ANLISIS DEL PAPER: El experimento de mutagnesis dirigida al sitio identific ocho
Estructura cristalina y propiedad de unin al ADN del
dominio ATPasa de endonucleasa de reparacin del
desemparejamiento bacteriano MutL de Aquifex aeolicus
AGUILAR PRADO, XIMENA; ARENAS PACHECO, KRISTELL; CORONEL
MONJE, KATIUSCA; MOLER VALENCIA, ROBERTO; ORTIZ ROMERO,
DERLY; PARI CHECA, JANETH; QUEPUY SALAS, MARIELA, SNCHEZ
VERA PATRICIO
Escuela Profesional de Ingeniera Biotecnolgica, Facultad de Ciencias
Farmacuticas, Bioqumica y Biotecnolgicas; Campus de la Universidad
Catlica de Santa Mara, Arequipa, PER
RESUMEN
El sistema de reparacin de falta de coincidencia de ADN (MMR) corrige
las bases no coincidentes que se generan principalmente por los errores
de replicacin del ADN.
El sistema de reparacin elimina la regin monocatenaria que contiene
errores y permite la resntesis de la hebra. En las primeras reacciones de
MMR, la endonucleasa MutL corta la hebra recin sintetizada / que
contiene errores del dplex para iniciar la reaccin de escisin aguas
abajo. MutL endonucleasa consiste en la ATPasa N-terminal y dominios de
endonucleasa C-terminales.
En este estudio, informamos la estructura cristalina del dominio ATPasa
de MutL endonucleasa de Aquifex aeolicus.
aminocidos bsicos que interactan con el ADN residuos, que se
distribuyeron a travs de los dos subdominios y formaron una hendidura
de unin de ADN.
INTRODUCCION
En las clulas vivas, las bases desparejadas son generadas por varios tipos
de procesos biolgicos que incluyen errores de replicacin de ADN, ADN
oxidativo daos, recombinacin entre secuencias no idnticas, el sistema
de reparacin de desajustes (MMR) reconoce y corrige esos errores
Las reacciones de MMR se inician cuando se reconoce una base no
coincidente por MutS. MutS, entonces, activa MutL endonucleasa, que
introduce una ruptura de una sola cadena a la recin sintetizada (es decir,
que contiene errores) hebra del dplex no coincidente para discriminar la
cadena hija y cadenas parentales.
MutL endonucleasas se comunican con abrazaderas deslizantes de
replicacin (pinzamiento bacteriano y proliferacin eucariota) antgeno
nuclear celular (PCNA). Despus de la incisin por MutL endonucleasa,
una exonucleasa corta la cadena que contiene el error, y la regin con
huecos resultante se llena con una ADN polimerasa replicativa. En
eucariotas, MutL es un contribuyente importante para proporcionar el
actividad de endonucleasa para la incisin de cadena hija en la reaccin
de MMR.
Human MutL es un heterodmero compuesto por PMS2 y
MLH1.Mutaciones en la lnea germinal o silenciamiento epigentico de
genes para PMS2 y Se sabe que MLH1 causa el sndrome de Lynch y otros
tumores espordicos En la mayora de las bacterias, excepto para los
miembros de la -proteobacteria el mecanismo de MMR se asemeja al de
eucariotas MMR, Dado que el MutL de longitud completa tiende a
agregarse, la cristalizacin de la protena intacta no ha tenido xito. El
primer avance en los estudios estructurales de MutL fue el informe sobre
la estructura cristalina de E. dominio Coli MutL ATPasa (residuos 1-349).
Posteriormente, las estructuras cristalinas de PMS2 humano [34], MLH1 y
levadura Pms1 (a contraparte para PMS2 humano) se resolvieron los
dominios ATPasa. Los las estructuras generales de los cuatro son similares
entre s. Las estructuras revelaron cmo se constituye el sitio cataltico
ATPasa y explic por qu las mutaciones en el gen mlh1 humano pueden
causar el sndrome de Lynch. Por ejemplo, 9 mutaciones sin sentido (P28L,
M35R, S44F, G67R, I68N, I107R, T117R, T117 M y R265H) encontrado en
MLH1 humano del sndrome de Lynch familia se encuentran alrededor del
bolsillo de unin ATP, lo que indica que estas mutaciones causan la
disfuncin de la MMR al perturbar la ATPasa actividad de humanos
MutLLos dominios de ATPasa de E. coli y las protenas MutL eucariotas
estn compuestos por los dominios de unin a ATP N-terminales y a- C-
terminales. El primero contiene motivos Bergerat ATPasa y se espera que
forme una interfaz dmera sobre la unin a ATP. Aunque la funcin del
subdominio de sndwich - se comprende menos, se ha pensado que los
dos subdominios participan en la unin de ADN. En el subdominio de
sndwich - del E. coli MutL NTD, la mutagnesis de Arg266 hacia un
glutamato disminuy pero no anul la actividad de unin al ADN. Tambin
se revel que la triple mutacin R162E / R266E / R316E dio como
resultado la eliminacin de la actividad de unin a ADN de E. coli MutL
NTD.
En este estudio, describimos la estructura cristalina de resolucin de 3,44
el dominio ATPasa de MutL endonucleasa de un hiper termfilo
eubacterium Aquifex aeolicus. Dado que las protenas de los termfilos
son extremadamente estable y tolerante a las mutaciones, mutagnesis
dirigida al sitio los estudios son relativamente sencillos de llevar a cabo.
ADN vinculante ensayos con protenas mutantes reveladas previamente
no identificadas Residuos de unin a ADN en los subdominios sndwich
de unin a ATP y -. Sobre la base de estos resultados y la base de
simulacin de acoplamiento estructura modelo de A. aeolicus MutL de
longitud completa (aqMutL), el enlace de ADN modo de la MutL de larga
duracin se discute.
MATERIALES Y METODOS
1. Construccin de plsmidos:
Los fragmentos de ADN que codifican la DTN de aqMutL se generaron
mediante PCR utilizando ADN genmico de A. aeolicus VF5 como plantilla.
El delantero y los iniciadores inversos utilizados para la amplificacin
fueron 5'ATATCATATGCCTGAAGTAAGA AAGGTAATA GCGG-3 ' y 5'-
ATATAGATCTTTAAATATCTACGATAGGTTTCTC-3', el delantero y los
cebadores inversos contenan sitios NdeI y BglII, respectivamente.
El fragmento amplificado se clon en el vector pET-11a usando sitios
NdeI y BamHI. Los plsmidos de expresin para R156E, K158E, K161E,
R167E, R168E, R247E, K252E, R259E y K265E mutantes de la aqMutL NTD
fueron construido al introducir las mutaciones en pET-11a / aqmutL NTD
plsmido usando el procedimiento de mutagnesis PrimeSTAR.
El conjunto de cartillas utilizadas para la construccin de estos mutantes
fueron 5'-
CCCGTCGAGAGAAAGTTCTTAAAAAAG-3 'y 5'-CTTTCTCTCGACGGGGAGATT
GAAAAA-3 ', 5'AGGAGAGAGTTCTTAAAAAAGGAGGAT-3' y 5'-TAAGAACT
CT CTCCTGACGGGGAGATT-3 ', 5'-TTCTTAGAAAAGGAGGATACCGAAAGG-3
'y 5'-CTCCTTTTCTAAGAACTT TCTCCTGAC-3 ', 5'-GAAAG GGAAAA
GGTACTG GAACTTATC-3' y 5'-TACCTTTTCCCTTTCGGTATCCTCCTT-3 ', 5'
AGGAGAGAGGTACTGGAACTTATCAAG-3'y 5'-CAGTACCTCTCTCCTTTCG
GTATCTC-3',5'-AACAAAGAACCTATTCAGAATAAGAA-3' y 5'AATAGGTTCTTT
GTTTATAAAGACATA-3 ', 5'-TCAGAATG AGAACTTAAAGGA GTTCCT G-3' y
5'-AAGTTCTCATTCTGAATAGGTCTTTTG-3',5'-GTTCCTGGAGAAGGTTTTCGG
TTACAA-3'y 5'-ACCTTCTCCA GGAACTCCTTTA AGTT-3 ', 5'-
CGGTTACGAAACTCTAGTAGTTCTTT-3' y 5'-AGAGTTTCGTAACCGAAAAC
CTTCCT-3 ', respectivamente.
El anlisis de secuencia confirm que, adems de las mutaciones
deseadas, no hay mutaciones adicionales que fueran introducidas en el
gen mutL.
1.2 Expresin y purificacin de protenas:
Las clulas se cultivaron adicionalmente a 37 C durante 3 horas. Las
clulas se lisaron mediante sonicacin en tampn I (50 mM Tris-HCl (pH
8,0) y ditiotreitol 0,1 mM) y se calent a 80 C durante 15 minutos. El
lisado se enfri en hielo durante 10 minutos. Despus de la centrifugacin
en 15,000 x g por 15 min, el sobrenadante se carg en un SP-sepharose
(Columna de salud de GE) (20 ml). La columna se lav con 50 ml de
tampn I y lavado adicional con 50 ml de tampn I que contiene 100 mM
NaCl. La protena se eluy con 50 ml de tampn I que contiene 300 mM
NaCl. Las fracciones que contienen la NTD aqMutL fueron detectadas por
SDSPAGE.
Se aadi sulfato de amonio a la fraccin para producir una
concentracin final de 1 M. La solucin se carg en una Columna
Toyopearl-Fenilo (40 ml) (TOSOH) equilibrada con tampn I que contiene
sulfato de amonio 1 M La columna fue lavada con 100 ml de tampn I que
contiene sulfato de amonio 1 M, y luego eluido con 50 ml de tampn I
que contiene 0,3 M de sulfato de amonio. Las fracciones que contenan
aqMutL NTD se detectaron mediante SDS-PAGE, y dializado frente a un
litro de tampn I tres veces a 4 C.
La concentracin de protena se determin sobre la base del valor de la
absorbancia a 278 nm. El coeficiente de extincin molar terico para la
protena (11,900 M-1 cm-1) se calcul usando las descripciones
previamente descritas en el mtodo. Los mutantes de la aqMutL NTD
fueron preparados por el mismo procedimiento que para el NTD aqMutL
de tipo salvaje. Los espectros ultravioleta de dicrosmo circular de las
protenas mutantes fueron idnticos al de wildtype lo que indica que las
mutaciones no interfieren con la formacin de la estructura secundaria en
las protenas mutantes. El CTD y la longitud completa de aqMutL se
prepararon como se describi anteriormente
1.3 Cristalizacin y Determinacin Estructural
La AqMutL NTD fue cristalizada por el mtodo de gota colgante, usando
kits de cristalizacin que fueron comprados de Hampton. Un microlitro de
solucin de protena a 11,8 mg/ml se mezcl con un volumen igual de
solucin. La gota fue equilibrada con 50 L de solucin a 20 C. Despus
de la optimizacin de la cristalizacin inicial, conveniente para la
cristalografa de rayos X, se prepararon las muestras con 100 mM Bis-Tris
(pH 5.5) de y 3 M NaCl.
Mtodo de gota colgante: La solucin proteica se encuentra en
una gota suspendida de la parte inferior de una lmina de microscopio. El
tamao de la gota oscila normalmente entre los 0,5 l y los 20 l. La
solucin del pocillo (ca. 1 ml), que se encuentra en un reservorio por
debajo de la gota, posee una elevada concentracin de precipitante y
dispone, por tanto, de una presin de vapor inferior a la de la solucin
proteica. Durante el experimento, el agua de la gota se evapora sobre la
solucin del recipiente. De esta manera, la concentracin proteica de la
gota aumenta, junto con la concentracin de otros materiales. En
condiciones favorables, la cristalizacin tendr lugar al cabo de unos das
o semanas.
Cristalografa de rayos x: Es una tcnica experimental para el
estudio y anlisis de materiales, basada en el fenmeno de difraccin de
los rayos X por slidos en estado cristalino. Los rayos X son difractados
por los electrones que rodean los tomos por ser su longitud de onda del
mismo orden de magnitud que el radio atmico.
El cristal de la aqMutL NTD fue empapado en 25% PEG3, como
crioprotector y fue crio-enfriado en una corriente de gas nitrgeno. Los
datos fuern recolectados a una longitud de onda de 1.0000 en el
BL38B1. Los datos se procesaron con el programa HKL2000. La estructura
de la aqMutL NTD fue resuelta por reemplazo molecular usando el
programa de Phaser. La estructura cristalina de Escherichia coli MutL NTD
(1BKN) fue utilizado como un modelo de bsqueda. El modelo fue
refinado utilizando los programas PHENIX y COOT. La estereoqumica de
la estructura se comprob utilizando el programa PROCHECK en la base
CCP4. Las coordenadas atmicas y los factores de la estructura (cdigo
5X9Y) han sido depositadas en el Protein Data Bank.
HKL-2000 se basa en las versiones extendidas de Denzo, XdisplayF
y Scalepack. Consiste en varios subprogramas, coordinados por el centro
de comando grfica. Los elementos nuevos ms importantes son:
estrategia y simulacin, procesamiento de 3D, de estructuras
macromoleculares.
Escherichia coli MutL NTD modelo de protena conservada a
travs de la evolucin.
Protein Data Bank es una base de datos de la estructura
tridimensional de las protenas y cidos nucleicos. Estos datos,
generalmente obtenidos mediante cristalografa de rayos X o resonancia
magntica nuclear, son enviados por bilogos y bioqumicos de todo el
mundo. Estn bajo el dominio pblico y pueden ser usados libremente.
1.4 Ensayo de Desplazamiento de Movilidad Electrofortica
Los 15, 20, 25, 30- y 60 DNAs monocatenarios 5-CGGTATCTTGACTAT-3,
5CGGTATCTTGACTATGACCG-3 , 5-CGGTATCTTGACTATGACCGCTCTA-3,
y 5-CGGTATCTTGACTATGACCGCTCTACGAGC-3, y
5AGGAACCTCGAGGGAT CCGTCCTAGCAAGCCG CTGCTAC
CGGAAGCTTCTCGAGGTTCCT (BEX Co) se alineo complementarios
monocatenario DNAs (BEX Co.) para obtener 15, 20, 25, 30 y 60 bp
dsDNAs. }
El 20 nM dsDNA fue incubado con diferentes concentraciones de aqMutL
NTD o su mutante en 50 mM Tris-HCl (pH 8,0), 100 mM NaCl, 2,5 mM
MgCl2, 1 mM TDT y 0,2 mg/ml de albmina de suero bovino durante 30
min a 25 C. La mezcla de reaccin (10 l) se carg en gel de
poliacrilamida al 9% y luego en buffer TBE (89 mM Tris borato y 2 mM
EDTA).
dsDNA es un virus en el que su material gentico est compuesto
por ADN de doble cadena y se replica usando una ADN polimerasa
dependiente del ADN, no usando el ARN como intermediario durante la
replicacin. Son los virus ADN ms diversos y frecuentes y corresponden
al Grupo I de la Clasificacin de Baltimore.
El gel fue teido con SYBR gold (Invitrogen) y detectado bajo luz UV en
254 nm. Con el fin de separar las protenas dependientes del substrato
DNA en el gel, se llev a cabo la coloracin en el buffer TBE que contiene
1 M NaCl. Las cantidades de DNAs tamizadas y libres se determinaron
utilizando analizador de CS 3.0 (ATTO). % Valor de la seleccin se calcul
como porcentaje de las seales cambiadas de posicin a todas las seales
en cada carril:
%Seleccin=100(Sshifted )/(Sfree Sshifted)
en la que Sshifted y Sfree son las cantidades de cambio de posicin y sin
seales de ADN en cada carril. Entonces, la constante de disociacin (Kd)
fue determinada por el ajuste de curvas tericas basadas en la ecuacin
(1), los valores del % seleccin utilizando la versin de Igor Pro 5.03
(WaveMetrics).
Constante de disociacin o Kd es definida en termodinmica
qumica como la relacin matemtica que se establece a partir de las
concentraciones de los compuestos qumicos que se forman en una
reaccin de disociacin al alcanzar su punto de equilibrio.
Para probar la cuantitatividad de esta electroforesis tras la tincin, se
realiz un ensayo con un dsDNA de 25bp marcada con fluorescencia y en
comparacin con los resultados. Marcados con Cy5 5 ADN (5-
CGGTATCTTGACTATGACCGCTCTA-3 ') fue transformado a DNA
monocatenario complementario. no etiquetado El dsDNA generado fue
sometido a un ensayo de cambio de movilidad electrofortica con la
aqMutL NTD. Se contaron las seales de DNAs libres y que cambiaron de
lugar. Los resultados con marcado con Cy5 dsDNA fueron casi los mismos
que con la coloracin SYBR gold. Por lo tanto, la cuantificacin con SYBR
oro despus de la electroforesis fue considerada lo suficientemente
confiable y empleada en los ensayos con dsDNAs de diferentes
longitudes.
 SYBR Gold es el ms sensible de los tintes s probados para la
deteccin visual directa de dsDNA y es posible ver a menos de 100 pg de
dsDNA.
1.5 Simulacin de acoplamiento entre NTD y CTD de aqMutL
La protena CA en el contexto de Gag juega un papel decisivo en el
ensamblaje de la cpsida inmadura. CA est formada por dos dominios,
el Nterminal (NTD) y el Cterminal (CTD). Ambos son pequeos,
globulares y predominantemente helicoidales. NTD contiene las hlices
1 a 7 de CA, y est conectado por una regin bisagra flexible con CTD, que
contiene una pequea hlice 310, una regin extendida y las hlices 8 a
11 de CA. En las imgenes de crioEM de la cpsida inmadura se ha
observado que las molculas de Gag interaccionan entre s formando
una red hexagonal. En esta red, la capa definida por los dominios NTD de
CA adopta una disposicin en anillos hexamricos en torno a huecos
relativamente grandes. Debajo de esta capa se disponen los dominios
CTD de CA que se asocian en dmeros y se ordenan en torno a huecos algo
ms pequeos. Ms abajo aparecen estructuras alargadas que forman
hexmeros y parecen corresponder a pptidos SP1. Estas estructuras
descienden en la cpsida hasta llegar a la capa ms interna, constituida
por la nucleocpsida ARNNC A pesar de que la organizacin general est
relativamente definida, an no se han descrito con claridad qu regiones
de Gag estn implicadas en su hexamerizacin y en la interaccin entre
hexmeros vecinos. Se ha demostrado que el dominio NTD de CA es
prescindible para el ensamblaje de la cpsida inmadura, pero por otro
lado se ha encontrado que las mutaciones que impiden el correcto
ensamblaje de la cpsida inmadura se localizan tanto en NTD como en
CTD. Este mismo anlisis mutacional revel que la interfase de
dimerizacin CTDCTD (fundamental para la polimerizacin de la
cpsida madura) podra estar tambin implicada en la organizacin de la
cpsida inmadura. .Estos mutantes de la polimerasa que pueden
transcribir normalmente la mayora de los genes , pero que CAP en los
genes lagno puede activarlas . Estos mutantes poseen sustitucin en el
dominio C-terminal (CTD) de la subunidad de la RNA polimerasa .Este
dominio se une al dominio N terminal (NTD) de esta incluido en el
cuerpo de la enzima , mientras que el CTD sobresale de esta y se une al
elemento UP del promotor , siempre y cuando est elemento.
RESULTADOS Y DISCUSION
2 Estructura general del dominio aqMutL ATPase:
En este estudio se emple la cristalografa de rayos X para determinar la
estructura cristalina de la NTD aqMutl. Se refin a factores Rwork y Rfree
respectivamente que representan el valor R cristalogrfico permitiendo
evaluar el acuerdo de un modelo refinado con los datos.
Las formas de simetra: cristalogrfica y no cristalogrfica se diferenciaban
de la interfaz dmera.
En solucin se propone que el aqMutl NTD existe como una forma
monomrica a travs de ngulos muy bajos con la tcnica de dispersin
de ngulo pequeo (SAXS) a y anlisis de filtracin en gel , adems es
considerada de esta forma porque el rea de la superficie enterrada
accesible a la asociacin es inferior a 850 A La secuencia de aminocidos
de esta estructura vara con la de las protenas Mutl. Sin embargo, la
estructura cristalina de la NTD aqMutL es similar a la de la endonucleasa
MutL humana PMS2 y E. coli MutL.
La raz media de las desviaciones cuadradas entre aqMutL NTD y humanos
PMS2 NTD o E. coli MutL NTD fueron 2.44 o 1.82 , respectivamente.
Aunque la estructura de una parte de los motivos ATPasa (residuos
67-92, ver cabezas de flechas rojas en la Fig. 2A) en el aqMutL NTD era
desordenado, el resto de los motivos fueron ordenados y ubicados al
mismo posiciones como las de E. coli MutL NTD.
Residuos 42-44 y 194-197 del aqMutL NTD tambin estaban
desordenados en la estructura cristalina aunque la regin
correspondiente en la forma de la apo E. coli MutL NTD se
Ordenado. Por el contrario, los residuos 150-161 del aqMutL NTD fueron
Ordenado, mientras que la regin correspondiente (residuos 149-162) fue
desordenados en E. coli MutL NTD . Residuos 280-289 del aqMutL NTD y
la regin correspondiente en E. Coli MutL NTD fueron ambos
desordenados en la estructura cristalina. Confirmaron que los residuos
encontrados en Las interfaces MutL / MutS fueron esenciales para in
vitro. Algunos de los los residuos correspondientes se conservan en la
estructura aqMutL NTD lo que sugiere que aqMutL interacta con MutS
en un similar a la interaccin E. coli MutS-MutL.
2.1 Distribucin de carga en la superficie del dominio MutL ATPase
Para conocer el tipo de union de DNA de MutL es esenciar conocer su
funcin molecular. Sin embargo informacipon de la estructura atmica de
DNA-MutL. Por lo tanto, se analiz el mapa del potencia electrosttico de
aqMutL NTD, que revel dos fases: bsica y acida. El conjunto de cargas se
esparce a travs de los lmites del sitio de unin de ATP y los subdominios
- sndwich.Este tipo de racimo de cargas no es obvio en NTD de E. coli
MutL. De todas maneras, la estructura terciaria predicha sugiera que estas
cargas se conservan en las cargas de la endonuclease MutL. Entonces, se
hipotetiza que las cargas positivas del racimo son importanes para la
unin de DNA de aqMutL NTD.
2.2 Sitio de unin al ADN del subdominio de unin a ATP
Aunque la E. coli MutL NTD parece no tener un gran grupo de residuos de
aminocidos cargados positivamente, se inform que varios residuos en el
subdominio de unin a ATP estn implicados en la actividad de unin al
ADN. Se prepararon mutantes R156E, K158E, K161E, R167E y R168E de la
NTD aqMutL y se analizaron las actividades de unin a ADN de estos NTD
mutantes mediante un ensayo de cambio de movilidad electrofortica.
Aunque el ensayo de desplazamiento de movilidad electrofortica podra
ser menos cuantitativo que otros mtodos basados en resonancia de
plasmn superficial o calorimetra de titulacin isotrmica, este mtodo
semicuantitativo sera lo suficientemente fiable como para detectar la
diferencia en las actividades de unin al ADN entre protenas mutantes y
de tipo salvaje.
2.3 Una hendidura entre los subdominios de la NTD aqMutL une ADN
Los residuos requeridos para la unin al ADN estn mapeados en la
estructura cristalina de aqMutL NTD. El bsico que interacta con el ADN
los residuos se encuentran tanto en el sndwich de unin al ATP como en
el sndwich - subdominios y componer una hendidura con carga
positiva. El sustrato se espera que dsDNA se una a esta hendidura cargada
positivamente. Esta hiptesis fue propuesta previamente para levadura
Pms1 por Schorzman et al., que observ la proteccin dependiente de la
unin al ADN de la regin de la hendidura de protelisis y oxidacin
limitadas. Se identific varios adicionales bsicos vinculantes de ADN
Residuos.
2.4 Estructura del modelo del aqMutL de longitud completa
manera fcil y rpida modelos estructurales de complejos protena-
protena y multmeros simtricos para su propio anlisis.
Conclusiones:
En este estudio se determino la estructura cristalina de la bacteria MutL
endonuclease ATPase domain. La estructura terciaria general era muy
similar a los de humanos y homlogos de E. coli MutL a pesar de la baja
homologa en la estructura primaria. Esto implica que el conjunto
estructura de la protena MutL se form en un paso relativamente
temprano en el evolucin de la vida y se ha mantenido desde entonces.
Nuestra estructura cristalina revel que el aqMutL NTD tiene una gran
base y -caras cidas.

Las interacciones protena-protena son esenciales para la funcin celular

e inmune, y en muchos casos, debido a la ausencia de una estructura
determinada experimentalmente del complejo, estas interacciones deben
ser modeladas para obtener una comprensin de su base molecular.
Presentamos un servidor de acoplamiento de protenas fcil de usar,
basado en los programas de acoplamiento de cuerpo rgido ZDOCK y M-
ZDOCK, para predecir estructuras de complejos protena-protena y
multmeros simtricos. Con el objetivo de proporcionar una interfaz
accesible e intuitiva, brindamos opciones para que los usuarios guen el
puntaje y la seleccin de los modelos de salida, adems de la visualizacin
dinmica de las estructuras de entrada y los modelos de acoplamiento de
salida. Este servidor permite a la comunidad de investigacin producir de