Biotecnologa

2017
Proyecto de Investigacin:
Obtencin de quitina por va fermentativa bacteriana Quiones Cerna Claudio
Universidad Nacional Eduardo
de Trujillo

Obtencin de quitina por fermentacin bacteriana

1. Objetivo.

Obtener quitina a partir de exoesqueleto de langostino a travs de la fermentacin

bacteriana.

Evaluar el rendimiento de obtencin de la quitina por peso seco.

2.- Materiales y equipos.

Materiales

Caldo nutritivo modificado

Cepas bacterianas: Bacillus subtilis, Lactobacillus sp y Streptococcus thermophilus

Tubos eppendorf de 50 ml

Agua destilada estril

Placas Petri

Mechero y asa bacteriolgica.

Tubos de vidrio estriles.

Equipos

Centrifuga refrigerada marca eppendorf

Incubadora

Estufa

3.- Procedimiento.

Se prepar 500 ml de agar nutritivo modificado: 0,5 % de peptona, 0,5% de extracto de

carne y 0,5 % de NaCl. Se esteriliz por autoclave a 121 C por 15 minutos. Se inocul 5 ml
de una suspensin de Bacillus subtilis a una concentracin del tubo N3 de Mac Farland,
para la fase de desproteinizacin 9 gramos de exoesqueleto de quitina, previamente
purificada. Se incub a 35 C en condiciones estticas por 4 das.

Luego de la fase de desproteinizacin, de los 500 ml se tom 35 ml y se verti en cada uno

de los cuatro tubos eppendorf de 50ml, se centrifug a 800 rcf por 8 min, se descart el
sobrenadante y se volvi a vertir en los tubos los restos de los 500 ml anteriormente, se
homogenizo en un vortex y se volvi a centrifugar, as sucesivamente hasta quitar todo el
residuo del exoesqueleto desproteinizado del matraz anteriormente. Se lav con agua
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destilada 2 veces y se verti en placas Petri. Se coloco a secar a la estufa a 70C por 24
horas. Se anot el peso.

Para la fase de desmineralizacin, se prepar 200 ml de caldo para lactobacillus

conformado por: 1% de peptona, 0,5% de extracto de levadura, 6% de fosfato
monopotasico, 0,2% de citrato de sodio, 2 % de glucosa, 0,1 % de polisorbato 80, 0,13 %
cido actico, 0,0575 % de sulfato de magnesio, 0,012 % Sulfato de manganeso y 0,0034 %
de sulfato de hierro II. Se nivel a un pH 6 y se esteriliz por autoclave. Se inocul 10 ml de
un consorcio de Lactobacillus sp y Streptococcus thermophilus, adquirida en una tienda
comercial de yogurt, y se agreg el exoesqueleto de langostino tratada anteriormente. Se
incub a 35 C por 2 das en condiciones estticas. Una vez terminado se procedio a
centrifugar igual a lo descrito anteriormente. Se lav con agua destilada 2 veces y se verti
en placas Petri. Se coloco a secar a la estufa a 70C por 24 horas. Se anot el peso.

4. Resultados.

Figura N1.- Caldo nutritivo modificado para la fase desproteinizacin.

Figura N2.- Peso seco del exoesqueleto del langostino luego de la fase de desproteinizacin.
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Figura N2.- Medio de cultivo para la fase de desmineralizacin despus de los dos das
tratados.

Figura N3.- Peso seco despus de la fase de desmineralizacin.

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Figura N4.- Exoesqueleto despus de la fase fermentativa bacteriana vertidas en placas

para su secado.
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Tabla N1. Peso y rendimiento del proceso de obtencin de la quitina por va fermentativa
bacteriana.

Gramos Peso (gramos)

Peso inicial 9
Fase de desproteinizacion 6,301

Fase de desmineralizacion 4,12

Rendimiento(%)
Fase de desprotenizacion 70,01111111

Fase de desmineralizacion 65,3864466

Quitina obtenida 45,77777778

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5.- Conclusin.

Se obtuvo un rendimiento de 45,8 % de quitina obtenida del exoesqueleto de langostino a

travs de la via fermentativa por microorganismos.