Metabolitos secundarios

1) No son esenciales para el crecimiento

2) Generalmente se producen como mezclas de productos muy
relacionados qumicamente entre s.
3) La produccin puede perderse fcilmente por mutacin espontnea
4) Cada uno de estos productos es producido por un grupo muy
reducido de organismos

ANTIBIOTICOS

ANTITUMORALES: doxorubicina
bleomicina
zinostatin
INHIBIDORES DE PROTEASAS: leupeptina
aprotinina
INHIBIDORES DE LA SINTESIS DEL COLESTEROL: compactina
lovastatina
INMUNOSUPRESORES : ciclosporinaA
FK506 (tracolimus)
ANTITUMORALES:
Doxorubicina. S. peuceticus
Bleomicina S. verticullus

Zinostatina S. macromomyceticus

INHIBIDORES DE PROTEASAS Y PEPTIDASAS

Leupeptina, aprotinina A58365A Streptromyces sp
Streptomyces sp
INHIBIDORES DE LA SINTESIS DEL COLESTEROL
HMG CoA
Compactina (Penicillium) HMG CoA Estatinas
Reductasa
Mevalonato
Lovastatina (Aspergillus)
Geranil PP

Farnesil PP

Escualeno

CH3 Colesterol

INMUNOSUPRESORES
CiclosporinaA
FK506 (tracolimus)
ANTIBITICOS

INTRODUCCIN
GRUPOS DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES
APLICACIONES
IMPORTANCIA ECONOMICA

CLASIFICACIN DE LOS ANTIBITICOS POR

SU MECANISMO DE ACCIN:

ANTIBITICOS QUE ACTAN SOBRE LA PARED

CELULAR.
ANTIBITICOS LACTMICOS
MODO DE ACCIN
ESTRUCTURA QUMICA
BIOSNTESIS Y REGULACIN
TECNICAS DE ESTUDIO
DESARROLLO DE CEPAS
MTODOS DE PRODUCCIN
GRUPOS DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE
ANTIBIOTICOS

Hongos filamentosos:
Penicillium (penicilina)
Aspegillus
Acremonium (cefalosporina)
Actinomicetos, familia Streptomycetaceae.
Streptomyces (tetraciclina, eritromicina, estreptomicin
Nocardia
Micromonospora
Familia Bacillaceae. Ej.
Bacillus (bacitracina, gramicidina y polimixina)
APLICACIONES

1) Como agentes quimio-terapeticos.

2) Antibiticos utilizados en patologa de plantas.
3) Antibiticos usados para aumentar el crecimiento de los
animales en veterinaria.
5) Antibiticos usados como herramientas en bioqumica
y en biologa molecular.

IMPORTANCIA ECONOMICA
Aproximadamente 30000 toneladas/ao.24 billones de $

Debe continuar la bsqueda de nuevos antibiticos?

PARED CELULAR

Gram- Gram+
CLASIFICACIN DE LOS ANTIBIOTICOS POR SU
MECANISMO DE ACCIN
1.- Antibiticos que afectan a la pared celular:
Bloquean la sntesis del peptidoglicano
fosfomicina, cicloserina, bacitracina, vancomicina, beta-lactmicos
2.- Antibiticos que actan sobre la membrana plasmtica:
Polipeptidicos: polimixina B
Polienos: nistatina y la anfotericina B
Agentes imidazlicos
3.- Antibiticos que acta sobre la sntesis de protena
Actan sobre la transcripcin: Actinomicina y Rifamicina
Actan sobre la traduccin: Aminoglicsidos (estreptomicina,
kanamicina..etc), tetraciclinas, cloranfenicol y eritromicina.

4:- Antibiticos que actan sobre el DNA.

Mitomicina, novobiocina, cido nalidixico.
Antibiticos que afectan a la pared celular

Los aminoazcares son de dos tipos

N-acetylglucosamina (NAG) y su pariente
cido N-acetylmuramic acid (NAM).
INTERIOR

EXTERIOR autolysins
 N acetilglucosamina 1P N acetilglucosamina 6P Glucosamina 6P Fructosa 6P
UTP
P-P
UDP-NAG Glutamato Glutamina
CICLOSERINA
PEP FOSFOMICINA

NADPH Lala Dglu DAP Dala-Dala 2D-ala 2L-ala

NADP
UDP-NAM UDP-NAM
pentapptido
Lpido-P Lipido-P-P-NAM
(Bactoprenol) pentapptido
BACITRACINA
INTERIOR UDP-NAG
Lpido-P-P
UDP

EXTERIOR Lipido-P-P-NAM-NAG
pentapptido
NAM-NAG-NAM-NAG+NAM-NAG NAM-NAG-NAM-NAG
pentapptido pentapptido pentapptido

VANCOMICINA PENICILINAS /CEFALOSPORINAS

Transpeptidacin
Resistencia a vancomicina en
enterococos, genes vanHAX
 Antibiticos que afectan a la membrana plasmtica

Polimixina B

(6, metil octanoico)

Efecto detergente
Antibiticos que afectan a la membrana plasmatica

Anfotericina B

La anfotericina B forma complejos con los esteroles de la

membrana y crea poros causando alteraciones en la
permeabilidad

Ketoconazol, fluconazol
Afectan a la ruta de biosntesis del ergosterol,
inhiben a la esterol-14-alfa-desmetilasa
 Actan sobre el DNA
(Actinomicina)
Transcripcin
Actan sobre RNA polimerasa
(Rifamicina)
Antibiticos que
inhiben la sntesis de
protenas
Actan sobre la subunidad 30S
(Aminoglicsidos y Tetraciclinas)
Traduccin
Iniciacin, Actan sobre la subunidad 50S
elongacin y (Cloranfenicol y Eritrocicina)
terminacin
Antibiticos que inhiben la sntesis de proteinas: Transcripcin

Actinomicina D

Rifamicina, R= H

Rifampicina, R=

R
Antibiticos que inhiben la sntesis de proteinas: Traduccin
Inhibidores de la sntesis de protenas a nivel de la subunidad 30S

AMINOGLICSIDOS
5 4 3
6 2 Estreptomicina
1
Tobramicina Streptomyces
Amicacina
Gentamicina Micromonospora

TETRACICLINAS

Tetraciclina
Aureomicina
Doxiciclina
Antibiticos que inhiben la sntesis de proteinas: Traduccin
Inhibidores de la sntesis de protenas a nivel de la subunidad 50 S

Cloranfenicol
Antibiticos que inhiben la sntesis de DNA

Mitomicina

Se une a la subunidad Beta de la DNA

girasa

Novobiocina
Antibiticos -lactmicos:

Penicillium chrysogenum
Antibiticos -lactmicos: Estructura qumica

anillo lactmico ncleo 6-APA

6-aminopenicilnico

anillo tiazolidinico

ncleo 7-ACA
7-aminocefalospornico
anillo lactmico

anillo dihidrotiazinico
Especies productoras de los principales grupos de antibiticos -lactmicos
Ncleo -lactmico Estructura Hongos Bacterias Gram (+) Gram (-)

Penam s Aspergillus
Penicillium
Epidermophytum
N Trichophyton
O
Cefem s Acremonium Streptomyces Flavobacterium
Anixiopsis Nocardia Xantomonas
Arachnomyces Lysobacter
N Spiroidium
O Scopulariopsis
o
Clavam Streptomyces

N
O

Carbapenem Streptomyces Serratia

Erwinia
N
O
Monobactam Nocardia Pseudomonas
Gluconobacter
Chromobacter
NH Agrobacter
O Acetobacter
Transpeptidacin

+ penicilina
Modificaciones de las Penicilinas

NATURAL PENICILLINS
 Penicillin G o V

Penicillin acylase (E. coli)

H2N

+ R-COOH

6-aminopenicillanic acid
La Cefalosporina C fue descubierta en el hongo Acremonium chrisogenum.
Tiene actividad contra bacterias Gram (-) y es ms estable que la Penicilina
G frente a las penicilinasas

Acremonium
Conversin de la Cefalosporina C a 7-ACA

(D- amino acid oxidase)

 Cefalosporinas
Primera generacin Segunda Tercera generacin Cuarta
Generacin generacin
(cefamicina)
Oral Oral Oral Oral
Cephalexin (Keflex) Cefuroxime (Ceftin) Cefixime (Suprax) Cefpirome
Cephradine (Velosef) Cefacor (Ceclor) Cedinir (Omnicef)
Cefadrosil (Duricef) Cefprozil (Cefzil) IV
Ceftibutin (Cedax) IV Cefepime (Maxipime)
IV Cefpodoxime (Vantin) Ceftazidime
Cefazolin Cefoperazone
Cephalothin IV Ceftriaxone
Cephapirin Cefamandole Cefotaxime
Cephradine Cefonocid Ceftizoxime
Cefuroxime
Cefoxitin
Cefotetan
Cefepime
Cefmetazole

Cefoxitina
(cefamicina)
Biosntesis de penicilinas y cefalosporinas

penicilinas cefalosporinas
Biosntesis de penicilinas y cefalosporinas
(L)
penicilinas

(D)

En Acremonium

En Streptomyces
Agrupamiento de genes implicados en la biosntesis de
antibiticos -lactmicos en varios organismos fngicos y procariotas
 Aspectos evolutivos relacionados con la biosntesis de
Penicilinas y Cefalosporinas
El % de identidad entre la ACV Sintetasa, IPN Ciclasa, Cef E y Cef F, de bacterias con
las protenas homologas en eucariotas es del 57-60%. Este porcentaje es mayor que el
encontrado entre otras protenas muy conservadas, como enzimas del metabolismo primario.

Se ha sugerido una posible transferencia horizontal de la ruta biosinttica

de antibiticos lactmicos desde organismos procariticos hasta los eucariotas.

Se estima que la transferencia debi ocurrir hace 370 millones de aos

Esta teora esta apoyada por la ausencia de intrones en el gen pcbAB (11KB), pcbC y
cef EF, mientras que genes especficos ausentes en los clusters bacterianos pero
presentes en hongos productores de penicilinas y cefalosporinas como penDE,
cefG, cef D1 y cef D2 , contienen intrones.

Otro dato a favor de esta teora es la funcionalidad de las secuencias promotoras

de los genes pcbAB de A. chrysogenum en un organismo procaritico como E. coli.

CONSECUENCIAS. A partir de entonces los hongos podran competir con las bacterias
de su entorno usando un arma a la que ellos mismos no son sensibles
 Desarrollo de cepas
0,07g/l Mtodos clsicos: obtencin
de mutantes

0,55g/l
Penicillium notatum (Fleming)

2 u/ml

85.000 u/ml

7g/l
Desarrollo de cepas
Clsico. Mutagnesis utilizando rayos X, mostazas nitrogenadas,
rayos u.v, EMS. Tras la mutagnesis:
1- Se evala la actividad antibacteriana de los mutantes
(BSQUEDA)
2- Se efecta el proceso de preseleccin de mutantes como paso previo
a la evaluacin de la produccin (SELECCIN).
2-1. En la resistencia al propio antibitico producido.
2.2. En la bsqueda de superproductores de precursores.
2-3. Seleccin de mutantes resistentes a iones metlicos pesados
2-4. Destoxificacin selectiva

Recombinacin gentica: se utiliza para traspasar funciones de

una cepa a otra
Recombinacin parasexual. Fusin de protoplastos.
Procesos parasexuales:
Procesos no meiticos en clulas vegetativas que conducen a recombinacin
FUSION PARASEXUAL: recombinacin mittica

Penicillium

(10-3)
(10-6- 10-7)

FUSION DE PROTOPLASTOS: permite mezclar el material gentico

de cepas que no poseen sistemas naturales de recombinacin
Mejora de la produccin de antibiticos lactmicos
mediante ingeniera gentica
*Mutagnesis dirigida

*Aumento de la dosis gnica de enzimas biosintticas de pasos

limitantes

*Produccin biosinttica de nuevos antibiticos

*Expresin heterloga de genes en hongos filamentosos

 *Produccin
ACV ACV anlogo biosinttica de
nuevos
antibiticos
Anlisis de cepas industriales
En muchas de las cepas industriales que se utilizan actualmente han
ocurrido fenmenos de amplificacin gnica.

5-6 copias

14 copias

Secuencia especfica de recombinacin TTTACA

Bsqueda de nuevas molculas

*Uso de cepas de bacterias hipersensibles a lactmicos pero no a

otros antibiticos

* Para buscar molculas de la familia de la Vancomicina se inmoviliza

el dipptido D-ala-Dala en una columna de afinidad por la que se pasa
un extracto

*La adicin de D-ala-D-ala a las placas de prueba revertir la accin

de antibiticos de la familia de las Vancomicinas

*Mutasntesis, es el empleo de mutantes bloqueados en un paso a los

que se aaden distintos compuestos utilizables por la siguiente enzima
de la ruta
 Precursor
Mutasntesis natural

Bloqueo Precursor
anlogo

Antibitico
Anlogo
Antibitico
natural
 Proceso de produccin de penicilina
Fuente de N2: lquido de maceracin
de maz
Fuente de carbono: lactosa
pH: 6,5-7,7
cido fenilactico

Acetato
de amilo
40.000-200.000 litros 0-3C, pH 2,5
5x 103 /ml proceso aerbico (vvm, 0,5-1)
impulsores de tipo turbina para el mezclado Medio alcalino
cristaliza