Ao de la consolidacin del mar de Grau

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA

(Creada por ley N 25265)

E. A. P. INGENIERA AMBIENTAL Y SANITARIA

CATEDRA: MICROBIOLOGA
CATEDRTICO:
Mg. SNCHEZ ARAUJO, VCTOR GUILLERMO.
INTEGRANTES :
CAPCHA RIOS ANGELA LISETH
CHANCA HUIZA AHOSHI SUZUKI
DE LA CRUZ LANAZCA HECTOR JHON
GAZPAR GONZALES ABEL MELANIO
LOZANO CASTRO RICHARD RONY
MATAMOROS CONTRERAS FANY RUT
CICLO : IV
SECCIN :A
HUANCAVELICA PER
2016
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INTRODUCCIN

La tincin de Gram es uno de los mtodos ms importantes en el laboratorio bacteriolgico

y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su utilidad prctica es
indiscutible y en el trabajo microscpico de rutina del Laboratorio de Microbiologa las
referencias a la morfologa celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos, etc.) se
basan justamente en la tincin de GRAM.

porque permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias (Gram+ y Gram-), segn se
comporten ante esta tincin. El fundamento radica en la diferente estructura de la pared
celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en
su pared, mientras que las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano ms fina y una
capa lipopolisacardica externa. Tras la tincin con el primer colorante (Cristal violeta) se
efecta un lavado con etanol que arrastrar al colorante slo en las Gram (-), mientras que en
las Gram (+) el colorante queda retenido y las clulas permanecern azules. Las clulas Gram
(-) se teirn despus con un colorante de contraste (safranina) para que puedan observarse.

En esta prctica aplicaremos el mtodo gram para identificar los diferentes tipos de bacterias
ya sean de gram positivo y de gram negativo, adems aprenderemos el buen manejo de
microscopio y as identificar con el objetivo los resultados que busca.

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I. OBJETIVOS:

GENERAL

Identificacin de clulas Gram positivas y Gram negativas

ESPECFICOS:

Recordar el manejo del microscopio ptico para la observacin de bacterias

(importancia del objetivo de inmersin)
Utilizar la tcnica de tincin diferencial con el colorante cristal violeta y
safranina.
Observar las diferentes formas de la estructura microbiolgica,
obtenidas en el aislamiento de microorganismos.

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II. FUNDAMENTO
TEORICO

CYANOBACTERIA

Las cianobacterias (Cyanobacteria, gr. kyans, "azul"), antiguamente

llamadas algas verdeazuladas, son un filo del dominio Bacteria que
comprende las bacterias capaces de realizar fotosntesis oxignica. Son los
nicos procariontes que llevan a cabo ese tipo de fotosntesis, por ello
tambin se les llam oxifotobacterias (Oxyphotobacteria).1

Las cianobacterias fueron designadas durante mucho tiempo como algas

cianfitas (Cyanophyta, literalmente "plantas azules") o cianofceas
(Cyanophyceae, literalmente "algas azules"), castellanizndose a menudo
como algas verde-azuladas o azul verdosas. Cuando se descubri la
distincin entre clula procariota y eucariota se constat que stas eran las
nicas "algas" procariotas, y el trmino "Cyanobacteria" (se haba llamado
siempre bacterias a los procariontes conocidos) empez a ganar preferencia.
Los anlisis morfolgicos y genticos recientes han venido a situar a las
cianobacterias entre las bacterias gramnegativas, y lo son tambin, en algn
sentido, sus descendientes por endosimbiosis, los plastos.1

Anatoma y morfologa

Las cianobacterias (tambin llamadas algas verdeazules, verde-azuladas o

cloroxibacterias debido tanto a la presencia de pigmentos cloroflicos que le
confieren ese tono caracterstico como a su similitud con la morfologa y el
funcionamiento de las algas) son microorganismos cuyas clulas miden slo
unos micrmetros (m) de dimetro, pero son ms grandes que la mayora
de las otras bacterias. El citoplasma suele presentar estructuras reconocibles
como los carboxisomas (corpsculos que contienen la enzima ribulosa-1,5-
bisfosfato carboxilasa RuBisCO, que realiza la fijacin el CO2), grnulos de
glucgeno, grnulos de cianoficina, grnulos de polifosfato, vesculas
gasferas (llenas de gas) y tilacoides, vesculas aplastadas formadas por

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invaginacin de la membrana plasmtica (con la que suelen conservar

comunicacin o contacto) donde reside el aparato molecular de la
fotosntesis. Con medios ms sofisticados se pueden reconocer agregados
moleculares como ribosomas, microtbulos (no homlogos de los
eucariticos). La envoltura est constituida, como en todas las bacterias
gramnegativas, por una membrana plasmtica y una membrana externa,
situndose entre ambas una pared de murena (peptidoglucano).

Tolypothrix, cianobacteria filamentosa de color cian (azul verde).

Las cianobacterias ms comunes son unicelulares cocoides (esferoidales), a

veces agregadas en una cpsula mucilaginosa, o formando filamentos
simples. Los filamentos pueden aparecer agregados en haces, envueltos por
muclago, o de una manera que aparenta ramificacin. Existen adems
cianobacterias que forman filamentos con ramificacin verdadera. Las
cianobacterias contradicen, como las mixobacterias, el prejuicio segn el cual
los procariontes no son nunca genuinamente pluricelulares.

Entre las clulas de un filamento hay una comunicacin ntima, en forma de

microplasmodesmos, y existe adems algn grado de especializacin de
funciones. La diferencia ms notable la ofrecen los heterocistes, clulas
especiales que slo se presentan en un clado de cianobacterias. Los
heterocistes aparecen como clulas ms grandes y de pared engrosada
intercaladas en los filamentos. Recientemente se ha confirmado que su pared
presenta celulosa, el polmero ms abundante en las paredes celulares de
las plantas. Los heterocistes contienen la maquinaria de fijacin del
nitrgeno, proceso que es relativamente incompatible con la de la
fotosntesis.4

Otro tipo de clulas especializadas son los acinetos; son clulas que vuelven
ms grandes, con una pared ms gruesa que las clulas vegetativas, a veces
con pequeas protuberancias; poseen un citoplasma granuloso debido a la
acumulacin de gran cantidad de cianoficina como sustancia de reserva.
Entre la pared y las capas mucilaginosas segregan una nueva capa fibrosa.

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Tienen un metabolismo reducido y soportan condiciones de vida

desfavorables.2

Morfologa de una cianobacterias ideal

a.- Membrana externa; b.- Capa depeptidoglucano; c.- Membrana
plasmtica;d.- Citosol; e.- Grnulo de cianoficina; f.-Ribosoma; g.- Grnulo
de glucgeno; h.- Cuerpo lipdico; i.- Carboxisoma; j.-Ficobilisoma. k.-
Grnulo polifosfato; l.-Vacuola gasfera; m.- Tilacoide; n.- ADN.3

FISIOLOGA

Las cianobacterias son en general organismos fotosintetizadores, pero

algunas vivenheterotrficamente, como descomponedoras, o con un
metabolismo mixto. Las cianobacterias comparten con algunas otras
bacterias la capacidad de usar N2 atmosfrico como fuente de nitrgeno.

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III. MATERIALES Y MTODOS

MATERIALES

CANTIDAD: UN MECHERO

CANTIDAD: SE UTILIZA EL CRISTAL

VIOLETA HASTA QUE CUBRA EL
INOCULO EN LA PLACA

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CANTIDAD:SE UTILIZA EL ALCOHOL

ACETIL PARA ENJUAGAR

CANTIDAD: UNA AZA

BACTERIOLOGICA PARA HACER
CULTIVOS

CANTIDAD: SE UTILIZA UNA AZADA

PURO PARA REALIZAR LA
MUESTRA

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CANTIDAD:SE UTILIZA EL LUGOL

HASTA QUE TAPE TODO LA
MUESTRA

CANTIDAD: UN MICROSCOPIO POR

GRUPO

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CANTIDAD:UN PORTA OBJETO

PARA VER BACTERIAS

CANTIDAD: SE TOMA UNA BURBUJA

DE AGUA PARA PONER EN EL
PORTA OBJETO

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CANTIDAD:SE UTILIZA SAFRANINA

CUBRIENDO HACI TODA LA
MUESTRA

MTODOS

SIEMBRA POR ESTRAS

1. Se calienta con un mechero el asa microbiolgica hasta esterilizarlo,

para luego tomar la muestra de gotitas de agua destilada.
Colocndolas en la lmina portaobjetos.

2. Pasamos a agregar la bacteria cultivada anteriormente, para luego

mezclarlas bien, la muestra debe de ser poca ya que de lo contrario
se podra tener problemas posteriores al momento de observarlas al
microscopio

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3. Una vez mezclado se esteriliza primeramente el asa microbiolgica

para luego pasar a secar nuestra muestra.

4. Una vez secada la muestra se le agrega el cristal de violeta dejndolo

actuar por dos minutos, para posteriormente enjuagarlo.

5. Despus de enjuagar nuestra muestra agregamos el lugol para dejarlo

actuar como mordiente por un minuto.

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6. Pasado el minuto se lava con alcohol acetona para decolorarlo y

despus enjuagarlo.

7. Una vez enjuagado se le agrega la safranina por 30 segundos para

luego enjuagarlo.

8. Despus del enjuague se pasa a secar en el mechero o al aire libre,

para despus agregar el aceite de inmersin para ayudar a observar
mejor la muestra.

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9. Terminado todos estos procedimientos se pasa a ubicar nuestra

muestra en el microscopio y observar los resultados.

IV. RESULTADOS

Esta imagen es del resultado de la siembra por estra.

La siembra por estra es para aislar a colonias y poder observarlas.
La coloracin depende del tipo de organismo que quieras observar.
La bacteria que observamos es la batera estafilocos como su propio nombre
lo dice forma de cocos como en las imgenes.
Esta siembra se realiza de mediante el aislamiento de colonias con la aza
bacteriolgica, despus de ello se hecho cristal violeta, lugol, alcohol cetona
y la safranina en este orden a un tiempo determinado.
Esta imagen es del microscopio a un objetivo de 100 X.

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DISCUSIN DE RESULTADOS:
el alumno tendr que distinguir el tipo de pared bacteriana (Gram positivo o
gram negativo) lo cual no hicimos y segn varios autores todava se tiene
que utilizar otros reactivos y la morfologa bacteriana (cocos, bacilos u otros)
de las diferentes bacterias contenidas en la mezcla problema.

el cristal violeta tie todas las clulas de color violeta. el yodo (lugol) forma
un complejo insoluble de yodo-cristal violeta-pared celular. el etanol decolora
totalmente las bacterias Gram negativas, pero no las Gram-positivas, a causa
de las diferencias en la estructura de la pared. La safranina es un colorante
que contrasta notablemente con el azul violeta, tiendo las bacterias Gram
negativas de rojo. la tincin debe hacerse con un cultivo fresco para no
obtener falsos gramnegativos.

se hace diferentes tipos de tincin de Gram segn su tincin de esporas lo

cual lo que hicimos es solo son para algunos tipos de microorganismos por
ejemplo encontramos para el bacillus thuringiensis tambin tenemos tincin
negativa de cpsula. Lo cual se ve al microorganismo: klebsiella pneumoniae.

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V. CONCLUSIONES
Los microorganismos se cultivan en el laboratorio en materiales nutritivos
denominados medios de cultivo, cuyos componentes son muy variados. La
eleccin del medio se basa en el propsito del estudio.
Se logr identificar e trabajar y cultivar microorganismos.
Se lo logro la siembra de microorganismos
El aislamiento consiste en obtener un cultivo puro de un microorganismo a
partir de un cultivo mixto.
La siembra de microorganismos es la incorporacin a un medio de cultivo de
una muestra, con propsitos cuantitativos o cualitativos.
En eta practica tambin se aprendimos los mtodos adecuado de siembra
como es el mtodo de incorporacin y superficie.

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VI. RECOMENDACIONES
Que las practicas se han repartida un da antes para que los alumnos investiguen sobre
el tema a tratar para el desarrollo excelente de la prctica.
Que los alumnos contengan cada uno de sus implementos sin hacer demorar a la
realizacin de la prctica.
Que se implenten mayor materiales en el laboratorio para que la prctica se realice
con todos los alumnos y no unos cuantos.

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VII. BIBLIOGRAFA:
1. Sobsey M. Methods for recovering viruses from shellfish, seawater and
sediments. En: Methods for recovering viruses in the environments. Boca de
Ratn, FL: CRC Press, 1987:77-108.
2. Luria E, Delbrck M, Anderson F. Electron microscope studies of bacterial
viruses. J Bact 1943; 46:57-77.
3. Tetrt F, Desplats C, Kutateladze M, Monod C, Ackermann H, Krich H.
Phylogeny of the major head and tail genens of the wide ranging T4Type
bacteriophages. J Bact 2001; 183:358-66.
4. Smith H, Huggins M, Shaw K. The control of experimental Escherichia coli
diarrhoea in calves by means of bacteriophages. J Gen Microbiol 1987; 133:
1111- 26.
5. Lindqvist H. Bacteriophage and gene transfer. APMIS 1998; (Suppl 84):15-8.
6. Sonea S. Bacterial viruses, prophage, and plasmids, reconsidered. Ann N Y
AcadSci 1987; 503:251-60. 7. Hernndez A. Aislamiento, caracterizacin y
deteccin precoz de bacterifagos de Streptococcus thermophilus en la
industria Lctea.[Tesis doctorado en ciencias]. Oviedo: Universidad de
Oviedo; 2007.

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VIII. ANEXOS:
Observando las muestras.

Procesos de coloracin.

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