COLORACION DE LOEFFLER: Tiene la caracteristica que el colorante tiene la

afinidad por carbohidratos o almidones. PROCEDIMIENTO: Despues de realizar

los pasos del procedimiento de coloracion: Adicionar el colorante de Loeffler y
dejarlo durante 10 min. Lavar con agua corriente. Secar al medio con papel
absorvente. Aadir aceite de imercion Observar en el microscopio.
RESULTADOS Y DISCUSIONES Al hacer la lectura al microscopio se observo
una coloracion de azul intenso ya que el colorante de loeffler tie el ADN. Las
bacterias se observaron de un color azul tenue.
Visualizacin, cultivo e identificacin de los hongos

- EXAMEN MICROSCPICO.- El exmen microscpico de los hongos en las

muesras clnicas o de los cltivos se efecta previa tincin o directamente en
fresco.
Los hongos se observan en nuestras clnicas tedas con la tincin de Gram como
grampositivos. Tambin se visualizan bien contrastando las muestras con una
gota de azul de lactofenol. En productos fluidos en los que se sospecha la
existencia de levaduras capsuladas, como el criptococo, puede depositarse en el
prota una gota de material, y aadir una gota de tinta china, lo que permite
observar la levadura con la cpsula.

Muchas veces el examen microscpico de las micosis de los tejidos y rganos

profundos se hace por tcnicas histolgicas a partir de biopsias. La hematoxilina-
eosina se til para examinar las lesiones inflamatorias que, en ciertas ocasiones,
orientan el diagnstico, pero no permite la deteccin de elementos fngicos, que
se tien mal por esta tcnica. La tincin de PAS colorea intensamente la pared
polisacrida de los hongos y permite na deteccin rpda de los elementos
fngicos en los tejidos. Las tinciones argnticas permiten igualmente reconocer los
elementos fngicos ya que la pared se tie en negro. En los tejidos de los hongos
pueden observarse como levaduras aisladas, o como filamentos ramificados
infiltrantes.
2.3. Observacin microscpica de hongos.1.
Partiendo de una colonia de hongos de un cultivo puro y utilizando un asa
demicologa ( o bien un asa de picadura), transferir una pequea cantidad de
micelio(cortar un cuadrado de agar malta de 7.2.2) a un portaobjetos, procurando
no daar lasestructuras del hongo.

2. Aadir una gota de

azul de lactofenol.
3. Colocar un cubre y absorber con papel de filtro el exceso.4. Observar al
microscopio con objetivo de inmersin.
5. Resultados.
El lactofenol acta como lquido de soporte, agente fijador y tie elmicelio y las
esporas de color azul.
3.1. Observacin de levaduras
. Las colonias de levaduras suelen ser de color crema, mso menos lisas, o de
aspecto seco y plegadas, y de tamao variable. Por ello, el aspectomorfolgico de
la colonia no representa un habitualmente carcter distintivo importante entrelas
diferentes especies.
Observacin macroscpica de levadurasProcedimiento
1. Dividir una placa de agar Sabouraud en dos zonas.2. Sembrar en estra
por agotamiento, cultivos frescos de levaduras: Saccharomyces yCryptococcus sp.
3. Lectura de resultados en el microscopio. Utilizar el objetivo que resulte ms
adecuadopartiendo siempre del de menor
aumento.4. Realizar una tincin para cada levadura:a. Tincin Gram -
Saccharomyces (Gram positiva)b. Tincin negativa (presenta cpsula

Observacin microscpica de levadurasProcedimiento:

(preparacin a realizar por el profesor)1. Inocular una placa de agar de malta ( o
bien agar rice cream) mediante estras poragotamiento, tal como se indica en la
figura. Tomando una pequea parte de unacolonia aislada de
candida albicans (atencin patgena)
, se realizan estras en treszonas de la placa, sin retomar nuevo inculo entre una
y otra; de este modo habremosdispuesto un inculo decreciente mximo en la
zona 1 y ms escaso en la zona 3. Esimportante, con vistas a la colocacin de la
placa en el microscopio para suobservacin, que el inculo quede separado
aproximadamente 15 mm del borde de laplaca.2. Colocar un cubreobjetos estril
las zonas inoculadas. Si los cubreobjetos se esterilizana la llama, asegurarse de
que estn totalmente fros antes de su colocacin.3. Incubar a
temperatura ambiente y en la oscuridad (o bien a 28-30 C en estufa decultivos
durante 48 h.) Reincubar 24 h. ms si fuese
necesario4. Observacin microscpica: micelio, blastosporas,... (
operacin

delicada
).a. Situar la placa sin tapa sobre la platina del
microscopio.b. Realizar la observacin con objetivo
x10.
Realizar el enfoque y posterioresmanipulaciones con mucha precaucin, evitando
tocar el cubreobjetos o losbordes de la placa con el objetivo.Desplazar la placa
manualmente para recorrer otras zonas.Si es preciso colocar el objetivo
x40
(extremar al mximo las precauciones

Fundamentos de diferenciacin de gram positivo y

gram negativo[editar]
Los fundamentos de la tcnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las
bacterias gram positivas y gram negativas
La pared celular de las bacterias gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano,
adems de dos clases de cidos teicoicos: anclado en la cara interna de la pared celular y
unido a la membrana plasmtica, se encuentra el cido lipoteicoico, y ms en la superficie,
el cido teicoico que est anclado solamente en el peptidoglicano (tambin conocido
como murena).
Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las bacterias gram negativas es delgada, y se
encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior (de composicin distinta a la
interna) por medio de lipoprotenas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una
membrana exterior por lipoprotenas. La membrana exterior est hecha
de protena, fosfolpido y lipopolisacrido.
Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tien diferencialmente debido a estas diferencias
constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su
rigidez a la pared celular bacteriana, y las gram positivas lo poseen en mucha mayor
proporcin que las gram negativas.
La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloracin se debe a que la membrana
externa de las bacterias gram negativas es soluble en solventes orgnicos, como por ejemplo
la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee es demasiado delgada
como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se form previamente, y por lo
tanto este complejo se escapa, perdindose la coloracin azul-violcea. Por el contrario, las
bacterias gram positivas, al poseer una pared celular ms resistente y con mayor proporcin
de peptidoglicanos, no son susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este
acta deshidratando los poros, cerrndolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo
cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloracin azul-violeta.

Factores que alteran la tincin de Gram[editar]

Cules son las fuentes de errores ms comunes

en la tincin de gram?

R: Edad de la bacteria.
II: Errores del operador.
III: Uso de antibiticos

A pesar de la gran utilidad del la tincin de Gram,

este mtodo debe ser valorado con precaucin, ya
que la reaccin puede variar segn la edad de las
clulas (cultivos viejos de bacterias gram positivas
pueden perder capas de peptidoglucano y teirse
como gram negativos) y la tcnica empleada (Al
decolorar por un tiempo muy prolongado se puede
correr el riesgo que bacterias gram positivas se
tian como gram negativas),Es por esta situacin
que junto a la muestra deben teirse controles con
bacterias gram positivas (ej. S. aureus) y gram
negativas (ej. E. Coli).

2. explique que reaccin de gram darn las

levaduras. Estos tendrn la misma
importancia que para la bacterias?

En esta tincin, las levaduras suelen comportarse

como gram positivas. El
color depende de la composicin de la pared
celular de la levadura y no tiene tanta importancia
como las bacterias ya que en ellas existe toda una
clasificacin por medio del gram lo que no sucede
con las levaduras.

3. explique el fundamento de la tincin negativa en

la prctica que tipo de informacin se obtiene.?

Tie el fondo de la preparacin y no el

microorganismo desde el punto de vista formal no
es una tincin previamente dicha porque no fija los
microorganismos. Se parece ms a una
preparacin en fresco. Su realizacin es
sencillsima, consiste en colocar la muestra
hmeda sobre el porta objetos y mezclar con
tinta china. La tinta cubre toda la preparacin a
excepcin de las capsulas. En el microscopio se
observa el fondo negro y
losmicroorganismos con capsula sin color.

4 .Investigue otra tcnica de Tincin selectiva que

permita observar otras estructuras bacterianas.

Las Tinciones Selectivas nos permiten observar

estructuras de las clulas gracias a su mayor
afinidad por los colorantes utilizados.

5. a que se debe el distinto comportamiento de

las bacterias segn sean gram positivas o gram
negativas?

El distinto comportamiento en la tincin de gram,

se piensa que es debido a las diferentes capas
superficiales o paredes de las bacterias (tipo de
clula).
Esto se debe a la diferencia en su pared celular y
bsicamente hay
dos causas diferentes:
A la cantidad de fosfolipidos que tienen la gram
negativas es mayor que las gram positivas.
A los peptidoglicanos, que es mayor en las gram
positivas que en las gram negativas.

6) Para qu se necesita el aceite de inmersin?

El aceite de inmersin tiene un ndice de
refraccin similar al del vidrio (1,5 aprox.) y se
utiliza para el objetivo de 100X.
.