Fisiologa microbiana. Albert G. Moat, John W. Foster y Michael P.

Spector
Derechos de autor 2002 por Wiley Liss, C
ISBN: 0-471-39483-1

CAPTULO 11

VAS DE FERMENTACIN

Las principales vas utilizadas por los microorganismos para la desasimilacin de hidratos de carbono y la
generacin de energa biolgicamente til (como PMF o ATP) y poder reductor (tal como NADH o NADPH) se
delinean en captulos anteriores. Tambin se describen las reacciones de iniciacin por el que una variedad de
azcares alternativos y otros sustratos son metabolizados a productos intermedios que pueden entrar en las
rutas metablicas centrales. Los organismos individuales pueden utilizar la fructosa bifosfato aldolasa,
fosfocetolasa, o cetogluconato aldolasa vas o variaciones de ellos. productos fermentativos adicionales pueden
derivarse a partir de piruvato o otros intermedios. Las vas fermentativas que ocurren en algunos de los
principales grupos de microorganismos se describen en la figura 11-1 y se consideran en detalle en este
captulo.

SALDOS DE FERMENTACIN

Una evaluacin completa de las vas de fermentacin de carbohidratos requiere identificacin cualitativa de la contabilidad
y cuantitativa de la cantidad de productos recuperados. Para evaluar la exactitud de las determinaciones analticas, una balance
de carbono o la recuperacin de carbono puede calcularse, como se muestra en la fermentacin de la muestra en la
Tabla 11-1. En virtud de un nmero de circunstancias, el equilibrio puede no ser ideal porque una parte de los hidratos de
carbono puede ser asimilado en constituyentes celulares o compuestos distintos de la principal sustrato aadido puede
ser utilizado para formar una parte de los productos recuperados.

Las reacciones de oxidacin-reduccin juegan un papel importante en el metabolismo fermentativo de hidratos de

carbono. Est, por lo tanto, es aconsejable realizar una reduccin de oxidacin o
equilibrio O-R en los productos formados. El equilibrio O-R proporciona una indicacin en cuanto a si el saldo
productos formados con respecto a sus estados oxidados o reducidos. Puede que no sea posible equilibrar el
hidrgeno y el oxgeno del sustrato directamente porque hidrataciones o deshidrataciones pueden ocurrir pasos
como intermediarios en la va de fermentacin. Sin embargo, una forma sencilla de lograr el mismo fin es calcular
una oxidacin

412
 SALDOS DE FERMENTACIN 413

CH 3 CH 3 CO 2 (2)
+ 2H CH 3 + 2H CH 3
HCOH C=O
CHO CH 2 OH
COOH COOH
lactato piruvato acetaldehdo Etanol
CO 2
(0) (1) ( - 1)

COOH
CH 3
C=O CO 2 + CoA
+ 2H HOdo COCH 3
CH 2
COOH
COOH
un- Acetolactato (0)
oxaloacetato +2
MARIDO CO 2 + CH 3 + HCOOH
(3) ( - 1) (2) Formiato de (1)
CO-S-CoA - CO 2
+ 2H Acetil-CoA
CH 3
( - 1)
COOH - CoA + 4H
HCOH C
HCOH CH 3 CH 3 =O
- CoA
CH 2 COOH CH 2 OH CH 2
COOH Acetato etanol ( - 2) acetona ( - 2)
Malate (2) (0) COOH + 2H - 2H
C=O
- MARIDO 2 O

CH 2 CH 3 CH 3

COOH COOH HCOH C=O

CH acetoacetato HCOH C=O

(0)
CH CH 2 CH 2
CO 2 + 4H
2,3-butanodiol diacetilo
COOH
( - 3) ( - 1) ( - 2)
Fumarato de (2)

+ 2H CH 3 CH 3
C=O (CH 2) 2
COOH
COOH COOH
HCOH CH 2 Acetona butirato ( - 2)
( - 2)
COOH
Succinato de (1)
+ 2H + 4H

CO 2

CH 3 CH 3 CH 3

CH 2 HCOH (CH 2) 2

COOH COOH MARIDO 2 COH

propionato isopropanol butanol

( - 1) ( - 3) ( - 4)

Fig. 11-1. Las principales vas de la formacin de producto de fermentacin a partir de piruvato. Los nmeros entre parntesis son los
valores de oxidacin calculado sobre la base del nmero de tomos de oxgeno de menos de la mitad el nmero de tomos de hidrgeno como se
muestra en la Tabla 11-1.

valor para cada compuesto y comparar la cantidad total de productos oxidados y reducidos, como se muestra en la
Tabla 11-1. Si la relacin de productos oxidados a productos reducidos est cerca del valor terico de 1,0, esto
proporciona una indicacin adicional de que los productos estn en equilibrio.
414 VAS DE FERMENTACIN

TABLA 11-1. Equilibrio de fermentacin para Lactobacillus pentoaceticus

mmol Valor de productos mercanca do 1 do 1

carbono un oxidacin segundo
Compuesto Mmol oxidados reducida Observado Calculado do

Glucosa 100 600 0

lactato 96 288 0
Glicerol 7 21 -1 7
Etanol 86 172 -2 172 86
Acetato 7 14 0 7
CO 2 89 89 +2 178 89

Los totales 584 178 179 89 93

recuperacin de carbono Reduccin de oxidacin do 1 Equilibrar

sustrato mmol producto productos oxidados C observada 1

mmol 100
productos reducidos calculado: C 1
584 600 100 = 97,4% 178 179 = 1.0 89 93 = 0.96

un mmol C = compuesto mm nmero de tomos de C.

segundo valor de oxidacin = (Nmero de tomos de O) - ( nmero de tomos de H / 2).

do calculado: C 1 = cantidad esperada para cada C 2 observado. En el ejemplo anterior, por cada milimol de piruvato convertido en etanol, una

cantidad igual de CO 2 se espera:

Piruvato (C 3) ---- etanol (C 2) + CO 2 ( do 1)

Del mismo modo, para cada mmol de piruvato convertido en acetato, una cantidad igual de CO 2 se espera:

Piruvato (C 3) ---- acetato de (C 2) + CO 2 ( do 1)

los valor de oxidacin de un compuesto se determina a partir del nmero de tomos de oxgeno de menos de la
mitad el nmero de tomos de hidrgeno. Para la glucosa, que tiene 6 tomos de oxgeno y 12 tomos de hidrgeno,
el valor de oxidacin es 0 (Tabla 11-1). Por lo tanto, la glucosa se denomina una compuesto neutro, y ser igualmente
equilibrada los productos de fermentacin deben contener cantidades equivalentes de productos oxidados y
reducidos. El carbono en los productos finales en el ejemplo mostrado en la Tabla 11-1 est muy cerca de la cantidad
de glucosa fermentada (97,4%). Adems, la cantidad de producto oxidado (dixido de carbono) es aproximadamente
igual a la cantidad de productos reducidos (glicerol y etanol), por lo que el equilibrio O-R es muy prximo al valor
terico de 1,0. La Figura 11-1 muestra las rutas generales de formacin y los valores de oxidacin para un nmero de
productos de fermentacin comunes.

Otro aspecto de los saldos de fermentacin es la do 1 equilibrar. La cantidad de C esperada 1 producto

se calcula a partir de las cantidades de los productos para los que CO 2 o formiato se espera como un
producto adjunto. Por ejemplo, si un C 2
compuesto tal como etanol o acetato es uno de los productos finales fi, una cantidad igual de CO 2 que se
espera, puesto que el etanol se deriva de piruvato por descarboxilacin. Tenga en cuenta que en la Tabla 11-1
C 1 equilibrio (0.96) es muy prximo al valor terico de 1,0.
 fermentacin de la levadura 415

fermentacin de la levadura

Aunque se conocen ms de 800 especies de levaduras, el paradigma para estudios de la fisiologa, el

metabolismo intermediario, y la gentica es Saccharomyces cerevisiae. Esta especie de levadura utiliza la va de
EMP de metabolismo de la glucosa en las condiciones de pH neutro o ligeramente cido y un ambiente
anaerbico. Los productos principales formados en estas condiciones son dixido de carbono y etanol. La
secuencia de reacciones implicadas en esta va se presenta en la Figura 8-1. Sin embargo, ciertas facetas de la
fermentacin alcohlica de levadura llevan consideracin adicional.

Cuando las clulas de levadura se cultivan en altas concentraciones de glucosa, las clulas funcionan bajo un sistema
de control reguladora llamada represin catablica por carbono o represin de la glucosa. Mediante el uso 13 sustratos
C-etiquetados, es posible hacer estimaciones fiables en cuanto al metabolismo fl ujos que ocurren en la clula. En cultivo
discontinuo, 16.2 de cada 100 molculas de glucosa consumida por las clulas entra en la ruta de las pentosas fosfato,
mientras que la misma ux fl relativa es 44,2 por cada 100 molculas de un quimiostato. El ciclo de TCA no funciona como un
ciclo en cultivos por lotes de clulas de levadura en crecimiento. En contraste, los cultivos de quimioestato de levadura
utilizan el ciclo de TCA en su forma intacta.

La fermentacin etanlica en la levadura puede ser alterado como resultado de una serie de cambios en el medio de
cultivo. En presencia de sulfito sdico, el acetaldehdo es atrapado como un complejo de adicin de bisulfito te fi, y glicerol
se forma como producto principal:

glucosa + HSO 3 - --- glicerol + acetaldehdo-HSO 3 - + CO 2

En estas condiciones, el acetaldehdo es incapaz de servir como un aceptor de hidrgeno. dihidroxiacetona

fosfato se convierte en el aceptor de hidrgeno preferido, produciendo glicerol-3-fosfato, que es luego
hidrolizado a glicerol y P yo. La fermentacin no se desplaza totalmente en la direccin de la formacin de
glicerol, ya que no es posible aadir su fi ciente bisulfito de obligar a todo el acetaldehdo sin incurrir en efectos
txicos adicionales. Por lo tanto, algo de etanol se encuentra entre los productos.

En condiciones alcalinas se observa todava otro tipo de patrn de fermentacin:

2 de glucosa --- + Acetato de 2 glicerol + etanol + 2CO 2

En estas condiciones una reaccin de dismutacin se produce en la que 1 mol de acetaldehdo se oxida a
acetato y otro se reduce a etanol. Esta secuencia es catalizada por dos deshidrogenasas ligada a NAD y
requiere un equilibrio entre las reacciones siguientes:

CH 3 CHO + NAD + + H 2 O --- CH 3 COOH + NADH + H + CH 3 CHO + NADH + H + ---

CH 3 CH 2 OH + NAD + GA-3-P + P i + NAD + --- NADH + H 1,3-difosfoglicerato +

NADH + H + dihidroxiacetona-P + + --- glicerol-3-P + NAD +

Esta serie de reacciones se denomina a veces como la lanzadera glicerol-3-fosfato. La oxidacin del
acetaldehdo en acetato rendimientos no ATP, ya que la reaccin procede directamente sin la formacin
intermedia de acetil-CoA.
416 VAS DE FERMENTACIN

Los productos de fermentacin formados por la levadura tambin se pueden alterar drsticamente a travs de ingeniera
metablica. Por ejemplo, la introduccin de un gen de lactato deshidrogenasa a partir de msculo bovina ( LDH-A) dentro S.
cerevisiae engendra la produccin de cido lctico a niveles que rivalizan con los conseguidos por las bacterias del cido lctico.

En la levadura libre de clulas extrae la adicin de P yo da como resultado un marcado aumento en la

velocidad de fermentacin. La tasa finalmente desaparece a la del control sin P aadido yo. La adicin de una
segunda cantidad de P yo volver a aumentar la velocidad de fermentacin. Este fenmeno (a veces referido
como el efecto Harden-Young) resulta de la incorporacin de P yo en steres de fosfato orgnico, en particular
fructosa-1,6-bisfosfato, F-6-P, G-6-P, y G-1-P. fosfato inorgnico se asimila durante la formacin de

1,3-difosfoglicerato. En etapas posteriores, ADP es fosforilado a ATP, que a su vez permite la fosforilacin de
la glucosa adicional. La acumulacin de steres de fosfato limita la cantidad de P yo disponible para el
metabolismo de la glucosa adicional. Este efecto puede ser contrarrestado por la adicin de ion arseniato, lo
que resulta en la formacin de arseniato phosphoglyceryl. Este compuesto se hidroliza enzimticamente, la
prevencin de la acumulacin de intermediarios fosforilados. Durante el procedimiento habitual de preparacin
de los extractos libres de clulas de levadura, la ATPasa de la enzima puede ser inactivada. Preparaciones en
las que ATPasa est activo, o al que exgenas ATPasa se aade, no agotan el P yo, y steres de fosfato no se
acumulan. En estas condiciones, la fermentacin contina a un ritmo constante.

En una suspensin de clulas de levadura de reposo que est fermentando la glucosa, la introduccin de los resultados de
oxgeno en la cesacin de la formacin de etanol. Este fenmeno, denominado
Efecto Pasteur, ha sido ampliamente estudiado en los intentos para dilucidar el mecanismo involucrado. Que crecen las
clulas de levadura no muestran un efecto notable Pasteur. Las clulas que crecen respiran solamente 3 a 20% del
azcar cataboliza y el resto se fermenta. El mecanismo implicado en el cese de la fermentacin en las clulas en reposo
(es decir, bajo condiciones de inanicin de nitrgeno) es un inactivacin progresiva de los sistemas de transporte de
azcar. Como consecuencia, la contribucin de la respiracin a la glucosa catabolismo, que es pequeo en clulas en
crecimiento, se convierte en bastante significativo en las condiciones de inanicin de nitrgeno.

Algunos de los di fi DIF en el estudio de la fermentacin alcohlica en los resultados de levadura del hecho de
que varias isoenzimas de la alcohol deshidrogenasa (ADH) estn presentes, y las actividades de estas y otras
enzimas relacionadas con el metabolismo de carbohidratos se dividen entre el citoplasma, la membrana
mitocondrial, y la citosol mitocondrial. La enzima clave de la produccin fermentativa alcohol (ADH1) reduce el
acetaldehdo a etanol en presencia de NADH y sirve para mantener el equilibrio redox de la fermentacin de
glucosa se produce en el citoplasma de las clulas de levadura. Durante la oxidacin de etanol, ADH2 cataliza la
formacin de acetaldehdo.

utilizacin oxidativa de etanol en la mitocondria implica ADH3. La membrana mitocondrial interna es impermeable a
NAD + o NADH. mutantes de levadura que carecen de ADH1 pueden regenerar NAD + citoplasmtica mediante la
reduccin de DHAP a glicerol-3-fosfato. El glicerol-3-fosfato puede entrar en la membrana mitocondrial, donde se vuelve
a oxidar a DHAP por una deshidrogenasa de glicerol-3-fosfato FAD vinculados. Los electrones generados en esta
oxidacin se transfieren a la cadena respiratoria. Por esta razn, las clulas fi cientes ADH1-de son incapaces de crecer
anaerbicamente. Como resultado de la liberacin de P yo a partir de glicerol-3phosphate, glicerol aparece como un
producto final. Sin embargo, la levadura de deficiente en al menos cuatro de las isoenzimas ADH conocidas todava
produce hasta un tercio del rendimiento mximo terico de etanol a partir de glucosa. Esto puede deberse a la presencia
de formas adicionales de
 FERMENTACIONES productora de cido lctico 417

ADH. El genoma publicado por S. cerevisiae identi fi cados al menos siete genes que potencialmente podra cdigo para
los miembros de la familia de ADH. El glicerol es un producto de fermentacin principal, pero acetaldehdo y acetato
tambin se producen. La produccin de etanol en las clulas se multiplican ADH-de fi ciente depende de transporte de
electrones mitocondrial asociada con la membrana mitocondrial interna.

FERMENTACIONES productora de cido lctico

En las bacterias productoras de cido lctico se producen dos tipos principales de la fermentacin del cido lctico. Aquellas especies
que fermentan la glucosa principalmente a cido lctico son homofermentativos
y los que producen una mezcla de otros productos junto con cido lctico son
heterofermentantes. Algunas especies homofermentativas pueden formar una variedad ms amplia de productos si
se alteran las condiciones de la fermentacin. A pH alcalino de las cantidades de formiato, acetato, y el etanol se
incrementan a expensas de lactato (Tabla 11-2). Como se discuti anteriormente, los estudios de istopos de
etiquetado son tiles para determinar la principal va utilizada en la formacin de productos finales. Lactobacillus casei,
L. pentosus, y
S. faecalis se mostr a producir 14 lactato C-metil-etiquetados a partir de glucosa-1- 14 C con una dilucin del 50% y 14 lactato
marcado con C-carboxilo a partir de glucosa-3,4- 14 C sin dilucin de la actividad especfica. Estos patrones de marcaje fi
t la distribucin de tomos de carbono que se esperan de la utilizacin de la va de EMP, como se muestra en la Figura
11-2. En L. lactis
un opern se ha demostrado que codifican para la fosfofructoquinasa, la piruvato quinasa, y lactato
deshidrogenasa, tres enzimas crucial para el funcionamiento de la va de EMP. Distribucin de 14 sustratos C
marcado indica que ms del 90% del carbono en azcares fermentados se convierte en productos finales
metablicos, normalmente cido lctico (ver Fig. 11-2). Tan poco como 5% del carbono glucosa consumida se
convierte en biomasa.
Se ha propuesto que el trmino homolctica ser usado para referirse a las bacterias del cido lctico que contienen
aldolasa pero no transcetolasa. bacterias del cido homolcticas verdaderos metabolizar la glucosa mediante la ruta de
EMP mientras que los que son realmente heterofermentativo presumiblemente siguen una va de monofosfato de hexosa.
Sin embargo, algunos datos sugieren que una combinacin de ambas vas puede ser operativo en ciertos organismos.

TABLA 11-2. Efecto del pH sobre la glucosa en la fermentacin por S. faecalis

pH

Los productos formados un 5.0 7.0 9.0

cido lctico 174,0 146,0 122,0

cido actico 12.2 18.8 31.2
cido frmico 15.4 33.6 52.8
Etanol 7.0 14.6 22.4

recuperacin Carbon% 95.0 90.0 88.0

ndice o segundo 1.02 1.18 1.18

un Las cantidades de los productos mostrados como mol / 100 mol de glucosa fermentada.

segundo Vase la Tabla 7-5 para definicin de OR (oxidacin-reduccin) ndice y su clculo.

Fuente: De Wood, 1961. La fermentacin de hidratos de carbono y compuestos relacionados. En Las

bacterias, Vol. II, Metabolismo. IC Gunsalus y RY Stanier (Eds.). Academic Press, Nueva York, pg. 59.
418 VAS DE FERMENTACIN

Ruta de Embden-Meyerhof-Parnas

1 CHO CHO CHO CH 2 OP CH 3 1 CH 3

2 CHOH CHOH CHOH C=O C=O CH 2 OH
2
3 HO * CH H * HO * CH H * HO * CH H * * CH 2 OH * COOH 3 *CO
CO 2
4 COH COH COH * CHO * COOH 4
5 * CO 2
5 HCOH HCOH HCOH HCOH C=O CH 2 OH
6 CH 2 OH CH 2 OP CH 2 OP CH 2 OP CH 3 6 CH 3
Glucosa G-6-P F-1,6-BP DHAP + GA-3-P piruvato Etanol + CO 2

1 COOH CO 2 1 CO 2
Camino
CHOH CH 3
Warburg- CH 3 OH CH 3 CH 3
3
2 HO * CH H * 2
Dickens- *C = O * COOPERATIVA * CHO 3 *CH
CH 2 OH
Horecker 4 COH H * COH * CHO *COOH 4 *COOH
5
HMP 5 HCOH HCOH HCOH C=O HCOH
6 CH 2 OP CH 2 OP CH 2 OP CH 3 6 CH 3
6-PG CO 2 Acetil-P acetaldehdo CO 2+ Etanol
+ + + +
R-5-P GA-3-P piruvato lactato

1 COOH COOH CO 2 1 CO 2
Entner-
C=O C=O CH 2 OH CH 2 OH
Doudoroff 2
3 * CH 2 * CH 3 *CH
CH 3 3 *CH
CH 3
Camino 2
4 H * COH * CHO *COOH * CO 2 * CO 2
4
5
5 HCOH HCOH C=O CH 2 OH CH 2 OH
6 CH 2 OP CH 2 OP CH 3 CH 3 6 CH 3
2K3D6PG piruvato 2CO 2
+ +
GA-3-P 2 etanol

Fig. 11-2. patrones de istopos de etiquetado en las vas centrales del metabolismo de carbohidratos en los microorganismos. * C
indica 14 C-etiquetado tomos de carbono.

Uno de los principales factores que controlan el tipo de producto formado es la cantidad de equivalentes
reductores disponibles. En la etapa de oxidacin en la va de fosfato isomerasa, NAD + esta reducido. El potencial
de electrodo de este sistema (NAD + / NADH 2) es - 0,28 V. El potencial del electrodo de la reaccin de lactato
deshidrogenasa es - 0,18 V. Como este est a un potencial ms alto, reduce NAD donar sus tomos de hidrgeno
en piruvato, reducindolo a lactato. Sin embargo, si algn otro aceptor de hidrgeno est disponible, la reduccin de
NAD donar sus tomos de hidrgeno a esta aceptor en lugar de piruvato si el potencial del electrodo de la reaccin
alternativa es mayor (vase Fig. 9-6). Por ejemplo, el potencial de la reduccin de acetaldehdo a etanol es - 0,07 V.
Si se forma acetaldehdo, a continuacin, NADH donar sus tomos de hidrgeno para este sistema. En las
condiciones habituales de fermentacin de cido lctico, no parece estar formado en cualquier cantidad apreciable
acetaldehdo. Sin embargo, por la alteracin del valor de pH, la fermentacin puede ser desviada a una variedad de
productos (Tabla 11-3). Desde los estreptococos parecen utilizar la va de EMP, el desvo de la fermentacin debe
ocurrir en una etapa despus de piruvato
 FERMENTACIONES productora de cido lctico 419

TABLA 11-3. Ejemplos de acetona Butanol y Mixed-Disolvente Fermentaciones

productos un 1 segundo 2 do 3 re 4 mi 5F 6 gramo

CO 2 195.5 220,0 207,0 174,0 215,0 195,0

MARIDO 2 233.0 165,9 111.1 229,4 137,0 54.0
Acetato 42.6 24.8 20.3 48.5 16.0 5.0
butirato 75.3 7.1 14.5 59.5
formiato rastro 10.0
lactato 25.7
Etanol 4.9 122,0 95.0
butanol 47.4 50.2 4.5
Acetona 22.3 28.0 6.0
isopropanol 18.0
acetona 5.7
2,3-butanodiol 12.0 39.0
recuperacin C (%) 97.0 98.0 93.5 98.0 105,0 100,0
equilibrio o 1.02 1.01 1.05 0.99 0.90 1.13

un Las cantidades expresadas como milimoles por 100 mmol de glucosa utilizada.

segundo C. saccharobutyricum. Donker, HL 1926. Ph.D. tesis, escuela Technishe Hooge, Delft, Pases Bajos.
do C. acetobutylicum. Donker de 1926.
re C. butylicum. Sjolander, NW 1937. J. Bacteriol. 34: 419.
mi C. thermosaccharolyticum. Osburn, GL, RW Brown, y CH Werkman. 1937. J. Biol. Chem.
121: 685.
F B. acetobutylicum. Osburn, et al., 1937.
gramo B. polymyxa. Osburn, et al., 1937.

formacin en lugar de por la metabolizacin de hexosa a travs de una va alternativa. En estas condiciones, una
dismutacin del piruvato se produce, dando lugar a lactato, acetato, y la formacin a travs de la siguiente
secuencia:

CH 3 COCOOH + CoASH CH 3 CO-SCoA + HCOOH

CH 3 CO-Scoa + P yo CH 3 COOPO 3 MARIDO 2 + CoASH

CH 3 COCOOH + 2H CH 3 CHOHCOOH

CH 3 COOPO 3 MARIDO 2 + ADP CH 3 COOH + ATP

RED: 2 piruvato + 2H + ADP + P yo lactato de etilo + + formiato + ATP

El etanol, cuando se produce, se forma a travs de la reduccin de acetil fosfato:

CH 3 COOPO 3 MARIDO 2 + 2 (2H) --- CH 3 CH 2 OH + P yo

Debido a una diferencia en los sistemas de piruvato de escisin, formiato, en lugar de dixido de carbono es el principal
producto de un carbono. El dixido de carbono se forma en pequeas cantidades por algunos organismos homolcticas
bajo condiciones en las que la fermentacin se desva de la produccin de lactato.

organismos homofermentativas, tales como S. faecalis, han demostrado que poseen altos niveles de
deshidrogenasa de glucosa-6-fosfato y 6-fosfogluconato deshidrogenasa.
420 VAS DE FERMENTACIN

Sin embargo, un patrn homofermentativa se mantiene a travs interrelaciones reguladores entre las vas de EMP
y HMP (ver Fig. 11-3). La especificidad de activacin fi c de lactato deshidrogenasa (LDH) por FDP es
caracterstico de S. bovis y muchos otros productores de cido bacterias lcticas. El nivel de LDH, que es
dependiente de FDP para la actividad, disminuye a medida que la fermentacin se convierte heterolctica. En S.
faecalis un solo 6PGD ligada a NADP se observa cuando la glucosa es la fuente de energa primaria. clulas
Gluconato-adaptado producen dos 6-PGD: uno especfico para NADP y la otra especificidad c para NAD. La
enzima ligada a NADP es insensible a la inhibicin FDP pero es inhibida por ATP y otros nucletidos. La isomerasa
de G-6-P es inhibida por 6-PG.

Cuando hay una demanda celular para ATP, estas actividades reguladoras de carbono glucosa directa a
travs de la va de EMP de produccin de energa. La inhibicin de G-6-P isomerasa por 6-PG evita la
acumulacin de F-6-P. La alteracin del patrn de fermentacin de estos organismos por el cambio en el pH o de
otra influencias ambientales puede resultar de la interrupcin de estas funciones reguladoras. En S. mutans, fosfatos
de triosa (gliceraldehdo-3-fosfato o fosfato de dihidroxiacetona) inhiben fuertemente liasa pyruvateformate (PFL),
el primer paso en la secuencia de dismutacin. La inhibicin por fosfatos de triosa en cooperacin con un efecto
de la reactivacin de ferredoxina puede regular la actividad de liasa pyruvateformate.

Glucosa
ATP

ADP NAD NADH

G-6-P 6-P-GL 6-PG

NADP

Inhibicin
F-6-P NADPH
ATP
Ribulosa-1-P + CO 2
ADP
PAG yo
F-1,6-BP

DHAP GA-3-P GA-3-P + Acetil-P

+ 2P i + 2ADP NADH ADP

NAD ATP
2ATP NADH
piruvato acetaldehdo
NADH NADH

Activacin
NAD NAD
lactato Etanol

Fig. 11-3. Regulacin de las vas metablicas en Streptococcus faecalis. 6-fosfogluconato (6-PG) inhibe la
actividad de la isomerasa de hexosa difosfato. La fructosa-1,6-bifosfato (F-1,6-BP) inhibe la actividad de
6-fosfogluconato deshidrogenasa. La lactato deshidrogenasa se activa por F-1,6-BP. ( Fuente: Reproducida de Foso,
AG 1985. Biologa de la actico lctico y bacterias del cido propinico. En Biologa de Microorganismos Industriales, AL
Demain y NA Solomon (Eds.). Benjamin-Cummings, Menlo Park, CA. pp. 143-186.)
 FERMENTACIONES productora de cido lctico 421

el gnero Lactococcus incluye L. lactis, L. cremoris, y L. diacetylactis. Estas especies, as como varias especies
de Leuconostoc y Lactobacillus, producir acetona, diacetilo, y 2,3-butanodiol. Estos compuestos son responsables
de la caracterstica y deseable Avor fl en ciertos productos lcteos tales como mantequilla. En ciertas otras
fermentaciones, la presencia de estos compuestos no es deseable, y es de importancia para ser capaz de
minimizar su produccin. Como se muestra en la Figura 11-4, hay varias rutas para la produccin de acetona y
diacetilo. Con etilo como sustrato, la acetil-CoA se forma directamente a partir de acetato sin la formacin
intermedia de piruvato. diacetylactis Lactococcus, Lactobacillus casei, y otros organismos productoras de lactato que
requieren el cido lipoico para el acetato de activate crecimiento a acetil fosfato y forman entonces acetil-CoA a
travs de la quinasa de etilo y fosfotransacetilasa. Por lo tanto, en medios carentes de cido lipoico, estos
organismos pueden no formar acetil-CoA a partir de piruvato.

En un medio libre de lipoato que contiene glucosa y acetato, acetona se forma tanto a travs de la
acetil-CoA-C 2- condensacin TPP y C 2- do 3 rutas condensacin. En L. lactis
el gen de la - descarboxilasa acetolactato ( aldB) est agrupado con los genes para los aminocidos de cadena
ramificada. Esta enzima parece desempear un doble papel en este organismo mediante la regulacin de la
biosntesis de valina y leucina, as como la catlisis de la segunda etapa de la ruta para acetona y 2,3-butanodiol. El
control de la transicin de homolctica a fermentacin mixta-cido parece estar regulado por la NADH / NAD +
relacin relacionada con el fl ux-control de la actividad de glyyceraldehyde-3-fosfato deshidrogenasa.

Durante el crecimiento en la leche, PFL y lactato deshidrogenasa son importantes para sostener el
crecimiento de L. lactis y regenerar cofactores reducidos bajo condiciones anaerbicas. El gen que codifica PFL
ha sido clonado y caracterizado. La enzima se activa

CH 3
CH 3
C=O COOH
Acetato ATP
COOH
piruvato ADP
+ TPP CH 3
do 2- do 3
condensacin - CO 2 POLICA
Acetil-P
OH - PAG yo + CoA
CH 3 CH 3 TPP C
CH 3
HO do COOH Acetal-TPP
C=O
C=O Acetal-TPP
CH 3 CoA
do 2- do 2
Acetil-CoA
un- acetolactato condensacin
- TPP
- CO 2 - CoA

CH 3 CH 3 CH 3
CC =OH
OH CH OH
2H 2H C=O
C=O C=O
CH 3
CH 3 CH 3
2,3-butanodiol acetona diacetilo

Fig. 11-4. rutas alternas para acetona, diacetilo y 2,3-butanodiol. TPP, pirofosfato de tiamina.
422 VAS DE FERMENTACIN

a travs de la formacin de radicales libres y se degrada en presencia de oxgeno. En condiciones anaerobias, el

carbono fl ux a partir de piruvato se distribuye principalmente entre las dos enzimas que compiten: lactato
deshidrogenasa (LDH) y liasa piruvato-formiato (PFL). La regulacin de la transicin de homofermentativa a la
formacin de mezclado-cido se asocia principalmente con la influencia de los efectores alostricos que actan sobre
la LDH y enzimas PFL.
Los organismos que metabolizan azcares a travs de vas fermentativas y no utilizan oxgeno molecular como
un aceptor de hidrgeno final o generan ATP a travs de la fosforilacin oxidativa son anaerobios. Sin embargo, si
tales organismos crecen en presencia de oxgeno, pueden ser referidos como aerotolerant. En presencia de
oxgeno, productos txicos tales como el perxido de hidrgeno pueden ser generados por la autooxidacin de la
reduccin de FAD, y los radicales hidroxilo se pueden formar por la interaccin de este compuesto con superxido.
organismos anaerobios que toleran la presencia de oxgeno son generalmente capaces de hacerlo en virtud de la
presencia de enzimas que las protegen de estos compuestos txicos (vase ms discusiones en el captulo 18).
Algunos organismos fermentativos tales como L. plantarum se aerotolerant simplemente porque no interactan con
el oxgeno molecular. concentraciones intracelulares elevadas de Mn 2+ tambin ayudar a estos organismos en
barrido de anin superxido.

Streptococcus pyogenes y otras bacterias de cido lctico producen NADH oxidasa, una avoprotein fl nica que
cataliza la reduccin de cuatro electrones de oxgeno a agua. Esta enzima puede en realidad permitir que ciertos
organismos fermentativos para utilizar el oxgeno molecular con ventaja en la produccin de energa. Bajo
condiciones anaerbicas la conversin de piruvato a lactato o una mezcla de formiato, acetato, etanol y sirve para
oxidar NADH a NAD +. En presencia de oxgeno, FL enzimas avin que contienen catalizan la oxidacin de NADH
por el oxgeno.

A pesar de que S. mutans depende de la gluclisis y prefiere un ambiente anaerbico, la presencia de

oxgeno induce la formacin de NADH oxidasa y la superxido dismutasa. Dos tipos de NADH oxidasa se
inducen en las cepas tolerantes a oxgeno de S. mutans. A oxidasa que forman perxidos (Nox-1) cataliza la
reaccin:

NADH + H + + O 2 --- NAD + + H 2 O 2

El segundo oxidasa (Nox-2) cataliza una reduccin de cuatro electrones del oxgeno por NADH:

2NADH + 2H + + O 2 --- 2NAD + + 2H 2 O

La presencia de FAD libre aumenta la actividad de Nox-1 pero no la de Nox-2.

S. mutans tambin produce una peroxidasa (AhpC) codificada por ahpC, un gen localizado aguas arriba de la nox-1 gene.
Esta enzima peroxidasa complementa Nox-1 mediante la reduccin del perxido a agua y emulando la accin de
Nox-2. Sin embargo, Nox-2 parece jugar un papel importante en el metabolismo energtico aerbico en oxgeno
tolerantes S. mutans,
mientras que Nox-1 sirve un papel insignificante a pesar del hecho de que es la nica enzima que se produce
cuando el organismo se cultiva en condiciones anaerbicas. Este organismo tambin produce otro sistema
antioxidante, codificada por el DPR gen que es independiente del sistema de Nox-1-AhpC y puede compensar las
deleciones de ambos nox-1 y ahpC
en las cepas mutantes. El producto de la DPR gen, Dpr, es una protena de unin al hierro que, presumiblemente, contribuye a la
tolerancia de oxgeno mediante el mantenimiento de un nivel bajo de hierro.
La mayora de las bacterias de cido lctico no producen citocromos porque son incapaces de sintetizar hemo.
Sin embargo, cuando se cultiva en presencia de hematina, Enterococcus
 FERMENTACIONES SOLVENTES A LA PRODUCCIN DE CIDO-Y BUTRICO 423

faecalis produce citocromos funcionales que producen ATP a travs de la fosforilacin oxidativa. Un E. faecalis
grupo de genes, cydABCD, codifica una citocromo funcional bd oxidasa -terminal que se produce cuando las
clulas se cultivan en presencia de hemo. La capacidad de formar citocromos parece limitarse a E. faecalis y
algunas cepas de L. lactis. Otras bacterias de cido lctico producen menaquinonas, que son quinonas
isoprenoides que funcionan en el transporte de electrones y, posiblemente, en la fosforilacin oxidativa.

FERMENTACIONES SOLVENTES A LA PRODUCCIN DE CIDO-Y BUTRICO

Los miembros de la Clostridium, Butyrivibrio, Bacillus, y otra menos bien de fi nido fl ora de sedimentos pantano, madera
hmeda de rboles vivos, y los sistemas de digestin anaerobia de aguas residuales producir cido butrico, butanol,
acetona, isopropanol, o 2,3-butanodiol. Hidrgeno, dixido de carbono, acetato y etanol se encuentran comnmente
entre los productos de fermentacin.

Clostridium acetobutylicum utiliza la va de EMP para el catabolismo de la glucosa con la formacin de etanol,
dixido de carbono, hidrgeno, acetona, isopropanol, butirato, y butanol a partir de piruvato a travs de acetil-CoA,
como se muestra en la Figura 11-1. Durante el crecimiento, las primeras formas organismo de acetato y butirato
(fase acidognica). A medida que el pH cae y el cultivo entra en la fase estacionaria, hay un cambio metablico a
disolvente de produccin (fase solvetogenic). La reaccin fundamental en estas fermentaciones es la formacin de
acetil-CoA a partir de piruvato. Acetil-CoA puede entonces someterse a condensacin para formar acetoacetato,
que puede ser reducido a butirato y butanol o escinde mediante descarboxilacin a la acetona. La acetona puede
reducirse an ms a isopropanol. Acetil-CoA tambin puede ser reducido en acetaldehdo y etanol. Con otras
especies como

B. acetoethylicum o B. polymyxa, lactato o 2,3-butanodiol pueden observarse como se muestra en la Tabla 11-3.

En el equilibrio de los productos de fermentacin formados en estas fermentaciones complejas, no es difcil de

explicar el carbono en los productos formados. Sin embargo, la formulacin de un esquema terico para dar cuenta de
un equilibrio de productos oxidados y reducidos puede ser ms difcil. Considere la siguiente ecuacin:

4 glucosa --- 2 de etilo + 3 butirato + 8CO 2 + 8H 2

Balance de carbono: (4 6) = (2 2) + (3 4) + (8 1) = 24

O-R equilibrio: 0 = 0 + 3 ( - 2) + 8 (2) + 8 ( - 1) = 16 - 14

Los tomos de balance de carbono, pero hay un dficit de algn producto reducida. En la mayora de las fermentaciones
clostridiales hay una formacin compensatoria de pequeas cantidades de varios productos reduce como se muestra en
la Tabla 11-3. La produccin de estos compuestos parece ser necesario debido a la condensacin de 2 moles de
acetil-CoA para formar acetoacetil y la posterior conversin a la acetona a travs de los resultados de acetoacetato
descarboxilasa en una fuerte disminucin en el nmero de aceptores de hidrgeno disponible. Acetil-CoA puede actuar
como un aceptor de hidrgeno, dando lugar a etanol, y acetona se puede reducir adicionalmente a isopropanol. En
fermentaciones que muestran la mejor O-R equilibrio, etanol, acetona, y

2,3-butanodiol se encuentran entre los productos finales fi nales.

424 VAS DE FERMENTACIN

La ecuacin general para butirato de mezclado, acetona, y la fermentacin del etanol puede dar cuenta tanto
para el carbono y el resto O-R:

do 6 butirato de (C 4) + 2C 1+ 2H 2

do 6 acetona (C 3) + 3C 1 + 2H 2

do 6 2 etanol (C 2) + 1C 1 + 2H 2

RED: 3C 6 do 4 + do 3 + 2C 2 + 7C 1 + 6H 2 ( balance de carbono: 18 = 18)

O: 0 ( - 1) + ( - 2) + 2 ( - 2) + 7 (2) + 6 ( - 1) = 14 - 14 = 0

Generalmente, se formarn pequeas cantidades de productos, ya sea oxidado o reducido para proporcionar un
equilibrio de los productos oxidados y reducidos. Los valores de oxidacin se dan en la Figura 11-1. Los ejemplos
representativos de acetona-butanol y fermentaciones-disolvente mixto se muestran en la Tabla 11-3.

Formiato se produce en relativamente pocas de estas fermentaciones. Aunque el dixido de carbono y gas de
hidrgeno se producen como en la fermentacin de organismos gram-negativos,
en clostridios y otros anaerobios de hidrgeno se forma a travs de una
piruvato: ferredoxina (Fd) oxidorreductasa sin la produccin intermediario de formiato. La ferredoxina
reducida se convierte en hidrgeno por hidrogenasa:

piruvato + Fd --- acetil-CoA + CO 2 + FdH + H + FdH + H + --- MARIDO

2+ fd

El flujo de electrones de NADH a FDH a H 2 explica por qu estos organismos producen grandes cantidades
de H 2 y no consumen H 2.
Una enzima que contiene dos Fe 4 S 4 racimos cataliza la oxidacin de piruvato a acetil-CoA, dixido de
carbono, y ferredoxina reducida. Ferredoxina tambin contiene dos Fe 4 S 4 agrupaciones dispuestas en simetra
aproximadamente dos veces dentro de la protena ferredoxina. Hydrogenases que resultan en la produccin de
gas de hidrgeno contienen enzimas irononly. los C. pasteurianum enzima contiene cinco categoras diferenciadas
de hierro-azufre unidos covalentemente a la protena. una Fe 2 S 2 cluster y tres Fe 4 S 4 racimos transferir electrones
al centro de hidrgeno, el sitio cataltico presunta de la enzima. El centro de hidrgeno se compone de un grupo
de seis de hierro y un subgrupo de dos hierro unido a monxido de carbono y / o cianuro. La disposicin del hierro
(Fe) y tomos de azufre (S) en el cluster de cuatro hierro se muestra en la Figura 11-5.

Produccin de cido actico a partir de glucosa por C. thermoaceticum se e fi ciente en que 3 molculas de
etilo se producen por molcula de glucosa. Esto se consigue mediante una nueva serie de reacciones que implica
la sntesis de acetato de dixido de carbono:

do 6 MARIDO 12 O 6 EMP 2CH 3 COOH + 2CO 2 + 8H + + 8e -

2CO 2 + 8H + + 8e - CH 3 COOH

RED: do 6 MARIDO 12 O 6 3CH 3 COOH

Es particularmente significantes que la sntesis de acetato a partir de dixido de carbono por este microorganismo fue la
primera demostracin de la sntesis total de un compuesto orgnico de
 Fermentaciones de tipo mixto-ACID 425

Cys
S
Cys Fe S
S Cys

Cys S

rubredoxinas

Cys S Cys
S
SS
Fe Fe
S Cys
S
Cys
Fe 2 S 4 Racimo

S Cys
Cys S S Fe

Fe S

Fe S

S
S Fe

Cys S Cys

Fe 4 S 4 Racimo

Fig. 11-5. disposiciones propuestas del hierro (Fe) y tomos de azufre (S) en los sistemas de rubredoxina, ferredoxina, y
hidrogenasa. Cys-S representa la vinculacin con el S en cistena. En los sistemas de 8Fe / 8S, los tomos de hierro y azufre estn
dispuestos en dos tetramrica Fe 4 S 4 racimos.

dixido de carbono por un organismo hetertrofa. Este trabajo pionero de Harland G. Wood en los aos 1940 y 1950
demostraron de forma concluyente que todas las formas de vida fi dixido de carbono x. Sin embargo, la mayora de los
hetertrofos slo pueden aadir dixido de carbono a un compuesto preexistentes y formar un grupo carboxilo. Las
bacterias que pueden formar un compuesto orgnico a partir de dixido de carbono e hidrgeno contienen hidrogenasa,
una enzima que convierte el hidrgeno en dos protones y dos electrones. Estos electrones proporcionan la capacidad
reductora necesaria para la utilizacin de dixido de carbono. La reaccin global implica la participacin de ferredoxina
como portador reducida de electrones y la hidrogenasa enzimas, monxido de carbono deshidrogenasa, y
metilentetrahidrofolato reductasa.

Fermentaciones de tipo mixto-ACID

Bajo condiciones anaerbicas y en ausencia de receptores de electrones alternativos, los miembros de la Enterobacteriaceae
(Escherichia, Enterobacter, Salmonella, Klebsiella, y
Shigella) glucosa fermento a una mezcla de cido actico, frmico, lctico, los cidos succnico y etanol (Tabla
11-4). La produccin de acetato y formiato como los principales productos es notable. Tanto como el 85% de la
glucosa fermentada por E coli se metaboliza a travs de la va de EMP. Otras vas deben contribuir a los
productos que, en cierta medida,
426 VAS DE FERMENTACIN

TABLA 11-4. Ejemplos de Mezclar-cido Fermentaciones

Escherichia Enterobacter Salmonela

productos un coli Aerogenes typhi

lactato 108,8 53.4 121,7

Etanol 41.3 59.4 25.4
Acetato 32.0 10.1 25.6
formiato 1.6 5.5 39.33
CO 2 54.0 126,9 0
MARIDO 2 45.2 44.2 0
succinato 18.0 6.0 10.8
acetona 0 0.4 0
2,3-butanodiol 0 34.6 0
la recuperacin de carbono (%) 100,0 99.5 93.3
equilibrio o 0.99 0.99 0.97

un Las cantidades se expresan como milimoles por 100 glucosa mmol utilizado.

sin embargo. A diferencia de clostridios fermentaciones en el que la acetil-CoA, dixido de carbono, y dihidrgeno
generalmente surgen sin formiato como un intermedio, formiato se encuentra constantemente como un producto del
metabolismo del azcar por bacterias entricas. A liasa pyruvateformate CoA-dependiente (P fl) codificada por el p fl gen
inicia la secuencia de

CH 3 COCOOH + CoASH - CH 3 COSCoA + HCOOH

Fosfotransacetilasa convierte la acetil-CoA a acetil fosfato:

CH 3 COSCoA + P yo - CH 3 COOPO 3 MARIDO 2 + CoASH

acetato quinasa (codificada por el ackA gen en E coli ) genera ATP a partir de acetil fosfato:

CH 3 COOPO 3 MARIDO 2 + PAG yo - CH 3 COOH + ATP

Esta enzima resulta en la produccin de acetato y genera una porcin principal de la ATP producida durante el
crecimiento anaerobio. El sistema (FHL) liasa formiato-hidrgeno convierte formiato a H 2 y compaa 2. El
sistema FHL consta en realidad de dos enzimas: formiato deshidrogenasa-H (FDH-H), que produce dixido de
carbono y un vehculo reducida; y una hidrogenasa-3, que produce H 2 de la portadora reducida:

portadora HCOOH + CO 2 + carrier-2H

carrier-2H MARIDO 2 + portador

Red: HCOOH CO 2 + MARIDO 2

La induccin de la FDH-H (codificada por fdhF) requiere la presencia de formiato, molibdato, la ausencia de
receptores de electrones, tales como oxgeno o nitrato, y pH cido. Expresin de fdhF requiere un suplente factor
de (NTRA) y una secuencia de activacin aguas arriba (UAS). Expresin de p fl depende de las actividades
Fosfoglucoisomerasa y fosfofructoquinasa.
 Fermentaciones de tipo mixto-ACID 427

El cido lctico surge de piruvato a travs de la actividad de LDHA inducida en las condiciones de anaerobiosis y
un pH bajo. La produccin de etanol se produce a travs de la reduccin de la acetil-CoA a etanol a travs de una
deshidrogenasa de acetaldehdo ligado-CoA acoplado a una alcohol deshidrogenasa ligada a NAD.

Acetona est formado por Enterobacter aerogenes pero no por E coli. Una variedad de otros organismos (por
ejemplo, Serratia, Erwinia) tambin formar acetona o su oxidacin (diacetilo) o reduccin (2,3-butanodiol) los productos,
como se muestra en las Figuras 11-1 y 11-4. En los organismos gram-negativas, el pirofosfato de tiamina est implicada
como un cofactor y
- acetolactato se produce como un intermedio en acetona formacin. Acetato induce la produccin de la
enzima de formacin de acetolactato-, acetolactato decarboxilasa y diacetil reductasa. diacetil reductasa
tambin funciona como una deshidrogenasa acetona en E. aerogenes y sirve como un regulador del
equilibrio entre la acetona y 2,3butanediol.

En E coli la formacin directa de diacetilo de 2-hidroxietil-TPP y acetil-CoA se ha demostrado. El diacetilo se

reduce a acetona por un NADP + -speci fi c diacetil reductasa que no acta en acetona (Fig. 11-4). Acetona es
un producto catablico importante de B. subtilis crecido aerbicamente en glucosa. Desde acetona es neutral,
grandes cantidades de glucosa se pueden producir sin la produccin de exceso de cido.

Dos genes, ilvBN ( que codifica para acetohidroxi sintasa de cidos) y ALS ( la codificacin de
- acetolactato sintasa), estn involucrados en la produccin de acetolactato a partir de piruvato en
B. subtilis. Acetolactato se puede convertir en acetona por descarboxilacin espontnea a bajo pH o por medio
de la accin de la acetolactato decarboxilasa (codificada por ALSD). Acetona sirve como un compuesto de
almacenamiento de carbono. Se reimportado del medio de crecimiento y se utiliza durante la fase estacionaria
cuando otras fuentes de carbono se han agotado. Parece que hay ms de una va de utilizacin de acetona en B.
subtilis. Tres genes forman un opern, acuABC, genes que codifican enzimas acetona utilizacin. Otro sistema,
la acoABCL opern, que codifica la multicomponente acetona complejo enzima deshidrogenasa, parece
constituir la principal va de catabolismo acetona en este organismo. La expresin de este opern es inducida
por acetona y reprimida por glucosa. Un ACOR gen, que se encuentra aguas abajo de la acoABCL opern,
codifica un regulador positivo, que estimula la transcripcin del opern.

Un estudio de los saldos de la fermentacin anaerbica con diversos sustratos usando una tcnica de
espectroscopia no intrusiva de resonancia magntica nuclear (RMN) mostr que los sustratos ms reducida que
rendimiento de glucosa producto ms reducida como etanol. sustrato ms oxidado result en la produccin de
producto ms neutral en la forma de acetato. El nivel redox del sustrato es importante en el gobierno de la relacin
de oxidado a productos reducidos. Por ejemplo, alcoholes de azcar, que son ms reducidas que las hexosas
correspondientes, deben ceder una mayor proporcin de productos de fermentacin ms reducidas para lograr el
equilibrio de hidrgeno.

La fermentacin de citrato (valor de oxidacin: 3) produce SUF productos oxidados deficiente en la forma de
(valor de oxidacin: 1) HCOOH y dixido de carbono (valor de oxidacin: 2) para equilibrar la ecuacin de
oxidacin / reduccin. La fermentacin de citrato por Klebsiella pneumoniae comienza con la escisin por citrato
liasa para formar acetato y oxaloacetato. El oxaloacetato se descarboxila por el oxaloacetato descarboxilasa
bomba de Na +. Parte de la energa de esta reaccin se utiliza para el transporte de citrato. El piruvato formado
se degrada por liasa piruvato-formiato a acetil-CoA y formiato. formas fosfotransacetilasa acetil fosfato de
acetil-CoA y P yo. La transferencia de fosfato de alta energa a partir de acetil fosfato a ADP genera ATP, dejando
de etilo como un producto final nal fi. UN
428 VAS DE FERMENTACIN

porcin de la formiato recibe la accin de formato liasa-hidrgeno, produciendo CO 2 y H 2.

Un hidrogenasa NADP reductor convierte H 2 a NADPH + H +, que est disponible para las reacciones biosintticas.

La utilizacin de glicerol (valor de oxidacin: - 1) implica el transporte en la clula a travs de una

facilitador codificada por GlpF. El glicerol es fosforilado por glicerol quinasa (codificada por GLPK) atrapndola
dentro de la clula como glicerol-3-fosfato (G-3-P). Bajo condiciones anaerbicas una deshidrogenasa
codificada por el glpACB opern produce dihidroxiacetona fosfato, que luego puede ser metabolizado a travs
de la va del fosfato de triosa. En presencia de oxgeno, una deshidrogenasa aerbico codificada por el glpD opern
logra el mismo fin. los FNR gen de producto FNR, un activador pleiotrpico de genes implicados en la
respiracin anaerbica, regula la utilizacin de glicerol, G-3-P, y disteres glicerofosfato. El arco (sistema de
control respiratorio aerbico) controla la expresin de varios genes que codifican enzimas implicadas en la
respiracin aerbica.

PROPINICO FERMENTACIN

Propionato, acetato, y dixido de carbono son los principales productos de la fermentacin de la glucosa,
glicerol y lactato de Propionibacterium, Veillonella, Bacteroides, y algunas especies de clostridios. Clostridium
propionicum, Bacteroides ruminicola, y
Peptostreptococcus puede eliminar el agua de lactato para formar acrilato con posterior reduccin a
propionato. Coenzima A y CoA lactil dehydrase mediar la reaccin de

CH 3 CH 2 CH 3 CH 3
+ 2H - Cosco UN
HCOH - MARIDO 2 O HC CH 2 CH 2

COSCoA COSCoA COSCoA COOH

Lactil-CoA Acrililo-CoA Propionil-CoA propionato

Los dos tomos de hidrgeno necesarios para la reduccin de acrililo-CoA al propionato de propionil-CoA surgir a
travs de la formacin de acetato, CO 2, y 2 (2H) a partir de una porcin de la lactato total utilizada:

lactato etilo + CO 2 + 2 (2H)

2 lactato + 2 (2H) 2 propionato

Red: 3 lactato 2 propionato de etilo + + CO 2

En Propionibacterium y veillonellas, formacin propionato surge a travs de una serie ms compleja de reacciones:

1.5 glucosa + 3ADP + 3P yo 3 piruvato + 3ATP + 3 (2H)

piruvato + ADP + P yo etilo + CO 2 ATP + 2H

2 piruvato + 2ADP + 2P yo + 4 (2H) 2 propionato + CO 2 + 6ATP + 2H 2 O

Red: 1.5 glucosa + 6 ADP + 6P yo de etilo + 2 propionato + CO 2 + 6ATP + 2H 2 O

 PROPINICO FERMENTACIN 429

plipo norte - 1 plipo norte

PAG yo ADP ATP
Triosa-P F-1,6-BP F-6-P G-6-P Glucosa
NAD PP yo
ADP, P yo, NAD +
ATP NADH
PAG yo ADP +
ATP, NADH PP yo ATP
PAG yo

AMP
ENERGA piruvato Acetato + CO 2

ADP ATP

ARRULLO -

oxaloacetato Metilmalonil-CoA
P~ PAG yo
NADH NAD + NADH

Succinil-CoA Propionil-CoA
NAD +
Flavin-2H Flavin
CoA
fumarato succinato propionato

Fig. 11-6. formacin de propionato, acetato, y CO 2 por Propionibacterium. ( Fuente: De

HG Wood, 1986, comunicacin personal).

Los detalles de esta va de glucosa a propionato, acetato, y CO 2 en propionibacterias se muestra en

la Figura 11-6.
Un factor importante en la elucidacin de esta ruta de la formacin de propionato fue la demostracin de
transcarboxylation por transcarboxilasa metilmalonil-oxaloacetato. Este transcarboxilasa multimrica
cataliza la transferencia reversible de un grupo carboxilo de metilmalonil CoA en piruvato para formar
propionil-CoA y oxaloacetato. El grupo carboxilo transferido no se libera o se intercambia con el CO 2; ni es
intercambiada con el CO 2 disuelto en el medio. En esta reaccin, la biotina juega un papel cataltico
importante. Cobalamina (vitamina B 12) tambin sirve como un cofactor en la formacin de metilmalonil-CoA
a partir de succinil-CoA en la secuencia de reaccin

enz-biotina-CO 2 + piruvato oxaloacetato enz-biotina

oxaloacetato + 4H succinato + H 2 O

succinil-CoA-B 12- Enz metilmalonil-CoA + B 12- Enz

metilmalonil-CoA + enz-biotina propionil-CoA + enz-biotina-CO 2

propionil-CoA + succinato succinil-CoA + propionato

RED: piruvato + 4H propionato + H 2 O

Como se muestra en la Figura 11-6, los tomos de hidrgeno necesarios para la reduccin de oxalacetato de succinato
se obtienen a partir de reacciones en la conversin de glucosa a acetato y dixido de carbono a travs de piruvato. En
condiciones apropiadas y en presencia de las enzimas necesarias, los rendimientos de 11 moles de ATP por 3 moles de
glucosa se puede lograr:

3 glucosa + 4PP i + 11ADP --- 2 de etilo + 4 propionato + 2CO 2 + 11ATP + 4PP yo

430 VAS DE FERMENTACIN

La participacin de polifosfato y PP yo Tambin explica los rendimientos de clulas altos observados en el crecimiento de las
bacterias propinicas. Demostracin de reacciones en las que la energa inherente en polifosfato y PP yo pueden utilizarse y
no se desperdicia a travs de la hidrlisis tiene implicaciones de largo alcance en otros sistemas, ya que muchas
reacciones biolgicas producen PP yo o polifosfato como productos. Algunos ejemplos son los siguientes:

La glucoquinasa: glucosa + plipo norte --- G-6-P + plipo norte - 1

Fosfofructoquinasa: F-6-P + PP yo --- F-1,6-BP + P yo

Carboxytransphosphorylase: PEP + CO 2 + PAG yo --- oxalacetato + PP yo

conversin neta de piruvato a oxaloacetato:

piruvato + ATP + P yo --- oxaloacetato + AMP + 2PP yo

cido actico FERMENTACIN

Las bacterias de cido actico se dividen en dos gneros: Acetobacter y Gluconobacter.

Ambas especies son aerobios obligados que oxidan azcares, alcoholes de azcar y de etanol con la produccin de
cido actico como el principal producto final. Los electrones de estas reacciones oxidativas se transfieren directamente
a la cadena respiratoria. La cadena respiratoria de
G. suboxydans consta de citocromo do, ubiquinona, y un terminal de cytochrome- o
ubiquinol oxidasa. En A. aceti la composicin de la cadena respiratoria vara segn el grado de aireacin
durante el crecimiento.
Gluconobacter suboxydans carece de un ciclo TCA funcional, aunque todas las enzimas de este ciclo
excepto succinato deshidrogenasa estn presentes. Este organismo no puede fermentar los hidratos de carbono
de glucosa o de otras ya que las vas de EMP y Entner-Doudoroff no estn presentes. Un ciclo de las pentosas
modi fi ed se utiliza para el metabolismo de la glucosa en condiciones aerbicas (Fig. 11-7). Acetobacter especies
tienen un ciclo TCA funcional. La acetil fosfato resultante de la C 2- do 3 la escisin de pentosa se oxida a CO 2 y la
energa se genera a travs de la fosforilacin oxidativa.

Una actividad caracterstica de Acetobacter y Gluconobacter es la oxidacin de etanol a cido actico. la

oxidacin del etanol se produce a travs de dos deshidrogenasas asociadas a la membrana: alcohol
deshidrogenasa y acetaldehdo deshidrogenasa:

CH 3 CH 2 OH --- CH 3 CHO + 2H --- CH 3 COOH + 2H

Los electrones generados en la oxidacin de etanol se transfieren directamente a la cadena respiratoria.

La produccin comercial de cido actico se lleva a cabo en dos pasos. El alcohol se primer producido por fermentacin
de la levadura convertir la glucosa a CO 2 y el alcohol. Los segundos usos etapa A. aceti para convertir el etanol a cido
actico, con los equivalentes de reduccin se transfieren al oxgeno a travs de la cadena respiratoria como se describe
anteriormente. El proceso requiere controlarse cuidadosamente las condiciones para lograr el rendimiento mximo de etilo.

El acetato es un producto principal del metabolismo de carbohidratos en B. subtilis. Conversin de piruvato en

acetato se produce principalmente durante el crecimiento exponencial. Durante la fase estacionaria, acetato se genera a
travs de butanodiol. Overacidi fi cacin del medio de
 BIBLIOGRAFA 431

Glucosa
ATP SH-7-P
+
ADP ejrcito de reserva GA-3-P TK
G-6-P

F-6-P E-4-P R-5-P

PAG yo
+ +
MARIDO 2 O F-6-P X-5-P
Acetil-P E-4-P
+
PAG yo
ADP
HDP 2GA-3-P
ATP + 2H 2 O
2Acetyl-P
Acetato
2ADP

2ATP

2Acetate

Fig. 11-7. Modi fi ed ciclo de las pentosas para Acetobacter y Gluconobacter. TA, transaldolasa; TK,
transcetolasa; E-4-P, eritrosa-4-fosfato; SH-7-P, sedoheptulosa-7-fosfato; R-5-P, ribosa-5-fosfato; X-5-P,
xilulosa-5-fosfato; HDP, difosfato de hexosa; GA-3-P, la gliceraldehdo-3-fosfato. ( Fuente: De AG Moat, 1985. Biologa
de lctico, actico, y las bacterias del cido propinico. En Biologa de Microorganismos Industriales. AL Demain y NA
Solomon (Eds.). Benjamin Cummings, Menlo Park, CA, pp. 143-188.)

debido a piruvato y acetato de acumulacin durante el crecimiento exponencial es aparentemente aliviado por la
produccin de acetona en condiciones aerobias o 2,3-butanodiol en condiciones anaerbicas. Estos compuestos
pueden ser reutilizados en la fase estacionaria. El fosfotransacetilasa ( pta) gen, junto con el acetato de quinasa ( ackA)
gen, codificar las enzimas que catalizan la conversin de acetil-CoA a acetato a travs de acetilo ~ P. Estos dos
genes estn organizados en un opern y estn involucrados en el mantenimiento de la intracelular de acetil-CoA
y acetil ~ piscinas pg.

BIBLIOGRAFA

La fermentacin Pathways

ock, A.
SEGUNDO 2000. fermentacin. En J. Lederberg (ed.), Enciclopedia de Microbiologa, 2 ed., Vol. 20. Academic Press,
San Diego, pp. 343-9.

La fermentacin de la levadura

Gombert, AK, MM DosSantos, B. Christensen, y J. Nielsen. 2001. Red de identi fi cacin

y fl ux cuanti fi cacin en el metabolismo central de Saccharomyces cerevisiae bajo diferentes condiciones de represin de la
glucosa. J. Bacteriol. 183: 1441-1451.

Hanegraaf, PPF, AH Stouthamer y SALM Kooijman. 2000. Un modelo matemtico

para la levadura fisiologa respiro-fermentativo. Levadura diecisis: 423-37. Ostergaard, S., L. Olsson, y J. Nielsen. 2000. La

ingeniera metablica de Saccharomyces

cerevisiae. Microbiol. Mol. Biol. Rdo. 64: 34-50.
432 VAS DE FERMENTACIN

Walker, GM 2000. Las levaduras. En J. Lederberg (ed.), Enciclopedia de Microbiologa, 2 ed., Vol. 4.
Academic Press, San Diego, pp. 939-53. Walker, GM 1998. Fisiologa y Biotecnologa de la levadura. John Wiley & Sons,

Chichester, Reino Unido.

La fermentacin del cido lctico

Arnau, J., et al. 1997. Clonacin, expresin y caracterizacin de la Lactococcus lactis p fl

gen, que codifica la piruvato formato liasa. J. Bacteriol. 179: 5884-91. Garrigues, C., P. Loubiere, ND Lindley, y
M. Cocaign-Bosquet. 1997. El control del turno
a partir de cido homolctica a fermentacin mixta-cido en Lactococcus lactis: papel predominante de la NADH / NAD +
ratio. J. Bacteriol. 179: 5282-7.

Gibson, CM, TC Mallett, A. Claiborne, y MG Caparon. 2000. Contribucin de NADH

oxidasa para el metabolismo aerbico de Streptococcus pyogenes. J. Bacteriol. 182: 448-55. Goupil-Feuillerat, N., et al.

2000. doble papel de - descarboxilasa acetolactato en Lactococcus

lactis subsp. lactis. J. Bacteriol. 179: 6285-93.
Higuchi, M., Y. Yamamoto, LB Poole, et al. 1999. funciones de dos tipos de NADH oxidasas
en el metabolismo energtico y el estrs oxidativo de Streptococcus mutans. J. Bacteriol. 181: 5940-7. Litch campo, JH 2000. El

cido lctico, producido microbianamente. En J. Lederberg (ed.), Enciclopedia de

Microbiologa, 2 ed., Vol. 3. Academic Press, San Diego, pp. 9-17. Llanos, RM, CJ Harris, AJ Hillier, y BE
Davidson. 1993. La identificacin de una novela
opern en Lactococcus lactis codificacin de tres enzimas para la sntesis de cido lctico: fosfofructoquinasa,
piruvato quinasa, y lactato deshidrogenasa. J. Bacteriol. 175: 2541-51. Melchiorsen, CR, et al. 2000. Sntesis y la
regulacin postraduccional de formate- piruvato
liasa en Lactococcus lactis. J. Bacteriol. 182: 4783-8.
Foso, AG 1985. Biologa de la lctico, actico, y las bacterias del cido propinico. En AL y Demain
NA Solomon (eds.), Biologa de Microorganismos Industriales. Benjamin-Cummings, Menlo Park, CA, pp. 143-88.
Nov
ak, L. y P. Loubiere. 2000. La red metablica de Lactococcus lactis: distribucin de
14sustratos entre catablico y vas anablicas C-etiquetado. J. Bacteriol. 182: 1136-1143. Somkuti, GA 2000.

bacterias del cido lctico. En J. Lederberg (ed.), Enciclopedia de Microbiologa,

2 ed., Vol. 3. Academic Press, San Diego, pp. 1-8.
Winstedt, L., L. Frankenberg, L. Hederstedt, y C. von Wachenfeldt. 2000. Enterococcus
faecalis V583 contiene un citocromo BD oxidasa de tipo respiratorio. J. Bacteriol. 182: 3863-6. Yamamoto, Y., M.
Higuchi, LB Poole, y Y. Kamio. 2000. El papel de la DPR producto en oxgeno
tolerancia en Streptococcus mutans. J. Bacteriol. 182: 3740-7.

cido butrico y disolvente Productores de Fermentaciones

Adams, MWW, y EI Stiefel. 1998. La produccin biolgica de hidrgeno: no tan elemental.

Ciencia 282: 1842-3.
Cheryan, M. 2000. actico produccin de cido. En J. Lederberg (ed.), Enciclopedia de Microbiologa,
2 ed., Vol. 1. Academic Press, San Diego, pp. 13-17.
Das, A., y LG Ljungdahl. 2000. acetognesis y acetognicas bacterias. En J. Lederberg (ed.),
Enciclopedia de Microbiologa, 2 ed., Vol. 1. Academic Press, San Diego, pp. 18-27. Ljungdahl, LG 1994. La
va de acetil-CoA y la generacin quimiosmtica de ATP durante
acetogenesis. En HL Drake (ed.), Acetognesis. Chapman Hall, Nueva York. Mitchell, WJ 1999. Fisiologa de hidratos
de carbono a disolvente conversin por clostridios. Adv.
Microb. Physiol. 39: 31-130.
 BIBLIOGRAFA 433

Nair, RV, et al. 1999. Reglamento de la Sol genes del locus para la formacin de butanol y acetona
en Clostridium acetobutylicum ATCC824 por un represor transcripcional putativo. J. Bacteriol.
181: 319-30.
Peters, JW, WN Lanzilotta, BJ limn, y LC Seefelt. estructura cristalina 1998. rayos X de
la Fe de slo hidrogenasa (CPL) a partir de Clostridium pasteurianum a 1,8 Angstrom de resolucin.
Ciencia 282: 1853-8.
Saint-Amans, S., et al. 2001. Reglamento de carbono y electrones fluir en Clostridium butyricum
VPI 3266 cultiva en mezclas de glucosa-glicerol. J. Bacteriol. 183: 1748-1754.

Mezclar-cido Fermentaciones

Ali, NO, J. Bignon, G. Rapoport, y M. Debarbouille. 2001. Reglamento de la acetona

va catablica es controlado por sigma L en Bacillus subtilis. J. Bacteriol. 183: 2497-504. Kessler, D., y J.
Knappe 1996. anaerbico dissimilation de piruvato. En FC Neidhardt, et al.
(eds.), Escherichia coli y Salmonella: Biologa Celular y Molecular, 2 ed. ASM Press, Washington, DC, pp.
199-205.
Steuber, J., W. Krebs, M. Bott, y P. Dimroth. 1999. A unida a la membrana NAD (P) + - reduccin
hidrogenasa ofrece nucletidos de piridina reducidos durante la fermentacin de citrato Klebsiella pneumoniae. J.
Bacteriol. 181: 241-5.

cido propinico Fermentacin

Deborde, C., y P. Boyaval. 2000. Las interacciones entre el piruvato y el metabolismo del lactato en
Propionibacterium freudenreichii subsp. shermanii: en vivo 13 estudios de resonancia magntica nuclear C. Appl. Reinar.
Microbiol. 66: 2012-20.

cido Actico Fermentacin

Cheryan, M. 2000. actico produccin de cido. En J. Lederberg (ed.), Enciclopedia de Microbiologa,

2 ed., Vol. 1. Academic Press, San Diego, pp. 13-7.
Presecan-Siedel, E., A. Galinier, R. Longin, et al. 1999. regulacin del catabolito pta gene
como parte de carbono flujo vas en Bacillus subtilis. J. Bacteriol. 181: 6889-97.