Catalino De la ROSA T, et al.

REVISTA COLOMBIANA DE CIENCIAS DE LA SALUD

Volumen 1 nmero 1, ao 2012
ISSN 2322-6617

CUANTIFICACIN DE FLAVONOIDES TOTALES EN EL EXTRACTO METANLICO DE Glycine max (SOYA) Y SU

EFECTO LARVICIDA CONTRA Aedes aegypti

QUANTIFICATION OF TOTAL FLAVONOIDS IN THE METHANOLIC EXTRACT OF Glycine max (SOYBEAN) AND
LARVICIDAL EFFECT ON Aedes aegypti
1 2 3 3 3
Catalino De la ROSA T. *, Carolina TORRES G. , Oscar CAMACHO R. , Zuleima CALDERN M. , Eliecer HERRERA U. , Milena
3
OSORIO Y.
Recibido: Marzo 2011 - Aceptado: Enero 2011

RESUMEN
Los flavonoides son compuestos fenlicos caractersticos a los colores amarillo-naranja, atribuyndole propiedades antioxidantes,
larvicida y efecto cardiovascular. En este trabajo se realiz la marcha fitoqumica preliminar del extracto metanlico de la semilla
de Glycine max, el cual mostr la presencia de flavonoides, fenoles, taninos y aminocidos. Se cuantificaron los flavonoides
totales expresados como quercetina por espectrofotometra UV-Vis a 258 nm. El contenido de flavonoides totales fue 16.528%
de quercetina. Por HPLC se determin el contenido de isoflavonas como daidzena 4.779x10-3 mg/mL, genistina 0.012002
mg/mL, gliciteina 0.065597 mg/mL, genisteina 0.00008 mg/mL. La evaluacin de la actividad larvicida del extracto acuoso de
Glycine max result negativa frente al Aedes aegypti.
Palabras claves: Flavonoides, Glycine max, semillas, larvicida, Aedes aegypti

ABSTRACT
Flavonoids are phenolic compounds characteristic to the yellow-orange, attributing properties antioxidant, larvicide and
cardiovascular effect. In this paper was performed preliminary phytochemical methanol extract of the seeds of Glycine max, which
showed the presence of flavonoids, phenols, tannins and amino acids. Total flavonoids, expressed as quercetin, were quantified
by spectrophotometry UV-Vis at 258 nm. Total flavonoid content was 16,528% of quercetin. HPLC was determined as isoflavone
content daidzein 4.779x10-3 mg/mL, genistin 0.012002 mg/mL, glycitein 0.065597 mg/mL, genistein 0.00008 mg/mL. The
evaluation of the larvicidal activity of aqueous extract of Glycine max is negative against Aedes aegypti.
Keywords: flavonoids, Glycine max, seeds, larvicidal, Aedes aegypti.

1
Qumico Farmacutico. Magister en Ciencias Qumicas. Grupo de Investigacin Fitoqumica, Facultad de Qumica y Farmacia, Universidad del Atlntico.
2
Coordinadora Lnea de Entomologa Mdica, Programa Estudio y Control de Enfermedades Tropicales - PECET, Universidad de Antioquia - Medelln, Colombia
3
Semillero, Grupo de Investigacin Fitoqumica, Facultad de Qumica y Farmacia, Universidad del Atlntico
*Mail correspondencia: catalinodelarosa@mail.uniatlantico.edu.co
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CARACTERIZACIN SOCIOECONMICA DE LAS FAMILIAS DE NIOS PREESCOLARES Y ESCOLARES CON DESNUTRICIN DE LOS COLEGIOS PBLIC0S MUNICIPIO DE PUERTO COLOMBIA DEPARTAMENTO DEL
ATLNTICO 2009
INTRODUCCIN
Actualmente es reconocida la utilizacin emprica de las
plantas como agentes en los estados no deseados de salud
en mltiples culturas del mundo transmitida a travs de
generaciones. Este saber ha ido perfeccionndose a lo largo
de la historia, teniendo su aplicacin en la medicina actual
(Caigueral, 2003).
Las enfermedades transmitidas por vectores son
responsables del 22.8% de los eventos, y en la ltima
dcada se ha observado un aumento del 28.8%. Este
aumento se le atribuye a los cambios climticos que han
ocurrido en la dcada de los 90, que han contribuido a que
los vectores sean sensibles a las condiciones
medioambientales como la lluvia, la temperatura;
convirtindose en un problema de salud pblica
(Woolhouse, 2005). Una de estas enfermedades es el
dengue, el cual ha aumentado el nmero de personas
afectadas en los ltimos 10 aos (Rose, 2001). 2,5 mil
millones de personas de la poblacin mundial, corren el
riesgo de contraer la enfermedad por vivir en zonas
propensas donde se desarrolla el vector que transmite la
enfermedad (Hernndez, 2009). Por lo anterior Surge la
necesidad de implementar diferentes alternativas de
prevencin, control y erradicacin del dengue en la
poblacin colombiana (Vargas, 1998), por tal razn las
investigaciones de control de vectores han encaminado a
encontrar compuestos bioactivos de plantas a los cuales se
les atribuye actividad larvicida como es el caso de los
compuestos fenlicos (Kotkar, 2002).
La especie Glycine max perteneciente a La familia de las
leguminosas, posee un fruto en forma de vaina dehiscente
con suturas conteniendo de tres a cuatro semillas. La semilla
es rica en protenas y en aceites. En algunas variedades
mejoradas presenta alrededor del 40-42% de protena y del
20-22% en aceite, respecto a su peso seco. En la protena de
soja hay un buen balance de aminocidos esenciales,
destacando lisina y leucina (Toledo, 2011).
El objetivo de este estudio es cuantificar los flavonoides
totales del extracto metanlico de Glycine max (soya),
usando espectrofotometra UV-VIS y cromatografa HPLC; y
evaluar la actividad larvicida.
MATERIALES Y METODOS:
Recoleccin y tratamiento del material vegetal. El
material vegetal consisti en las semillas de Glycine max
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(soya), adquirido de forma empacada en los almacenes
Olmpica ubicados en la ciudad de Barranquilla (Atlntico).
Se seleccion y separ manualmente el grano para eliminar
aquellos que presentaron picaduras de insectos y/o materia
orgnica adherida al tegumento de la semilla. Del cual se
tom 1 kg, se moli manualmente con un molino de
cuchillas y se almacen adecuadamente libre de humedad y
luz directa.
Obtencin del extracto metanlico. Se pes 200.9 g de
semillas, se adicion 600 mL de MeOH y se someti a
reflujo durante 24 horas a temperatura controlada de 50C,
posteriormente se filtr e hidroliz adicionando 5 mL de
cido clorhdrico concentrado sometido a reflujo por 3
horas. Se enfri, filtr y extrajo con ter de petrleo, para
obtener una fase etrea y una metanlica. Se concentr el
extracto en un rotavaporador Buchi R-205 a 46C y un Buchi
Heating Bath B 490.
Marcha ftoqumica preliminar. Para determinar la
presencia de los grupos qumicos mayoritarios del extracto
metanlico de la semilla de Glycine max, se evalu de forma
cualitativa los metabolitos secundarios presentes. Sobre
dichas muestras se aplicaron reactivos especficos para
confirmar o descartar la presencia de flavonoides, alcaloides,
taninos, antraquinonas, fenoles, saponinas, esteroles y
terpenos (Lock, 1994).
Determinacin de flavonoides totales por UV/VIS. Se
pes 0.5252 g del extracto metanlico concentrado, se
diluy en 10 mL de MeOH, se llev a 100 mL. Obteniendo la
solucin madre, de la cual se prepar las diluciones a
diferentes concentraciones por triplicado. Como solucin
patrn se utiliz 0.0445 g de quercetina en 100 mL de
MeOH. Estas soluciones se leyeron a una absorbancia de
258 nm en un espectrofotmetro UV/Vis Hewlett Packard
8453 (Camacho, 2009).
Se emple la siguiente expresin para la determinacin del
contenido total de flavonoides expresados como quercetina
(Gutirrez, 2000):
Am * Pr * 5
FI = x 100
Ar
Dnde:
FI= Contenido de flavonoides totales expresados como
quercetina (%).
Am= Absorbancia de la solucin muestra (nm).
Pr= Peso de la sustancia de referencia (g).
Ar= Absorbancia de la solucin de referencia (nm).
 Catalino De la ROSA T, et al.

positivos para taninos, fenoles, saponinas, aminocidos. (Ver

tabla No 1).
Cuantificacin de flavonoides totales por Cromatografa Tabla No 1. Resultados de la Marcha Fitoqumica
Liquida de Alta Resolucin HPLC. Se utiliz 6.729 g del Metabolitos
Ensayo Resultado
extracto metanlico. El anlisis por HPLC, se realiz en un Secundarios
cromatgrafo liquido de alta resolucin Agilent Shinoda +
Flavonoides
Technologies, la columna empleada fue C 18 (250 x 4.6) 5 Pacheco +
m, volumen de inyeccin de 30L, detector UV 256 nm, Gelatina 1% +
Taninos
Gelatina sal +
con flujo 1 mL/min a una temperatura de 37C.
Fenoles Tricloruro frrico +
Dragendorff -
Determinacin de actividad biolgica. Preparacin de
Wagner -
las soluciones a diferentes concentraciones. Se Alcaloides Mayer -
prepararon soluciones a diferentes concentraciones en un Yodo yoduro cido de
rango de 1000 a 6500 ppm, siguiendo las directrices dadas -
potasio
por la organizacin mundial de la salud (OMS). Se prepar Antraquinonas Brntrager -
la solucin madre disolviendo 200 mg de extracto Saponinas Espuma (H2O) +
metanlico en 20 mL de solucin. Partiendo de la solucin Esteroles y terpenos Lieberman Burchard -
madre, se prepararon diluciones sucesivas a concentracin (+) Resultado positivo para esta prueba. Presencia del metabolito.
(-) Resultado negativo para esta prueba.
de 1000, 2000, 4000 y 6500 ppm (WHO, 2005).

Obtencin de las larvas del IV estadio de Aedes aegypti.
La evaluacin de la actividad larvicida del extracto acuoso
de Glycine max sobre las larvas del mosquito Aedes aegypti,
se realiz con larvas del estadio IV del programa de Estudio
y Control de Enfermedades Tropicales (PECET) de la
Universidad de Antioquia, la cepa utilizada fue Rokcefeller.
Los huevecillos fueron sumergidos en agua para inducir la
eclosin, las larvas que emergieron se transfirieron a agua
limpia para la alimentacin de las mismas, se criaron hasta
el IV estadio, se seleccionaron las larvas necesarias para
efectuar el ensayo biolgico (WHO, 2005).
Evaluacin de actividad larvicida. Se utiliz aprox. 1000
larvas del IV estadio de Aedes aegypti. Se distribuyeron en
cuatro (4) bloques, uno para cada concentracin (1000,
2000, 4000, 6500 ppm), cada bloque lo conformaron 4
unidades experimentales, las cuales contaban con 55 larvas
aproximadamente, que se trataron con el extracto acuoso
de Glycine max. Un grupo testigo por cada bloque con 100
mL de agua y 25 mL del extracto. El conteo de mortalidad se
realiz a las 24 y 48 horas. Las larvas se tomaron como
muertas cuando no reaccionaban al ser tocadas por un
puntero punta roma en la regin cervical (WHO, 2005).
El ensayo para taninos present turbidez, en la prueba de
fenoles con FeCl3 mostr una coloracin marrn, la prueba
de saponinas dio positiva por la presencia de espuma
persistente durante 30 min.
Determinacin de flavonoides totales por UV/Vis. El
contenido de flavonoides obtenido a una longitud de onda
de 258 nm, mostr resultado una concentracin de 16.53%
de flavonoides totales expresados como quercetina. En
comparacin con la especie Dioscorea trifida que es
reconocida por su alto contenido de flavonoides totales con
27.63 mg Eq quercetina/100 g de muestra seca (Ramos,
2010), muestra el gran contenido que posee la misma.
Cuantificacin de flavonoides totales por Cromatografa
Liquida de Alta Resolucin HPLC. El contenido de
flavonoides est expresado como isoflavonas totales (Ver
Figura No. 1). De igual forma se determin y cuantific los
diferentes tipos de isoflavonas presentes (genisteina,
daidzeina, glicitena, daidzina, genistina).
Tabla No 1. Cromatograma HPLC del extracto

RESULTADOS Y DISCUSIN

La marcha fitoqumica realizada al extracto metanlico de la

semilla de Glycine max, confirm la presencia de
flavonoides, dando resultados positivos para las pruebas de
Shinoda y Pacheco, de igual manera mostr resultados
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ATLNTICO 2009

El valor promedio de la concentracin obtenida de Programa de Farmacia, Universidad del Atlntico,

isoflavonas totales presentes en las semillas de Glycine max Atlntico-Colombia.
fue 0.13157 mg/mL.
(2) Caigueral Salvador, Dellacassa Eduardo, Bandoni
Evaluacin de actividad larvicida. En la evaluacin del Arnaldo L., (2003); Plantas Medicinales y Fitoterapia:
extracto acuoso de la especie Glycine max, se observ que Indicadores de Dependencia o Factores de
la solucin madre (250000 ppm) caus mortalidad de las Desarrollo?. Lat. Am. J. Pharm. 22 (3): 265-78
larvas a las 48 horas, mientras las concentraciones restantes
(1000, 2000, 4000, 6500 ppm) no ocasionaron mortalidad (3) Gutirrez Gaitn Yamilet Irene, Miranda Martnez
frente a las larvas del IV estadio de Aedes aegypti. Migdalia, Varona Torres Noel, Rodrguez Aida Tania
(2000); Validacin de 2 mtodos
espectrofotomtricos para la cuantificacin de
CONCLUSIN taninos y flavonoides (quercetina) en Psidium
guajaba L.; Revista Cubana de Farmacia; 34 (1): pp.
La marcha fitoquimica preliminar confirm la presencia de 50-55.
los componentes presentes en el extracto de la semilla de
Glycine max como son flavonoides, taninos, fenoles y (4) Hernndez K, Barrios M. (2009); Evaluacin de la
saponinas. As mismo, el anlisis por espectrofotometra actividad larvicida de aceites esenciales extrados de
UV/Vis obtuvo un porcentaje de flavonoides totales de flores de Plumeria rubra L (Frangipani) y Plumeria
16.5281% expresados como quercetina, resultado pudica Jacq (Florn) sobre Aedes aegypti. Tesis
significativo, comparndolo con el contenido de flavonoides Pregrado Programa de Farmacia, Universidad del
totales de la especie Dioscorea trfida (Ramos, 2010), Atlntico, Atlntico-Colombia.
reconocida por su contenido de flavonoides.
(5) Kotkar Hemlata et al. (2002); Antimicrobial and
Observando los resultados del anlisis cromatogrfico pesticidal activity of partially purified flavonoids of
(cromatografa HPLC) del extracto metanlico de Glycine Annona squamosa; Pest Management Science; 58
max se identificaron las isoflavonas mayoritarias como es el (1): pp. 33-37.
caso de daidzena y glicitena; de igual manera se
encontraron genisteina, daidzina y genistina. (6) Lock de Ugaz, O (1994); Investigacin Fitoqumica,
Mtodo en el estudio de productos naturales.
El efecto larvicida del extracto acuoso de Glycine max sobre Fondo Editorial, Segunda edicin. Pontificia
larvas del IV estadio de Aedes aegypti fue negativo, salvo la Universidad Catlica del Per; pp. 161-163, 183-213.
solucin madre (250000 ppm) donde la mortalidad fue
100% a 48 horas. (7) Ramos Fernando, et al (2010); Antocianinas,
polifenoles, actividad anti-oxidante de Sachapapa
morada (Dioscorea trifida l.) y evaluacin de
AGRADECIMIENTOS lipoperoxidacin en suero humano. Rev Soc Qum
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