GENTICA E CNCER

Estudos abrangendo inmeras reas possibilitaram uma compreenso

fundamental das bases genticas do cncer. Embora fatores ambientais e
dietrios indubitavelmente contribuem para o cncer, aceita-se que os
cnceres se originam atravs de um processo de passos mltiplos conduzidos
por alteraes de genes celulares e seleo clonal da prognie variante, que
vai adquirindo um comportamento progressivamente mais agressivo. Estas
mutaes ocorrem em trs classes de genes celulares: oncogenes, genes
supressores de tumor e genes de reparo de DNA. A grande maioria das
mutaes em cncer somtica, e presente apenas nas clulas tumorais. Uma
quantidade relativamente pequena dessas mutaes pode estar presente na
linhagem germinativa dos indivduos e predisp-los a vrios tipos de cncer.
Considera-se que a proliferao de clulas normais seja regulada por proto-
oncogenes promotores de crescimento contrabalanada por genes
supressores de tumor, que restringem o crescimento. Mutaes que potenciam
as atividades dos proto-oncogenes, convertem-nos em oncogenes, que foram
o crescimento de clulas tumorais. Inversamente, leses genticas que
inativam genes supressores, liberam as clulas da represso imposta por
estes genes, permitindo o crescimento irrestrito de clulas cancerosas.

ONCOGENES

Proto-ooncogenes so genes normais no organismo, envolvidos na

proliferao celular. Um proto-oncogene pode ser convertido de um gene
celular normal em um oncogene por uma variedade de eventos
submicroscpicos, incluindo mutaes puntuais, pequenas delees e
inseres e justaposio a outras sequncias cromossmicas. Este ltimo
evento pode ser visualizado citogeneticamente como uma translocao ou
inverso. Alm disso, a amplificao gnica tambm pode levar produo
exagerada de produtos oncognicos.

QUEBRAS ORIGINANDO FUSES GNICAS

A leucemia mielide crnica (CML) foi a primeira doena neoplsica a ser

associada com uma anormalidade cromossmica, o cromossomo Philadelphia
(Ph1), um cromossomo marcador do grupo G que ocorre na medula ssea de
90% dos pacientes com CML. O rearranjo especfico desse cromossomo
mostrou ser o resultado da translocao t(9;22)(q34;q11).

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A clonagem desses pontos de quebra mostrou que o oncogene Abelson (ABL)
estava translocado de sua localizao normal no cromossomo 9 para o
cromossomo 22 (Ph1). O gene localizado no ponto de quebra do cromossomo
22, que foi chamado BCR (breakpoint cluster region), tem pontos de quebra
em muitas neoplasias. A justaposio desses genes leva formao de um
RNAm quimrico de 8,5 kb, maior do que o RNAm normal do ABL . Este
RNAm traduzido em uma protena quimrica ABL (210 kDa), com atividade
tirosina quinase aumentada.

Mapa da fuso gnica BCR-ABL em Leucemia Mielide Crnica. (Forma-se um

DNA quimrico que dar origem a uma protena quimrica de 210 kDa).

Pacientes com leucemia linfoblstica aguda (ALL), cujas clulas tinham um

cromossomo Ph1 resultante da translocao cromossmica tpica foram
estudados, com a utilizao das mesmas sondas. Tanto CML quanto ALL tem o
mesmo ponto de quebra ABL entre os exons 1 e 2, mas em BCR, o ponto de
quebra para ALL est ao menos 50 kb 5 do ponto de quebra para CML. O
RNAm em ALL menor que em CML (70 kb) e a protena quimrica ABL
tambm menor (190 kDa) . Nestes casos a protena est alterada.

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Mapa da fuso gnica BCR-ABL em Leucemia Linfoblastica Aguda. (Forma-se
um DNA quimrico que dar origem a uma protena quimrica de 190 kDa).

Entre as condies em que a concentrao da protena afetada est o

linfoma de Burkitt, cuja principal alterao a translocao recproca t(8;14)
(q24;q32) . O ponto no qual o cromossomo 14 se quebra est situado entre os
genes que codificam as regies varivel e constante da cadeia pesada da
molcula de anticorpo (s vezes a translocao envolve os cromossomos 2 ou
22 em vez do 14, em regies que tambm esto envolvidas na produo de
anticorpos). O oncogene c-MYC se localiza no pequeno segmento do
cromossomo 8, que consistentemente se transloca para o cromossomo 14. A
protena c-MYC qualitativamente a mesma, tanto nas clulas normais quanto
nas do linfoma de Burkitt, porm o rearranjo ativa o oncogene por causa de
sua justaposio a sequncias enhancer que so ativas no tipo celular do
qual o tumor se origina. O oncogene c-MYC ento expresso na mesma
intensidade em que os genes da imunoglobulina so expressos numa clula B
normal. Ele se torna parte da funo especializada da clula e sua protena
expressa em nveis anormalmente altos .

Translocao recproca entre os cromossomos 8 e 14 origina a maior parte dos

casos de Linfoma de Burkitt, uma malignidade das clulas B do sistema imune
humano. Um segmento do cromossomo 8 se quebra e se move para o
cromossomo 14 e reciprocamente um segmento do cromossomo 14 se move

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para o cromossomo 8. Essa translocao recproca coloca um oncogene do
cromossomo 8 prximo a um gene no cromossomo 14 que codifica parte da
produo da molcula de anticorpo. Um mecanismo que ativa a produo de
anticorpos em clulas B normais, ativa ento o oncogene.

Esses rearranjos apresentam duas conseqncias potenciais: 1) ativao de

genes chave no controle da proliferao celular e diferenciao; 2) o rearranjo
rompe genes no relacionados, posicionados em cada um dos pontos de
quebra cromossmicos que ento se fundem num gene quimrico. Pelo menos
um dos genes afetados tende a codificar um fator de transcrio quimrico.
Quando expresso, o produto da fuso freqentemente retm a especificidade
de ligao ao DNA de um dos genes parentais, ativando inapropriadamente a
transcrio. Diversos outros casos desses rearranjos j foram descritos
detalhadamente, tanto em anlise citogentica, quanto molecular. Todos os
seus produtos quimricos tem atividade transformante.

ONCOGENES IDENTIFICADOS POR AMPLIFICAO DE DNA

Diversos alelos oncognicos foram identificados porque eles esto contidos

em sequncias de DNA amplificadas em clulas tumorais. Em vrios casos, as
sequncias de DNA amplificadas foram primeiramente reveladas em anlises
cariotpicas como elementos extracromossmicos denominados double-
minutes e regies homogeneamente coradas.
Double minutes (dmin) e regies homogeneamente coradas (HSRs), que
ocorrem em muitos tipos tumorais, so amplificaes genicas e correspondem
a uma concentrao imprpria de oncogenes. Double minutes so estruturas
extracromossmicas de DNA circular, consistindo de 1 a 2 milhes de pares de
bases que replicam de maneira autnoma, aproximadamente uma vez por ciclo
celular, e segregam ao acaso para as clulas filhas, devido ausncia de
centrmeros. HSRs so estruturas amplificadas intracromossmicas que no
esto necessariamente localizadas no locus nativo do gene. Ambos contm
genes que do uma vantagem seletiva de proliferao s clulas tumorais
onde eles ocorrem. H uma hiptese de que regies de DNA so excisadas do
cromossomo como resultado de eventos de recombinao na forquilha de
replicao. Dependendo de seu tamanho, estas estruturas amplificadas podem
conter alguns genes cromossmicos e resultariam numa deleo desses
genes dos loci correspondentes. Este modelo ainda prediz que os epissomos
multimerizam para formar estruturas circulares maiores, os dmin, que podem
ser detectados citologicamente. Subsequentemente sua formao, estes
elementos de DNA extracromossmicos podem se integrar ao cromossomo,
resultando em HSR.
Acredita-se que a seleo biolgica para a gerao e manuteno de
sequncias amplificadas de DNA em clulas tumorais seja dirigida pelo
nmero de cpias aumentadas e expresso aumentada de genes alvo ou
genes dentro de uma regio maior de DNA amplificado.

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 GENES SUPRESSORES DE TUMOR

Por uma definio operacional, os genes supressores de tumor so elementos

genticos cuja perda ou inativao permite clula apresentar algum dos
vrios fentipos da transformao neoplsica. Neoplasias como
retinoblastoma, tumor de Wilms, meningioma, neurinoma de acstico etc.,
podem ter uma perda gentica de ambos os alelos de um dado gene. A ao
recessiva de alelos mutantes de genes supressores de tumor permite que os
efeitos resultantes sejam retardados por longos perodos de tempo aps a
concepo. O retinoblastoma um tumor da infncia e em 20-30% dos casos,
ambos os olhos so afetados. Todos esses casos bilaterais e 15% dos casos
unilaterais so herdados como um carter autossmico dominante. O
retinoblastoma forneceu a primeira sugesto de que a inativao de um gene
especfico poderia ser importante para o desenvolvimento do cncer humano;
o gene RB est localizado no brao longo do cromossomo 13 (13q14) e em
tecido tumoral, o RNA mensageiro e o produto proteico deste gene esto
ausentes. O envolvimento da regio 13q14 na etiologia de RB foi primeiro
inferida pela observao de delees constitucionais intersticiais de 13q14 em
pacientes apresentando retinoblastoma e anomalias congnitas. Tanto as
formas hereditrias quanto as espordicas de retinoblastoma envolvem
anormalidades nesta regio. Utilizando-se retinoblastoma como modelo,
postulou-se que ele desencadeado por 2 leses sucessivas no genoma
celular. No retinoblastoma espordico, ambas as leses ocorreriam na
linhagem de clulas da retina como mutaes somticas ocorrendo de novo,
mas bem depois da concepo. No retinoblastoma familial, uma das duas
mutaes seria herdada de um dos pais ou se originaria durante a
gametognese; a segunda mutao requerida ocorreria ento como um evento
somtico. O primeiro passo seria a inativao de um gene supressor de tumor
e o segundo passo seria a inativao de seu alelo. Esta inativao poderia ser
qualquer disfuno (ex. metilao) ou ausncia (monossomia, deleo) do
gene.

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Modelo do desenvolvimento de retinoblastoma. Na parte superior, esquerda,
2 cromossomos 13 normais so representados. A formao de um tumor pode
resultar de um cromossomo com um nico gene mutado (RB). (Esta j a
constituio de um indivduo com a forma hereditria de retinoblastoma). A
segunda alterao a inativao de seu alelo.

Os produtos dos genes supressores de tumor so componentes das vias de

sinalizao intercelular que permitem clula receber e processar sinais
inibidores do seu redor. Quando a clula perde componentes crticos desta
rede de sinalizao, ela perde a capacidade de responder a certos sinais
extracelulares inibidores da proliferao, mesmo que estes sinais ainda
estejam presentes no meio ambiente.
A parada do crescimento geralmente conseguida atravs de trs respostas
alternativas. Uma clula em crescimento exponencial pode parar em diferentes
fases de seu ciclo celular. Uma parada no final da fase G 1, justamente antes da
sntese de DNA ocorre frequentemente. Alternativamente, as clulas podem ser
induzidas a sofrer um estgio terminal, a diferenciao ps-mittica. Isto
representa um comprometimento irreversvel e serve mais uma vez para limitar
a proliferao celular. Mais drstico o comprometimento da clula para sofrer
senescncia ou apoptose. Juntas, estas respostas definem a rea de ao dos
genes supressores e das protenas por eles codificadas.

A descoberta de que o mesmo tipo de genes est mutado em muitos tumores

levou concluso de que o cncer atingido atravs de mltiplos passos. O
nmero de mutaes requeridas para cada caso determinado de cncer varia
de acordo com os diferentes tipos celulares. Um exemplo de relevncia para o
fenmeno de mltiplos passos o dos tumores colo-retais. Esses tumores
parecem ser iniciados por mutaes no gene supressor de tumor APC (5q).
Ainda no est claro se o segundo passo uma mutao no alelo APC
remanescente, resultando na ausncia total do produto gnico funcional ou
alguma mutao em outro gene ainda no identificado. Mutaes no APC

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podem ocorrer da mesma maneira que no gene RB, na linhagem somtica ou
germinativa. Mutao de APC leva proliferao anormal de clulas. A
hipometilao do DNA ento associada converso de uma das clulas
deste epitlio proliferativo em um pequeno tumor benigno (adenoma). Ativao
do gene RAS (12p) frequentemente ocorre numa dessas clulas do tumor
benigno, levando a um crescimento seletivo, resultando num tumor maior e
pior (embora ainda benigno). Em seguida, uma mutao no gene DCC (18q)
pode fornecer a uma das clulas deste adenoma j em progresso, a
capacidade de proliferar ainda mais anormalmente, originando um adenoma
displstico que por sua vez, atinge o estgio carcinomatoso. A transio de
adenoma avanado para carcinoma frequentemente acompanhada, e talvez
dirigida, por mutaes no gene p53 (17p). Isto tambm poderia levar
capacidade de invaso, ou outras alteraes seriam necessrias para o
processo metasttico ser atingido.
Nenhum estgio da tumorignese esttico, incluindo o estgio maligno;
mutaes adicionais ocorrem, dando origem a pequenas subpopulaes que
podem permanecer como subtipos clonais; estes representam as maiores
dificuldades em oncologia clnica, pois so reservatrios de clulas
geneticamente heterogneas com capacidades variadas de proliferao,
diferenciao e metstases, e diferentes sensibilidades a drogas, radiao e
ataque imune.

Em muitos tumores, mutaes em um gene especfico parecem preceder as

mutaes em outros. Pelo fato de os oncogenes e genes supressores de tumor
controlarem diferentes circuitos de crescimento, talvez a ordem na qual os
circuitos so interrompidos no seja importante, mas sim que um nmero
suficiente de vias crticas tenha uma disfuno para que o crescimento do
tumor ocorra. Os achados citogenticos em muitos tumores sugerem que
somente um conjunto de vias genticas pode iniciar os processos
tumorignicos em tipos celulares particulares, e que a mutao em alguns
genes confere uma vantagem de crescimento seletivo somente em estgios
tardios do desenvolvimento tumoral.

Modelo de evoluo cromossmica em neoplasias colo-retais

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 GENES DE REPARO DE DNA

Mutaes que modifiquem a sequncia de nucleotdeos na cadeia original de

DNA, como transio ou transverso, acarretam um pareamento inadequado
das bases nucleotdicas, promovendo distores na configurao da dupla
hlice de DNA.
Inativao dos genes de reparo do DNA provavelmente no afeta diretamente
os passos normais do controle do crescimento. Em vez disso, sua inativao
parece resultar em uma taxa aumentada de mutaes numa variedade de
genes celulares, incluindo proto-oncogenes e genes supressores de tumor.

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METILAO

O fenmeno epigentico pode ser definido como mudana no material

gentico (especialmente no DNA e na cromatina) que altera a regulao da
expresso gnica de maneira que esta passada para as clulas filhas dentro
das clulas somticas), porm no caracterizada como mutao, pois no
envolve mudana na seqncia de DNA. Tem como principais mecanismos de
represso transcricional a metilao do DNA e a acetilao das histonas. A
modificao no padro de metilao do DNA a alterao epigenmica mais
bem estudada atualmente.

A metilao do DNA corresponde adio de um grupo metil ao carbono na

posio 5 da citosina.

Ocorre quase que exclusivamente nas citosinas que so seguidas

imediatamente por uma guanina (dinucleotdeos CpG). A maior parte do
genoma mostra uma clara depleo desses dinucleotdeos e os que esto
presentes esto quase sempre metilados.
Metilao de DNA o mecanismo que permite que determinados genes (e no
outros) se manifestem dentro de clulas normais especializadas, visto que
todas as clulas do corpo trazem a mesma carga gentica. O que as diferencia

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 a manifestao de um ou de outro gene durante o desenvolvimento e em
toda a sua vida para desativar genes desnecessrios.
Em contraste, pequenas pores de DNA, chamadas ilhas CpG, so
comparativamente ricas em nucleotdeos CpG e quase sempre esto livres de
metilao. Estas ilhas CpG esto frequentemente localizadas na regio
promotora dos genes humanos e a metilao dentro das ilhas est associada
inativao da transcrio do gene correspondente.
O mecanismo molecular responsvel pela manuteno do estado de metilao
livre das ilhas CpG ainda desconhecido, mas, em clulas embrionrias,
parece servir como local de ligao de protenas especficas que impedem a
metilao de novo . Essa associao se faz necessria uma vez que a
metilao do DNA em regies ricas em CG resulta em uma profunda inibio
da expresso gnica.
Em clulas cancergenas, metilao anormal de DNA desativa genes que
normalmente evitariam divises celulares imprprias. Em outras palavras, o
processo elimina um dos melhores mecanismos do corpo para prevenir o dano
a uma clula, evitando que a mesma se torne cancerosa.
Na realidade, mais de 10% dos genes em alguns tipos de tumor so inativados
por metilao. A resistncia quimioterapia est, na maioria dos casos, ligada
ao grau de metilaes anormais em alguns tumores.
As alteraes de metilao do DNA em clulas tumorais incluem a perda da
metilao em sequncias normalmente metiladas (hipometilao) e o ganho de
seqncias metiladas em locais geralmente no metilados (hipermetilao).

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REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

Nussbaum, R. L.; McInnes, R. R.; Willard, H. F. Thompson & Thompson: Gentica

Mdica. 7ed. Rio de Janeiro: Editora Guanabara Koogan S.A., 2008.

Turnpenny, P.D.; Emery: Gentica Mdica. 13 ed. Rio de Janeiro: Editora Elsevier,
2009.