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CINTICA ENZIMTICA

Para o estudo dirigido contido no item de 1 a 4 estudar o Captulo 5 do livro Marzocco &
Torres (pag. 54-83 na terceira edio)

1. Para recordar os conceitos bsicos em cintica de reaes qumicas e catlise, considere


a reao de converso de A B, no enzimtica.
1.1. Fazer o grfico da concentrao de produto [B] x Tempo para a reao.
1.2. Definir velocidade de reao. Escrever a equao de velocidade desta reao em
funo da concentrao de A.
1.3. Como proceder para medir esta velocidade? Que tempos (iniciais ou finais) devem ser
escolhidos para que as medidas de velocidade sejam de fato relacionadas
concentrao inicial de A?

2. Cintica de reaes qumicas catalisadas por enzimas e inibio enzimtica:


2.1. Descrever as etapas de uma reao catalisada por enzima, considerando E (enzima), S
(substrato) e P (produto)
2.2. Escrever a equao de velocidade da formao do complexo ES e a equao da
velocidade da formao de P a partir de ES.
2.3. Qual a etapa limitante da velocidade de transformao de S em P?
2.4. Fazer o grfico da velocidade da reao S P, catalisada enzimaticamente, em
funo da concentrao de S.
2.5. Analisando o grfico do item acima, verificar em cada trecho da curva as
concentraes de enzima livre, substrato e complexo ES.
2.6. A constante de Michaelis-Menten (KM) representa a relao entre as constantes de
velocidade de formao e degradao do complexo ES: (k-1 + k2)/k1. Baseado nisto,
explique porque, na prtica, a constante KM dada como uma unidade de
concentrao e no de velocidade.
2.7. Analise os dados da tabela abaixo onde uma enzima e trs substratos foram
incubados juntos. -OK
Soluo Enzima: Substratos Formao de produtos em
tampo Hexoquinase 10 minutos de reao
1 mM Glicose 1 mM Glicose-6-fosfato
50 mM pH 7,4 1 U/ml 1 mM Frutose 0,1 mM Frutose-6-fosfato
10 mM ATP 1,1 mM ADP
a) Utilizando os seus conhecimentos sobre KM, explique a diferena encontrada na
quantidade total de Glicose-6-fosfato e Frutose-6-fosfato.
b) Qual a funo do ATP nesta reao?

3. Multimdia: A Cintica da Reao Enzimtica


http://www.bdc.ib.unicamp.br/bdc_uploads/materiais/versaoOnline/versaoOnline527_pt/Cin
etica_bin/Cinetica.swf

3.1. Ler a introduo e os objetivos


3.1. Realizar o experimento 1, escolher as alternativas de valor e unidade.
3.2. Realizar o experimento 2:
a) Compare a formao de produto na reao em 10, 20 e 30 min.
b) Compare a velocidade da reao obtida para estes trs tempos de incubao.
3.3. Realizar o experimento 3:
a) Analise a velocidade de reao na presena das trs concentraes oferecidas de
inibidor.
b) Discuta como possvel identificar, atravs deste grfico, que a inibio do tipo no-
competitiva.
3.4. Realizar o experimento 4:
a) Analise a velocidade de reao na presena das trs concentraes oferecidas de
inibidor.
b) Discuta como possvel identificar, atravs deste grfico, que a inibio do tipo no-
competitiva.
3.5. Classifique as afirmaes abaixo como verdadeiras ou falsas:
( ) Sempre que o nmero de molculas de substrato for maior que o nmero de molculas
de enzimas, todas as molculas de enzimas estaro ligadas a uma molcula de substrato
( ) A velocidade da reao proporcional ao tempo da reao.
( ) A velocidade da reao proporcional concentrao de substrato.
( ) A velocidade da reao proporcional concentrao de enzima, desde que a
concentrao de substrato no seja limitante.
( ) A velocidade da reao proporcional concentrao do complexo enzima-substrato.
( ) A quantidade de produto formado depende do tempo da reao.

4. Inibio Enzimtica
4.1. Defina inibidores enzimticos irreversveis e reversveis. Quais aplicaes tecnolgicas
possveis para inibidores enzimticos?
4.2. Fazer o grfico V0 x [S] na ausncia de inibidor, na presena de duas concentraes
de inibidor competitivo e na presena de duas concentraes de inibidor no-
competitivo.
4.3. O que o Ki de um inibidor mede?
4.4. Compare quais seriam os valores de KM e VMax se fosse adicionado inibidor
competitivo na concentrao de 1 Ki na reao? E se fosse adicionado de inibidor
no competitivo, tambm na concentrao equivalente a 1 Ki? Considere duas
reaes separadas para cada inibidor.
4.5. Como se faz para determinar com preciso o KM de uma enzima? Faa esse grfico
na ausncia de inibidor, na presena de duas concentraes de inibidor competitivo
e na presena de duas concentraes de inibidor no-competitivo. -OK

5. Regulao da atividade das enzimas


Para este estudo dirigido estudar o Captulo 19 do livro Marzocco & Torres (pag. 259-264
na terceira edio)

5.1. Qual a importncia da regulao enzimtica no metabolismo?


5.2. Caracterizar enzima alostrica. Definir centro alostrico (stio alostrico) e
efetuador alostrico positivo e negativo.
5.3. Por que a cintica de algumas enzimas alostricas tem aspecto sigmoidal enquanto
as enzimas michaelianas tm cinticas hiperblicas?
5.4. Definir regulao enzimtica por modificao covalente.

6. Exerccios complementares:
1. Em um experimento com concentrao constante de enzima e substrato obteve-se 0,001
mmols de produto para um tempo de reao de 20 minutos. Que massa de produto ser
formada em 10 minutos de incubao?
(A) 0,0005 mmols
(B) 0,0010 mmols
(C) 0,0020 mmols

2. Em um experimento com concentrao constante de enzima e substrato obteve-se 0,001


mmols de produto, formados a cada minuto para um tempo de reao de 20 minutos. Qual
a velocidade da reao se o tempo de incubao fosse 10 minutos?
(A) 0,0005 mmols/minuto
(B) 0,0010 mmols/minuto
(C) 0,0020 mmols/minuto

Atividade de Multimdia: Enzyme


http://www.bdc.ib.unicamp.br/bdc_uploads/materiais/versaoOnline/versaoOnline528_pt/i
ndex.html
(selecionar cintica enzimtica, animaes ver todas simulaes)