150

Efektivitas Virus SpltMNPV Terhadap Ulat Spodoptera litura (Ulat

Grayak)

Kelas Biologi2015
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Negeri Surabaya

ABSTRAK
Virologi merupakan sudi mengenai virus. Virus adalah orgaisme terkecil yang berperan dalam penyebaran
penyakit dengan menginfeksi sel dan mengakibatkan perubahan yang membahayakan sel sampai mematikan sel.
Salah satu jenis virus yang membahayakan adalah Spodoptera litura multiple nuklear polyhedrosis virus (SpltMNPV)
yang mampu menginfeksi insecta, salah satunya adalah ulat grayak (Spodoptera litura). Penelitian ini bertujuan
untuk mengetahui keefektifan Spodoptera litura multiple nuklear polyhedrosis virus (SpltMNPV) dalam menginfeksi ulat
grayak (Spodoptera litura) dengan perantara pakan buatan yang telah diinfeksi virus Spodoptera litura multiple nuklear
polyhedrosis virus (SpltMNPV). Data yang diperoleh berupa 1. Memperbanyak virus dengan metode infeksi secara in
vivo 2. Pemurnian virus dilakukan dengan menghaluskan ulat yang terinfeksi menggunakan mortal kemudian
diamati di bawah mikroskop dengan perbesaran 1000 3. Perhitungan virus dengan menggunakan
haemachytometer. Hasil dari penelitian ini adalah banyaknya ulat yang mati instar 3 sebanyak 77 ekor dan
instar 4 sebanyak 123 ekor disebabkan karena beberapa hal yakni, mati diinstar 3 karena virus sebesar
3,3 1010; virus+bakteri sebesar 2,4 1010 dan 2,02 1010; virus+jamur sebesar 3,1 1010 dan mati diinstar 4
disebabkan virus sebesar 3,9 1010; virus+jamur sebesar 2,9 1010.

Kata kunci: virus SpltMNPV; ulat grayak (Spodoptera litura); pakan

.

PENDAHULUAN
Virologi merupakan ilmu yang
mempelajari tentang virus. Virus adalah
organisme yang sangat kecil dan jauh lebih kecil
dari bakteri. Virus dapat menembus saringan
bakteri, dan hanya dapat disaring menggunakan
saringan porselin.
Virus mampu berperan sebagai agen
penyakit dan agen pewaris sifat. Sebagai agen
penyakit, virus menginfeksi sel dan
mengakibatkan perubahan-perubahan yang
membahayakan sel sampai mampu mematikan
sel tersebut. Sebagai agen pewarisan sifat, virus
memasuki sel tersebut dan hidup permanen
didalamnya. Virus dikatakan sebagai parasit
obligat karena siklus hidupnya tergantung pada
siklus hidup inangnya. (Kusnadi, 2010)
Salah satu jenis virus yang membawa
dampak negatif dalam kehidupan mahluk
hidup adalah Spodoptera litura multiple nuklear
polyhedrosis virus (SpltMNPV). Virus SpltMNPV
merupakan virus yang mampu menginfeksi
insecta. Kemampuannya dalam mengubah
struktur DNA insecta menyebabkan kematian
pada insecta tersebut. Salah satu insecta yang
dapat terinfeksi oleh virus SpltMNPV adalah
ulat grayak (Spodoptera litura). Ulat grayak
merupakan salah satu insecta yang dapat
disebut hama dalam bidang pertanian karena
dapat menyebabkan kematin bagi tanaman
pertanian, seperti kentang, kacang tanah, kubis,
dan lain-lain.
Virus dapat menyerang manusia karena
hidup virus menempel pada inangnya atau
substrat tertentu yang dapat membuat dirinya
menjadi banyak. Virus menakutkan manusia
karena penyakit yang ditimbulkannya. Virus
dapat menyerang sistem kekebalan tubuh, sel
darah putih dan sebagainya. Agar kita
memperoleh gambaran tentang bagaimanakah
bentuk dan bagaimana virus menyerang
inangnya, maka dilakukanlah penelitian ini,
selain itu yang digunakan adalah jenis virus
yang menyerang ulat grayak agar virus tersebut
tidak membahayakan kita yang masih dalam
taraf belajar.
Adapun tujuan dilakukannya penelitian
ini untuk mengetahui cara perbanyakan virus,
mengetahui kematian ulat yang disebabkan oleh
virus, mengetahui cara pemurnian virus,
mengetahui cara penghitungan virus dengan
haemositometer, mengetahui efektivitas virus
terhadap ulat Spodoptera liptura.
151
BAHAN DAN METODE
Tempat dan Waktu
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan
November sampai Desember 2016 di
Laboratorium Mikrobiologi Fakultas MIPA
Universitas Negeri Surabaya.
Alat dan Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian
adalah ulat grayak (Spodoptera liptura) instar tiga
yang digunakan diperoleh dari BALITAS
Malang, virus uji yang digunakan yaitu Virus
SPltMNPV, pakan buatan, akuades steril,
alkohol, tepung kedelai, maizena, clindamicin,
renouit, nipagia, striptomisin,
quekeroat,natrium benzoat, vitamin c,
kandistatin, formalin 4%. Sedangkan alat yang
digunakan dalam penelitian ini adalah botol
kapsul, pinset, cawan petri, pipet tetes,
sentrifuse, kain penyaring, mortal, alu, tabung
reaksi, spet, cover glass.
Pembuatan pakan buatan
Semua bahan meliputi tepung kedelai 100
gr, maizena 50 gr, clindamicin, renouit, nipagia
1 gr, striptomisin 0,2 gr, quekeroat 2 gr, natrium
benzioat 0,2 gr, vit c, kandistatin, dan formalin
4% dicampur menjadi satu dengan
menggunakan blender sampai tercampur rata.
Kemudian dituang kedalam nampan plastik dan
dimasukkan kedalam kulkas.
Memperbanyak Virus
Menaruh ulat grayak kedalam botol kecil.
Pakan buatan dicelupkan dalam suspensi virus.
Ulat yang telah terkontaminasi virus dipelihara
dan diberi makan pakan buatan sampai ulat
mati. Ulat yang mati karena terinfeksi virus
akan diam terlentang dengan tubuh yang luna
HASIL DAN PEMBAHASAN
Telah diperoleh hasil perhitngan virus dari
pemurnian virus ulat grayak Berikut hasil instar
Tabel 1. Hasil Kematian Ulat Grayak.
Instar 3
77
berwarna hitam kecoklatan. Ulat yang telah
mati dipanen, secara hati-hati karena tubuhnya
mudah hancur. Tubuh ulat dimasukkan
kedalam tabung reaksi steril yang berisi
akuades dan disimpan difreezer.
Pemurnian Virus
Ulat yang telah mati terinfeksi virus
dihaluskan dengan mortal, jika terlalu pekat
ditambahkan akuades. Kemudian menyaring
ulat yang telah dihaluskan sampai 3 kali
penyaringan. Lalu dimasukkan kedalam tabung
sentrifuse dan dimurnikan dengan memutarnya
pada kecepatan 3500 rpm selama 15 menit.
Membuang supernata dan ditambahkan
akuades steril serta aduk sampai homogen. Di
putar kembali dengan cetrifuse pada kecepatan
3500 rpm selama 15 menit sebanyak 2 kali.
Penghitungan Virus
Penghitungan virus dilakukan dengan
menggunakan hemositometer. Membersihkan
alat haemachytometer dengan tissue yang
sudah diberi alkohol. Setelah itu
haemachytometer ditutup dengan cover glass
yang sudah dibersihkan. Mengambil larutan
pengenceran virus dari tabung reaksi dengan
menggunakan spet. Meneteskan larutan tadi
pada alat haemachytometer. Amati dengan
menggunakan mikroskop dan dihitung berapa
jumlah sel dalam satu kotak.
Rumus penghitungan:
Virus = T D 106
N0,25
N = 80
T = rata-rata total
D = faktor pengenceran
mati ulat yang dimurnikan seperti pada (Tabel
1) dan hasil perhitungan pengamatan jumlah
virus seperti pada (Tabel 2).
Instar 4
123
 Dari ulat grayak instar 3 memiliki jumlah
kematian sebanyak 77 ulat, sedangkan hasil dari
instar 4 memiliki jumlah kematian sebanyak 123
ulat. Dari semua ulat instar 3 dan instar 4 yang
Tabel 2. Hasil Pengamatan jumlah Virus
Penyebab mati Pengulangan Jumlah
mati tidak hanya disebabkan oleh virus saja,
melainkan terdapat jamur dan bakteri. Hal ini
disajikan pada tabel berikut:
Rata Total Hasil Perhitungan

Instar 3 Virus + I 1430

Bakteri 1400 7 x 1010

(0,5-2,5 cm) II 1370

Instar 3 Virus+ I 1387

Jamur (0,5 cm-

II 1290
1.338,5 6,7 x 1010
2,5 cm)
I 2.080
Instar 4 Virus
(2,5cm-3,5cm) II 2.084
2.082 10,4 x 1010

I 2.051
Instar 4
Virus+Bakteri 2.006,5 10 x 1010
(0,5 cm-2,5 cm) II 1.962

I 1468
Instar 3 Virus
(0,5 cm-2,5 cm) II 1475
1.471,5 7,3 x 1010

I 1.453
Instar 4
II 1.466
2.919 14,59 x 1010
Virus+Jamur
 Gambar 1. Instar 3 Virus Gambar 2. Instar 3 Virus+Bakteri Gambar 3. Instar 3 Virus+Jamur
Gambar 1. Instar 4 Virus
Suspensi virus diambil dengan pipet 1
ml dan diletakkan pada objek glass
haemocytometer, kemudian diamati dengan
mikroskop. Pengamatan dilakukan tepat pada
garis-garis yang nampak pada lapang
pandang dengan garis membujur serta
melintang membentuk kotak 5x5 dengan tiap
kotaknya berisi 4 x4 kotak. Kotak yang
dihitung virusnya adalah kotak paling kiri
atas, paling kanan atas, tengah, paling kiri
bawah dan paling kanan bawah. Perhitungan
virus dilakukan sebanyak dua kali
pengulangan dengan perbesaran mikroskop
100 x 10. Virus yang dilihat melalui mikroskop
dengan perbesaran 100x, akan tampak bulat
bercahaya. Sesungguhnya, yang terlihat
adalah polyhedra dari virus tersebut yang
berbentuk seperti kristal tidak beraturan (Tri
Asri, 2016). Melalui perhitungan virus, maka
akan diketahui penyebab kematian ulat.
Umumnya, ulat yang mati akibat virus akan
menghasilkan perhitungan sebesar . Hal
tersebut menjelaskan bahwa, penyebab
kematian ulat tidak hanya disebabkan oleh
infeksi virus melainkan ada faktor lain, seperti
kurangnya makanan. Berikut merupakan data
perhitungan terkait jumlah virus :
Jumlah virus didapatkan dari perhitungan
dengan rumus sebagai berikut:
Keterangan:
t :Rata-rata jumlah virus pada semua
pengulangan
Gambar 1. Instar 3 Virus+Jamur
d : =1
n :80
Virus merupakan parasit berukuran
mikroskopik yang menginfeksi sel organisme
biologis. Virus hanya dapat bereproduksi di
dalam material hidup dengan menginvasi dan
mengendalikan sel makhluk hidup karena
virus tidak memiliki perlengkapan selular
untuk bereproduksi sendiri. Istilah virus
biasanya merujuk pada partikel-partikel yang
menginfeksi sel-sel eukariota (organisme
multisel dan banyak jenis organisme sel
tunggal), sementara istilah bakteriofage atau
fage digunakan untuk jenis yang menyerang
jenis-jenis sel prokariota (bakteri dan
organisme lain yang tidak berinti sel).
Biasanya virus mengandung sejumlah kecil
asam nukleat (DNA atau RNA, tetapi tidak
kombinasi keduanya) yang diselubungi
semacam bahan pelindung yang terdiri atas
protein, lipid, glikoprotein, atau kombinasi
ketiganya (Lasinrang dkk, 2014). Virus hanya
bisa berkembang biak pada sel/jaringan yang
hidup, oleh karena itu virus bersifat parasit
interseluler obligat (Kusnadi, 2010).
SpltMNPV (Spodoptera litura-
multiplenucleopolyhedrovirus) adalah salah satu
jenis virus patogen yang berperan sebagai
agensia hayati dalam mengendalikan ulat
grayak (Spodoptera litura), karena bersifat
spesifik, selektif, efektif untuk hama-hama
yang telah resisten terhadap insektisida dan
aman terhadap lingkungan. Sebuah
baculovirus awalnya terisolasi, Spodoptera
litura beberapa nucleopolyhedrovirus
(SpltMNPV) telah terkontam melalui S. litura
larva upto empat generasi untuk menentukan
jumlah rata-rata tubuh oklusi (OBS) dipanen
per larva dan keberhasilan mereka dalam hal
infektivitas, makan penghentian dan
kecepatan membunuh larva inang (Mudasir
dkk, 2014).
Ulat grayak diberi pakan buatan berupa
komposisi-komposi tertentu yakni, tepung
kedelai 100 gr, maizena 50 gr, clindamicin+
renouit, nipagia 1gr, striptomisin 0,2 gr,
guekergoat 2gr, Na Benzoat 0,2 gr, vitamin C,
kondistatin dan formalin 4%. Setelah itu,
memasukkan agar dan air tersebut ke dalam
blender dan dicampur/ diblender. Hasil
blender tersebut kemudian diletakkan pada
nampan dan menunggunya hingga padat.
Pakan yang telah siap digunakan dibagi
menjadi dua bagian, bagian pertama dicelup
dalam suspensi virus, sedangkan bagian
lainnya menjadi pakan yang diberikan pada
hari-hari selanjutnya.
Pakan ulat buatan diberi bahan formalin
dan dimasukkan kedalam kulkas
penyimpanan guna menghindari penjamuran
dan bakteri yang masuk. Pakan akan
dicelupkan kedalam virus SpLtMNPV yang
akan dimakan ulat grayak, sehingga ulat
grayak akan terinfeksi virus. Setelah beberapa
hari bergantung lama matinya ulat, maka ulat
yang mati disimpan dalam tabung reaksi
aquades.
Banyaknya ulat yang mati diinstar 3
adalah 77 ekor dan yang mati diinstar 4 adalah
123 ekor. Untuk menjaga sterilitas larutan
virus sebelum virus dituang/diinfeksikan
dalam medium S. litura. Larutan SpLtMNPV
difiltrasi dengan kain penyaring. Selanjutnya
hasil pemurnian virus diamati pada
mikroskop.
Ulat-ulat yang mati pada instar 3 dan
instar 4 disebabkan karena beberapa hal yakni,
mati di Instar 3 karena virus+bakteri; mati di
instar 3 disebabkan virus+jamur; mati diinstar
3 disebabkan virus; mati diinstar 4 disebabkan
virus+bakteri; mati diinstaar 4 disebabkan
virus dan mati diinstar 4 disebabkan
virus+jamur. Setiap matinya ulat dengan
penyebab dan instar yang berbeda dihitung
dengan haemocytometer dengan dua kali
pengulangan. Hasil dari perhitungan
penyebab kematian dan instar kematian yang
berbeda yakni, mati di Instar 3 karena virus+
bakteri sebesar
7 x 1010; mati di instar 3 disebabkan
virus+jamur sebesar 6,7 x 1010; mati diinstar 4
disebabkan virus sebesar 10,4 x 1010; mati
diinstar 4 disebabkan virus+bakteri sebesar 10
x 1010; mati diinstaar 3 disebabkan virus
sebesar 7,3 x 1010;dan mati diinstar 4
disebabkan virus+jamur sebesar 14,59 x 1010.
Mekanisme infeksi terbagi menjadi dua yaitu
infeksi primer dan infeksi sekunder
(Samsudin, 2011). Mekanisme infeksi primer
terjadi jika larva memakan pakan alami yang
sudah diberi virus laten dan dicerna sampai
pada midgut larva. Calyx (polyhedron
envelope) yang mengelilingi polyhedra (OBs)
akan didegradasi oleh enzim proteinase,
setelah itu membran pembungkus Occlusion
Bodies (OBs) yang berupa protein polyhedrin
akan didegradasi di dalam midgut serangga
dalam suasana alkali sebelum mengeluarkan
Occlussion Derivat Viruses (ODVs) (DAmico
dan Slavicek, 2012). Suasana alkali yang bagus
untuk mendegradasi OBs berada di midgut
larva (Rohrmann, 2011). Secara umum SlNPV
mudah diperbanyak secara in vivo, yaitu
dengan menginfeksi larva inang atau diambil
dari larva yang telah terinfeksi SlNPV lalu
dapat diaplikasikan kembali. Dengan
didapatkannya isolat SlNPV yang lebih efektif,
maka dapat meningkatkan peluang SlNPV
untuk dikembangkan sebagai bioinsektisida,
sehingga ketergantungan terhadap insektisida
sintetik dapat dikurangi dan masalah
serangan larva S. litura Fabricius dapat diatasi
secara berkelanjutan (Laoh. dkk, 2003 dalam
Riyanto, 2008). NPV menginfeksi inang
melalui dua tahap. Pada tahap pertama NPV
menyerang usus tengah, kemudian pada
tahap selanjutnya organ tubuh (hoemocoel)
serta organ-organ tubuh yang lain. Pada
infeksi selanjutnya NPV juga menyerang sel
darah, trakea, hipodermis dan sel lemak.
Polyhedra Inclusion Body dalam tubuh larva
yang terserang ukuranya bervariasi
tergantung pada perkembangan stadium
larva, tetapi pada beberapa jenis NPV
sebagian polyhedra memiliki ukuran dan
stadium pematangan yang hampir sama
(Bedjo, 2006 ; Biogen Online, 2007 dalam
Riyanto, 2008).
Enzim proteinase banyak ditemukan pada
saluran pencernaan larva dan pada polyhedra
itu sendiri, sedangkan polyhedra yang
diperbanyak pada kultur sel kurang akan
enzim proteinase (Rohrmann, 2011). Tahap
selanjutnya, ODVs menembus membran
peritrofik, ODVs membutuhkan enzim-enzim
seperti enzim chitinase dan metalloprotease
untuk menembus membran peritrofik karena
dalam membran peritrofik tersusun atas
lapisan khitin dan muchin. Occlusion Derivat
Viruses (ODVs) melakukan fusi dengan
membran plasma dan sel-sel epitel midgut
yang merupakan target primer infeksi NPV,
ketika sampai pada sel midgut ODVs akan
mengeluarkan virion atau BVs (Rohrmann,
2011).
Ciri-ciri larva S. litura yang terinfeksi virus
laten pada tiap infeksi antara lain larva malas
untuk makan dan bergerak, cenderung naik ke
atas botol vial, larva mati dengan tubuh hitam
mengkilap dan mengeluarkan cairan putih
keruh. Jarak antara infeksi virus pertama pada
ulat dengan kematian ulat tersebut adalah
sekitar 12 hari. Ulat yang mati, dimasukkan ke
dalam tabung reaksi kemudian diletakkan di
dalam freezer. Hal tersebut berguna untuk
menjaga ulat agar tidak mengalami
kebusukan. Pemurnian virus dilakukan
seminggu kemudian, jangka waktu tersebut
adalah waktu kematian ulat secara
keseluruhan.
Jumlah virus didapatkan dari perhitungan
dengan rumus sebagai berikut:
Peningkatan patogenesitas virus laten tidak
langsung terjadi pada saat pertama kali
diinfeksikan secar in vivo pada larva S. litura,
patogenesitas terjadi ketika diinfeksikan
secara pertama kali penginfeksian. Pada
kegiatan ini penginfeksian virus laten hanya
dilakukan sekali. hal tersebut memungkinkan
penginfeksian oleh virus pada ulat grayak
memakan waktu yang lama dan ulat tidak
sepenuhnya mengalami infeksi. Sehingga,
kematian akibat infeksi pun tidak sepenuhnya
terjadi pada ulat grayak dalam kegaiatan ini.
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang telah
dilakukan dapat disimpulkan bahwa semua
virus berpengaruh terhadap ulat grayak.
Efektifitas virus SPLtMNPV terdapat pada
ulat grayak instar 4 dan tidak semua ulat
terinfeksi virus melainkan terinfeksi
virus+jamur, dan virus+bakteri. Ulat yang
terinfeksi paling banyak pada ulat grayak
instar 4 yang berbanding lurus dengan
perhitungan. Adapun hasil perhitungan
sebagai berikut: instar 3 virus+bakteri = 7 x
1 , instar 3 virus+jamur = 6,7 x 10 , instar 4
010 10
virus = 10,4 x 1010, instar 4 virus+bakteri = ,
instar 3 virus = 7,3 x 10 10, instar 4 virus+jamur
= 14,59 x 1010
DAFTAR PUSTAKA
Riyanto. 2008. Potensi Agen Hayati
Spodoptera Litura Nuclear
Polyherosis Virus (SINPV) untuk
Pengendalian Spodoptera Litura
Fabricus. http://eprints.unsri.ac.id/
1087/1/Potensi_Agen_Hayati_SLNP
_untuk_pengendalian__Spodoptera_
Litura.pdf. Online. Diakses 29
November 2016.
Aditya, Lasinrang., dkk. 2014.
Karakteristik dan Reproduksi Virus.
Makasar: Universitas Islam Negeri
Alauddin Makassar.
Asri, Mahanani Tri., dkk. 2013.
Peningkatan Patogenesitas Virus
Laten Hasil Isolasi dari Kultur Sel
Midgut Larva Spodoptera litura
terhadap Larva Spodoptera litura
melalui Penginfeksian Berulang
dalam LenteraBio. Vol. 2 No. 1. Hlm
1-4.
Asri, Mahanani Tri., dkk. 2009.
Pengembangan Metode
Penginfeksian Spodoptera Litura
Multiple Nucleopolyhedrosis Virus
(Spltmnpv) Pada Sel Primer Epitel
Usus Larva Spodoptera Litura
dalam jurnal Pengembangan Metode
Penginfeksian. Hlm 1-6