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HEMOGLOBINAS

ELETROFORESES E
OUTRAS METODOLOGIAS
PONTIFCIA UNIVERSIDADE
CATLICA DE GOIS
CBB-BIOMEDICINA
Prof.Luiz Murilo Martins de Arajo
PERFIL DAS HEMOGLOBINAS
MAIS COMUNS

% ADULTO % FETO
Hb A - 2 2 96 - 98 TRAOS

Hb A2 - 2 2 AT 3.5-4.0 TRAOS

Hb F - 2 2 TRAOS 99
HEMOGLOBINAS ANORMAIS MAIS FREQENTES
Hb S - 2 2(6: GLU VAL)

Hb C - 2 2(6: GLU LIS)

Hb DLos Angeles-Punjab - 2 2(121: GLU GLN)

Hb MBOSTON - 2(58:HIS TIR) 2 (Metahemoglobina)

Hb H - 4

Hb BARTS - 4
HEMOGLOBINAS ANORMAIS MAIS FREQENTES
Hb Lepore - Pareamento no homologo
entre os genes e (Hbrido -, sendo
a parte inicial, amino terminal semelhante
a gama e a terminal, carboxila,
semelhante a beta)

Hemoglobinas Instveis:
Hb Torino - 2(43:PHE VAL) 2
Hb Koln - 2 2(98:VAL MET)
Diversidade das Hemoglobinas
anormais

Variantes 920
Talassemia 300
Outras 150
Fonte: http\\www.globin.cse.psu.edu
OUTRAS HEMOGLOBINAS
ANORMAIS
Hb E - 2 2(26: GLU LYS)
Hb J Baltimore - 2 2(16: GLY ASP)
Hb N Baltimore - 2 2(95: LYS GLU)
Hb O Arbica - 2 2(121: GLU LYS)
Hb Porto Alegre- 2 2(9: SER CIS)
Hb K Woolwich - 2 2(132: LYS GLN)
OUTRAS HEMOGLOBINAS
INSTVEIS

Hb Rio Claro - 2 2(34: VAL MET)


Hb Zurich - 2 2(63: HIS ARG)
Hb Santa Ana - 2 2(88: LEU PRO)
Hb Niteroi - 2 2(42-44:PHE/GLU/SER 0)
HB Koln - 2 2(98: VAL MET)
Hb Camperdown - 2 2(104: ARG MET)
OUTRAS HEMOGLOBINAS
VARIANTES

Hb G Philadelphia - 2 68: ASN LIS 2


Hb I - 2 16: LYS GLU 2
Hb J Oxford - 2 15: GLY ASP 2
Hb J Rovigo - 2 53: ALA ASP 2
Hb Constant Spring - 2 142: STOP GLN 2
OUTRAS HEMOGLOBINAS
INSTVEIS
Hb Hasharon - 2 47: ASP HIS 2
Hb Stanleyville II - 2 78: ASN LIS 2
Hb G Pest - 2 74: ASP ASN 2
Hb Kurosaki - 2 7 : LYS GLU 2
Hb Westmead - 2 122: HIS GLN 2
Hb Campinas - 2 26: ALA VAL 2
Prevalncia de hemoglobinopatias em 238 amostras
coletadas para estudo eletrofortico de hemoglobinas no
Laboratrio lmina-Rj, no ano de 2000.

61 FITAS(25,6%) APRESENTARAM HEMOGLOBINAS


ANMALAS:
Talassemia Alf a : 6/61 10%
Talassemia Beta : 23/61 - 38 %
Hemoglobinopatia AS: 22/61 36%
Hemoglobinopatia AC: 3/61 5%
Hemoglobinopatia AD: 1/61 1.5%
Hemoglobinopatia SS: 1/61 - 1.5%
Persistncia Hereditria
de Hemoglobina Fetal: 5/61 - 8%

DOS TALASSMICOS:
Talassemia Minor : 19/23 - 82%
Talassemia Intermedia : 4/ 23 - 18%
Ricardo P. Ducatti
LEPAH-CBB-UCG
ELETROFORESE EM PH
ALCALINO
ELETROFORESE
definido como sendo a migrao de
espcies carregadas eletricamente, que
ocorre quando as mesmas so dissolvidas
ou suspensas em um eletrlito, atravs do
qual uma corrente eltrica aplicada.
Esta tcnica de separao foi
desenvolvida pelo qumico Arne Tiselius
para o estudo de protenas em soro e por
este trabalho ele ganhou o prmio Nobel
em 1948.
SEQUNCIA BSICA DA
ELETROFORESE DE HEMOGLOBINAS
EM pH alcalino

(-) (+)

A2 G S K F A B
OA
H J I
RR
C D L
E
T
s
Bu
E D Los Angeles-Punjab
Lepore
ELETROFORESE DE Hb
BARTS E Hb H
SC AA
A2 D
LEPORE

Hemoglobina Lepore (10 %)


ALTERAES NA ESTRUTURA QUMICA DA
MOLCULA POR TROCA DE AMINOCIDOS

Hb A- pI 6.8

HbS - pI 6.85
HbG - pI 6.90
HbC - pI 6.95

Hb S: Glu (-) Val (o): pI 6.85


Hb G: Asn (o) Lis (+): pI 6.90
Hb C: Glu (-) Lis (+): pI 6.95

P.C.NAOUM, 2001
PERFS ELETROFORTICOS
A
- A : NORMAL
A
- S : Trao Falciforme (Banda A e S)
S
- S : Anemia Falciforme (Banda S)
S
- C : Falciforme/ Hb C (Banda S e C)
- Tal : Micro-Drepanocitose (Banda
S
S e aumento de A2 e F)
S - Tal : Banda S e Hb H
A - C : Hetereozigoto para Hemoglobina C
C - C : Homozigoto para Hemoglobina C
ELETROFORESE EM pH
ALCALINO, COM
HEMOLISADO COM
SAPONINA
ELETROFORESE EM PH
ACIDO
ELETROFORESE GAR-CIDO
ELETROFORESE GAR-
CIDO
ELETROFORESE COM
ISOFOCALIZAO
ELETROFORESE CAPILAR
ELETROFORESE MICROCAPILAR
ELETROFORESE CAPILAR
Tcnica que foi introduzida em 1981, por
Jorgenson e Lukacs e tem sido aceita
cada vez mais, como um importante
mtodo analtico.
Em sua forma mais simples uma
aproximao da tcnica original, descrita
por Tiselius, porm emprega-se um tubo
capilar, preenchido com um eletrlito,
conforme o prprio nome sugere.
Pode ser usada na determinao de
hidrocarbonetos aromticos, vitaminas
hidro e lipossolveis, aminocidos, ons
inorgnicos, cidos orgnicos, frmacos,
catecolaminas, substncias quirais,
protenas, peptdeos, etc.

Sonia Claudia do Nascimento de Queiroz


Isabel Cristina Sales Fontes Jardim (Universidade Estadual de Campinas,
Instituto de Qumica),
http://www.chemkeys.com/bra/md/mds_11/elecap_4/elecap_4.htm
Uma caracterstica a sua capacidade
nica para separar macromolculas
carregadas eletricamente de interesse tanto
em indstrias de biotecnologia quanto em
pesquisas biolgicas.
No projeto Genoma Humano foi necessrio
distinguir os diversos polinucleotdeos, com
massas molares, por volta de 200 a 500
Daltons (Dalton = u.m.a.) que diferiam entre
si por um nico nucleotdeo.
Somente a EC tem resoluo suficiente
para este tipo de separao.
Alm disso, o DNA humano contm cerca
de 3 bilhes de nucleotdeos e as altas
velocidades de anlises, obtidas pela EC,
permitiram que milhares de nucleotdeos
fossem seqenciados em um nico dia
O funcionamento do equipamento
envolve a aplicao de alta voltagem,
tipicamente 5 a 30 kV em um capilar de
dimetro reduzido gerando correntes na
faixa de 10 a 100 mA.
O uso do capilar apresenta vrias
vantagens, particularmente com respeito
ao aquecimento Joule.
A alta resistncia eltrica do capilar
permite a aplicao de campos eltricos
altos pois gera um aquecimento mnimo.
Alm disso o formato de capilar propicia
uma dissipao eficiente do calor gerado.
O uso de campos eltricos altos resulta
em tempo de anlise curto, alta eficincia
e resoluo.
O capilar preenchido com uma soluo
tampo e suas extremidades so
mergulhadas em recipientes, que contm
a soluo tampo, e onde aplicado um
campo eltrico, que gera uma corrente no
interior do capilar.
Os eletrodos so feitos de um material
inerte, tal como, platina, e so tambm
mergulhados na soluo para fechar o
circuito.
O capilar passa atravs de um detector,
usualmente um detector
espectrofotomtrico de absoro no
UV/Vis
VANTAGENS

Rapidez
Versatilidade
Baixo custo por anlise
Alto poder se separao (resoluo)
Consumo mnimo de amostras, reagentes
e solventes.
Possibilidade de automao e deteco
on-line.
DESVANTAGENS
No adequada para a determinao de
compostos volteis, no-polares e de
massa molar baixa, os quais so melhores
determinados por cromatografia gasosa.
Tambm no muito adequada para a
anlise de polmeros no inicos de
massa molar alta
No to sensvel quanto a cromatografia
lquida de alta performace
HPLC

Metodologia automatizada que a partir da cromatografia por


troca inica permite separar e definir a porcentagem de
diferentes hemoglobinas de uma forma precisa e rpida.
GEL CENTRIFUGAO
PARA Hb S
ID FALCIFORME, DIAMED
TESTE DE FALCIZAO
SOLUBILIDADE
DA
HEMOGLOBINA
EM TUBO E PAPEL
AMPLIFICAO GNICA PELA PCR
Bio-Rad