Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
pesquisa
Purificao de protenas
Caroline Ritchie (caroline dot ritchie103 no gmail dot com)
Iowa State University, Estados Unidos
DOI //dx.doi.org/10.13070/mm.en.2.134
Encontro ltima modificao: 2016-11-02; verso original: 2012-11-17
Cite como MATER METHODS 2012; 2: 134
Abstrato
Uma reviso aprofundada da cromatografia em coluna para purificao de protenas e
resultados de pesquisa de 305 publicaes formais.
Componente de buffer
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 1/27
13/10/2017 Protein Purification
Figura 2. Um sistema
Aktaprime plus para a Um tampo uma soluo contendo um conjugado cido / par de bases. A
separao
gama de um tampo de pH baseia-se no seu pK , definido como o pH ao
cromatogrfica um
automatizada de
qual 50% das molculas so, na sua forma cida e 50% esto na sua forma
protenas. Da GE.
de base (figura 1). Uma regra geral em relao aos buffers que o pH da
soluo tampo deve estar dentro de 1,0 unidade de pH do pK para fornecer
a
a capacidade de buffer apropriada. Isto assegura que no h uma quantidade suficiente da molcula
+ -
em ambas as suas formas cida e bsica para neutralizar a soluo no caso de H ou OH afluxo.
Assim, os tampes impedem mudanas de pH que possam afetar negativamente a estabilidade da
protena.
2. Estabilidade qumica
Aditivos de Soluo
Amortecedor faixa Vantagens e desvantagens
de pH
Alm de um sistema de
buffer apropriado, as
O pH no depende da temperatura solues usadas durante a
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 2/27
13/10/2017 Protein Purification
2-mercaptoetanol (BME)
Agentes
Proteger contra danos oxidativos Dithiothreiotol (DTT)
redutores
Tris (2-carboxietil) fosfina (TCEP)
Chelating de EDTA
Inativar metaloproteases
metal
EGTA
Glicerol
Osmolytes
Estabilize a estrutura protica e melhore Detergentes (por exemplo, CHAPS , NP-
a solubilidade
40, Triton X-100 )
Acares (por exemplo, glicose, sacarose)
Tabela 2 . Aditivos comumente usados em tampes de purificao de protenas para aumentar a estabilidade das
protenas. Resumido de Thermo Fisher Pierce e Embl.de.
Os aditivos s devem ser utilizados se necessrio. O teste e o erro so muitas vezes necessrios para
determinar os aditivos especficos que so benficos para um determinado esquema de purificao de
protenas.
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 3/27
13/10/2017 Protein Purification
Antes de poder proceder purificao da protena de interesse, deve ser preparada uma amostra
bruta inicial. A primeira considerao, que ocorre bem antes de realizar a purificao real, a fonte da
protena de interesse. Esta poderia ser uma fonte nativa, como fgado, msculo ou tecido cerebral,
embora na rea ps-genmica seja relativamente raro que os investigadores purifiquem protenas de
fontes nativas. No entanto, ainda existe a necessidade, se o investigador deseja ligar uma atividade
cataltica a uma seqncia de protena especfica.
Atualmente, muito mais comum que as protenas sejam purificadas a partir de fontes recombinantes.
As decises importantes devem ser feitas com antecedncia para otimizar a purificao subseqente.
O investigador precisa considerar o uso final da protena (por exemplo, ensaio enzimtico, estudos
estruturais, gerao de anticorpos), pois isso ditar as quantidades e a pureza necessria para a
preparao final da protena. Uma considerao importante a escolha do sistema de expresso (ver
artigo de Labome Expresso proteica recombinante: Vector-Host Systems) para uma discusso dos
sistemas de expresso mais amplamente utilizados com base em uma pesquisa imparcial da literatura.
Embora uma discusso detalhada sobre a expresso da protena esteja fora do escopo deste artigo,
alguns pontos bsicos valem a pena considerar neste momento, pois eles afetam diretamente a
posterior purificao da protena.
Qual sistema de expresso dar o mais alto nvel de expresso? Como regra geral, quanto maior o
nvel de expresso, mais fcil ser obter grandes quantidades de protena altamente purificada.
Se optar pela expresso de E. coli, o objetivo final expresso solvel ou expresso insolvel na
forma de organismos de incluso? A isolao de corpos de incluso pode, por si s, constituir um
passo de purificao significativo devido alta abundncia da protena recombinante dentro dos
corpos de incluso; isso deve ser equilibrado contra a facilidade / dificuldade de solubilizao e
posterior reenvio da protena alvo dos corpos de incluso e o rendimento final da protena solvel [ 5 ].
Muito trabalho foi feito para otimizar os rendimentos das protenas funcionais dos corpos de incluso [
6 ].
Independentemente da fonte da protena alvo, a preparao inicial de uma amostra bruta como ponto
de partida para a purificao importante e precisa ser considerada ao mesmo tempo que pensa
sobre as estratgias de expresso e purificao.
Se a protena alvo expressa intracelularmente as clulas primeiro precisam ser colhidas por
centrifugao antes de serem ressuspensas em um tampo de lise apropriado. Conforme discutido
acima, o tampo de lise precisa conter um tampo apropriado e outros aditivos para garantir a mxima
estabilidade da protena alvo. A composio do tampo de lise / lise tambm precisa ser compatvel
com o (s) passo (s) de purificao subseqente (s) se o investigador for evitar tempos de troca de
buffer que consumam tempo antes da cromatografia em coluna.
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 4/27
13/10/2017 Protein Purification
Em seguida, um mtodo eficiente necessrio para lysing as clulas. Vrios mtodos foram descritos
na literatura. As clulas E.coli podem ser lisadas pela imprensa francesa (embora este mtodo no
seja facilmente escalvel), sonicao ou lise baseada em detergente (muitos reagentes comerciais de
lise esto disponveis). A eficincia da lise baseada em detergente pode ser melhorada pela adio de
lisozima ao tampo de lise. A lise baseada em detergente muito leve e no resulta em corte
significativo de DNA bacteriano. Assim, a incluso de preparaes de ADNase (preparaes altamente
puras esto comercialmente disponveis) geralmente necessria para reduzir a viscosidade da
amostra e produzir uma amostra com boas caractersticas de fluxo [ 8 ].
As clulas de mamferos e insetos tambm podem ser lisadas por mtodos de sonicao ou baseados
em detergentes. O tratamento com DNAase pode ser necessrio para reduzir a viscosidade da
amostra se houver lise significativa da membrana nuclear [ 8 ].
Uma vez que as clulas (microbiana / inseto / mamfero) tenham sido lisadas, geralmente necessrio
remover detritos celulares por centrifugao (tipicamente 15 000 xg durante 15 minutos a 4 C para
evitar o entupimento de colunas de cromatografia [ 8 ]. O sobrenadante resultante o ponto de partida
para purificao cromatogrfica em coluna da protena alvo.
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 5/27
13/10/2017 Protein Purification
Menos caro
Fluxo de O usurio tem mais controle Mais trabalho intensivo
gravidade
Pode fazer ajustes durante a O fluxo limitado pela gravidade
execuo
Nenhum
Uma interao Ligando o ligando (especfico); condies que perturbam as
Afinidade competidor
especfica interaes protena / protena (no especficas)
ligando
Carga de
Fora inica Alta fora inica; Aumento (troca de caties) ou diminuio
Ion Exchange superfcie
baixa (troca de anies) pH
lquida
Excluso de Raio
tamanho hidrodinmico
Tabela 4 . Os quatro tipos mais comuns de cromatografia em coluna utilizados na purificao de protenas.
Ao analisar a sequncia de uma protena, podem ser identificadas caractersticas nicas que podem
ajudar na sua purificao. O tamanho e a carga de uma protena (a um pH especfico) podem ser
determinados, juntamente com a identificao de grandes extenses de resduos hidrofbicos.
Cromatografia de afinidade
A fase estacionria para cromatografia de afinidade feita de uma matriz inerte ligada covalentemente
a um ligando que se liga especificamente a uma protena ou grupo de protenas. A matriz inerte
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 6/27
13/10/2017 Protein Purification
Na concepo de um
Protena para Purificar Ligando Elute com plasmdeo para a
Anticorpo (especfico do expresso da protena, as
Pptido antignico Ppito livre
antgeno) etiquetas de afinidade
Protena marcada com 2+ 2+ Imidazol ou histidina podem ser inseridas nos
polihistidina Ni ou Co livre terminais N ou C (ou em
Protena marcada com Anticorpo especfico de Pptido FLAG ou pH casos raros, em laos
FLAG FLAG baixo flexveis de protenas com
Protena marcada com estruturas conhecidas)
Reduo de glutationa Glutationa livre
GST para auxiliar na
Anticorpo especfico de purificao. Consulte o
Protena marcada com Myc PH baixo
Myc levantamento de Labome
Anticorpo (especfico da em tags protena / protide
Protena A, G ou L Extremos em pH
classe) para obter uma lista de
Protena de ligao ao DNA Heparina Alta fora inica tags comuns e discusses
relacionadas a etiquetas.
Tabela 5 . Exemplos de formas seletivas e no seletivas de cromatografia de
afinidade com o grupo funcional (ligando) usado para especificidade e condies
de eluio tpicas. Resumido de Thermo Fisher Pierce e GE. Veja abaixo os Os anticorpos so
fornecedores comuns para diferentes tipos de colunas com base em uma pesquisa frequentemente
Labome de mais de 200 publicaes.
purificados com base na
interao altamente
especfica que ocorre entre um anticorpo e seu antgeno (a sequncia reconhecida pelo anticorpo).
Um pptido contendo o antignio pode ser acoplado a uma matriz para ligao especfica do
anticorpo. A reduo do pH do tampo de eluio interrompe a interaco anticorpo / pptido para
libertar o anticorpo ligado. Este mtodo frequentemente utilizado comercialmente no isolamento de
anticorpos do soro bruto.
As protenas tambm podem ser purificadas por afinidade de uma maneira no seletiva. Na
purificao no selectiva, o ligando ligado fase estacionria liga-se a um grupo de protenas com
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 7/27
13/10/2017 Protein Purification
As condies de encadernao no
Protena no se liga Ajuste as condies do buffer
so apropriadas
A cromatografia de permuta de ons (IEX) separa as protenas com base na carga de superfcie
lquida, atravs de interaes eletrostticas que ocorrem entre as protenas e uma fase estacionada
carregada. Existem dois tipos de IEX: (1) troca de anies (fase estacionria carregada positivamente
que se liga a protenas carregadas negativamente); e (2) troca de caties (fase estacionria carregada
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 8/27
13/10/2017 Protein Purification
Todas as protenas exibem uma carga lquida que depende da composio de aminocidos da
protena e de quaisquer modificaes covalentemente anexadas. A carga lquida de uma protena
influenciada pelo pH do solvente em que dissolvido, pois os solventes trocam ies de hidrognio
com protenas. O ponto isoeltrico (pI) de uma protena o pH ao qual a protena no tem carga
lquida. A um pH acima do pI, uma protena ter uma carga negativa lquida, enquanto um pH abaixo
do pI levar a uma carga positiva lquida. Assim, o pH do solvente pode ser ajustado para facilitar a
ligao ao IEX ou para promover a eluio de uma protena ligada.
Normalmente, a ligao de uma protena ao IEX deve ser determinada por tentativa e erro, usando
solventes com uma gama de valores de pH, para determinar o pH ideal para a reteno de protenas.
Um pH de solvente que cerca de uma unidade de pH longe do pI geralmente suficiente para a
ligao de protenas [ 30 ]; no entanto, em alguns casos necessrio um pH mais do pI [ 31 ].
A fase estacionria do IEX composta por uma matriz inerte base de agarose ou polimrica com um
grupo carregado covalentemente ligado. As partculas da matriz esto disponveis em vrios tamanhos
e podem ser no porosas ou podem conter poros de tamanho varivel. A escolha da matriz depende
da capacidade de ligao desejada, resoluo e taxa de fluxo. Os tamanhos de partculas menores
oferecem maior resoluo, mas requer taxas de fluxo mais baixas e demoram mais para serem
executadas. As matrizes porosas oferecem uma maior capacidade de ligao do que as matrizes no
porosas. Numa matriz no porosa, as protenas no podem entrar na resina e, assim, oferecem uma
maior recuperao da amostra, maior resoluo e tempos de execuo mais curtos do que as matrizes
porosas. Um estudo mostrou que, para a maioria das protenas, a resoluo e a recuperao so
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 9/27
13/10/2017 Protein Purification
semelhantes quando separadas por uma matriz porosa versus no porosa; no entanto, para protenas
maiores,32 ].
Tal como acontece com outros mtodos Figura 9. Uma mistura de trs protenas de raio
cromatogrficos, a cromatografia de permuta hidrodinmico varivel carregada em uma coluna de
excluso de tamanho. As protenas grandes eluem
inica pode exigir uma soluo de problemas primeiro, uma vez que no conseguem entrar nos poros da
matriz e tm um caminho direto atravs da coluna. As
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 10/27
13/10/2017 Protein Purification
para determinar as condies ideais para protenas mais pequenas podem entrar nos poros, ter um
caminho mais complicado e, assim, levar mais tempo para
ligao de protenas, eluio de protenas e percorrer a matriz e eluir da coluna.
resoluo adequada.
A cromatografia de interao hidrofbica (HIC) separa as protenas com base na sua hidrofobicidade e
freqentemente usada como um passo intermedirio em um esquema de purificao. As protenas
so ligadas a uma fase estacionria em um tampo de alta fora inica e, portanto, a HIC pode
tipicamente ser realizada imediatamente aps cromatografia de permuta inica sem troca de tampo
ou diluio requerida. HIC tambm comumente realizada aps uma precipitao de sulfato de
amnio, um procedimento que pode ser usado para remover rapidamente protenas, precipitando
algumas, mas no todas, protenas com sal. HIC s vezes aplicvel em etapas iniciais de um
esquema de purificao ou como um passo final na remoo de vestgios de impurezas da protena de
interesse.
A presena de ons sal em soluo pode levar ao desdobramento parcial de uma protena e
exposio de resduos hidrofbicos normalmente enterrados. As protenas que se ligam fase
estacionria adotam sua conformao nativa medida que o tampo com uma fora inica inferior
adicionado. Isso diminui a exposio de resduos hidrofbicos que podem interagir com a fase
estacionria e facilita a eluio da coluna. Para as protenas que podem redobrar espontaneamente
atravs de uma diminuio da fora inica, o HIC pode ser um mtodo cromatogrfico valioso para a
purificao.
Tipicamente, a fora inica do tampo de ligao deve ser to baixa quanto possvel para ligar a
protena de interesse, evitando a sua precipitao. Se a fora inica necessria para a ligao
protena alta e provoca a precipitao da protena de interesse, pode ser utilizada uma fora inica
inferior. Neste caso, o procedimento de cromatografia pode ser usado para separar todas as protenas
de ligao da protena de interesse que flui sem ligao.
Antes de carregar a amostra na coluna, a fase estacionria deve ser equilibrada com o tampo de alta
fora inica (o mesmo tampo em que a amostra de protena ser aplicada). A amostra ento
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 11/27
13/10/2017 Protein Purification
carregada na coluna, a coluna lavada extensivamente e a protena eluda com um tampo de fora
inica baixa (Figuras 7 e 8).
A fase estacionria utilizada na cromatografia de interao hidrofbica composta por uma matriz
base de agarose reticulada ou um copolmero sinttico. Um ligando de alquilo ou arilo ento
conjugado com a matriz de base, proporcionando especificidade para molculas hidrofbicas.
O tipo e a concentrao de sal utilizados para ligao e eluio devem ser determinados
empiricamente para cada protena. Alm disso, o redoblemento e a funo da protena devem ser
assegurados aps sua eluio.
Como outras formas de cromatografia em coluna, um timo procedimento HIC pode exigir uma grande
soluo de problemas. necessrio ajustar as condies do buffer e a fase estacionria para cada
protena para assegurar a separao ideal.
A coluna no foi lavada o Lavar com um tampo de fora inica inferior; Fase
suficiente estacionria limpa de acordo com o fabricante
Baixa resoluo
Ajuste as condies do buffer para uma maior
Protena agregada na coluna
estabilidade da protena
A cromatografia de excluso de tamanho separa as protenas pelo seu raio hidrodinmico, uma
propriedade determinada pelo tamanho e forma da molcula. Ao contrrio dos outros procedimentos
cromatogrficos descritos anteriormente, as protenas no se ligam a uma fase estacionria na SEC.
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 12/27
13/10/2017 Protein Purification
Em vez disso, as protenas so separadas pela velocidade na qual eles navegam atravs de uma fase
estacionria inerte (Figura 9).
SEC um mtodo valioso usado com mais freqncia nas etapas finais de um esquema de
purificao devido sua capacidade de diferenciar entre diferentes espcies de uma protena. As
espcies oligomricas [ 38 ], as molculas de protenas desdobradas [ 39 ] e as espcies truncadas [
40 ] podem ser separadas da protena nativa, enquanto simultaneamente trocam os componentes do
tampo. Muitas vezes, o SEC usado como um mtodo de troca de buffer mais rpido e confivel do
que a dilise, pois compatvel com mais solventes e requer menos buffer. Um nico solvente usado
em todo o procedimento SEC completo, e as fases estacionrias da SEC comercialmente disponveis
so compatveis com os componentes do buffer mais comumente usados.
Tabela 9 . Tipos de fases estacionrias comercialmente disponveis para cromatografia de excluso de tamanho e
caractersticas de cada uma. Resumido da GE e da Simga-Aldrich.
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 13/27
13/10/2017 Protein Purification
O Superdex muitas vezes a melhor opo para os procedimentos tpicos da SEC, pois compatvel
com a maioria dos solventes e oferece a maior resoluo de todas as fases estacionrias disponveis.
Tal como acontece com outros mtodos cromatogrficos, existem vantagens e desvantagens para a
SEC, e a deciso de usar este mtodo depende da protena e da sua aplicao a jusante.
Vantagens da SEC:
1. Fornece troca de buffer e dessalinizao.
2. Permite a separao de espcies semelhantes (por exemplo, truncamentos e oligmeros) que podem no ser
separados com outras tcnicas de purificao.
3. compatvel com muitos solventes.
Desvantagens da SEC:
1. O desempenho muito sensvel embalagem de colunas.
2. Pode ter interaes inespecficas entre protena e resina, o que diminui a resoluo.
3. Oferece baixa resoluo para misturas de protenas complexas.
4. A amostra deve ser carregada em um pequeno volume para uma resoluo adequada. Isso pode ser problemtico
para protenas que precipitam em altas concentraes.
Otimizar as condies da SEC para alcanar a mxima resoluo muitas vezes demorado, mas
certos fatores podem ter um enorme impacto na resoluo.
2. Adicione sal ao buffer. Uma pequena quantidade de sal ajudar a prevenir interaes inespecficas entre a protena e
a fase estacionria. Isso permitir que todas as molculas de protena funcionem consistentemente ao longo da
extenso da coluna.
3. Use uma taxa de fluxo moderada. Executar uma coluna com muita rapidez no permitir tempo para que as
molculas pequenas entrem nos poros da matriz, enquanto uma taxa de fluxo que muito lenta permite mais tempo
para a difuso da amostra.
4. Certifique-se de que a amostra e as viscosidades do solvente sejam semelhantes. Ajuste as condies da amostra
para coincidir aproximadamente com a do buffer em execuo.
5. Ajuste o comprimento da coluna. Uma coluna que muito curta no permitir a separao adequada de protenas.
Alternativamente, uma coluna que muito longa levar difuso da amostra de protena.
6. Re-empacota a coluna. A embalagem da coluna pode ter um efeito enorme na resoluo da protena.
Como a SEC no separa as protenas com base em interaes com um grupo funcional, todas as
protenas so eludas nas mesmas condies e, portanto, a resoluo s pode ser obtida para
protenas de raio hidrodinmico muito diferente. Portanto, SEC no um mtodo cromatogrfico
apropriado para estgios iniciais de um esquema de purificao quando h muitas protenas
contaminantes. A SEC, no entanto, oferece um mtodo rpido e confivel para remover sais ou
molculas pequenas de uma amostra entre estgios iniciais ou intermedirios da purificao. Nos
estgios finais da purificao, quando existem apenas vestgios de contaminantes, o SEC um
mtodo valioso para isolamento e troca de protenas em buffer de armazenamento.
As protenas que se ligam a uma fase estacionria so eludas com condies de solvente que
perturbam as interaes de ligao. Estas condies de eluio variam tanto pelo tipo de
cromatografia quanto pelas propriedades da protena de interesse. Existem trs mtodos gerais de
eluio protica: eluio em lotes, eluio gradual e eluio gradiente linear. O melhor mtodo a
escolher depende do tipo de cromatografia em execuo e da resoluo requerida.
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 14/27
13/10/2017 Protein Purification
1. Por lotes - uma nica condio de eluio desloca todas as protenas ligadas em uma nica etapa. Este mecanismo
funciona melhor para procedimentos cromatogrficos baseados em uma interao muito especfica (ou seja,
cromatografia de afinidade). A elution em lote no oferece nenhuma resoluo, mas ideal para se livrar de
contaminantes muito rapidamente. Requer conhecimento prvio das condies de amortecimento necessrias para o
deslocamento da protena de interesse.
2. Stepwise - mltiplas elues em lotes so realizadas sequencialmente, com condies mais rigorosas em cada
etapa. Na eluio gradual, o nmero de fraces recolhidas depende do nmero de condies de eluio
sequenciais. A eluio progressiva proporciona uma resoluo melhor do que a eluio em lotes, mas uma resoluo
mais fraca do que a eluio gradiente linear.
3. Gradiente linear - mltiplas fraces consecutivas so recolhidas enquanto as condies de eluio so ajustadas de
forma linear. Um gradiente linear oferece a resoluo mais alta para cromatografia de permuta inica e cromatografia
de interao hidrofbica. Normalmente, um grande nmero de fraes consecutivas so coletadas.
A cromatografia de excluso de tamanho no requer nenhum destes mtodos de eluio, uma vez que
no ocorrem interaces entre a protena e a fase estacionria. A protena carregada na coluna, e
um grande nmero de fraes so coletadas at que todas as protenas sejam eludas, sem alterar as
condies do buffer durante todo o procedimento.
Idealmente, o tampo de eluio de uma coluna compatvel com a coluna subseqente, eliminando
a necessidade de troca de buffer ou dilise entre as etapas de purificao.
Cromatofocusing um mtodo de cromatografia em coluna que separa protenas com base em seu pI.
As protenas so ligadas a meios especializados de permuta inica e eluram com um gradiente de pH
[ 44 ]. A seletividade da cromatofoculao diferente da de outras tcnicas e, portanto, til como um
passo final de "polimento" [ 45 ].
Aps cada separao cromatogrfica, as fraes devem ser analisadas para determinar as fraes
que contm a protena de interesse e a pureza relativa de cada uma dessas fraes. Esta anlise
necessria aps cada passo para decidir quais as fraes devem ser agrupadas para uso posterior.
Para determinar a pureza, necessrio um ensaio que pode medir a quantidade de uma protena
especfica em relao quantidade de protena total. Os seguintes ensaios so rotineiramente
utilizados para anlise de pureza:
2. Espectroscopia - um mtodo para analisar as propriedades pticas das protenas. Esta tcnica para analisar a
pureza da protena adequada para protenas, como o citocromo P450, que possuem uma caracterstica
espectroscpica nica. As protenas desta famlia absorvem a luz em um comprimento de onda onde outras
protenas no (cerca de 420 nanmetros [ 46 ]), de modo que uma comparao de absorvncia em 420 nanmetros
contra 280 nanmetros (o comprimento de onda em que todas as protenas absorvem) pode fornecer uma medida
quantitativa de pureza da protena. Este mtodo rpido e de alto rendimento, mas apenas adequado para algumas
protenas.
3. Atividade protica - um teste enzimtico que depende da protena de interesse. Este mtodo de avaliao da pureza
da protena frequentemente acoplado a outra forma de determinao da concentrao de protena para calcular a
atividade em relao concentrao total de protena. Os ensaios de atividade so apenas adequados para
protenas com atividade do que podem ser facilmente monitorados em um formato de alto rendimento, como
proteases. Para algumas protenas, os ensaios de atividade fornecem um mtodo rpido e confivel para a deteco
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 15/27
13/10/2017 Protein Purification
de protenas. A medida da atividade muitas vezes ideal para
enzimas, porque a protena que perdeu atividade pode ser
excluda do uso subseqente.
Nesta era ps-genmica, h muito interesse na purificao de protenas de alto rendimento tanto para
determinao estrutural quanto para descoberta de drogas / rastreio de compostos. Para exibir uma
ampla gama de construes e selecionar o (s) timo (s) para o uso final desejado, os pesquisadores
utilizaram uma srie de sistemas automatizados / robotizados comercialmente disponveis que
permitem a purificao rpida, paralela (semi-) automatizada de etiquetas de afinidade protenas [ 47 ,
48 ]. Os princpios bsicos da protena ainda se aplicam; A robtica de manuseio de lquidos /
plataformas automatizadas simplesmente usada para facilitar a agilizao e acelerar o processo de
purificao.
Protenas de membrana
Cerca de 20 a 30% das protenas produzidas por clulas so protenas de membrana integrais e cerca
de 50% de drogas de molculas pequenas atuam sobre protenas de membrana [ 49 ]. Assim, existe
um grande interesse em resolver a estrutura das protenas da membrana. Um passo crucial na
purificao das protenas da membrana integral a sua solubilizao a partir da bicamada lipdica,
mantendo a sua integridade funcional. A abordagem tpica envolve o isolamento de membranas
intracelulares por centrifugao seguida de solubilizao de detergente de protenas de membrana
integral e centrifugao de alta velocidade para remover resduos de membrana insolveis [ 50 - 52 ].
Uma ampla gama de detergentes foi empregada para a solubilizao da protena da membrana [ 53 -
55] e, na ausncia de literatura ou precedente de laboratrio, o investigador precisar determinar
empiricamente o melhor detergente para sua protena particular. A protena de membrana solubilizada
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 16/27
13/10/2017 Protein Purification
pode ento ser purificada por cromatografia em coluna essencialmente da mesma maneira que para
protenas solveis. No entanto, os tampes de purificao precisaro conter detergentes para manter
a protena em estado solvel [ 56 , 57 ]. A purificao das protenas da membrana muitas vezes
extremamente desafiadora devido perda da integridade funcional da protena e da agregao aps a
remoo inicial da bicamada lipdica e atravs das vrias etapas de purificao. No entanto, vrios
grupos purificaram com sucesso as protenas de membrana em quantidades suficientes para a
determinao da estrutura (ver, por exemplo, Consrcio de Genmica Estrutural ). Recentemente, os
nanodiscos foram empregados com sucesso na purificao por afinidade de um GPCR da Famlia B
(ver artigo de Labome sobre nanodiscos ) [ 58 ].
Ni Sepharose, HisTrap
GE Healthcare 32 [ 10 , 14 , 16 , 18 , 73 , 91 , 114 - 139 ]
FF / HP
DELE Afinidade de metal
Clontech 20 [ 10 , 140 - 158 ]
TALON
Thermo Fisher /
HisPur Cobalt resin 7 [ 159 - 165 ]
Invitrogen
[ 13 - 15 , 59 - 62 , 65 , 68 , 71 , 73 , 76 , 77 , 81 , 83 ,
glutationa Sepharose 98 , 107 , 109 , 111 , 119 , 125 , 130 , 144 , 160 , 166 -
GE Healthcare 63
GST 4B 204 ]
Protena
de ligao GE Healthcare heparina 15 [ 14 , 68 , 107 , 115 , 122 , 195 , 219 - 227 ]
ao DNA
protena de
ligao a New England Biolabs resina de amilose 8 [ 101 , 122 , 221 , 228 - 232 ]
maltose
Outros sistemas de purificao de protena base de afinidade citados incluem Vector Laboratories agarose-bound jacalina
para 0-ligados glicoprotenas [ 149 ], Roche anti-protea de matriz C afinidade [ 120 ], os sistemas baseados em strepbiotin da
Thermo Fisher Pierce [ 157 , 233 - 235 ] , de EMD Millipore [ 161 , 236 ], de Qiagen [ 127 ], de IBA [ 66 ] e de Sigma-Aldrich [
233 ], resina de imunoafinidade Sigma-Aldrich Myc [ 213 ], para protenas de ligao a ies metlicos, GE Healthcare
Chelating Sepharose Fast Flow [ 225 ] e GE Healthcare HiTrap IMAC coluna HP [ 137], GE Healthcare Life Sciences HiTrap
Protein A [ 22 ], GE Healthcare IgG Sepharose [ 237 ], GE Healthcare poly (A) -Sepharose 4B [ 14 ], Thermo Scientific
SulfoLink resin [ 238 ], BioRad Affi-Gel 10 resin [ 238 ], RepliGen protena A agarose [ 238 ] e Sigma V5-agarose [ 173 ], Bio-
Rad Affigel [ 238 - 240 ].
excluso de tamanho
[ 9 , 11 , 14 - 17 , 22 , 63 , 66 , 68 , 73 , 76 , 83 , 84 ,
88 , 91 - 93 , 98 , 100 , 102 , 104 , 107 , 108 , 110 ,
Superdex / Superose / 111 , 114 - 117 , 121 , 122 , 124, 127 , 129 , 131 , 133
GE-Healthcare 91
Sephacryl - 135 , 137 - 140 , 144 , 148 , 151 , 155 , 159 , 165 ,
169 , 182 , 186 , 195 , 199 , 219 , 224 , 225 , 227 ,
239 , 241 - 272 ]
permuta inica
anio GE Healthcare Coluna MonoQ 9 [ 85 , 88 , 97 , 110 , 111 , 125 , 159 , 262 , 273 ]
GE Healthcare Q-Sepharose 1 [ 83 ]
interao hidrofbica
Cuidados de sade da
fenil sepharose CL-4B 1 [ 109 ]
GE
Tabela 10 . Estatsticas do levantamento de Labome de 305 publicaes citando sistemas de purificao de protenas. Nmero:
nmero de publicaes.
Entre a literatura pesquisada, as amostras de protenas foram preparadas atravs do disruptor celular
EMD Millipore BugBuster [ 134 ], [ 236 ], [ 274 ] ou AVESTIN EmulsiFlex C-3 [ 97 , 275 ], e foram
comparadas atravs de concentradores EMD Millipore Amicon Ultra [ 14 , 78 , 135 , 149 , 213 , 223 ,
235 , 248 , 250 ], Thermo Fisher Sartorius colunas de rotao [ 276 ] ou atravs de concentradores
Vivaspin [ 115 , 116 , 134 ,145 , 146 , 182 , 247 , 248 , 271 , 277 , 278 ].
Referncias
1. Good N, Winget G, Winter W, Connolly T, Izawa S, Singh R., tampes de ons de hidrognio para pesquisa biolgica.
Bioqumica. 1966; 5: 467-77 pubmed
2. Grady J, Chasteen N, Harris D. Radicals dos buffers "Good's". Anal Biochem. 1988; 173: 111-5 pubmed
3. Desmarais W, Bienvenue D, Bzymek K, Holz R, Petsko G, Ringe D. A estrutura cristalina de resoluo de 1.20 A da
aminopeptidase de Aeromonas proteolytica complexada com tris: um conto de inibio de tampo. Estrutura. 2002; 10: 1063-72
pubmed
4. Ghalanbor Z, Ghaemi N, Marashi S, Amanlou M, Habibi-Rezaei M, Khajeh K, et al . A ligao da alfa-amilase de Tris a Bacillus
licheniformis pode afectar a sua actividade de hidrlise de amido. Protein Pept Lett. 2008; 15: 212-4 pubmed
5. Burgess R. Replegando protenas do corpo de incluso solubilizadas. Mtodos Enzymol. 2009; 463: 259-82 editor pblico
6. Singh A, Upadhyay V, Upadhyay A, Singh S, Panda A. Recuperao de protenas dos corpos de incluso de Escherichia coli
usando um processo de solubilizao suave. Microb Cell Fact. 2015; 14: 41 editor publicado
7. Scott M, Modha S, Rhodes A, Broadway N, Hardwicke P, Zhao H, et al . Expresso eficiente de proteases segregadas via vrus
BacMam recombinante. Protein Expr Purif. 2007; 52: 104-16 pubmed
8. Grabski A. Avana em preparao de extratos biolgicos para purificao de protenas. Mtodos Enzymol. 2009; 463: 285-303
publisher pubmed
9. Pejchal R, Doores K, Walker L, Khayat R, Huang P, Wang S, et al . Um anticorpo neutralizador potente e amplo reconhece e
penetra no escudo de glicano do HIV. Cincia. 2011; 334: 1097-103 publisher pubmed
10. Cruz-Migoni A, Hautbergue G, Artymiuk P, Baker P, Bokori-Brown M, Chang C, et al . Uma toxina de Burkholderia pseudomallei
inibe a atividade de helicase do fator de traduo eIF4A. Cincia. 2011; 334: 821-4 editor publicado
11. Shenoy A, Wellington D, Kumar P, Kassa H, Booth C, Cresswell P, et al . GBP5 promove a montagem de inflammasoma NLRP3
e imunidade em mamferos. Cincia. 2012; 336: 481-5 publisher publicado
12. Hernandez J, Stein A, Behrmann E, Riedel D, Cypionka A, Farsi Z, et al . Intermedirios de fuso de membrana via montagem
direta e completa do complexo SNARE. Cincia. 2012; 336: 1581-4 editor publicado
13. Mukherjee S, Behar M, Birnbaum H, Hoffmann A, Wright P, Ghosh G. A anlise da relao RelA: CBP / p300 revela seu
envolvimento na transcrio NF-B-driven. PLoS Biol. 2013; 11: e1001647 publisher pubmed
14. Bohne A, Schwarz C, Schottkowski M, Lidschreiber M, Piotrowski M, Zerges W, et ai . Regulao recproca da sntese protica
e metabolismo do carbono para a biognese da membrana do tilacoide. PLoS Biol. 2013; 11: e1001482 publisher
pubmed
15. Lai Y, Diao J, Cipriano D, Zhang Y, Pfuetzner R, Padolina M, et ai . A complexina inibe a liberao espontnea e sincroniza a
fuso de vesculas sinpticas de Ca2 + por mecanismos distintos. Elife. 2014; 3: e03756 editor pblico
16. Hervs R, Oroz J, Galera-Prat A, Goi O, Valbuena A, Vera A, et al . Caractersticas comuns no incio da cascata de
neurodegenerao. PLoS Biol. 2012; 10: e1001335 editor pblico
17. Schroeder C, Ostrem J, Hertz N, Vale R. Um domnio semelhante a Ras na cadeia intermediria leve encadena o motor de
dinena para uma regio de ligao de carga. Elife. 2014; 3: e03351 editor pblico
18. Stokes J, Davis J, Mangat C, Williamson J, Brown E. Descoberta de uma pequena molcula que inibe a biognese do
ribossoma bacteriano. Elife. 2014; 3: e03574 editor pblico
19. Arakawa T, Philo J, Tsumoto K, Yumioka R, Ejima D. Eluio de anticorpos de uma coluna de Protena-A por solues aquosas
de arginina. Protein Expr Purif. 2004; 36: 244-8 pubmed
20. Chong S, Mersha F, Comb D, Scott M, Landry D, Vence L, et al . Purificao em coluna nica de protenas recombinantes livres
utilizando um marcador de afinidade autoclivvel derivado de um elemento de splicing de protena. Gene. 1997; 192: 271-81
pubmed
21. Jochum C, Beste M, Stone D, Graves S, Storb R. Desenvolvimento e caracterizao in vitro de canina CD40-Ig. Vet Immunol
Immunopathol. 2008; 123: 260-5 editor publicado
22. Corti D, Voss J, Gamblin S, Codoni G, Macagno A, Jarrossay D, et al . Um anticorpo neutralizante selecionado de clulas
plasmticas que se liga s hemaglutininas do grupo 1 e do grupo 2 da gripe A. Cincia. 2011; 333: 850-6 editor pblico
23. Shen Y, Tenney A, Busch S, Horn K, Cuascut F, Liu K, et ai . PTPsigma um receptor de proteoglicano de sulfato de
condroitina, um inibidor da regenerao neural. Cincia. 2009; 326: 592-6 editor pblico
24. Li F, Ravetch J. O envolvimento do receptor Fc inibidor conduz atividades adjuvantes e antitumorais de anticorpos agonistas
CD40. Cincia. 2011; 333: 1030-4 editor publicado
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 18/27
13/10/2017 Protein Purification
25. Salaman M, Williamson A. Focalizao isoeltrica de protenas nos estados nativos e desnaturados. Comportamento anmalo
da albumina plasmtica. Biochem J. 1971; 122: 93-9 pubmed
26. Vesterberg O. Fracionamento, anlise e caracterizao isoeltrica de anfolitos em gradientes de pH naturais. V. Separao de
mioglobins e estudos sobre suas diferenas eletroqumicas. Acta Chem Scand. 1967; 21: 206-16 pubmed
27. Awdeh Z, Williamson A, Askonas B. Concentrao isoeltrica em gel de poliacrilamida e sua aplicao em imunoglobulinas.
Natureza. 1968; 219: 66-7 pubmed
28. Righetti P. Determinao do ponto isoeltrico das protenas por foco isoeltrico capilar. J Chromatogr A. 2004; 1037: 491-9
pubmed
29. Pihlasalo S, Auranen L, Hanninen P, Harma H. Mtodo para estimar o ponto isoeltrico das protenas. Anal Chem. 2012; 84:
8253-8 editor publicado
30. Ahamed T, Chilamkurthi S, Nfor B, Verhaert P, van Dedem G, van der Wielen L, et al . Seleo de parmetros relacionados ao
pH em cromatografia de permuta inica usando operaes de gradiente de pH. J Chromatogr A. 2008; 1194: 22-9 pubmed
31. Trodler P, Nieveler J, Rusnak M, Schmid R, Pleiss J. Desenho racional de uma nova estratgia de purificao de um passo para
a lipase B de Candida antarctica por cromatografia de permuta inica. J Chromatogr A. 2008; 1179: 161-7 pubmed
32. Duncan J, Chen A, Siebert C. Avaliao de desempenho de embalagens no sseas versus porosas de permuta inica na
separao de protenas por cromatografia lquida de alto desempenho. J Chromatogr. 1987; 397: 3-12 pubmed
33. Staby A, Jensen R, Bensch M, Hubbuch J, Dnweber D, Krarup J, et al . Comparao de resinas de permuta inica
cromatogrficas VI. Resinas fracas de permuta aninica. J Chromatogr A. 2007; 1164: 82-94 pubmed
34. DePhillips P, Lenhoff A. Determinantes das caractersticas de reteno de protena nos adsorventes de permuta catinica. J
Chromatogr A. 2001; 933: 57-72 pubmed
35. von Hippel P, Wong K. Sobre a estabilidade conformacional das protenas globulares. Os efeitos de vrios eletrlitos e no
eletrotrlitos na transio trmica da ribonuclease. J Biol Chem. 1965; 240: 3909-23 pubmed
36. Tsumoto K, Ejima D, Senczuk A, Kita Y, Arakawa T. Efeitos dos sais nas interaes protena-superfcie: aplicaes para
cromatografia em coluna. J Pharm Sci. 2007; 96: 1677-90 pubmed
37. Er-El Z, Zaidenzaig Y, Shaltiel S. Sepharoses revestidos com hidrocarbonetos. Uso na purificao de glicognio fosforilase.
Biochem Biophys Res Commun. 1972; 49: 383-90 pubmed
38. Woodbury R, Hardy S, Randall L. Comportamento complexo na soluo da SecA homodimrica. Protein Sci. 2002; 11: 875-82
pubmed
39. Corbett R, Roche R. Uso de cromatografia de excluso de tamanho de alta velocidade para o estudo da dobragem e
estabilidade das protenas. Bioqumica. 1984; 23: 1888-94 pubmed
40. Kim T, Paik S, Yang C. Implicaes estruturais e funcionais das regies C-terminais da alfa-sinuclena. Bioqumica. 2002; 41:
13782-90 pubmed
41. Hjerten S, Levin O, Tiselius A. Cromatografia de protena em colunas de fosfato de clcio. Arch Biochem Biophys. 1956; 65:
132-55 pubmed
42. Cummings L, Snyder M, Brisack K. Cromatografia de protena em colunas de hidroxiapatita. Mtodos Enzymol. 2009; 463:
387-404 publisher pubmed
43. Hilbrig F, Freitag R. Isolamento e purificao de protenas recombinantes, anticorpos e DNA plasmdico com cromatografia de
hidroxiapatita. Biotechnol J. 2012; 7: 90-102 pubmed publisher
46. Schenkman J, Jansson I. Anlises espectrales dos citocromos P450. Mtodos Mol Biol. 2006; 320: 11-8 pubmed
47. Koehn J, Hunt I. Produo de protenas de alto rendimento (HTPP): uma reviso das tecnologias habilitadoras para acelerar a
produo de protenas. Mtodos Mol Biol. 2009; 498: 1-18 editor publicado
48. Kim Y, Babnigg G, Jedrzejczak R, Eschenfeldt W, Li H, Maltseva N, et ai . Purificao de protena de alto rendimento e
avaliao de qualidade para cristalizao. Mtodos. 2011; 55: 12-28 publisher pubmed
50. Lin S, Guidotti G. Purificao das protenas da membrana. Mtodos Enzymol. 2009; 463: 619-29 publisher pubmed
51. Duquesne K, Sturgis J. Solubilizao da protena da membrana. Mtodos Mol Biol. 2010; 601: 205-17 editor pblico
52. Roy A. Preparao e solubilizao da membrana. Mtodos Enzymol. 2015; 557: 45-56 pubmed publisher
53. Linke D. Detergents: uma viso geral. Mtodos Enzymol. 2009; 463: 603-17 editor pblico
54. Arachea B, Sun Z, Potente N, Malik R, Isailovic D, Viola R. Seleo de detergentes para extrao melhorada de protenas de
membrana. Protein Expr Purif. 2012; 86: 12-20 publisher publicado
55. Y Y, Wang K, Yan N. Os sistemas de expresso recombinante para a determinao da estrutura das protenas da membrana
eucaritica. Cell Protein. 2014; 5: 658-72 editor pblico
56. Anandan A, Vrielink A. Detergentes em Purificao e Cristalizao de Protenas de Membranas. Adv Exp Med Biol. 2016; 922:
13-28 PubMed editora
57. Smith S. Estratgias para a purificao de protenas de membrana. Mtodos Mol Biol. 2017; 1485: 389-400 pubmed
58. Mitra N, Liu Y, Liu J, Serebryany E, Mooney V, DeVree B, et al . Ligao de ligando dependente de clcio e sinalizao de
protena G da famlia B GPCR receptor de hormona paratiroideia purificado em nanodiscos. ACS Chem Biol. 2013; 8: 617-25
editor publicado
60. Zhao Y, Takeyama K, Sawatsubashi S, Ito S, Suzuki E, Yamagata K, et ai . Ao Corepressive do CBP na transactivao dos
receptores de andrgenos em heterochromatin pericntrica em um sistema modelo experimental de Drosophila. Mol Cell Biol.
2009; 29: 1017-34 editor pblico
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 19/27
13/10/2017 Protein Purification
61. Wang H, Westin L, Nong Y, Birnbaum S, Bendor J, Brismar H, et ai . Norbin um regulador endgeno da sinalizao
metabotrpica do receptor 5 de glutamato. Cincia. 2009; 326: 1554-7 editor publicado
62. Vilar M, Sung T, Chen Z, Garca-Carpio I, Fernandez E, Xu J, et al . A heterodimerizao de p45-p75 modula a sinalizao p75:
base estrutural e mecanismo de ao. PLoS Biol. 2014; 12: e1001918 editor pblico
63. Breitsprecher D, Jaiswal R, Bombardier J, Gould C, Gelles J, Goode B. Mecanismo de lanador de foguetes da montagem de
actina colaborativa definida pela imagem de uma nica molcula. Cincia. 2012; 336: 1164-8 editor publicado
64. Yang X, Goldberg M, He M, Xu H, Blevins J, Norgard M. Expresso diferencial de um regulador transcricional de tipo CarD,
LtPA, em Borrelia burgdorferi. Infect Immun. 2008; 76: 4439-44 editor pblico
65. Qian W, Miki D, Zhang H, Liu Y, Zhang X, Tang K, et al . A histona acetiltransferase regula a desmetilao de DNA ativo em
Arabidopsis. Cincia. 2012; 336: 1445-8 editor publicado
66. Li Z, Park Y, Marcotte E. A Bacteriophage tailspike domain promove a auto-clivagem de um fator de transcrio humano ligado
membrana, o fator regulador MYELIN MYRF. PLoS Biol. 2013; 11: e1001624 editor pblico
67. Neubauer C, Gillet R, Kelley A, Ramakrishnan V. Decodificao na ausncia de um codo por tmRNA e SmpB no ribossoma.
Cincia. 2012; 335: 1366-9 editor publicado
68. McCloskey A, Taniguchi I, Shinmyozu K, Ohno M. hnRNP C, o tetrmero mede o comprimento do ARN para classificar os
transcritos da ARN polimerase II para exportao. Cincia. 2012; 335: 1643-6 editor publicado
69. Lu Y, Adegoke O, Nepveu A, Nakayama K, Bedard N, Cheng D, et al . A enzima deubiquitinante USP19 suporta a proliferao
celular estabilizando KPC1, uma ubiquitina ligase para p27Kip1. Mol Cell Biol. 2009; 29: 547-58 editor pblico
70. Zhang J, Liu X, Ding Y, Xiong L, Ren J, Zhou Z, et ai . Fission levedura Pxd1 promove correto reparo do DNA, ativando
Rad16XPF e inibindo Dna2. PLoS Biol. 2014; 12: e1001946 publisher pubmed
71. Notani D, Gottimukkala K, Jayani R, Limaye A, Damle M, Mehta S, et al . O regulador global SATB1 recruta beta-catenina e
regula a diferenciao T (H) 2 de maneira dependente de Wnt. PLoS Biol. 2010; 8: e1000296 editor pblico
72. Wang S, Tan K, Agosto M, Xiong B, Yamamoto S, Sandoval H, et ai . O complexo retromer necessrio para a reciclagem da
rodopsina e sua perda leva degenerao dos fotorreceptores. PLoS Biol. 2014; 12: e1001847 publisher pubmed
73. Walser R, Burke J, Gogvadze E, Bohnacker T, Zhang X, Hess D, et al . PKC fosforila PI3K para ativ-lo e liber-lo do controle
GPCR. PLoS Biol. 2013; 11: e1001587 editor pblico
74. Ydenberg C, Rose M. Regulao antagonista da localizao nuclear de Fus2p atravs da sinalizao de feromonas e do ciclo
celular. J Cell Biol. 2009; 184: 409-22 publisher pubmed
75. Little H, Rorick N, Su L, Baldock C, Malhotra S, Jowitt T, et ai . As mutaes do Missense que causam a sndrome de Van der
Woude e a sndrome do ptergio poplteo afetam as funes de ativao da transcrio e de ligao DNA do IRF6. Hum Mol
Genet. 2009; 18: 535-45 editor pblico
76. Polley S, Huang D, Hauenstein A, Fusco A, Zhong X, Vu D, et al . Uma base estrutural para a ativao de IB quinase 2 via
auto-fosforilao trans-dependente dependente da oligomerizao. PLoS Biol. 2013; 11: e1001581 editor pblico
77. Tao L, Xie Q, Ding Y, Li S, Peng S, Zhang Y, et ai . CAMKII e calcineurina regulam a vida til de Caenorhabditis elegans atravs
do fator de transcrio FOXO DAF-16. Elife. 2013; 2: e00518 editor pblico
78. Yao P, Potdar A, Ray P, Eswarappa S, Flagg A, Willard B, et al . O complexo HILDA coordena um interruptor condicional na
regio 3 'no traduzida do mRNA VEGFA. PLoS Biol. 2013; 11: e1001635 editor pblico
79. Miura G, Roignant J, Wassef M, Treisman J. Myopic atua na via endoctica para melhorar a sinalizao pelo receptor Drosophila
EGF. Desenvolvimento. 2008; 135: 1913-22 publisher pubmed
80. Beyhan S, Gutirrez M, Voorhies M, Sil A. Uma rede sensvel temperatura liga a forma celular e os traos de virulncia em um
patgeno fngico primrio. PLoS Biol. 2013; 11: e1001614 publisher pubmed
81. Mazurkiewicz P, Thomas J, Thompson J, Liu M, Arbibe L, Sansonetti P, et ai . SpvC um efetor de Salmonella com atividade de
fosforreonina-liasa em protena quinases ativadas por mitgenos hospedeiros. Mol Microbiol. 2008; 67: 1371-1383 pubmed
publisher
82. Tisserant A, Knig H. Prevalncia de pr-mRNA regulada por sinal pelo fator de empalme geral U2AF. PLoS ONE. 2008; 3:
E1418 pubmed publisher
83. Diao J, Burr J, Vivona S, Cipriano D, Sharma M, Kyoung M, et al . A-sinuclena nativa induz agrupamento de imitadores de
vesculas sinpticas via ligao a fosfolpidos e synaptobrevin-2 / VAMP2. Elife. 2013; 2: e00592 editor pblico
84. Chatterjee D, Cooley R, Boyd C, Mehl R, O'TOOLE G, Sondermann H. Perspectiva mecnica sobre a regulao alostrica
conservada da protelise periplasmtica pela molcula de sinalizao cyclic-di-GMP. Elife. 2014; 3: e03650 editor pblico
85. Ekiert D, Friesen R, Bhabha G, Kwaks T, Jongeneelen M, Yu W, et ai . Um eptopo neutralizante altamente conservado em vrus
da gripe A do grupo 2. Cincia. 2011; 333: 843-50 publisher publicado
86. Heisel S, Ketter R, Keller A, Klein V, Pallasch C, Lenhof H, et ai . Aumento da serorreatividade ao antgeno 2 expresso em
glioma em pacientes com tumor cerebral sob radiao. PLoS ONE. 2008; 3: e2164 pubmed publisher
87. As propriedades de carga Copic A, Latham C, Horlbeck M, D'Arcangelo J, Miller E. ER especificam um requisito para a rigidez
do revestimento COPII mediada por Sec13p. Cincia. 2012; 335: 1359-62 publisher pubmed
88. Armache K, Garlick J, Canzio D, Narlikar G, Kingston R. Base estrutural do silenciamento: domnio Sir3 BAH em complexo com
um nucleossoma com resoluo de 3,0 . Cincia. 2011; 334: 977-82 publisher pubmed
89. Avinoam O, Fridman K, Valansi C, Abutbul I, Zeev-Ben-Mordehai T, Maurer U, et al . Os fusognios eucariticos conservados
podem fundir envelopes virais nas clulas. Cincia. 2011; 332: 589-92 editor publicado
90. Wilusz J, Whipple J, Phizicky E, Sharp P. tRNAs marcados com CCACCA so direcionados para a degradao. Cincia. 2011;
334: 817-21 publisher pubmed
91. Dueber E, Schoeffler A, Lingel A, Elliott J, Fedorova A, Giannetti A, et al . Os antagonistas induzem uma mudana
conformacional no CIAP1 que promove a autobibitinao. Cincia. 2011; 334: 376-80 publisher publicado
92. Diskin R, Scheid J, Marcovecchio P, West A, Klein F, Gao H, et ai . Aumentando a potncia e amplitude de um anticorpo contra
o HIV usando o design racional baseado em estrutura. Cincia. 2011; 334: 1289-93 editor pblico
93. Klinge S, Voigts-Hoffmann F, Leibundgut M, Arpagaus S, Ban N. Estrutura cristalina da subunidade ribossomal 60S eucaritica
em complexo com fator de iniciao 6. Cincia. 2011; 334: 941-8 editor publicado
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 20/27
13/10/2017 Protein Purification
94. DiTacchio L, Le H, Vollmers C, Hatori M, Witcher M, Secombe J, et ai . Histone lisina desmetilase JARID1a ativa CLOCK-
BMAL1 e influencia o relgio circadiano. Cincia. 2011; 333: 1881-5 editor publicado
95. Park H, Hohn M, Umehara T, Guo L, Osborne E, Benner J, et al . Expandindo o cdigo gentico de Escherichia coli com
fosfosserina. Cincia. 2011; 333: 1151-4 editor publicado
96. Shi W, Zhang X, Jiang X, Yuan H, Lee J, Barry C, et ai . A pirazinamida inibe a trans-traduo em Mycobacterium tuberculosis.
Cincia. 2011; 333: 1630-2 publisher publicado
97. Fleishman S, Whitehead T, Ekiert D, Dreyfus C, Corn J, Strauch E, et al . Projeto computacional de protenas visando a regio
conservada do caule da hemaglutinina da gripe. Cincia. 2011; 332: 816-21 editor pblico
98. Stefer S, Reitz S, Wang F, Wild K, Pang Y, Schwarz D, et al . Base estrutural para a biognese da protena da membrana
cauda-ancorada pelo complexo receptor Get3. Cincia. 2011; 333: 758-62 editor pblico
99. Kralj J, Hochbaum D, Douglass A, Cohen A. O spiking eltrico em Escherichia coli sondou com uma protena fluorescente de
indicao de tenso. Cincia. 2011; 333: 345-8 editor publicado
100. Tagliabracci V, Engel J, Wen J, Wiley S, Worby C, Kinch L, et al . A quinase secreta fosforila protenas extracelulares que
regulam a biomineralizao. Cincia. 2012; 336: 1150-3 editor pblico
101. Zalatan J, Coyle S, Rajan S, Sidhu S, Lim W. O controle conformacional da protena de andaime Ste5 isola contra a
inactividade da MAP quinase. Cincia. 2012; 337: 1218-22 publisher pubmed
102. Zimmermann I, Marabelli A, Bertozzi C, Sivilotti L, Dutzler R. Inibio do canal de ons procaritico e ligando-ligando
pentamdico ELIC por caties divalentes. PLoS Biol. 2012; 10: e1001429 editor pblico
103. Metcalf W, Griffin B, Cicchillo R, Gao J, Janga S, Cooke H, et ai . Sntese de cido metilfosfnico por micrbios marinhos: uma
fonte de metano no oceano aerbio. Cincia. 2012; 337: 1104-7 publisher pubmed
104. Mayer A, Heidemann M, Lidschreiber M, Schreieck A, Sun M, Hintermair C, et ai . A fosforilao de tirosina CTD prejudica o
recrutamento de fator de terminao para ARN polimerase II. Cincia. 2012; 336: 1723-5 editor publicado
105. Das M, Drake T, Wiley D, Buchwald P, Vavylonis D, Verde F. Dinmica oscilatria da GTPase Cdc42 no controle do crescimento
polarizado. Cincia. 2012; 337: 239-43 publisher pubmed
106. Yang J, Zhao T, Goldstein J, Brown M. Inibio da O-aciltransferase de grelina (GOAT) por pentapeptdeos octanoilados. Proc
Natl Acad Sci US A. 2008; 105: 10750-5 publisher publicado
107. Hsiao Y, Nakagawa A, Shi Z, Mitani S, Xue D, Yuan H. Estrutura cristalina do CRN-4: implicaes para a funo do domnio na
degradao do DNA apopttico. Mol Cell Biol. 2009; 29: 448-57 publisher pubmed
108. Jinek M, Chylinski K, Fonfara I, HAUER M, Doudna J, Charpentier E. Uma endonuclease de DNA controlada por ARN
dualmente programvel em imunidade bacteriana adaptativa. Cincia. 2012; 337: 816-21 publisher pubmed
109. Okada C, Yamashita E, Lee S, Shibata S, Katahira J, Nakagawa A, et al . Uma estrutura de alta resoluo das mquinas de
exportao nuclear pr-microRNA. Cincia. 2009; 326: 1275-9 editor publicado
110. Barthelme D, Sauer R. Identificao do proteasoma Cdc48 20S como uma antiga mquina proteoltica AAA +. Cincia. 2012;
337: 843-6 editor publicado
111. Dickinson D, Nelson W, Weis W. Um epitlio polarizado organizado por beta e alfa-catenina antecede a caderina e as origens
metazorias. Cincia. 2011; 331: 1336-9 editor publicado
112. Prasad R, Longley M, Sharief F, Hou E, Copeland W, Wilson S. DNA DNA polimerase theta possui atividade 5'-dRP lyase e
funes em reparo de exciso de base de nucletido nico in vitro. Nucleic Acids Res. 2009; 37: 1868-77 editor pblico
113. Hirota T, Lee J, St John P, Sawa M, Iwaisako K, Noguchi T, et al . Identificao de ativadores de molculas pequenas de
criptocromo. Cincia. 2012; 337: 1094-7 editor pblico
114. Castillo-Acosta V, Ruiz-Prez L, Yang W, Gonzalez-Pacanowska D, Vidal A. Identificao de um resduo crtico para a exciso
de extremidades bloqueadoras de 3 'em endonucleases apurnicas / apirimidricas da famlia Xth. Nucleic Acids Res. 2009; 37:
1829-42 editor pblico
115. Hsiao Y, Fang W, Lee C, Chen Y, Yuan H. Perspectivas estruturais sobre o reparo do DNA por RNase T - um processo de
exonuclease com 3 'de DNA estruturado em caminhos de reparo. PLoS Biol. 2014; 12: e1001803 editor pblico
116. Depuydt M, Leonard S, Vertommen D, Denoncin K, Morsomme P, Wahni K, et al . Um sistema de reduo periplasmtica
protege os resduos individuais de cistena da oxidao. Cincia. 2009; 326: 1109-11 editor pblico
117. Lu W, Du J, Wacker T, Gerbig-Smentek E, Andrade S, Einsle O. Gating dependente do pH em um canal Formate FocA. Cincia.
2011; 332: 352-4 editor publicado
118. Zorman S, Rebane A, Ma L, Yang G, Molski M, Coleman J, et al. Common intermediates and kinetics, but different energetics, in
the assembly of SNARE proteins. elife. 2014;3:e03348 pubmed publisher
119. Huang S, Zhang Z, Zhang C, Lv X, Zheng X, Chen Z, et al. Activation of Smurf E3 ligase promoted by smoothened regulates
hedgehog signaling through targeting patched turnover. PLoS Biol. 2013;11:e1001721 pubmed publisher
120. Puel A, Cypowyj S, Bustamante J, Wright J, Liu L, Lim H, et al. Chronic mucocutaneous candidiasis in humans with inborn
errors of interleukin-17 immunity. Science. 2011;332:65-8 pubmed publisher
121. Dunkle J, Wang L, Feldman M, Pulk A, Chen V, Kapral G, et al. Structures of the bacterial ribosome in classical and hybrid
states of tRNA binding. Science. 2011;332:981-4 pubmed publisher
122. Lamech L, Mallam A, Lambowitz A. Evolution of RNA-protein interactions: non-specific binding led to RNA splicing activity of
fungal mitochondrial tyrosyl-tRNA synthetases. PLoS Biol. 2014;12:e1002028 pubmed publisher
123. Grotjohann T, Testa I, Reuss M, Brakemann T, Eggeling C, Hell S, et al. rsEGFP2 enables fast RESOLFT nanoscopy of living
cells. elife. 2012;1:e00248 pubmed publisher
124. King N, Sheffler W, Sawaya M, Vollmar B, Sumida J, Andre I, et al. Computational design of self-assembling protein
nanomaterials with atomic level accuracy. Science. 2012;336:1171-4 pubmed publisher
125. Yi C, Ma M, Ran L, Zheng J, Tong J, Zhu J, et al. Function and molecular mechanism of acetylation in autophagy regulation.
Science. 2012;336:474-7 pubmed publisher
126. Iwig J, Vercoulen Y, Das R, Barros T, Limnander A, Che Y, et al. Structural analysis of autoinhibition in the Ras-specific
exchange factor RasGRP1. elife. 2013;2:e00813 pubmed publisher
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 21/27
13/10/2017 Protein Purification
127. Lazarus J, Moughamian A, Tokito M, Holzbaur E. Dynactin subunit p150(Glued) is a neuron-specific anti-catastrophe factor.
PLoS Biol. 2013;11:e1001611 pubmed publisher
128. Laganowsky A, Liu C, Sawaya M, Whitelegge J, Park J, Zhao M, et al. Atomic view of a toxic amyloid small oligomer. Science.
2012;335:1228-31 pubmed publisher
129. Gagnon M, Seetharaman S, Bulkley D, Steitz T. Structural basis for the rescue of stalled ribosomes: structure of YaeJ bound to
the ribosome. Science. 2012;335:1370-2 pubmed publisher
130. Hawley S, Fullerton M, Ross F, Schertzer J, Chevtzoff C, Walker K, et al. The ancient drug salicylate directly activates AMP-
activated protein kinase. Science. 2012;336:918-22 pubmed publisher
131. Huang N, Chelliah Y, Shan Y, Taylor C, Yoo S, PARTCH C, et al. Crystal structure of the heterodimeric CLOCK:BMAL1
transcriptional activator complex. Science. 2012;337:189-94 pubmed publisher
132. Okunuki Y, Usui Y, Kezuka T, Hattori T, Masuko K, Nakamura H, et al. Proteomic surveillance of retinal autoantigens in
endogenous uveitis: implication of esterase D and brain-type creatine kinase as novel autoantigens. Mol Vis. 2008;14:1094-104
pubmed
133. Du J, Zhou Y, Su X, Yu J, Khan S, Jiang H, et al. Sirt5 is a NAD-dependent protein lysine demalonylase and desuccinylase.
Science. 2011;334:806-9 pubmed publisher
134. Azoitei M, Correia B, Ban Y, Carrico C, Kalyuzhniy O, Chen L, et al. Computation-guided backbone grafting of a discontinuous
motif onto a protein scaffold. Science. 2011;334:373-6 pubmed publisher
135. Schulz S, Iglesias-Cans M, Krah A, Yildiz O, Leone V, Matthies D, et al. A new type of Na(+)-driven ATP synthase membrane
rotor with a two-carboxylate ion-coupling motif. PLoS Biol. 2013;11:e1001596 pubmed publisher
136. Login F, Balmand S, Vallier A, Vincent-Monegat C, Vigneron A, Weiss-Gayet M, et al. Antimicrobial peptides keep insect
endosymbionts under control. Science. 2011;334:362-5 pubmed publisher
137. Wu X, Zhou T, Zhu J, Zhang B, Georgiev I, Wang C, et al. Focused evolution of HIV-1 neutralizing antibodies revealed by
structures and deep sequencing. Science. 2011;333:1593-602 pubmed publisher
138. Montaville P, Jgou A, Pernier J, Compper C, Guichard B, Mogessie B, et al. Spire and Formin 2 synergize and antagonize in
regulating actin assembly in meiosis by a ping-pong mechanism. PLoS Biol. 2014;12:e1001795 pubmed publisher
139. Ahmed Y, Gerke J, Park H, Bayram , Neumann P, Ni M, et al. The velvet family of fungal regulators contains a DNA-binding
domain structurally similar to NF-B. PLoS Biol. 2013;11:e1001750 pubmed publisher
140. Polikanov Y, Blaha G, Steitz T. How hibernation factors RMF, HPF, and YfiA turn off protein synthesis. Science. 2012;336:915-8
pubmed publisher
141. Carmena M, Pinson X, Platani M, Salloum Z, Xu Z, Clark A, et al. The chromosomal passenger complex activates Polo kinase at
centromeres. PLoS Biol. 2012;10:e1001250 pubmed publisher
142. Suzuki G, Shimazu N, Tanaka M. A yeast prion, Mod5, promotes acquired drug resistance and cell survival under environmental
stress. Science. 2012;336:355-9 pubmed publisher
143. Meharena H, Chang P, Keshwani M, Oruganty K, Nene A, Kannan N, et al. Deciphering the structural basis of eukaryotic protein
kinase regulation. PLoS Biol. 2013;11:e1001680 pubmed publisher
144. Neunuebel M, Chen Y, Gaspar A, Backlund P, Yergey A, Machner M. De-AMPylation of the small GTPase Rab1 by the pathogen
Legionella pneumophila. Science. 2011;333:453-6 pubmed publisher
145. Xu F, Wu H, KATRITCH V, Han G, Jacobson K, Gao Z, et al. Structure of an agonist-bound human A2A adenosine receptor.
Science. 2011;332:322-7 pubmed publisher
146. Liu W, Chun E, Thompson A, Chubukov P, Xu F, KATRITCH V, et al. Structural basis for allosteric regulation of GPCRs by
sodium ions. Science. 2012;337:232-6 pubmed publisher
147. Roman-Hernandez G, Peterson J, Bernstein H. Reconstitution of bacterial autotransporter assembly using purified components.
elife. 2014;3:e04234 pubmed publisher
148. Brohawn S, del Mrmol J, MacKinnon R. Crystal structure of the human K2P TRAAK, a lipid- and mechano-sensitive K+ ion
channel. Science. 2012;335:436-41 pubmed publisher
149. Inamori K, Yoshida-Moriguchi T, Hara Y, Anderson M, Yu L, Campbell K. Dystroglycan function requires xylosyl- and
glucuronyltransferase activities of LARGE. Science. 2012;335:93-6 pubmed publisher
150. Ranson-Olson B, Zeilstra-Ryalls J. Regulation of the Rhodobacter sphaeroides 2.4.1 hemA gene by PrrA and FnrL. J Bacteriol.
2008;190:6769-78 pubmed publisher
151. Colombo M, Bourhis J, Chamontin C, Soriano C, Villet S, Costanzo S, et al. The interaction between the measles virus
nucleoprotein and the Interferon Regulator Factor 3 relies on a specific cellular environment. Virol J. 2009;6:59 pubmed
publisher
152. Zhang B, Zhang T, Wang G, Wang G, Chi W, Jiang Q, et al. GSK3-Dzip1-Rab8 cascade regulates ciliogenesis after mitosis.
PLoS Biol. 2015;13:e1002129 pubmed publisher
153. Miyagawa Y, Okita H, Itagaki M, Toyoda M, Katagiri Y, Fujimoto J, et al. EWS/ETS regulates the expression of the Dickkopf
family in Ewing family tumor cells. PLoS ONE. 2009;4:e4634 pubmed publisher
154. Tomishige N, Kumagai K, Kusuda J, Nishijima M, Hanada K. Casein kinase I{gamma}2 down-regulates trafficking of ceramide in
the synthesis of sphingomyelin. Mol Biol Cell. 2009;20:348-57 pubmed publisher
155. Oldham M, Chen J. Crystal structure of the maltose transporter in a pretranslocation intermediate state. Science.
2011;332:1202-5 pubmed publisher
156. Paige J, Wu K, Jaffrey S. RNA mimics of green fluorescent protein. Science. 2011;333:642-6 pubmed publisher
157. Meister S, Plouffe D, Kuhen K, Bonamy G, Wu T, Barnes S, et al. Imaging of Plasmodium liver stages to drive next-generation
antimalarial drug discovery. Science. 2011;334:1372-7 pubmed publisher
158. Bhattacharjee S, Halane M, Kim S, Gassmann W. Pathogen effectors target Arabidopsis EDS1 and alter its interactions with
immune regulators. Science. 2011;334:1405-8 pubmed publisher
159. Kuper J, Braun C, Elias A, Michels G, Sauer F, Schmitt D, et al. In TFIIH, XPD helicase is exclusively devoted to DNA repair.
PLoS Biol. 2014;12:e1001954 pubmed publisher
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 22/27
13/10/2017 Protein Purification
160. Hata K, Kaibuchi K, Inagaki S, Yamashita T. Unc5B associates with LARG to mediate the action of repulsive guidance molecule.
J Cell Biol. 2009;184:737-50 pubmed publisher
161. Previs M, Beck Previs S, Gulick J, Robbins J, Warshaw D. Molecular mechanics of cardiac myosin-binding protein C in native
thick filaments. Science. 2012;337:1215-8 pubmed publisher
162. Shao G, Patterson-Fortin J, Messick T, Feng D, Shanbhag N, Wang Y, et al. MERIT40 controls BRCA1-Rap80 complex integrity
and recruitment to DNA double-strand breaks. Genes Dev. 2009;23:740-54 pubmed publisher
163. Maine G, Mao X, Muller P, Komarck C, Klomp L, Burstein E. COMMD1 expression is controlled by critical residues that
determine XIAP binding. Biochem J. 2009;417:601-9 pubmed publisher
164. Baker J, Sudarsan N, Weinberg Z, Roth A, Stockbridge R, Breaker R. Widespread genetic switches and toxicity resistance
proteins for fluoride. Science. 2012;335:233-5 pubmed publisher
165. Gong L, Suchard M, Bloom J. Stability-mediated epistasis constrains the evolution of an influenza protein. elife. 2013;2:e00631
pubmed publisher
166. Wang H, den Hollander A, Moayedi Y, Abulimiti A, Li Y, Collin R, et al. Mutations in SPATA7 cause Leber congenital amaurosis
and juvenile retinitis pigmentosa. Am J Hum Genet. 2009;84:380-7 pubmed publisher
167. Org T, Chignola F, Hetnyi C, Gaetani M, Rebane A, Liiv I, et al. The autoimmune regulator PHD finger binds to non-methylated
histone H3K4 to activate gene expression. EMBO Rep. 2008;9:370-6 pubmed publisher
168. Gibbs S, Barren B, Beck K, Proft J, Zhao X, Noskova T, et al. Hsp40 couples with the CSPalpha chaperone complex upon
induction of the heat shock response. PLoS ONE. 2009;4:e4595 pubmed publisher
169. Zaitseva L, Cherepanov P, Leyens L, Wilson S, Rasaiyaah J, Fassati A. HIV-1 exploits importin 7 to maximize nuclear import of
its DNA genome. Retrovirology. 2009;6:11 pubmed publisher
170. Szabo I, Bock J, Grassme H, Soddemann M, Wilker B, Lang F, et al. Mitochondrial potassium channel Kv1.3 mediates Bax-
induced apoptosis in lymphocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008;105:14861-6 pubmed publisher
171. Kodani A, Kristensen I, Huang L, Sutterlin C. GM130-dependent control of Cdc42 activity at the Golgi regulates centrosome
organization. Mol Biol Cell. 2009;20:1192-200 pubmed publisher
172. Salahudeen A, Thompson J, Ruiz J, Ma H, Kinch L, Li Q, et al. An E3 ligase possessing an iron-responsive hemerythrin domain
is a regulator of iron homeostasis. Science. 2009;326:722-6 pubmed publisher
173. Fine B, Hodakoski C, Koujak S, Su T, Saal L, Maurer M, et al. Activation of the PI3K pathway in cancer through inhibition of
PTEN by exchange factor P-REX2a. Science. 2009;325:1261-5 pubmed publisher
174. Carlton J, Caballe A, Agromayor M, Kloc M, Martin-Serrano J. ESCRT-III governs the Aurora B-mediated abscission checkpoint
through CHMP4C. Science. 2012;336:220-5 pubmed publisher
175. Yuksek K, Chen W, Chien D, Ou J. Ubiquitin-independent degradation of hepatitis C virus F protein. J Virol. 2009;83:612-21
pubmed publisher
176. MacPherson M, Beatty L, Zhou W, Du M, Sadowski P. The CTCF insulator protein is posttranslationally modified by SUMO. Mol
Cell Biol. 2009;29:714-25 pubmed publisher
177. Ramachandran A, Parisien J, Horvath C. STAT2 is a primary target for measles virus V protein-mediated alpha/beta interferon
signaling inhibition. J Virol. 2008;82:8330-8 pubmed publisher
178. Conover G, Henderson S, Gregorio C. A myopathy-linked desmin mutation perturbs striated muscle actin filament architecture.
Mol Biol Cell. 2009;20:834-45 pubmed publisher
179. Masaki S, Yoshimoto R, Kaida D, Hata A, Satoh T, Ohno M, et al. Identification of the specific interactors of the human lariat
RNA debranching enzyme 1 protein. Int J Mol Sci. 2015;16:3705-21 pubmed publisher
180. Kim N, Min K, Kang K, Lee E, Kim H, Moon K, et al. Regulation of retinal axon growth by secreted Vax1 homeodomain protein.
elife. 2014;3:e02671 pubmed publisher
181. Liu L, Liu C, Hou X, Xi W, Shen L, Tao Z, et al. FTIP1 is an essential regulator required for florigen transport. PLoS Biol.
2012;10:e1001313 pubmed publisher
182. Fleckenstein M, Reese M, Knen-Waisman S, Boothroyd J, Howard J, Steinfeldt T. A Toxoplasma gondii pseudokinase inhibits
host IRG resistance proteins. PLoS Biol. 2012;10:e1001358 pubmed publisher
183. Viiri K, Jnis J, Siggers T, Heinonen T, Valjakka J, Bulyk M, et al. DNA-binding and -bending activities of SAP30L and SAP30 are
mediated by a zinc-dependent module and monophosphoinositides. Mol Cell Biol. 2009;29:342-56 pubmed publisher
184. Lee K, Qian D, Rey S, Wei H, Liu J, Semenza G. Anthracycline chemotherapy inhibits HIF-1 transcriptional activity and tumor-
induced mobilization of circulating angiogenic cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2009;106:2353-8 pubmed publisher
185. Epting C, King F, Pedersen A, Zaman J, Ritner C, Bernstein H. Stem cell antigen-1 localizes to lipid microdomains and
associates with insulin degrading enzyme in skeletal myoblasts. J Cell Physiol. 2008;217:250-60 pubmed publisher
186. Zhou B, Liu J, Wang Q, Liu X, Li X, Li P, et al. The nucleocapsid protein of severe acute respiratory syndrome coronavirus
inhibits cell cytokinesis and proliferation by interacting with translation elongation factor 1alpha. J Virol. 2008;82:6962-71
pubmed publisher
187. Bereczki O, Ujfaludi Z, Pardi N, Nagy Z, Tora L, Boros I, et al. TATA binding protein associated factor 3 (TAF3) interacts with p53
and inhibits its function. BMC Mol Biol. 2008;9:57 pubmed publisher
188. Sonnberg S, Seet B, Pawson T, Fleming S, Mercer A. Poxvirus ankyrin repeat proteins are a unique class of F-box proteins that
associate with cellular SCF1 ubiquitin ligase complexes. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008;105:10955-60 pubmed publisher
189. Oakhill J, Steel R, Chen Z, Scott J, Ling N, Tam S, et al. AMPK is a direct adenylate charge-regulated protein kinase. Science.
2011;332:1433-5 pubmed publisher
190. Amato S, Liu X, Zheng B, Cantley L, Rakic P, Man H. AMP-activated protein kinase regulates neuronal polarization by interfering
with PI 3-kinase localization. Science. 2011;332:247-51 pubmed publisher
191. Zhang K, Fischer T, Porter R, Dhakshnamoorthy J, Zofall M, Zhou M, et al. Clr4/Suv39 and RNA quality control factors
cooperate to trigger RNAi and suppress antisense RNA. Science. 2011;331:1624-7 pubmed publisher
192. Sims R, Rojas L, Beck D, Bonasio R, Schller R, Drury W, et al. The C-terminal domain of RNA polymerase II is modified by
site-specific methylation. Science. 2011;332:99-103 pubmed publisher
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 23/27
13/10/2017 Protein Purification
193. Pan F, Yu H, Dang E, Barbi J, Pan X, Grosso J, et al. Eos mediates Foxp3-dependent gene silencing in CD4+ regulatory T cells.
Science. 2009;325:1142-6 pubmed publisher
194. Kouzu-Fujita M, Mezaki Y, Sawatsubashi S, Matsumoto T, Yamaoka I, Yano T, et al. Coactivation of estrogen receptor beta by
gonadotropin-induced cofactor GIOT-4. Mol Cell Biol. 2009;29:83-92 pubmed publisher
195. Trojer P, Zhang J, Yonezawa M, Schmidt A, Zheng H, Jenuwein T, et al. Dynamic Histone H1 Isotype 4 Methylation and
Demethylation by Histone Lysine Methyltransferase G9a/KMT1C and the Jumonji Domain-containing JMJD2/KDM4 Proteins. J
Biol Chem. 2009;284:8395-405 pubmed publisher
196. Oyama S, Yamakawa H, Sasagawa N, Hosoi Y, Futai E, Ishiura S. Dysbindin-1, a schizophrenia-related protein, functionally
interacts with the DNA- dependent protein kinase complex in an isoform-dependent manner. PLoS ONE. 2009;4:e4199
pubmed publisher
197. Beauvais D, Ell B, McWhorter A, Rapraeger A. Syndecan-1 regulates alphavbeta3 and alphavbeta5 integrin activation during
angiogenesis and is blocked by synstatin, a novel peptide inhibitor. J Exp Med. 2009;206:691-705 pubmed publisher
198. Long D, Raschle M, Joukov V, Walter J. Mechanism of RAD51-dependent DNA interstrand cross-link repair. Science.
2011;333:84-7 pubmed publisher
199. Andersen K, Onischenko E, Tang J, Kumar P, Chen J, Ulrich A, et al. Scaffold nucleoporins Nup188 and Nup192 share structural
and functional properties with nuclear transport receptors. elife. 2013;2:e00745 pubmed publisher
200. Bujalka H, Koenning M, Jackson S, Perreau V, Pope B, Hay C, et al. MYRF is a membrane-associated transcription factor that
autoproteolytically cleaves to directly activate myelin genes. PLoS Biol. 2013;11:e1001625 pubmed publisher
201. Xiong B, Bayat V, Jaiswal M, Zhang K, Sandoval H, Charng W, et al. Crag is a GEF for Rab11 required for rhodopsin trafficking
and maintenance of adult photoreceptor cells. PLoS Biol. 2012;10:e1001438 pubmed publisher
202. Hoffmeyer K, Raggioli A, Rudloff S, Anton R, Hierholzer A, Del Valle I, et al. Wnt/-catenin signaling regulates telomerase in
stem cells and cancer cells. Science. 2012;336:1549-54 pubmed publisher
203. Bagijn M, Goldstein L, Sapetschnig A, Weick E, Bouasker S, Lehrbach N, et al. Function, targets, and evolution of
Caenorhabditis elegans piRNAs. Science. 2012;337:574-8 pubmed publisher
204. Knutson B, Hahn S. Yeast Rrn7 and human TAF1B are TFIIB-related RNA polymerase I general transcription factors. Science.
2011;333:1637-40 pubmed publisher
205. Robles M, Boyault C, Knutti D, Padmanabhan K, Weitz C. Identification of RACK1 and protein kinase Calpha as integral
components of the mammalian circadian clock. Science. 2010;327:463-6 pubmed publisher
206. Johnson K, Zhu S, Tremblay M, Payette J, Wang J, Bouchez L, et al. A stem cell-based approach to cartilage repair. Science.
2012;336:717-21 pubmed publisher
207. Moin S, Urban S. Membrane immersion allows rhomboid proteases to achieve specificity by reading transmembrane segment
dynamics. elife. 2012;1:e00173 pubmed publisher
208. Lee B, Moon J, Shu J, Yuan L, Newman Z, Schekman R, et al. UNC93B1 mediates differential trafficking of endosomal TLRs.
elife. 2013;2:e00291 pubmed publisher
209. Blish K, Wang W, Willingham M, Du W, Birse C, Krishnan S, et al. A human bone morphogenetic protein antagonist is down-
regulated in renal cancer. Mol Biol Cell. 2008;19:457-64 pubmed
210. Wang F, Tong Q. SIRT2 suppresses adipocyte differentiation by deacetylating FOXO1 and enhancing FOXO1's repressive
interaction with PPARgamma. Mol Biol Cell. 2009;20:801-8 pubmed publisher
211. Matsuyama M, Aizawa S, Shimono A. Sfrp controls apicobasal polarity and oriented cell division in developing gut epithelium.
PLoS Genet. 2009;5:e1000427 pubmed publisher
212. Sathish N, Zhu F, Yuan Y. Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus ORF45 interacts with kinesin-2 transporting viral capsid-
tegument complexes along microtubules. PLoS Pathog. 2009;5:e1000332 pubmed publisher
213. Yi W, Clark P, Mason D, Keenan M, Hill C, Goddard W, et al. Phosphofructokinase 1 glycosylation regulates cell growth and
metabolism. Science. 2012;337:975-80 pubmed publisher
214. Misawa T, Arima K, Mizusawa H, Satoh J. Close association of water channel AQP1 with amyloid-beta deposition in Alzheimer
disease brains. Acta Neuropathol. 2008;116:247-60 pubmed publisher
215. Wang F, He L, Huangyang P, Liang J, Si W, Yan R, et al. JMJD6 promotes colon carcinogenesis through negative regulation of
p53 by hydroxylation. PLoS Biol. 2014;12:e1001819 pubmed publisher
216. Duong H, Robles M, Knutti D, Weitz C. A molecular mechanism for circadian clock negative feedback. Science. 2011;332:1436-
9 pubmed publisher
217. He Y, Li B, Li Z, Liu P, Wang Y, Tang Q, et al. Tet-mediated formation of 5-carboxylcytosine and its excision by TDG in
mammalian DNA. Science. 2011;333:1303-7 pubmed publisher
218. Naidu S, Friedrich J, Russell J, Zomerdijk J. TAF1B is a TFIIB-like component of the basal transcription machinery for RNA
polymerase I. Science. 2011;333:1640-2 pubmed publisher
219. Chakraborty A, Wang D, Ebright Y, Korlann Y, Kortkhonjia E, Kim T, et al. Opening and closing of the bacterial RNA polymerase
clamp. Science. 2012;337:591-5 pubmed publisher
220. Oganesian A, Armstrong L, Migliorini M, Strickland D, Bornstein P. Thrombospondins use the VLDL receptor and a nonapoptotic
pathway to inhibit cell division in microvascular endothelial cells. Mol Biol Cell. 2008;19:563-71 pubmed
221. Pan C, Potratz J, Cannon B, Simpson Z, Ziehr J, Tijerina P, et al. DEAD-box helicase proteins disrupt RNA tertiary structure
through helix capture. PLoS Biol. 2014;12:e1001981 pubmed publisher
222. Aggarwal S, Snaidero N, Phler G, Frey S, Sanchez P, Zweckstetter M, et al. Myelin membrane assembly is driven by a phase
transition of myelin basic proteins into a cohesive protein meshwork. PLoS Biol. 2013;11:e1001577 pubmed publisher
223. Pinheiro V, Taylor A, Cozens C, Abramov M, Renders M, Zhang S, et al. Synthetic genetic polymers capable of heredity and
evolution. Science. 2012;336:341-4 pubmed publisher
224. Wu C, Li T, Farh L, Lin L, Lin T, Yu Y, et al. Structural basis of type II topoisomerase inhibition by the anticancer drug etoposide.
Science. 2011;333:459-62 pubmed publisher
225. Coles C, Shen Y, Tenney A, Siebold C, Sutton G, Lu W, et al. Proteoglycan-specific molecular switch for RPTP clustering and
neuronal extension. Science. 2011;332:484-8 pubmed publisher
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 24/27
13/10/2017 Protein Purification
226. Paixao-Cavalcante D, Hanson S, Botto M, Cook H, Pickering M. Factor H facilitates the clearance of GBM bound iC3b by
controlling C3 activation in fluid phase. Mol Immunol. 2009;46:1942-50 pubmed publisher
227. Zcharia E, Jia J, Zhang X, Baraz L, Lindahl U, Peretz T, et al. Newly generated heparanase knock-out mice unravel co-
regulation of heparanase and matrix metalloproteinases. PLoS ONE. 2009;4:e5181 pubmed publisher
228. Wild P, Farhan H, McEwan D, Wagner S, Rogov V, Brady N, et al. Phosphorylation of the autophagy receptor optineurin restricts
Salmonella growth. Science. 2011;333:228-33 pubmed publisher
229. Alder A, Jamil M, Marzorati M, Bruno M, Vermathen M, Bigler P, et al. The path from -carotene to carlactone, a strigolactone-
like plant hormone. Science. 2012;335:1348-51 pubmed publisher
230. Feng L, Huang J, Chen J. MERIT40 facilitates BRCA1 localization and DNA damage repair. Genes Dev. 2009;23:719-28
pubmed publisher
231. Yamagishi Y, Honda T, Tanno Y, Watanabe Y. Two histone marks establish the inner centromere and chromosome bi-orientation.
Science. 2010;330:239-43 pubmed publisher
232. Wilbur J, Heald R. Mitotic spindle scaling during Xenopus development by kif2a and importin . elife. 2013;2:e00290 pubmed
publisher
233. Seth D, Hausladen A, Wang Y, Stamler J. Endogenous protein S-Nitrosylation in E. coli: regulation by OxyR. Science.
2012;336:470-3 pubmed publisher
234. Kaiser C, Goldman D, Chodera J, Tinoco I, Bustamante C. The ribosome modulates nascent protein folding. Science.
2011;334:1723-7 pubmed publisher
235. Zhang M, Wu P, Kelly F, Nurse P, Hang H. Quantitative control of protein S-palmitoylation regulates meiotic entry in fission yeast.
PLoS Biol. 2013;11:e1001597 pubmed publisher
236. Mao Z, Hine C, Tian X, Van Meter M, Au M, Vaidya A, et al. SIRT6 promotes DNA repair under stress by activating PARP1.
Science. 2011;332:1443-6 pubmed publisher
237. Carter A, Cho C, Jin L, Vale R. Crystal structure of the dynein motor domain. Science. 2011;331:1159-65 pubmed publisher
238. Farcas A, Blackledge N, Sudbery I, Long H, McGouran J, Rose N, et al. KDM2B links the Polycomb Repressive Complex 1
(PRC1) to recognition of CpG islands. elife. 2012;1:e00205 pubmed publisher
239. van den Elsen J, Isenman D. A crystal structure of the complex between human complement receptor 2 and its ligand C3d.
Science. 2011;332:608-11 pubmed publisher
240. Zhou H, Kaplan T, Li Y, Grubisic I, Zhang Z, Wang P, et al. Dual functions of TAF7L in adipocyte differentiation. elife.
2013;2:e00170 pubmed publisher
241. Gari K, Len Ortiz A, Borel V, Flynn H, Skehel J, Boulton S. MMS19 links cytoplasmic iron-sulfur cluster assembly to DNA
metabolism. Science. 2012;337:243-5 pubmed publisher
242. Liu T, Liu Z, Song C, Hu Y, Han Z, She J, et al. Chitin-induced dimerization activates a plant immune receptor. Science.
2012;336:1160-4 pubmed publisher
243. Lai Y, Cascio D, Yeates T. Structure of a 16-nm cage designed by using protein oligomers. Science. 2012;336:1129 pubmed
publisher
244. Janda C, Waghray D, Levin A, Thomas C, Garcia K. Structural basis of Wnt recognition by Frizzled. Science. 2012;337:59-64
pubmed publisher
245. Gao Y, Zorman S, Gundersen G, Xi Z, Ma L, Sirinakis G, et al. Single reconstituted neuronal SNARE complexes zipper in three
distinct stages. Science. 2012;337:1340-3 pubmed publisher
246. Soon F, Ng L, Zhou X, West G, Kovach A, Tan M, et al. Molecular mimicry regulates ABA signaling by SnRK2 kinases and PP2C
phosphatases. Science. 2012;335:85-8 pubmed publisher
247. Spatzal T, Aksoyoglu M, Zhang L, Andrade S, Schleicher E, Weber S, et al. Evidence for interstitial carbon in nitrogenase FeMo
cofactor. Science. 2011;334:940 pubmed publisher
248. Miller A, Long S. Crystal structure of the human two-pore domain potassium channel K2P1. Science. 2012;335:432-6 pubmed
publisher
249. Dey A, Seshasayee D, Noubade R, French D, Liu J, Chaurushiya M, et al. Loss of the tumor suppressor BAP1 causes myeloid
transformation. Science. 2012;337:1541-6 pubmed
250. Ayaz P, Ye X, Huddleston P, Brautigam C, Rice L. A TOG:-tubulin complex structure reveals conformation-based mechanisms
for a microtubule polymerase. Science. 2012;337:857-60 pubmed publisher
251. Childers W, Xu Q, Mann T, Mathews I, Blair J, Deacon A, et al. Cell fate regulation governed by a repurposed bacterial histidine
kinase. PLoS Biol. 2014;12:e1001979 pubmed publisher
252. Palm W, Swierczynska M, Kumari V, Ehrhart-Bornstein M, Bornstein S, Eaton S. Secretion and signaling activities of lipoprotein-
associated hedgehog and non-sterol-modified hedgehog in flies and mammals. PLoS Biol. 2013;11:e1001505 pubmed
publisher
253. Fodor K, Wolf J, Erdmann R, Schliebs W, Wilmanns M. Molecular requirements for peroxisomal targeting of alanine-glyoxylate
aminotransferase as an essential determinant in primary hyperoxaluria type 1. PLoS Biol. 2012;10:e1001309 pubmed
publisher
254. Atherton J, Farabella I, Yu I, Rosenfeld S, Houdusse A, Topf M, et al. Conserved mechanisms of microtubule-stimulated ADP
release, ATP binding, and force generation in transport kinesins. elife. 2014;3:e03680 pubmed publisher
255. Sosa B, Demircioglu F, Chen J, Ingram J, Ploegh H, Schwartz T. How lamina-associated polypeptide 1 (LAP1) activates Torsin.
elife. 2014;3:e03239 pubmed publisher
256. Rousseau A, McEwen A, Poussin-Courmontagne P, Rognan D, Nomin Y, Rio M, et al. TRAF4 is a novel phosphoinositide-
binding protein modulating tight junctions and favoring cell migration. PLoS Biol. 2013;11:e1001726 pubmed publisher
257. Lecona E, Rojas L, Bonasio R, Johnston A, Fernandez-Capetillo O, Reinberg D. Polycomb protein SCML2 regulates the cell
cycle by binding and modulating CDK/CYCLIN/p21 complexes. PLoS Biol. 2013;11:e1001737 pubmed publisher
258. Schopfer P, Heyno E, Drepper F, Krieger-Liszkay A. Naphthoquinone-dependent generation of superoxide radicals by quinone
reductase isolated from the plasma membrane of soybean. Plant Physiol. 2008;147:864-78 pubmed publisher
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 25/27
13/10/2017 Protein Purification
259. Nakane S, Nakagawa N, Kuramitsu S, Masui R. Characterization of DNA polymerase X from Thermus thermophilus HB8 reveals
the POLXc and PHP domains are both required for 3'-5' exonuclease activity. Nucleic Acids Res. 2009;37:2037-52 pubmed
publisher
260. Pinotsis N, Chatziefthimiou S, Berkemeier F, Beuron F, Mavridis I, Konarev P, et al. Superhelical architecture of the myosin
filament-linking protein myomesin with unusual elastic properties. PLoS Biol. 2012;10:e1001261 pubmed publisher
261. Mller M, Peters H, Blmer J, Blankenfeldt W, Goody R, Itzen A. The Legionella effector protein DrrA AMPylates the membrane
traffic regulator Rab1b. Science. 2010;329:946-9 pubmed publisher
262. Kudryashev M, Stenta M, Schmelz S, Amstutz M, Wiesand U, Castao-Diez D, et al. In situ structural analysis of the Yersinia
enterocolitica injectisome. elife. 2013;2:e00792 pubmed publisher
263. Pallesen J, Hashem Y, Korkmaz G, Koripella R, Huang C, Ehrenberg M, et al. Cryo-EM visualization of the ribosome in
termination complex with apo-RF3 and RF1. elife. 2013;2:e00411 pubmed publisher
264. Oganesyan V, Damschroder M, Cook K, Wu H, Dall'Acqua W. Crystallization and preliminary X-ray diffraction analysis of the
complex between a human anti-interferon antibody fragment and human interferon alpha-2A. Acta Crystallogr Sect F Struct Biol
Cryst Commun. 2009;65:14-6 pubmed publisher
265. Archbold J, Macdonald W, Gras S, Ely L, Miles J, Bell M, et al. Natural micropolymorphism in human leukocyte antigens
provides a basis for genetic control of antigen recognition. J Exp Med. 2009;206:209-19 pubmed publisher
266. Baldinger T, Gossen M. Binding of Drosophila ORC proteins to anaphase chromosomes requires cessation of mitotic cyclin-
dependent kinase activity. Mol Cell Biol. 2009;29:140-9 pubmed publisher
267. Peng T, Huang B, Sun Y, Lu Y, Bonewald L, Chen S, et al. Blocking of proteolytic processing and deletion of glycosaminoglycan
side chain of mouse DMP1 by substituting critical amino acid residues. Cells Tissues Organs. 2009;189:192-7 pubmed
publisher
268. Guo Y, Nady N, Qi C, Allali-Hassani A, Zhu H, Pan P, et al. Methylation-state-specific recognition of histones by the MBT repeat
protein L3MBTL2. Nucleic Acids Res. 2009;37:2204-10 pubmed publisher
269. Huang H, Levin E, Liu S, Bai Y, Lockless S, Zhou M. Structure of a membrane-embedded prenyltransferase homologous to
UBIAD1. PLoS Biol. 2014;12:e1001911 pubmed publisher
270. Liu X, Bushnell D, Silva D, Huang X, Kornberg R. Initiation complex structure and promoter proofreading. Science.
2011;333:633-7 pubmed publisher
271. Roostalu J, Hentrich C, Bieling P, Telley I, Schiebel E, Surrey T. Directional switching of the kinesin Cin8 through motor coupling.
Science. 2011;332:94-9 pubmed publisher
272. Cooley R, Rhoads T, Arp D, Karplus P. A diiron protein autogenerates a valine-phenylalanine cross-link. Science. 2011;332:929
pubmed publisher
273. Ataide S, Schmitz N, Shen K, Ke A, Shan S, Doudna J, et al. The crystal structure of the signal recognition particle in complex
with its receptor. Science. 2011;331:881-6 pubmed publisher
274. Zhang S, Bryant D. The tricarboxylic acid cycle in cyanobacteria. Science. 2011;334:1551-3 pubmed publisher
275. Gardner B, Walter P. Unfolded proteins are Ire1-activating ligands that directly induce the unfolded protein response. Science.
2011;333:1891-4 pubmed publisher
276. McNulty N, Wu M, Erickson A, Pan C, Erickson B, Martens E, et ai . Efeitos da dieta sobre a utilizao de recursos por uma
microbiota modelo de intestino humano que contm Bacteroides cellulosilyticus WH2, um simbionte com um glicbio extenso.
PLoS Biol. 2013; 11: e1001637 editor pblico
277. Ali A, Jukes R, Pearl L, Oliver A. Reconhecimento especfico de um motivo multiplicado por fosforilao no andaime de reparo
do DNA XRCC1 pelo domnio FHA do PNK humano. Nucleic Acids Res. 2009; 37: 1701-12 publisher publicado
278. Mechaly A, Sassoon N, Betton J, Alzari P. Os movimentos helicoidais segmentares e a assimetria dinmica modulam a
autofosforilao da histidina quinase. PLoS Biol. 2014; 12: e1001776 editor pblico
ISSN: 2329-5139
contribuir
tpicos relacionados
mtodo
Incorporando Aminocidos
Naturais em Protenas
Recombinantes em Clulas
Vivos
Nanodiscs: Pesquisa de
Protenas de Membranas em
Condies Quase Nativas
Empresas de Protena
Mtodos de Pesquisa em
Modificao de Protenas
Tags proteicos / pptidos
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 26/27
13/10/2017 Protein Purification
Quantificao de protenas
Ensaios de Interao / Ligao
Receptor-Ligando de Protena
Expresso Protena
Recombinante: Vector-Host
Systems
siRNAs e shRNAs: Ferramentas
para Protena Knockdown por
silenciamento de genes
reagente
CHAPS
EDTA
EGTA
HEPES
PMSF
Salina tamponada com fosfato
Triton X-100
ditiotreitol
glicerol
leupeptina
pepstatina
poli-histidina
https://www.labome.com/method/Protein-Purification.html 27/27