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MONOOXIGENASAS

del CITOCROMO P450


Cyt P450
Enzimas que catalizan reacciones de
oxidacin (FASE I) y que pueden
formar metabolitos reactivos
REACCIONES DE
OXIDACIN
Cyt P450

monooxigenasa

oxidasa

peroxidasa
MONOOXIGENASAs DEL
CITOCROMO P450

Cyt P450
Grupo de enzimas con actividad monooxigenasa
El Cyt P es una hemoproteina que, reducida y asociada
a CO, exhibe un mximo de absorcin de luz a los
450 nm

Presentes en animales, plantas, levaduras y bacterias


En mamferos, algunas enzimas estn involucradas en sntesis de
esteroides
Sin embargo, la gran mayora de MO oxida a xenobiticos

NOMENCLATURAS
1. Monooxigenasas dep. Cit P450
2. Oxidasas Funcin Mixta, OFM (Mixed Function Oxidases, MFO)
3. Enzimas microsomales
4. Enzimas metabolizantes de drogas
Componentes del Cyt P450
asociados al Ret Endoplsm.
Cyt P450

Citocromo P450, una


cadena de 35-40 KDa
(hemoproteina)
Cit P450 reductasa
(flavoproteina, FAD,
FMN)
Citocromo b5
El Cit P450 es
una hemoproteina
Cyt P450

Grupo Hemo

Grupo hemo (Fe-protoporfirina IX)


Caractersticas
espectrales
- El Cyt P450 (Fe2+) tiene alta afinidad por CO
Cyt P450
- El complejo Cyt P450(Fe2+) -CO tiene un
mximo de Ab a 450 nm y oxidado a 420 nm

- Cuando la
preparacin de
CYP se reduce con
ditionito (Fe2+) y
se satura con CO
el espectro de Ab
cambia y aparece
el mximo a 450
nm
Reacciones
catalizadas por Cyt P450
Cataliza la mayora de las oxidaciones de XBs
Cyt P450
En las reacciones intervienen:
- O2 molecular
- NADPH

Y siempre se produce:

La reduccin de un tomo del O2 hasta H2O


La incorporacin de un tomo de O al sustrato
RH + NADPH + H+ + O2 ---

R-OH + NADP+ + H2O

Los sustratos pueden ser muy variados y poco


especficos: endgenos y compuestos XBs.
Tipos de Reacciones
Catalizadas por enzimas
tipo Cyt P450
Cyt P450

Hidroxilacin de compuestos aromticos y alifticos


Formacin de epoxis sobre dobles enlaces
N-hidroxilacin de aminas aromticas
Desalquilacin en O-, N-, S-alquilos
Desulfuracin oxidativa del paration

Reacciones de reduccin en ausencia de O2


Cyt P450 Tipos de Reacciones
Los sustratos son muy variados

Tipo de reaccin Susbtrato Metabolito(s)


Cyt P450
A.-oxidaciones

Hidroxilacin aromtica

Hidroxilacin aliftica
epoxidacin

N-hidroxilacin

O- dealquilacin
N-dealquilacin
S-dealquilacin
desaminacin
Tipos de hidroxilaciones

Cyt P450

H aliftica

H. aromtica

N-hidroxilacin

Epoxidaciones
Hidroxilacin
de hormonas sexuales
Cyt P450

Sobre metabolitos endgenos

Testosterona -hidroxiTestosterona
6
Hidroxilacin de benzopireno

Cyt
CytP450
P450

Interaccin con
Hidroxilacin
de cumarina
Cyt P450

Desalquilacin de aminas
N-Hidroxilacin de aminas
anilina
Cyt P450

2-acetil amino-fluoreno (2-AAF)


Formacin
de epoxis en insaturaciones
Cyt P450
Formacin
de radicales quinnicos
Cyt P450

Acetaminofen = paracetamol
El Cyt P450 tambin cataliza
Reacciones de reduccin
Cyt P450
Azoreduccin

Reduccin de
nitroaromticos

Deshalogenacin
reductora
Formacin de metabolitos
reactivos: radical quinnico del
paracetamol
Cyt P450

Sulfo=transferasa Glucuronil=transferasa

Acetaminofen
o Cit P450
Paracetamol

Glutation=S=transferasa

N-acetil-p-benzo
quinoneimida

Union covalente a Muerte


SH en proteinas celular
Cyt P450 Formacin de
Metabolitos reactivos

Cyt P450
COMPUESTO FRMULA M.REACTIVO TOXICIDAD

bromobenceno Necrosis heptica

Cloruro de vinilo cncer heptico

anilina metahemoglobina

dimetilnitrosamina carcinognesis

Tetracloruro de C Necrosis heptica

cloroformo Necrosis renal


Cyt P450 Mecanismo de Accin de los
componentes del Cyt P450:
los e- le llegan al Cyt P450 desde el cyt
Cyt P450
b5 y desde la Cyt P450 reductasa (FAD)
Esquema del ciclo cataltico del
Cyt P 450:

Cyt P450

el NADPH es el
dador de los e- que
le llegan al Cyt P450
desde el cyt b5 y
desde la reductasa
(FMN, FAD). A
veces puede actuar
de dador el NADH
Ciclo cataltico

Cyt P450
3+
3+
3+
reductasa

1. El Fe3+ del Cit P450,


con el S unido, se
reduce a Fe2+
2. A continuacin ste
3+
une una mol de O2 2+
3. 2 Reduccin
4. Sale una molcula de
H2O y el Fe2+ pasa a
(FeO)3+ 2+
5. El S se hidroxila y se
desprende; el Cit
queda Fe3+.
Cyt b5
Las enzimas del Cit
Cyt P450
P450 presentan
muchas isoformas

ISOENZIMAS
CYP P450
Isoenzimas del Cit P450
Los isoenzimas de Cit P450 son
Cyt P450 responsables del metabolismo oxidativo (fase
I) de muchas sustancias endgenas y de XBs:
frmacos, drogas, contaminantes, etc.

Cada isoenzima del Cit P450 es producto de su gen y a


ambos, en general, se les suele denominar como CYP.

Los isoenzimas de CYP son un grupo de enzimas hemo


situadas en la bicapa lipdica del retculo endoplasmico;
muy presentes en los hepatocitos, y tambin distribuidas
en intestino, rin, pulmn y cerebro.

Se han identificado ms de treinta (30) isoenzimas


diferentes de CYP en humanos.
Isoenzimas CYP
ISOENZIMAS: En base a la similitud de
Cyt P450
secuencia aminoacdica (40%), se les ha
agrupado en familias (1 - 2 - 3 - 4*) ej CYP 2
Mediante un N se designa su forma
individual, Ej CYP 2E1
Nomenclatura
Raz: CYP
Familia: CYP 2
Subfamilia: CYP 2D
Gen individual: CYP 2D6
Todos los isoenzimas de CYP de la misma familia tienen
por lo menos una semejanza estructural del 40%, y de
ellos, para la misma subfamilia, tienen una semejanza
estructural al menos del 60%.
Polimorfismos del CYP
Cambios en la cantidad de enzima expresada
(de origen genotpico o fenotpico)
Cyt P450 El polimorfismo se refiere a la ocurrencia de alelos multiples
en un locus, donde al menos dos alelos aparecen con una
frecuencia >1% en la poblacin general.

Como consecuencia se suele producir una Disminucin


de la Eficiencia cataltica del enzima o una Disminucin
de la Afinidad del enzima por los sustratos

Consecuencias del polimorfismo enzimtico entre individuos:

Puede variar la biodisponibilidad y la vida media de un XB


La respuesta txica puede ser exagerada o la teraputica ineficaz
Se pueden producir interacciones entre diferentes XBs
Metabolizacin exagerada con produccin de metabolitos reactivos.
Pueden aparecer efectos sinrgicos o antagnicos entre diferentes
sustancias xenobiticas en los organismos.
Induccin
Cyt P450
enzimtica del
CIT P-450

La Induccin enzimtica es el aumento


de la sntesis de una protena enzimtica
debido a la presencia de su sustrato o de
algn compuesto anlogo estructural
Induccin enzimtica por hormonas
esteroideas con receptor nuclear
Cyt P450

Modelo de
accin
hormonal:
Induccin
de la
sntesis de
protenas
Induccin enzimtica
por XBs

Cyt P450

Ah .- Receptor aril
hidrocarburo hidroxilasa
hsp 90 .- proteina shock por
calor
ARNT .- Transferasa
nuclear aril hidrocarburo

El complejo entra al ncleo,


se une especficamente al
DNA y comienza la
transcripcin de genes, del
P450 1A1, en este caso.
Induccin del CYP
por TCDD

Cyt P450

Las dioxinas
(TCDD)
inducen la
sntesis de
Enzimas tipo
Cit P450
La Induccin enzimtica del CYP
Afecta a la interaccin de drogas
Cyt P450
Fentobarbital induce CYP 2C9
La wafarina es metabolizada por CYP 2C9
Habr que aumentar la dosis del anticoagulante

Fentobarbital induce CYP 2C9


Los estrgenos son metabolizados por CYP 2C9
Puede no haber proteccin anticonceptiva

El etanol induce CYP 2E1


Los comp. Policclicos son metabolizados por CYP 2E1
Pueden formarse cancergenos en el pulmn de fumadores

EFECTOS ANTAGNICOS Y SINRGICOS


ADAPTACIN Y RESISTENCIA
Isoenzimas del P450 ms activas
Oxidacin de XBs en humanos
Ms el de 90% de la oxidacin de drogas en
Cyt P450 humanos es debido a seis isoenzimas de
CYP:
1A2 2C9
2C19 * 2D6 *
2E1 3A4 **

* Muchos antidepresivos y medicaciones antipsicticas son


metabolizadas por CYP 2C19 o CYP 2D6. Esto da lugar a
menudo a interacciones droga-droga con significado
clnico, al tratar un individuo (e.g. depresin psicoptica)
con un antidepresivo y un antipsictico. Asimismo, las
preocupaciones por toxicidad se presentan al co-prescribir
un TCA y un SSRI (una prctica aceptada para la depresin
resistente del tratamiento).
Polimorfismos del P450
Consecuencias de los polimorfismos
Cyt P450
- Cambios en la cantidad de enzima (de origen
genotpico o fenotpico)
- Disminucin de la eficiencia cataltica de la
enzima (genes con mutaciones pero funcionales )

- Reducida afinidad de la enzima por el sustrato


(genes defectuosos)

Diferencias en la XB-cintica, biodisponibilidad, vida


media, etc.
Respuesta alterada, deficiencia tetapetica, efecto
txico potenciado, etc.
Produccin anormal de emtbolitos txicos o reactivos
Interacciones cruzadas entre compuestos
VARIABILIDAD
INTERINDIVIDUAL
FARMACO-XB-GENTICA

Se producen grandes diferencias


Cyt P450 interindividuales en el metabolismo de
drogas/ XBs
Las diferencias pueden estar determinadas genticamente
por el nivel basal de expresin de la enzima Cyt P450,
incluyendo los polimorfismos, metabolizadores pobres y
extensivos o por los efectos de induccin por XBs de las
diferentes isoformas

Los metabolizadores pobres tendrn concentraciones altas


en plasma de la droga patrn y bajos niveles de los
metabolitos derivados.