Gentica de mamferos:

el ratn
Estrategias de bsqueda de genes,
metodologa y usos
Estrategias de genoma ntegro en
gentica del ratn
El ratn como organismo modelo,
desarrollo bsico del ratn y
perspectivas histricas
Gentica del ratn I

El ratn como un organismo

modelo, desarrollo bsico del
ratn y perspectivas histricas
El ratn de laboratorio

Ventajas/Desventajas
Caractersticas
Cepas inbred/outbred
Estrategias de cruzamiento de
ratones
 Porqu el ratn?
Es un mamfero!! Y uno de los ms pequeos (25-40g)
Cercano evolutivamente a humanos(60 millones de aos)
Corto tiempo de gestacin (20 das)
Entra a la pubertad relativamente temprano (6-8 semanas)
Camadas grandes
Largo perodo reproductivo
Machos no atacan a las cras
Dciles, fciles de manejar
Para estudios de desarrollo, los embarazos se planean fcilmente para
inseminacin (plugs vaginales)
Placentacin y desarrollo temprano son similares a los humanos
Sintenia conservada con el genoma humano ( filas de 10- 20 mb )
 Caractersticas del ratn
Genoma
Cromosomas: 19 pares autosmicos + XY
Contenido de DNA diploide:~ 6pg
Unidades de recombinacin:1600 cM
Nmero aprox. de genes: 26000
Biologa reproductiva
Tiempo de gestacin 20 das
Edad al destete 3 semanas
Edad de madurez sexual 7 semanas
Tiempo de vida en el elab1.5-2.5 aos
Tamao promedio de camada 6-9
Camadas por hembra 4-8
 Desventajas
No exactamente humano: diferencias en funcin cognitiva,
comportamiento, expresin gnica.
Dificultad para monitorear desarrollo in utero en comparacin
con otros organismos modelo
Diploide vs haploide mutaciones gnicas son letales menos
frecuentemente, pero los fenotipos son frecuentemente
suprimidos por heterocigosidad
Genoma grande es ms difcil trabajar en relacin a
organismos con genomas ms compactos
Perodo de gestacin largo en comparacin con otros
organismos modelo
La funcin celular est influenciada por estmulos endocrinos,
fisiolgicos y del medio ambiente
Se necesitan amplios espacios de almacenamiento
 Origen de cepas
endogmicas (inbred)
Ms de 100 aos de uso de ratones en el estudio de herencia en
mamferos y seleccin natural
Fueron originalmente mantenidos por criadores que establecieron
lneas nicas seleccionadas por color del pelaje u otras caractersticas
externas
Alrededor del ao 1900, una profesora de escuela retirada Abbie
Lathrop cri y vendi ratones desde su hogar en Granby, MA
Entre sus clientes estaba William Castle de la Universidad de Harvard,
quien estableci algunas de las primeras lneas de cepas endogmicas
(ej. BALB/c)
Abbie Lathrop realiz tambin sus propios experimentos de crianza
dando lugar a cepas como C57BL/6 y C57BL/10
En 1929, los Laboratorios Jackson fueron establecidos como repositorio
para stocks de cepas inbred y lneas mutantes para uso experimental.
Fuentes y cepas de ratones
de laboratorio

PROVEEDORES CEPAS DE USO COMUN

The Jackson C57BL/6J

Laboratory BALB/c
Charles River
C3H
Taconic Farms
DBA/2
Harlan Sprague
Dawley
Estrategias de crianza de
ratones
 Caracterstics reproductivas de
cepas inbred de uso comn
Cepa Cruces Semanas Tamao Nmero Fecundidad Respuesta
productivos al primer de camada de camadas relativa superovulatoria
(%) cruce
129/SvJ 75 7.9 5.9 4.1 18.1 alta
A/J 65 7.6 6.3 2.9 11.9 baja
AKR/J 84 6.6 6.1 2.2 11.3 -
BALB/cJ 47 8.0 5.2 3.8 9.3 baja
C3H/HeJ 86 6.7 5.7 2.9 14.2 baja
C3H/HeOuJ 99 5.9 6.4 3.7 23.4 -
C57BL/6J 84 6.8 7.0 4.0 23.5 alta
C57BL/10SnJ 67 7.7 6.3 2.8 11.8 -
CBA/CaJ 96 6.4 6.9 2.7 17.9 alta
DBA/2J 75 7.4 5.4 3.9 15.8 baja
FVB/N >90 - 9.5 4.8 41.0 moderada
SJL/J 72 7.4 6.0 3.1 13.4 alta
Qu es una cepa endogmica?

Definida como una que ha sido mantenida por

ms de 20 generaciones de cruces hermano-
hermana y es escencialmente homocigota en
todos los loci genticos, excepto por mutaciones
que aparecen espontnemante

Por ello, estas cepas son genticamente

idnticas en todos los aspectos excepto en el
locus de inters. Utiles para estudiar cncer,
herencia de rasgos visibles, histocompatibilidad,
etc.
 Obteniendo lneas inbred

1. Cruce externo para obtener F1

2. F1 x F1 intercruce hermano/hermana
3. F2 x F2 elegir al azar F2s, etc....
4. F19 x F19 definida como inbred
escencialmente homocigoto en todos sus
loci (98.7%).
Figure 3.1 Consequences of inbreeding at
the F2 generation. The first cross
illustrated is an outcross between animals
homozygous for alternative alleles at the
A locus. The F1 offspring are all
identically heterozygous A/a. An
intercross between two F1 animals will
produce an F2 generation with three
possible genotypes havingthe
probabilities shown. The final box
indicates the different combinations of F2
by F2 matings that are possible and the
probabilities associated with each one.
The two mating combinations that cause
fixation for one allele are circled

http://www.informatics.
jax.org/silver/frames/fra
me3-2.shtml
Figure 3.2 Consequences of inbreeding up to 20 generations. This illustration of inbreeding is based
on the same simplifying assumptions described in the legend to Figure 3.1. Points on the solid line
indicate the portion of the genome that will be homozygous in any individual animal at each
generation. Points on the dashed line indicate the portion of the genome that will be fixed
identically in the two animals chosen to generate the following generation of animals.

http://www.informatics.jax.org/silver/figures/figure3-2.shtml
 Lneas hbridas F1
Ratones inbred, aunque genticamente
uniformes son frecuentemente menos
fttiles, menosa sanos, menos resistentes a
enfermedad, etc.

Cruzar 2 cepas inbred produce hbridos F1

Son genticamente idnticos unos con

otros, pero son ms saludables en
comparacin con las cepas parentales
 Cepas inbred recombinantes
Producir hbridos F1 y luego cruzar al azar en la
generacin F2 (por lo menos 20 generaciones)
Produce una serie de cepas inbred
recombinantes (RI)
Util para localizar nuevos loci que exhiben
polimorfismos entre las dos cepas parentales
por RFLP
Estas cepas han sido tiles en la identificacin
de loci que afecta la susceptibilidad a drogas,
cnceres, etc.
Caro de mantener y a veces difcil de analizar
 Ratones outbred
(no consanguneos)
Cruzamiento al azar
Son robustos, similar a hbridos F1, pero
son genticamente variables
Utiles cuando no se requiere un fenotipo
preciso y cuando potenciales modificadores
genticos no son una amenaza
Ms baratos
CD1, Swiss, Webster
 Congnico Vs. Isognico
Si una mutacin no tiene background inbred es difcil
concluir con certeza que un fenotipo especfico es debido a
esa mutacin o a partir de variacin en otros loci
La solucin es producir animales co-isognicos que son
isognicos en todos los dems loci
Una cepa congnica es aquella escencialmente co-
isognica con una cepa inbred excepto en segmentos
cromosmicos seleccionados diferencialmente
Formados por backcrossing (cruzar con una cepa de
generacin anterior) con una cepa inbred por ms de 10
generaciones mientras que se mantiene heterocigosidad
en locus selectos de inters
El segmento cromosmico de inters contendr otros
genes que no estn en el locus de inters.
Genmica del ratn

Recursos tiles

Avances actuales
Figure 2. Infographic illustration of the
hierarchy between species level genomes,
genes (functional units), the sequence variation
which defines alleles, leading to individual
genotypes, which, when expressed dictate
phenotypes. See right for details. The bottom
photo shows an obese C57BL/6J- Lepob/Lepob
mouse on the right, with a heterozygous
Lepob/Lep+ lean littermate on the left.

Reference:
http://www.informatics.jax.org/mgihome/other/home
page_IntroMouse.shtml
 Informacin genmica del ratn
Crom Tamao (kb) % secuencia Crom Tamao % Secuencia
completa (kb) completa

1 225000 10.2 12 99000 9.2

2 186000 31.6 13 98000 17.3

3 160000 12.9 14 117000 7.9

4 186000 28.6 15 89000 13.3

5 171000 11.1 16 100000 8.8

6 144000 10.9 17 105000 12.4

7 136000 7.4 18 95000 7.2

8 141000 6.1 19 66000 4.8

9 113000 7.5 X 182000 37.7

10 129000 8.3 Y 66000 1.5

11 143000 69.7 Total 2751000 17.3

 Links tiles

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/Homology/
http://www.informatics.jax.org/
http://www.informatics.jax.org/silver
http://www-genome.wi.mit.edu/mouse_rh/index.html
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/guide/mouse/
http://www.mgu.har.mrc.ac.uk/
Historia de la gentica del ratn
en pastilla

Estudios tempranos en relacin

a gentica del ratn

Los orgenes de la embriologa del ratn

Primeros intentos de gene targeting

Estudiando el genoma del ratn

Mutaciones espontneas
Mutaciones inducidas en genes conocidos
Adicin de genes exgenos/modificadores
Mutaciones tipo celular- especficas
Mutaciones temporo-especficas
Mutagnesis al azar seguida por seleccin
fenotpica
Toxinas, dieta, radiacin
Implantes tisulares, transplante
 Estudios tempranos en
gentica del ratn
Observacin visual de caractersticas externas
y comportamiento

Radiacion y mutagnesis qumica

Realizada en Harwell (U.K.) and Oak Ridge (U.S.A.) por
Carter y Russell
Pioneros incluyen: Hans Gruneberg, Nelly Dobrovolskaia-
Zavadskaia, L.C. Dunn, Dorothea Bennett y Salome
Waelsch
Lleva a importantes descubrimientos como el gen T y sus
haplotipos asociados
Revela tambin la complejidad de la gentica del ratn
 Primeros estudios de la
embriologa del ratn
Cultivo de embriones de ratn
John Hammond cultiv los primeros embriones desde 8 clulas hasta
etapa de blastocisto (1949)
Wes Whitten y John Biggers definieron las condiciones exactas
para cultivo in vitro de 1 clula - blastocisto (1971)
Ciruga de transplante y manipulacin de embriones
Perfeccionada por Anne McLaren y Beatrice Mintz (50s -60s)
Richard Gardner crea las primeras quimeras mediante
inyeccin de clulas aisladas en blastocistos del husped
(1968)
Ralph Brinster realiz los primeros experimentos inyectando
mRNA de globina en ovocitos de ratn (1980)
Davor Solter transfiri ncleos entre ovocitos y demostr la
importancia de tipificacin en mamferos (1984)
Primeros estudios en manipulacin
del genoma del ratn

Jaenisch y Mintz (1974): inyectaron DNA de SV40 en la

cavidad del blastocelo de blastocistos de ratn, elos
detectaron las secuencias virales en los tejidos somticos
de la descendencia
Jaenisch (1976): descurbi que el virus de la leucemia
murina de Moloney poda ser introducido de manera
estable en la lnea germinal por infeccin viral de
embriones de ratn preimplantacin
Smithies, Capecchi y otros (1980s): mostraron que la
inyeccin del gen HSV timidina quinasase (tk)en el ncleo
de fibroblastos cultivados llevaba a incorporacin estable
y expresin del gen en 5-20% de las clulas
Primeros estudios en manipulacin
del genoma del ratn

Gordon (1980): demostr la primera introduccin de un gen

clonado en tejido somtico de ratn por inyeccin
pronuclear.
Seguido por otros grupos que demostraron transmisin a
lnea germinal de los genes clonados (Ruddle, Constantini,
Brinster, etc)
Evans y Kaufman (1981): derivaron las primeras clulas ES
Bradley (1984): demonstr que ellas podan contribuir a
muchos tejidos
Robertson et al (1986): mostraron la primera manipulacin
gentica de clulas ES mediante integracin de secuencias
retrovirales en la lnea germinal.
Lneas celulares de teratocarcinoma:
clulas madres pluripotentes
 Pluripotente Vs. Totipotente

Pluripotentes: capaz de madurar o desarrollar a

lo largo de diferentes vas, no diferenciadas se
refiere a las clulas de la masa celular interna.
Ellas pueden da 3 lneas celulares: endoedrmo,
mesodermo y ectodermo
Totipotentes: la capacidad de una clula no
diferenciada para desarrollarse hacia un tipo
celular se refiere a clulas individuales de un
embrin pre-blastocisto que puede desarrollarse
hacia masa celulas interna o trofoectodermo.
 Gentica del ratn II

Manipulando el genoma del ratn:

tecnologa transgnica y konockout

Constructs bsicos

Obteniendo clulas ES