BIOLOGA GENERAL GUA DE LABORATORIO

PRACTICA N 5
RECONOCIMIENTO DE LPIDOS Y PROTENAS

1. FUNDAMENTO TERICO
As como para otras biomolculas resulta fcil establecer una definicin desde el punto de
vista qumico, en el caso de los lpidos esta tarea entraa una mayor dificultad, ya que
constituyen un grupo de sustancias qumicamente muy heterogneo que no se
caracteriza, como otras biomolculas, por la posesin de un determinado conjunto de
grupos funcionales. Por ello, resulta mucho ms conveniente identificarlos sobre la base
de una de sus propiedades fsicas: su mayor o menor solubilidad en distintos tipos de
disolventes. As, se considera que los lpidos son un grupo de biomolculas que se
caracterizan por ser poco o nada solubles en agua y, por el contrario, muy solubles en
disolventes orgnicos no polares.
La clasificacin de los lpidos tambin resulta problemtica, dadas las caractersticas
qumicas tan diversas que poseen. Adoptaremos una de las ms comunes, que divide a los
lpidos en dos grandes categoras: lpidos saponificables, que contienen cidos grasos
unidos a algn otro componente, generalmente mediante un enlace tipo ster, y lpidos
no saponificables, que no contienen cidos grasos, aunque tambin incluyen algunos
derivados importantes de stos.

2. OBJETIVOS
Comprobar la solubilidad de los lpidos y su composicin.

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3. PROCEDIMIENTOS:
1. TINCIN
FUNDAMENTO

Los lpidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el colorante Sudn III.

MATERIALES
Gradillas con tubos de ensayo
Aceite vegetal
Solucin de Sudn III en frasco
cuentagotas.
Tinta roja en frasco cuentagotas
Pipeta 5 ml

TCNICA

1. Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de aceite.

2. Aadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solucin alcohlica de Sudn III.
3. Al otro tubo aadir 4-5 gotas de tinta roja.
4. Agitar ambos tubos y dejar reposar.
5. Observar los resultados: en el tubo con Sudn III todo el aceite tiene que aparecer
teido, mientras que, en el tubo con tinta, sta se ir al fondo y el aceite no estar
teido.

Muestra Observaciones
Agua + Sudan
Aceite + Sudan
Aceite + Tinta Roja

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2. SOLUBILIDAD
FUNDAMENTO

Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en
pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso, que es transitoria,
pues desaparece en reposo por reagrupacin de las gotitas de grasa en una capa que,
por su menor densidad, se sita sobre el agua. Por el contrario, las grasas son solubles
en disolventes orgnicos, como el ter, cloroformo, acetona, benceno, etc.

MATERIALES
Gradillas con tubos de ensayo
Vaso de precipitado con agua
Mechero
Aceite vegetal y margarina
ter o cloroformo.
Pipeta 5 ml

TCNICA

1. Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo.

2. Aadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de ter u otro disolvente orgnico,
3. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.
4. Observar los resultados: Se ver cmo el aceite se ha disuelto en el ter y, en
cambio no lo hace en el agua y el aceite subir debido a su menor densidad.

Muestra Observaciones
Aceite + Agua
Aceite + Cloroformo
Aceite + margarina

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3. SAPONIFICACIN
FUNDAMENTO

Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido sdico o potsico descomponindose

en los dos elementos que las integran: glicerina y cidos grasos. stos se combinan con
los iones sodio o potasio del hidrxido para dar jabones, que son en consecuencia las
sales sdicas o potsicas de los cidos grasos. En los seres vivos, la hidrlisis de los
triglicridos se realiza mediante la accin de enzimas especficos (lipasas) que dan lugar
a la formacin de cidos grasos y glicerina.

MATERIALES
Gradillas con tubos de ensayo
Hidrxido de Sodio al 20%
Vaso de precipitado 250 ml
Mechero
Aceite vegetal
Pipeta 5 ml

TCNICA

1. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%.

2. Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos.
3. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara que
contiene la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia
semislida que es el jabn formado y una superior lipdica de aceite inalterado.

Muestra Observaciones

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4. CUESTIONARIO

1. Qu son los jabones?

2. Cmo se pueden obtener los jabones?
3. Por qu en la saponificacin la glicerina aparece en la fase acuosa?
4. Qu enzima logra en el aparato digestivo la hidrlisis de las grasas?
5. Indica lo que ocurre con la mezcla aceite-Sudn III y aceite-tinta y explica a qu se debe la
diferencia entre ambos resultados.
6. Qu ocurre con la emulsin de agua en aceite transcurridos unos minutos de reposo? Y
con la de cloroformo y aceite? A qu se deben las diferencias observadas entre ambas
emulsiones?

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RECONOCIMIENTOS PROTENAS

1. FUNDAMENTO

Las protenas son elementos vitales para los organismos, encontrndose en plantas y
animales en una proporcin elevada. Hay una gran variedad de protenas y cada una
desempea una funcin biolgica especfica que puede ser de reserva, de sostn,
transporte, estructural, etc. Qumicamente las protenas estn constituidas por
combinaciones complejas de carbono, hidrogeno, oxigeno, nitrgeno y otros elementos en
menor proporcin como son azufre cobre y fosforo.
Cuando la estructura de la protena se desorganiza, se dice que se encuentra
desnaturalizada y esto trae como consecuencia la perdida de la actividad biolgica. La
desnaturalizacin puede lograrse por medios fsicos como el calor o qumicos como una
variacin de pH, observndose una disminucin en la solubilidad y la formacin de un
coagulo. Este mtodo es utilizado para demostrar la presencia de protenas.

Tambin se puede identificar protenas mediante el uso de sustancias que, al ponerse en

contacto con ellas, producen una coloracin especfica, tal es el caso de la Reaccin de
Biuret.

2. OBJETIVO

Poner de manifiesto ciertas propiedades de las protenas, algunas de las cuales pueden
servirnos para su identificacin.

3. PROCEDIMIENTOS
1. REACCIN DE BIURET

El Biuret es una reaccin tpica de los enlaces peptdicos, en la cual los tomos de cobre del
reactivo se unen a varios grupos NH, lo que produce una coloracin rosa-violcea.
Esta reaccin no sirve para dipptidos ni para aminocidos.
El REACTIVO DE BIURET es aquel que detecta la presencia de protenas, pptidos cortos y
otros compuestos con dos o ms enlaces peptdicos en sustancias de composicin
desconocida.
Est compuesto de hidrxido potsico (KOH) y sulfato cprico (CuSO4), junto con tartrato
de sodio y potasio (KNaC4O64H2O).
El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa cuando
se combina con polipptidos de cadena corta.
El Hidrxido de Potasio no participa en la reaccin, pero proporciona el medio alcalino
necesario para que tenga lugar.

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Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un mtodo colorimtrico que permite

determinar la concentracin de protenas de una muestra mediante espectroscopa
ultravioleta-visible a una longitud de onda de 540 nm (para detectar el in Cu2+).

MATERIALES
Gradillas con tubos de ensayo
Reactivo de Biuret
Vaso de precipitado 250 ml
Clara de huevo, leche, jamn, aceite
Pipeta 5 ml
TECNICA

1. Se toma un tubo de ensayo y se colocan 3ml de albmina de huevo (clara de huevo), es

decir la parte transparente.
2. Se aaden 3 ml de Reactivo de Biuret
3. El resultado es que la mezcla se torna de color violeta, indicando la presencia de
protenas.

Muestra Observaciones
Clara de huevo + Biuret
Leche + Biuret
Aceite + Biuret
Jamn + Biuret

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2. DESANATURALIZACION DE PROTENAS

Una protena es una cadena de aminocidos cuya secuencia es especfica. Se forman en los
ribosomas por lectura de los genes que llevan la informacin de la secuencia concreta de
aminocidos que da lugar a una determinada protena. Esta cadena de aminocidos agrega
otros tomos o molculas como cobre, zinc, hierro, etc, para dar lugar a la protena final
que comienza a plegarse sobre s misma para adoptar la conformacin espacial necesaria
para realizar correctamente su funcin biolgica. La prdida de esta conformacin espacial
hace que la protena no pueda cumplir con su funcin biolgica en el organismo y es lo que
se conoce como desnaturalizacin de protenas. Por ejemplo, un enzima pierde su funcin
cataltica.
La desnaturalizacin de protenas es consecuencia de algn factor externo como acidez del
medio, temperatura > 70C, alcohol, etc. Es importante saber que la desnaturalizacin de
una protena no afecta a lo que se conoce cmo estructura primaria, esto es, la secuencia
de aminocidos base de la protena.
La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su
DESNATURALIZACIN por los agentes indicados, que al actuar sobre la protena la
desordenan por la destruccin de su estructura terciaria y cuaternaria

MATERIALES
Gradillas con tubos de ensayo
Alcohol, cido actico
cocinilla
Clara de huevo
Pipeta 5 ml

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TCNICA

Para ver la coagulacin de las protenas se puede utilizar clara de huevo, para conseguir ms
volumen puede prepararse para toda la clase una dilucin de clara de huevo en agua, de forma
que quede una mezcla an espesa.

1. Colocar en un tubo de ensayo 3 ml de clara de huevo y calentar

2. Colocar en un tubo de ensayo 3 ml de clara de huevo y aadir 5 gotas de cido actico
o alcohol y calentar el tubo a la llama del mechero.

Muestra Observaciones
Clara de huevo + T
Clara de huevo + OH

4.CUESTIONARIO

1. Fundamente las reacciones qumicas realizadas en la prctica

2. Explique lo que sucedi en el reconociendo de protenas?
3. Elabore una lista de los aminocidos esenciales y no esenciales.
4. Defina que es un enlace peptdico y demustrelo en un grfico o esquema
5. Explique que es el proceso de desnaturalizacin?
6. Explique que son las enzimas y cules son los factores para que se realice una correcta
accin enzimtica?