Cdigo LQ-323

MANUAL DE LABORATORIO DE QUIMICA ORGANICA II

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DETERMINACIN DE VITAMINA A EN AZCAR FORTIFICADA
Fecha

1. Objetivo General
Lograr la determinacin del trans-retinol conocido como Vitamina A en azcar fortificada a
travs del mtodo Espectrofotomtrico.

2. Objetivos especficos
1. Realizar la extraccin del trans-retinol presente en el azcar, usando como disolvente el
hexano.
2. Determinacin de la concentracin de vitamina A presente en el azcar comercial (mg/kg).

3. Revisin
La Vitamina A o trans-retinol es una vitamina liposoluble que es usada como un aditivo de
fortificacin para el azcar comercial (sacarosa) y su frmula qumica es:

La tcnica espectrofotomtrica se basa en la medicin de la Absorbancia, la cual est

directamente relacionada con la concentracin del analito investigado, mediante la siguiente
ecuacin (Ley de Beer).

As = as bc = Absorbancia
Donde b representa la longitud (cm) del camino ptico entre las superficies lmite de la
disolucin (celda ptica), as es el ndice de absorbancia y c representa la concentracin (g/mL)
de la disolucin de azcar preparada para fines de cuantificacin, la cual conlleva una dilucin.
Para expresar la concentracin de vitamina A en el azcar se utilizan unidades de mg de vitamina
A/kg de azcar. Para realizar este clculo considere:

A =

Donde cada elemento de la ecuacin expresa:

Elemento Concepto Valor

ABS Absorbancia a longitud de onda 325 nm -
Vh Volumen de la fase orgnica (mL) 3,0
VI Volumen inicial de la muestra (mL) 250,0
D Dilucin (5/10) 2
FC Factor de correccin de longitud de onda 1.007
Coeficiente de Absortividad del Palmitato de retinol (g-1cm-1mL) 0.092
Vaz Volumen de la alcuota analizada disolucin de azcar (mL) 2,0
mmta Masa de la muestra en (g) 100,00
R Recuperacin 0.905
B Espesor de la celda (cm) 1
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En resumen la ecuacin quedara de la siguiente manera:

A (mg/Kg de azcar) = 49.5776

En esta prctica deber explorar su libro de texto de Wade la seccin 15.13 sobre Espectroscopia
de absorcin en el ultravioletala, donde deber entender los principios bsicos de la tcnica.

4. Material de vidrio y equipo de laboratorio

Espectrofotmetro (325 nm) Agitador tipo Vortex
Varilla de reflujo. Pipetas Volumtricas de 2 mL, 3 mL y
Cubetas pticas o Celdas de 1 cm de 5mL
longitud. Baln Volumtrico 250 mL y 100 mL
Bao mara Beaker 250 mL
Balanza semi analtica Tubos de ensayo con tapn
Agitador Magntico

5. Reactivos
Disolucin Hidrxido de sodio (NaOH) Fenolftalena
aprox 0,1 mol/L Hexano
Etanol

6. Experimentacin
Preparacin de la muestra hasta disolver la matriz del compuesto fortificante en el
azcar (Vitamina A)
En un beaker de 250 ml pesar 100,00 0,01 g de azcar, rpidamente disolver con
aproximadamente 100 ml de agua caliente a 85 1 C con ayuda de un agitador magntico hasta
que todo el azcar se disuelva completamente.
Enfre las disoluciones, asegurndose que estn cubiertas de la luz, transfiera cuantitativamente
a un baln volumtrico de 250 mL, lave varias veces el beaker con pequeas porciones de agua
destilada, transfiera los lavados al baln y afore a 250 mL con agua destilada, al final se procede
a homogenizar la disolucin.

Extraccin del trans-retinol por medio de Hexano

Transferir 5 ml de la disolucin preparada a un tubo de ensayo, agregar 5 ml de la disolucin de
hidrxido de sodio y mezclar agitando manualmente por 30 segundos. En otro tubo de ensayo
agregar 2 mL de la disolucin obtenida anteriormente y agregar de 2 a 3 gotas de fenolftalena
en el tubo de ensayo seguidamente de 3 mL de etanol, mezclar nuevamente por 30 segundos.
Medir 3 mL de hexano con una pipeta volumtrica y luego agregarlo cuidadosamente en el tubo,
cerrar inmediatamente y agitar por 120 segundos, para asegurar la extraccin completa del
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retinol. Destape ligeramente los tubos para aliviar la presin del gas. La fase acuosa es de color
fucsia, mientras que la fase orgnica es incolora.

Medicin cuantitativa por medio de espectrofotometra

Preparar el espectrofotmetro segn las condiciones del fabricante y ajustar la longitud de onda
a 325 nm. Transferir a la cubeta la fase orgnica de la disolucin y llenar. Determinar la
absorbancia de la disolucin, emplear un blanco reactivo como patrn de referencia de
absorbancia cero; Se introduce al sistema los datos para calcular los mg/L de Vitamina A.

7. Evaluacin
1. Por qu se protege de la luz las disoluciones de azcar forticada con vitamina A,
justifique con alguna reaccin que sufre el trans-retinol?
2. Por qu algunos compuestos orgnicos son coloridos y se pueden usar como cromforo
(investiguen que es un cromforo y enliste tres de ellos)?
3. El Licopeno es un compuesto natural que puede ser estrado de tomates y sanda,
investigue como podra determinar concetraciones de Licopeno en tomates.
4. Cul es la importancia de fortificar el azcar con vitamina A, adems investigue que
materia prima utilizan los ingenios del pas para realizar esta fortificacin? .
5. Determine con la ley de Lambert-Beer y teniendo en cuenta que se realizan diluciones y
una extraccin como se lleg a la ecuacin de los mg de Vitamina A/Kg de azcar.