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Qu cultivos puedo procesar en

mi laboratorio?

Mdulo III

Bases para el procesamiento e


interpretacin de flujos
vaginales
CULTIVO DE
FLUJO VAGINAL

Se realiza para determinar la causa de


vaginitis, dolor plvico, flujo vaginal inusual
u otros signos de infeccin.
Tambin se usa para la deteccin de
enfermedades
de transmisin sexual.
Toma de muestra

9 Colocar el espculo sin lubricar.

9 Tomar secrecin con hisopo estril y realizar suspensin


en tubo con solucin fisiolgica estril.

9 Tomar nuevamente muestra y colocar el hisopo en un tubo


con medio de transporte Stuart.

9 Tomar nuevamente muestra y hacer un extendido en un


portaobjetos.
Toma de muestra
Condiciones del paciente

9 Abstinencia sexual de 48 hs.

9 72 horas sin antibitico.

9 No estar menstruando.

9 Una semana sin vulos vaginales ni cremas.

9 No realizar higiene profunda.


Toma de muestra
En nias y mujeres vrgenes
puede tomarse la muestra
introduciendo directamente el
hisopo a travs del orificio
himeneal sin espculo.
Toma de muestra

espculo

En mujeres

En nias
Transporte y conservacin
1) Solucin fisiolgica:
9 para anlisis micolgico si no se puede procesar
inmediatamente puede conservarse hasta 2 horas
en la heladera.

9para anlisis parasitolgico si no se puede procesar


inmediatamente puede conservarse a 37 C no ms
de una hora.

2) Medio de transporte Stuart:


9 se conserva a temperatura ambiente
Procesamiento
Primer da:
Solucin fisiolgica: ensayos bioqumicos y observacin en
fresco.
Coloracin de Gram .
Siembra.

Segundo da:
Observacin macro y micromorfolgica
Largar Pruebas Bioqumicas

Tercer da:
Lectura de Pruebas Bioqumicas
Informe de Resultados
Procesamiento : Primer da.
Solucin fisiolgica
Ensayos bioqumicos:

Toma de ph: lo correcto sera tomarlo sobre el espculo.


En solucin fisiolgica tiende a neutro.

Test de las aminas: colocar una gota de la solucin


fisiolgica y agregar una gota de K(OH) al 10%. Oler de
inmediato. Tiene olor a pescado.
Procesamiento : Primer da.
Solucin fisiolgica
Observacin en fresco:
Se coloca una gota entre cubre y portaobjeto. Observar con
objetivo de 40 x y ocular de 10 x e informar en forma semi-
cuantitativa:

9 Presencia de Trichomonas.
9 Presencia de formas levaduriformes o seudomicelio.
9 Leucocitos.
9 Clulas epiteliales.
Procesamiento : Primer da.
Solucin fisiolgica

Observacin en fresco:

Presencia de Trichomonas.
Procesamiento : Primer da.
Solucin fisiolgica

Observacin en fresco:

Presencia de formas
levaduriformes o seudomicelio
Procesamiento : Primer da.
Coloracin de Gram

Observar con objetivo de 100 x y ocular de 10 x. Informar


en forma semicuantitativa:

9 Leucocitos.
9 Clulas gua.
9 Grmenes: morfologa y tincin.
Procesamiento : Primer da.
Coloracin de Gram

Bacilos gram positivos:

Lactobacillus spp.
Procesamiento : Primer da.
Coloracin de Gram
Cocobacilos gram negativos:

Gardnerella vaginalis
Procesamiento : Primer da.
Coloracin de Gram
Diplococos gram negativos:

Neisseria gonorrhoeae
Procesamiento : Primer da.
Coloracin de Gram

Cocos gram positivos en cadena:


Streptococcus spp.
Enterococcus spp.
Procesamiento : Primer da.
Coloracin de Gram
Levaduras:

Candida spp
Procesamiento : Primer da.
Coloracin de Gram

En nias prepberes:

Haemophilus spp
Cocobacilos gram negativos

Corynebacterium spp
Cocobacilos gram positivos
Procesamiento : Primer da
Siembra

A partir del medio de transporte Stuart sembrar en agar


sangre y agar chocolate tratando de aislar.

Colocar en atmsfera de CO2 (lata) e incubar a 37C


durante 48 hs.
Procesamiento : Primer da
Siembra
9 Frotar el hisopo en un extremo de la placa hacindolo
girar para descargar toda la muestra.

9 Extender el inculo inicial con el ansa sobre la descarga.

9 Con el ansa extender el inculo sobre otro segmento sin


tocar el anterior.

9 Repetir el paso anterior.

9 Hacer una ltima estra abierta.


Procesamiento : segundo da
Observacin de macromorfologa

9 Realizar visualizacin macroscpica de las placas en las


que se produjo desarrollo bacteriano.

9 Si no hay desarrollo claro incubar 24 horas ms a 37C


en atmsfera de CO2.
Procesamiento : segundo da
Observacin de macromorfologa

Lactobacillus spp.
Procesamiento : segundo da
Observacin de macromorfologa

Gardnerella vaginalis
Procesamiento : segundo da
Observacin de macromorfologa

Neisseria gonorrhoeae
Procesamiento : segundo da
Observacin de macromorfologa

Streptococcus agalactiae
Procesamiento : segundo da
Observacin de macromorfologa

Corynebacterium spp. Haemophilus spp.


Procesamiento : segundo da
Observacin de macromorfologa

Candida spp
Procesamiento : segundo da
Observacin de micromorfologa
Se realiza coloracin de Gram de las colonias.

Lactobacillus spp Gardnerella vaginalis Neisseria gonorrhoeae


Procesamiento : segundo da
Observacin de micromorfologa

Streptococcus agalactiae Corynebacterium spp. Haemophilus spp.


Procesamiento : segundo da
Largar pruebas bioqumicas

Lactobacillus spp:
Catalasa: negativa

Gardnerella vaginalis:
Catalasa: negativa
Oxidasa : negativa
Inhibicin por polietanol sulfonato de sodio al 5%
Procesamiento : segundo da
Largar pruebas bioqumicas
Neisseria gonorrhoeae:
Catalasa: positiva
Oxidasa: positiva
Glucosa
Maltosa
Sacarosa
Lactosa

Streptococcus agalactiae:
Catalasa: negativa
Hipurato
CAMP
Procesamiento : segundo da
Largar pruebas bioqumicas

Corynebacterium spp:
Catalasa: positiva
Nitrato
Urea

Haemophilus spp:
Catalasa: positiva
Prueba de satelitismo
Procesamiento : segundo da
Largar pruebas bioqumicas

Candida spp:

Plasma
Agar harina de maz
Procesamiento : tercer da
Leer pruebas bioqumicas
Gardnerella vaginalis:
Inhibicin por polietanol sulfonato de sodio al 5%

Se considera positiva cuando el halo de inhibicin es


igual o mayor a 12 mm.
Procesamiento : tercer da
Leer pruebas bioqumicas

Neisseria gonorrhoeae:

azcar resultado

Glucosa Positivo
Maltosa Negativo
Sacarosa Negativo
Lactosa Negativo
Procesamiento : tercer da
Leer pruebas bioqumicas
Streptococcus agalactiae:

Hipurato: positivo

CAMP: positivo
Procesamiento : tercer da
Leer pruebas bioqumicas

Haemophilus spp:

Prueba de satelitismo positiva


Procesamiento : tercer da
Leer pruebas bioqumicas
Candida spp:
Plasma : presencia de tubos germinativos es Candida albicans.

Agar harina de maz: clamidoconidias terminales es Candida


albicans.
Bsqueda de Streptococcus agalactiae
en embarazadas
Se recomienda la identificacin de
gestantes portadoras de
Streptococcus agalactiae mediante cultivo de
muestra de exudado
vaginorrectal realizado en las 35 37
semanas de gestacin
y la administracin de profilaxis
antibitica
intraparto a todas las gestantes
colonizadas.
Bsqueda de Streptococcus agalactiae
en embarazadas
A quin?: A todas las embarazadas.
Cundo?: entre las 35 y 37 semanas de gestacin.
De dnde?: tercio externo de la vagina y recto.
Con qu?: dos hisopos estriles.
Transporte?: en el da en medio de transporte Stuart.
Conservacin hasta procesamiento?: hasta 24 hs. en heladera.
Bsqueda de Streptococcus agalactiae
en embarazadas

El cultivo de las muestras


vaginal y anal
en forma simultnea aumenta la
deteccin de
Streptococcus agalactiae en un
25% respecto del cultivo de la
muestra vaginal sola.
Bsqueda de Streptococcus agalactiae
en embarazadas
Da 1: las muestras tomadas en los hisopos se siembran en
un caldo selectivo Todd Hewitt para aumentar la
recuperacin. El caldo una vez inoculado se incuba 24 hs. a
37C.

Da 2: se subcultiva el caldo en agar sangre. Incubar la


placa a 37C durante 24 hs. en atmsfera de CO2.

Da 3: observar las placas de cultivo en busca


de colonias hemolticas . Largar pruebas
de identificacin.
Bsqueda de Streptococcus agalactiae
en embarazadas
El caldo Todd Hewitt , o bien la muestra , pueden
cultivarse en medio Granada o en medios cromognicos
especficos.

En el medio Granada las colonias anaranjadas se identifican


directamente como Streptococcus agalactiae. En los medios
cromognicos las colonias que den la coloracin indicada
(depende del fabricante) se identifican como Streptococcus
agalactiae.
Bsqueda de Streptococcus agalactiae
en embarazadas

agar CHROM B
(Biomrieux)

Agar Granada
Informe de resultados
Cultivo de flujo vaginal
Examen bacteriolgico:
Examen directo en fresco
Examen directo por coloracin de Gram
Cultivo e identificacin
Examen micolgico:
Examen directo en fresco
Cultivo e identificacin
Examen parasitolgico:
Examen directo en fresco
Informe de resultados

Bsqueda de S. agalatiae en flujo vaginal e hisopado anal

Se/No se obtuvo desarrollo de Streptococcus agalactiae


MuchasGracias.NosvemosenelmduloIV.