V.

CROMATOGRAFA

1. Que es la cromatografa?

La cromatografa es una tcnica de separacin basada en el intercambio de los

solutos entre dos fases.

En el caso de separacin ptima, los diferentes picos o manchas del

cromatograma se corresponden a los componentes de la mezcla separada.

En el eje X se representa el tiempo de retencin, y en el eje Y una seal (obtenida,

por ejemplo, a partir de un espectrofotmetro, un espectrmetro de masas o
cualquier otro de los diversos detectores) correspondiente a la respuesta creada
por los diferentes analitos existentes en la muestra. En el caso de un sistema
ptimo, la seal es proporcional a la concentracin del analito especfico
separado.

2. Cules son las clases de cromatografa que hay?, Descrbelas.

Cromatografa de reparto: La fase estacionaria suele ser mantenida fija mediante

un soporte inerte poroso (papel o celulosa). La fase mvil suele ser una mezcla de
disolventes medianamente miscibles con el agua. Cuanto ms soluble en agua
sea la sustancia a cromatografa, ms retenida y retrasada quedar en el
desarrollo cromatogrfico.

- Cromatografa de adsorcin: La fase estacionaria retiene con ms o menos

poder a la sustancias a cromatografa por un fenmeno de adsorcin en superficie.
Para ello se utiliza almina, gel de slice, etc.
Cromatografa de afinidad: Es un tipo de cromatografa de adsorcin en la que la
fase estacionaria tiene afinidad biolgica por la sustancia que se quiere separar.
Se utilizan as parejas antgeno-anticuerpo, enzima-inhibidor, etc.
Cromatografa de intercambio inico: la fase estacionaria retiene a las
sustancias por su carga inica. Las sustancias con carga opuesta a la de la resina
quedarn retenidas en la fase estacionaria, mientras que las de la misma carga
que la resina sern arrastradas por la fase mvil. Las sustancias que quedan
unidas a la resina pueden eludirse cambiando las condiciones de la fase mvil
(variando el pH, la fuerza inica, etc.). Este tipo de cromatografa se hace slo en
columna y los soportes utilizados son polmeros tales como celulosa o poli
estirenocarboxilados o poli aminados, etc.
- Cromatografa en capa fina: La fase estacionaria se extiende sobre una placa.
- Cromatografa en columna: La fase estacionaria se empaqueta en una
columna.

3. Qu es un cromatograma?

Un cromatograme es un registro producido por el cromatgrafo de gas / lquido. Es

tambin una medida del funcionamiento del instrumento.
El cromatograma de una mezcla de gases proporciona la composicin individual
de todos los componentes mayoritarios de la mezcla.
Las propiedades de los gases son bsicamente aditivas. En otras palabras, las
propiedades de la mezcla son calculables a partir de las propiedades de los
componentes individuales.
4. Describe las partes del siguiente cromatograma

5. Menciona cmo pueden ser las columnas cromatogrficas.

6. Menciona las caractersticas principales de un detector cromatogrfico

Un cromatgrafo de gases consiste en varios mdulos bsicos ensamblados para:

1) proporcionar un gasto o flujo constante del gas transportador (fase mvil), 2)
permitir la introduccin de vapores de la muestra en la corriente de gas que fluye,
3) contener la longitud apropiada de fase estacionaria, 4) mantener la columna a la
temperatura apropiada (o la secuencia del programa de temperatura), 5) detectar
los componentes de la muestra conforme eluyen de la columna, y 6) proveer una
seal legible proporcional en magnitud a la cantidad de cada componente.

7. Describe cada uno de los siguientes trminos cromatogrficos.

Adsorbente.
se haya en el interior de una columna de vidrio, metal o plstico. Contando
con este soporte mecnico pueden emplearse para la separacin gran
variedad de materiales. Los adsorbentes ms comunes son tambin la
almina y el gel de slice, pero se han empleado a su vez materiales tales
como carbn vegetal, arcilla celulosa, almidn e incluso azcar.
Derivacin.
Es utilizada para analizar la muestra por cromatografa de gases. Mientras
mayor sea el peso del compuesto, o del conglomerado molecular asociado,
mayor ser su punto de ebuillicion.
Adems de incrementar las volatilidad de los analitos, y oproteger a los
grupos termolbiles del rompimiento por pirolisis, en la dericvacion puede
 usarse para disminuir la adsorcin enla columnay mejorar la separacin o
resolucin de compuestos similares, asi como incrementar la sensibilidad
con respecto a un determinado detector.
Eficiencia.
Capacidad de la columna para reproducir picos delgados y afilados.
La eficiencia de la columna est relacionada con el ensanchamiento de la
banda que se encuentra en la columna y puede ser calculada:
donde W1/2 es el ancho del pico a una altura media del pico

N = 5.54( 1 )2
1/2
y se expresa como un nmero de platos tericos (N) para la columna bajo
condiciones experimentales especficas. La eficiencia es conocida
frecuentemente como el nmero de platos tericos por metro de cama
cromatogrfica, o expresada como H que es la longitud de la cama (L)
dividida por el nmero de platos tericos. H = L / N A partir de que el valor
observado de N depende de factores experimentales tales como la
velocidad de flujo y la carga de la muestra, es importante que las
comparaciones sean hechas bajo condiciones idnticas. En el caso de la
cromatografa de intercambio inico, la eficiencia se mide bajo condiciones
isocrticas, usando una sustancia que no interacciona con la matriz
Integracin.
Permite cuantificar los compuestos.
8. Qu es la retencin relativa de dos picos adyacentes?

9. Define los siguientes trminos cromatogrficos: tr, tm, tr

10. Cmo se puede identificar un componente en un cromatograma?

a) CROMATOGRAFA DE GASES

1. Cmo se clasifica la cromatografa de Gases?

La cromatografa puede ser clasificada por su utilidad y en base al material que se

utilice como eluyente para separar los solutos. De acuerdo a su utilidad la
cromatografa se clasifica en: analtica, utilizada para determinar los qumicos
presentes en una mezcla y en que concentracin; y preparativa, utilizada para
purificar grandes cantidades de qumicos.
2. Cules son las partes de un cromatgrafo de Gases?

Inyectores

Los cromatgrafos de gases cuentan con inyectores que son los dispositivos por
donde se inyectan las muestras en el GC, puede tener un mximo de dos
inyectores.
Vlvulas de muestreo

Otra de las partes fundamentales un cromatgrafo son las vlvulas de muestreo

son dispositivos mecnicos sencillos que introducen una muestra de tamao fijo
en el flujo del gas portador. Las vlvulas se usan ms a menudo para probar
gases o lquidos en flujos de circulacin constante.
Columna y horno de GC

Las columnas del GC se encuentran dentro de un horno de temperatura

controlada. Por lo general, un extremo de la columna est unido al inyector y el
otro extremo est unido al detector. Las columnas varan en longitud, dimetro y
recubrimiento interno. Cada columna est diseada para su uso con diferentes
compuestos.

3. Qu tipo de gases pueden emplearse como fase mvil y que calidad

debe tener este?

son generalmente gases inertes como Helio, Argn o Nitrgeno. El gas portador
lleva las molculas del analito a travs de la columna, este movimiento es inhibido
por la adsorcin que presenta el analito tanto en las paredes de la columna cuanto
en los materiales empaquetados en la misma.

4. Cuales son las zonas de calentamiento del cromatgrafo de Gases?

5. Qu es y para que sirve la silanizacin de un cido?

Los tratamientos silanizadores reducen considerablemente el rea de los soportes

e influyen significativamente en los volmenes de retencin de los solutos.

consistente en el tratamiento con dimetilclorosilano. Para que la reaccin sea

completa, los grupos OH deben ocupar puntos activos adyacentes. En presencia
de un solo hidroxilo. Mediante un lavado con metanol, el segundo cloruro se
sustituye por un grupo metoxi.

6. Da un ejemplo de cmo aplicar la cromatografa de Gases al anlisis

ambiental, puedes consultar en la bibliografa.

7. Mencione y describa cules son las tcnicas de cuantificacin usadas en

cromatografa de gases.
Las tcnicas cromatogrficas son imprescindibles para una correcta evaluacin de la actividad de
materiales catalizadores y para el estudio de soportes slidos de reacciones qumicas de gran
importancia en petroqumica y en la elaboracin de compuestos orgnicos de alto valor aadido
(qumica fina). Pero las tcnicas cromatogrficas no slo tienen aplicacin en catlisis convencional
donde intervienen transformaciones de compuestos orgnicos; podemos tambin citar la
separacin e identificacin de gases simples como el hidrgeno y el oxgeno producidos por la
accin de catalizadores que actan en la fotodescomposicin del agua.

8. Mencione los factores que intervienen en un correcto anlisis por

cromatografa de gases.

9. Cul es la caracterstica y/o propiedad imprescindible con la que debe

contar una analito para ser identificado y/o cuantificado por cromatografa
de gases.

Aparte de la eleccin de la columna a utilizar, bsicamente los parmetros a fijar

en cada caso sern;
1.- Naturaleza y velocidad del gas portador
2.- Temperatura de detector.
3.-Temperatura de inyeccin.
4.- Temperatura de columna.
Debe tener una presin de vapor apreciable a la temperatura de operacin. (pv 1
torr, @ Tmax 450C).
No debe ser termolbil (formacin de derivados).
No debe reaccionar con ningn componente del sistema (instrumentacin con
superficies internas inertes)

10. Los siguientes datos fueron obtenidos al cuantificar un analito en CG,

determine las concentraciones experimentales para cada una de las
muestras citadas.
 b) CROMATOGRAFA DE LQUIDOS

1. Cul es la diferencia principal entre la cromatografa de Gases y la de

lquidos?

Cromatografa Lquida Cromatografa de Gas

La fase Movible es un lquido La fase Movible es un gas

La Separacin se basa en la accin recproca del soluto con el La Separacin se basa sobre todo en los puntos de
media de la cromatografa ebullicin de las molculas del soluto

Puede ser realizado en una hoja o una olumna Puede ser realizado solamente en una olumna

Puede ser utilizado para separar cualquier pasta soluble, e.g Puede ser aplicado en la separacin de pastas
aminocidos, protenas, drogas, cidos nuclicos, lpidos, voltiles y de mezclas gaseosas
antioxidantes, hidratos de carbono, y polmeros naturales y
artificiales

Realizado Generalmente en las pastas tan sensibles al calor de la Realizado en substancias inestables ms altas de las
temperatura ambiente puede ser analizado con seguridad usando temperaturas pudo conseguir tan trmicamente
la tcnica desnaturalizado

La retencin del Soluto aqu se basa en la accin recproca de La Separacin se basa en los puntos de ebullicin de
solutos con las fases movibles y estacionarias as que es fcil las molculas del soluto as que no es muy flexible en
optimizar resultados trminos de separacin ptima

Esto es una tcnica relativamente ms lenta El anlisis se mide ms rpidamente y generalmente

en minutos, aunque pueda tomar tan poco como un
 par de segundos

Da Generalmente un mayor pico o una banda ms amplia dando Proporciona a una resolucin comparativamente
por resultado una resolucin ms inferior mejor

Los disolventes polares de las Aplicaciones tienen gusto del agua Utiliza cualquier disolvente que se vaporice
o del metanol

2. Cules son los componentes bsicos de un cromatografo de lquidos?

3. Cmo se divide la cromatografa de lquidos?

Mecanismo
Mtodo Abreviatura
predominante

Lquido, slido o Adsorcin sobre la

LSC
de adsorcin superficie

Reparto entre fases

Lquido LLC lquidas, una mvil y la
otra estacionaria.

Fase enlazada BPC Reparto y / o adsorcin

entre las fases mvil y
 enlazada.

Uso de la estructura de
ligantes inmovilizados
Afinidad -- para unir
bioselectivamente la
protena deseada.

4. Qu es el factor de capacidad?

5. De qu depende el tiempo de retencin de un analito?

El tiempo que transcurre despus de la inyeccin de la muestra para que el pico del analito
alcance el detector se denomina tiempo de retencin y se le da el smbolo tR.

6. Si varo la temperatura de la columna, la velocidad de elucin de los

componentes de la muestra cmo cambiar?

7. Cmo afecta el pH, a la determinacin cromatogrfica lquida.

Para eluir las molculas retenidas se puede variar la carga inica del disolvente o
su pH de forma que se alcance el punto isoelctrico de la molculas o especies de
inters o el de la matriz, neutralizando de este modo la fuerza que retiene a las
molculas en la columna.
8. Cules son los disolventes convencionales, usados en los diferentes tipos
de cromatografa lquida.

9. Se realiz una calibracin de acetato de etilo para poder cuantificarlo en

un extracto de un barniz. Con los siguientes datos cromatogrficos,
cuantifica y reporta la presencia del componente buscado en las muestras A,
B, C y D.

A) Realizar la curva de calibracin

B) Determine si existe en la composicin de las muestras a, b, c, d acetato de

etilo y cuantifique su concentracin.