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1. OBJETIVOS
1.1. GENERAL
1.1.1. Conocer las cromatografa de columna como tcnica de separacin de
mezclas de sustancias, sus caractersticas y los factores que en ella
intervienen.
1.2. ESPECFICOS
1.2.1. Separar una mezcla de componentes orgnicos mediante la tcnica de
cromatografa de columna, usando acetato de isopropilo como eluyente.
1.2.2. Empacar una columna de cromatografa.
1.2.3. Entender y analizar el efecto de la polaridad en la cromatografa de columna.
1.2.4. Caracterizar una mezcla que contiene varios componentes mediante los
conocimientos tericos adquiridos.
3. DATOS EXPERIMENTALES
Una vez realizado el montaje, procurando que la columna de slice este bien empacada, se
procede a agregar el acetato de isoproplo, el cual es un disolvente medianamente polar, y
despus de aproximadamente 10 minutos se puede observar la columna desarrollada con dos
fases, como se observa en la figura 2.
Figura 2, cromatografa de columna parcialmente desarrollada.
Se procedi a hacer la cromatografa de capa fina con las dos sustancias obtenidas de las dos
fases de la capa fina comparndolas con los dos colorantes que la practica anterior se haba
determinado, Sudan III y Rojo de Metilo. El montaje y el procedimiento ya se describi en la
prctica pasada y se puede observar en la figura 3.
Para el anlisis de datos se utilizaron distintos coeficientes para poder tener un anlisis
cuantitativo de las muestras, y se describen por las siguientes relaciones.
= (1)
= 100 (2)
10
= (3)
= (4)
Rf (1) Rf (2)
Fase Patrn Problema Patrn Problema
Roja 0,81 0,79 0 0
Naranja 0 0 0,23 0,24
Tabla 1, coeficientes RF
4. DISCUSIN DE RESULTADOS
5. CUESTIONARIO
5.1. Un colorante se piensa que puede ser azul de metileno, Cmo se podra comprobar
esta suposicin utilizando un procedimiento basado en una tcnica cromatogrfica?
Haciendo uso de la cromatografa de capa fina, se buscan diferentes eluyentes que presenten o
no afinidad con la muestra y las fases estacionarias adecuadas que estn disponibles en el
laboratorio. Se procede a determinar el valor de Rf para realizar el estudio adecuado y
determinar la composicin de la muestra, y comprobar la presencia de azul de metileno en
este caso.
5.2. Qu debe hacerse para encontrar el eluyente adecuado para una sustancia en una
cromatografa de columna?
Con la estructura de la molcula conocida se deben tener en cuenta las interacciones
intermoleculares que pueden existir entre la sustancia y tanto la fase mvil como la
estacionaria para determinar si la sustancia se mover a travs de la columna.
5.7. Indique la toxicidad de las sustancias que utiliz y cmo se podran desechar.
- ter de petrleo: Provoca irritacin cutnea y daos en los rganos. Es txico para
organismos acuticos, con efectos nocivos duraderos. Se sospecha que perjudica la
fertilidad. Se recomienda recoger con materiales absorbentes o en su defecto con
arena o tierra secas y depositar en contenedores para residuos para su posterior
eliminacin.
- Sudn III: es nocivo en caso de inhalacin, nocivo en contacto con la piel. Debe ser
eliminado en el punto de recogida de residuos especiales o peligrosos, conforme la
reglamentacin local.
- Rojo de metilo: Es txico para los organismos acuticos, puede provocar a largo
plazo efectos negativos en el medio ambiente acutico. Se debe evitar su liberacin al
medio ambiente, desechar en recipiente adecuado.
- p-Nitrofeno: Es nocivo por ingestin, tiene peligro de efectos acumulativos. Es
nocivo para los organismos acuticos, provocando efectos negativos en el medio
ambiente acutico. Se debe almacenar alejado de agentes oxidantes y de bases fuerte.
Sin embargo, no requiere medidas especiales.
6. CONCLUSIONES
La mezcla de colorantes de la muestra problema est conformado por Rojo de metilo
y Sudan III
Un correcto empaquetamiento de la columna es crucial y vital para llevar a cabo una
separacin correcta, ya que en caso contrario se presentarn diferentes tipos de
transporte.
Realizar una concentracin de la muestra es beneficioso para la determinacin de
colorantes, con la precaucin de no deteriorar la muestra de colorantes.
Las cromatografas de columna y de capa fina son dos tcnicas complementarias que
sirven para mejorar el anlisis de una muestra problema, sabiendo que poseen
diferencias, pero se rigen por el mismo principio de polaridad.
Es muy importante tener claro la polaridad de la muestra para la correcta
identificacin de los componentes, con el solvente adecuado.
7. BIBLIOGRAFA
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