Morfofisiologia Humana I

morfofisiologia humana I - conferencia 01
MORFOFISIOLOGIA I
VIDEOCONFERENCIA 1
LA CELULA
INTRODUCCION A LA MORFOFISIOLOGIA. LA CELULA
MORFOFISIOLOGIA HUMANA
La morfofisiologia humana estudia la forma, estructura y funcin del

organismo; as como las leyes y principios que rigen su organizacin,
desarrollo y relaciones con el medio externo.
La misma constituye un sistema de contenidos esenciales aportados por

ciencias particulares con las cuales est en estrecha interrelacin como:
la Biologa Celular y Molecular encargada de los aspectos moleculares
de la vida, la Embriologa que aborda los aspectos relacionados con la
concepcin y desarrollo del individuo, la Anatoma Humana que estudia
aspectos macroscpicos del organismo, la Histologa los aspectos
microscpicos y la Fisiologa encargada del estudio de las funciones;
adems toma elementos de especialidades como la Gentica y la
Inmunologa.
Esta disciplina guarda vnculo estrecho con los factores sociales como
son: las condiciones, modos y estilos de vida, entonces podemos
entender su relacin con la Epidemiologia y la Sociologa entre otras;
tambin se relaciona con especialidades quirrgicas, clnicas y de
medios diagnsticos como la Anatoma
Patolgica, la Imagenologa, el Laboratorio Clnico y la Microbiologa a

las que sirve de fundamento cientfico.
Sin lugar a duda el objeto de estudio de la Morfofisiologia es el

organismo como un todo interrelacionado con el medio ambiente.
METODOS DE ESTUDIO DE LA MORFOFISIOLOGIA HUMANA
Con el desarrollo de la ciencia y en particular de todas aquellas que

forman parte de la Morfofisiologia humana se han aportado grandes
volmenes de conocimientos sobre la forma, estructura, desarrollo y
funcionamiento del organismo a partir de la aplicacin de mtodos de
estudio tanto en el individuo vivo como en el cadver.
Cuando se trata de estudiar rganos, sistema de rganos y regiones del

cuerpo humano a simple vista algunos autores describen mtodos que
permiten el estudio por sistemas y otros que facilitan el estudio
topogrfico o por regiones; otros mtodos de gran utilidad son los que
permiten la valoracin funcional de los componentes del organismo vivo y
generalmente se realizan en laboratorios; en la imagen se observan
algunos de estos mtodos de estudio.
METODOS Y TECNICAS DE ESTUDIO DE CELULAS Y TEJIDOS
Para el estudio de las clulas y los tejidos desde el punto de vista

microscpico se emplean diferentes mtodos y tcnicas, los que
necesitan de la complementacin del microscopio como instrumento
indispensable para poder observarlas, para el uso del microscopio es
importante conocer cuantos tipos de microscopios existen y el
basamento de su funcionamiento de forma general, el que se sustenta en
la fuente de energa y sus sistemas de lentes; de ah que en la
microscopia se empleen diferentes tipos de microscopios en
dependencia del inters de estudio; por ejemplo microscopios que
emplean radiaciones visibles de los cuales existen diferentes tipos.
Hacia la izquierda de la imagen se observa el microscopio ptico de

campo brillante y hacia la derecha un ejemplo de microscopio
electrnico, los que emplean radiaciones invisibles y que pueden ser de
varios tipos.
Entre las tcnicas mas empleadas para la observacin de los tejidos est
la de inclusin en parafina.
METODOS Y TECNICAS PARA EL ESTUDIO DE CELULAS Y TEJIDOS

VIVOS
Otros mtodos y tcnicas empleados para el estudio de las clulas y los

tejidos y que su uso depende de los objetivos del estudio pueden ser; los
mtodos y tcnicas para el estudio de clulas y tejidos vivos entre los
que tenemos: el cultivo de tejido que es el ms empleado.
Otros utilizados son: la coloracin vital, la coloracin supravital y el
transplante de tejidos y rganos.
Y aquellos mtodos y tcnicas que se emplean para el estudio de clulas

y tejidos muertos y conservados, los que a su vez pueden clasificarse en:
Mtodos y tcnicas citoqumicas e histoqumicas entre las que se

encuentran: la reaccin de fulgen que permite el estudio del ADN, la
reaccin de PAS que permite el estudio de los polisacridos, los Sudanes
que permiten el estudio de las grasas.
Por ultimo tenemos los mtodos y tcnicas citoqumicas e histoqumicas

con basamento fsico entre los que tenemos: la congelacin y fractura, la
inmunofluorescencia, la morfometra y la inmunocitoqumica entre otros.
Como todos sabemos existen en la naturaleza diversos objetos y

fenmenos que expresan su condicin de materia en movimiento en
mltiples formas y manifestaciones a travs de sus diferentes
propiedades, incluso hasta las percepciones y sensaciones son producto
de la actividad del cerebro; el que constituye la base morfofuncional de la
memoria, la conciencia y el pensamiento.
Sobre la materia Lenin plante: la materia es una categora filosfica

para designar la realidad objetiva dada al hombre en sus sensaciones,
calcada, fotografiada y reflejada por nuestras sensaciones y existe
independientemente de ellas.
El estudio de estos aspectos tiene gran importancia pues permite la

formacin de una concepcin cientfica del origen y organizacin de la
materia.
PROPIEDADES
Sus propiedades y capacidad de interaccin y combinacin propician la

aparicin de niveles de organizacin que van desde los mas simples o
inferiores hasta los de mayor complejidad, llegando a formar verdaderos
sistemas biolgicos cualitativamente superiores con caractersticas
estructurales y funcionales propias.
NIVELES DE ORGANIZACION DE LA MATERIA

Los niveles de organizacin de la materia desde los inferiores a los
superiores son:
Nivel subatmico: est constituido por partculas subatmicas como

electrones, protones, neutrones y otras; que al interactuar dan lugar al
nivel superior o atmico.
Nivel atmico: al que se le incorporan otros elementos ms complejos

hasta llegar a conformar las molculas con caractersticas fsicas y
qumicas diferentes que forman parte de otro nivel superior, el molecular.
Nivel molecular: la interaccin a este nivel de agregados moleculares y

su compleja organizacin estructural da lugar a una forma superior de
organizacin surgiendo la materia viva, nos estamos refiriendo al nivel
celular.
Nivel celular: en el que aparece el movimiento biolgico que evoluciona

dando lugar a niveles superiores como:
Tejido.
rgano.
Organismo.
Poblacin.
Comunidad.
Biosfera.
Seguidamente nos referiremos al protoplasma como la forma de

organizarse la materia en el nivel celular.
PROTOPLASMA
El termino protoplasma fue utilizado por primera vez por Purkinje en 1839
para nombrar el contenido de las clulas, ya fueran animales o vegetales;
de ah que por protoplasma se entiende a la materia que constituye a los
seres vivos.
COMPONENTES DEL PROTOPLASMA
La composicin qumica del protoplasma es muy diversa, se destaca la

presencia de compuestos inorgnicos representados por:
El agua que constituye el componente ms abundante en un 70 a 85%.
Minerales como: sulfato, magnesio, fosfatos y calcio, entre otros que

representan el 1%.
Entre los compuestos orgnicos se destacan:
Las protenas en un 10 a 15%.
Los lpidos del 2 al 3%.
Los glcidos en 1%.
PROPIEDADES FISIOLOGICAS DEL PROTOPLASMA
Como materia que constituye a las clulas, al protoplasma le son

inherentes propiedades fisiolgicas como expresin de vida; las cuales
adquieren un mayor o
menor desarrollo dependiendo de la diferenciacin y especializacin de

las clulas.
En la imagen se resumen las mismas, estas son:
Irritabilidad.
Conductibilidad.
Excitabilidad.
Contractilidad.
Respiracin.
Absorcin.
Secrecin.
Excrecin.
Reproduccin.
Crecimiento.
El desarrollo de las propiedades fisiolgicas del protoplasma de las

clulas en su proceso de diferenciacin y especializacin, conllev al
surgimiento de niveles superiores haciendo cada vez ms complejo el
desarrollo biolgico de los organismos, que alcanza su mxima expresin
en el hombre.
DESARROLLO BIOLOGICO HUMANO
El desarrollo biolgico humano constituye un proceso de cambios

cualitativos continuos que comienzan en el momento de la fecundacin y
no cesan hasta la muerte.
El nacimiento constituye un fenmeno decisivo, con el se produce un

cambio de ambiente del organismo y permite dividir el desarrollo en un
periodo prenatal y uno
postnatal; en cada uno de estos periodos se distinguen diferentes etapas

que tienen caractersticas muy singulares.
El periodo postnatal en condiciones normales es el ms extenso, en el se

pueden apreciar etapas muy bien definidas:
La infancia y la etapa de la adolescencia se caracterizan por un

crecimiento rpido con la maduracin de todos los rganos y sistemas.
La adultez es la etapa ms extensa, y en ella se han alcanzado ya el

mximo de capacidad fsica, biolgica e intelectual. El individuo est
completamente preparado para enfrentar los retos de la vida.
En el envejecimiento existe una disminucin de las funciones; sin

embargo la presencia de estos cambios implica tambien un desarrollo.
El conocimiento de estas etapas permite evaluar como se comporta el
desarrollo a lo largo de la vida, y favorece la realizacin de acciones en la
comunidad con un enfoque de prevencin de enfermedades y promocin
de salud.
ETAPAS DEL DESARROLLO PRENATAL HUMANO
El periodo prenatal presenta tres etapas muy bien definidas:
Una etapa pre-embrionaria que se inicia con la fecundacin y se extiende

durante la primera semana.
Una etapa embrionaria que se extiende desde la segunda hasta la octava

semana, y se caracteriza por una rpida diferenciacin de los tejidos,
para dar lugar a los esbozos de los rganos; por tal motivo es un periodo
de gran vulnerabilidad a la
accin de agentes externos nocivos al desarrollo que pueden producir

malformaciones congnitas.
La etapa fetal, que se extiende desde la novena semana hasta el

nacimiento, en la misma contina el desarrollo de los tejidos y rganos
dado por un crecimiento rpido y maduracin de los mismos; lo que
posibilita que la mayora de ellos comiencen a funcionar durante la vida
prenatal.
CARACTERISTICAS GENERALES
En general se puede resumir que el desarrollo ocurre durante toda la

vida, esta regulado genticamente, pero puede ser modificado por
factores ambientales que lo favorecen o entorpecen.
Tiene caractersticas particulares en sus diferentes periodos o etapas y

una velocidad variable de cambios y crecimiento, haciendo que unas
sean ms susceptibles que otras a la aparicin de determinados
problemas de salud como pueden ser:
Las malformaciones congnitas en el periodo embrionario.
La hipertensin arterial en el adulto.

La prdida de capacidades mentales en el adulto mayor.
Por todo lo anterior el desarrollo constituye un componente esencial en el

proceso de salud.
EL CUERPO HUMANO
Como se sabe, un nivel superior de organizacin de la materia es el nivel

de organismo; que en el humano est constituido por un conjunto de
estructuras y rganos que constituyen sistemas que forman el cuerpo.
Para facilitar el estudio del cuerpo humano y poder precisar su

descripcin debemos saber que este se divide en diferentes partes.
Las partes del cuerpo humano son:
Cabeza.
Cuello.
Tronco.
Miembros superiores.
Miembros inferiores.
Cada una de estas partes se sub-dividen en regiones.
REGIONES DE LA CABEZA Y CUELLO
As tenemos en la cabeza: el crneo y la cara.
En el cuello las regiones: anterior, esternocleidomastoidea, laterales y

posterior; esta ultima no se observa en la imagen que se muestra.
REGIONES DEL TRONCO
En el tronco se distinguen las regiones: dorsal, pectoral, abdominal y

perineal; esta ultima no se observa en la imagen que se muestra.
REGIONES DEL MIEMBRO SUPERIOR

Cada miembro superior cuenta con cuatro regiones que se nombran:
deltoidea o del hombro, brazo, antebrazo y mano; destacndose en esta
ultima las regiones: dorsal y palmar.
REGIONES DEL MIEMBRO INFERIOR
Los miembros inferiores tambien presentan cuatro regiones llamadas:

gltea o cadera, muslo, pierna y pie; en el pie se distinguen: el dorso y la
planta.
CAVIDADES CORPORALES
Adems de estas partes, existen cavidades donde se alojan rganos de

importancia.
En la cabeza se encuentra la cavidad craneal que contiene al encfalo.
En el tronco las cavidades: torcica, abdominal y pelviana.
En la cavidad torcica se encuentran algunas vsceras como: el corazn

y los pulmones.
En la cavidad abdominal se distinguen rganos del aparato digestivo

como: el estomago e intestinos; y glndulas como el hgado y el
pncreas, tambien se localizan los riones, los urteres y el bazo.
En la cavidad pelviana se encuentra el recto que pertenece al aparato

digestivo; as como la vejiga urinaria y rganos del sistema urogenital.
Las proporciones de las diferentes partes y cavidades del cuerpo varan

de un individuo a otro, dando lugar a los tipos constitucionales. Aspecto
que por su importancia estudiaremos a continuacin.
TIPOS CONSTITUCIONALES
Al hacer un estudio detallado de los individuos se descubren diferencias

entre ellos, tanto morfolgicas como funcionales; estas diferencias
aportan la base para el estudio de los tipos constitucionales que se
definen como:
Conjunto de caractersticas morfofuncionales determinadas por factores
genticos y ambientales.
Se han descrito diferentes clasificaciones de los tipos constitucionales;

una de las ms utilizadas es la propuesta por Pende que describe tres
tipos:
Longilineos.
Normolineos.
Brevilineos.
Los longilineos tienen crecimiento preferentemente en longitud, son

delgados y con poco desarrollo muscular.
Los brevilineos de crecimiento preponderante en anchura y son de cuello

y extremidades cortas.
Por ultimo los normolineos que tienen caractersticas intermedias y son

los denominados atlticos, ya que presentan un gran desarrollo del
esqueleto y del tejido muscular.
POSICION ANATOMICA
Para describir las caractersticas del cuerpo humano es necesario tener

presente el concepto de posicin anatmica.
La misma considera al cuerpo humano en posicin vertical, de frente al

observador, con la mirada fija en el horizonte, los miembros inferiores
juntos y los superiores colgando a ambos lados del cuerpo con las
palmas orientadas hacia delante.
Este es un aspecto de gran importancia durante la prctica mdica.
En esta imagen se ilustra la posicin anatmica.
Adems de la posicin anatmica es necesario el dominio de los ejes y

planos, ya que ellos determinan los trminos a emplear para facilitar la
comunicacin y comprensin de la literatura medica universal.
EJES Y PLANOS DEL CUERPO
Los ejes son lneas imaginarias que atraviesan el cuerpo y se emplean

para comprender la mecnica articular, al suponer que el cuerpo gira
alrededor de un eje. Estos son tres:
El eje sagital: paralelo al suelo y a la sutura sagital del crneo, orientado

en sentido antero-posterior.
El eje coronal o frontal: paralelo al suelo y a la sutura coronal del

crneo.
El eje vertical: perpendicular al suelo y paralelo a la longitud del cuerpo.
Adems existen ejes oblicuos que presentan direcciones variables e

intermedias a la de los ejes fundamentales.
Los planos son superficies que cortan imaginariamente al cuerpo en un

sentido determinado. Estos son tres y se caracterizan al igual que los
ejes por ser perpendiculares entre si y adoptan nombres relacionados
con alguna estructura; teniendo la particularidad de que cada uno de
ellos divide al cuerpo en dos partes.
El plano sagital: es vertical y paralelo a la sutura sagital del crneo y

dividiendo al cuerpo en dos partes: derecha e izquierda; cuando este
coincide con la lnea media del cuerpo lo divide en dos mitades y se
denomina: plano medio.
El plano coronal o frontal: es vertical y paralelo a la sutura coronal del

crneo dividindolo en dos mitades: anterior y posterior.
El plano horizontal: paralelo al suelo divide al cuerpo en dos partes:

superior e inferior.
TERMINOS GENERALES
El trazado imaginario de los planos y ejes facilitan la definicin de

trminos generales de utilidad para la descripcin de distintas
caractersticas del cuerpo humano. Es importante destacar la relatividad
en el uso de estos trminos segn la posicin del plano de referencia,
particularmente en los miembros.
Los ms importantes son:
Superior o craneal e Inferior o caudal; relativos al plano horizontal.
Anterior o ventral y posterior o dorsal; relativos al plano coronal o

frontal.
TERMINOS RELATIVOS AL PLANO MEDIO
Se utilizan otros trminos al plano medio como son:
Medio: cuando coincide con el plano medio.
Medial: cuando est cercano al plano medio.
Lateral: cuando est alejado medio.
Intermedio: cuando est situado entre los puntos medial y lateral.
TERMINOS RELATIVOS A LOS MIEMBROS
Por ultimo tenemos los trminos relativos a los miembros.
Los trminos proximal y distal se utilizan para designar la mayor o menor

distancia del punto de unin del miembro con el tronco. Por ejemplo: la
articulacin del codo es proximal con respecto a la articulacin de la
mueca, pero al mismo tiempo es distal con respecto al tercio medio del
brazo.
Los trminos ulnar y radial se refieren a las partes medial y lateral del
antebrazo respectivamente; relacionados con los huesos de esa regin.
Los trminos tibial y fibular se corresponden con la parte medial y lateral

de la pierna respectivamente; relacionados con los huesos de esa regin.
Los trminos palmar y plantar se refieren a la palma de la mano y a la

planta del pie respectivamente; ellos no se observan en la imagen.
El trmino dorsal se refiere a las superficies: posterior de la mano y

anterosuperior del pie.
Otros trminos se utilizan para las descripciones de rganos y cavidades,
tales como:
Interno y externo cuando se refiere a las estructuras de las paredes de

rganos huecos o cavidades corporales.
Superficial y profundo cuando se refiere a la localizacin de alguna

estructura en un rgano macizo, o en una parte del cuerpo con respecto
a la superficie del mismo.
Existen otros trminos generales de uso especfico en el desarrollo

prenatal como son:
Ceflico, caudal, rostral, entre otros.
Para continuar con el estudio del tema abordaremos aspectos generales

relacionados con la organizacin morfofuncional de la clula.
CELULA
A principios del siglo IX con los descubrimientos de diversos autores se

defini la teora celular.
TEORIA CELULAR
La cual plantea que:
La clula es la unidad estructural y funcional de los organismos vivos.
Determina las caractersticas morfofuncionales de los mismos.
Se origina a partir de otras clulas y la continuidad se mantiene a travs

de la informacin contenida en el material gentico.
TIPOS CELULARES
En el desarrollo evolutivo de las clulas se destacan dos tipos,

dependiendo fundamentalmente de la presencia o no del ncleo entre
otras caractersticas. Por lo que podemos encontrar a las clulas:
Procariotas: que carecen de ncleo, por lo que el material gentico se
encuentra libre en el citoplasma sin ninguna membrana que lo asle;
adems presentan escasos organitos u orgnulos citoplasmticos.
Ejemplos de ellas son las bacterias.
Eucariotas: que se caracterizan fundamentalmente porque su material

gentico est aislado por membranas, localizado en una estructura que
constituye el ncleo; adems se destacan en ellas la presencia de una
gran variedad de organitos citoplasmticos conformando junto al ncleo
el sistema de endomembranas.
Esta forma caracterstica de organizacin garantiza la compartimentacin

celular, ya que cada componente de la clula ocupa distintos espacios
delimitados por membranas. Estas estructuras realizan distintas
funciones y mantienen una estrecha relacin estructural y funcional.
Por su nivel de complejidad morfofuncional, abordaremos el estudio de

las clulas eucariotas; caractersticas de los organismos pluricelulares.
CELULAS EUCARIOTAS
Existen diferentes tipos y formas celulares como resultado de los

procesos de diferenciacin y especializacin celular, asocindose estas
para formar tejidos, rganos, aparatos y sistemas.
Esto est relacionado entre otros factores con la forma que debe adquirir
una clula teniendo en cuenta el tejido al que pertenece y la funcin que
desempea.
Por tal razn existen clulas con caractersticas y funciones comunes

formando un tejido particular; de igual forma existen otras con estructura
y funcin diferente.
ALGORITMO PARA EL ESTUDIO DE LA CELULA
Para estudiar las caractersticas morfofuncionales de una clula se

sugiere seguir el siguiente orden:
1. Caractersticas generales: donde se debe tener en cuenta: la forma, el

tamao, la disposicin y abundancia o proporcin.
2. Caractersticas de su citoplasma teniendo presente: el aspecto, la
coloracin y los componentes ms desarrollados.
3. Caractersticas de su ncleo, precisando: nmero de ncleos, la forma,

el tamao, coloracin, la posicin y sus componentes.
4. Establecer la relacin estructura-funcin: recordando que la clula por

estar constituida por protoplasma presenta una composicin qumica
similar a este.
COMPONENTES DE LA CELULA
La utilizacin del microscopio electrnico permiti perfeccionar el estudio

de la estructura de las clulas; en ellas se destacan dos componentes
fundamentales: el ncleo y el citoplasma. Cada uno de ellos con
caractersticas particulares pero en estrecha interrelacin, lo que
garantiza las funciones generales y especificas de las clulas.
El ncleo est constituido por cuatro componentes: envoltura, cromatina,

nuclolo y nucleoplasma o matriz nuclear.
Por su parte el citoplasma es la porcin del protoplasma que rodea al

ncleo. Est limitado externamente por la membrana plasmtica, tiene
una apariencia viscosa y en el se llevan a cabo importantes funciones
metablicas y contiene a los organitos y las inclusiones.
Los organitos son estructuras vivientes de las clulas, encargadas de su

funcionamiento y que dependiendo de la presencia o no de membrana
pueden ser: membranosos y no membranosos.
Mientras que las inclusiones son estructuras inertes resultado en muchos

casos de la actividad de la clula. Estas pueden ser: alimentos,
pigmentos o productos tiles y de desechos.
A continuacin abordaremos algunos aspectos generales de estos

componentes citoplasmticos.
En el esquema se observa la disposicin de los componentes en el

citoplasma de la clula, debemos fijarnos que cada uno guarda un
compartimiento.
Los organitos citoplasmticos membranosos son:
Membrana plasmtica.
Retculo endoplsmico liso.
Retculo endoplsmico rugoso.
Complejo de golgi.
Mitocondrias y lisosomas.
Los organitos que no poseen membrana son:
Los ribosomas libres, encargados de la sntesis de protenas para la

clula.
Los centriolos, que juegan un papel importante durante la formacin del

huso mittico durante la divisin celular.
Los microtbulos y microfilamentos que forman parte del citoesqueleto.
MEMBRANA PLASMATICA
En esta imagen se observa un esquema de la organizacin de la

membrana plasmtica, formada por una bicapa lipdica
fundamentalmente fosfolpidos y colesterol, en estrecha relacin con las
protenas, a las que a su vez se unen carbohidratos.
A esta estructura dinmica se le conoce como modelo del mosaico fluido,

por su constante movimiento y recambio.
En esta otra imagen se puede observar al microscopio electrnico la

estructura trilaminar de las membranas plasmticas de dos clulas, este
organito funciona como una barrera protectora que mantiene la integridad
del protoplasma y permite el intercambio de sustancias, energa e
informacin entre el medio interno y externo de la clula.
COMPLEJO DE GOLGI
En esta imagen se observa un esquema del complejo de golgi, en el que

se pueden ver sus sculos aplanados a travs de los cuales van pasando
y modificndose las sustancias en formacin, hasta ser secretadas a
travs de las vesculas de secrecin.
A continuacin se observa una microfotografa al microscopio electrnico;

este organito es el responsable de la condensacin de las protenas, de
aadir azucares, de formar lisosomas y de aportar membranas entre
otras funciones.
RETICULO ENDOPLASMICO
En este esquema se representa la estructura de los retculos

endoplsmicos: liso y rugoso.
Debemos fijarnos que tienen una relacin estructural, siendo uno

continuidad del otro.
Se pueden observan en las membranas del retculo rugoso ribosomas

asociados, dndole el aspecto caracterstico.
En esta microfotografa electrnica se pueden ver los retculos

endoplasmticos: liso y rugoso.
El retculo liso es un sistema de tbulos aplanados que se anastomosan

entre si, carecen de ribosomas asociados a sus membrana y tienen la
funcin de sntesis de lpidos; por lo que abundan en clulas que
secretan estos compuestos. Adems se plantea que participan en la
sntesis de acido clorhdrico,
destoxificacin del organismo y en el almacenamiento de los iones calcio

que intervienen directamente en la contraccin muscular.
Por su parte el retculo endoplasmtico rugoso esta constituido por

cisternas interconectadas en forma de vesculas aplanadas redondeadas
y tbulos que se anastomosan entre si, y unidos a su superficie se
encuentran los ribosomas; tienen la funcin de la sntesis de protenas
para la secrecin.
MITOCONDRIAS
En esta imagen se puede observar a la izquierda un esquema de una

mitocondria, donde se destaca la disposicin de su doble membrana y
las crestas.
Hacia la derecha se observan las mismas estructuras pero al microscopio

electrnico.
Las mitocondrias son las responsables del aporte de ATP mediante el

proceso de la respiracin celular.
INCLUSIONES CITOPLASMATICAS
En esta imagen se puede observar en el citoplasma de las clulas

diferentes tipos de inclusiones.
En un corte de tejido donde se utiliz la tincin del acido peryodico de

Chiift, se observa en el citoplasma de la clula un moteado rojo que se
corresponde con la presencia de los grnulos de glucgeno.
Mientras que en un corte de tejido donde se utilizo la tincin de nitrato de

plata se pueden observar grnulos oscuros de color marrn,
correspondientes a la presencia de lpidos.
En la parte inferior de la imagen se observan como moteado oscuro los

grnulos de cimgeno en una clula secretora de protenas y hacia la
derecha grnulos correspondientes a pigmentos de melanina.
MODELOS CELULARES
Como se puede ver en la imagen, existen diferentes tipos celulares en el

organismo, en dependencia de la funcin que desempean.
A partir de clulas indiferenciadas comienzan a desarrollarse sus

componentes, dando lugar a diferentes modelos celulares que responden
a funciones especificas.
Por ejemplo: existen clulas cuyo aparato de sntesis ha alcanzado gran

desarrollo, permitiendo la sntesis y secrecin de determinadas
sustancias; ya sean protenas, lpidos, glucoprotenas, esteroides, entre
otras.
Por su parte las clulas especializadas en la absorcin, desarrollan

estructuras en su membrana plasmtica que facilitan cumplir con su
funcin; presentan adems organitos que participan en el proceso.
Las clulas fagocticas por su parte tendrn gran desarrollo de los

lisosomas entre otros componentes; ya que estos son los encargados de
la digestin celular.
A continuacin se observa la interrelacin de estos componentes en una

clula secretora de protenas.
SECRECION DE PROTEINAS
En la imagen se representa de forma esquemtica la interrelacin

morfofuncional que se establece entre el retculo endoplsmico rugoso, el
aparato de golgi y la membrana plasmtica durante el proceso de
secrecin de protenas.
Generalmente estas clulas tienen forma cilndrica, se observa el

desarrollo de estos componentes en el citoplasma de la clula y el
trayecto de la secrecin desde las cisternas del retculo a travs de las
vesculas de transferencia hasta incorporarse a los sculos de golgi para
terminar de formarse.
Luego a travs de la cara madura o secretora del aparato de golgi,

emergen vesculas de secrecin con el producto en su interior.
Posteriormente la membrana plasmtica desempea un papel

fundamental, permitiendo la secrecin de la protena elaborada. En este
proceso las mitocondrias aportan la energa y el ncleo dirige y controla
la sntesis a travs de la codificacin previa de la protena a formarse.
CONCLUSIONES
La Morfofisiologia humana tiene como objeto de estudio al organismo

humano, emplea los diferentes mtodos de estudio de cada una de las
ciencias que la integran y constituye el fundamento cientfico de las

ciencias mdicas.
El organismo humano como un todo es el resultado de la integracin de

diferentes niveles de organizacin y desarrollo de la materia viva, en
estrecha relacin con el medio ambiente.
El desarrollo del organismo humano ocurre durante toda la vida, esta

regulado genticamente, puede ser modificado por factores ambientales,
tiene caractersticas particulares en sus diferentes periodos o etapas y
constituye un componente esencial en el proceso de salud.
Los tipos constitucionales expresan las diferencias individuales

existentes entre las proporciones de las partes del cuerpo y tienen una
alta significacin prctica para el desempeo de la profesin mdica.
La posicin anatmica, los planos y ejes del cuerpo humano constituyen

el fundamento de la terminologa cientfica de la Morfofisiologia como
base para la comprensin y comunicacin en la prctica medica.
Todo organismo vivo tiene como unidad estructural y funcional a la

clula, constituida por dos componentes bsicos, el ncleo y el
citoplasma, los que tienen funciones especficas expresadas por el nivel
de diferenciacin e interrelacin alcanzado.
Las caractersticas morfofuncionales de los diferentes tipos celulares del

organismo, dependen del proceso de diferenciacin y especializacin
alcanzado por sus componentes.
La similitud en la estructura y funcin de determinadas clulas del

organismo, justifica la existencia de diferentes modelos celulares.
MTODOS DE ESTUDIO EN HISTOLOGIA Msc. Beln Z. Iglesias Ramrez. Profesora

Auxiliar de Histologa. ISCM Habana Dra. CM Teresita Rodrguez Obaya. Investigador
titular. CIM Para estudiar la estructura de las clulas, tejidos y rganos que constituyen los
componentes del cuerpo humano y organismos pluricelulares, el hombre ha desarrollado
diversos mtodos y tcnicas, y ha ido perfeccionando los instrumentos necesarios para
conocer con ms profundidad la morfologa y funcin de los diferentes niveles de
organizacin de la materia. Es pues importante conocer, antes de estudiar la estructura y la
composicin de las clulas y los tejidos, algunos mtodos, tcnicas e instrumentos de los
que se dispone para llegar a estos conocimientos. OBSERVACIN MICROSCOPICA A
finales del siglo XVI los hermanos Hans y Zacaras Janssen, construyeron el primer
microscopio compuesto. Galileo, que es conocido por sus estudios de Astronoma, fue uno
de los primeros investigadores que utiliz el microscopio para fines cientficos. El empleo
del microscopio origin nuevos trminos, tales como el de clula (empleado por Robert
Hooke, 1635-1703) y las primeras descripciones y grabados de organismos microscpicos
(como los realizados por Leeuwenhoeck, 1632-1723); este ltimo emple lentes
compuestas en la observacin de protozoarios y otros organismos unicelulares. El ojo
humano es capaz de discriminar dos puntos que se encuentren separados por una distancia
mayor de 0.1 mm solamente. Esto constituye un obstculo para el estudio de las estructuras
internas de la clula y es por esto que es necesario el empleo de equipos que aumenten la
resolucin. La posibilidad de un sistema ptico de distinguir por separado (resolver) dos
puntos muy cercanos, se denomina poder de resolucin. El poder de resolucin en los
microscopios, est en relacin inversa con la longitud de onda de la radiacin empleada en
la fuente de iluminacin. La resolucin del microscopio ptico aumenta y alcanza su lmite
cuando se utiliza como fuente de iluminacin la luz ultravioleta, producto de su pequea
longitud de onda. El microscopio ptico fue perfeccionndose hasta llegar a los modelos
actuales, que pueden alcanzar hasta 0.2 m de resolucin. 2 A mediados del siglo XX, se
invent un tipo de microscopio que utiliza como fuente de iluminacin los electrones. Con
este equipo se puede realizar un estudio ms detallado de la clula y los elementos
subcelulares, moleculares y atmicos. El microscopio electrnico al emplear una fuente de
emisin de electrones, de una longitud de onda de 0.005 nm, puede alcanzar valores
resolutivos mucho mayores que el alcanzado por los microscopios pticos. El lmite de
poder de resolucin del microscopio electrnico es de 0.2 nm. Actualmente se utilizan las
siguientes unidades de medidas m - micrmetro (antes, micra) nm - nanmetro (antes,
milimicra) 0.1 nm = 1 (antes, Amstrong) TIPOS DE MICROSCOPIOS Existen diversos
tipos de microscopios, los cuales describiremos brevemente sealando sus caractersticas
fundamentales. MICROSCOPIO PTICO DE CAMPO BRILLANTE Este tipo de
microscopio utiliza como fuente de iluminacin la luz visible. Cuando la muestra a
observar es transparente a la luz empleada, el haz luminoso la atraviesa iluminando el
campo que se quiere observar. Aqu se emplea un sistema de iluminacin de luz
transmitida. Este tipo de microscopio, se encuentra formado por un sistema de iluminacin
compuesto por una fuente de luz que puede ser emitida por una lmpara incandescente, en
la base del equipo, o proyectada por un espejo (figura 2.1), Este haz de luz atraviesa una
lente condensadora que lo concentra sobre la muestra, para obtener una iluminacin ptima
de la misma. Otra parte importante del equipo es el sistema ptico, el cual esta constituido
por varias lentes las que estn diseadas y construidas para evitar o corregir los defectos y
las aberraciones que pueden producirse durante la proyeccin de la imagen. La lente
objetivo recibe este nombre por ser la que se encuentra ms cerca del objeto a examinar.
Esta lente forma una imagen primaria ampliada del objeto, en el plano focal de una segunda
lente compuesta, la lente ocular, que recibe este nombre por estar cerca del ojo del
observador. La lente ocular amplia la imagen primaria y forma una final ampliada en la
retina del observador. Adems del sistema de iluminacin y del sistema ptico, en el
microscopio existe un sistema mecnico que est constituido por aquellas partes que
sostienen los sistemas de 3 lentes y de la muestra, y que adems sirve para el enfoque y el
movimiento de la muestra bajo el objetivo. Este tipo de microscopio puede trabajar
acoplado a distintos instrumentos, uno de ellos, el micromanipulador, que permite mediante
movimientos en los distintos planos del espacio, y de una forma muy precisa, hacer
disecciones sobre tejidos y clulas, introducir micropipetas y microelectrodos para
suministrar sustancias o medir potenciales elctricos en las clulas. El esquema bsico del
microscopio de campo brillante, sirve para el estudio de los diferentes microscopios
pticos, los que al presentar un aditamento, dispositivo o accesorio adicional permitir una
observacin ms especializada; por ejemplo, el invertido, el de polarizacin, el de
fluorescencia, el de contraste de fase, etc. Debido a esto es importante estudiar
detenidamente las partes de que consta un microscopio ptico de campo brillante, para as
comprender mejor el funcionamiento de los microscopios pticos ms especializados que
sern descritos posteriormente (figura 2.1) Fig. 2.1 Se observa un microscopio de campo
brillante con todos sus componentes. Sistema de Lentes 4 MICROSCOPIO PTICO DE
CONTRASTE DE FASE. Cuando una muestra, por ejemplo una clula, debe ser observada
viva, no se puede procesar por ninguna de las tcnicas que sern descritas ms adelante
(inclusin, corte y coloracin) y, por tanto, al ser vistas en un microscopio de campo
brillante, seran pocos los detalles observables de la muestra. Para una visualizacin con
suficiente contraste, se utiliza un microscopio especial que tiene un dispositivo que
transforma las diferencias de fase de la longitud de onda de la luz empleada, en diferencias
de amplitud. La luz, al atravesar una muestra, es desfasada normalmente con respecto a la
luz que atraviesa el medio donde se encuentra dicha muestra (agua, aire, aceite. etc.). Este
desfasaje es pequeo y el ojo humano no es capaz de distinguirlo; ahora bien, mediante
dispositivos que existen en los llamados microscopios de contraste de fase, la diferencia de
fase se aumenta lo suficiente como para que el ojo lo distinga, pudindose apreciar distintas
intensidades de luz que van desde la oscuridad hasta el brillo intenso. Los diferentes tonos
intermedios estn determinados por las diferencias de espesor en la muestra.
MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA Y DE FLUORESCENCIA La luz
ultravioleta, que no es visible al ojo humano, pero que si se puede utilizar en
microfotografa, tiene una longitud de onda muy corta (300 m) y es absorbida por algunos
componentes celulares como los cidos nucleicos, o por determinadas sustancias que se le
pueden suministrar a las clulas. El microscopio de luz ultravioleta puede utilizarse para la
toma de microfotografas usando una pelcula sensible a esta radiacin, o mediante la
visualizacin de las imgenes captadas por una cmara de televisin sensible a la luz
ultravioleta. La luz ultravioleta, por ser una radiacin de alta energa, se utiliza en las
tcnicas de fluorescencia que consisten en la excitacin de los electrones de sustancias
presentes en las clulas o tejidos, o que pueden ser suministrados previamente. Para esto se
utilizan colorantes especiales o fluorocromos, los cuales, dependiendo del tipo empleado y
de la energa de excitacin, emitirn con una longitud de onda que mediante filtros puede
ser observado por ojo humano. Un ejemplo de esta tcnica, consiste en suministrar a clulas
vivas en cultivo o a animales de investigacin vivos, uno de estos reactivos y examinar
despus al microscopio de fluorescencia el sitio donde este material se acumula, por
ejemplo, usando naranja acridina como fluorocromo se puede demostrar la localizacin de
ADN, al cual se le 5 observa una fluorescencia de color verde naranja en el ncleo de las
clulas que han captado dicho colorante. MICROSCOPIO ELECTRNICO DE
TRANSMISIN. Como ya tratamos, los electrones al tener una longitud de onda muy
pequea (0.005 nm) permiten a este instrumento un alto poder de resolucin. El
microscopio electrnico se asemeja en algunos aspectos al microscopio ptico, ya que
consta de: a) sistema de iluminacin; b) sistema de manipulacin de la muestra; c) sistema
de formacin de la imagen; d) sistema de proyeccin de la imagen La fuente de iluminacin
es un fino filamento de tungsteno (ctodo) que al ser calentado por el paso de una corriente
emite electrones, los cuales son desprendidos a gran velocidad al establecerse una
diferencia de potencial elctrico entre el ctodo y el nodo (este se encuentra cerca del
primero), pasando a travs de este ltimo por una apertura hacia una columna metlica
hueca, donde existe un alto vaco para evitar que los electrones que viajan a travs de ella
sean difractados por molculas extraas. Una vez acelerados los electrones por el nodo, a
traviesan un campo magntico producido por la condensadora, la cual concentrarn los
electrones en un haz fino y lo dirigirn hacia la muestra. Esta ltima se introduce dentro de
la columna por un dispositivo especial que expone el objeto a estudiar al haz de electrones
el cual constituye el sistema de manipulacin de la muestra. La muestra se contrasta con
sustancias que contienen metales pesados de alta densidad electrnica en sus tomos, los
cuales presentan diversas afinidades por determinados componentes celulares; una vez que
el haz de electrones atraviesa la muestra, los mismos chocan con la nube electrnica de
estos compuestos que se han depositado sobre los componentes celulares lo que produce un
retardo y dispersin de la trayectoria de alguno de los electrones, mientras que otros
continuarn su trayecto hasta llegar a la pantalla fluorescente, donde se forma la imagen. El
dispositivo con la muestra puede moverse en distintas direcciones en un plano
perpendicular al eje de la columna o puede ser ligeramente inclinado para algunos estudios
en que se requiere este movimiento. Luego de atravesar la muestra, los electrones pasan
inmediatamente a travs de la lente objetivo, donde se forma una imagen primaria
invertida, la cual es rectificada por una lente 6 intermedia y proyectada hacia una pantalla
fluorescente, formando la imagen final aumentada al chocar los electrones y producirse una
emisin de ondas en el rango de la luz visible. Por debajo de esta pantalla existe una cmara
fotogrfica donde se registran las imgenes, una vez retirada la pantalla fluorescente.
MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO. Existe otro tipo de microscopio
electrnico que recibe el nombre de microscopio electrnico de barrido y que se basa en el
estudio de los electrones reflejados por una superficie. Un dispositivo integra la imagen, la
cual se observa en un sistema de televisin; mediante este equipo es posible estudiar la
estructura tridimensional de las superficies; por ejemplo, los cilios de una clula, la forma
bicncava de los hemates, etctera. Este tipo de microscopio electrnico, dado su poder de
resolucin (alrededor de 20 nm o ms), permite el estudio detallado de estructuras cuyas
dimensiones se encuentran entre los lmites de resolucin del microscopio ptico (0.2 m)
y el microscopio electrnico de transmisin que puede alcanzar de 0.3-0.1 nm TCNICAS
DE PREPARACIN DE MUESTRAS PARA OBSERVARLAS AL MICROSCOPIO. Al
observar una estructura al microscopio ptico o al electrnico, la luz o los electrones
atraviesan la muestra, dando lugar a la formacin de imgenes que son ampliadas por las
lentes del microscopio. Para esto es necesario que los objetos examinados sean lo
suficientemente delgados, para que la luz o los electrones los atraviesen (figura 2.4). En el
caso de la microscopa ptica las muestras deben tener un grosor de 5-8 m
aproximadamente, y para microscopa electrnica, valores entre 20 y 40 nm. Es necesario,
por tanto, cortar el material que ha de ser estudiado en "lascas" muy finas. La preparacin
del material biolgico muerto, para su estudio al microscopio ptico o al electrnico, consta
de cuatro pasos fundamentales. 1ro. La fijacin. 2do. La inclusin. 3ro. El corte. 4to. La
coloracin. Mediante la fijacin se logra detener los procesos de destruccin, celular o
hstica, que se producen por las enzimas contenidas en ellos, una vez muerto el organismo o
al separarla de l. Este proceso de destruccin celular recibe el nombre de autolisis. 7 Por
otra parte, la estructura se conservan lo ms natural posible, ya que las sustancias fijadoras
actan sobre los componentes celulares deteniendo la autolisis mediante reacciones
qumicas con reactivos como el formol, el glutaraldehido, el tetraxido de osmio, etc., o
pueden actuar coagulando las protenas cuando se utiliza el calor. A continuacin se realiza
la inclusin del tejido, para que el material tenga la suficiente firmeza al cortarse. El agua
que contiene el tejido se sustituye por una sustancia que le da rigidez y evita que se
deforme. Esto se logra introduciendo el material a procesar en alcoholes de gradacin
creciente, lo que ir sustituyendo el agua por el alcohol. Despus el alcohol es sustituido
por un solvente orgnico como es el xilol, la acetona, etc., para de esta forma terminar
incluyendo el tejido en una sustancia que es miscible en este solvente orgnico. Estas
sustancias son la parafina, que se utiliza en microscopa ptica, y las resinas sintticas, que
se utilizan en microscopa electrnica. Una vez incluido el material se realiza el corte
utilizando equipos especiales, los cuales presentan una cuchilla que corta "lascas" del
material. Para microscopa ptica se utilizan cuchillas de acero y el equipo recibe el nombre
de micrtomo.(Fig. 2.2 ). En microscopa electrnica se utilizan los ultramicrtomos, que
emplean cuchillas de vidrio o diamante. Para el estudiante que comienza es muy difcil,
imaginar los planos de corte de una estructura determinada. En la figura 2.3 se representan
los cortes dados a un huevo y a una estructura tubular, comparndolos con la imagen que de
estos se observa al verlos aislados. 8 Los cortes para su observacin al microscopio ptico,
se montan en una lmina de vidrio llamada portaobjetos. Para microscopa electrnica se
montan en unas rejillas metlicas pequeas que presentan perforaciones, las cuales
permiten el paso del haz electrnico. Para el estudio de cortes al microscopio ptico de
campo brillante es necesario colorear previamente la muestra con diferentes compuestos
qumicos (colorantes), que tienen la capacidad de reaccionar con los diversos componentes
de las estructuras celulares. La posibilidad de observar una coloracin dada en una
estructura se debe a que esta se comporta como un filtro de color, dejando pasar solamente
la luz de determinada longitud de onda. Es importante para el estudiante la comprensin de
algunos conceptos relacionados con la coloracin. Los colorantes que corrientemente se
emplean para la observacin de lminas histolgicas, son sales neutras que presentan
radicales cidos o bsicos, es decir, colorantes cidos y bsicos. Una coloracin de uso
corriente en histologa es la hematoxilina y eosina (H/E) que emplea ambos tipos de
colorantes. Con esta coloracin se observa que el ncleo se tie con el colorante bsico
(azul), y el citoplasma se colorea con el colorante cido (rosado). El ncleo, al tener
afinidad por el colorante bsico (el ADN capta el colorante bsico), es basfilo y la
propiedad que manifiesta esa estructura se denomina basofilia. Por su parte, el citoplasma,
excepto en clulas secretoras de protenas, es generalmente acidfilo, es decir, tiene
afinidad con el colorante cido eosina. La propiedad de reaccionar con los colorantes
cidos, es la acidofilia. 9 Fig. 2.4 En la figura se muestra un esquema de una clula
eucariota coloreada con Hematoxilina/Eosina. El ncleo se aprecia de color azuloso
(basfilo) y el citoplasma se observa rosado (acidfilo). No obstante se observa basofilia
localizada en el citoplasma que se corresponde con el Retculo endoplasmtico rugoso. La
basofilia citoplasmtica se debe a la presencia de ribosomas asociados al Retculo. Fig. 2.5
Se observan un frotis de sangre de rana, a 40x. Cada clula se corresponde con un
eritrocito, en esta especie los eritrocitos son nucleados. Se aprecia el ncleo oscuro
(basfilo) y el citoplasma acidfilo (rosado) Otro grupo de colorantes, los bsicos de
anilina, incluyen el azul de toluidina, el azul A, el azul de metileno. Se emplean para
identificar los mucopolisacridos. Al colorearse las estructuras, lo hacen de un color
distinto al del colorante original. Esa propiedad se denomina metacromasia. Los colorantes
bsicos de anilina son el azul brillante, el rojo neutro y el verde Janus. 10 Las tcnicas de
tincin incluyen tambin la utilizacin de varios colorantes. Ejemplo de ellos son los
mtodos tricrmicos como el Mallory, el Mallory-Azan y el mtodo de Masson utilizados
para demostrar las fibras del tejido conjuntivo, etc. Otra tcnica de coloracin muy
empleada es la tincin con sales de plata, que tie de negro o carmelita oscuro las
estructuras celulares, estas se denominan por la afinidad con las sales de platas argirfilas.
Por otra parte, el fenmeno fundamental que permite la visualizacin de las estructuras al
microscopio electrnico, esta dado por la dispersin electrnica que provocan los elementos
qumicos que componen las estructuras de la muestra. Estos elementos tienen por lo general
bajo peso atmico (C, O, N, H, etc.), por lo que se hace necesario asociar a estas
estructuras, compuestos que contengan metales pesados de mayor peso atmico, por
ejemplo el tetraxido de osmio y las sales de uranio, que reaccionan con zonas especficas
de la muestra, provocando una mayor dispersin y, por tanto, un contraste entre las
diferentes zonas. La imagen que se observa en la pantalla fluorescente del microscopio
electrnico est formada por los electrones que atraviesan la preparacin sin una gran
dispersin. Los diferentes tonos estn determinados por la llegada o no de ellos, donde las
zonas brillantes corresponden, al lugar en el que un mayor nmero de electrones chocan
con la pantalla fluorescente r TCNICA DE CONGELACIN FRACTURA. Mediante
esta tcnica es posible estudiar al M/E estructuras celulares superficiales o puestas al
descubierto por medio de la fractura de una muestra congelada a muy bajas temperaturas,
sin ningn tipo de procesamiento qumico que altere la ultraestructura de la misma. La
muestra se congela en nitrgeno lquidos (-196 C) y se monta en un equipo donde hay un
dispositivo especial dentro de una campana, en la cual se hace un alto vaco. Mediante una
cuchilla se produce un corte que provoca una lnea de fractura en la muestra, quedando
expuesta la superficie donde se produjo el corte. Esta superficie pierde agua por
sublimacin y posteriormente se le evaporan carbn y metales pesados desde diferentes
ngulos, hasta cubrirla en su totalidad, logrando de esta manera, una rplica o mascarilla de
la misma. Por un procedimiento donde se elimina el material biolgico, la replica se separa
de la muestra y se examina al M/E, en ella se pueden apreciar las caractersticas de las
estructuras que quedaron impresas en la rplica 11 TCNICA CITOQUMICAS E
HISTOQUMICAS. Las clulas y los tejidos estn constituidas por protenas, carbohidratos
y otros componentes, los cuales se encuentran formando parte de las estructura de los
mismos. Estas sustancias son qumicamente activas, es decir, que en determinadas
condiciones es posible hacerlas reaccionar con otros compuestos. Esta capacidad de
reaccin es el principio en que se basan las tcnicas citoqumicas e histoqumicas para la
demostracin, en las clulas y en los tejidos, de un compuesto o sustancia, o para la
determinar la actividad de una enzima, o complejos enzimticos celulares e hsticos. El
producto de estas reacciones son compuestos coloreados visibles al microscopio ptico, o
de alta densidad para su visualizacin al microscopio electrnico; por ejemplo, la
demostracin de lpidos acumulados intracelularmente en algunas patologas, o la
demostracin de lpidos que forman parte de estructuras celulares, se puede llevar a efecto
mediante diversas tcnicas con substancias que reaccionan con las grasas; uno de estos es el
tetraxido de osmio, que reacciona con los lpidos no saturados, y da un compuesto de
color negro que puede distinguirse tanto al microscopio ptico como al microscopio
electrnico debido a su alta densidad. En otras ocasiones, es posible, mediante esta tcnica,
demostrar la presencia o ausencia de un orgnulo celular. Las clulas objeto de estudio se
ponen en contacto con sustratos especficos que reaccionarn con los componentes
qumicos de un orgnulo dado, as dando coloracin al M/O. Estas tcnicas brindan una
informacin de la composicin qumica celular, as como de sus elementos estructurales y
su localizacin. TCNICA INMUNOCITOQUMICA E INMUNOHISTOQUMICA.
Determinadas clulas de organismos superiores tienen la capacidad de responder ante
sustancias extraas, antgenos, sintetizando otros compuestos llamados anticuerpos. La
tcnica inmunocitoqumica se basa en el reconocimiento del antgeno por un anticuerpo que
previamente se ha conjugado con un fluorocromo, una enzima o un coloide de un metal
pesado (por ejemplo el oro). Al conjugarse con estos compuestos, los anticuerpos pueden
reconocer en el tejido o en la clula, los componentes antignicos contra los cual fueron
desarrollados, poniendo as de manifiesto la localizacin o presencia de aquellas estructuras
objetos del estudio, mediante 12 reacciones qumicas o a travs de microscopios
especializados (microscopios de fluorescencia y electrnico). Si se emplea un microscopio
de fluorescencia, el marcador ser un fluorocromos, los cuales emiten fluorescencia al ser
excitados por la luz ultravioleta; si la reaccin antgeno-anticuerpo se evidencia mediante
una enzima se hace necesario el empleo del sustrato de la misma, adems de una sustancia
que proporcione un color determinado o un precipitado que pueda ser distinguido en un
microscopio ptico de campo brillante o con una tcnica adecuada al microscopio
electrnico. TCNICAS DE FRACCIONAMIENTO CELULAR. Cuando se requieren
separar los componentes intracelulares (organitos), la tcnica de eleccin es la
centrifugacin o la ultracentrifugacin en un medio isotnico. Para esto es necesario
romper previamente las clulas mediante procedimientos mecnicos (en un
homogeneizador con mbolo de vidrio o tefln), con la consiguiente liberacin al medio de
sus componentes. En la centrfuga las partculas de distinta densidad, forma y tamao,
sedimentan a diferentes velocidades y tiempo. De este modo se obtienen distintas porciones
o fracciones celulares. La unidad que define la velocidad de sedimentacin de una partcula
en un campo gravitacional, se denomina unidad Svedverg, la cual relaciona la velocidad
angular del rotor de la centrfuga con la distancia de la partcula al eje del rotor. Esta unidad
es una constante para cada partcula y generalmente se describe como una unidad S.
Aunque con esta tcnica se obtienen fracciones celulares bastante puras, no es posible
evitar la contaminacin de una determinada fraccin con partes de otra. Como se plante
anteriormente, el comportamiento de las diferentes partes de la clula en el campo
centrifugacional, est determinado por varios parmetros que pueden coincidir en organitos
diferentes; por ejemplo, una mitocondria pequea puede tener similar forma, talla y
densidad que un lisosoma y, por tanto, se obtiene una fraccin mitocondrial contaminada
por lisosomas. Este hecho es necesario tenerlo en cuenta cuando se est estudiando el
contenido enzimtico de determinada fraccin, ya que se pueden falsear los resultados
(figura 2.10). TCNICA DE CULTIVO DE TEJIDOS. El mtodo consiste en cultivar
clulas o tejidos en un medio nutritivo. En estos cultivos se realizan estudios sobre distintos
procesos, tales como la divisin, el crecimiento, la diferenciacin celular y otros. Estas
clulas de cultivo provienen de rganos o tejidos animales o vegetales, las cuales,
mantenindolas en un medio nutritivo adecuado, y con temperatura, pH y otros 13
requerimientos especiales, pueden desarrollar muchas de las funciones metablicas que
realizaban cuando formaban parte de los tejidos. Esta tcnica es muy til para el estudio de
los virus, utilizando a las clulas de cultivo como hospederas de ellos. La tcnica en
cuestin tambin se utiliza en el estudio de clulas cancerosas y su comportamiento en el
desarrollo de tumores. En general, las clulas de cultivo sirven como material de
experimentacin sobre el cual se pueden hacer diversos estudios, empleando todas las
tcnicas descritas. Como hemos estudiado, son diversos los mtodos y tcnicas empleados;
no obstante, con el desarrollo de las ciencias irn surgiendo nuevas tcnicas que permitan a
los cientficos un conocimiento cada vez ms profundo de las clulas y su funcionamiento.
Es importante tener en cuenta que cada mtodo y tcnica tiene sus limitaciones y que solo
haciendo un uso racional de ellas, se puede lograr un conocimiento cada vez ms completo.
METODOS DE ESTUDIO DE LA MORFOLOGIA CELULAR
1. Estudio de las clulas vivas: Mtodo in vivo: se realiza a organismos o clulas vivas
en su estado natural incluso orgnulos celulares. Se utilizan colorantes llamados colorantes
vitales, estos no causan dao al organismo o clula durante un tiempo corto, a largo plazo
son txicos y mortales.
Mtodo in Vitro: estudia al organismo vivo pero colocado en condiciones artificiales. Se
realiza en clulas aisladas y fciles de separar. Estas clulas se colocan sobre un sustrato
adecuado que se llama medio de cultivo en el cual se mantienen con vida mientras dura el
estudio conocido como cultivo celular.
2. Estudio de celulas muertas
A) FIJACIN: cuando el animal muere es necesario detener sus procesos vitales antes de
una autolisis de sus materiales. Este proceso es conocido como fijacin. Conserva las
clulas y tejidos en un estado lo mas parecido posible en morfologa y composicin qumica
al estado vivo.
Modo de actuacin:
1. Se insolubilizan las protenas
2. Evita autolisis de los constituyentes de las clulas debido a sus propias enzimas
desprendidas por los lisosomas de las clulas.
3. Protege a las clulas del ataque bacteriano.
4. el tejido para posteriores tratamientos como la tincin, el corte
Fijacin fsica:
Por calor: aplicamos calor de manera que se produce la coagulacin de las protenas. No es
buena ya que las clulas se destruyen.
Por fro: se congela el tejido con dixido de carbono o N liquido. Es mejor que la anterior
pero se pueden formar cristales.
Fijacin qumica: (por medio de sustancias qumicas disueltas)
1. Un solo liquido fijador:

Microscopia OPTICA:
Formaldehdo: produce la reticulacin de protenas
Ac. Actico: cambia el estado coloidal de las protenas.
Ac. Prico y dicromato potasico: actan formando sales.
Alcoholes etlico y metlico: producen deshidratacin.
Microscopa ELECTRONICA:
Glutaraldehido: reticulacin de protenas
Tetraoxido de Osmio: reticulacin de protenas.
2. Mezclas fijadoras:
Microscopia OPTICA: Bouin: formado por una mezcla de formaldehdo, cido actico y cido
prico.
Microscopa ELECTRONICA: Se utiliza glutaraldehido mezclado con paraformaldehido.
Tipos de fijacin qumica:

Perfusin: se coloca el fijador en una jeringuilla inyectndoselo al animal en el torrente
sanguneo de manera que el fijador se distribuye por todo su organismo. Una vez fijado
podemos abrirlo para obtener nuestro rgano.
Inmersin: se mete el rgano en un recipiente con fijador. Esta tcnica depende del
tamao de la muestra el volumen del fijador y todo esto influir en el tiempo de fijacin.
La fijacin tb depende de la velocidad de penetracin del fijador (tetraxido de osmio lento,
formaldehdo rapido). El tejido debe sacarse del fijador ya que el fijador puede estropearlo.
Despus de sacar el tejido realizaremos la inclusin.
B) INCLUSIN: consiste en colocar el tejido fijado en una sustancia que lo conserve y le de
consistencia y volumen para poder cortarlo (en secciones finas y delgadas).
Medios de inclusin:
Microscopia OPTICA: Utilizaremos parafina o paraplast que es un medio de inclusin no
hidrosoluble.
Microscopa ELECTRONICA: Utilizaremos resinas epoxi como el epn, araldita y metacrilato
o gelatinas y agar que son medios hidrosolubles.
Etapas de inclusin: (deshidratacin, aclaramiento, y realizacin del bloque o inclusin)
Microscopia OPTICA, INCLUSIN EN PARAFINA:

Deshidratacin: consiste en quitarle el agua al tejido ya que la parafina es no hidrosoluble.
Para ello lavamos en agua el fijador. Se realizara con alcoholes de pureza ascendente hasta
llegar a alcohol puro que no es soluble en parafina.
Aclaramiento: se sustituye este alcohol por un lquido intermediario normalmente el
hidrocarburo bencnico (silol, benceno, tolueno).
Impregnacin: el tejido se coloca en parafina liquido, esta parafina es liquida a 60 grados
(a t ambiente es slida). El tejido se impregna de parafina sustituyndola por el silol.
Inclusin: se saca el tejido de la parafina y lo ponemos en el fondo de un molde metlico y
lo rellenamos de parafina liquida colocndolo a t ambiente de manera que la parafina se
solidifica quedando el bloque realizado y preparado para el corte.
Microscopa ELECTRONICA, INCLUSIN:

Deshidratacin: se realiza con alcoholes de concentraciones crecientes al igual que con el
M.O. A veces se pueden utilizar acetonas.
Aclaramiento: se utiliza un hidrocarburo bencenico en este caso el oxido de propileno.
Impregnacin: se saca el tejido del oxido de propileno y se mete en un bote con la resina
epoxi que a t ambiente es liquida y el tejido se impregna.
Confeccin del bloque o inclusin: no se utilizan moldes metlicos sino las cpsulas de
gelatina de los medicamentos. El tejido se saca de la resina y se mete en el fondo de la
cpsula de gelatina. Seguidamente se introduce a 60 grados para que la resina epoxi se
solidifique.
Una vez tenemos el bloque realizado procedemos a realizar el corte.

C) CORTE:
Microscopia OPTICA: el bloque hay que cortarlo en pequeas secciones finas. Estas se
cortan en un micrtomo (que tiene una cuchilla metlica) donde se realizan secciones de un
grosor de 3 a 5 micras. Las secciones obtenidas se colocan encima de un cristal alargado
llamado porta. Una vez en el porta podemos teir la muestra. Para tejidos lquidos
debemos realizar los frotis o extensin: se coloca encima del porta una gota de sangre y
encima otro porta formando un ngulo perpendicular. Este porta se desplaza arrastrando la
gota y formando en el otro porta una extensin de sangre.
Microscopa ELECTRONICA: los bloques para esta microscopa se colocan en el ultra
micrtomo (que tiene cuchillas de diamante y vidrio) obteniendo as secciones muy finas
llamadas ultrafinas de un espesor entre 200 y 500 manmetros. Estas secciones se recogen
en unas estructuras redondas pequeas que son las rejillas. Estas rejillas (de metal, +
frecuente el cobre) con los trozos o ultrafinas pegados se contrastan.
D) TINCIN O CONTRASTE
M. OPTICO (tincin): antes de empezar la tincin hay que quitar la parafina del tejido ya
que esta parafina no es hidrosoluble. As que hay que introducir el porta en xileno quitando
la parafina, llamado desparafinar. A continuacin se hidrata con alcoholes de concentracin
decreciente desde xileno pasando por alcoholes hasta llegar a agua. Ya esta el tejido
preparado para ser coloreado con hematoxilina y eosina pasndolos a agua para lavar el
colorante. Debemos sellar el tejido para quitarle el agua y dejarlo conservado (EUKIT,
DPX). Para esto se utilizan blsamos que no son solubles en agua a si que debemos
deshidratar el tejido y luego aclarar en xileno que si es soluble en los blsamos. Echamos
blsamo y colocamos encima otro cristal mas pequeo llamado cubre. Con esta tincin las
estructuras biolgicas son resaltadas mediante colorantes capaces de fijarse selectivamente
sobre ellos segn su afinidad especifica, relacionada con su naturaleza qumica. Existen
varios tipos de tinciones:
Tinciones vitales: teir clulas vivas.
De rutina: la tincin de hematoxilina y eosina. Mediante esta tincin se puede demostrar la
relacin entre clulas tejidos y orgnulos.
Especiales: se tie una estructura en particular de la clula. (Ej. Tcnicas histoqumicas).
Clasificacin de colorantes:
Segn su origen:
Naturales: tomados del medio natural
Artificiales: fabricados
Segn su composicin:
cidos: eosina: tien elementos bsicos como citoplasma de un color rosa anaranjado.
Bsicos: hematoxilina: tien elementos cidos como el ncleo de color violeta.

Eosina y hematoxilina se emplean juntas al realizar una tincin para ver la clula entera.
Metacromticos: tincin diferente a la del colorante utilizado, esta propiedad se llama

metacromasia y el colorante cambia su color cuando acta sobre ciertos componentes
celulares.
Azul de toluidina (ms importante) es azul pero cuando se pone en contacto con sustancias
o elementos metacromticos se vuelve violeta. Tie molculas cargadas negativamente,
molculas de alto peso molecular y esteres de sulfato (glucosalinoglicanos).
Mecanismos de coloracin:
1. Disolucin: se emplean colorantes liposolubles adems el tejido se fija por congelacin.
Sirve para teir lpidos o grasas. Posee la propiedad de que son ms solubles en los lpidos
que el solvente que los contiene por eso tienden a abandonar la solucin para incorporarse
a los lpidos del tejido.
Colorantes:
Sudan III: tie lpidos de color rojo
Sudan IV: tie lpidos de color negro
Tetraxido de Osmio: tie lpidos de negro Cuando estos no se utilizan y se cambian por
tcnicas convencionales de tincin los lpidos del tejido se disuelven debido a los alcoholes
de manera que se observan huecos blancos por la disolucin de las grasas llamada visin
negativa de las grasas.
2. Impregnacin: se emplean metales como la plata, el plomo y el osmio utilizados en

forma de xidos o de sales los cuales son reducidos por los componentes celulares
precipitando en forma de metales insolubles. El ms utilizado es la plata, entonces
hablamos de impregnaciones argnticas:
Gomori (especifica para fibras de reticulita), Reticulina y Verhoeff (para fibras elsticas)
dan precipitados negros.
Clases de tinciones segn el numero de colorantes:
Monocromicas: un colorante Policromicas: varios colorantes (ticrmicos).
Ticrmico de Masson: tie de color verde sobre toda fibra colgena de tejido conjuntivo.
Ticrmico de Mallory: tie de color azul las mismas fibras colgenas.
Microscopa ELECTRONICA (contraste):

No se utilizan colorantes, no se observan colores solo blancos, grises y negros. Se utilizan
sales de metales pesados para contrastar el tejido.
-Para M. Electrnico de transmisin:
Acetato de uranilo
Citrato de plomo
-Para M. Electrnico de barrido: Se sombrea la mezcla con carbono y con platino.
METODOS DE ESTUDIO DE LA COMPOSICIN QUIMICA DE LA CELULA (estudian los
componentes qumicos del interior de la clula).
Tcnicas Histoqumicas:
1. Identificacin de aldehdos:
Reaccin plasmal: para poner de manifiesto los aldehdos libres de la clula.
Feulgen: para poner de manifiesto el ADN.
PAS (cido peridico de Schiff): pone de manifiesto los hidratos de C.
PAS +: con hidratos de C
PAS -: sin ellos
Resultado: cuando hay aldehdos se observa color rosa fuerte y en las tres tcnicas se
utiliza el reactivo de Schiff (incoloro). Este es la fuchsina decolorada con anhdrido
sulfuroso.
Reaccin plasmal: sencilla, si en el tejido estudiado hay aldehdos libres reaccionaran con el
reactivo de Schiff produciendo un color rosa fuerte.
Feulgen: se produce en el tejido una hidrlisis cida con cido clorhdrico (HCL) con lo cual
quedan grupos aldehdos libres, estos grupos son tratados con el reactivo de Schiff
vindose el color rosa fuerte.
PAS: se realiza una hidrlisis con cido peridico quedando aldehdos libres que se ponen
de manifiesto con el reactivo de Schiff y que deja de nuevo el color rosa fuerte.
2. Identificacin de Enzimas (proteinas que manipuladas se desnaturalizan y se destruyen

por ellos no se pueden fijar):
El tejido se fija por congelacin.
Las 2 tecnicas ms importantes: Fosfatasa cida: tie enzimas marrn oscuro. Fosfatasa
alcalina: las tie de negro. Se utiliza un sustrato sobre el que acta la enzima que hay en la
clula cuya presencia queremos poner de manifiesto.
Tcnicas Auto radiogrficas: se utilizan sustancias radiactivas (como istopos radiactivos)

que tienen afinidad a un determinado compuesto celular. Principales Istopos:
Trimidinatrinitada: afn con ADN, Uridinatrinitada: afn con ARN
Se coloca la clula en la sustancia radiactiva para enmarcar algn componente. Se lava y
se coloca en parafina. Se corta y se coloca en un porta en una emulsin fotogrfica que
tiene cristales de bromuro de plata. El porta se revela como si fuera una foto. El cristal de
bromuro de plata sobre el que ha incidido se transforma en un filamento de plata mientras
que los cristales sobre los que no ha incidido ningn istopo desaparecen. Al final al
Microscopio ptico observamos pequeos puntos que son los filamentos de plata.
Al M. Electrnico veremos los filamentos de plata perfectamente.
Tcnicas Inmunocitoqumicas: (base-antgeno-anticuerpo)
T. Directa- fluorescencia
T. Indirecta- PAP (peroxidasa-antiperoxidasa)
Para M. Electrnico:
1. Tincin negativa: suspensiones de clulas
2. Sombreado: material inorgnico y suspensiones.
3. Criofractura: material biolgico.
1. Tincin negativa: no se utilizan cortes sino suspensiones.

Sobre la rejilla se coloca la gota de suspensin de clulas la que se coloca una capa de
cido fosfotnstico que se mete por todos los orificios de la clula. Como resultado veremos
el fondo y los orificios de color ya que se han acumulado los metales pesados por tanto los
electrones chocan se dispersan sin atravesar la muestra. El material lo veremos brillante ya
que los electrones pueden atravesarlo al no depositarse sobre l metales pesados. Al final
nos queda algo parecido al negativo de una foto.
2. Sombreado: se observa con detalle la superficie de partculas muy pequeas. Se utiliza
una campana al vaco. En un lado de esta tenemos una platina en cuyo borde se deposita la
muestra sobre una rejilla con soporte de carbono. Al otro lado de la campana hay unos
electrodos hechos de diferentes metales (platino, carbono). Los electrodos se calientan
haciendo que le metal incida sobre un lado de la muestra. Seguidamente se disolvemos el
material biolgico quedndonos un molde de platino o del metal llamado replica. A veces se
necesita reforzar la replica depositando adems del metal una capa continua de carbono y
enzima la replica.
3. Criofractura: la muestra se coloca sobre un soporte y se introduce en nitrgeno lquido
con lo que se congela proceso llamado cro fijacin. A continuacin la muestra congelada se
mete en una campana con una cuchilla que le da un golpe seco a la muestra que se
fractura hacindolo siempre por el sitio ms dbil. Despus sobre una de las caras de
fractura se deposita una capa continua de carbono, a continuacin se realiza un sombreado
de platino y por ltimo se realiza la rplica.
-Congelacin grabado: congelacin y corte de cuchilla separndose por la membrana a
nivel de la bicapa lipdica. Despus se aumenta la T de manera que el hielo de superficie
de fractura se sublima (slido a gas) con lo que las partculas que estn en la zona de
fractura quedan mucho ms marcadas.
Se deposita una pelcula continua de carbono y sobre esta se sombrea con platino para
obtener la replica disolviendo la materia orgnica.
Fraccionamiento celular: sirve para separar los distintos orgnulos de una clula, para ello
las clulas se trituran y se centrifugan varias veces. En cada centrifugacin se separa un
orgnulo diferente de la clula (1 ncleo). Se observa a la velocidad a la que sedimenta
cada orgnulo pudiendo saber el coeficiente de sedimentacin expresado en unidades S
(Svedberg) (Ej. Ribosomas 70s).
MTODOS DE ESTUDIO EN HISTOLOGIA Msc. Beln Z. Iglesias Ramrez. Profesora Auxiliar de

Histologa. ISCM Habana Dra. CM Teresita Rodrguez Obaya. Investigador titular. CIM Para estudiar
la estructura de las clulas, tejidos y rganos que constituyen los componentes del cuerpo
humano y organismos pluricelulares, el hombre ha desarrollado diversos mtodos y tcnicas, y ha
ido perfeccionando los instrumentos necesarios para conocer con ms profundidad la morfologa y
funcin de los diferentes niveles de organizacin de la materia. Es pues importante conocer, antes
de estudiar la estructura y la composicin de las clulas y los tejidos, algunos mtodos, tcnicas e
instrumentos de los que se dispone para llegar a estos conocimientos. OBSERVACIN
MICROSCOPICA A finales del siglo XVI los hermanos Hans y Zacaras Janssen, construyeron el
primer microscopio compuesto. Galileo, que es conocido por sus estudios de Astronoma, fue uno
de los primeros investigadores que utiliz el microscopio para fines cientficos. El empleo del
microscopio origin nuevos trminos, tales como el de clula (empleado por Robert Hooke, 1635-
1703) y las primeras descripciones y grabados de organismos microscpicos (como los realizados
por Leeuwenhoeck, 1632-1723); este ltimo emple lentes compuestas en la observacin de
protozoarios y otros organismos unicelulares. El ojo humano es capaz de discriminar dos puntos
que se encuentren separados por una distancia mayor de 0.1 mm solamente. Esto constituye un
obstculo para el estudio de las estructuras internas de la clula y es por esto que es necesario el
empleo de equipos que aumenten la resolucin. La posibilidad de un sistema ptico de distinguir
por separado (resolver) dos puntos muy cercanos, se denomina poder de resolucin. El poder de
resolucin en los microscopios, est en relacin inversa con la longitud de onda de la radiacin
empleada en la fuente de iluminacin. La resolucin del microscopio ptico aumenta y alcanza su
lmite cuando se utiliza como fuente de iluminacin la luz ultravioleta, producto de su pequea
longitud de onda. El microscopio ptico fue perfeccionndose hasta llegar a los modelos actuales,
que pueden alcanzar hasta 0.2 m de resolucin. 2 A mediados del siglo XX, se invent un tipo de
microscopio que utiliza como fuente de iluminacin los electrones. Con este equipo se puede
realizar un estudio ms detallado de la clula y los elementos subcelulares, moleculares y
atmicos. El microscopio electrnico al emplear una fuente de emisin de electrones, de una
longitud de onda de 0.005 nm, puede alcanzar valores resolutivos mucho mayores que el
alcanzado por los microscopios pticos. El lmite de poder de resolucin del microscopio
electrnico es de 0.2 nm. Actualmente se utilizan las siguientes unidades de medidas m -
micrmetro (antes, micra) nm - nanmetro (antes, milimicra) 0.1 nm = 1 (antes, Amstrong)
TIPOS DE MICROSCOPIOS Existen diversos tipos de microscopios, los cuales describiremos
brevemente sealando sus caractersticas fundamentales. MICROSCOPIO PTICO DE CAMPO
BRILLANTE Este tipo de microscopio utiliza como fuente de iluminacin la luz visible. Cuando la
muestra a observar es transparente a la luz empleada, el haz luminoso la atraviesa iluminando el
campo que se quiere observar. Aqu se emplea un sistema de iluminacin de luz transmitida. Este
tipo de microscopio, se encuentra formado por un sistema de iluminacin compuesto por una
fuente de luz que puede ser emitida por una lmpara incandescente, en la base del equipo, o
proyectada por un espejo (figura 2.1), Este haz de luz atraviesa una lente condensadora que lo
concentra sobre la muestra, para obtener una iluminacin ptima de la misma. Otra parte
importante del equipo es el sistema ptico, el cual esta constituido por varias lentes las que estn
diseadas y construidas para evitar o corregir los defectos y las aberraciones que pueden
producirse durante la proyeccin de la imagen. La lente objetivo recibe este nombre por ser la que
se encuentra ms cerca del objeto a examinar. Esta lente forma una imagen primaria ampliada del
objeto, en el plano focal de una segunda lente compuesta, la lente ocular, que recibe este nombre
por estar cerca del ojo del observador. La lente ocular amplia la imagen primaria y forma una final
ampliada en la retina del observador. Adems del sistema de iluminacin y del sistema ptico, en
el microscopio existe un sistema mecnico que est constituido por aquellas partes que sostienen
los sistemas de 3 lentes y de la muestra, y que adems sirve para el enfoque y el movimiento de la
muestra bajo el objetivo. Este tipo de microscopio puede trabajar acoplado a distintos
instrumentos, uno de ellos, el micromanipulador, que permite mediante movimientos en los
distintos planos del espacio, y de una forma muy precisa, hacer disecciones sobre tejidos y clulas,
introducir micropipetas y microelectrodos para suministrar sustancias o medir potenciales
elctricos en las clulas. El esquema bsico del microscopio de campo brillante, sirve para el
estudio de los diferentes microscopios pticos, los que al presentar un aditamento, dispositivo o
accesorio adicional permitir una observacin ms especializada; por ejemplo, el invertido, el de
polarizacin, el de fluorescencia, el de contraste de fase, etc. Debido a esto es importante estudiar
detenidamente las partes de que consta un microscopio ptico de campo brillante, para as
comprender mejor el funcionamiento de los microscopios pticos ms especializados que sern
descritos posteriormente (figura 2.1) Fig. 2.1 Se observa un microscopio de campo brillante con
todos sus componentes. Sistema de Lentes 4 MICROSCOPIO PTICO DE CONTRASTE DE FASE.
Cuando una muestra, por ejemplo una clula, debe ser observada viva, no se puede procesar por
ninguna de las tcnicas que sern descritas ms adelante (inclusin, corte y coloracin) y, por
tanto, al ser vistas en un microscopio de campo brillante, seran pocos los detalles observables de
la muestra. Para una visualizacin con suficiente contraste, se utiliza un microscopio especial que
tiene un dispositivo que transforma las diferencias de fase de la longitud de onda de la luz
empleada, en diferencias de amplitud. La luz, al atravesar una muestra, es desfasada normalmente
con respecto a la luz que atraviesa el medio donde se encuentra dicha muestra (agua, aire, aceite.
etc.). Este desfasaje es pequeo y el ojo humano no es capaz de distinguirlo; ahora bien, mediante
dispositivos que existen en los llamados microscopios de contraste de fase, la diferencia de fase se
aumenta lo suficiente como para que el ojo lo distinga, pudindose apreciar distintas intensidades
de luz que van desde la oscuridad hasta el brillo intenso. Los diferentes tonos intermedios estn
determinados por las diferencias de espesor en la muestra. MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA
Y DE FLUORESCENCIA La luz ultravioleta, que no es visible al ojo humano, pero que si se puede
utilizar en microfotografa, tiene una longitud de onda muy corta (300 m) y es absorbida por
algunos componentes celulares como los cidos nucleicos, o por determinadas sustancias que se
le pueden suministrar a las clulas. El microscopio de luz ultravioleta puede utilizarse para la toma
de microfotografas usando una pelcula sensible a esta radiacin, o mediante la visualizacin de
las imgenes captadas por una cmara de televisin sensible a la luz ultravioleta. La luz
ultravioleta, por ser una radiacin de alta energa, se utiliza en las tcnicas de fluorescencia que
consisten en la excitacin de los electrones de sustancias presentes en las clulas o tejidos, o que
pueden ser suministrados previamente. Para esto se utilizan colorantes especiales o fluorocromos,
los cuales, dependiendo del tipo empleado y de la energa de excitacin, emitirn con una longitud
de onda que mediante filtros puede ser observado por ojo humano. Un ejemplo de esta tcnica,
consiste en suministrar a clulas vivas en cultivo o a animales de investigacin vivos, uno de estos
reactivos y examinar despus al microscopio de fluorescencia el sitio donde este material se
acumula, por ejemplo, usando naranja acridina como fluorocromo se puede demostrar la
localizacin de ADN, al cual se le 5 observa una fluorescencia de color verde naranja en el ncleo
de las clulas que han captado dicho colorante. MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN.
Como ya tratamos, los electrones al tener una longitud de onda muy pequea (0.005 nm)
permiten a este instrumento un alto poder de resolucin. El microscopio electrnico se asemeja
en algunos aspectos al microscopio ptico, ya que consta de: a) sistema de iluminacin; b) sistema
de manipulacin de la muestra; c) sistema de formacin de la imagen; d) sistema de proyeccin de
la imagen La fuente de iluminacin es un fino filamento de tungsteno (ctodo) que al ser
calentado por el paso de una corriente emite electrones, los cuales son desprendidos a gran
velocidad al establecerse una diferencia de potencial elctrico entre el ctodo y el nodo (este se
encuentra cerca del primero), pasando a travs de este ltimo por una apertura hacia una
columna metlica hueca, donde existe un alto vaco para evitar que los electrones que viajan a
travs de ella sean difractados por molculas extraas. Una vez acelerados los electrones por el
nodo, a traviesan un campo magntico producido por la condensadora, la cual concentrarn los
electrones en un haz fino y lo dirigirn hacia la muestra. Esta ltima se introduce dentro de la
columna por un dispositivo especial que expone el objeto a estudiar al haz de electrones el cual
constituye el sistema de manipulacin de la muestra. La muestra se contrasta con sustancias que
contienen metales pesados de alta densidad electrnica en sus tomos, los cuales presentan
diversas afinidades por determinados componentes celulares; una vez que el haz de electrones
atraviesa la muestra, los mismos chocan con la nube electrnica de estos compuestos que se han
depositado sobre los componentes celulares lo que produce un retardo y dispersin de la
trayectoria de alguno de los electrones, mientras que otros continuarn su trayecto hasta llegar a
la pantalla fluorescente, donde se forma la imagen. El dispositivo con la muestra puede moverse
en distintas direcciones en un plano perpendicular al eje de la columna o puede ser ligeramente
inclinado para algunos estudios en que se requiere este movimiento. Luego de atravesar la
muestra, los electrones pasan inmediatamente a travs de la lente objetivo, donde se forma una
imagen primaria invertida, la cual es rectificada por una lente 6 intermedia y proyectada hacia una
pantalla fluorescente, formando la imagen final aumentada al chocar los electrones y producirse
una emisin de ondas en el rango de la luz visible. Por debajo de esta pantalla existe una cmara
fotogrfica donde se registran las imgenes, una vez retirada la pantalla fluorescente.
MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO. Existe otro tipo de microscopio electrnico que recibe
el nombre de microscopio electrnico de barrido y que se basa en el estudio de los electrones
reflejados por una superficie. Un dispositivo integra la imagen, la cual se observa en un sistema de
televisin; mediante este equipo es posible estudiar la estructura tridimensional de las superficies;
por ejemplo, los cilios de una clula, la forma bicncava de los hemates, etctera. Este tipo de
microscopio electrnico, dado su poder de resolucin (alrededor de 20 nm o ms), permite el
estudio detallado de estructuras cuyas dimensiones se encuentran entre los lmites de resolucin
del microscopio ptico (0.2 m) y el microscopio electrnico de transmisin que puede alcanzar de
0.3-0.1 nm TCNICAS DE PREPARACIN DE MUESTRAS PARA OBSERVARLAS AL MICROSCOPIO. Al
observar una estructura al microscopio ptico o al electrnico, la luz o los electrones atraviesan la
muestra, dando lugar a la formacin de imgenes que son ampliadas por las lentes del
microscopio. Para esto es necesario que los objetos examinados sean lo suficientemente delgados,
para que la luz o los electrones los atraviesen (figura 2.4). En el caso de la microscopa ptica las
muestras deben tener un grosor de 5-8 m aproximadamente, y para microscopa electrnica,
valores entre 20 y 40 nm. Es necesario, por tanto, cortar el material que ha de ser estudiado en
"lascas" muy finas. La preparacin del material biolgico muerto, para su estudio al microscopio
ptico o al electrnico, consta de cuatro pasos fundamentales. 1ro. La fijacin. 2do. La inclusin.
3ro. El corte. 4to. La coloracin. Mediante la fijacin se logra detener los procesos de destruccin,
celular o hstica, que se producen por las enzimas contenidas en ellos, una vez muerto el
organismo o al separarla de l. Este proceso de destruccin celular recibe el nombre de autolisis. 7
Por otra parte, la estructura se conservan lo ms natural posible, ya que las sustancias fijadoras
actan sobre los componentes celulares deteniendo la autolisis mediante reacciones qumicas con
reactivos como el formol, el glutaraldehido, el tetraxido de osmio, etc., o pueden actuar
coagulando las protenas cuando se utiliza el calor. A continuacin se realiza la inclusin del tejido,
para que el material tenga la suficiente firmeza al cortarse. El agua que contiene el tejido se
sustituye por una sustancia que le da rigidez y evita que se deforme. Esto se logra introduciendo el
material a procesar en alcoholes de gradacin creciente, lo que ir sustituyendo el agua por el
alcohol. Despus el alcohol es sustituido por un solvente orgnico como es el xilol, la acetona, etc.,
para de esta forma terminar incluyendo el tejido en una sustancia que es miscible en este solvente
orgnico. Estas sustancias son la parafina, que se utiliza en microscopa ptica, y las resinas
sintticas, que se utilizan en microscopa electrnica. Una vez incluido el material se realiza el
corte utilizando equipos especiales, los cuales presentan una cuchilla que corta "lascas" del
material. Para microscopa ptica se utilizan cuchillas de acero y el equipo recibe el nombre de
micrtomo.(Fig. 2.2 ). En microscopa electrnica se utilizan los ultramicrtomos, que emplean
cuchillas de vidrio o diamante. Para el estudiante que comienza es muy difcil, imaginar los planos
de corte de una estructura determinada. En la figura 2.3 se representan los cortes dados a un
huevo y a una estructura tubular, comparndolos con la imagen que de estos se observa al verlos
aislados. 8 Los cortes para su observacin al microscopio ptico, se montan en una lmina de
vidrio llamada portaobjetos. Para microscopa electrnica se montan en unas rejillas metlicas
pequeas que presentan perforaciones, las cuales permiten el paso del haz electrnico. Para el
estudio de cortes al microscopio ptico de campo brillante es necesario colorear previamente la
muestra con diferentes compuestos qumicos (colorantes), que tienen la capacidad de reaccionar
con los diversos componentes de las estructuras celulares. La posibilidad de observar una
coloracin dada en una estructura se debe a que esta se comporta como un filtro de color,
dejando pasar solamente la luz de determinada longitud de onda. Es importante para el
estudiante la comprensin de algunos conceptos relacionados con la coloracin. Los colorantes
que corrientemente se emplean para la observacin de lminas histolgicas, son sales neutras que
presentan radicales cidos o bsicos, es decir, colorantes cidos y bsicos. Una coloracin de uso
corriente en histologa es la hematoxilina y eosina (H/E) que emplea ambos tipos de colorantes.
Con esta coloracin se observa que el ncleo se tie con el colorante bsico (azul), y el citoplasma
se colorea con el colorante cido (rosado). El ncleo, al tener afinidad por el colorante bsico (el
ADN capta el colorante bsico), es basfilo y la propiedad que manifiesta esa estructura se
denomina basofilia. Por su parte, el citoplasma, excepto en clulas secretoras de protenas, es
generalmente acidfilo, es decir, tiene afinidad con el colorante cido eosina. La propiedad de
reaccionar con los colorantes cidos, es la acidofilia. 9 Fig. 2.4 En la figura se muestra un esquema
de una clula eucariota coloreada con Hematoxilina/Eosina. El ncleo se aprecia de color azuloso
(basfilo) y el citoplasma se observa rosado (acidfilo). No obstante se observa basofilia localizada
en el citoplasma que se corresponde con el Retculo endoplasmtico rugoso. La basofilia
citoplasmtica se debe a la presencia de ribosomas asociados al Retculo. Fig. 2.5 Se observan un
frotis de sangre de rana, a 40x. Cada clula se corresponde con un eritrocito, en esta especie los
eritrocitos son nucleados. Se aprecia el ncleo oscuro (basfilo) y el citoplasma acidfilo (rosado)
Otro grupo de colorantes, los bsicos de anilina, incluyen el azul de toluidina, el azul A, el azul de
metileno. Se emplean para identificar los mucopolisacridos. Al colorearse las estructuras, lo
hacen de un color distinto al del colorante original. Esa propiedad se denomina metacromasia. Los
colorantes bsicos de anilina son el azul brillante, el rojo neutro y el verde Janus. 10 Las tcnicas
de tincin incluyen tambin la utilizacin de varios colorantes. Ejemplo de ellos son los mtodos
tricrmicos como el Mallory, el Mallory-Azan y el mtodo de Masson utilizados para demostrar las
fibras del tejido conjuntivo, etc. Otra tcnica de coloracin muy empleada es la tincin con sales
de plata, que tie de negro o carmelita oscuro las estructuras celulares, estas se denominan por la
afinidad con las sales de platas argirfilas. Por otra parte, el fenmeno fundamental que permite la
visualizacin de las estructuras al microscopio electrnico, esta dado por la dispersin electrnica
que provocan los elementos qumicos que componen las estructuras de la muestra. Estos
elementos tienen por lo general bajo peso atmico (C, O, N, H, etc.), por lo que se hace necesario
asociar a estas estructuras, compuestos que contengan metales pesados de mayor peso atmico,
por ejemplo el tetraxido de osmio y las sales de uranio, que reaccionan con zonas especficas de
la muestra, provocando una mayor dispersin y, por tanto, un contraste entre las diferentes
zonas. La imagen que se observa en la pantalla fluorescente del microscopio electrnico est
formada por los electrones que atraviesan la preparacin sin una gran dispersin. Los diferentes
tonos estn determinados por la llegada o no de ellos, donde las zonas brillantes corresponden, al
lugar en el que un mayor nmero de electrones chocan con la pantalla fluorescente r TCNICA DE
CONGELACIN FRACTURA. Mediante esta tcnica es posible estudiar al M/E estructuras celulares
superficiales o puestas al descubierto por medio de la fractura de una muestra congelada a muy
bajas temperaturas, sin ningn tipo de procesamiento qumico que altere la ultraestructura de la
misma. La muestra se congela en nitrgeno lquidos (-196 C) y se monta en un equipo donde hay
un dispositivo especial dentro de una campana, en la cual se hace un alto vaco. Mediante una
cuchilla se produce un corte que provoca una lnea de fractura en la muestra, quedando expuesta
la superficie donde se produjo el corte. Esta superficie pierde agua por sublimacin y
posteriormente se le evaporan carbn y metales pesados desde diferentes ngulos, hasta cubrirla
en su totalidad, logrando de esta manera, una rplica o mascarilla de la misma. Por un
procedimiento donde se elimina el material biolgico, la replica se separa de la muestra y se
examina al M/E, en ella se pueden apreciar las caractersticas de las estructuras que quedaron
impresas en la rplica 11 TCNICA CITOQUMICAS E HISTOQUMICAS. Las clulas y los tejidos estn
constituidas por protenas, carbohidratos y otros componentes, los cuales se encuentran
formando parte de las estructura de los mismos. Estas sustancias son qumicamente activas, es
decir, que en determinadas condiciones es posible hacerlas reaccionar con otros compuestos. Esta
capacidad de reaccin es el principio en que se basan las tcnicas citoqumicas e histoqumicas
para la demostracin, en las clulas y en los tejidos, de un compuesto o sustancia, o para la
determinar la actividad de una enzima, o complejos enzimticos celulares e hsticos. El producto
de estas reacciones son compuestos coloreados visibles al microscopio ptico, o de alta densidad
para su visualizacin al microscopio electrnico; por ejemplo, la demostracin de lpidos
acumulados intracelularmente en algunas patologas, o la demostracin de lpidos que forman
parte de estructuras celulares, se puede llevar a efecto mediante diversas tcnicas con substancias
que reaccionan con las grasas; uno de estos es el tetraxido de osmio, que reacciona con los
lpidos no saturados, y da un compuesto de color negro que puede distinguirse tanto al
microscopio ptico como al microscopio electrnico debido a su alta densidad. En otras ocasiones,
es posible, mediante esta tcnica, demostrar la presencia o ausencia de un orgnulo celular. Las
clulas objeto de estudio se ponen en contacto con sustratos especficos que reaccionarn con los
componentes qumicos de un orgnulo dado, as dando coloracin al M/O. Estas tcnicas brindan
una informacin de la composicin qumica celular, as como de sus elementos estructurales y su
localizacin. TCNICA INMUNOCITOQUMICA E INMUNOHISTOQUMICA. Determinadas clulas de
organismos superiores tienen la capacidad de responder ante sustancias extraas, antgenos,
sintetizando otros compuestos llamados anticuerpos. La tcnica inmunocitoqumica se basa en el
reconocimiento del antgeno por un anticuerpo que previamente se ha conjugado con un
fluorocromo, una enzima o un coloide de un metal pesado (por ejemplo el oro). Al conjugarse con
estos compuestos, los anticuerpos pueden reconocer en el tejido o en la clula, los componentes
antignicos contra los cual fueron desarrollados, poniendo as de manifiesto la localizacin o
presencia de aquellas estructuras objetos del estudio, mediante 12 reacciones qumicas o a travs
de microscopios especializados (microscopios de fluorescencia y electrnico). Si se emplea un
microscopio de fluorescencia, el marcador ser un fluorocromos, los cuales emiten fluorescencia
al ser excitados por la luz ultravioleta; si la reaccin antgeno-anticuerpo se evidencia mediante
una enzima se hace necesario el empleo del sustrato de la misma, adems de una sustancia que
proporcione un color determinado o un precipitado que pueda ser distinguido en un microscopio
ptico de campo brillante o con una tcnica adecuada al microscopio electrnico. TCNICAS DE
FRACCIONAMIENTO CELULAR. Cuando se requieren separar los componentes intracelulares
(organitos), la tcnica de eleccin es la centrifugacin o la ultracentrifugacin en un medio
isotnico. Para esto es necesario romper previamente las clulas mediante procedimientos
mecnicos (en un homogeneizador con mbolo de vidrio o tefln), con la consiguiente liberacin
al medio de sus componentes. En la centrfuga las partculas de distinta densidad, forma y tamao,
sedimentan a diferentes velocidades y tiempo. De este modo se obtienen distintas porciones o
fracciones celulares. La unidad que define la velocidad de sedimentacin de una partcula en un
campo gravitacional, se denomina unidad Svedverg, la cual relaciona la velocidad angular del rotor
de la centrfuga con la distancia de la partcula al eje del rotor. Esta unidad es una constante para
cada partcula y generalmente se describe como una unidad S. Aunque con esta tcnica se
obtienen fracciones celulares bastante puras, no es posible evitar la contaminacin de una
determinada fraccin con partes de otra. Como se plante anteriormente, el comportamiento de
las diferentes partes de la clula en el campo centrifugacional, est determinado por varios
parmetros que pueden coincidir en organitos diferentes; por ejemplo, una mitocondria pequea
puede tener similar forma, talla y densidad que un lisosoma y, por tanto, se obtiene una fraccin
mitocondrial contaminada por lisosomas. Este hecho es necesario tenerlo en cuenta cuando se
est estudiando el contenido enzimtico de determinada fraccin, ya que se pueden falsear los
resultados (figura 2.10). TCNICA DE CULTIVO DE TEJIDOS. El mtodo consiste en cultivar clulas o
tejidos en un medio nutritivo. En estos cultivos se realizan estudios sobre distintos procesos, tales
como la divisin, el crecimiento, la diferenciacin celular y otros. Estas clulas de cultivo provienen
de rganos o tejidos animales o vegetales, las cuales, mantenindolas en un medio nutritivo
adecuado, y con temperatura, pH y otros 13 requerimientos especiales, pueden desarrollar
muchas de las funciones metablicas que realizaban cuando formaban parte de los tejidos. Esta
tcnica es muy til para el estudio de los virus, utilizando a las clulas de cultivo como hospederas
de ellos. La tcnica en cuestin tambin se utiliza en el estudio de clulas cancerosas y su
comportamiento en el desarrollo de tumores. En general, las clulas de cultivo sirven como
material de experimentacin sobre el cual se pueden hacer diversos estudios, empleando todas las
tcnicas descritas. Como hemos estudiado, son diversos los mtodos y tcnicas empleados; no
obstante, con el desarrollo de las ciencias irn surgiendo nuevas tcnicas que permitan a los
cientficos un conocimiento cada vez ms profundo de las clulas y su funcionamiento. Es
importante tener en cuenta que cada mtodo y tcnica tiene sus limitaciones y que solo haciendo
un uso racional de ellas, se puede lograr un conocimiento cada vez ms completo.
HISTOQUMICA Y CITOQUMICA
Histoqumica es el estudio qumico de los tejidos
independientemente del mtodo de anlisis empleado. En la
prctica se emplea la palabra para designar el mtodo junto con el
auxilio de los microscopios pticos (MO) y electrnico (ME).
Esta tcnica permite la identificacin y localizacin de compuestos o

radicales qumicos en las clulas y tejidos. Esto se consigue
provocando reacciones que dan productos insolubles que son
coloreados o electrodensos y visibles por el MO y el ME .
A. PRINCIPIOS BSICOS.
1. QUE LOS COMPUESTOS QUE DEBEN SER ANALIZADOS NO
SEAN DIFUSIBLES.
Este problema se resuelve insolubilizando los compuestos que van
a ser estudiados por medio de la fijacin del tejido.
Se recomienda el uso de fijadores con alcohol para el estudio de

sustancias hidrosolubles como el glucgeno.
Hay que evitar los fijadores cidos en las tcnicas de visualizacin

del fosfato clcico.
Los fijadores ms utilizados son:
Formaldehdo para el MO .
Glutaraldehdo para el ME.
2. EL PRODUCTO DE LA REACCIN DEBE SER

INSOLUBLE para evitar la difusin .
3 .EL MTODO UTILIZADO DEBE SER ESPECFICO PARA LA
SUSTANCIA O GRUPO QUMICO QUE SE ESTA
ANALIZANDO. En algunas reacciones la intensidad del color
producido es proporcional a la concentracin de la sustancia
analizada.En este caso se puede medir dicha sustancia con un
histofotmetro.
B. PRINCIPALES SUSTANCIAS DE INTERS BIOLGICO
DEMOSTRABLE HISTOQUMICAMENTE.
1. IONES
IN DETERMINACIN
HIERRO EL in frrico se demuestra por la reaccin con la mezcla de FE

CIANURO POTSICO Y CIDO CLORHDRICO que forma un p
oscuro de ferrocianuro frrico.
Esta reaccin se usa para localizar los macrfagos del SRE y d
enfermedades en las cuales hay depsitos de hierro en los tejido
FOSFATO Reaccionan con NITRATO DE PLATA y se forma fosfato de plata

reducido por hidroquinona y forma un precipitado negro. Esta rea
para el estudio del hueso.
2. LPIDOS.
Se usan colorantes que se disuelven en las grasas como el SUDAN
IV y el SUDAN NEGRO.Los tejidos se sumergen en soluciones
alcohlicas saturadas de colorantes muy liposolubles y debilmente
solubles en alcohol. Se usa para el diagnostico de enfermedades
metablicas que producen depsitos intracelulares.
3. CIDOS NUCLICOS.
CIDO DETERMINACIN
NUCLICO
DNA Se usa la reaccin de FEULGEN que consiste :

Hidrlisis del DNA con cido clorhdrico para extraer las bases
en libertad los grupos aldehdicos del azucar.
El reactivo de SCHIFF (fuchsina bsica con anhdrido sulfuros

con el aldehdo y forma un precipitado rojo.
Esta reaccin presenta proporcionalidad entre la intensidad del

y el contenido en DNA del ncleo.
RNA Tiene gran afinidad por los colorantes bsicos (basoflia) lo que
tia intensamente con el AZUL DE TOLUIDINA o de METILENO
4. PROTENAS.
Su identificacin se basa en mtodos de deteccin de aminocidos.
Reaccin de aminobenceno.
Reaccin de Sakaguchi que detecta la arginina de las protenas

bsicas como las histonas y protaminas.
5. POLISACRIDOS.
Se encuentran unidos a protenas o en forma libre. En el caso de
ser un polmero, antes hay que tratar la muestra con un enzima
glucogenoltico para que libere los azucares.
La reaccin ms usada es la del PAS (cido peridico-schiff). El

cido oxida a los azucares en posicin 1-2 y deja grupos aldehdos
libres que reaccionan con el reactivo de SCHIFF dando un
compuesto insoluble y coloreado. De este modo se demuestra la
presencia de:
Glucgeno en el hgado y msculo.
Depsito intracelular de glucgeno en enfermedades congnitas.
Glucosaminoglicano o mucopolisacrido que forman parte de los

proteoglicanos.
Glucoprotenas.
Los azucares cidos tambin reaccionan con el colorante AZUL DE

ALCIAN.
6. CATECOLAMINAS. El formoaldehdo reacciona con las

catecolaminas produciendo compuestos fluorescentes.
7. ENZIMAS. Su localizacin se basa en la produccin de un
precipitado fuertemente coloreado o electrodenso en el sitio de
actividad enzimtica.
ENZIMA DETERMINACIN
FOSFATASA CIDA Se usa el mtodo de GOMORI que consiste en incu

tejidos en una solucin que contengan GLICEROL
SDICO y NITRATO DE PLOMO a pH 5 .
La enzima libera el fosfato que reacciona con el plo
precipitado insoluble.Despus se aade sulfito de a
color negro y electro denso al precipitado.
Se usa para localizar lisosomas.
DESHIDROGENASAS Se usan cortes no fijados junto con un compuesto q

y debilmente coloreado del tipo TETRAZOL.El tetra
y forma un precipitado coloreado llamado FORMAZ
Se usa para detectar mitocondrias.
PEROXIDASA Promueve la reduccin de ciertos sustratos, transfir

hidrgenos desde el perxido de hidrgeno al sustr
reduce.
Como sustratos se usa el perxido de hidrgeno y e
3,3-diamino-bencidina que cuando se reduce forma
coloreado, insoluble y electrodenso.
B. FLUORESCENCIA.
Sustancia fluorescente es la que absorbe luz de una longitud de
onda determinada y emite luz en otra longitud de onda mayor. En
microscopa se suele usar la excitacin con luz ultravioleta.
1. COMPUESTOS FLUORESCENTES.
Compuestos naturales constituyentes de las clulas: vitamina A,
riboflavina(B2) y las porfirinas.
Colorantes con afinidad por las estructuras celulares como el

Naranja de acridina que se une a los cidos nuclicos:
DNA: fluorescencia verde amarillenta.
RNA: fluorescencia roja amarillenta.
Esta prueba se usa en el diagnostico precoz del cncer (clulas

ricas en RNA).
2. INMUNOCITOQUMICA (INMUNOFLUORESCENCIA).
Sirve para identificar protenas especificas. Se basa en la reaccin
Ag-Ac. Al Ac se le puede marcar con un compuesto fluorescente. Es
la mtodo ms usado para la deteccin de auto-anticuerpos en
enfermedades autoinmunes.
PREPARACIONES PERMANENTES
Describiremos primero las preparaciones histolgicas permanentes
(laminas) para el estudio al microscopio ptico. Con este
instrumento los objetos se examinan por transparencia, siendo
pocas las estructuras que se examinan directamente (mesenterio,
cola de renacuajo) y que pueden ser observadas in vivo, sin fijar y
teir, como sucede en las preparaciones permanentes.
Los pasos que se siguen para obtener una preparacin permanente

son:
1. Fijacin
2. Inclusin
3. Corte con microtomo
4. Coloracin
A. FIJACIN.
Se hace a fin de evitar la autolisis y destruccin celular.
Los tejidos deben ser tratados inmediatamente despus de ser

cortados.
Tiene por fin endurecer los tejidos, volvindolos mas resistentes a
las etapas subsiguientes de la tcnica histolgica.Hay que
conservar la morfologa y la composicin qumica de los
componentes de los tejidos.
Suele durar unas 12 horas.
La fijacin puede ser realizada por procesos:
MTODO CARACTERSTICAS
FSICO Calor, como en bacteriloga.

Fri, como en el criostato.
QUMICO (uso de fijadores que Fijadores:

inmovilizan las protenas de Cloruro de mercurio y cido pcrico precipitan
los tejidos).Es la ms usada en
Histologa. Formaldehdo, tetraxido de osmio y glutaral
causan coagulacin y se usan en ME.
Mezclas fijadoras:
Liquido de BOUIN: pcrico/formol/actico gla
Liquido de HELLY: dicromato potsico/clorur

mercurio/formol
Este paso es ESENCIAL, puesto que las protenas son las

principales responsables de la estructura celular y se degrada
despus de la muerte celular.
Habitualmente se hace una doble fijacin con una solucin

tamponada de:
Glutaraldehdo.
Tetraxido de osmio.
B. INCLUSIN.
Da consistencia firme a los tejidos para que se puedan obtener
cortes suficientemente finos.
Las sustancias ms usadas para este fin son:
GELATINA, CELOIDINA, PARAFINA para la MO.
RESINA EPOXI para la ME.
Hay una serie de tratamientos a los que hay que someter a una
pieza antes de la inclusin:
TRATAMIENTO CARACTERSTICAS
DESHIDRATACIN Se extrae el agua de los tejidos con baos d

concentraciones crecientes de etanol ( de 7
ACLARAMIENTO O Sustitucin del etanol por un liquido miscible

DIAFANIZACIN parafina.Se usa xilol, benzol o toluol que de
translcida.
INCLUSIN O IMPREGNACIN Se colocan las piezas en parafina fundida

interior de una estufa.
Debido al calor , el xilol o toluol se evapora
espacios que dejan libre son ocupados por l
Se lleva la pieza a un recipiente rectangul

solidificar.
Inconvenientes:
Destruyen muchas enzimas

Eliminan compuestos liposolubles
C. CORTE CON MICROTOMO.

Los bloques de parafina son seccionados por la cuchilla del
microtomo, obtenindose cortes de 3 a 8 micras de espesor. Estos
cortes son extendidos en agua caliente y despus se llevan a un
portaobjetos.
Para el microscopio electrnico se requieren cortes de 0.02 a 0.1

micra. El material se incluye en plsticos bastante duros del tipo
epoxi y para cortarlos se usa un ultramicrotomo equipado con
navaja de cristal o diamante.
El microtomo de CONGELACIN SE USA PARA ESTUDIAR LOS

LPIDOS DE LAS ESTRUCTURAS CELULARES, ya que los
solventes orgnicos los eliminan. Usa nieve carbnica para congelar
el tejido.
CRIOSTATO es un microtomo de congelacin ms elaborado que

permite la obtencin rpida de cortes sin pasar por todas las etapas
anteriores, cuando se usa parafina.Son muy utilizados en hospitales
cuando se requiere un diagnostico rpido de un material patolgico.
El criostato es tambin muy til en histoqumica , pues no inactiva

las enzimas, pero dificulta la difusin de las molculas.
MTODO DE CONGELACIN-DESECACIN: Se mantiene la

actividad enzimtica. Se congela a -150 C y despus se deshidrata
lentamente a vaci.
D. COLORACIN.
Aumenta el contraste de las estructuras y hace a los tejidos
visibles y diferenciables unos de otros.
Se realiza normalmente con MEZCLAS QUMICAS DE

COLORANTES.
La mayora de los colorantes se comportan como cidos o como
bases y tienden a formar sales con los radicales ionizables de los
tejidos.
Los componentes de los tejidos pueden ser:
SUSTRATO COLORANTE EJEMPLOS
BASFILO (tejidos que se BSICO (azul de toluidina y Nucleoprotenas y

tien fcilmente con azul de metileno, cidas.
colorantes bsicos). hematoxilina).
ACIDFILO (tejidos que se QCIDO (orange G, eosina y Protenas bsicas

tien fcilmente con la fuschina cida). citoplasma.
colorantes cidos).
La doble coloracin por la hematoxilina y la eosina es la ms
utilizada en la tcnica histolgica.
OJO: Los colorantes no proporcionan datos sobre la naturaleza

qumica de los componentes a los que se unen.
TCNICA COMPONENTES NCLEO CITOPLASMA FIBRAS F

COLGENAS E
Hematoxilina- Hematoxilina Azul I

eosina
Eosina Rosa Rosa I
Hematoxilina Negro
frrica
Tricromo Fuchina-cida y Rojo

Masson Panceau
Verde luz Verde

Fuchina- Fuchina y P
resorcina resorcina
Impregnacin Sales de plata Castao

argntica
Los factores que influyen en la tincin son:
Pureza y concentracin del colorante.
pH y temperatura.
Tiempo.
E. METACROMASIA.
Hay ciertos tejidos, como la matriz cartilaginosa, que al usar
colorantes como el azul de toluidina, se modifica el color azul por
unin al tejido, pasando a prpura. A este fenmeno se le denomina
metacromasia.
Los colorantes metacromticos suelen ser bsicos, como el azul de

toluidina y tionina. Los componentes tisulares que pueden
colorearse metacromticamente, denominados cromotropos, son
principalmente:
Glucosaminoglicanos sulfatados, fuertemente cidos de la matriz

cartilaginosa y los mastocitos del tejido conectivo.
Nucleoprotenas.
F. MANIPULACIN EXPERIMENTALES DE CLULAS VIVAS.

Las tcnicas de tincin pueden ser:
VITALES: no provocan la muerte. Se usan colorantes

relativamente no venenosos que son retenidos selectivamente por
algunas clulas del organismo. Se inyecta al animal vivo.
SUPRAVITALES: se agrega el colorante a las clulas o tejidos
que permanecen vivos despus de ser separados del organismo.
Ejemplos:
El carmn y azul tripn se usan para el estudio de la fagocitosis.
El rojo neutro para identificar los distintos tipos de leucocitos.
El verde jano tie las mitocondrias.
La alizarina se une a la matriz sea recin formada y se ha usado

para el estudio de la formacin del hueso.
G. CRIOFRACTURA.
Permite el estudio de la ultraestructura de las clulas sin los
posibles artefactos producidos por la fijacin y la inclusin (ej:
membrana plasmtica). Sirve para el examen de cortes ultrafinos.
Fases:
1. Congelar el tejido a temperatura muy baja.
2. Fracturar con una cuchilla de metal afilada. El tejido fracturado se mantiene a m

temperatura y en alto vaco, as se elimina el agua por sublimacin. La superficie f
muestra elevaciones y depresiones correspondientes a las diversas estructuras de
3. Hacer una rplica al molde de la superficie fracturada depositando una capa de
4. Depositar una capa de metal pesado sobre la superficie de carbono para dar un
sombreado.
5. Llevar la muestra a presin atmosfrica normal y destruir el tejido por una susta
ataque el molde (cido fuerte, hipoclorito sdico).
6. Colocar la rplica en una rejilla de cobre y llevarla al ME.
RADIOAUTOGRAFIA
Se basa en el efecto de las radiaciones sobre las emulsiones
fotogrficas que contienen bromuro de plata (microdetectores de
radiactividad). Los cationes de plata que son alcanzados por la
radiacin se transforman en plata metlica que aparece negra al
microscopio ptico (MO).
Fases:
1. Inyectar el istopo radiactivo al rgano en estudio.
2. Poner un corte de rgano en contacto con la pelcula de emulsin fotogrfica.
3. Dejar un perodo de exposicin y revelar la pelcula. Los puntos negros que apa
corresponden a los sitios del rgano que contienen el istopo.
La cantidad de grnulos de plata es proporcional a la radiactividad

presente y as permite tambin la medida de la cantidad relativa de
dicha sustancia.
a) Tcnica de emulsin liquida:
Se sumergen las preparaciones biolgicas en la emulsin

calentada y fundida.
Retirar las lminas y queda sobre su superficie una fina pelcula

de emulsin.
Secar y guardar al abrigo de la luz, generalmente a baja

temperatura.
Proceso de revelado semejante al usado para placas fotogrficas

en una cmara oscura.
Llevar al microscopio (ME MO).
b) Aplicaciones: con el uso de istopos radiactivos de C, H, N, S, P,

es posible marcar las molculas de numerosos compuestos que
intervienen en el metabolismo. De esta forma se localiza el proceso
metablico y su velocidad, como la secrecin de grnulos de
zimgeno.

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Entre los compuestos orgnicos se destacan:

Las protenas en un 10 a 15%.

Los lpidos del 2 al 3%.

Los glcidos en 1%.

PROPIEDADES FISIOLOGICAS DEL PROTOPLASMA

Como materia que constituye a las clulas, al protoplasma le son

menor desarrollo dependiendo de la diferenciacin y especializacin de

En la imagen se resumen las mismas, estas son:

El desarrollo de las propiedades fisiolgicas del protoplasma de las

DESARROLLO BIOLOGICO HUMANO

El desarrollo biolgico humano constituye un proceso de cambios

El nacimiento constituye un fenmeno decisivo, con el se produce un

postnatal; en cada uno de estos periodos se distinguen diferentes etapas

El periodo postnatal en condiciones normales es el ms extenso, en el se

La infancia y la etapa de la adolescencia se caracterizan por un

La adultez es la etapa ms extensa, y en ella se han alcanzado ya el

En el envejecimiento existe una disminucin de las funciones; sin

ETAPAS DEL DESARROLLO PRENATAL HUMANO

El periodo prenatal presenta tres etapas muy bien definidas:

Una etapa pre-embrionaria que se inicia con la fecundacin y se extiende

Una etapa embrionaria que se extiende desde la segunda hasta la octava

accin de agentes externos nocivos al desarrollo que pueden producir

La etapa fetal, que se extiende desde la novena semana hasta el

En general se puede resumir que el desarrollo ocurre durante toda la

Tiene caractersticas particulares en sus diferentes periodos o etapas y

Las malformaciones congnitas en el periodo embrionario.

La hipertensin arterial en el adulto.

Por todo lo anterior el desarrollo constituye un componente esencial en el

Como se sabe, un nivel superior de organizacin de la materia es el nivel

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Las partes del cuerpo humano son:

Cada una de estas partes se sub-dividen en regiones.

REGIONES DE LA CABEZA Y CUELLO