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Cultivo de Aspergillus oryzae

En esta entrada voy a intentar cultivar un hongo que me han enviado :)


El Aspergillus oryzae. Es un hongo bien preciado en cocina japonesa.
Se usa para fermentar soja y obtener salsa de soja.
Tambin en el sake y el shochu, amazake -una bebida fermentada ligeramente alcohlica-
y miso.

Caractersticas y morfologa de Aspergillus oryzae

Al comenzar su desarrollo las colonias son blanco-amarillentas, y luego se convierten en


amarillo verdosas o de color castao.

Puede tener una o dos filas con conidiosporos piriformes.


Los conidiforos son estructuras formadas a partir de hifas, que porta clulas conidigenas
productoras de conidios o esporas.

Conidiforo de Aspergillus oryzae

Produce amilasas, proteasas, y cidos kjico.

El koji se cultiva sobre arroz cocido al vapor, refrescado e inoculado con las esporas del Aspergillus
oryzae. Entonces es incubado de 3 a 4 das a 42C. Cuando el koji est listo para la cosecha se
observa una lana blanca como el algodn cubriendo completamente el arroz.
Experimento: Multiplicacin de Aspergillus oryzae

Me han enviado el hongo inoculado en arroz, una de las formas como se suele cultivar.

Puesto que necesito esporas para hacer pruebas, voy a intentar que esporule primero. Para ello
hay que dejar que termine su ciclo. Tambin se puede forzar con cambios bruscos de temperatura
(por encima de 35C).

Primero quiero que se reproduzca todo lo que pueda.


Para ello estoy rehidratando la pequea muestra con:

agua destilada,
una punta de levadura
una pizca de mi "Sustancia mgica" -con presunta capacidad de hacer crecer ms los
hongos-
unas gotas de mezcla sobresaturada de antibitico: amoxicilina + cido clavulnico

En total, menos de 2 ml de solucin enriquecida para un tamao de arroz de una cucharada


sopera.

En lugar de una placa de Petri he utilizado una cajita cuadrada transparente de unos 5cm, que
permite el cierre casi hermtico.

La muestra que me envan parece estar en muy buen estado, ha tardado dos das en llegar.
El hongo es blanquecino, lo que sugiere que an est vivo, activo y aun no ha empezado a
esporular.

21 junio 2013. Madrid. T= 25 C


Aspergillus oryzae siendo rehidratado

Aspergillus oryzae siendo rehidratado


Aspergillus oryzae siendo rehidratado

El proceso de crecimiento a unos 25-30 C dura unos 12 das, siendo el da 13 al 15 los


das de mxima produccin de cido kjico, una de las sustancias carcatersticas que
produce este hongo.

Una vez finaliza su ciclo vital y/o empieza a esporular, el hongo se torna verdoso.
En ese momento se debe desecar lo antes posible (por ejemplo al sol) para estimular la
mxima produccin de esporas y la ausencia de humedad en el resultado, que se usar para
sembrar las prximas muestras.

22 junio 2013. Madrid. T= 25 C. 12h

Llevan unas 12h pero la caja que los contiene aparece con condensacin: los hongos estn
vivitos y estn respirando!!
Adems se aprecia cierto olor a fermentado: cido, avinagrado, con olor intenso a
manzana/sidra.
Aspergillus oryzae a las 12h

Aspergillus oryzae: Detalle de la condensacin.


Aspergillus oryzae a las 12h

23 junio 2013. Madrid. T= 25 C. t =24 horas

El nuevo micelio del hongo empieza a ser claro en slo este da transcurrido.
Se ve cambio desde las fotos anteriores, slo unas 6 horas antes.
El color amarillento de los granos de arroz es debido a las sustancias que he aadido al
lquido inicial.
El olor es que desprende es cido, alcohlico, con olor a manzana, mosto o sidra.

Aspergillus oryzae a las 24h


Aspergillus oryzae a las 24h

24 junio 2013. Madrid. T= 26 C. t =48 horas

Tras 48h el hongo ha cubierto por completo el medio de cultivo de arroz.

El olor ha cambiado y ya no es tan afrutado a manzana/mosto/sidra. Ahora huele algo ms a


queso.

Supongo que seguir creciendo un poco ms, uno o dos das, y a partir de ah empezar a
declinar y con ello esporular.
Aspergillus oryzae a las 48h

25 junio 2013. Madrid. T= 26 C. t =72 horas

Tras 3 das el hongo sigue cubriendo por completo el medio de cultivo de arroz.
A excepcin de unos granos aislados que se han quedado como rezagados y en los que
apenas ha crecido el hongo y que voy a apartar.

S parece que su aspecto ahora es ms aterciopelado, como si tuviera mltiples pelitos.

El olor sigue siendo ms a... queso? Desde luego no afrutado como el primer da.
Aspergillus oryzae

Aspergillus oryzae, detalle


Aspergillus oryzae, vista por debajo de la placa de cultivo
26 junio 2013. Madrid. T= 26 C. t =4 das

No hay muchos cambios con respecto a ayer.


El hongo no ha cubierto ms lgicamente porque no dispone de sitio. Eso precisamente
debera hacer que en breve termine su ciclo de crecimiento (si no lo ha hecho ya) y
comiencen a producir esporas. Entonces se volvern verdes, segn parece. No obstante
cualquier cambio a otro color (gris, negro) ser a tener en cuenta :)

Una pequea parte -unos granos-se ha secado. Espero que no contaminada por otro hongo.
Si veo que tal los apartar con el resto de granos "raros". Tampoco parece que sea porque el
hongo haya terminado su ciclo vital. Quiz tengan demasiada concentracin de los
nutrientes lquidos que aad, por ser granos sueltos que se empaparon por completo y antes
que el resto que permaneca en bloque...

El olor sigue siendo el mismo, el color y aspecto tambin.


Aspergillus oryzae

Aspergillus oryzae. Granos contaminados puestos a parte

27 junio 2013. Madrid. T= 26 C. t =5 das

Primeros cambios.
El olor no es tan agradable como antes y se vuelve ms "alimento estropeado".
Lo ms novedoso es la aparicin de una zona de aspecto de pelusa blanquecina: los rganos
reproductores.
Aspergillus oryzae. Inicio de la esporulacin

Aspergillus oryzae. Inicio de la esporulacin


Aspergillus oryzae.Granos apartados

Aspergillus oryzae. Vista del medio desde abajo.

28 junio 2013. Madrid. T= 26 C. t =6 das

Novedades: el hongo ha empezado a esporular. Ms concretamente ha empezado a


desarrollar las estructuras de fabricacin de esporas: esos pelillos tpicos que preceden al
oscurecimiento a verde-negro.
Aspergillus oryzae. Condensacin de la caja

Aspergillus oryzae. Masa blanquecina desarrollndose


Aspergillus oryzae. Masa blanquecina detalle

Aspergillus oryzae. Masa blanquecina detalle


Aspergillus oryzae. Detalle

29 junio 2013. Madrid. T= 27 C. t =7 das

La mas ms filamentosa parece haberse difuminado.


Han aparecido un montn de pequeos filamentos en posicin vertical, coronados por una
estructura diferente, ms brillante?.
Tambin se observa alguna gota... no s muy bien si de condensacin o de alguna sustancia
producida por el hongo (?).
Aspergillus oryzae

Aspergillus oryzae

30 junio 2013. Madrid. T= 27 C. t =8 das

Siguen apareciendo estructuras filamentosas transparentes, coronadas por curiosos


pequeos puntos blanquecinos.
Prcticamente cubren todo el rea del medio de cultivo de arroz del rea derecha, por donde
empez esta colonizacin. En el rea izquierda an no se ha formado por completo.

Cabe destacar que el olor ahora es casi....nulo.


Ni a estropeado, ni a rancio, ni a queso, ni afrutado.
No huele a nada prcticamente.
Aspergillus oryzae

2 julio 2013. Madrid. T= 28 C. t =10 das

El color blanquecino se ha tornado algo ms oscuro.


Destaca en la caja la ausencia de tanta respiracin como en la fase de desarrollo del hongo:
casi no hay vaho.

Aspergillus oryzae. Detalle del contenedor con casi ausencia de vaho por respiracin
Aspergillus oryzae. Detalle

Aspergillus oryzae. Parte de abajo del contenedor.

4 de julio 2013. Madrid. T= 28 C. t =12 das

Apenas hay cambios.


Aparece alguna mancha ms oscura, verdosa-negra. No s si por contaminacin.
Podra porque es diferente al resto. Pero a la vez es raro que sea en un rea tan adentrada y
no en un borde.
La respiracin y el vaho en el contenedor de cultivo es an menor comparada con la foto de
dos das anteriores.
Aspergillus oryzae. Detalle del contenedor con casi ausencia de vaho por respiracin

Aspergillus oryzae. Detalle de la mancha verde oscura


10 de julio 2013. Madrid. T= 30 C. t =18 das

El da 4 finalmente separ los hongos en dos, el posible contaminado y el normal.


Para ello us una cmara casera estril, elaborada con una caja de plstico de almacenaje y
unos guantes de goma. Todos los detalles para elaborar una cmara casera estril en la
entrada Recoger semillas de Phalaenopsis.

Finalmente ha parecido ser una decisin acertada. La mancha del posible hongo
contaminante ha aumentado.
Por otro lado, el hongo separado, se ha mantenido intacto en su color, y no posee manchas
extraas.
Aspergillus oryzae. Ejemplar separado no contaminado.

Aspergillus oryzae. Detalle del ejemplar separado no contaminado.


Aspergillus oryzae. Ejemplar separado y posiblemente contaminado.

En cuanto al aspecto del hongo se refiere apenas hay ningn cambio visible, y quiz
terminara de esporular hace ya varios das.