La espectrometra ultravioleta-visible o espectrofotometra UVVIS
implica la espectroscopia de fotones en la regin de radiacin ultravioleta-visible. Utiliza la luz en los rangos visible y adyacentes (el ultravioleta (UV) cercano y el infrarrojo (IR) cercano. En esta regin del espectro electromagntico, las molculas se someten a transiciones electrnicas.
Esta tcnica es complementaria de la espectrometra de
fluorescencia, que trata con transiciones desde el estado excitado al estado basal, mientras que la espectrometra de absorcin mide transiciones desde el estado basal al estado excitado.
La espectroscopia ultravioleta-visible o espectrofotometra
ultravioleta-visible (UVVIS ) es una espectroscopia de emisin de fotones y una espectrofotometra. Utiliza radiacin electromagntica (luz) de las regiones visible, ultravioleta cercana (UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro electromagntico, es decir, una longitud de onda entre 380nm y 780nm. La radiacin absorbida por las molculas desde esta regin del espectro provoca transiciones electrnicas que pueden ser cuantificadas. La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos grupos funcionales de molculas, y adems, para determinar el contenido y fuerza de una sustancia. Se utiliza de manera general en la determinacin cuantitativa de los componentes de soluciones de iones de metales de transicin y compuestos orgnicos altamente conjugados. Se utiliza extensivamente en laboratorios de qumica y bioqumica para determinar pequeas cantidades de cierta sustancia, como las trazas de metales en aleaciones o la concentracin de cierto medicamento que puede llegar a ciertas partes del cuerpo.
La ley de Beer-Lambert
establece que la absorbancia de una solucin es directamente
proporcional a la concentracin de la solucin. Por tanto, la espectrometra UVVIS puede usarse para determinar la concentracin de una solucin. Es necesario saber con qu rapidez cambia la absorbancia con la concentracin. Esto puede ser obtenido a partir de referencias (las tablas de coeficientes de extincin molar) o, con ms exactitud, determinndolo a partir de una curva de calibracin.
La ley de Beer-Lambert es til para la caracterizacin de muchos
compuestos, pero no sirve como relacin universal para la concentracin y absorcin de todas las sustancias. En molculas complejas de gran tamao, como los tintes orgnicos (Xylenol Naranja o Rojo Neutro, por ejemplo), a veces se encuentra una relacin polinmica de segundo orden entre la absorcin y la concentracin.
Ley de Beer-Lambert
No debe confundirse con Ley de Lambert.
En ptica, la ley de Beer-Lambert, tambin conocida como ley de
Beer o ley de Beer-Lambert-Bouguer es una relacin emprica que relaciona la absorcin de luz con las propiedades del material atravesado. La ley de Beer fue descubierta independientemente (y de distintas maneras) por Pierre Bouguer en 1729, Johann Heinrich Lambert en 1760 y August Beer en 1852. En forma independiente, Wilhel Beer y Johann Lambert propusieron que la absorbancia de una muestra a determinada longitud de onda depende de la cantidad de especie absorbente con la que se encuentra la luz al pasar por la muestra.
Limitaciones de la ley de Lambert-Beer
Esta ley permite establecer una relacin lineal entre absorbancia y
concentraciones de una especie absorbente a una temperatura dada. La representacin de absorbancia frente a concentracin es una recta que pasa por el origen. Sin embargo, se encuentran frecuentes desviaciones con relacin a la proporcionalidad directa entre absorbancias y concentraciones que limitan la aplicacin de la ley. Las principales causas son: La concentracin. Slo es aplicable a disoluciones diluidas (menor 10-2 M); en disoluciones concentradas la distancia entre partculas absorbentes es tan pequea que se produce una modificacin en la distribucin de cargas de las mismas, lo que se traduce en una alteracin en la capacidad de absorcin a una longitud de onda determinada. Este efecto se puede eliminar mediante dilucin.
La interaccin entre el soluto y la radiacin debida a mecanismos
diferentes a la absorcin pero que producen alteraciones en la intensidad de la luz, tales como la dispersin, reflexin, la fluorescencia, etc.
Utilizacin de radiacin no monocromtica, puesto que la ley est
definida para radiaciones con una sola longitud de onda. Sin embargo, si la calidad del equipo no es buena, se obtienen bandas de radiaciones con un estrecho intervalo de longitudes de onda.
Falta de uniformidad de la muestra o especie absorbente, o
presencia de impurezas.
Desviaciones qumicas, debidas a reacciones del absorbente con
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