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Eletroforese

A eletroforese uma tcnica baseada na separao de partculas, que ocorre quando as mesmas so
dissolvidas ou suspensas em um eletrlito, atravs do qual uma corrente eltrica aplicada. tambm usada
na identificao de substncias, no estudo de homogeneidade de sistemas biolgicos e na determinao de
pontos isoeltricos.
Esta tcnica consiste na migrao de molculas ionizadas, em soluo, de acordo com suas cargas eltricas e
pesos moleculares em campo eltrico. Molculas com carga negativa migram para o plo positivo (nodo) e
molculas com carga positiva migram para o plo negativo (ctodo).

Arne Tiselus desenvolveu a eletroforese livre, para o estudo de protenas em soro (atravs do qual ganhou o
Premio Nobel em 1948), um tipo de eletroforese em que as substncias a serem separadas esto em soluo
ou suspenso, e que no emprega suporte.

Este mtodo de soluo livre era bastante limitado devido a essas solues estarem sujeitas a uma srie de
influncias fsicas do ambiente que lhes causam perturbaes, tais como ondas mecnicas e at mesmo
movimentos de conveco do lquido pelo aquecimento da soluo causado pela aplicao da diferena de
potencial. Estas perturbaes fazem com que a eletroforese, nessas condies, seja um processo muito pouco
reprodutvel, com as cargas de mesma natureza no migrando juntas, mas sim, dispersas.

Para contornar esses problemas, desenvolveram-se sistemas em que tais perturbaes eletroforese so
minimizadas. Esses sistemas utilizam matrizes rgidas conhecidas como suportes com as quais a soluo
interage e que diminuem as perturbaes mecnicas e os movimentos de conveco no lquido. Existem
diferentes meios-suporte, tais como papel de filtro, slica gel, membranas de acetato de celulose, gel de
agarose, amido ou poliacrilamida, entre outros.

A eletroforese que utiliza suporte tambm conhecida como eletroforese de zona, e foi iniciada por Knig em
1937 (mesmo perodo em que a eletroforese livre era descrita por Tiselius) na separao de veneno de cobra
recorrendo a papel de filtro como meio-suporte, mas s mais tarde, em 1946, foi retomada por Martin e
colaboradores.

Dependendo do suporte que utilizamos para a eletroforese e da natureza das macromolculas, podemos separ-
las mais com base na carga ou mais com base em seu tamanho.

Os suportes em gel apresentam grande capacidade de separar as molculas com base no tamanho molar (sendo
praticamente o nico tipo de suporte para eletroforese utilizado para a separao de fragmentos de cidos
nuclicos).

J a eletroforese em suporte de papel muito eficiente no que diz respeito a separao de partculas com
grande diferenas de cargas, como por exemplo a separao de protenas que, devido variada composio
de seus aminocidos, apresentam grandes diferenas na carga total.

Em razo de algumas partculas serem substncias anfteras, ou seja, capazes de adquirirem carga positiva ou
negativa em funo do pH, indispensvel manter constante o pH do meio durante a eletroforese, pelo uso de
solues-tampo.
Os principais tipos de eletroforese so:

Eletroforese em gel

Eletroforese capilar

1. ELETROFORESE EM GEL
uma tcnica de separao de molculas onde as partculas que so carregadas negativamente por um
composto denominado SDS (detergente dodecil sulfato de sdio), com exceo do DNA que j possui um
carter de ction, migram em um determinado gel durante a aplicao de uma diferena de potencial em
direo a um eletrodo positivo, sendo que este criado por uma corrente eltrica, e posteriormente so
aplicadas sobre o gel.

Para a separao das molculas nesta tcnica, temos que levar em considerao o tamanho da molcula, sendo
que as de menor massa migram mais rapidamente do que as de maior, pois possuem mais agilidade de
mobilidade. Em alguns casos o formato da molcula tambm influencia, pois dependendo do formato as
mesmas tero mais facilidade de migrar pelo gel. importante ressaltar que a eletroforese utilizada
normalmente para a separao de protenas e molculas de DNA e RNA.

1.1 SUBDIVISES DA ELETROFORESE EM GEL:


1.1.1 ELETROFORESE EM GEL DE AGAROSE
A agarose um polissacardeo composto por agar e pectina.

Para preparar este gel, simplesmente faz-se a mistura entre o p de agarose e soluo tampo. Aps fundir,
coloca-se brometo de etidium, que tem ampla afinidade pelo DNA, e revela sobre presena de UV(ultra
violeta) os cidos nuclicos.

Quando a mistura esfriar o gel estar duro. Esse endurecimento feito em um local apropriado, o mesmo local
onde ser feita a corrida da amostra. Um detalhe importante a colocao do pente no gel durante o
endurecimento. O pente cria poos que sero utilizados para a colocao das amostras. Podemos ver este
processo como uma corrida. Cada um colocado numa pista e na presena de uma corrente eltrica vai
deixando o seu rasto. So estes rastos que sero comparados no mtodo.

O gel de agarose e usado pois tem uma maior extenso de separao para fragmentos longos de DNA(
identifica os cidos nuclicos presente neste). O tamanho e a conformao da molcula de DNA, a
concentrao do gel de agarose , a corrente eltrica aplicada e tipo de tampo usado influenciam a velocidade
da partcula no gel.

1.1.2 ELETROFORESE EM GEL DE POLIACRILAMIDA


A poliacrilamida uma mistura de dois polmeros, acrilamida e bisacrilamida. Para preparar este gel, basta
adicionar os dois polmeros nas concentraes desejadas em um suporte de vidro e na presena de um
catalisador.

Esta tcnica utilizada, pois o gel poliacrilamida tem a capacidade de separar fragmentos muito pequenos de
DNA e que apresentam uma mnima diferena de massa, alm disso o gel pode recuperar e purificar
determinada amostra.
Apesar das vantagens, o gel de agarose mais utilizado pois a poliacrilamida muito txica e difcil de ser
preparada. Neste tipo de gel a corrida feita em cubas verticais, e o carante utilizado o mesmo da eletroforese
em gel de agarose.

Existem dois tipos de gel de poliacrilamida:

Desnaturante: separa e purifica fitas simples de DNA, e convenciona desnaturante pois e polimerizado pela
uria.
No desnaturante: separa e purifica fitas duplas de DNA.

2. ELETROFORESE CAPILAR
A eletroforese definida como o transporte, em soluo eletroltica, de compostos carregados eletricamente
sob a influncia de um campo eltrico, no qual a separao entre dois solutos ocorre de acordo com diferenas
entre suas mobilidades eletroforticas.
Esta tcnica que foi introduzida em 1981, por Jorgenson e Lukacs e tem sido aceita cada vez mais, como um
importante mtodo analtico. Em sua forma mais simples a eletroforese capilar uma aproximao da tcnica
original, descrita por Tiselius para o estudo de protenas em soro, porm emprega-se um tubo capilar,
preenchido com um eletrlito, tendo como principal vantagem o uso de capilares com dimetros internos
extremamente pequenos (na faixa de 15-100? m) permite uma melhor dissipao do calor e, assim, possvel
obter uma alta eficincia de separao com tempo reduzido de anlise.

A eletroforese capilar uma tcnica aplicvel na determinao de uma grande variedade de amostras,
incluindo hidrocarbonetos aromticos, vitaminas hidrossolveis e lipossolveis, amino cidos, ons
inorgnicos, cidos orgnicos, frmacos, catecolaminas, substncias quirais, protenas, peptdeos e muitos
outros.

Uma caracterstica que difere a eletroforese capilar das demais tcnicas a sua capacidade nica para separar
macromolculas carregadas eletricamente de interesse tanto em indstrias de biotecnologia quanto em
pesquisas biolgicas. Um exemplo disso o projeto Genoma Humano, que foi concludo recentemente, que
teve como meta obter a seqncia completa do DNA humano e para isso foi necessrio distinguir os diversos
polinucleotdeos, com massas molares, por volta de 200 a 500 Daltons que diferiam entre si por um nico
nucleotdeo. Somente a eletroforese capilar tem resoluo suficiente para este tipo de separao.

Alm disso, o DNA humano contm cerca de trs bilhes de nucleotdeos e as altas velocidades de anlises,
obtido pela eletroforese capilar, permitiram que milhares de nucleotdeos fossem seqenciados em um nico
dia.

2.1 ELETROFORESE CAPILAR EM ZONA OU SOLUO LIVRE


A separao de ons a forma mais simples de eletroforese capilar e denominada eletroforese capilar em
soluo livre ou em zona. Muitos compostos podem ser separados rapidamente e facilmente por esta tcnica,
pois a separao em nesta tcnica baseada nas diferenas nas mobilidades eletroforticas resultantes das
diferentes velocidades de migraes de espcies inicas no tampo, contido dentro do capilar.

Como Funciona est tcnica:


O capilar preenchido com uma soluo tampo de composio constante, a qual est presente tanto no nodo
como no ctodo. Em uma amostra tem-se uma mistura de espcies carregadas eletricamente e espcies neutras,
onde os ons, apresentam tamanhos e cargas diferentes. A amostra introduzida na extremidade andica
(nodo) do tubo e, ao ser aplicada uma diferena de potencial entre as extremidades da coluna, os ons migram
atravs do tubo com diferentes velocidades e em diferentes sentidos. A velocidade e o sentido de migrao
dependem do tamanho e da magnitude de carga de cada on. Deve ser ressaltado que as espcies neutras no
sofrem influncia do campo eltrico e por isso migram conjuntamente.

Na eletroforese capilar de zona, alm dos solutos, a soluo tampo, normalmente, move-se atravs do capilar
sob o efeito de um campo eltrico (Este fenmeno denominado fluxo eletroosmtico ou eletro-endosmtico).

Durante uma operao convencional, o fluxo eletroosmtico origina-se no nodo e dirige-se ao ctodo devido
formao de uma dupla camada inica que ocorre na interface entre o capilar de slica fundida e a soluo
nele contida. Os grupos silanis presentes na superfcie do capilar so cidos fracos que se ionizam a partir de
pH 3-4 (estando totalmente ionizados em meio alcalino), criando uma superfcie carregada negativamente.
Esta camada negativa na superfcie atrai para sua proximidade as espcies carregadas positivamente da
soluo, formando uma camada positiva, a qual ser mobilizada pela presena do campo eltrico.

A atrao dessa camada pelo ctodo arrasta a soluo do interior da coluna, criando assim um fluxo com perfil
reto, em contraste com o perfil parablico que criado em sistemas pressurizados.

O fluxo eletroosmtico proporciona duas grandes vantagens, sendo que a primeira delas que ctions e nions
podem ser separados numa nica anlise, e a outra vantagem que mesmo os ons com razes carga/raio
muito diferentes podem ser analisados em um tempo relativamente curto devido magnitude este fluxo.

O pH da soluo tampo um dos parmetros que afeta fortemente a separao em eletroforese capilar em
zona, pois este parmetro afeta tanto o fluxo eletroosmtico, quanto a mobilidade eletrofortica dos analitos.
Isto, tendo em vista medida que o pH elevado tem-se um aumento do fluxo eletroosmtico, pois ocorre um
aumento da dissociao dos grupos Si-OH que se encontram nas paredes internas do capilar. O fluxo
eletroosmtico tambm afetado pela concentrao do tampo e pela fora inica mas, sobretudo, pelo pH.
No que se refere ao controle da seletividade da separao dos analitos, a variao do pH afeta o grau de
ionizao dos analitos e, portanto, suas mobilidades eletroforticas.

Normalmente, o tampo escolhido para promover a melhor separao entre os analitos e no necessariamente
a velocidade eletroosmtica mais adequada.

A anlise qualitativa feita atravs da comparao dos tempos de migrao dos padres com os tempos de
migrao das substncias presentes na amostra e/ou atravs de espectros de UV/Vis (detector por arranjo de
diodos) ou do espectro de massas (detector espectrmetro de massas).

A quantificao das substncias, com concentraes desconhecidas, presentes na amostra, feita


atravs do procedimento usual de calibrao:

1. Injeo de solues dos padres de concentraes conhecidas


2. Obteno das respostas do detector para cada composto, em funo da altura, rea ou rea dividida pelo
tempo de migrao
3. Construo da curva analtica (resposta do detector versus concentrao)
4. Injeo das amostras
5. Obteno das respostas do detector para as amostras
6. Quantificao das substncias atravs das curvas analticas.
2.2 ELETROFORESE CAPILAR EM GEL
A separao de biomolculas grandes, tais como DNA, por ECSL, s vezes muito difcil de se obter devido
similaridade nas razes massa/carga. Assim ECSL muitas vezes no suficiente para separar estes tipos de
substncias. Uma alternativa preencher o capilar com um gel, onde o principal mecanismo de separao est
baseado nas diferenas nos tamanhos dos solutos que migram atravs dos poros do polmero. Esta tcnica
denominada eletroforese capilar em gel. ons menores migram mais rapidamente enquanto que solutos
maiores ficam mais tempo retidos. Alm disso, o gel serve como um meio anticonvectivo, minimizando a
difuso dos solutos. Ele tambm previne a adsoro do soluto nas paredes do capilar e ajuda a eliminar a
eletroosmose.

A implementao da tecnologia para fabricao de capilares preenchidos com gel confrontou-se com vrios
problemas. Primeiramente, ocorria o fenmeno de encolhimento do polmero durante o processo de fabricao
no interior do capilar, o que gerava rupturas na estrutura final do gel. Estas rupturas estruturais formavam
bolhas de ar, que eventualmente causavam interrupo da corrente eltrica durante a eletroforese. Outro
aspecto relacionava-se com o uso de altas voltagens. Nestas condies, o fluxo eletroosmtico era
suficientemente forte para arrastar o gel para fora do capilar. Por este motivo, o uso de agarose na fabricao
de capilares foi logo descartado, porque alm do baixo ponto de fuso, agarose contm grupos ionizveis,
capazes de gerar fluxo eletroosmtico.

Em 1987, B. L. Karger e A. S. Cohen apresentaram solues para ambos os problemas, descrevendo, a


fabricao detalhada de capilares preenchidos com gis fisicos.

O mtodo de Karger e Cohen consiste num pr-tratamento do capilar com o reagente de dupla
finalidade: eliminar o fluxo eletroosmtico atravs de uma ligao covalente com os grupos da superfcie
capilar e evitar a extruso do gel durante operao do sistema, atravs da ligao covalente com o gel a ser
formado na etapa seguinte. O capilar ento preenchido com uma soluo tamponada e com catalisador. As
extremidades do capilar so imersas em soluo tampo e a polimerizao do gel ocorre, aps algumas horas.
Uma das principais vantagens de realizar separaes eletroforticas em um capilar que o seu formato
possibilita a dissipao eficiente do calor gerado pelo efeito Joule. Em CGE, esta vantagem duplamente
verificada, em razo da geometria do capilar e das propriedades anti-convectivas do gel.

2.2.1 ELETROFORESE DE CIDOS NUCLICOS


Por meio dessa tcnica possvel separar molculas em funo da sua massa (tamanho), forma e compactao.
Trata-se de uma tcnica rpida, sensvel e precisa. A molcula em questo, por exemplo o DNA, migra em
suportes (gis de agarose ou acrilamida) por ao de uma corrente eltrica, com diferentes velocidades,
dependendo do seu tamanho e forma. Quando submetido a um campo eltrico, as molculas de DNA migram
para o plo positivo, pois so carregadas negativamente, e como fora oposta migrao existe o atrito com
o suporte (gel). Quanto maior a molcula, maior o atrito e mais lenta a migrao; portanto, molculas de
tamanhos diferentes tero migrado uma distncia diferente depois de algum tempo. A distncia que o
fragmento percorreu a partir do ponto de aplicao comparada com a distncia que outros fragmentos de
tamanhos conhecidos percorreram no mesmo gel. O DNA pode ser visualizado na presena de compostos
intercalantes, sendo que o mais utilizado o brometo de etdio.

Em presena desse composto, o DNA emite fluorescncia por exposio luz UV e, assim, molculas de um
mesmo tamanho so visualizadas em um mesmo ponto do gel, formando uma faixa fluorescente.
Se na amostra submetida corrente eltrica existir mais de um tamanho de molcula, estas sero separadas na
migrao e, ento, sero visveis bandas em diferentes localizaes do gel.

Basicamente, duas matrizes slidas so utilizadas atualmente para eletroforese: gis de agarose e gis de
acrilamida. A escolha do tipo de gel depende do tamanho do fragmento e da diferena de tamanho de diferentes
fragmentos de DNA que se quer visualizar. As duas substncias formam tramas de poros de tamanhos
variveis, possibilitando a separao dos fragmentos, que ter sua eficincia dependente da concentrao do
polmero e da intensidade da voltagem e amperagem aplicadas.
Em qualquer um dos casos, estas substncias so dissolvidas numa soluo-tampo eletroltica,
obrigatoriamente a mesma que recobrir o gel na cuba de eletroforese e possibilitar a passagem de corrente
eltrica (Tampo de Corrida). Para eletroforese de DNA, normalmente utiliza-se o TBE (Tris-Borato EDTA)
e o TAE (Tris- Acetato EDTA). Quanto aplicao das amostras no gel, importante ressaltar que antes disso,
elas so misturadas a outra soluo (Tampo de amostra), que tem como funo aumentar a viscosidade da
amostra e assim impedir que esta comece a flutuar no tampo de corrida antes que a voltagem seja aplicada
no sistema. Alm disso, o tampo de amostra possui um corante que possibilita a visualizao do andamento
da corrida.

Apesar de sua versatilidade e relativo baixo nvel de dificuldade de realizao, a eletroforese convencional
tem a desvantagem de identificar os fragmentos apenas quanto ao tamanho e no quanto seqncia.

CONCLUSO
Ao trmino deste trabalho de pesquisa conclumos que a eletroforese um processo analtico de separao de
misturas, cujo principal agente o campo eltrico.

Essa tcnica passou por evolues, com a introduo de um suporte como papel de filtro, slica gel, membranas
de acetato de celulose, gel de agarose, amido ou poliacrilamida, entre outros.

Atualmente o campo de aplicao da eletroforese tem sido amplamente difundido, devido simplificao de
aparelhagem utilizada e tambm disponibilidade de meios de suporte altamente purificados, o que veio
diminuir em muito o tempo gasto na separao.

As principais tcnicas de eletroforese so: eletroforese em gel, eletroforese capilar e capilar em gel. A
tcnica de eletroforese capilar possui uma srie de vantagens, tais como a rapidez, versatilidade, um baixo
custo por anlise, alto poder se separao (resoluo) e um consumo mnimo de amostras, reagentes e
solventes. Alm disso, oferece a possibilidade de automao e deteco on-line.
Entretanto esta tcnica oferece algumas limitaes, pois no adequada para a determinao de compostos
volteis, no-polares e de massa molar baixa, os quais so melhores determinados por cromatografia gasosa.
Tambm no muito adequada para a anlise de polmeros no inicos de massa molar alta e no to sensvel
quanto a cromatografia lquida de alta eficincia.

A eletroforese de grande importncia para as cincias, permitindo a separao e identificao de molculas


de DNA por meio da diferena de velocidade de migrao, identificao de pessoas em testes de paternidade
pela comparao de DNA, na indstria farmacutica e at mesmo na agropecuria.
Eletroforese
A Eletroforese, ferramenta amplamente utilizada no meio cientfico, uma tcnica baseada na separao de
partculas em um determinado gel de acordo com sua massa e carga.
A eletroforese pode ser utilizada para separao de diversas molculas orgnicas, como lipoprotenas,
protenas, RNA e DNA.

O princpio da eletroforese utilizada para separao de DNA se baseia na carga negativa global de uma fita de
DNA.

Portanto, ons livres, molculas de DNA ou fragmentos de DNA em uma soluo podem ser separados
aplicando-se uma certa voltagem.

Ao final do processo as cadeias de DNA estaro prximas ao catodo (positivo), que atrai, devido polaridade,
molculas de carga negativa.

O gel de poliacrilamida forma uma malha constituida por uma rede de polmeros que permite a migrao de
molculas.

Molculas de menor peso molecular tero mais facilidade em atravessar a malha do gel, se posicionando assim
mais prximas do catodo; enquanto as moleculas com maior peso apresentam maior dificuldade e se
posicionam mais prximas do anodo.

A distncia que o fragmento percorreu a partir do ponto de aplicao comparada com a distncia que outros
fragmentos de tamanhos conhecidos percorreram no mesmo gel. So os marcadores de tamanho molecular
(Ladders = Escadas), que so misturas de trechos de DNA com tamanhos variveis.

Existem dois modelos bsicos de eletroforese: Baseada em gis de agarose ou em gis de poliacrilamida.
As duas substncias formam tramas de poros de tamanhos variveis, possibilitando a separao dos
fragmentos, que ter sua eficincia dependente da concentrao do polmero e da intensidade da voltagem e
amperagem aplicada.

Fonte: www.icb.ufmg.br

Eletroforese

Eletroforese de Protenas

2. Conceitos
Eletroforese um termo bastante amplo, que se refere migrao de solutos e partculas em um meio lquido,
sob influncia de um campo magntico. As protenas possuem cargas positivas e negativas, sendo sua
mobilidade eletrofortica diretamente proporcional carga da partcula e inversamente proporcional
viscosidade do meio.
Existem atualmente dois tipos de metodologia de eletroforese:
2.1 Eletroforese convencional por zona
Existem atualmente dois tipos de metodologia de Eletroforese. Na metodologia convencional, de eletroforese
por zona, as protenas migram em meio de suporte poroso como acetato de celulose, gel de agarose ou
poliacrinamida, gerando um eletroferograma por zonas de protenas.

2.2 Eletroforese capilar


A eletroforese capilar baseia a separao das protenas pelo seu tamanho e outras propriedades fsico-
qumicas, atravs do fluxo em um tubo capilar. O mtodo semelhante HPLC (Cromatografia Lquida de
Alta Performance), que utiliza colunas similares agarose, fornecendo resultados comparveis eletroforese
em gel de agarose.

Devido sua alta resoluo, a eletroforese capilar permite a separao de bandas pouco visveis no mtodo
convencional, como os picos de Beta1 (transferrina e hemopexina) e Beta2 (complemento C3), resultando em
um padro de seis bandas. Estas caractersticas permitem ganho adicional na avaliao de pacientes com
gamopatias monoclonais.

2.3 Vantagens da Eletroforese capilar


Estudos clnicos demonstram uma maior sensibilidade da eletroforese capilar (93 a 95%) para a deteco de
gamopatias monoclonais, em relao eletroforese por zona em gel de agarose (86 a 91%). A eletroforese
capilar particularmente mais sensvel deteco de componentes monoclonais em pequenas concentraes,
especialmente IgA ou cadeias leves, que podem no ser detectadas pela tcnica em gel de agarose, devido
co-migrao com a transferrina e o C3. Outra vantagem a no deteco dos picos de fibrinognio pela
eletroforese capilar, que uma constante fonte de resultados falsamente positivos quando se utiliza a
metodologia convencional de eletroforese por zona. O fibrinognio, normalmente ausente nas amostras de
soro, pode ser detectado em casos de coagulao incompleta do sangue (amostra processada em tempo
insuficiente) ou quando o paciente se encontra sob utilizao de drogas anticoagulantes.

O aumento da sensibilidade com a eletroforese capilar, permite ainda uma maior deteco dos casos de
bisalbuminemia adquirida, que pode ter relevncia em algumas situaes clnicas como em casos de fstulas
pancreticas, presena de ascite e uso de antibiticos.

Outra vantagem do mtodo por capilaridade a possibilidade de automao total do processo, que garante
maior qualidade e rapidez de resultados.
Eletrofeferograma por anlise capilar, mostrando as difeferentes zonas de protenas
Zonas de eletrofores com correlao com as difeferentes protenas

Nota:
Pre A = pr-Albumina
Alb = albumina
a1 Ac = alfa1-Antiquimiotripsina
a1 Ag = alfa1-glicoprotena cida
a1 At = alfa1-antitripsina
a2M = alfa2-macroglobulina
aLp = alfa-lipoprotena
Pl = plasminognio
Hpx = hemopexina
Hpt = haptoglobina
AT3 = pr-Albumina
b Lp = beta-lipoprotena
C1q; C1r, C1s, C3, C4,
C5, C1inh = complemento
Cer = ceruloplasmina
CRP = protena C reativa
Fibr = fibrinognio
IgA, IgD, IgE, IgG,
IgM = imunoglobulinas
Tf = transferrina
FB = fator B

3. Principais protenas encontradas nas bandas eletroforticas


3.1 Albumina
Elevado: Desidratao aguda
Diminuido: analbuminemia, inflamaes, doena heptica, glomerulopatias, leso tubular, enteropatia
perdedora de protenas, doena inflamatria intestinal, desnutrio protica, linfomas, leucemias,
hipertireoidismo e uso de corticides. Durante a gravidez os nveis diminuem at a oitava semana, retornando
ao normal em cerca de oito semanas aps o parto. A bisalbuminemia, que uma anormalidade caracterizada
pela presena de uma dupla banda na zona de albumina, pode ser congnita e sem significncia clnica, ou
adquirida, e estar relacionada utilizao de antibiticos ou presena de ascite ou de fstula pancretica.
O aumento da intensidade da interzona albumina/alfa-1 globulina pode acontecer em casos de alcoolismo
crnico e gravidez. A diminuio est associada cirrose, hepatites e inflamaes.

3.2 Alfa-1 Globulina


Esta banda composta basicamente pela alfa-1-antitripisina. O restante (10%) se deve alfa-1-glicoprotena
cida, alfa-fetoprotena e certas protenas carreadoras. As elevaes desta zona esto associadas reao de
fase aguda, cirrose, disproteinemia familiar idioptica, Doena de Hodgkin, carcinomatose metasttica, lcera
pptica, gravidez, enteropatia perdedora de protena, estresse, colite ulcerativa, uso de estrgenos, corticides
e antiinflamatrios. A diminuio nesta banda pode estar associada a hepatites virais agudas, m-absoro,
enfisema pulmonar, sndrome nefrtica e ao jejum prolongado.

3.3 Alfa-2 Globulina


Composta pela haptoglobina, alfa-2 macroglobulina e ceruloplasmina. Esta zona encontra-se raramente
diminuda, uma vez que a diminuio de um dos componentes compensada pela elevao dos demais.

Pode se encontrar elevada nas seguintes situaes: Febre reumtica, analbuminemia, senilidade,
hipoalbuminemia, glomerulonefrite, cirrose, diabetes, disproteinemia familiar idioptica, Doena de Hodgkin,
doena aguda, carcinomatose metasttica, cirrose heptica, infarto agudo do miocrdio, mixedema, sndrome
nefrtica, osteomielite, lcera pptica, pneumonia, poliarterite nodosa, enteropatia perdedora de protena,
artrite reumatide, sarcoidose, estresse, colite ulcerativa e uso de corticides.
A haptoglobina uma glicoprotena de sntese heptica, que se liga de forma irreversvel hemoglobina aps
a hemlise das hemcias. Valores diminudos de haptoglobina so marcadores de hemlise. A alfa-2
macroglobulina o principal inibidor das proteinases plasmticas. A ceruloplasmina contem 95% do cobre
srico. Nveis diminudos ocorrem na doena de Wilson, desnutrio, sndrome nefrtica, e enteropatia perde-
dora de protenas. Nveis elevados podem estar associados reaes do tipo fase aguda .

3.3 Beta Globulina


A frao beta 1 corresponde a transferrina e hemopexina e a frao beta 2 corresponde ao complemento C3.
A transferrina a principal protena responsvel pelo transporte de ferro. Em casos de anemia ferropriva, seus
nveis se encontram elevados. Nveis elevados podem ser encontrados em casos de reao de fase aguda,
neoplasias, desnutrio protico-calrica e na perda de protenas (sndrome nefrtica, enteropatia perdedora
de protena).
O complemento C3 uma protena de fase aguda fraca e tardia, podendo tambm se encontrar elevada na
obstruo biliar.

3.4 Gama Globulina


A frao gama corresponde zona de migrao das imunoglobulinas (G, A, M, D, E). A interpretao de
variaes nesta zona depende da faixa etria e tambm de um mnimo de informaes clnicas.

Hipogamaglobulinemia

Hipogamaglobulinemia fisiolgica no recm-nato.


Imunodeficincia isolada ou total (envolvendo as trs classes de imunoglobulinas, G, M, A), em crianas e
adultos.
Hipogamaglobulinemia secundria, devido utilizao de corticides, terapia imunossupressora,
quimioterapia ou radioterapia.
Hipogamaglobulinemia do mieloma de cadeias leves: o diagnstico ser confirmado atravs da deteco de
protena de Bence-Jones na urina.

Hipergamaglobulinemia

Hipergamaglobulinemia policlonal (aumento difuso), observado principalmente em infeces hepticas,


AIDS ou doenas auto-imunes.
Hipergamaglobulinemia monoclonal (pico mo-noclonal homogneo), podendo estar associada com doena
maligna (mielona ou doena de Waldenstrm), em conjunto com leucemia linftica crnica ou linfoma, ou
gamopatia benigna, vista em pacientes idosos.
Na presena de pico monoclonal na zona gama, necessrio a eliminao da possibilidade de se tratar de
fibrinognio remanescente (o que no ocorre com a utilizao de eletroforese capilar).
Hipergamaglobulinemia oligoclonal (vrios e pequenos picos). Em casos especficos, a hiper
gamaglobulinemia resultante da elevao de subclasses de imunoglobulinas. Estas bandas so derivadas da
sntese de anticorpos contra vrios antgenos e s podem ser identificadas quando so utilizadas metodologias
de alta resoluo, como a eletroforese capilar.
Geralmente, estas imunoglobulinas correspondem a:
Doenas auto-imunes: artrite reumatide, sndrome de Sjgren, lupus eritrematoso, esclerose sistmica
progressiva.
Anticorpos contra protenas virais: HIV, hepatite viral, meningite, infeco por citomegalovirus.
Resposta auto-imune em pacientes transplantados sob terapia imunossupresora.
Resposta imune em indivduos normais: 1 a 5% dos indivduos normais podem apresentar forma oligoclonal
sem significado clnico. Este tipo de elevao monoclonal geralmente est presente em baixas concentraes
e de forma transiente.

Concluses
A eletroforese de protenas permanece como uma forma fcil e comum de investigao, sendo de utilidade
para a confirmao de caos de estados inflamatrios ou infecciosos, com respectivas elevaes poli ou
monoclonais de gamaglobulinas. A eletroforese capilar torna o teste mais sensvel e especfico, possibilitando
a deteco de alteraes que no poderiam ser vistas atravs das tcnicas tradicionais.

Referncias Bibliogrficas
1. Didier Le Carrer, Serum protein Electrophoresis Immunofixation, Edition FM-BIO, Vanves, 2005.
2. J. Villar Caso, Las protenas Del Plasma, Editorial Cientfico-Mdica-Barcelona, 1950.
3. Burtis CA, Ashwood ER. Tietz, Fundamentals of Clinical Chemistry 5th Ed., 2001.
Fonte: www.richet.com.br