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Prova da coagulase

PRINCPIO
Verificar a capacidade de microrganismos reagirem com o plasma e formarem um cogulo, uma
vez que a coagulase uma protena com atividade similar protrombina, capaz de converter o
fibrinognio em fibrina, que resulta na formao de um cogulo visvel. Pode ser encontrada em
duas formas que possuem diferentes propriedades: coagulase conjugada e coagulase livre.

A coagulase conjugada (prova em lmina), tambm conhecida como fator de aglutinao,


encontra-se unida parede celular bacteriana e no est presente em filtrados de cultivos.
Quando as clulas bacterianas so suspensas em plasma (fibrinognio), formam-se cordes de
fibrina entre elas, o que causa agrupamento sob a forma de grumos visveis.

A coagulase livre (prova em tubo) uma substncia similar trombina e est presente em
filtrados de cultivos. secretada extracelularmente e reage com uma substncia presente no
plasma denominado Fator de Reao com a Coagulase CRF, para formar um complexo que,
por sua vez, reage com fibrinognio, formando fibrina (cogulos). Quando uma suspenso em
plasma do microrganismo produtor de coagulase preparada em tubo de ensaio, forma-se um
cogulo visvel aps o perodo de incubao.

UTILIDADE
Separar as espcies de Staphylococcus de importncia clnica, S. aureus coagulase positiva,
das demais espcies coagulase negativa.

INOCULAO
Coagulase conjugada:
Traar dois crculos com lpis de cera em uma lmina de vidro;
Colocar duas gotas de gua destilada ou soluo fisiolgica estreis dentro de cada crculo;
Com auxlio de um fio bacteriolgico agregar a colnia em estudo, homogeneizando
delicadamente em cada crculo;
Colocar uma gota de plasma para a prova de coagulase em um dos crculos;
No outro crculo, adicionar outra gota de gua destilada ou soluo fisiolgica estreis, como
controle;
Homogeneizar com palito de madeira;
Inclinar a lmina delicadamente, para frente e para trs;
Observar presena de aglutinao.

Coagulase livre:
Com auxlio do fio bacteriolgico, suspender colnias em estudo em caldo BHI e colocar em
estufa 37C at que turve;
Se necessrio, acertar a turbidez at 0,5 da escala de MacFarland;
Em um tubo de ensaio estril, colocar 0,5 ml de plasma reconstitudo e 0,5 ml do caldo BHI
com crescimento bacteriano recm turvado;
Incubar em estufa 35C 4 horas;
Verificar se h presena de cogulo;
Se no houver presena de cogulo, incubar o tubo em temperatura ambiente e repetir as
leituras com 18 e 24 horas de incubao.

INTERPRETAO
Coagulase conjugada:
+ Positiva: formao de precipitado branco e aglutinao dos microrganismos da suspenso,
aps 15 segundos, no crculo que contm o plasma.
- Negativa: ausncia de aglutinao no crculo que contm o plasma.
***A presena de precipitado ou aglutinao, torna a prova inespecfica, devendo ser repetida a
prova em tubo.

Coagulase livre:
+ Positiva: presena de qualquer grau de cogulo.
- Negativa: ausncia de cogulo.