INSTITUTO TECNOLGICO DE SONORA

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS AGRONMICAS Y VETERINARIAS

REPORTE DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA VETERINARIA. PRCTICA No. 7

DEMOSTRACIN DE LA ACTIVIDAD DE LA CATALASA

Antonio Barreras Figueroa. antoniobarrerasfa@gmail.com

Introduccin. En esta prctica se conocer sobre la

catalasa, una enzima distribuida en numerosos tejidos y
su funcin en las clulas, as como lo que se necesita
para que se ponga en accin. La actividad de la catalasa
se mostrar gracias a la sangre y su reaccin con los
diferentes reactivos.

Metodologa. El alumno llevar a cabo el experimento

con el uso de sangre diluida en agua destilada y diversos
reactivos. Se utilizarn y numerarn cuatro tubos de
ensayo.

En el primer tubo se aadir 3 ml de sangre diluida, el

cual se colocar en bao Mara durante 10 minutos,
pasado el tiempo se enfriar con agua corriente hasta que
alcance una temperatura ambiente y despus se le
aadirn 2 ml de Perxido de hidrgeno para observar
su reaccin.

A los tres tubos restantes se le aadirn 2 ml de Perxido
de hidrgeno y 3 ml de sangre diluida. Al tubo 3 se le
aadirn 12 gotas de Cianuro de Sodio y al tubo 4 se le
aadirn 12 gotas de Nitrato de Plomo. Los tubos 2, 3 y
4 se colocarn en bao Mara a 37C durante 5 minutos
para observar el resultado.
La metodologa fue en base al manual de prcticas.
Resultados y discusin. La prctica comenz al
momento de calentar el primer tubo con sangre diluida.
Se utiliz un bao Mara para calentar el primer tubo.
A los 2 minutos la sangre comenz a tomar una pequea
capa blanca en la superficie. A los 5 minutos se observ
un oscurecimiento en la sangre y se apreciaron
sedimentos en ella.
Se sigui calentando el tubo, y a los pocos minutos la
tonalidad de la sangre se oscureci an ms, tomando un
color caf. Se utiliz agua corriente para enfriar el tubo.
Se observ que, a temperatura ambiente, la sangre
present elementos celulares muertos.
Fig. 1. Tubo #1. Resultado de aplicacin de Perxido de Hidrgeno
despus del proceso de calentamiento y enfriamiento.
A los tubos 2, 3 y 4 se le aadieron 3 ml de sangre
diluida y 2 ml de perxido de hidrgeno. Al tubo 3 se le
aadi 12 gotas de Cianuro de Sodio y al tubo 4 se le
aadi 12 gotas de Nitrato de Plomo.
Se observ gran cantidad de espuma en los tubos 2 y 4,
en el tubo 3 solo se percibi poca efervescencia, pero
hubo un notable cambio de color en la sangre.
Se utiliz un bao Mara para calentar los tubos 2, 3 y 4,
lo cual sirvi para que la catalasa funcionara a la
temperatura adecuada. En este paso, los tubos 3 y 4
presentaron efervescencia. El tubo 2 no present
cambios. Al pasar los minutos, el tubo 2 empez a tomar
un color rojo ms oscuro, y en los tubos restantes
disminuy la efervescencia. Mediante el termmetro se
comprob la temperatura del agua y al alcanzar los
37C, se aadi Perxido de Hidrgeno en cada tubo
para observar la reaccin.

Despus, se aadi al tubo 2 ml de Perxido de
Hidrgeno y se observ cmo se separaron los
componentes en la sangre.
Los tubos 3 y 4 no presentaron reaccin alguna, sin
embargo, se observ que el tubo 2 empez a trabajar
demasiado. Esto es porque la catalasa, al alcanzar la
temperatura ptima para su funcionamiento, y al entrar
en contacto con el perxido de hidrgeno, la enzima
reaccion correctamente, cumpliendo su funcin de
evitar la peroxidacin. En los tubos 3 y 4 no hubo
reaccin a causa de las sustancias inhibidoras (Cianuro
de Sodio y Nitrato de Plomo) que se aadieron en un
principio, las cuales causaron disminucin e
inactivacin total de la actividad de la enzima.
Fig. 2. Tubos 2, 3 y 4 calentados a 37C en bao Mara. Se observa
una reaccin en el tubo 2 a causa de una temperatura ptima, la
ausencia de sustancias inhibidoras y el contacto con el Perxido de
Hidrgeno.
Al finalizar el experimento, los resultados obtenidos
fueron los esperados. Se observ la actividad de la
catalasa en condiciones ptimas para su funcionamiento,
y en condiciones no ptimas.
Conclusiones. Al estar trabajando con la catalasa, se
pudo comprobar el funcionamiento de esta enzima, y los
factores que pueden afectar la accin de esta. Gracias a
los reactivos que utilizamos como sustancias
inhibidoras, se observ el efecto que estas tienen en la
enzima, impidiendo su funcionamiento, por lo que la
catalasa no pudo actuar sobre el perxido de hidrogeno.
Al haber realizado la prctica, se puede comprobar que
se necesita determinado grado de temperatura para que
la enzima pueda funcionar, ya que al calentar el tubo a
la temperatura adecuada de la catalasa (37C) pudo
actuar sobre el perxido de hidrgeno.
Cuestionario.
1. Hay dos modelos sobre la forma en la que el
sustrato se une al sitio activo de una enzima.
Investguelos y explique claramente cmo
funcionan cada uno de ellos. R: 1. Modelo
llave-cerradura: supone que la estructura del
sustrato y la del centro activo son
complementarias, de la misma forma que una
llave encaja en una cerradura. Este modelo es
vlido en muchos casos, pero no es siempre
correcto. 2. Modelo del ajuste inducido: En
algunos casos, el centro activo adopta la
conformacin idnea slo en presencia del
sustrato. La unin del sustrato al centro activo
del enzima desencadena un cambio
conformacional que da lugar a la formacin del
producto.
2. Hay algunas sustancias que pueden inhibir la
accin enzimtica, investigue los dos tipos de
inhibidores enzimticos y cul es la forma de
accin de cada uno de ellos. R:
1. Los inhibidores reversibles se unen a las
enzimas mediante interacciones no covalentes
tales como los puentes de hidrgeno, las
interacciones hidrofbicas y los enlaces inicos.
Los enlaces dbiles mltiples entre el inhibidor
y el sitio activo se combinan para producir una
unin fuerte y especfica.
2. Los inhibidores irreversibles normalmente
modifican una enzima covalentemente, con lo
que la inhibicin no puede ser invertida. Los
inhibidores irreversibles suelen contener grupos
funcionales reactivos como mostazas
nitrogenadas, aldehdos, haloalcanos o
alquenos. Estos grupos electroflicos reaccionan
con las cadenas de aminocidos para formar
uniones covalentes.
3. En que organelos celulares se encuentra la
catalasa? R: En los peroxisomas en clulas
eucariotas y en el citoplasma en clulas
procariotas.
4. Si los eritrocitos carecen de orgnulos, En
qu parte acta la catalasa? R: En el citosol.
5. El cianuro de sodio acta como inhibidor de
la catalasa, si el cianuro entrara a la
circulacin sangunea luego a los tejidos y
finalmente a las clulas.... qu pasara en el
organismo? R: El organismo se intoxicara, ya
que el cianuro es muy txico. El efecto nocivo
 y letal ms importante de las distintas
variedades de cianuro, es el de impedir que el
oxgeno que es llevado por los glbulos rojos de
la sangre, llegue a las dems clulas del
organismo, impidiendo as el proceso de la
respiracin celular.

6. La actividad de la catalasa vara

dependiendo en que rgano se encuentra, en
cuales rganos es ms elevada su actividad y
en cuales es menos activa? Su actividad es ms
elevada en la sangre y en el hgado.

Referencias Bibliogrficas.
Gonzlez Maas, Juan Manuel (2007). MODO DE ACCIN
DE LAS ENZIMAS. Recuperado el 18 de octubre de 2017 de
http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz2.htm.

Correa Alanis, Tania V. (2009). INHIBIDORES

ENZIMATICOS. Recuperado el 18 de octubre de 2017 de
http://bqmenmh.blogspot.com/2009/04/inhibidores-
enzimaticos.html.

Contreras, Ramn (2016). Catalasa. Recuperado el 18 de

octubre de 2017 de
https://biologia.laguia2000.com/bioquimica/catalasa.

Dra. Ela M. Cspedes Miranda. (1997). Enzimas que

participan como barreras fisiolgicas para eliminar los
radicales libres: II. Catalasa. Recuperado el 18 de octubre de
2017 de
http://bvs.sld.cu/revistas/ibi/vol15_2_96/ibi01296.htm.