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FACULTAD DE CIENCIAS
E.A.P BIOTECNOLOGA
AUTORES:
CURSO:
BIOTECNOLOGA AGRCOLA
Docente:
JULIO CHICO
CHIMBOTE - PER
2017
RESUMEN
Cordova A. y colab. (2014): El objetivo fue establecer un mtodo eficiente para inducir la
formacin de callos in vitro a partir de explantes de M. dubia. Los explantes de hojas y nudos
fueron desinfectados y sembrados en medio MS suplementado con cido 2,4-D, BAP y Kin.
Los cultivos fueron mantenidos a 252C, en oscuridad por 2 semanas y posteriormente con
un fotoperiodo de 16 horas luz y 8 horas de oscuridad por 6 semanas. El tratamiento con 2
mg/L de 2,4-D y 0,1 mg/L de BAP estimul mayor callognesis en los tres tipos de explantes.
Los callos se generaron a partir de la primera semana (nudos), cuarta semana (hojas) y sexta
semana (pulpa) y estos fueron friables (hojas y nudos) y no friables (pulpa).
Villalobos I. y colab. (1987): Los brotes de tres cultivos de caa de azcar B 4362, H 44-
3098 y H 54-775, se cultivaron in vitro en el medio de MS con 0, 1,5, 3, 4,5 y 6 mg / L de 2,4
- D con el fin de inducir la formacin de callos. Despus de un mes de incubacin, se
determinaron el tamao, la organognesis y el peso fresco del callo para cada tratamiento.
Los resultados mostraron que 3 mg/L de 2,4-0 produjeron el callo ms vigoroso. Para la
diferenciacin del callo, 2,4-D fue sustituido por 1 mg / L de cinetina y las plntulas obtenidas
se colocaron en el invernadero y posteriormente en el campo. Los callos perdieron su
capacidad para regenerar las plntulas despus de haber sido incubados durante veintids
semanas.
Quiones M. y colab. (2011) Tuvo como objetivo lograr la desdiferenciacin celular para
obtener tejido calloso a partir de explantes de tallo y pecolo de Nicotiana paniculata tabaco
cimarrn. Los explantes se esterilizaron con solucin de Hipoclorito de Sodio (NaClO) al
2.5%, luego se les realiz pequeos cortes (heridas) y fueron introducidos in vitro en el medio
MS suplementado con 1mg/L de cido 2,4-D, 30g/L de sacarosa y 100 mL/L de agua de coco.
Posteriormente, los explantes se incubaron en un cuarto oscuro a una temperatura de 20-22
C. Como resultado se obtuvo callos en los explantes de tallos a los seis, trece y veinte das
de la introduccin in vitro. A los 30 das de cultivo, se observ el proceso de fenolizacin como
producto de la reaccin de oxidacin en los explantes, lo que caus el cambio de color de los
callos de blanco amarillento a pardo claro.
Otahola V. y Daz M. (2010): El objetivo fue evaluar la respuesta de dos tipos de explantes
tomados de plantas adultas de las especies de maracuy y determinar la dosis de BAP que
permite mayor regeneracin en ambos explantes. Se hizo dos ensayos, para determinar la
regeneracin de plantas en cultivo in vitro de maracuy, utilizando como explante discos
foliares y yemas axiales. Se us diferentes dosis de BAP en medio MS con sacarosa y
solidificado con Agar a pH 5.8. Al utilizar discos Foliares no hubo regeneracin en maracuy.
En la primera evaluacin realizada 15 das despus de la siembra en los explantes foliares
no hubo formacin de brotes, pero si de callos en todos los tratamientos.
Adam J. (2011): El objetivo fue evaluar los beneficios del cultivo de tejidos vegetales in vitro
en dos especies del gnero Passiflora, como alternativa de propagacin masiva de material
de siembra seleccionado, con alta calidad fitosanitaria y estabilidad gentica (clones). Para la
micropropagacin Los explantes de passiflora de desinfectados fueron cortados en secciones
nodales y foliares de 1 cm. se sembr en medio MS enriquecido con Nitsh y Nitsh, Agar,
Sacarosa, inositol, AIA y kinetina. Se vio que la kinetina determina los cambios en los niveles
endgenos de los reguladores de crecimiento de las secciones nodales, apareciendo callo,
de modo que los explantes presentaron un crecimiento de grosor, pero su elongacin fue ms
lenta respecto al patrn.
Severin C. y Colab. (2011): El objetivo fue evaluar la respuesta in vitro de dos explantos y 3
biotopos de P. caerulea, y determinar histolgicamente a travs de qu tejidos se da la
regeneracin. Se us medio MS con vitaminas de Gamborg, se adicion sacarosa, agar,
benciladenina. A pH 5.8 con NaOH y HCl antes de agregar agar. Los entrenudos mostraron
un marcado engrosamiento seguido por una proliferacin celular en los extremos. Mostraron
que los entrenudos presentaron un marcado engrosamiento seguido por una proliferacin
celular en los extremos.
Los trabajos realizados por Kantharajah y Dodd (1990) reportan la regeneracin de plntulas
de P.edulis a partir de segmentos nodal es utilizando 8,88M de bencil adenina (BA). Los autores
tambin reportan la regeneracin de plntulas en gulupa mediante el empleo de segmentos
nodales y la multiplicacin de brotes utilizando explantes de hoja.
Por tanto, el objetivo de esta investigacin fue inducir la formacin de callos in vitro a partir
de explantes de hojas de maracuy, a diferentes concentraciones de 2-4-D y BAP.
MATERIALES Y MTODOS
Poblacin muestral:
Procedimiento:
Una vez las hojas en el laboratorio, se procedi a realizarse los cortes respectivos con ayuda
de pinzas y sacabocado para obtener los discos foliares, los cuales tuvieron 1 cm. de dimetro
aproximadamente. Estos discos foliares fueron extrados de la seccin media de la hoja,
tomando parte de la nervadura central. Posteriormente, los cortes realizados se procedieron
a desinfectarse colocndolos en alcohol al 70% de concentracin por aproximadamente 30
segundos, luego se lav con agua destilada estril para posteriormente sumergirlo en
hipoclorito de sodio al 2.5% de concentracin por aproximadamente 2.5 minutos, finalmente
se lav con agua estril 3 veces. Dicho proceso descrito anteriormente se realiz en la cmara
de flujo laminar y en presencia de dos mecheros a una cercana de manejo menor a 20
centmetros con la finalidad de mantener la asepsia en el medio de trabajo.
a. Porcentaje de explantes o discos con formacin de callos, evaluados a los 15, 20, 25
das despus de la inoculacin. estos parmetros sern observados cualitativamente
a simple vista en cada uno de los tratamientos sometidos.
0.027 mL de BAP
0.054 mL de 2,4-D
0.9 gr. de sacarosa
0.12 gr. de medio MS
0.45 gr. de agar-agar
0.036 mL de BAP
0.144 mL de 2,4-D
0.9 gr. de sacarosa
0.12 gr. de medio MS
0.45 gr. de agar-agar
RESULTADOS:
En cuanto a la no obtencin de callos vemos que el que tiene menor nmero de resultado es
el tratamiento 2 con una unidad por experimento; sin embargo, es el tratamiento 2 el mismo
que tiene mayor ndice de muestras contaminadas, seguido del tratamiento 3 en cuanto a
contaminacin y el tratamiento 1 con menor ndice de contaminacin.
Con callos 9 8 7 8
Total 15 15 15 15
De acuerdo con lo observado en la tabla 1 podemos ver que los diferentes tratamientos
respondieron de acuerdo con el objetivo planteado, puesto que la cantidad promedio de
formacin de callos es de 8 unidades experimentales por total del experimento realizado.
Respecto a la no formacin de callos se puede ver que se trata de 2 unidades en promedio
por experimento total. Por otro lado, vemos que la cantidad de muestras contaminadas en
promedio es de 5 unidades lo cual es evidencia de algn tipo de mala manipulacin de
condiciones aspticas durante la inoculacin de los explantes en el medio de cultivo.
Modelo estadstico:
De acuerdo con los resultados obtenidos, para la realizacin del modelo estadstico de
anlisis de varianza (ANOVA) se procedi a realizar la construccin de la matriz estadstica
en base a una clasificacin cualitativa elegida subjetivamente en una escala del 1 al 10 en
base a la formacin de callos en los tratamientos preparados, cada valor obtenido se ingresa
de manera aleatoria en el modelo estadstico propuesto.
Tabla 2. RESULTADOS DE LA MASA DE LOS CALLOS FORMADOS
Tratamiento 1 Tratamiento 2 Tratamiento 3
0.0707g 0.0768g 0.0374g
0.0302g 0.0642g 0.0448g
0.0601g 0.0401g 0.0341g
0.0834g 0.0398g 0.0411g
0.0551g 0.0546g 0.0458g
0.0484g 0.0485g 0.0523g
0.0636g 0.0504g 0.0370g
0.0572g 0.0507g 0.0563g
0.0265g 0 0.0276g
0.0905g 0 0
0.0351g 0 0
0.0639g 0 0
0 0 0
0 0 0
0 0 0
0.0457 0.0283 0.0251 PROMEDIO
En esta tabla se detallan los resultados obtenidos en cuanto a la masa de los callos formados
en los explantes en cada uno de los tratamientos realizados. Con estos datos obtenidos es
posible obtener los resultados del modelo estadstico propuesto, el cual es el anlisis de
varianza (ANOVA). Los pesos de los callos formados difieren evidentemente en cada uno de
los tratamientos respectivos y podemos de esta manera determinar que en el tratamiento 1
se obtuvo mejores resultados en cuanto a la masa de los callos.
Al ingresar esta informacin en el programa informtico Excel office 2010 y hacer el
modelamiento estadstico propuesto llegamos a los siguientes datos, los cuales sern
detallados a continuacin:
En esta tabla se puede observar de manera resumida los datos estadsticos bsicos para la
realizacin de la investigacin.
Total 0.034344148 44
De acuerdo con los datos obtenidos en tabla 4 decimos que, varianza de tratamiento es
0.003662505 y la varianza del error es 0.030681643. En cuanto al modelo decimos que F
calculado es 2.506795768 y F tabla es 3.219942293; por lo tanto, llegamos a la conclusin
de que se acepta la hiptesis nula. Es decir, de acuerdo con el modelo planteado no existe
evidencia suficiente para aceptar la hiptesis de la investigacin, por lo cual se acepta la
hiptesis nula.
FIGURA 1. DIAGRAMA DE CAJA Y BIGOTE
En la figura 1 vemos que los bigotes o brazos de las cajas nos indican el mximo y mnimo
en cada uno de los tratamientos y las lneas trazadas de manera horizontal en las cajas nos
indican el 50% de los resultados cuantitativos para cada uno de los tratamientos. Para ello el
programa informtico por defecto realiza el ordenamiento de los datos obtenidos y procede
de acuerdo con estadstica.
1
DISCUSION
CONCLUSIN
Es posible realizar la induccin de callos en Passiflora edulis de manera ptima usando las
cantidades necesarias de inductores de crecimiento. El 2,4 -D es un inductor de callos por
excelencia utilizado en diversos ensayos de micro propagacin in vitro. Adems, el
bencilaminopurina es otro de los factores que contribuye en ello. Es importante considerar
que a muy bajas o altas concentracin de estos componentes anteriormente mencionados
podra resultar perjudicial para el cientfico y los objetivos planteados antes de la ejecucin
de dicho proceso. El tratamiento 1 que fue el medio de cultivo con concentraciones
moderadas de 2,4 D y BAP arrojando esta un promedio de 9 explantes con callos del total
de 15 repeticiones. Por otro lado, es vlido mencionar que el mantener las condiciones
aspticas contribuye a reducir el nmero de explantes contaminados y por consiguiente el
margen de error se reducira a lo mnimo.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
3. Crdova A., Cobos M., Iman S., Castro J. (2014) Un mtodo eficiente para la induccin
de callos in vitro en Myrciaria dubia (Kunth) Mc Vaugh "Camu Camu". Per: Scientia
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agronoma mesoamericana 20(1): 11-22
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y organognesis indirecta a partir de explantes de cotiledn, hipoctilo y hoja en Ugni
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http://132.248.9.34/hevila/Revistacolombianadebiotecnologia/2011/vol13/no1/10.pdf
10. Villalobos I., Arias O. (1987). INDUCCIN Y MULTIPLICACIN DE CALLOS in vitro
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Costa rica: Agronoma Costarricense 11(1): 39-44.