente medianamente polar, y
despus de aproximadamente 10 minutos se puede observar la columna desarrollada con dos
fases, como se observa en la figura 2.
Figura 2, cromatografa de columna parcialmente desarrollada.

Se procedi a hacer la cromatografa de capa fina con las dos sustancias obtenidas de las dos
fases de la capa fina comparndolas con los dos colorantes que la practica anterior se haba
determinado, Sudan III y Rojo de Metilo. El montaje y el procedimiento ya se describi en la
prctica pasada y se puede observar en la figura 3.

Figura 3, cromatografa de capa fina

Para el anlisis de datos se utilizaron distintos coeficientes para poder tener un anlisis
cuantitativo de las muestras, y se describen por las siguientes relaciones.


= (1)


= 100 (2)
10


= (3)


= (4)

A primera impresin como se observa en la figura 4, las muestras recogidas por la


cromatografa de columna comparada con los colorantes sudan III (1) y rojo de Metilo (2), se
observa claramente que las alturas de arrastre del disolvente son muy parecidas lo que nos da
un indicio que los colorantes estn presentes en la muestra.

Rojo de Sudan III


metilo

Figura 4, cromatografa de capa fina.

En las tablas 1, 2, 3 y 4 se evidencia los clculos realizados para la caracterizacin cuantitativa de


las cromatografas

Rf (1) Rf (2)
Fase Patrn Problema Patrn Problema
Roja 0,81 0,79 0 0
Naranja 0 0 0,23 0,24
Tabla 1, coeficientes RF

Ensayo hRf (1) hRf (2)


Fraccin Patrn Problema Patrn Problema
1 61 59 0 0
2 0 0 25 25
Tabla 2. Resultados de los hrf de los colorantes en CCF.

Ensayo hRst (1) hRst (2)


Fraccin Patrn Problema Patrn Problema
1 1 0,96 0 0
2 0 0 1 1
Tabla 3. Resultados de los hRst de los colorantes en CCF.
hst (1) hst (2)
Fraccin Problema Patrn Problema
1 0,97 0 0
0 0 1 1
Tabla 4. Resultados de los hst de los colorantes en CCF.

4. DISCUSIN DE RESULTADOS

5. CUESTIONARIO
5.1. Un colorante se piensa que puede ser azul de metileno, Cmo se podra comprobar
esta suposicin utilizando un procedimiento basado en una tcnica cromatogrfica?
Haciendo uso de la cromatografa de capa fina, se buscan diferentes eluyentes que presenten o
no afinidad con la muestra y las fases estacionarias adecuadas que estn disponibles en el
laboratorio. Se procede a determinar el valor de Rf para realizar el estudio adecuado y
determinar la composicin de la muestra, y comprobar la presencia de azul de metileno en
este caso.

5.2. Qu debe hacerse para encontrar el eluyente adecuado para una sustancia en una
cromatografa de columna?
Con la estructura de la molcula conocida se deben tener en cuenta las interacciones
intermoleculares que pueden existir entre la sustancia y tanto la fase mvil como la
estacionaria para determinar si la sustancia se mover a travs de la columna.

5.3. La recuperacin cuantitativa del producto principal de la prctica, sera ms


eficiente mayores o menores de 8 mL? Por qu?
Con fracciones pequeas se puede garantizar la separacin de un solo componente, si son
grandes las fracciones puede ocurrir que el componente que se mueve tenga algo del otro
componente. En este caso sera ms eficiente la fraccin menor a 8 mL.

5.4. Indique algunas de las aplicaciones de la cromatografa en columna y de capa fina.


La cromatografa de columna sirve para la separacin de componentes de plantas medicinales,
de sntesis orgnica, de colorantes. Identificacin de hioscina y de morfina, separacin de
cido actico, alcohol cetilico y metil-etil cetona. Adems en la produccin sinttica de
acetaminofn, identificacin de la imina de la N-acetilbenzoquinona, entre otros.

La cromatografa de capa fina se suele utilizar para la identificacin de una sustancia


conocida en una mezcla por su comparacin con una sustancia patrn. Por otro lado sirve para
determinar el grado de pureza de alguna muestra.

5.5. Escriba una lista de eluyentes utilizados en cromatografa en columna en orden de


polaridad decreciente.
ter de petrleo
ter dietlico
Ciclohexano
Acetato de etilo
Tetracloruro de carbono
Piridina
Benceno
Etanol
Cloroformo
Metanol
Diclorometano
Agua
cido actico

5.6. Cul es la diferencia entre la cromatografa en capa fina y la cromatografa en


papel?
En la cromatografa sobre papel y en la cromatografa en capa fina la fase estacionaria no se
dispone en forma de columna, sino que est constituida, en el primer caso, por una hoja de
papel de filtro y, en el segundo, por una capa de absorbente finamente dividido extendida
sobre una placa de vidrio o de plstico. El principio de funcionamiento es muy similar para
ambos tipos de cromatografas. En la cromatografa en capa fina se desarrolla ms
rpidamente, proporciona mejores separaciones y se puede elegir entre diferentes adsorbentes.

5.7. Indique la toxicidad de las sustancias que utiliz y cmo se podran desechar.
- ter de petrleo: Provoca irritacin cutnea y daos en los rganos. Es txico para
organismos acuticos, con efectos nocivos duraderos. Se sospecha que perjudica la
fertilidad. Se recomienda recoger con materiales absorbentes o en su defecto con
arena o tierra secas y depositar en contenedores para residuos para su posterior
eliminacin.
- Sudn III: es nocivo en caso de inhalacin, nocivo en contacto con la piel. Debe ser
eliminado en el punto de recogida de residuos especiales o peligrosos, conforme la
reglamentacin local.
- Rojo de metilo: Es txico para los organismos acuticos, puede provocar a largo
plazo efectos negativos en el medio ambiente acutico. Se debe evitar su liberacin al
medio ambiente, desechar en recipiente adecuado.
- p-Nitrofeno: Es nocivo por ingestin, tiene peligro de efectos acumulativos. Es
nocivo para los organismos acuticos, provocando efectos negativos en el medio
ambiente acutico. Se debe almacenar alejado de agentes oxidantes y de bases fuerte.
Sin embargo, no requiere medidas especiales.

5.8. Qu fenmenos fsico-qumicos intervienen en una separacin cromatogrfica de


columna?
Fuerzas intermoleculares son el fundamento de la separacin cromatogrfica, tanto las fuerzas
de van der Waals dipolo-dipolo y puentes de hidrgeno son las que definen el movimiento de
las sustancias.

5.9. Qu es una serie eluotrpica?Qu utilidad tiene en la cromatografa de columna?


La serie eluotrpica es una lista de eluyentes organizados por la polaridad. Como la
cromatografa depende de las fuerzas intermoleculares, un eluyente de mayor polaridad
arrastrar ms una sustancia polar a travs de la columna.

5.10. Realice un cuadro comparativo entre la cromatografa de capa fina y de columna.


Cromatografa de capa fina Cromatografa de columna

- La fase estacionaria es slida - La fase estacionaria puede ser slida


- Es una tcnica analtica, es decir o una suspensin
para el anlisis de componentes - Es una tcnica de purificacin, pues
- Se compara simultneamente con permite separar los componentes de
patrones. - una mezcla
- Los componentes se diferenciarn - No se puede hacer una
en solubilidad y en la fuerza de su comparacin simultnea con
adsorcin. patrones.
- Consiste en una capa delgada de un - Utiliza una columna de vidrio
adsorbente depositada sobre un vertical que se llena con un soporte
soporte plano como una placa de slido
vidrio, o una lmina de aluminio o
de plstico.

6. CONCLUSIONES
La mezcla de colorantes de la muestra problema est conformado por Rojo de metilo
y Sudan III
Un correcto empaquetamiento de la columna es crucial y vital para llevar a cabo una
separacin correcta, ya que en caso contrario se presentarn diferentes tipos de
transporte.
Realizar una concentracin de la muestra es beneficioso para la determinacin de
colorantes, con la precaucin de no deteriorar la muestra de colorantes.
Las cromatografas de columna y de capa fina son dos tcnicas complementarias que
sirven para mejorar el anlisis de una muestra problema, sabiendo que poseen
diferencias, pero se rigen por el mismo principio de polaridad.
Es muy importante tener claro la polaridad de la muestra para la correcta
identificacin de los componentes, con el solvente adecuado.

7. BIBLIOGRAFA
[1] Guerrero C., Polana W., Principios de Qumica Orgnica: Guas de Laboratorio. Bogot. 2015
[2] Lide D. R.. , CRC Handbook of Chemistry and Physics, Editorial Advisory Board, 2005
[3] Mohring J.R., Hammond C.N., Schatz P.F, Thechniques in organic chemistry 3 Ed. England:
W & H Freeman. B
[4] Molina, B.P; Lorenzo, G.A; Velasco, L.M; Tarraga, T.A; Alajarin, C.M; Lidon, E.J & Guirado,
M.A. (1991) Prcticas de qumica orgnica. Universidad de Murcia. CompoBell. Pgina 23-26.
[5]Walton, H.F & Reyes, J. (1983) Anlisis qumico e instrumental. Editorial
Revert. Barcelona; Espaa. Pgina 323

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