I.

INTRODUCCIN

Las protenas son elementos vitales para los organismos, encontrndose en

plantas y animales en una proporcin elevada. Hay una gran variedad de
protenas y cada una desempea una funcin biolgica especfica que puede ser
de reserva, de sostn, transporte, estructural, etc. Qumicamente las protenas
estn constituidas por combinaciones complejas de carbono, hidrogeno, oxigeno,
nitrgeno y otros elementos en menor proporcin como son azufre cobre y
fosforo.

Cuando la estructura de la protena se desorganiza, se dice que se encuentra

desnaturalizada y esto trae como consecuencia la perdida de la actividad
biolgica. La desnaturalizacin puede lograrse por medios fsicos como el calor o
qumicos como una variacin de pH, observndose una disminucin en la
solubilidad y la formacin de un coagulo. Este mtodo es utilizado para demostrar
la presencia de protenas. Tambin se puede identificar protenas mediante el uso
de sustancias que al ponerse en contacto con ellas, producen una coloracin
especfica, tal es el caso de la Reaccin de Biuret.

La sntesis de protenas se lleva a cabo en dos etapas: la primera etapa

(transcripcin) ocurre dentro del ncleo de las clulas eucariotas, aqu la
secuencia se transcribe en una molcula de ARN, el cual es denominado ARN
mensajero (ARNm) y la segunda etapa (traduccin - sntesis de protena
propiamente dicha) el ARNm pasa del ncleo al citoplasma donde el mensaje es
traducido por los ribosomas que arman una protena.
 II. MARCO TEORICO

2.1. Generalidades de las protenas

2.1.1. Caractersticas

Los prtidos o protenas son biopolmeros, estn formadas por gran nmero
de unidades estructurales simples repetitivas (monmeros). Debido a su gran
tamao, cuando estas molculas se dispersan en un disolvente adecuado,
forman siempre dispersiones coloidales, con caractersticas que las
diferencian de las disoluciones de molculas ms pequeas.

Por hidrlisis, las molculas de protena se dividen en numerosos compuestos

relativamente simples, de masa molecular pequea, que son las unidades
fundamentales constituyentes de la macromolcula. Estas unidades son los
aminocidos, de los cuales existen veinte especies diferentes y que se unen
entre s mediante enlaces peptdicos. Cientos y miles de estos aminocidos
pueden participar en la formacin de la gran molcula polimrica de una
protena.

Todas las protenas tienen carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno, y casi

todas poseen tambin azufre. Si bien hay ligeras variaciones en diferentes
protenas, el contenido de nitrgeno representa, por trmino medio, 16% de la
masa total de la molcula; es decir, cada 6,25 g de protena contienen 1 g de
N. El factor 6,25 se utiliza para estimar la cantidad de protena existente en
una muestra a partir de la medicin de N de la misma.

La sntesis proteica es un proceso complejo cumplido por las clulas segn

las directrices de la informacin suministrada por los genes.

Las protenas son largas cadenas de aminocidos unidas por enlaces

peptdicos entre el grupo carboxilo (-COOH) y el grupo amino (-NH2) de
residuos de aminocido adyacentes. La secuencia de aminocidos en una
protena est codificada en su gen (una porcin de ADN) mediante el cdigo
gentico. Aunque este cdigo gentico especifica los 20 aminocidos
"estndar" ms la selenocistena y en ciertos Archaea la pirrolisina, los
residuos en una protena sufren a veces modificaciones qumicas en la
modificacin postraduccional: antes de que la protena sea funcional en la
clula, o como parte de mecanismos de control. Las protenas tambin
pueden trabajar juntas para cumplir una funcin particular, a menudo
asocindose para formar complejos proteicos estables.

2.1.2. Funciones

Las protenas ocupan un lugar de mxima importancia entre las molculas

constituyentes de los seres vivos (biomolculas). Prcticamente todos los
procesos biolgicos dependen de la presencia o la actividad de este tipo de
molculas. Bastan algunos ejemplos para dar idea de la variedad y
trascendencia de las funciones que desempean. Son protenas:

Casi todas las enzimas, catalizadores de reacciones qumicas en

organismos vivientes;
Muchas hormonas, reguladores de actividades celulares;
La hemoglobina y otras molculas con funciones de transporte en la
sangre;
Los anticuerpos, encargados de acciones de defensa natural contra
infecciones o agentes patgenos;
Los receptores de las clulas, a los cuales se fijan molculas capaces
de desencadenar una respuesta determinada;
La actina y la miosina, responsables finales del acortamiento del
msculo durante la contraccin;
El colgeno, integrante de fibras altamente resistentes en tejidos de
sostn.
Funciones de reserva. Como la ovoalbmina en el huevo, o la casena
de la leche.

Todas las protenas realizan elementales funciones para la vida celular, pero
adems cada una de stas cuenta con una funcin ms especfica de cara a
nuestro organismo.
Debido a sus funciones, se pueden clasificar en:

Catlisis: Est formado por enzimas proteicas que se encargan de

realizar reacciones qumicas de una manera ms rpida y eficiente.
Procesos que resultan de suma importancia para el organismo. Por
ejemplo la pepsina, esta enzima se encuentra en el sistema digestivo y
se encargan de degradar los alimentos.
Reguladoras: Las hormonas son un tipo de protenas las cuales
ayudan a que exista un equilibrio entre las funciones que realiza el
cuerpo. Tal es el caso de la insulina que se encarga de regular la
glucosa que se encuentra en la sangre.
Estructural: Este tipo de protenas tienen la funcin de dar resistencia
y elasticidad que permite formar tejidos as como la de dar soporte a
otras estructuras. Este es el caso de la tubulina que se encuentra en el
citoesqueleto.
Defensiva: Son las encargadas de defender al organismo.
Glicoprotenas que se encargan de producir inmunoglobulinas que
defienden al organismo contra cuerpos extraos, o la queratina que
protege la piel, as como el fibringeno y protrombina que forman
cogulos.
Transporte: La funcin de estas protenas es llevar sustancias a travs
de todo el organismo donde son requeridas. Protenas como la
hemoglobina que lleva el oxgeno por medio de la sangre.
Receptoras: Este tipo de protenas se encuentran en la membrana
celular y llevan a cabo la funcin de recibir seales y para que la clula
as pueda realizar su funcin. El acetilcolina que recibe seales para
producir la contraccin muscular.

2.1.3. Estructura de la proteinas

Es la manera como se organiza una protena para adquirir cierta forma.

Presentan una disposicin caracterstica en condiciones fisiolgicas, pero si
se cambian estas condiciones como temperatura, pH, etc. pierde la
conformacin y su funcin, proceso denominado desnaturalizacin. La funcin
depende de la conformacin y sta viene determinada por la secuencia de
aminocidos.

Para el estudio de la estructura es frecuente considerar una divisin en cuatro

niveles de organizacin, aunque el cuarto no siempre est presente.

Conformaciones o niveles estructurales de la disposicin tridimensional:

a) Estructura primaria:

Es la secuencia de aminocidos de la protena (en formalineal).

b) Estructura secundaria:
La estructura secundaria es la disposicin de la secuencia de
aminocidos en el espacio.
- La a (alfa)-hlice: Esta estructura se forma al enrollarse
helicoidalmente sobre s misma la estructura primaria.
- La conformacin beta: En esta disposicin los aminocidos no
forman unahlice sino una cadena en forma de zigzag.

c) Estructura terciaria:
 Informa sobre la disposicin de la estructura secundariade un
polipptido al plegarse sobre s misma originando una
conformacinglobular.

d) Estructura cuaternaria:
Esta estructura informa de la unin, mediante enlaces dbiles (no
covalentes) de varias cadenas polipeptdicas con estructura terciaria,
para formar un complejo proteico. Cada una de estas cadenas
polipeptdicas recibe el nombre de protmero.

2.2. Identificacin de las protenas

Se puede identificar protenas mediante el uso de sustancias que al ponerse
en contacto con ellas, producen una coloracin especfica, tal es el caso de la
Reaccin de Biuret y xasoproteica.

2.2.3. La reaccin de Biuret

Es una molcula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-
NH2), que es la ms sencilla que da positiva esta reaccin la
presencia de protenas. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en
solucin acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reaccin se basa en
la formacin de una compuesto de color violeta, debido a la
formacin de un complejo de coordinacin entre iones Cu2+ y los
pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forman parte
de los enlaces peptdicos.
En este caso utilizamos Hidrxido de sodio. El Hidrxido de sodio
no participa en la reaccin, pero proporciona el medio alcalino
necesario para que tenga lugar.
El criterio para determina si la muestra de estudio resulta positiva o
negativa ,se debe a que el reactivo, de color azul, cambia a violeta
en presencia de protenas, y vira a rosa cuando se combina con
polipptidos de cadena corta, por lo cual si la solucin final nos da
una coloracin violeta , se refiere a que se ha detectado una
presencia de protenas o mejor dicho de enlaces peptidicos.
 la reaccion de biuret se lleva a cabo cuando:
Una protena reacciona con el cobre (II) sulfato (azul), la prueba
positiva es la formacin de un complejo de color violeta.

La prueba de biuret funciona para cualquier compuesto que

contenga dos o ms de los siguientes grupos:

2.2.4. Reaccin xantoproteica

Se pretende utilizar para determinar la presencia o no de protenas
en una muestra.
Esta reaccin se debe a la presencia de un grupo fenilo en la
molcula proteica. Los complejos de la molcula proteica que son
de importancia en esta reaccin son la tirosina y el triptfano. La
fenilalanina no reacciona en las condiciones que se realiza en el
laboratorio. La reaccion xantoproteica a su vez se puede
considerar como una sustitucion electrofilica aromtica de los
residuos de tirosina de las proteinas por el acido nitrico que
reacciona.
 La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con
aminocidos portadores de grupos aromticos, especialmente en
presencia de tirosina, dando un compuesto coloreado amarillo a pH
acido. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali, se
torna color amarillo oscuro a naranja.

La reaccion xantoproteica se lleva a cabo cuando:

Se representa la produccin de un producto de color amarillo en la
adicin de cido ntrico.realizado en un ensayo para detectar la
presencia de tirosina y triptfano en una protena

2.3. Expresion de proteina recombinantes

La expresin de protenas recombinantes se ha realizado tanto en clulas
procariotas como en clulas eucariotas, siendo las primeras las ms
conocidas y estudiadas. Las clulas eucariotas ms utilizadas a nivel
industrial son las levaduras (Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae), los
hongos filamentosos (Aspergillus niger, Aspergillus oryzae), las clulas de
insecto (Drosophila S2) y las clulas de mamfero (CHO, HEK, HELA).
Las levaduras son fcilmente cultivables en medios de cultivo econmicos y
las protenas que producen presentan un elevado grado de homologa
respecto a los organismos superiores. Sin embargo, las glicoprotenas
producidas en este husped disponen de un patrn de glicosilacin diferente
al humano, aunque se han realizado avances en la modificacin de los
patrones de glicosilacin de levaduras para conseguir que produzcan
protenas recombinantes teraputicas con estructuras glicosiladas similares a
las humanas.
Las clulas de insecto son tiles para el procesamiento de protenas
complejas, especialmente glicoprotenas, sin embargo, su patrn de
glicosilacin difiere respecto a las clulas de mamfero.
Finalmente, las clulas de mamfero tienen la ventaja de que producen
correctamente glicoprotenas humanas bien de forma transitoria o bien de
forma estable, pero el coste de la produccin es elevado en comparacin con
los sistemas procariotas debido al coste de materiales, a la densidad celular
que pueden alcanzar los cultivos y al tiempo de generacin celular, ya que
una bacteria se divide ms de cincuenta veces en el tiempo en el que una
clula de mamfero se divide una vez.
Dentro de los sistemas procariotas, uno de los modelos de expresin ms
utilizados ha sido Escherichia coli. El xito de Escherichia coli se basa
principalmente en:
La facilidad de manipulacin del DNA
El elevado nmero de mutantes y vectores de expresin disponibles
El amplio conocimiento de la fisiologa de la clula, que permite
alcanzar densidades celulares elevadas con un medio de cultivo
econmico, y
El conocimiento del efecto de la sobreexpresin de protenas sobre la
bacteria.

Sin embargo, Escherichia coli presenta ciertos inconvenientes en la sntesis

de protenas recombinantes:

No lleva a cabo procesamientos post-transduccionales propios de

clulas eucariotas, como es el caso de la glicosilacin o fosforilacin, lo
cual afecta a la estructura, estabilidad, solubilidad y actividad biolgica
de la protena producida
Carece de chaperonas (protenas de plegamiento) adecuadas para
permitir un plegamiento correcto de las protenas recombinantes
No forma puentes disulfuro en el citoplasma, salvo en ciertas cepas
mutantes.
Para producir protenas recombinantes en Escherichia coli es necesario que
las clulas dispongan de un mecanismo capaz de procesar la informacin
gentica que codifica para la protena de inters, bien sea industrial o
farmacutico, y permitir as producir grandes cantidades de dicha protena. El
conjunto de organismo hospedador y elementos de procesamiento de la
expresin gentica para la sntesis proteica recibe el nombre de sistema de
expresin

2.4. Sintesis de proteina

La sntesis de protenas se lleva a cabo en dos etapas:
La primera etapa (transcripcin)
ocurre dentro del ncleo de las clulas eucariotas, aqu la secuencia se
transcribe en una molcula de ARN, el cual es denominado ARN
mensajero (ARNm) y
La segunda etapa (traduccin - sntesis de protena propiamente dicha)
el ARNm pasa del ncleo al citoplasma donde el mensaje es traducido
por los ribosomas que arman una protena.

Transcripcin Para formar la cadena de ARN a partir del ADN se debe tener
en cuenta que cada nucletido del ADN se ensambla con un determinado
nucletido del ARN. La molcula helicoidal de ADN se desenrolla y deja
accesible la cadena a partir de la cual se inicia la sntesis (armado) del ARN.
La enzima (polimerasa del ARN) que controla la reaccin detecta una regin
de la secuencia del ADN, llamada promotor, que marca el punto de inicio de la
sntesis. Los nucletidos se aaden uno por uno en orden complementario, de
esta manera la adenina del ADN se combina con el uracilo del ARN (A U),
en el mismo orden, la timina se ensambla con la adenina (T A), y la citosina
se combina con la guanina y viceversa (C G, G C). Hay por lo tanto
complementariedad entre el ARN y el ADN de donde se copia.

Al conservar la informacin impresa en esta parte del genoma (dotacin

gentica), el ARN se constituye en portador de las instrucciones que
determinan la secuencia de aminocidos de una protena. Dichas
instrucciones, en clave, se descifran leyendo los nucletidos de tres en tres
("tripletes"), y cada triplete de nucletido, que determina uno de los 20
aminocidos existentes, recibe el nombre de codn. Durante la traduccin, a
medida que se "leen" los codones, se van aadiendo los aminocidos
correspondientes a la protena que se est formando.

El trabajo de los ARNt consiste en tomar del citosol a los aminocidos y

conducirlos al ribosoma en el orden marcado por los nucletidos del ARNm,
que son los moldes del sistema. La sntesis de las protenas comienza con la
unin entre s de dos aminocidos y contina por el agregado de nuevos
aminocidos -de a uno por vez- en uno extremos de la cadena. Como se ha
explicado, la clave de la traduccin reside en el cdigo gentico, compuesto
por combinaciones de tres nucletidos consecutivos -o tripletes- en el ARNm.
Los distintos tripletes se relacionan especficamente con tipos de aminocidos
usados en la sntesis de las protenas. Cada triplete constituye un codn,
existen en total 64 codones (cuatro nucletidos se combinan de a tres, as
que: 43 = 64), 61 de los cuales sirven para cifrar aminocidos y 3 para marcar
el cese de la traduccin.
 III. CONCLUSIONES

Las protenas constituyen una de las molculas ms importantes en el

organismo ya que cumplen muchas funciones.
La identificacin de las protenas se lograr por la reaccin de Biuret y la
reaccin de xantoproteica.
La sntesis de protena se da en dos etapas: por transcripcin y traduccin.
La expresin de protenas recombinantes se ha realizado tanto en clulas
procariotas como en clulas eucariotas, Las clulas eucariotas ms
utilizadas a nivel industrial son las levaduras, los hongos filamentos, las
clulas de insectos y clulas de mamferos.
 IV. BIBLIOGRAFIA

http://siladin.cchoriente.unam.mx/coord_area_cienc_exp/biologia/GuiaBioI/
ANEXO_6SINTESIS.pdf
CAREY Francis A. Qumica Orgnica. Captulo 27 Aminocidos, pptidos y
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MARTNEZ SANTILLN Rogelio. MANUEL DE PRCTICAS DE
LABORATORIO DE BIOQUMICA. Practica nmero 6. Protenas Colegio
de bachilleres del Estado de Baja California. Enero, 2007.