CINTICA DE

CRECIMIENTO CELULAR
Crecimiento Celular

Aspectos fundamentales
Estequiomtrico:
la concentracin final de clulas depende de la
concentracin y composicin del medio de cultivo.
balance de materia y energa de los procesos de
crecimiento celular .

Cintico:
velocidad en la que se desarrolla el proceso

2
 Aspectos que intervienen en la interaccin entre
las clulas y el medio ambiente a lo largo de su
crecimiento

Condiciones ambientales Poblacin celular

(medio) nutrientes
multicomponente multicomponente
sustratos
reacciones en solucin heterogeneidad en cada clula
equilibrio cido-base. individual
cambio de las propiedades productos mutiples reacciones
reolgicas mecanismos de control interno
multifsico (gas, lquido) adaptabilidad
calor variabilidad gentica
distribucin espacial no unifrome.

interacciones
mecnicas
Modelos de crecimiento celular

Modelos segregados

Modelos no segregados

Modelos estructurados

Modelos no estructurados
 No Estructurado Estructurado

Caso ideal
Multicomponente.
No
Descripcin de las clulas
Segregado Un solo componente.
como promedio.
Descripcin de las clulas
como promedio

Un solo componente. Multicomponente.

Segregado
Poblacin celular Poblacin celular
heterognea. heterognea.
Caso real
 Sistemas de cultivo

Discontinuo (Batch)

Continuo

Discontinuo alimentado (Fed-Batch)

Bioreactores: Tanque de agitacin mecnica

45
 Cultivo Batch o Discontinuo

V constante fX

Xo So
Sf
Po

Pf
 Continuo

SR
Reservorio

FI = F S
FI
FS X

X
S
V constante S
P
P
Discontinuo alimentado (fed-
(fed-batch).

F, SR

X
VX
VF S0
V0 VP
 Discontinuo (batch).

Caractersticas

Tiempos cortos de procesos lo que permite trabajar

en condiciones aspticas, sobre todo cuando se trata
de medios de cultivos ricos en nutrientes.

Perodos muertos: lavado, esterilizado, etc.

Opera a baja densidad celular.

Las concentracin de los distintos

componentes vara a lo largo del proceso.
Distintas fases en el crecimiento de un organismo
en un proceso en batch
 Discontinuo (batch).
Suponemos que las clulas crecen en condiciones homogneas en cuanto a
transferencia de nutrientes (fte. de carbono, nitrgeno, minerales,
vitaminas, etc.)
Las concentraciones de nutrientes y de biomasa del cultivo varan a
travs del tiempo.

El crecimiento de un microorganismo puede describirse a travs de una

ecuacin exponencial de acuerdo a:

n
Xn = Xo * 2 (1)

Xn = biomasa despus de n generaciones

Xo = biomasa inicial
n = nmero de generaciones
 Discontinuo (batch).
Tambin puede decirse que la biomasa se incrementar en dX en
un determinado intervalo de tiempo dt de acuerdo a la ecuacin:

dX = Xo m (2)
dt
donde es la velocidad especfica de crecimiento de un organismo
y tiene unidades de t-1 (min-1, h -1 o d-1).
la velocidad especfica de crecimiento depende:
caractersticas intrnsecas del organismo
factores externos (fte. de carbono, O2, T, etc.)
Integrando la ecuacin 2 se obtiene:
m t
Xt = Xo * e (3)

o bien

ln Xt = ln Xo + m *t (4)
Clculo de parmetros cinticos en cultivos en
batch

Graficando ln X vs. tiempo el clculo de la recta de

regresin en la zona de crecimiento exponencial es
igual a m . Tambin es posible calcular la fase lag
de acuerdo a lo que se describe en el grfico.

Figura 2: Grfica ln X vs. tiempo, calculo de m y de la fase lag

 Discontinuo (batch).

Otro parmetro importante a conocer en un proceso en

batch es el tiempo de duplicacin de la biomasa (td),
por la ecuacin 4 podemos reemplazar t = td y Xt=
2 Xo

ln 2Xo = ln Xo + m * td (5)

m = ln 2 = 0.693
(6)
td td

td = 0.693
(7)
m
 Fase Descripcin
lag Las clulas se adaptan al nuevo 0
ambiente

aceleracin Comienza el crecimiento < max

exponencial Se alcanza la velocidad mxima de = max

crecimiento

desaceleracin Crecimiento disminuye por falta de < max

nutrientes o inhibidores

estacionaria Se detiene el crecimiento =0

muerte Las clulas pierden viabilidad y se <0

lisan
 Influencia del substrato limitante en el
crecimiento microbiano

La biomasa final obtenida es un proceso de cultivo esta dada

por la relacin de rendimiento:

X
YX/S = (8)
S

Yxs= gr. de peso seco de biomasa obtenida por gr. de

substrato consumido.
El primero en establecer una relacin entre la
concentracin de substrato limitante y la velocidad de
crecimiento fue Monod y hallo que se corresponda con
una hiprbola rectangular similar a la descripta por
Michaelis-Menten para un proceso enzimtico
estableciendo la siguiente relacin:

max s
= (9)
KS + s
Representacin grfica del modelo de
Monod de sustrato limitante
Donde max = es la mxima velocidad de crecimiento; s
es la concentracin de substrato limitante y Ks=
constante de saturacin de substrato y es igual a la
concentracin de substrato que da una velocidad de
crecimiento de max /2.
Si reemplazamos la ecuacin 9 dentro de la 2 queda:

dx
= Xo
max s dt
dx * Xo (10)
=
dt KS + s

Si s>> Ks, s/(Ks+s) tiende a uno entonces el organismo

crece a max conforme s tiende a Ks entonces s/(Ks+s)
tiende a cero reduciendo el crecimiento.
Energa de activacin para el crecimiento
microbiano.
 Efecto de la temperatura sobre mm de un
cultivo aerbico en glucosa de A. aerogenes
Cintica de crecimiento en cultivos con
plsmidos

Posibilidad de prdida del plsmido

Mutacin del plsmido

Diferencia de velocidad de crecimiento

entre poblacin con y sin plsmidos
X+: poblacin con plsmidos
X-: poblacin sin plsmidos

dX + = (1-p) * X + * m +
dt

- + + - -
dX = p * X * m + X *m
dt

p: probabilidad de prdida de plsmidos

 F = X+
X+ + X-

F: fraccin de clulas con plsmidos.

F = 1- a -p
n( a + p - 1)
1- a -2 p

Donde

a = m -
n = m+ * t

m+ ln 2
 Relacin de velocidad de crecimiento en
poblaciones libres y que portan plsmidos.
Fraccin de la poblacin que porta plsmidos en
un cultivo en batch despus de 25 generaciones
 Otros modelos de crecimiento
El modelo logstico describe el crecimiento de una poblacin al momento del
inicio del crecimiento de acuerdo a la siguiente ecuacin:

m = m max * 1- X
[ Xf ]
al inicio X<<Xf y [1-X / Xf ] tiende a 1 entonces el organismo crece
a max en cambio cuando X = Xf [1-X / Xf ] tiende a 0 y dx/dt =0
entonces el crecimiento se detiene debido que la poblacin llega a su
densidad mxima. Si queremos evaluar entonces la velocidad de consumo
de substrato reemplazamos por la ecuacin 11 y queda:

m max * 1- X * X
ds = [ Xf ]
dt Yxs
 Fase lag

Aparte de la forma grfica descripta para hallar la duracin

de la fase lag, otros autores ha descripto otras formas
matemticas como ser:

t lag = t- 2.3 * lg X / Xo
m max

y tambin puede modificarse la ecuacin de Monod :

(-t/t lag )
m = m max * s 1- e
Ks + s
 Clculo de parmetros cinticos en
cultivos en batch
Graficando ln X vs tiempo el clculo de la recta de
regresin en la zona de crecimiento exponencial es igual a .
Tambin es posible calcular la fase lag de acuerdo a lo que se
describe en el grfico.
 Cintica de muerte celular
La cintica de muerte celular puede describirse por la ecuacin:

kD = - 1 dx
X dt

Y haciendo la correccin en la ecuacin 3 que describe el

crecimiento de un microorganismo queda:

Xt = Xo e ( -kD ) t

El factor kD es importante en procesos como los de

degradacin de efluentes, cuando se trabaja a bajas
velocidades de crecimiento cuando se usan inculos de baja
viabilidad.
Modificaciones de las ecuaciones de Monod
calculando la fase lag y la velocidad de
muerte celular
 Velocidad de consumo de substrato
Un incremento de biomasa dx se deber a consumo ds y
esa relacin esta dada por la formula de rendimiento
Yxs = dx
ds
entonces la velocidad de consumo de substrato si reemplazamos por la
ecuacin 2 se transforma en:
- ds = m max * X dX = Xo m
dt Yxs dt
o bien
- ds = qs * X
dt

donde qS es la velocidad especfica de consumo de substrato

qS tiene unidades de gr. de
qs = m
substrato limitante consumido
Yxs por gr. de biomasa por tiempo
(gr. sust * gr X -1 * h-1).
 Energa de mantenimiento: mS
En todo proceso adems del substrato que se consume para crecimiento existe una
energa necesaria para el mantenimiento de la biomasa (mS), esta energa es utilizada
por la clula para, por ejemplo mantener gradientes, pH, turnover de macromolculas,
etc. Se expresa en unidades de substrato consumido por gr. de X por tiempo. Podemos
decir entonces que en todo proceso parte de la fuente de carbono ser consumida para
el crecimiento y parte para el mantenimiento. Por la estimacin del coeficiente de
mantenimiento podemos recalcular lo que es el YXS para crecimiento (YXS verdadero)
del YXS observado por las siguientes ecuaciones, donde tenemos que la velocidad de
consumo de substrato va a tener dos trminos uno para el crecimiento y otro para el
mantenimiento:

ds = ds + ds
dt dt M dt G

ds
consumo de substrato para mantenimiento
dt M

ds
consumo de substrato para crecimiento
dt G
Formacin de Productos
Productos de bajo peso molecular

Productos de alto peso molecular

1) Componentes estructurales.
2) Enzimas (intra o extracelulares).
 Clasificacin de los productos de fermentacin
de bajo peso molecular
Productos directamente asociados con la generacin de energia
en la clula (asociados al crecimiento): etanol, acido actico, ac.
lctico , productos de las fermentaciones anaerbicas.

Productos indirectamente asociados con la generacin de

energa (semiasociados al crecimiento):, aminoacidos,
nucletidos.

Productos cuya sntesis no est claramente ligada directa o

indirectamente a la generacin de energa (no asociados al
crecimiento): antibioticos, vitaminas.
 Formacin de productos

1 Asociado al crecimiento
2 Semiasociado al crecimiento
3 No asociado al crecimiento

X( )
P(---)

Tiempo Tiempo Tiempo

 Cintica formacin de productos

Bsicamente pueden describirse tres tipos de procesos

con respecto a la formacin de producto :
asociados al crecimiento
parcialmente asociados
no asociados al crecimiento

A continuacin se describe tres frmulas de rendimiento de

importancia: produccin de producto en funcin del sustrato

P
YP/S =
S
 Cintica formacin de productos

Y PX = Y PS produccin de producto en funcin de la

Yxs biomasa

Es tambin posible formular la ecuacin de formacin de producto a

travs del tiempo segn:

dp = a * dx + b * X
dt dt

donde a es una constante asociada al crecimiento y b es una constante

que no esta asociada al crecimiento. Y tambin podemos definir qP s
decir la velocidad especfica de produccin del producto

qP = Y PX * m
Distintos Tipos de cintica de
formacin de productos
Productividad de una fermentacin en batch

Qp o P = X
t

t = 1 * ln X + t lag + t est + tlim

m max Xo
Medidas de Performance de un Bioproceso

Productividad
mg / gr biomasa * h
mg / L * h
Mas importante porque describe cuanto tiempo puede durar el
bioproceso

Mxima Concentracin de Producto

mg / L
(importante cuando el costo de la recuperacin y purificacin del
producto representa un porcentaje alto en el costo total del
bioproceso)
Rendimiento de Producto
gr de producto / gr de substrato
(importante cuando el costo nutriente representa un porcentaje
alto en el costo total del bioproceso, no muy usual)
Inhibicin del crecimiento

Alta concentracin de sustrato y/o

productos, cambios en las propiedades
fisico-qumicas del medio :presin
osmtica, fuerza inica, constante
dielctrica, y actividad de solutos, pueden
alterar la fluidez de las membranas.
Posibles mecanismos de la accin de
inhibidores

Alteracin de permeabilidad celular

Alteracin de la actividad de las enzimas
Disociacin de agregados enzimticos
Afecta la sntesis de enzimas
Influencia en la actividad funcional de las
clulas
 Otros modelos

Inhibicin por sustrato

Andrews y Noack 1
= m
Ks + S + S2
Kis
Inhibicin por producto
Jerusalimsky y Neronova

S Kip
= m
Ks + S Kip + P
 Modificaciones del Modelo de Monod.
Inhibicin por altas concentraciones de substrato

m = m max * s * 1
Ks + s (1+ (s / K is ))

donde Ki es la constante de inhibicin .

Inhibicin del crecimiento debido al producto

m = m max * s * K ip
Ks + s K ip + p

donde Ki,p es la constante de inhibicin del producto y p es

igual a la concentracin del producto
 Modificaciones del Modelo de Monod.
Modelo de inhibicin del crecimiento debido al producto de Luong:

Pi n
m = m max * 1-
P i*

Donde Pi es la concentracin de producto y Pi* es la concentracin crtica de

producto en las cuales el crecimiento es cero. Y donde n es una constante que
surge de graficar (ver grfico ):

ln 1- m = n lnP i - n lnP i *
m max

de no conocerse Pi* debe hallarse por prueba de ensayo y error para aquella
recta de regresin que mejor ajuste tenga donde la pendiente ser igual a n .
 n ln Pi*
0

ln [ 1- /max]
n

-3

ln P
 Modificaciones del Modelo de Monod.

Otros modelos describen los casos para cuando se dan

mltiples inhibiciones de productos y substratos,

n n
m = m max * 1 - Ci * 1- Pi
C i* P i*