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BIOLOGIA GENERAL

INFORME DE LABORATORIO N7
ACTIVIDAD ENZIMATICA

GENERAL BIOLOGY
LABORATORY REPORT N7
ENZYMATIC ACTIVITY

Sharith Cantillo, Nancy Fierro, Elizabeth Pardo.


Estudiantes de Medicina de la Universidad Del Magdalena.

RESUMEN:
En este laboratorio se someti a la enzima (peroxidasa) y a su respectivo sustrato
(perxido de hidrogeno) a una serie de condiciones como cambios en la temperatura, la
concentracin del sustrato, concentracin de la enzima y cambios en el pH y se pudo
observar el cambio en la velocidad de reaccin por esas variaciones, todo el
procedimiento se dio bajo la tutela de nuestra docente a cargo Tania De La Hoz, la cual
superviso la actividad y nos hizo constancia de las normas de seguridad que se deben
llevar en el laboratorio.
PALABRAS CLAVES: enzimas, sustrato, temperatura, pH, peroxidasa y perxido de
hidrogeno.

SUMMARY:
In this laboratory, the enzyme (peroxidase) and its respective substrate (hydrogen
peroxide) were subjected to a series of conditions such as changes in temperature,
substrate concentration, enzyme concentration and changes in pH, Change in the speed
of reaction for these variations, the entire procedure was given under the tutelage of our
teacher in charge Tania De La Hoz, which supervised the activity and made us record
the safety standards to be carried in the laboratory.
KEYWORDS: enzymes, substrate, temperature, pH, peroxidase and hydrogen peroxide
INTRODUCCION temperatura, el pH y la concentracin
Las clulas poseen compuestos qumicos son algunos de los factores que influyen
que controlan las reacciones que ocurren en la actividad de las enzimas.
en su interior. La sustancia que controla
la velocidad a la que ocurre una reaccin MATERIALES Y REACTIVOS
qumica sin que la clula sufra dao
alguno ni se destruya se conoce como Laboratorio
catalizador. Las enzimas son sustancias
Beakers, tubos de ensayo pequeo, bao
(protenas) que actan como
Mara, gradilla, vidrio de reloj, pinzas
catalizadores en las clulas y hacen
para tubos de ensayo cuchilla o bistur,
posibles las, reacciones que ocurren en
papel absorbente, estufa, termmetro,
las clulas disminuyendo la cantidad de
probetas, pipetas, cinta para rotular.
energa de activacin que se necesita.
Las enzimas tambin controlan la
velocidad a la que ocurre la reaccin Reactivos y Soluciones:
para que la energa se libere a una 100 ml de solucin de perxido de
temperatura que no haga dao al hidrogeno al 6%, agua destilada, agua en
organismo. Las miles de reacciones que bolsa, hielo, cido actico, hidrxido de
constituyen el metabolismo de los seres sodio, solucin salina (suero fisiolgico),
vivos estn bajo control de miles de solucin de almidn y saliva.
enzimas.
Biolgico:
Diferentes enzimas controlan diferentes 200 gramos de hgado fresco licuado en
reacciones. La sustancia sobre la cual poco agua (este procedimiento deben
acta una enzima se llama Sustrato: Al realizarlo en casa)
ocurrir una reaccin el sustrato se
convierte en uno o ms productos
nuevos
PROCEDIMIENTO

Utilice tubos de ensayos grandes. Las


Las enzimas no se consumen en las muestras de la solucin de perxido de
reacciones y se pueden volver a utilizar. hidrogeno se deben tener por separado
Sin embargo una enzima particular acta en tubos de ensayos antes de agregar la
solo sobre un sustrato especfico, as que muestra del extracto de hgado en los
una enzima solo puede controlar un tipo respectivos tubos de ensayos. Esto con
de reaccin especfica. el fin de que las soluciones de perxido
sean agregadas al mismo tiempo en
Una enzima recibe el nombre del sustrato cada uno de los tubos que contengan la
sobre el cual acta, a una parte del muestra.
nombre del sustrato sobre el cual acta
la enzima se le aade el sufijo asa.

Corno las enzimas son protenas; los


factores que afectan la estructura de la
protena, tambin afectan la funcin o
actividad de las enzimas. La
a) Rotule y prepare cuatro tubos de N del Ml de extracto de Temperatura C
ensayos de la siguiente forma tubo hgado
1 2 Baos con hielo
2 2 Temperatura
N del Mililitros de extracto de hgado ambiente
tubo 3 2 Agua hirviendo
1 0
2 1
3 2
Espere que el material que este dentro de
4 4 los tubos tenga la misma temperatura que la
de los respectivos baos; luego agite y
Una vez realizado el procedimiento, agite proceda agregar al mismo tiempo 2 ml de
bien los tubos, luego agregue al mismo perxido de hidrogeno a cada uno de los
tiempo, 2 ml de perxido de hidrogeno en tubos.
cada uno de los tubos.
d) Rotule y prepare tres tubos de
ensayos de la siguiente forma
b) Rotule y prepare cinco tubos de
ensayos de la siguiente forma N del ml de extracto pH
tubo de hgado
1 2 cido actico 5 gotas
N del Mililitros de extracto de hgado
2 2 Solucin salina (suero
tubo
fisiolgico)
1 1
3 2 Hidrxido de sodio 5 gotas
2 1
3 1
4 1
Agite cada uno de los tubos y agregue al
5 1
mismo instante 2 ml de perxido de
hidrogeno en cada uno de ellos.
Agite cada uno de los tubos, agregue al
mismo tiempo las siguientes cantidades de e) Rotule y prepare cuatro tubos de
perxido de hidrogeno ensayos de la siguiente forma
N del tubo Material
N del Mililitros de Perxido de
1 1 ml de Extracto de hgado
tubo hidrogeno
2 1 ml de saliva
1 0 ml 3 1 ml de Extracto de hgado
2 1 ml 4 1 ml de saliva

3 2 ml
Agite cada uno de los tubos; a los dos
4 4 ml primeros agregue 2 ml de perxido de
5 6 ml hidrogeno, Describa todo lo que observa y
su explicacin. A los tubos 3 y 4 agregue 2
c) Rotule y prepare tres tubos de ml de solucin de almidn agtelos durante
ensayos de la siguiente forma 3 minutos y luego agregue 3 gotas de lugol
en cada uno de ellos.
En la parte d en el tubo nmero 1 se
form un coagulo de color gris, en el
DISCUSION tubo nmero 2 se form una reaccin
En la parte a se observ al agregarse el efervescente como en las reacciones
perxido de hidrogeno en todos los anteriores y en el tubo numero 3 el
tubos se observ que se produjo un hgado tomo un color oscuro y se volvi
burbujeo en todos los tubos de ensayo una especie de masa y tuvo una
menos en el primero, la reaccin fue reaccin efervescente bastante espesa,
mayor en el tubo nmero 4 que en el estos cambios se deben a que los
tubo numero 2 por lo tanto, entre ms niveles de pH que tienen el cido
extracto de hgado haba la actividad actico y el hidrxido de sodio son muy
enzimtica era ms fuerte, si se hubiese diferentes a los niveles ptimos de esta
seguido aumentando la concentracin enzima lo cual conduce a una reduccin
enzimtica se hubiese llegado a un en la actividad enzimtica.
punto donde la actividad enzimtica no En la parte e en el tubo nmero 1 hubo
hubiera aumentado, porque existe una una reaccin efervescente bastante
relacin lineal entre la cantidad de rpida y fuerte lo que indica que hay
enzima y el grado de actividad. bastante enzimas que pueden
En la parte b se observ que entre ms reaccionar con el sustrato, en el tubo
perxido de hidrogeno se agreg ms nmero 2 la reaccion se vio bastante
fuerte era la reaccin, si se hubiese diferente, dejando una capa espesa
seguido agregando sustrato se hubiera arriba y una capa trasparente abajo, en
llegado a un punto en donde la actividad el tubo nmero 3 no hubo ninguna
enzimtica no hubiera aumentado por reaccin, quedo completamente igual,
que el ndice de actividad enzimtica se esto seala que no haba ninguna
vuelve independiente a la concentracin enzima que reaccionara con el sustrato,
del sustrato. en el tubo nmero 4 se volvi de un
color morado claro con el lugol.
En la parte c en el tubo numero 1 el cual
se someti a bajas temperaturas se vio CONCLUSION
una actividad enzimtica reducida, en el Se concluye que en diferentes
tubo numero 2 el cual se mantuvo a condiciones a la que fueron sometidas
temperatura ambiente tubo una las enzimas, las mismas sufren una
actividad enzimtica normal y el tubo variacin en su actividad enzimtica eso
numero 3 el cual se someti a altas se debe a que la enzima maneja una
temperaturas en un bao mara hubo temperatura y un pH ideal, y al alterarse
una reaccin bastante dbil, esto se alguno de los dos el resultado de la
debe a que las enzimas manejan una reaccin sufre un cambio, aunque el pH
temperatura ideal y cuando se calienta y optimo en las enzimas no es el mismo
se lleva a cierta temperatura la protena para todas ya que en unas varan, como
se desnaturalizo y cuando se llev a una es el caso de la pepsina la cual no se
temperatura baja se obtuvo una desnaturaliza con el pH del estomago
reaccin leve debido a que la 4. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
temperaturas bajas detienen la actividad
enzimtica pero no las destruyen. 1. Para los procedimientos realizados
identifique la enzima y los respectivos
sustratos.
R- La enzima utilizada en este laboratorio llamada activacin se produce debido a la
fue la peroxidasa, las cuales son un tipo gran afinidad qumica (electrnica) por
de enzimas muy extendidas en todo el rbol ciertas reas de la enzima, sitios activos.
filogentico de la vida. Pertenecen a la 5. Desde el punto de vista enzimtico
categora de las oxidorreductasas y segn cmo una fiebre alta puede afectar su
el Comit de Nomenclatura de la Unin actividad? Explique.
Internacional de Bioqumica y Biologa R- Las enzimas son susceptible a los
Molecular se clasifican con los nmeros EC cambios de temperatura, las enzimas tienen
1.11, y el sustrato que se utilizo fue el una temperatura ptima. Cuando la enzima
perxido de hidrogeno el cual tambin es est en su temperatura ptima la actividad
conocido como agua oxigenada , enzimtica est en su punto ms alto,
dioxogen o dioxidiano, es un compuesto cualquier cambio en la temperatura a partir
qumico con caractersticas de un lquido ah va a generar una disminucin en su
altamente polar, fuertemente enlazado con actividad enzimtica, no todas las enzimas
el hidrgeno tal como el agua, pero que en tienen la misma temperatura optima, por lo
general se presenta como un lquido tanto la actividad enzimtica de algunas
ligeramente ms viscoso que sta. Es enzimas en caso de fiebre se reducen
conocido por ser un poderoso oxidante. mientras que en otras aumentan porque
2. Cmo explicara usted el burbujeo tienen una temperatura optima mayor.
que se produce al aplicar perxido de 6. A qu se debe que una enzima actu
hidrogeno (H2O2) a una herida; Cul es mejor a un determinado pH y sea inactiva
el propsito de este procedimiento? a otro explique?
R-El agua oxigenada se usa como
R- Se debe a que las enzimas adems de
desinfectante cuando se echa sobre una
tener una temperatura ptima tambin
herida. La sangre contiene una enzima que
cuentan con un PH ptimo en la cual la
acta como un catalizador (peroxidasa),
acelerando la reaccin de descomposicin actividad enzimtica alcanza su punto ms
del agua oxigenada. Como muchas de las alto, y cualquier desviacin en los niveles de
bacterias patgenas son anaerobias (no PH van a causar que la actividad enzimtica
pueden vivir con oxgeno), mueren en la disminuya. Entre ms alejado estn estos
espuma blanca rica en oxgeno que se niveles del PH optimo, menor ser la
produce cuando la sangre de la herida actividad enzimtica, los PH extremos
acta sobre el agua oxigenada. (niveles muy alejados del optimo) pueden
3. Realice una breve descripcin de la ocasionar la desnaturalizacin de las
forma en que se puede inhibir la enzimas, debido a que la estructura con
actividad de una enzima. estos cambios es posible modificar las
R- La actividad de una enzima se puede interacciones inicas que intervienen en la
inhibir utilizando agentes qumicos que estabilidad de la enzima en su estado
alteren de forma drstica el pH del medio en nativo.
que encuentre la enzima, lo cual lleva a una
reduccin en la actividad enzimtica y en BIBIOGRAFIAS.
caso de que los niveles de pH sean muy
extremos llevara a la desnaturalizacin de Pelczar Michael. 1982. Micro Biologa. 4
la misma. Edicin. Editorial libros McGraw-Hill DE
4. Est usted de acuerdo con la MEXICO, S.A. de C.V.
interaccin enzima - sustrato es anloga Larner, J.: Interediary Metabolism and its
a lo de una cerradura y su llave. Explique Reguation , Prentice-Hall, Englewood Cliffs,
su respuesta N.J., 1971.
R- estoy de acuerdo con esta analoga Jean, C. 2011. Biologa Celular y Molecular.
debido a que los sitios activos de una 5o Edicin. Editorial Panamericana S.A.C.F.
enzima especfica solo reacciona con un
sustrato especfico, esta reaccin tambin

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