HISTOLOGIA E EMBRIOLOGIA - FISIOTERAPIA - 1 O ANO

I. Apresentação geral da disciplina

II. Importância da disciplina

III. Uso e manutenção do microscópio óptico composto

1. Componentes de um microscópio óptico composto

. parte mecânica = suporte
. parte óptica
- condensador
- objetiva ( secas e de imersão)
- ocular

2. Cálculo do aumento (ampliação) da imagem

. aumento da objetiva X aumento da ocular

3. Limite de resolução

a menor distância entre 2 pontos que permite que sejam visualizados individualmente
LR = K x λ , onde,
K = constante (0,61);
λ = comp. de 1 onda de luz empregada (0,55 µ m);
AN = abertura numérica (vem gravado na objetiva).
LR ⇒ AN
4. Como usar o microscópio

4.1 acenda a fonte de luz;

4.2 limpe a lâmina, as objetivas e a ocular com um lenço de papel;

4.3 gire o revólver do microscópio para que a objetiva panorâmica fique em

posição de uso;

4.4 com o macrométrico abaixe a platina até o ponto máximo;

4.5 coloque a lâmina com a lamínula voltada para cima e prenda-a com as

presilhas;

4.6 manipulando o macrométrico e olhando através da ocular suba

vagarosamente a platina até visualizar a imagem;

4.7 verifique as condições de iluminação, manuseando condensador e diafragma;

4.8 melhore o foco usando o parafuso micrométrico;

4.9 centre a estrutura utilizando o sistema “charriot”;

4.10 gire o revólver e mude para a objetiva imediatamente de maior aumento

(faça uso do parafuso micrométrico para ajuste do foco).

4.11 etapas para retirar a lâmina

4.11.1 volte o revólver à objetiva panorâmica;

4.11.2 usando o macrométrico desça completamente a platina;

4.11.3 retire a lâmina;

4.11.4 desligue a fonte de luz;

4.11.5 enrole o fio de luz em torno da base do aparelho;

4.11.6 cubra-o com o protetor plástico.

5. O que não deve ser feito

5.1 não deixe a lâmpada do microscópio acesa quando não o estiver usando;

5.2 nunca mergulhe as objetivas em líquidos para limpá-las;

5.3 nunca faça o foco das objetivas de maior aumento sem tê-lo feito nas

precedentes;

5.4 não tente fazer consertos em seu microscópio e nunca troque peças de um

microscópio para outros;

5.5 não “arraste” seu microscópio de uma lado para outro da bancada;

5.6 nunca tente desmontar as oculares e objetivas;

5.7 não se retire do laboratório sem deixar seu microscópio em ordem.

IV. Técnicas gerais de preparação de uma lâmina permanente para
microscopia de luz

1. Introdução

2. Material
. autópsia;
. biópsia;
. 4 mm de espessura.

3. Fixação
. evitar autólise;
. impedir a atividade e a proliferação de bactérias;
. endurecer as células;
. aumentar a afinidade das estruturas celulares;
. fixação química = sol. formol a 10% ⇒ 24 hs.

4. Descalcificação
. peças ósseas;
. ácidos.

5. Desidratação
. 1 a 2hs em cada álcool etílico (70%, 80%, 90%, 95% e absoluto I, II e III)

6. Diafanização
. xilol ou benzol;
. álcool absoluto + benzol (1:1) ⇒ benzol I, II e III;
. peças pequenas = 40 min. em cada estágio;
. peças grandes = 1h:30min. em cada estágio;
7. Inclusão
. blocos de parafina
8. Microtomia
. micrótomo

9. Fixação dos cortes na lâmina

. albumina de Meyer

10. Desparafinização e hidratação

. xilol I e II ⇒ 5 min. em cada;
. álcool absoluto I e II, 95%, 90%, 80% e 70% ⇒ 5 min. em cada ⇒ água
corrente ⇒ 10 min.

11. Coloração
. corantes ácidos;
. corantes básicos;
. técnicas citoquímicas.

12. Montagem
. lamínula;
. Bálsamo do Canadá, Entelan ou Permout.
V. Microscópio de contraste de fase
. detalhes celulares in vivo
. #s de fase + #s de amplitude = #s de intensidade luminosa

VI. Microscópio confocal

. raios laser = gera imagens de planos ópticos do tecido em exame
. imagens muito nítidas

VII. Microscópio de polarização

. filtro polaróide = luz polarizada
- polarizador
- analisador

VIII. Microscopia de fluorescência

. substâncias fluorescentes
. radiação ultravioleta
. fonte de luz ultravioleta
. filtros = radiação
. vitamina A e porfirinas
. alaranjado-de-acridina + DNA = fluorescência verde-amarelada
. alaranjado-de-acridina + RNA = fluorescência vermelho-amarelada
IX. Microscopia eletrônica
. alta resolução
1. Microscópio eletrônico de transmissão
. aquecimento do filamento catódio - emissão de elétrons
. # de potencial entre o filamento e o anódio (placa perfurada no centro que
forma um feixe de elétrons)
. feixe defletido por lentes eletromagnéticas
. condensador focaliza o feixe no plano do objeto
. objetiva forma uma imagem do objeto
. imagem ampliada por 1 ou 2 lentes projetoras = imagem final - tela
fluorescente ou filmes fotográficos
. cortes finos de tecido (20 a 100nm de espessura)
. incluir em resinas duras
. ultramicrótomos (navalhas de vidro ou diamante)

2. Microscópio eletrônico de varredura

. bobina de varredura - entre a lente eletromagnética e a objetiva
. desvio feixe de elétrons - incide sobre objeto ponto a ponto = numa seqüencia
determinada
. feixe eletrônico não atravessa o objeto - sofre reflexões - elétrons secundários -
sinal elétrico = tubo de vídeo
X. Histoquímica e citoquímica

. localização de #s substâncias nos cortes de tecido

. reações químicas específicas ou interação macromolecular de alta afinidade
. compostos insolúveis, corados ou elétron-densos
. Microscópio óptico ou eletrônico
. alguns exemplos de moléculas orgânicas que podem ser observadas:
. lipídeos
. ácidos nucléicos
. polissacarídeos
. enzimas
. fosfatase ácida
. desidrogenases
. peroxidase
 Objetivos educacionais da disciplina

. Cohecer os diferentes tipos de células e seus componentes;

. Conhecer o desenvolvimento embrionário dos diferentes órgãos;
. Nomear, reproduzir e reconhecer as estruturas componentes dos órgõs de diversos
sistemas;
. Reproduzir em desenhos esquemáticos cortes histológicos dos vários órgãos de
sistemas;
. Relacionar as estruturas histológicas dos vários sistemas com suas respectivas funções;
. Automatizar as operações de uso de microscópio;
. Dominar a linguagem técnica usada em Histologia;
. Diferenciar os diversos órgãos de um mesmo sistema;
. Comparar as estruturas histológicas nos diferentes órgãos;
. Estabelecer comparações funcionais das estruturas nos diferentes orgãos;
. Demonstrar conhecimentos sobre a organização histológica dos diversos órgãos e
sistemas;
. Aplicar conhecimentos da Histologia geral na compreensão da histologia de órgãos e
sistemas;
. Demonstrar conhecimentos de Histofisiologia nos diversos órgãos e sistemas.