Você está na página 1de 874

Traduo

Cludio M. Rocha-de-Souza
Pesquisador visitante do Instituto de Tecnologia de Imunobiolgicos Bio-Manguinhos - FIOCRUZ.
Doutor em Microbiologia Mdica pela Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ).

Reviso tcnica desta edio


Jos Procpio Moreno Senna
Pesquisador da vice-diretoria de desenvolvimento tecnolgico do Instituto de Tecnologia de Imunobiolgicos Bio-Manguinhos - FIOCRUZ.
Professor da disciplina de Bacteriologia do Mestrado Profissional em Tecnologia de Imunobiolgicos Bio-Manguinhos - FIOCRUZ.
Doutor em Biologia Celular e Molecular pela Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS).

M626 Microbiologia mdica de Jawetz, Melnick e Adelberg [recurso


eletrnico] / Geo. F. Brooks ... [et al.] ; [traduo: Cludio M.
Rocha-de-Souza ; reviso tcnica: Jos Procpio Moreno Senna].
- 26. ed. - Dados eletrnicos. - Porto Alegre : AMGH, 2014.
Editado tambm como livro impresso em 2014.
ISBN 978-85-8055-335-2
1. Microbiologia. I. Brooks, Geo. F.
CDU 579
Catalogao na publicao: Ana Paula M. Magnus - CRBl0/2052
Um livro mdico LANGE

Geo. F. Brooks, MD Stephen A. Morse, PhD


Professor of Laboratory Medicine and Associate Director for Environmental Microbiology
Microbiology and lmmunology Division ofFoodborne, Waterborne,
Chief, Microbiology Section and Environmental Diseases
Clinica/ Laboratories National Center for Emerging and Zoonotic
University of California, San Francisco, California lnfectious Diseases
Centers for Disease Control and Prevention
Karen C. Carroll, MD Atlanta, Georgia
Professor of Pathology
The Johns Hopkins University School ofMedicine Timothy A. Mietzner, PhD
Director, Division Medical Microbiology Associate Professor
The Johns Hopkins Hospital, Baltimore, Maryland Department ofMicrobiology and Molecular Genetics
University of Pittsburgh School ofMedicine, Pittsburgh
Janet S. Butel, PhD AdjunctAssociate Professor ofMicrobiology
Distinguished Service Professor Arizona School of Dentistry and Oral Health
Chair, Department ofMolecular Virology and Microbiology Mesa, Arizona
Baylor College ofMedicine, Houston, Texas


e Jawetz, Me nic e erg

26 Edio

Verso impressa
desta obra: 2014

Me
Graw
Hill
Education

AMGH Editora Ltda.


2014
Obra originalmente publicada sob o ttulo Jawetz, Melnick & Adelberg's medical microbiology, 26th edition
ISBN 0071790314 I 9780071790314

Original edition copyright 2013, The McGraw-Hill Global Education Holdings, LLC., NewYork, NewYork 10020.
Ali rights reserved.

Portuguese translation copyright 2014, AMGH Editora Ltda., a Grupo A Educao S.A. company.
Ali rights reserved.

Gerente editorial: Letcia Bispo de Lima

Colaboraram nesta edio


Editor: Alberto Schwanke
Assistente editorial: Mirela Favaretto
Preparao de originais: Ndia da Luz Lopes
Leitura final: Carla Rosane Romanelli
Arte sobre capa original: Estdio Castellani
Editorao eletrnica: Estdio Castellani

Nota
Assim como a medicina, a microbiologia uma cincia em constante evoluo. A medida que novas pesquisas e a
prpria experincia clnica ampliam o nosso conhecimento, so necessrias modificaes na teraputica, onde tambm
se insere o uso de medicamentos. Os autores desta obra consultaram as fontes consideradas confiveis, num esforo
para oferecer informaes completas e, geralmente, de acordo com os padres aceitos poca da publicao. Entretanto,
tendo em vista a possibilidade de falha humana ou de alteraes nas cincias mdicas, os leitores devem confirmar estas
informaes com outras fontes. Por exemplo, e em particular, os leitores so aconselhados a conferir a bula completa
de qualquer medicamento que pretendam administrar, para se certificar de que a informao contida neste livro est
correta e de que no houve alterao na dose recomendada nem nas precaues e contraindicaes para o seu uso.
Essa recomendao particularmente importante em relao a medicamentos introduzidos recentemente no mercado
farmacutico ou raramente utilizados.

Reservados todos os direitos de publicao, em lngua portuguesa,


AMGH EDITORA LTDA., uma parceria entre GRUPO A EDUCAO S.A. e McGRAW-HILL EDUCATION
Av. Jernimo de Ornelas, 670 - Santana
90040-340 Porto Alegre RS
Fone: (51) 3027-7000 Fax: (51) 3027-7070

proibida a duplicao ou reproduo deste volume, no todo ou em parte, sob quaisquer


formas ou por quaisquer meios (eletrnico, mecnico, gravao, fotocpia, distribuio na Web e outros),
sem permisso expressa da Editora.

Unidade So Paulo
Av. Embaixador Macedo Soares, 10.735 Pavilho 5
- - Cond. Espace Center
Vila Anastcio 05095-035 So Paulo SP
Fone: (11) 3665-1100 Fax: (l l) 3667-1333

SAC 0800 703-3444 - www .grupoa.com.br


, .

re ac10

Esta 26 edio de Microbiologia mdica de Jawetz, Melnick Tambm nova nesta edio a contribuio de Barbara
e Adelberg permanece fiel aos objetivos da 1 edio, publicada Detrick, PhD, Professor, Division of Clinical Immunology,
em 1954, de "oferecer uma apresentao sucinta, precisa e atua Department of Pathology, Johns Hopkins University School
lizada dos aspectos da microbiologia mdica particularmente of Medicine. O conhecimento da Dra. Detrick em imunologia
relevantes s reas de infeces clnicas e quimioterapi'. Todos clnica e no papel das citocinas na sade e na doena ser de
os captulos foram atualizados para refletir a abrangncia do imenso valor a esta e a futuras edies.
conhecimento mdico proporcionada pelos mecanismos mo Esperamos que as mudanas desta edio sejam teis aos
leculares, pelos avanos em nossa compreenso sobre a patog estudantes de microbiologia.
nese microbiana e pela descoberta de novos patgenos. Entre
as novidades, destacam-se: Os autores

Conceitos-chave ao longo dos captulos.


Novas questes de reviso.
Resumos ao fmal de cada captulo.
Novas fotografias e microfotografias coloridas.
1O Microbiota normal humana 165

11 Bacilos gram-positivos formadores


de esporos: espcies Bacillus e
Clostridium 7 75
Stephen A. Morse, PhD e Timothy A. Meitzner, PhD

12 Bacilos gram-positivos aerbios no


1 A cincia da microbiologia 1
formadores de esporos: Corynebacterium,
Listeria, Erysipelothrix, Actinomycetes e
2 Estrutura celular 11
patgenos relacionados 187

3 Classificao das bactrias 43


13 Estafilococos 199

4 Crescimento, sobrevida e morte dos


14
microrganismos 55 Estreptococos, enterococos e outros
gneros relacionados 209
5 Cultura de microrganismos 67
15 Bacilos entricos gram-negativos
6 Metabolismo microbiano 77 (Enterobacteriaceae) 229

7 Gentica microbiana 101 16 Pseudomonas, Acinetobacter e bactrias


gram-negativas incomuns 245

17 Vibries, Campylobacter, Helicobacter e


bactrias associadas 255

18 Haemophilus, Bordetel/a, Bruce/la e


Francisella 265
Barbara Detrick, PhD
19 Yersinia e Pasteurella 279
8 Imunologia 123

20 Neissrias 285

21 Infeces causadas por bactrias


anaerbias 295

22 Legionelas, bartonelas e patgenos

Karen C. Carrol/, MO
bacterianos incomuns 305

9 Patognese da infeco bacteriana 149 23 Micobactrias 313


VIII Sumrio

24 Espiroquetas e outros microrganismos 41 Coronavrus 613


espiralados 327
42 Raiva, infeces por vrus lentos e doenas
25 Micoplasmas e bactrias com paredes causadas por prons 619
celulares defeituosas 341
43 Vrus de cnceres humanos 633
26 Riqutsias e gneros relacionados 349
44 Aids e lentivrus 653
27 Chlamydia spp. 359

28 Quimioterapia antimicrobiana 371

Thomas G. Mitchel/, PhD

45 Micologia mdica 671


Jane Butel, PhD

29 Propriedades gerais dos vrus 407

30 Patognese e controle das doenas virais 431

31 Parvovrus 451
Judy A. Sakanari, PhD e
32 Adenovrus 457 James H. McKerrow, MO, PhD

33 Herpes-vrus 467 46 Parasitologia mdica 715

34 Poxvrus 493

35 Vrus da hepatite 507 S E O Diagnstico em


microbiologia mdica e
36 Picornavrus (grupos dos enterovrus e
rinovrus) 527
VII correlao clnica 753

Karen C. Carrol/, MO
37 Reovrus, rotavrus e calicivrus 543
47 Princpios de microbiologia mdica
38 Doenas virais transmitidas por artrpodes e diagnstica 753
roedores 553
48 Casos e correlaes clnicas 785
39 Ortomixovrus (vrus influenza) 577

40 Paramixovrus e vrus da rubola 591 ndice 823


C A PT U L O

A cincia da microbiologia

INTRODUO observados a olho nu. Quanto forma e funo, em se tratan


do de propriedades bioqumicas ou de mecanismos genticos,
A microbiologia o estudo dos microrganismos. Um grande a anlise dos microrganismos transporta-nos at os limites da
e diverso grupo de organismos microscpicos que existem em compreenso biolgica. Assim, a necessidade de originalidade
clulas isoladas ou em aglomerados, o qual tambm inclui os - uma prova do mrito de uma hiptese cientfica - pode
vrus, que so microscpicos mas no so clulas. Os microrga ser totalmente satisfeita pela microbiologia. Para ser til, uma
nismos causam enorme impacto em toda a vida, bem como na hiptese deve fornecer elementos bsicos para uma generali
constituio fsica e qumica de nosso planeta, e so respons zao, e a ampla diversidade microbiana nos fornece um ver
veis pelo transporte dos elementos qumicos essenciais vida, dadeiro palco em que esse desafio constante.
como o carbono, nitrognio, enxofre, hidrognio e oxignio, A previso, a consequncia prtica da cincia, o produto
alm da fotossntese, realizada por microrganismos diferentes resultante de uma combinao de tcnica e teoria. A bioqumi
das plantas verdes. Alm disso, existem 100 milhes de ve ca, a biologia molecular e a gentica fornecem as ferramentas
zes mais bactrias nos oceanos (13 x 1028) do que estrelas no necessrias para a anlise dos microrganismos. A microbio
universo. A taxa de infeces virais nos oceanos de cerca de logia tem por funo ampliar os horizontes dessas disciplinas
1 x 1023 por segundo, essas infeces removem entre 20 a 40% cientficas. Um bilogo pode descrever tal tipo de troca co
de todas as clulas bacterianas a cada dia. Estima-se que exis mo mutualismo, ou seja, que tem a capacidade de favorecer
tam 5 x 1030 clulas microbianas na Terra; excluindo-se a ce todas as partes contribuintes. Os lquens so um exemplo de
lulose, essas clulas constituem cerca de 90% da biomassa da mutualismo microbiano; consistem em um fungo e um parcei
biosfera. Os seres humanos tambm tm ntima relao com ro fototrfico, que pode ser uma alga (um eucarioto) ou uma
os microrganismos, uma vez que mais de 90% das clulas do cianobactria (um procarioto). O componente fototrpico o
nosso corpo so micrbios. As bactrias presentes no intestino produtor primrio, e o fungo atua fornecendo ao mesmo uma
humano mdio pesam aproximadamente 1 Kg, sendo que um espcie de ncora de sustentao e proteo ao ambiente. Na
adulto humano ir excretar o seu prprio peso em bactrias biologia, o mutualismo denominado simbiose, uma associa
fecais a cada ano. O nmero de genes presentes na microbiota o contnua que envolve diferentes organismos. Se a troca fun
intestinal supera em 150 vezes o contido dentro do nosso ge ciona principalmente em benefcio de apenas uma das partes, a
noma, at mesmo em nosso prprio genoma, 8% do DNA so associao descrita como parasitismo - uma relao em que
derivados de fragmentos de genomas virais. um hospedeiro propicia o benefcio primrio ao parasito. O
isolamento e a caracterizao de um parasito, como, por exem
plo, uma bactria patognica ou um vrus, com frequncia exi
PRINCPIOS BIOLGICOS ILUSTRADOS gem procedimentos laboratoriais que mimetizem o ambiente
PELA MICROBIOLOGIA de crescimento proporcionado pelas clulas hospedeiras. Exi
gncia que s vezes um grande desafio para os pesquisadores.
Em nenhuma outra forma, a diversidade biolgica mostra-se Os termos "mutualismo", "simbiose" e "parasitismo" es
to notvel quanto nos microrganismos, seres no diretamente to relacionados com a cincia da ecologia, e os princpios da
2 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

biologia ambiental esto implcitos na microbiologia. Os mi duplicao. O agente delta, tambm conhecido como vrus da
crorganismos so produtos da evoluo, a consequncia biol hepatite D, demasiado pequeno para codificar mesmo uma
gica da seleo natural que opera sobre uma ampla variedade nica protena do capsdeo, e precisa do auxlio do vrus da
de organismos geneticamente diversos. Convm no esquecer hepatite B para sua transmisso. Os vrus so conhecidos por
a complexidade da histria natural antes de formular generali infectarem ampla variedade de hospedeiros vegetais e animais,
zaes acerca dos microrganismos, que constituem o conjunto bem como protistas, fungos e bactrias. Entretanto, a maioria
mais heterogneo de todos os seres vivos. dos vrus capaz de infectar tipos especficos de clula e so
Existe uma importante diviso biolgica que distingue os mente uma espcie de hospedeiro.
eucariotos, organismos que possuem um ncleo delimitado por Alguns vrus so grandes e complexos. Por exemplo, o Mi
membrana, dos procariotos, organismos cujo DNA no est fisi mivirus (um vrus de DNA), que infecta a Acanthamoeba (uma
camente separado do citoplasma. Como descrito neste captulo, ameba de vida livre encontrada no solo) apresenta um dimetro
bem como no Captulo 2, outras diferenas importantes podem de 400 a 500 nm e um genoma que codifica 979 protenas, in
ser citadas entre os eucariotos e os procariotos. Por exemplo, os cluindo as aminoacil tRNA sintetases (aaTRS), nunca encon
eucariotos distinguem-se pelo seu tamanho relativamente gran tradas fora de organismos celulares, como tambm enzimas
de, bem como pela presena de organelas especializadas e deli que participam na biossntese de polissacardeos. Um vrus
mitadas por membrana, como as mitocndrias. marinho ainda maior foi recentemente descoberto (megav
Conforme descreveremos adiante em mais detalhes, os mi rus); seu genoma ( 1.259,197-pb) codifica para 1.120 protenas
crorganismos eucariticos - ou, em termos filogenticos, os putativas, sendo assim maior do que os presentes em algumas
Eucarya - so unificados por sua estrutura celular distinta e por bactrias (Quadro 7.1). Devido ao seu grande tamanho, esses
sua histria filogentica. Entre esses grupos de microrganismos vrus podem assemelhar-se a bactrias quando observados em
esto as algas, os protozorios, os fungos e os mixomicetos. preparaes de colorao para microscopia ptica. Entretanto,
no realizam diviso celular ou possuem ribossomos. Diversas
doenas transmissveis em plantas so causadas por viroides
VRUS - pequenas molculas de RNA circular de filamento nico e
covalentemente fechadas que se apresentam como estruturas
As propriedades singulares dos vrus os distinguem das outras semelhantes a bastonetes. Esses viroides no possuem caps
formas de vida. Os vrus no possuem muitos dos atributos das deos. Seu tamanho varia de 246 a 375 nucleotdeos de extenso.
clulas, o que inclui a capacidade de se replicar. Somente quan A forma extracelular de um viroide RNA nu - no existe
do infecta uma clula que um vrus adquire o atributo-chave capsdeo de nenhum tipo. A molcula de RNA no contm ge
de um sistema vivo a reproduo. Os vrus so conhecidos por nes que codificam protenas, e, portanto, o viroide totalmente
infectarem todas as clulas, inclusive as clulas microbianas. dependente das funes do hospedeiro para sua replicao. O
Recentemente, foi descoberto que vrus demominados virfa RNA viroide replicado pela RNA polimerase dependente do
gos tm a capacidade de infectar outros vrus. As interaes DNA da planta hospedeira; a preferncia por essa enzima pode
dos vrus com o hospedeiro tendem a ser altamente especficas, contribuir para a patogenicidade dos viroides.
e a variedade biolgica dos vrus existentes reflete a diversidade Constatou-se que as molculas de RNA dos viroides contm
das clulas hospedeiras potenciais. A maior diversidade dos v sequncias de bases repetidas, invertidas em suas extremidades
rus exibida pela ampla variedade de estratgias que eles usam terminais 3' e 5', uma caracterstica dos elementos transpon
para se replicar e sobreviver. veis ( Cap. 7) e de retrovrus. Por conseguinte, provvel que
As partculas virais so geralmente pequenas (p. ex., ade tenham evoludo a partir dos elementos transponveis ou re
novrus possui 90 nm) e consistem em uma molcula de cido trovrus por meio da deleo de sequncias internas.
nucleico, DNA ou RNA, envolta por uma camada de protena As propriedades gerais dos vrus de animais patognicos
ou capsdeo (s vezes revestido por um invlucro de lipdeos, para os seres humanos so descritas no Captulo 29. Os vrus
protenas e carboidratos). As protenas - com frequncia gli bacterianos so descritos no Captulo 7.
coprotenas - encontradas no capsdeo determinam a espe
cificidade da interao entre o vrus e a clula hospedeira. O
capsdeo protege o cido nucleico e facilita a fixao do vrus, PRONS
bem como sua penetrao na clula hospedeira. No interior
da clula, o cido nucleico viral direciona o mecanismo enzi Vrias descobertas notveis, feitas nas ltimas trs dcadas,
mtico do hospedeiro para desempenhar funes associadas levaram caracterizao molecular e gentica do agente trans
replicao do vrus. Em alguns casos, a informao gentica missvel responsvel pelo scrapie (prurido lombar dos car
do vrus pode ser incorporada em forma de DNA dentro de neiros), uma doena degenerativa do sistema nervoso central
um cromossomo do hospedeiro. Em outras circunstncias, a dos ovinos. Os estudos realizados identificaram uma protena
informao gentica viral pode servir de base para a produo especfica do scrapie em preparaes de crebros de carneiros
celular e liberao de cpias do vrus, processo que requer a re infectados, que capaz de reproduzir os sintomas da doena
plicao do cido nucleico viral e produo de protenas virais em carneiros anteriormente no infectados (Fig. 1.1). Os esfor
especficas. A maturao consiste na organizao do cido nu os para identificao de outros componentes, como o cido
cleico e das subunidades proteicas recm-sintetizadas em par nucleico, no tiveram sucesso. Para distinguir esse agente dos
tculas virais maduras que, em seguida, so liberadas no meio vrus e viroides, foi introduzido o termo pron para ressaltar
extracelular. Alguns vrus de tamanho muito pequeno neces sua natureza proteincea e infecciosa. A forma celular da pro
sitam do auxlio de outro vrus na clula hospedeira para sua tena pron (PrPc) codificada pelo DNA cromossmico do
CAPTULO 1 A cincia da microbiologia 3

Tanto a protena pron normal (PN) quanto a


protena pron anormal (PP) esto presentes.
'
'

'
'
PP '
'
'

d
'
'
'
'
'
'
'
'
"

''
'

'
'
'
'

PN '
'

'

!
'

.
'
'
'

.....
Etapa 1 A protena pron
anormal interage com a protena n
"' I
pron normal.

,
,
1
1
I
1
,
I
1
1
I
1
1
I
1
1
I

!
,
1

Etapa 2 A protena pron normal


I
1
1

() >
convertida em protena pron I
,
1
anormal. I
PP ,
1
,
1 - Neurnio
1
I
,
1
1

H
I
1

<l(j V'
1

50m 1
1

PN rtida 1

!
I
FIGURA 1.1 Pron. Prons isolados do crebro de um hamster infecta 1

Etapas 3 e 4 As protenas pron


do por scrapie. Esta doena neurodegenerativa causada por um pron.
anormais continuam a interagir com
(Reproduzida, com autorizao, de Stanley B. Prusiner.) as protenas
PP original pron normais
\ at que elas
hospedeiro. A PrPc uma sialoglicoprotena com massa mole convertam todas as
protenas normais em
cular (MM) de 33.000 a 35.000 daltons e alto contedo de uma protenas anormais.
estrutura secundria a-helicoidal sensvel a proteases e sol 1
1
1

vel em detergente. expressa sobre a superfcie dos neurnios PN convertida


1
1
1

1
por meio de uma ncora de glicosilfosfatidil inositol tanto em 1
1

1
crebros infectados quanto em crebros no infectados. Uma 1
1

1
1
mudana conformacional ocorre na protena pron, alterando 1
1
1
sua forma PrPc normal ou celular para a conformao associa ,.

da doena, PrP5c (Fig. 1.2). Quando a PrP5c est presente em


um indivduo (devido converso conformacional espontnea
ou infeco), capaz de recrutar PrPc e convert-lo isofor Protenas pron anormais
ma associada doena. Assim, os prons replicam utilizando o
prprio substrato PrPc que est presente no hospedeiro. FIGURA 1.2 Mecanismo proposto pelo qual os prons se replicam. As
Existem outras doenas importantes causadas por prons protenas pron normais e anormais diferem entre si por sua estrutura
(Quadro 1.1 e Cap. 42). O kuru, a doena de Creutzfeldt-Jakob terciria. (Reproduzida, com autorizao, de Nester EW, Anderson DG,
(DCJ), a doena de Gerstmann-Strussler-Scheinker e a insnia Roberts CE, Nester MT (editors): Microbiology: A Human Perspective, 6th
familiar fatal acometem os seres humanos. A encefalopatia es ed. McGraw-Hill, 2009, p. 342.)
pongiforme bovina, acredita-se que seja causada pela ingesto
de raes e farinhas de ossos preparadas com sobras de carneiros
abatidos, foi a responsvel pela morte de mais de 184.000 cabeas PROCARIOTOS
de gado bovino na Gr-Bretanha desde sua descoberta em 1985.
Uma nova variante da DCJ (vDCJ) foi associada ingesto de As principais caractersticas que diferenciam os procariotos
carne bovina infectada por pron no Reino Unido e na Frana. consistem em seu tamanho relativamente pequeno, em geral da
Uma caracterstica comum a todas essas doenas a converso ordem de 1 m de dimetro, e na ausncia de membrana nu
de uma sialoprotena codificada pelo hospedeiro em uma forma clear. O DNA de quase todas as bactrias um crculo de cerca
resistente a protease como consequncia da infeco. de 1 mm de extenso, representando o cromossomo procario
As doenas humanas causadas por prons so singulares, to. A maioria dos procariotos possui um nico cromossomo.
uma vez que se manifestam em forma de doenas espordicas, O DNA cromossmico tem de se dobrar mais de 1.000 vezes
genticas e infecciosas. O estudo da biologia dos prons constitui para ficar contido dentro da membrana da clula procaritica.
uma rea importante da investigao biomdica em desenvolvi Evidncias substanciais sugerem a possibilidade de tais dobras
mento, e ainda h muito conhecimento a ser adquirido. serem ordenadas, permitindo uma proximidade de regies es
As caractersticas que distinguem os vrus e prons do mun pecficas do DNA. A regio especializada da clula que con
do microbiano esto apresentadas no Quadro 1.2. tm DNA denominada nucleoide, podendo ser visualizada
4 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

QUADRO 1.1 Doenas causadas por pron comuns a seres humanos e a animais

Tipo Nome Etiologia

Doenas por pron no homem

Aquisio Doena variante de Creutzfeldt-Jakob Associada ingesto ou inoculao de material infectado por pron
Kuru
Doena iatrognica de Creutzfeldt-Jakobb
Espordica Doena de Creutzfeldt-Jakob Fonte de infeco desconhecida
Familiar Gerstmann-Straussler-Scheinker Associada a mutaes especficas dentro do gene que codifica a PrP
Insnia familiar fatal
Doena de Creutzfeldt-Jakob
Doenas por pron em animais

Gado Encefalopatia espongiforme bovina Exposio a carnes e ossos (rao) contaminados por pron
Carneiro Scrapie Ingesto de material contaminado por scrapie
Veado, alce Doena degenerativa crnica Ingesto de material contaminado por pron
Marta Encefalopatia transmissvel das martas Fonte de infeco desconhecida
Gatos Encefalite espongiforme felina Exposio a carnes e ossos (rao) contaminados por pron

Associadas exposio a materiais contaminados por encefalopatia espongiforme bovina (EEB).

bAssociada a materiais biolgicos contaminados por pron, tais como enxertos de dura-mter, transplante de crnea, hormnio do crescimento humano obtido de cadveres
ou instrumentos cirrgicos contaminados por pron.

PrP, protena prinica.

Reproduzido, com autorizao, da American Society for Microbiology. Priola SA: How animal prions cause disease in humans. Microbe 2008; 3(12): 568.

QUADRO 1.2 Caractersticas diferenciadoras para vrus, viroides e prons

Vrus Viroides Prons

Agentes intracelulares obrigatrios Agentes intracelulares obrigatrios Protena celular anormal

Apresentam ou DNA ou RNA revestido Consiste somente de RNA sem camada Consiste somente de protena, sem DNA
por uma camada de protena de protena ou RNA

Reproduzido, com autorizao, de Nester EW, Andreson DG, Roberts CE, Nester MT (editors): Microbio/ogy: A Human Perspective, 6th ed. McGraw-Hill, 2009, p. 13.)

por microscopia eletrnica, bem como por microscopia ptica dos procariotos extraordinariamente ampla, podendo-se de
aps o tratamento da clula para tornar o nucleoide visvel. Por duzir que o grupo dos procariotos abrange uma variedade
conseguinte, seria um erro concluir que a diferenciao subce heterognea de especialistas, cada qual adaptado a um nicho es
lular, nitidamente demarcada por membranas nos eucariotos, treitamente circunscrito.
est ausente nos procariotos. Na verdade, alguns procariotos A variedade de nichos procariticos ilustrada ao conside
formam estruturas subcelulares delimitadas por membrana, rarmos as estratgias empregadas na produo de energia me
com funes especializadas, como os cromatforos das bact tablica. A luz solar constitui a principal fonte de energia para a
rias fotossintticas (Cap. 2). vida. Alguns procariotos, como as bactrias de cor prpura, con
vertem a energia luminosa em energia metablica sem produzir
oxignio. Outros procariotos - como, por exemplo, as bact
Diversidade dos procariotos rias azul-esverdeadas (Cianobactrias) - produzem oxignio
O pequeno tamanho do cromossomo procaritico limita a quan capaz de fornecer energia por meio da respirao, na ausncia
tidade de informao gentica que ele pode conter. Dados recen de luz. Os microrganismos aerbios dependem da respirao
tes, baseados na determinao da sequncia do genoma, indicam com oxignio para obterem energia. Alguns microrganismos
que o nmero de genes dentro de um procarioto pode variar de anaerbios podem utilizar aceptores de eltrons diferentes do
468 no Mycoplasma genitalium a 7.825 no Streptomyces coeli oxignio na respirao. Muitos anaerbios realizam fermenta
color, e que muitos desses genes devem ter funes essenciais, es, em que a energia obtida mediante o rearranjo metablico
como a produo de energia, a sntese das macromolculas e a dos substratos qumicos de crescimento. A extraordinria varie
replicao celular. Qualquer procarioto transporta relativamen dade qumica dos substratos de crescimento potenciais para o
te poucos genes que possibilitam a acomodao fisiolgica do crescimento aerbio ou anaerbio reflete-se na diversidade dos
organismo a seu ambiente. A variedade de ambientes potenciais procariotos que se adaptaram sua utilizao.
CAPTULO 1 A cincia da microbiologia 5

Comunidades dos procariotos Os micoplasmas, por exemplo, so parasitas procario


tos que perderam a capacidade de formar parede celular. A
Uma estratgia til sobrevida dos especialistas consiste em adaptao desses microrganismos a seu ambiente parasitado
formar consrcios, isto , grupamentos em que as caracters resultou na incorporao de uma quantidade significativa de
ticas fisiolgicas dos diferentes organismos contribuem para colesterol no interior de suas membranas celulares. O coleste
a sobrevivncia do grupo como um todo. Se os organismos rol, no encontrado em outros procariotos, assimilado a par
existentes no interior de uma comunidade fisicamente inter tir do ambiente metablico fornecido pelo hospedeiro. A perda
conectada provm diretamente de uma nica clula, a comu de funo tambm exemplificada pelos parasitas intracelu
nidade consiste em um clone que pode conter at 108 clulas. lares obrigatrios, como as clamdias e riqutsias, bactrias
A biologia dessa comunidade difere substancialmente daquela extremamente pequenas (com 0,2 a 0,5 m de dimetro) e que
representada por uma nica clula. Por exemplo, o elevado n dependem da clula hospedeira para obter muitos metablitos
mero de clulas praticamente assegura a presena, no interior e coenzimas essenciais. Essa perda de funo reflete-se na pre
do clone, de pelo menos uma clula portadora de uma variante sena de um genoma menor, com menos genes (Quadro 7.1).
de qualquer gene no cromossomo. Assim, a variabilidade ge Os exemplos mais amplamente distribudos de simbion
ntica - a fonte do processo evolutivo denominado seleo tes bacterianos parecem os cloroplastos e as mitocndrias,
natural - garantida no interior do clone. O elevado nmero as organelas produtoras de energia dos eucariotos. Existem
de clulas no interior dos clones tambm tende a proporcionar considerveis evidncias que levam concluso de que os an
uma proteo fisiolgica para pelo menos alguns membros do cestrais dessas organelas eram endossimbiontes, procariotos
grupo. Por exemplo, os polissacardeos extracelulares podem que estabeleceram simbiose no interior da membrana celular
fornecer proteo contra agentes potencialmente letais, como do hospedeiro eucaritico ancestral. A presena de inmeras
os antibiticos ou ons de metais pesados. As grandes quanti cpias das organelas pode ter contribudo para o tamanho re
dades de polissacardeos produzidas pelo elevado nmero de lativamente grande das clulas eucariticas e sua capacidade
clulas dentro de um clone podem possibilitar que as clulas de especializao, caracterstica que se reflete na evoluo dos
em seu interior sobrevivam exposio a determinado agente organismos multicelulares diferenciados.
letal em uma concentrao capaz de matar clulas isoladas.
Muitas bactrias usam um mecanismo de comunicao in Classificao dos procariotos
tercelular denominado quorum sensing para regular a transcri
Para a compreenso de qualquer grupo de microrganismos,
o dos genes envolvidos em diversos processos fisiolgicos,
necessrio conhecer sua classificao. Um sistema de clas
como a bioluminescncia, a transferncia por conjugao de
sificao apropriado possibilita ao cientista selecionar as ca
plasmdeos e a produo de determinantes de virulncia. O
ractersticas que iro tornar possvel uma rpida e acurada
dispositivo do quorum sensing depende da produo de uma
categorizao de um organismo recm-descoberto. A catego
ou mais molculas sinalizadoras difusveis denominadas au
rizao possibilita a previso de muitos outros traos compar
toindutores ou feromnios, que permitem bactria monito
tilhados por outros membros da categoria. Em um ambiente
rar a densidade da sua prpria populao celular. Trata-se de
hospitalar, a classificao bem-sucedida de determinado mi
um exemplo de comportamento multicelular nos procariotos.
crorganismo patognico pode fornecer a rota mais direta pa
Uma caracterstica marcante dos procariotos a sua capa
ra sua eliminao. A classificao tambm pode proporcionar
cidade de trocar pequenos fragmentos de informao gentica.
uma compreenso abrangente das relaes entre diferentes or
Esta informao pode ser transportada em plasmdeos, peque
ganismos, informao capaz de assumir grande valor prtico.
nos elementos genticos especializados com capacidade de sofrer
Por exemplo, a eliminao de um microrganismo patognico
replicao dentro de pelo menos uma linhagem celular procari ser relativamente prolongada se o seu habitat estiver ocupado
tica. Em alguns casos, os plasmdeos podem ser transferidos de por uma variante no patognica.
uma clula para outra, sendo capazes de transportar conjuntos Os princpios de classificao dos procariotos so discuti
de informao gentica especializada por meio de uma popula dos no Captulo 3. No incio, preciso reconhecer que qual
o. Alguns plasmdeos exibem ampla variedade de hospedeiros, quer caracterstica de um procarioto pode servir como um
que possibilita a transferncia de conjuntos de genes a diversos possvel critrio de classificao. Entretanto, nem todos os
microrganismos. Os plasmdeos de resistncia a frmacos, que critrios so igualmente eficazes no agrupamento dos organis
podem tornar diversas bactrias resistentes ao tratamento com mos. Possuir DNA, por exemplo, no um critrio til para se
antibiticos, so objeto de preocupao especial. distinguirem os organismos, visto que todas as clulas contm
A estratgia de sobrevida de uma nica linhagem de clulas DNA. A presena de um plasmdeo com ampla variedade de
procariticas pode levar a uma variedade de interaes com hospedeiros no constitui um critrio til, uma vez que esses
outros organismos. Entre essas interaes, podem-se incluir plasmdeos podem ser encontrados em diversos hospedeiros e
relaes simbiticas ilustradas por complexas trocas nutricio no estar presentes o tempo todo. Para serem teis, os critrios
nais entre microrganismos no intestino humano. Tais trocas devem ser estruturais, fisiolgicos, bioqumicos ou genticos.
beneficiam tanto os microrganismos quanto o hospedeiro hu Os esporos - estruturas celulares especializadas que podem
mano. As interaes que envolvem parasitas podem ser dele permitir a sobrevida do organismo em ambientes extremos -
trias para o hospedeiro. A simbiose avanada, ou parasitismo, constituem critrios estruturais teis para a classificao, visto
pode levar perda de funes que no permitem o crescimen que existem subgrupos bem caracterizados de bactrias que
to do simbionte ou do parasito, independentemente de seu formam esporos. Alguns grupos de bactrias podem ser efetiva
hospedeiro. mente subdivididos com base na sua capacidade de fermentar
6 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

carboidratos especficos, critrios que podem ser ineficazes PROTISTAS


quando aplicados a outros grupos de bactrias que no tenham
qualquer capacidade fermentativa. Um teste bioqumico, a co O "ncleo verdadeiro" dos eucariotos (do grego karyon, "n
lorao de Gram, constitui um critrio eficaz de classificao, cleo") representa apenas uma de suas caractersticas diferenciais.
j que a resposta ao corante reflete diferenas fundamentais e As organelas delimitadas por membrana, os microtbulos e os
complexas na superfcie celular bacteriana, dividindo a maior microfilamentos dos eucariotos formam uma estrutura intrace
parte das bactrias em dois grupos principais. lular complexa diferente daquela encontrada nos procariotos.
Os critrios genticos vm sendo cada vez mais usados para Os agentes responsveis pela motilidade das clulas eucariti
a classificao das bactrias, e muitos deles tornaram-se possveis cas so os flagelos ou clios - estruturas complexas constitudas
em virtude do desenvolvimento de tecnologias baseadas na de de inmeros filamentos que no se assemelham aos flagelos dos
teco do DNA. Na atualidade, possvel construir sondas gen procariotos. A expresso gnica nos eucariotos ocorre por meio
ticas ou realizar ensaios de amplificao de DNA (p. ex., testes de de uma srie de eventos que levam integrao fisiolgica do
reao em cadeia da polimerase - PCR) capazes de identificar ncleo com o retculo endoplasmtico, estrutura sem equivaln
rapidamente os organismos que transportam regies genticas cia nos procariotos. Os eucariotos diferem pela organizao de
especficas com ancestral comum. A comparao de sequncias seu DNA celular em cromossomos separados por um aparelho
de DNA para alguns genes levou elucidao das relaes :fi mittico distinto durante a diviso celular.
logenticas entre os procariotos. Pode-se determinar a origem Em geral, a transferncia gentica entre os eucariotos de
de linhagens celulares ancestrais, e os microrganismos podem pende da fuso dos gametas haploides para formar uma clula
ser agrupados com base nas suas afinidades evolutivas. Essas in diploide que contm um conjunto completo de genes derivados
vestigaes levaram a algumas concluses notveis. Assim, por de cada gameta. O ciclo de vida de muitos eucariotos encontra
exemplo, a comparao de sequncias do citocromo C sugere que se quase totalmente no estado diploide, forma no encontrada
todos os eucariotos, inclusive seres humanos, provm de um de nos procariotos. A fuso dos gametas para formar uma prognie
trs diferentes grupos de bactrias fotossintticas de cor prpura. reprodutiva um evento altamente especfico que estabelece a
Tal concluso explica em parte a origem evolutiva dos eucariotos, base para a espcie eucaritica. Esse termo s pode ser aplica
mas no leva totalmente em conta o ponto de vista geralmente do metaforicamente aos procariotos, que trocam fragmentos de
aceito de que a clula eucaritica originou-se da fuso evolutiva DNA no processo de recombinao. Os agrupamentos taxon
de diferentes linhagens de clulas procariticas. micos dos eucariotos baseiam-se frequentemente em proprie
dades morfolgicas compartilhadas, e digno de nota o fato
Bactrias e arqueobactrias: as principais de muitos determinantes taxonomicamente teis serem os as
subdivises dentro de procariotos sociados reproduo. Quase todas as espcies bem-sucedidas
de eucariotos so aquelas cujas clulas esto estreitamente rela
Um grande sucesso na filogenia molecular consistiu na demons
cionadas, membros da mesma espcie, podendo recombinar-se
trao de que os procariotos so classificados em dois prin
para formar descendentes viveis. As estruturas que contribuem
cipais grupos. A maioria das pesquisas foi dirigida para um
direta ou indiretamente para o evento reprodutivo tendem a ser
grupo, o das bactrias. O outro grupo, constitudo pelas ar
altamente desenvolvidas e com modificaes menores entre es
queobactrias, tem recebido relativamente pouca ateno at
pcies estreitamente relacionadas extensamente conservadas.
o momento, em parte pelo fato de ser difcil estudar muitos
Os eucariotos microbianos - protistas - so membros
de seus representantes em laboratrio. Por exemplo, algumas
dos quatro grupos principais: algas, protozorios, fungos e mi
arqueobactrias morrem ao entrar em contato com o oxig
xomicetos. preciso ressaltar que esses agrupamentos no so
nio, enquanto outras crescem a temperaturas superiores da
necessariamente filogenticos. Os microrganismos estreita
ebulio da gua. Antes mesmo de se obterem evidncias mo
mente relacionados podem ser categorizados separadamente,
leculares, os principais subgrupos de arqueobactrias pareciam
visto que certas semelhanas bioqumicas e genticas subjacen
distintos. Os metangenos efetuam uma respirao anaerbia
que d origem ao metano; os halfilos exigem concentraes tes podem no ter sido reconhecidas.
de sal extremamente altas para o seu crescimento; e os ter
moacidfilos necessitam de temperaturas altas e acidez. Na Algas
atualidade, sabe-se que esses procariotos compartilham carac O termo "algas" foi utilizado durante muito tempo para des
tersticas bioqumicas, tais como componentes da parede ce crever todos os organismos que geram 02 como produto da
lular ou da membrana, que distinguem totalmente o grupo de fotossntese. Um importante subgrupo desses organismos - as
todos os outros organismos vivos. Uma caracterstica curiosa, bactrias azul-esverdeadas, ou cianobactrias - consiste em pro
compartilhada por arqueobactrias e eucariotos, a presena cariotos, de modo que esses microrganismos no so mais deno
de ntrons no interior dos genes. A funo dos ntrons - seg minados algas. Tal classificao reservada exclusivamente aos
mentos de DNA que interrompem o DNA informativo no in organismos eucariticos fotossintticos. Todas as algas contm
terior dos genes - ainda no foi estabelecida. O que sabemos clorofila na membrana fotossinttica de seus cloroplastos subce
que os ntrons representam uma caracterstica fundamental lulares. Muitas espcies de algas so microrganismos unicelulares.
compartilhada pelo DNA das arqueobactrias e dos eucariotos. Outras algas podem formar estruturas multicelulares extrema
Esse trao comum sugere que - assim como as mitocndrias
mente grandes. Os kelps* de algas pardas possuem, s vezes,
e os cloroplastos parecem representar derivados evolutivos das
bactrias - o ncleo dos eucariotos teria se originado de um * N. de RT. Kelps so algas grandes pertencentes classe Phaeophyta.
ancestral arqueobacteriano. Algumas espcies podem ser muito longas e formar "florestas de kelps".
CAPTULO 1 A cincia da microbiologia 7

Fungos
Os fungos so protistas no fotossintticos que crescem co
mo uma massa de filamentos ramificados e entrelaados ("hi
fas"), conhecida como miclio. O maior miclio em extenso
contnua produzido por um fungo foi encontrado no leste do
2
Ogegon (EUA) abrangendo uma rea de 2.400 acres (9,7 km ).
Embora as hifas exibam paredes transversais, tais paredes so
perfuradas, permitindo a livre passagem dos ncleos e do ci
toplasma. Por conseguinte, o microrganismo como um todo
um cencito (massa multinucleada de citoplasma contnuo)
confinado dentro de uma srie de tubos ramificados. Esses
tubos, constitudos de polissacardeos, como a quitina, so
homlogos s paredes celulares. As formas miceliais so de
nominadas bolores; alguns tipos, conhecidos como leveduras,
no formam miclio, mas so facilmente reconhecidos como
fungos pela natureza de seus processos de reproduo sexuada
e pela presena de formas de transio.
Os fungos provavelmente representam um ramo evolutivo
dos protozorios. No tm qualquer relao com os actinomi
cetos, que consistem em bactrias miceliais com as quais se as
semelham superficialmente. As principais subdivises (phyla)
FIGURA 1.3 Microscopia eletrnica de varredura (ampliada 4.000
vezes) do dinoflagelado Gymnodinium. (Reproduzida, com autorizao, dos fungos so: Chytridiomycota, Zygomycota (os zigomicetos),
de David M. Phillips/Visuals Unlimited.) Ascomycota (os ascomicetos), Basidiomycota (os basidiomice
tos) e os "deuteromicetos" (ou fungos imperfeitos).
A evoluo dos ascomicetos a partir dos ficomicetos ob
vrias centenas de metros de extenso. Muitas algas produzem servada em um grupo de transio cujos membros formam um
toxinas que so venenosas para o homem e outros animais. Os zigoto, que, em seguida, se transforma diretamente em asco.
dinoflagelados, algas unicelulares, causam proliferao de algas, Acredita-se que os basidiomicetos tenham evoludo a partir
ou a mar vermelha, nos oceanos (Fig. 1.3). As mars vermelhas dos ascomicetos. A classificao dos fungos e seu significado
causadas pelas espcies de dinoflagelados Gonyaulax so preo clnico so discutidos em detalhes no Captulo 45.
cupantes, pois este organismo produz neurotoxinas, tais como
a saxitoxina e a goniautoxina, que se acumula em mariscos
Mixomicetos
(p. ex.: moluscos, mexilhes, vieiras e ostras) que se alimentam
deste organismo. A ingesto desses mariscos pelo ser humano So microrganismos que se caracterizam pela presena, em um
resulta em sintomas de paralisia por envenenamento, que pode estgio do seu ciclo de vida, de uma massa de citoplasma mul
levar morte. tinucleada e ameboide denominada plasmdio. O plasmdio
de um mixomiceto uma estrutura anloga ao miclio de um
fungo verdadeiro. Ambos so cenocticos. No miclio, o fluxo
Protozorios citoplasmtico limita-se rede ramificada de tubos de quitina,
Os protozorios so protistas unicelulares incapazes de reali ao passo que, no plasmdio, o citoplasma pode fluir em todas as
zar fotossntese. Os protozorios mais primitivos parecem for direes. Esse fluxo faz que o plasmdio migre na direo de sua
mas flageladas que, em muitos aspectos, assemelham-se aos fonte alimentar, que frequentemente consiste em bactrias. Em
representantes das algas. Aparentemente, os ancestrais desses resposta a um sinal qumico (p. ex.: o AMP cclico 3' 5' [Cap. 7]),
protozorios eram algas que se tornaram hetertrofos - as o plasmdio, que atinge um tamanho macroscpico, diferencia
necessidades nutricionais desses organismos so supridas por se em um corpo pedunculado capaz de produzir clulas mveis,
compostos orgnicos. A adaptao a um modo heterotrfico flageladas ou ameboides. Essas clulas iniciam uma nova etapa
de vida foi s vezes acompanhada da perda dos cloroplastos, e, no ciclo de vida do mixomiceto (Fig. 1.4). Com frequncia, o
assim, as algas deram origem aos protozorios estreitamente re ciclo iniciado por fuso sexual de clulas individuais.
lacionados. Foram observados eventos semelhantes em labora O ciclo de vida dos mixomicetos ilustra um tema central
trio como resultado de mutaes ou adaptaes fisiolgicas. deste captulo: a interdependncia das formas vivas. O cresci
Os protozorios flagelados parecem ter evoludo para os ti mento dos mixomicetos depende de nutrientes fornecidos por
pos ameboides e ciliados. Formas intermedirias so conhecidas clulas bacterianas ou, em alguns casos, por clulas vegetais.
e podem apresentar flagelos em um estgio do seu ciclo de vida e A reproduo dos mixomicetos via plasmdios pode depen
pseudpodes (caractersticos das amebas) em outro estgio. Um der do reconhecimento intercelular e da fuso entre clulas da
quarto grupo importante de protozorios, os esporozorios, mesma espcie. Para uma compreenso mais completa de um
constitudo por parasitos estritos, em geral imveis; a maior par microrganismo, necessrio no apenas o conhecimento dos
te desses grupos reproduz-se sexuada ou assexuadamente, alter outros organismos com os quais ele coevoluiu como tambm
nando geraes por meio de esporos. Os protozorios parasitos uma apreciao sobre a variedade de respostas fisiolgicas ca
de seres humanos so discutidos no Captulo 46. pazes de contribuir para a sua sobrevivncia.
8 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Esporos

Corpos de frutificao
Germinao
liberando esporos


ft:..
<f
:'
.....-- '
'
'

'
'

Mixamoeba

Corpo de frutificao

---"....
"
_ ._ __
Plasmdio

A B

FIGURA 1.4 Mixomicetos. (A) Ciclo de vida de um mixomiceto acelular. (8) Corpo de frutificao de um mixomiceto acelular. (Reproduzida, com
autorizao, de Carolina Biological Supply/Phototake, lnc.)

RESUMO DO CAPTULO 3. Qual dos seguintes organismos no um protista?


(A) Bactria
Os microrganismos so um grupo grande e diversificado (B) Alga
que abrangem seres uni e pluricelulares; eles tambm in (C) Protozorio
cluem vrus, que so microscpios, porm no celulares. (D) Fungo
Um vrus consiste em uma molcula de cido nuclei (E) Mixomiceto
co (DNA ou RNA) envolvida por protenas, que formam
4. Qual dos seguintes agentes contm simultaneamente DNA e RNA?
o capsdeo. Alguns vrus podem apresentar um envelope
composto por lipdeos, protenas e carboidratos. (A) Bactria
Um pron uma protena infectante capaz de causar doen- (B) Vrus
(C) Viroide
as neurolgicas crnicas.
(D) Pron
Procariotos so divididos em bactrias e arqueobactrias.
(E) Plasmdeo
Procariotos so haploides.
Eucariotos inferiores, ou protistas, esto representados em 5. Um homem de 65 anos de idade desenvolveu demncia progres
quatro grupos principais: algas, protozorios, fungos e mi siva no decorrer de alguns meses, com ataxia e sonolncia. O
xomicetos. perfil eletroencefalogrfico mostrou paroxismos com altas vol
Eucariotos possuem membrana nuclear e so diploides. tagens e ondas lentas, sugestivos de doena de Creutzfeldt-Jakob.
Esta doena causada por qual dos seguintes agentes?
(A) Bactria
QUESTES DE REVISO (B) Vrus
(C) Viroide
1. Qual dos seguintes termos caracteriza a interao entre um
(D) Pron
fungo e uma alga em um lquen?
(E) Plasmdeo
(A) Parasitismo
(B) Simbiose 6. Qual dos seguintes microrganismos no infectado por vrus?
(C) Endossimbiose (A) Bactria
(D) Endoparasitismo (B) Protozorio
(E) Consrcio (C) Clulas humanas
(D) Vrus
2. Qual dos seguintes agentes no possui cido nucleico?
(E) Nenhuma das opes acima
(A) Bactria
(B) Vrus 7. Vrus, bactrias e protozorios so caracterizados unicamente
(C) Viroide por seus respectivos tamanhos. Verdadeiro ou falso?
(D) Pron (A) Verdadeiro
(E) Protozorio (B) Falso
CAPTULO 1 A cincia da microbiologia 9

8. Qual dos seguintes microrganismos um procarioto? REFERNCIAS


(A) Arqueobacteria
Arslan D, Legendre M, Seltzer V. et al.: Distant Mimivirus relative with
a larger genome highlights the fundamental features of Megaviri
(B) Protozorio
(C) Vrus
dae. Proe Natl Aead Sei U S A 2011;108:17486.
(D) Pron
Belay ED: Transmissible spongiform encephalopathies in humans.
(E) Fungo
Annu Rev Mierobiol 1999;53:283.
9. Quorum sensing em procariotos envolve: Colby DW, Prusiner SB: De novo generation of prion strains. Nature
(A) Comunicao intercelular Rev Mierobiol 201 1;9:771.
(B) Produo de feromnios Diener TO: Viroids and the nature of viroid diseases. Areh Virol
(C) Um exemplo de comportamento multicelular 1999;15(Suppl):203.
(D) Regulao de genes envolvidos em diversos processos fisio Fournier PE, Raoult D: Prospects for the future using genomics
lgicos and proteomics in clinicai microbiology. Annu Rev Mierobiol
(E) Todas as respostas acima 2011;65:169.
Lederberg J (editor): Eneyelopedia of Mierobiology, 4 vols. Academic
10. Vinte minutos aps a ingesto de mariscos crus, um homem de Press, 1992.
35 anos de idade apresentou parestesia facial e nas extremidades, Olsen GJ, Woese CR: The winds of (evolutionary) change: Breathing
cefaleia e ataxia. Esses sintomas so resultados de uma neuroto new life into microbiology. J Baeteriol 1994;176:1.
xina produzida por algas chamadas: Pelczar MJ Jr, Chan ECS, Krieg NR: Mierobiology: Coneepts and Appli
(A) Ameba eations. McGraw-Hill, 1993.
(B) Cianobactria Priola SA: How animal prions cause disease in humans. Mierobe 2008;
(C) Dinoflagelado 3:568.
(D) Kelp Prusiner SB: Biology and genetics of prion diseases. Annu Rev Miero
(E) Nenhuma das respostas acima biol l 994;48:655.
Reisser W (editor): Algae and Symbiosis: Plants, Animais, Pungi, Viruses,
Respostas Interaetions Explored. Biopress, 1992.
Schloss PD, Handlesman J: Status of the microbial census. Mierobiol
1. B 4. A 7. B 10. e Mol Biol Rev 2004;68:686.
Sleigh MA: Protozoa and Other Protists. Chapman & Hall, 1990.
2. D 5. D 8. A
Whitman WB, Coleman DC, Wiebe WJ: Prokaryotes: The unseen
3. A 6. E 9. E majority. Proe Natl Aead Sei U S A l998;95:6578.
C A PT U L O

Estrutura celular

INTRODUO B. Microscpio de contraste de fase


O microscpio de contraste de fase foi desenvolvido para au
Neste captulo, discutimos a estrutura bsica e a funo dos
mentar as diferenas de contraste entre as clulas e o meio ao
componentes que constituem as clulas eucariticas e as pro
redor, tornando possvel que as clulas vivas sejam vistas sem
cariticas. O captulo inicia-se com uma discusso sobre o
que precisem ser coradas; com microscpios de campo lumi
microscpio. Historicamente, foi o microscpio que primeira
noso, preciso empregar preparaes que coram e matam a
mente revelou a presena das bactrias e, mais tarde, os segre
clula. O microscpio de contraste de fase tem como vantagem
dos da estrutura celular. Hoje, continua sendo uma poderosa
o fato de que as ondas de luz passam atravs de objetos trans
ferramenta em biologia celular.
parentes, tais como as clulas, aparecendo em diferentes fases,
dependendo das propriedades dos materiais atravs dos quais
elas passam. Esse efeito ampliado por um anel especial nas
MTODOS PTICOS lentes da objetiva do microscpio de contraste de fase, o que
leva formao de imagem escura em forma de luz de fundo.
O microscpio ptico
O poder de resoluo do microscpio ptico, em condies ide C. Microscpio de campo escuro
ais, corresponde aproximadamente a metade do comprimento
O microscpio de campo escuro um microscpio ptico
de onda da luz utilizada. (O poder de resoluo refere-se a dis
no qual o sistema de iluminao foi modificado para atingir
tncia que deve separar dois pontos de luz para que sejam vis
somente os lados da amostra. Isso obtido pelo uso de um
tos como duas imagens distintas.) No caso da luz amarela, cujo
condensador especial que bloqueia tanto os raios da luz dire
comprimento de onda de 0,4 m, o menor dimetro separ
ta quanto a luz refletida para o exterior atravs de um espe
vel , portanto, de cerca de 0,2 m, ou seja, um tero da largura
lho posicionado ao lado do condensador em ngulo oblquo.
de uma clula procaritica tpica. A ampliao til no micros
Cria-se assim um "campo escuro" que contrasta com a borda
cpio a que possibilita a visualizao das menores partculas
sombreada das amostras, surgindo quando os raios oblquos
passveis de resoluo. Em geral, vrios tipos de microscpio
so refletidos a partir das bordas da amostra em direo ascen
ptico so empregados em microbiologia.
dente objetiva do microscpio. A resoluo obtida por um
microscpio de campo escuro bastante elevada. Assim, essa
A. Microscpio de campo luminoso (microscpio tcnica foi particularmente valiosa na observao de certos or
ptico comum) ganismos, como o Treponema pallidum, um espiroqueta com
menos de 0,2 m de dimetro e que no pode ser observado
O microscpio de campo luminoso o mais empregado em com um microscpio ptico convencional ou de contraste de
microbiologia de rotina, e consiste em duas sries de lentes fase (Fig. 2.lA).
(objetiva e ocular), que funcionam em conjunto na resoluo
de imagens. Estes microscpios geralmente empregam uma
objetiva com poder de aumento de 100 vezes, com uma ocular D. Microscpio de fl uorescncia
de aumento de 10 vezes, aumentando a amostra 1.000 vezes. O microscpio de fluorescncia utilizado para visualizao
Por conseguinte, as partculas com 0,2 m de dimetro so am de amostras que fluorescem, que a faculdade de absorver
pliadas at cerca de 0,2 mm, tornando-se nitidamente visveis. a luz em comprimentos de onda curtos (ultravioleta) e no
A ampliao adicional no proporciona maior resoluo dos brilhar em comprimentos de onda mais longos (luz visvel).
detalhes, e pode reduzir a rea visvel (campo). Alguns organismos fluorescem naturalmente devido presen
Com esse microscpio, as amostras so visualizadas devido a de substncias fluorescentes naturais presentes no interior
a diferenas de contraste entre elas e o meio ao redor. Muitas das clulas, tais como a clorofila. Aqueles que no apresentam
bactrias so difceis de visualizar devido perda de contraste fluorescncia natural podem ser corados com um grupo de co
com o meio. Corantes podem ser usados para corar clulas ou rantes fluorescentes, chamados fluorocromos. O microscpio
suas organelas e aumentar seu contraste de modo a tornar mais de fluorescncia amplamente utilizado em diagnsticos de
fcil a visualizao em microscopia de campo luminoso. microbiologia clnica. Por exemplo, o fluorocromo auramina O,
12 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

que d um brilho amarelo quando exposto luz ultravioleta,


fortemente absorvido pelo Mycobacterium tuberculosis, a bact
ria que causa a tuberculose. Quando o corante aplicado a uma
amostra sob suspeita de conter o M. tuberculosis e exposta luz
ultravioleta, a bactria pode ser detectada pela aparncia dos or
ganismos com um brilho amarelo contra um fundo escuro.
O principal uso da microscopia de fluorescncia na tcni
ca de diagnstico chamada tcnica do anticorpo fluorescente
(FA, fluorescent-antibody) ou imunofluorescncia. Por essa
tcnica, anticorpos especficos (p. ex., anticorpos contra a Le
gionella pneumophila) so marcados quimicamente com um
fluorocromo, como o isotiocianato de fluorescena (FITC,
fluorescein isothiocyanate). Em seguida, tais anticorpos fluo
rescentes so adicionados a uma lmina de microscpio que
contm a amostra clnica. Se a amostra contiver L. pneumophi
la, o anticorpo fluorescente se liga aos antgenos de superfcie
da bactria, produzindo fluorescncia quando exposto luz
ultravioleta (Fig. 2.lB).

E. Microscpio de interferncia diferencial

A de contraste
Os microscpios de interferncia diferencial de contraste (DIC,
differential interference contrast) utilizam um polarizador para
produzir luz polarizada. Os feixes de luz polarizada passam atra
vs de um prisma que vai gerar dois tipos distintos de feixes, os
quais passam atravs da amostra e entram nas lentes da objetiva,
onde so recombinados em um feixe simples. Devido s ligeiras
diferenas do ndice de refrao das substncias para cada feixe
que passa por elas, os feixes combinados no ficam totalmente
na mesma fase; em vez disso, criam um efeito de interferncia
que intensifica as sutis diferenas na estrutura celular. Estrutu
ras, como esporos, vacolos e grnulos, aparecem em forma tri
dimensional. A microscopia de DIC particularmente til para
a observao de clulas no coradas devido sua capacidade de
gerar imagens que revelam estruturas celulares internas, menos
B
aparentes pelas tcnicas de microscopia ptica.

O microscpio eletrnico
O alto poder de resoluo dos microscpios eletrnicos pos
sibilitou aos cientistas observar em detalhes as estruturas das
clulas procariticas e das eucariticas. A resoluo superior
do microscpio eletrnico deve-se ao fato de os eltrons terem
um comprimento de onda muito mais curto do que o dos f
tons de luz branca.
Existem dois tipos de microscpio eletrnico de uso geral:
o microscpio eletrnico de transmisso (MET), que tem
muitas caractersticas em comum com o microscpio ptico, e
o microscpio eletrnico de varredura (MEV). O MET foi o
primeiro a ser desenvolvido, e utiliza um feixe de eltrons emi
e
tido de um canho, que direcionado ou focalizado por um
FIGURA 2.1 (A) Exame positivo de microscopia de campo escuro. Os condensador eletromagntico sobre uma amostra delgada.
treponemas so reconhecveis pela sua forma espiralada caracterstica medida que os eltrons incidem na amostra, so dispersos dife
e os movimentos deliberados para a frente e para trs com rotao em
rencialmente de acordo com o nmero e a massa de tomos na
torno do eixo longitudinal. (Reproduzida, com autorizao, de Charles
Stratton/Visuals Unlimited.) (8) Fotomicrografia de fluorescncia. Bas amostra; alguns eltrons atravessam a amostra, sendo reunidos
tonetes marcados com corante fluorescente. ( Evans Roberts) (C) Mi e focalizados por uma lente objetiva eletromagntica que for
croscopia eletrnica de varredura da bactria - Staphylococcus aureus nece uma imagem da amostra ao sistema de lentes projetoras
(ampliada 32.000 vezes). Reproduzida, com autorizao, de David M. para maior ampliao. A imagem visualizada ao incidir em
Phillips/Photo Researchers, lnc.) uma tela que fluoresce com a incidncia dos eltrons, e pode
CAPTULO 2 Estrutura celular 13

ser registrada em filme fotogrfico. O MET tem uma capaci pelo movimento de uma sonda pontiaguda sobre a superf
dade de resoluo de 0,001 m para as partculas distantes. Os cie do objeto. A microscopia de varredura por tunelamento
vrus, com dimetros de 0,01 a 0,2 m, podem ser facilmente e o microscpio de fora atmica so exemplos dessa nova
observados. classe de microscpios, que possibilitam aos cientistas visua
Em geral, o MEV tem menor poder de resoluo do que lizar tomos ou molculas na superfcie de uma amostra. Por
o MET, mas particularmente til ao fornecer imagens tridi exemplo, as interaes entre as protenas de uma bactria Es
mensionais da superfcie dos materiais microscpicos. Os el cherichia coli podem ser estudadas com um microscpio de
trons so focados atravs de lentes em um ponto muito fino. fora atmica.
A interao dos eltrons com a amostra resulta na liberao
de diferentes formas de radiao (p. ex., eltrons secundrios)
da superfcie do material, que podem ser capturadas por um ESTRUTURA DA CLULA EUCARITICA
detector apropriado, ampliadas e, em seguida, apresentadas em
forma de imagem na tela de uma televiso (Fig. 2.lC).
O ncleo
Uma tcnica importante em microscopia eletrnica consis
te no uso de "sombreamento". Esta tcnica envolve a deposio O ncleo contm o genoma da clula, e delimitado por uma
de uma fina camada de metal pesado (p. ex.: platina) sobre a membrana que consiste em um par de membranas separadas
amostra, colocando-a no trajeto de um feixe de ons metlicos por um espao de espessura varivel. A membrana interna
no vcuo. O feixe direcionado obliquamente at a amostra, geralmente um saco simples, mas a membrana externa ,
de modo que esta adquire uma "sombra" na forma de uma rea em muitos casos, contnua ao retculo endoplasmtico (RE).
no revestida no lado oposto. Quando um feixe de eltrons A membrana nuclear exibe permeabilidade seletiva devido
atravessa a preparao recoberta no microscpio eletrnico e presena de poros que consistem em um complexo de diver
forma-se uma cpia positiva da imagem "negativa", obtm-se sas protenas cuja funo importar e exportar substncias
um efeito tridimensional (p. ex., Fig. 2.22). de/para dentro ou de/para fora do ncleo. Os cromossomos
Outras tcnicas importantes de microscopia eletrnica das clulas eucariticas contm macromolculas de DNA
consistem no uso de cortes ultrafinos de material embebido; lineares, dispostas em dupla hlice, visveis ao microscpio
um mtodo de congelamento-ressecamento de amostras que ptico apenas quando a clula sofre diviso, e o DNA encon
impede a deformao causada pelos procedimentos conven tra-se em uma forma altamente condensada; nas outras fases
cionais de ressecamento; e a utilizao de colorao negativa do ciclo, os cromossomos no esto condensados e apresen
com material de alta densidade de eltrons, como o cido fos tam o aspecto mostrado na Figura 2.2. As macromolculas
fotngstico ou sais de uranil (Fig. 42.1). Na ausncia desses sais de DNA da clula eucaritica esto associadas a protenas
de metais pesados, no haveria contraste suficiente para detec bsicas, denominadas histonas, que se ligam ao DNA por in
tar os detalhes da amostra. teraes inicas.
Uma estrutura frequentemente visvel no interior do n
cleo o nuclolo, uma rea rica em RNA, o local da sntese do
Microscpio de varredura confocal a laser RNA ribossmico (Fig. 2.2). As protenas ribossmicas sinte
O microscpio de varredura confocal a laser (MVCL) acopla tizadas no citoplasma so transportadas ao nuclolo e combi
uma fonte de raio laser luz do microscpio. Na microsco nam-se com o RNA ribossmico para formar as subunidades
pia de varredura confocal a laser, um feixe de laser espalhado (grande e pequena) do ribossomo eucaritico. Em seguida,
contra um espelho que o direciona atravs de um orifcio que so exportadas para o citoplasma, onde se associam para for
ajusta precisamente o plano de foco do feixe a uma camada mar um ribossomo intacto que pode funcionar na sntese das
,

vertical no interior da amostra. Pela iluminao precisa de um prote1nas.


nico plano da amostra, a intensidade de iluminao cai rapi
damente acima e abaixo do plano de foco, e a luz se perde para
outros planos de focos, minimizados. Assim, em uma amos
Estruturas citoplasmticas
tra relativamente espessa, podem-se observar vrias camadas O citoplasma das clulas eucariticas caracteriza-se pela pre
ajustando-se o plano de foco da luz a laser. sena do RE, vacolos, plastdeos autorreprodutivos e um
Certas clulas so frequentemente coradas com corantes citoesqueleto elaborado, constitudo de microtbulos, micro
fluorescentes para que se tornem mais visveis. Como alterna ftlamentos e filamentos intermedirios.
tiva, imagens com falsas cores podem ser geradas pelo ajuste do O retculo endoplasmtico (RE) uma rede de membra
microscpio de modo que diferentes camadas apresentem dife nas ligadas por canais contnuos membrana nuclear. So re
rentes coloraes. Os MVCL so equipados com um programa conhecidos dois tipos de RE: o rugoso, que contm ribossomos
de computador para agrupar imagens digitais e process-las SOS ligados, e o liso, que no os possui (Fig. 2.2). O RE rugoso
posteriormente. Assim, as imagens obtidas de diferentes cama o principal produtor de glicoprotenas e produz o material
das podem ser armazenadas e superpostas digitalmente para se da nova membrana, transportada atravs da clula. O RE liso
reconstruir uma imagem tridimensional da amostra inteira. participa da sntese dos lipdeos e, em alguns aspectos, do me
tabolismo dos carboidratos. O aparelho de Golgi consiste em
vesculas de membranas que funcionam em conjunto com o
Microscpios de varredura por sonda RE para modificar quimicamente e transformar os produtos
Uma nova classe de microscpios, chamados microscpios de do RE destinados a serem secretados e que atuam em outras
varredura por sonda, medem as caractersticas da superfcie estruturas da membrana da clula.
14 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

vrias enzimas, em particular as ligadas ao ciclo do cido c


trico. Os cloroplastos so organelas de clulas fotossintticas
capazes de converter a energia da luz solar em energia qumi
ca atravs da fotossntese. A clorofila e os outros componen
tes necessrios fotossntese esto localizados em uma srie
de membranas de discos flutuantes que se chamam tilacoides.
A forma, o tamanho e o nmero dos cloroplastos por clula
variam bastante. Diferentemente da mitocndria, os cloro
plastos so, em geral, muito maiores do que os procariotos. As
mitocndrias e os cloroplastos contm seu prprio DNA, que
existe em uma forma covalente circular fechada e codifica para
algumas (no todas) das protenas que o compem e RNA de
transferncia. As mitocndrias e os cloroplastos tambm con
tm ribossomos 70S, da mesma maneira que os procariotos.
Alguns microrganismos eucariticos (p. ex., Trichomonas
vaginalis) no possuem mitocndria e em seu lugar apresen
tam uma membrana prxima a uma organela respiratria,
chamada hidrogenossomo. Os hidrogenossomos podem ter
surgido por endossimbiose, e foram identificados alguns que
contm DNA e ribossomos. O hidrogenossomo, de tamanho
quase similar ao da mitocndria, no possui cristas e nem as
enzimas do ciclo do cido tricarboxlico. O piruvato retira
do pelo hidrogenossomo, e so produzidos H 2, C02, acetato
e ATP.
Os lisossomos so sacos ligados membrana que contm
vrias enzimas digestivas utilizadas pela clula para digerir
as macromolculas, tais como protenas, cidos graxos e po
lissacardeos. O lisossomo permite que essas enzimas sejam
separadas do citoplasma, pois elas podem destruir as macro
molculas celulares se no forem controladas. Aps a hidrlise
das macromolculas nos lisossomos, os monmeros resultan
FIGURA 2.2 Micrografia eletrnica de um corte fino de um ncleo tes passam atravs do lisossomo para o citoplasma, onde ser
eucaritico tpico mostrando um nuclolo proeminente e grandes vem como nutrientes.
agregaes de heterocromatina contra a membrana nuclear, atravessa O peroxissomo uma estrutura ligada membrana cuja fun
da por poros (setas). Quadro superior esquerda. Dois poros nucle o produzir H202 pela reduo de 02 a partir de vrios doa
ares com seus diafragmas. Quadro inferior direita. Lmina fibrosa dores de hidrognio. O H202 produzido no peroxissomo sub
presente na face interna do envelope nuclear. O retculo endoplasmti sequentemente degradado em H20 e 02 pela enzima catalase.
co e vrias mitocndrias so visveis no citoplasma. (Reproduzida, com O citoesqueleto uma estrutura tridimensional que preen
autorizao, de Fawcett DW: Bloom and Fawcett. A Textbook ofHistology, che o citoplasma. Os tipos primrios de fibra, compreendendo
12th ed. Copyright 1994. Com autorizao de Chapman & Hall, New
o citoesqueleto, so os microfilamentos, os filamentos inter
York, NY, EUA.)
medirios e os microtbulos. Os microftlamentos, que pos
suem cerca de 3 a 6 nm de dimetro, so polmeros compostos
de subunidades da protena actina. Estas fibras formam enve
Os plastdeos consistem nas mitocndrias e nos cloro lope em torno da clula, definindo e mantendo a forma da c
plastos. Diversas linhas de evidncia sugerem que as mitocn lula. Os microfilamentos tambm podem ser responsveis por
drias e cloroplastos eram descendentes de antigos organismos movimentos celulares, como os de deslizamento, contrao e
procariticos, tendo surgido do engolfamento de uma clula citocinese.
procaritica por uma clula maior (endossimbiose). As mito Os microtbulos so tubos cilndricos, de 22 a 25 nm de
cndrias apresentam o tamanho de procariotos, e sua membra dimetro, compostos por subunidades da protena tubulina.
na, que perdeu esteris, muito menos rgida que a membrana Essas estruturas auxiliam os microftlamentos na manuteno
citoplasmtica das clulas eucariticas, que contm esteris. A da estrutura celular, na formao de fibras finas para a sepa
mitocndria possui dois grupos de membranas. A membrana rao dos cromossomos durante a mitose, e desempenham
externa semipermevel e possui inmeros pequenos canais importante papel na motilidade celular. Os filamentos inter
que permitem a passagem de ons e pequenas molculas (p. ex., medirios possuem cerca de 10 nm de dimetro e fornecem
adenosina trifosfato [ATP] ). A invaginao da membrana ex fora tensional clula.
terna forma um sistema de membranas externas dobradas, de
nominadas cristas, locais das enzimas envolvidas na respirao
e na produo de ATP. As cristas tambm contm protenas de
Camadas superficiais
transporte especficas que regulam a passagem dos metablitos O citoplasma limitado por uma membrana plasmtica, com
para dentro e para fora da matriz mitocondrial. Esta contm posta de protenas e fosfolipdeos, semelhante membrana da
CAPTULO 2 Estrutura celular 15

(p. ex., Paramecium), que exibem movimento semelhante a


uma onda para impulsionar a clula atravs da gua. Os fla
gelos das clulas eucariticas originam-se da regio polar da
clula, enquanto os clios, mais curtos que os flagelos, cir
cundam a clula (Fig. 2.3). Tanto os flagelos quanto os clios
das clulas eucariticas possuem a mesma estrutura bsica e
composio bioqumica idntica. Ambos consistem em uma
srie de microtbulos, cilindros proteicos ocos constitudos
de uma protena denominada tubulina, circundados por uma
membrana. A disposio dos microtbulos denominada
"sistema 9 + 2", visto que consiste em nove pares perifri
cos de microtbulos circundando dois microtbulos centrais
(Fig. 2.4).

20m ESTRUTURA DA CLULA PROCARITICA


FIGURA 2.3 Um paramcio se movimentando com o auxlio de c A clula procaritica mais simples que a eucaritica em todos
lios presentes na superfcie celular. ( Manfred Kage). os nveis, com uma nica exceo: seu envelope celular mais
complexo.

clula procaritica ilustrada adiante (Fig. 2.10). A maioria das


clulas animais no tem outras camadas superficiais; entretan
O nucleoide
to, as clulas vegetais apresentam uma parede celular externa Os procariotos no possuem um ncleo verdadeiro; em vez
composta de celulose. Muitos microrganismos eucariticos disso, o DNA empacotado em uma estrutura conhecida como
tambm possuem uma parede celular externa, que pode ser nucleoide, o qual pode ser visualizado ao microscpio ptico
constituda de um polissacardeo, como a celulose ou a quitina, em material corado (Fig. 2.5). Feulgen-positivo, indicando a
ou de material inorgnico, como, por exemplo, a parede de s presena de DNA. O DNA de carga negativa pelo menos em
lica das diatomceas. parte neutralizado por pequenas poliaminas e ons magnsio;
entretanto, existem protenas semelhantes histona nas bact
rias que, presumivelmente, desempenham papel semelhante ao
Organelas de motilidade das histonas na cromatina eucaritica.
Muitos microrganismos eucariticos possuem organelas de As micrografias eletrnicas de uma tpica clula procari
nominadas flagelos (p. ex., Trichomonas vaginalis) ou clios tica, como a que se v na Figura 2.5, revelam a ausncia de

Brao de -----.
dinena externo
Brao de --...,,_
dinena interno Microtbulo
central
Raio da cabea
Raio radial
Microtbulo
duplo

Ligao ---+
de nexina

Bainha central

Subtbulo B

A B
FIGURA 2.4 Estrutura ciliar e flagelar. (A) Microscopia eletrnica de uma seo transversal de um clio. Notar os dois microtbulos centrais cir
cundados por nove microtbulos duplos (ampliada 160.000 vezes). (Reproduzida, com autorizao, de KG Murti/Visuals Unlimited.) (8) Diagrama da
estrutura de um clio e de um flagelo. (Reproduzida, com autorizao, de Willey JM, Sherwood LM, Woolverton CJ (editors): Prescott, Harleyand Klein's
Microbiology, 7th ed., New York: McGraw-Hill; 2008. The McGraw-Hill Companies, lnc.)
16 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

A
0,5 m
FIGURA 2.5 Nucleoides do Bacil/us cereus (ampliada 2.500 vezes).
(Reproduzida, com autorizao, de Robinow C:The chromatin bodies of
bacteria. Bacteriol Rev 1956; 20:207.)

Fibras de DNA
membrana nuclear e aparelho mittico. A exceo a esta re
gra constituda pelos planctomicetos, um grupo divergente Membrana
de bactrias aquticas que possuem um nucleoide circundado
por um envelope nuclear que consiste em duas membranas. Clula rompida
A distino entre procariotos e eucariotos ainda baseada no
fato de que os procariotos no possuem um aparato mittico
como os eucariotos. A regio nuclear (Fig. 2.6) preenchida
com fibrilas de DNA. O nucleoide da maioria das clulas bac
terianas consiste em uma nica molcula circular contnua,
cujo tamanho vai de 0,58 a quase 10 milhes de pares de bases. B
Entretanto, algumas (poucas) bactrias podem ter dois, trs ou FIGURA 2.6 O nucleoide. (A) Micrografia eletrnica de transmisso
mesmo quatro cromossomos. Por exemplo, o Vibrio cholerae ampliada e colorida de uma Escherichia coli com seu DNA observado
e a Brucella melitensis tm dois cromossomos desiguais. Exis em vermelho. ( CNRl;SPL;Photo Researchers, lnc.) (8) Cromosso
tem excees regra da circularidade, pois alguns procariotos mo liberado de uma clula lisada de E. coli. Notar como o DNA deve
(p. ex., Borrelia burgdorferi e Streptomyces coelicolor) possuem estar firmemente enovelado para poder caber dentro da bactria.
um cromossomo linear. ( Dr. Gopal Murti/SPL/Photo Researchers.)
Nas bactrias, o nmero de nucleoides e, consequentemen
te, o de cromossomos depende das condies de crescimento
(Fig. 2.5). As bactrias de crescimento rpido tm mais nu
cleoides por clula do que as de crescimento lento; entretanto, da luz so as ficobilinas encontradas na superfcie externa das
quando inmeras cpias esto presentes, so todas iguais (i. e., membranas tilacoides.
as clulas procariticas so haploides). As bactrias frequentemente armazenam materiais em
forma de grnulos insolveis, que aparecem como corpos re
frteis no citoplasma quando vistos microscopia de contras
Estruturas citoplasmticas te de fase. Esses chamados corpos de incluso quase sempre
As clulas procariticas carecem de plastdeos autnomos, co funcionam no armazenamento de energia ou como reserva
mo as mitocndrias e os cloroplastos; as enzimas de transpor trio dos blocos estruturais de construo. A maioria das in
te de eltrons localizam-se na membrana citoplasmtica. Os cluses celulares rodeada por fina membrana composta de
pigmentos fotossintticos (carotenoides, bacterioclorofila) das lipdeo, que serve para separar adequadamente a incluso do
bactrias que efetuam a fotossntese esto contidos na mem citoplasma. Um dos corpos de incluso mais comuns consis
brana intracitoplasmtica, de morfologia variada. Vesculas te no cido poli-(J-hidroxibutrico (PHB), um composto se
de membrana (cromatforos) ou lamelas costumam ser ob melhante ao lipdeo que consiste em unidades de cadeias de
servadas em tipos de membrana. Algumas bactrias fotossin cido -hidroxibutrico conectadas atravs de ligaes ster.
tticas tm estruturas no unitrias, em forma de membranas O PHB produzido quando uma fonte de nitrognio, enxofre
fechadas, chamadas clorossomos. Em algumas cianobactrias ou fsforo encontra-se limitada e existe um excesso de carbono
(antigamente conhecidas como algas azul-esverdeadas), as no meio (Fig. 2.SA). Outro produto da armazenagem formado
membranas fotossintticas frequentemente formam estrutu por procariotos quando h um excesso de carbono o glico
ras em inmeras camadas, denominadas tilacoides (Fig. 2.7). gnio, um polmero da glicose. O PHB e o glicognio so usa
Os principais pigmentos acessrios utilizados para a captao dos como fontes de carbono quando a sntese das protenas e
CAPTULO 2 Estrutura celular 17

as fontes de enxofre reduzido se tornam limitantes, o enxofre


em grnulos oxidado, geralmente em sulfato, e os grnulos
desaparecem lentamente. Muitas bactrias acumulam grandes
reservas de fosfato inorgnico em forma de grnulos de poli
fosfato (Fig. 2.8B), os quais podem ser degradados e usados
como fonte de fosfato para a sntese dos fosfolipdeos e a do
cido nucleico, como suporte de crescimento. Esses grnulos
so s vezes denominados grnulos de volutina ou grnulos
metacromticos, uma vez que se coram de vermelho com co
rante azul. Esses grnulos so caractersticos das corinebact
rias (Cap. 13).
Certos grupos de bactrias autotrficas que fDCam dixido
de carbono para construir seus blocos bioqumicos contm cor
pos polidricos circundados por uma concha proteica (carbo
xissomos) que contm a enzima-chave para a fixao de co2, a
carboxilase de ribulosebisfosfato (Fig. 2.7B). Os magnetosso
mos so partculas de cristal do ferro mineral magnetita (Fe3 O4)
que permitem a certas bactrias aquticas exibir magnetotaxia
(i. e., migrao ou orientao da clula com respeito ao campo
A magntico da Terra). Os magnetossomos so circundados por
uma membrana no unida que contm fosfolipdeos, protenas
Membrana plasmtica
e glicoprotenas. Vesculas gasosas so encontradas quase ex
Parede celular
clusivamente em microrganismos de habitats aquticos, pro
/ porcionando-lhes a flutuao. A membrana da vescula gasosa
uma camada proteica de 2 nm de espessura, impermevel
gua e solutos mas permevel a gases; dessa forma, as vesculas
gasosas existem como estruturas cheias de gs, circundadas pe
los componentes do citoplasma (Fig. 2.9).
As bactrias contm protenas semelhantes actina e a
protenas sem actina, ambas do citoesqueleto das clulas eu
cariticas, como protenas adicionais, que tm uma funo
de citoesqueleto (Fig. 2.10). Os homlogos da actina (p. ex.,
MreB, Mbl) realizam uma variedade de funes, ajudando a
determinar a forma celular, a segregao dos cromossomos e
a localizar protenas com a clula. Os homlogos sem actina
(p. ex., FtsZ) so protenas nicas no citoesqueleto bacteria
no (p. ex., SecY, MinD) e esto envolvidas na determinao da
Ficobilissomos forma celular, na regulao da diviso da clula e na segregao
A '

cromossom1ca.
Tilacoides
O envelope celular
As clulas procariticas so circundadas por um complexo en
Carboxissomo
1m Ribossomo 708 velope composto por camadas que diferem em sua composio
entre os grupos principais. Estas estruturas protegem os orga
B nismos de ambientes hostis, como extremos de osmolaridade,
FIGURA 2.7 (A) Corte fino de Synechococcus lividus mostrando um substncias qumicas e antibiticos.
extenso sistema de tilacoide. Os ficobilissomos desses tilacoides so
perfeitamente visveis como grnulos na localizao t (ampliada
85.000 vezes). (Reproduzida, com autorizao, de Elizabeth Gentt/ A membrana celular
Visuais Unlimited.) (8) Seo fina de Synechocystis durante a diviso.
A. Estrutura
Diversas estruturas esto visveis. (Reproduzida, com autorizao, de
Carlsberg Research Communications 42:77-98, 1977, com gentil autori A membrana celular bacteriana, tambm denominada mem
zao de Springer Science+Business Media.) brana citoplasmtica, visvel em micrografias eletrnicas de
cortes finos (Fig. 2.15). Trata-se de uma tpica "unidade de
membrana", composta de fosfolipdeos e mais de 200 tipos di
a sntese do cido nucleico so reiniciadas. Uma variedade de ferentes de protena. As protenas respondem por cerca de 70%
procariotos capaz de oxidar compostos de enxofre reduzidos, da massa da membrana, proporo consideravelmente eleva
como o sulfito de hidrognio e o tiossulfato, produzindo gr da quando comparada com a das membranas das clulas dos
nulos intracelulares de enxofre elementar (Fig. 2.SC). Como mamferos. A Figura 2.11 ilustra um modelo de organizao
18 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

'
.
..-
.

'
MP
"





'
'

'

...


' .
'\
.
'

R .._ . _ ._
.


. .-

. . .

.
.

' .
.. .. .

. .
-

'
..-

1


..



...

.


...

. \
.
.... L li
. '\,..
... . . .
.
...

... \
. ..
1-
" ,

.


"
.


.
....



.'
. '
'



' . L Ili


. .N

.
..
.



..
.. ' .

-
= l
A ---'- - .

Tilacoides

L IV -

0,1m
B

FIGURA 2.8 Corpos de incluso em bactrias. (A) Micrografia eletrnica de Bacillus megaterium (ampliada 30.500 vezes) mostrando corpos de
incluso de cido. PHB, poli--hidroxibutrico; PC, parede celular; N, nucleoide; MP, membrana plasmtica; M, "mesossomo"; R, ribossomos. (Repro
duzida, com autorizao, de Ralph A. Slepecky/Visuals Unlimited.) (8) Ultraestrutura da cianobactria Anacystis nidulans. A bactria est se dividindo
e um septo est parcialmente formado, LI e Lll. Diversas caractersticas estruturais podem ser vistas, inclusive as camadas da parede celular, Llll e
LIV; gp, grnulos de polifosfato; cp, um corpo polidrico; c, grnulos de cianoficina; mp, membrana plasmtica. (Reproduzida, com autorizao, do
National Research Council of Canada.) (C) Cromatium vinosum, uma sulfobactria prpura, com grnulos intracelulares de enxofre, microscopia de
campo luminoso (ampliada 2.000 vezes). (Reproduzida, com autorizao, de John Holt (editor): The Shorter Bergey's Manual ofDeterminative Bacterio
logy, 8th ed., 1977. Copyright Bergey's Manual Trust. Published por Williams & Wilkins.)

da membrana. As membranas dos procariotos diferenciam-se diglicerol). As molculas se orientam com os grupos glicerol
daquelas das clulas eucariticas pela ausncia de esteris, e a polares nas superfcies e a cadeia de hidrocarbonetos apola
nica exceo representada pelos micoplasmas que incorpo res no interior. Esses lipdeos no usuais contribuem para a
ram esteris, como o colesterol, em suas membranas quando faculdade de muitas arqueobactrias de crescer em condies
crescem em meios que contenham esterol. ambientes como altas concentraes de sal, baixo pH ou tem
A membrana celular das arqueobactrias (Cap. 1) difere peraturas muito elevadas.
das demais bactrias. Algumas membranas de arqueobactrias
contm lipdeos nicos, os isoprenoides, em vez de cidos gra
B. Funo
xos, unidos ao glicerol por uma ligao ter em vez de ster.
Alguns destes lipdeos no possuem grupamentos fosfato e, as As principais funes da membrana citoplasmtica so ( 1) a
sim, no so fosfolipdeos. Em outras espcies, a membrana ce permeabilidade seletiva e o transporte de solutos; (2) transpor
lular feita por monocamada lipdica, que consiste em lipdeos te de eltrons e fosforilao oxidativa em espcies aerbias; (3)
longos (com cerca de duas vezes a extenso de um fosfolipdeo) excreo das exoenzimas hidrolticas; (4) localizao das en
com glicerol-teres em ambas as extremidades (tetrateres de zimas e molculas transportadoras que atuam na biossntese
CAPTULO 2 Estrutura celular 19

FIGURA 2.9 Corte transversal de uma clula em diviso de cianobactria da espcie Microcystis, mostrando a distribuio hexagonal das ves
culas gasosas cilndricas (ampliada 31.500 vezes). (Micrografia obtida por HS Pankratz. Reproduzida, com autorizao, de Walsby AE: Gas vesicles.
Microbial Rev 1994;58:94.)

do DNA, dos polmeros da parede celular e dos lipdeos da


membrana; e (5) localizao dos receptores e outras protenas
do sistema quimiottico dos outros sistemas de transduo
sensorial.
Pelo menos 50% da membrana citoplasmtica deve en
contrar-se no estado semilquido para que ocorra o cresci
mento celular. A temperaturas baixas, tal estado obtido
mediante o aumento acentuado na sntese e na incorporao
dos cidos graxos insaturados em fosfolipdeos da membrana
celular.

1 . Permeabilidade e transporte - a membrana citoplasm


tica forma uma barreira hidrofbica impermevel maioria das
molculas hidroflicas. Entretanto, existem vrios mecanismos
A B (sistemas de transporte) que capacitam a clula a transportar
os nutrientes para o seu interior e produtos de degradao para
FIGURA 2.10 Citoesqueleto procaritico. Visualizao da protena
fora. Esses sistemas de transporte atuam contra um gradiente
de citoesqueleto MreB-/ike (Mbl) de Bacillus subtilis. A protena Mbl foi
fusionada com protena verde fluorescente (PVF) e as clulas vivas fo de concentrao para aumentar a concentrao dos nutrientes
ram examinadas por microscopia de fluorescncia. (A) Setas indicando no interior da clula, funo que requer alguma forma de ener
os cabos helicoidais do citoesqueleto que se estendem ao longo das gia. H trs mecanismos gerais de transporte envolvidos no
clulas. (8) Trs das clulas de (A) so mostradas com maior aumento. transporte da membrana: o transporte passivo, o transporte
(Cortesia de Rut Carballido-Lopez e Jeff Errington.) ativo e a translocao de grupos.
20 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Protena Glicolipdeo
Hlice
integral -----li
a.-hidrofbica

Hopanoide

Protena Fosfolipdeo
tJDJ'
perifrica

FIGURA 2.11 Estrutura celular da membrana plasmtica. Este diagrama do modelo de mosaico fluido da estrutura da membrana bacteriana
mostra as protenas integrais (verde e vermelha) inseridas na bicamada lipdica. Protenas perifricas (amarela) esto frouxamente associadas
membrana de superfcie interna. As pequenas esferas representam as extremidades hidroflicas da membrana fosfolipdica, e as caudas duplas, as
cadeias de cidos graxos hidrofbicos. Outros lipdeos de membrana, tais como os hopanoides (prpura), podem estar presentes. Por razes de
clareza, os fosfolipdeos so mostrados proporcionalmente em tamanho muito maior do que o tamanho real nas membranas. (Reproduzida, com
autorizao, de Willey JM, Sherwood LM, Woolverton CJ (editors): Prescott, Harley, and Klein's Microbiology, 7th ed, N: McGraw-Hill; 2008. McGraw
Hill Companies, lnc.)

a. Transporte passivo - este mecanismo depende de difuso, simultneo de dois substratos na mesma direo por um nico
no emprega energia e opera somente quando o soluto se en transportador; por exemplo, um gradiente de H+ pode permi
contra em alta concentrao no lado exterior da clula. A difu tir o simporte de um on de carga oposta (p. ex., glicina) ou
so simples responde pela entrada de poucos nutrientes, como de uma molcula neutra (p. ex., galactose). Os antiportadores
o oxignio dissolvido, dixido de carbono e a prpria gua. A catalisam o transporte simultneo de dois compostos de carga
difuso simples no proporciona velocidade nem seletivida semelhante em direes opostas por um transportador comum
de. A difuso facilitada tambm no requer energia, de modo (p. ex., H+:Na+). Aproximadamente 40% dos substratos trans
que o soluto nunca alcana uma concentrao interna maior portados por E. coli utilizam este mecanismo.
que a do lado externo da clula. Entretanto, a difuso facilita
da seletiva. As protenas de canal formam canais seletivos 2) Transporte tipo ABC - este mecanismo emprega ATP di
que facilitam a passagem de molculas especficas. A difuso retamente para transportar os solutos para a clula. Nas bac
facilitada comum nos microrganismos eucariticos (p. ex., trias gram-negativas, o transporte de muitos nutrientes
leveduras), mas rara nos procariotos. O glicerol um dos facilitado por protenas de ligao especficas localizadas no
poucos compostos que entram nas clulas procariticas por espao periplasmtico; nas clulas gram-positivas, as protenas
difuso facilitada. de ligao esto presas junto superfcie externa da membra
na celular. Tais protenas funcionam transferindo o substrato
b. Transporte ativo - muitos nutrientes encontram-se em ligado a um complexo de protena ligada membrana. Em se
uma concentrao superior a 1.000 vezes como resultado do guida, a hidrlise do ATP desencadeada, e a energia usada
transporte ativo. Dependendo da fonte de energia empregada, para abrir os poros da membrana e permitir um movimento
existem dois tipos de mecanismo de transporte ativo: o trans unidirecional do substrato para a clula. Aproximadamen
porte acoplado a ons e o sistema de cassete de ligao ao te 40% dos substratos transportados por E. coli utilizam este
ATP (transportador tipo ABC). mecanismo.

1) Transporte acoplado a ons - estes sistemas movimentam e. Translocao de grupos - alm do transporte verdadeiro,
uma molcula atravs da membrana celular a expensas de um em que um soluto movido atravs da membrana sem alte
gradiente de ons previamente estabelecido, como a fora mo rao da estrutura, as bactrias utilizam um processo deno
triz de prton ou fora motriz de sdio. Existem trs tipos b minado translocao de grupos (metabolismo vetorial) para
sicos: uniporte, simporte e antiporte (Fig. 2.12). O transporte efetuar a captao de determinados acares (p. ex., glicose e
acoplado a ons particularmente comum nos organismos ae manose) com a fosforilao do substrato durante o processo
rbios, que possuem um tempo de gerao e uma forma motriz de transporte. Em sentido estrito, a translocao de grupos
de ons mais fceis do que nos anaerbios. Os uniportadores no um transporte ativo, pois no h gradiente de concen
catalisam o transporte de um substrato independente de qual trao envolvido. Esse processo possibilita que as bactrias uti
quer on acoplado. Os simportadores catalisam o transporte lizem de maneira eficiente suas fontes de energia ao acoplar o
CAPTULO 2 Estrutura celular 21

Uniportador d. Processos especiais de transporte - o ferro (Fe) um nu



-

triente essencial para o crescimento de quase todas as bactrias.

b -
-
b Em condies anaerbias, geralmente encontra-se em estado
de oxidao +2 e solvel. Entretanto, em condies aerbias,
b b
-

,>
-
-
mostra-se geralmente em estado de oxidao +3 e insolvel. Os
compartimentos internos dos animais praticamente no con
"

b b tm ferro livre, sequestrado em complexos proteicos, como a
transferrina e a lactoferrina. Algumas bactrias solucionam
este problema secretando siderforos - compostos quelan
Exterior \ I nterior
tes do Fe e que promovem seu transporte como um complexo
A solvel. Um grupo principal de siderforos consiste em deriva
dos do cido hidroxmico (-CONH20H), o qual quela o Fe3+
Simportador
fortemente. O complexo ferro-hidroxamato transportado
ativamente para a clula por ao cooperativa de um grupo de
protenas que se estende pela membrana externa, o periplas
ma e a membrana interna. O ferro liberado, e o hidroxamato
pode sair da clula e ser usado novamente no transporte de
ferro.
Algumas bactrias patognicas usam um mecanismo fun
damentalmente diferente, que envolve receptores especficos
que se ligam transferrina e lactoferrina do hospedeiro (bem
B como a outras protenas do hospedeiro que contenham ferro).
O ferro removido e transportado para a clula por um proces
Antiportador >=' so dependente de energia.
,l
b
-

b
,

e;; 2. Transporte de eltrons e fosforilao oxidativa os


b
-

b
citocromos, assim como outras enzimas e componentes da ca
- deia respiratria, inclusive certas desidrogenases, localizam-se
b- \ ,.- -
ci
,, na membrana celular. Por conseguinte, a membrana celular
-
b bacteriana constitui um anlogo funcional da membrana mi
b -
b tocondrial - relao que tem sido utilizada por muitos bilo
gos para confirmar a teoria de que as mitocndrias evoluram
a partir de bactrias simbiticas. No Captulo 6, discutimos o
e
mecanismo pelo qual a gerao de ATP est acoplada ao trans
FIGURA 2.12 Trs tipos de transportadores: (A) Uniportadores; (8) porte de eltrons.
Simportadores; e (C) Antiportadores. Os uniportadores catalisam o
transporte de uma nica molcula independentemente de qualquer 3. Excreo das exoenzimas hidrolticas e protenas de
outra; os simportadores catalisam o transporte concomitante de duas patogenicidade todos os microrganismos que dependem
-

molculas distintas (em geral, um soluto e um on de carga positiva, H+)


dos polmeros orgnicos macromoleculares como fonte de nu
na mesma direo, enquanto os antiportadores catalisam o transporte
trientes (p. ex., protenas, polissacardeos, lipdeos) excretam
pela troca de dois solutos similares em direes opostas. Uma nica
protena de transporte pode catalisar apenas um, dois ou mesmo to enzimas hidrolticas que degradam os polmeros em subuni
dos os trs processos, dependendo das condies. Foi observado que dades pequenas o suficiente para penetrarem na membrana
uniportadores, simportadores e antiportadores so estruturalmen celular. Os animais superiores secretam essas enzimas no l
te semelhantes e relacionados do ponto de vista evolutivo, e atuam men do trato digestrio, enquanto as bactrias (gram-positivas
por mecanismos semelhantes. (Reproduzida, com autorizao, de e gram-negativas) o fazem diretamente no meio externo ou
Saier MH Jr: Peter Mitchell and his chemiosmotic theories. ASM News no espao periplasmtico, entre a camada de peptidoglicano
1997; 63:13.) e a membrana externa da parede celular, no caso das bactrias
gram-negativas (ver A parede celular).
Nas bactrias gram-positivas, as protenas so secretadas
diretamente, porm as protenas secretadas por bactrias gram
transporte com o metabolismo. Nesse processo, uma protena negativas precisam atravessar a membrana externa. Foram des
transportadora da membrana inicialmente fosforilada no ci critas seis vias de secreo de protenas em bactrias: sistemas de
toplasma custa do fosfoenolpiruvato; em seguida, a protena secreo tipos I, li, Ili, IV, V e VI. Uma viso geral esquemtica
fosforilada liga-se ao acar livre na face externa da membra dos sistemas tipos 1 a V apresentada na Figura 2.13. Os siste
na e o transporta para o citoplasma, liberando-o em forma de mas de secreo tipos 1 e IV foram descritos em bactrias gram
acar-fosfato. Os referidos sistemas de transporte de acar negativas e gram-positivas, enquanto os sistemas de secreo
so denominados sistemas de fosfotransferase. Esses sistemas tipos li, Ili, V e VI foram encontrados somente em bactrias
tambm esto envolvidos no movimento direcionado para es gram-negativas. As protenas secretadas atravs das vias tipos 1
sas fontes de carbono (quimiotaxia) e na regulao de vrias e III atravessam a membrana interna (MI) e a membrana exter
outras vias metablicas (represso dos catablitos). na (ME) em uma etapa, enquanto as protenas secretadas pelas
22 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

vias tipos II e V atravessam a MI e a ME em etapas distintas. As Em bactrias gram-negativas e gram-positivas, outro siste
protenas secretadas pelas vias tipos II e V so sintetizadas nos ma de translocao pela membrana plasmtica, chamado via
ribossomos citoplasmticos, em forma de pr-protenas que tat, pode mover protenas atravs da membrana plasmtica.
contm uma sequncia-lder ou sinalizadora adicional de 15 a Em bactrias gram-negativas, estas protenas so ento libera
40 aminocidos - mais comumente, cerca de 30 aminocidos das para o sistema tipo II (Fig. 2.13). A via tat difere do sistema
- na extremidade aminoterminal e que exigem a presena do sec, pois faz a translocao das protenas em sua conformao
sistema sec para o seu transporte atravs da MI (citoplasmti final (dobra).
ca). Em E. coli, a via sec compreende diversas protenas da MI Embora as protenas secretadas pelos sistemas tipos II e V
(SecD a SecF, SecY), uma ATPase associada membrana celu sejam similares no mecanismo utilizado para atravessar a MI,
lar (SecA) que fornece energia para exportao, uma protena existem diferenas na maneira como atravessam a ME. As pro
chaperona (SecB) que se liga pr-protena, e a peptidase sinal tenas secretadas pelo sistema tipo II so transportadas pela ME
periplasmtica. Aps translocao, a sequncia-lder clivada por um complexo multiproteico (Fig. 2.13). Trata-se da prin
pela peptidase sinal ligada membrana, e a protena madura cipal via para a secreo das enzimas de degradao extracelu
liberada no espao periplasmtico. Diferentemente, as protenas lares por bactrias gram-negativas. A elastase, a fosfolipase C e
secretadas pelos sistemas tipos 1 e III no possuem sequncia a exotoxina A, so secretadas por este sistema na Pseudomonas
lder e so exportadas intactas. aeruginosa. Entretanto, as protenas secretadas pelo sistema

Tipo 1 Tipo Ili Tipo li Tipo V Tipo IV

Exterior da clula

TolC
Membrana
Yop externa

Espao
YscJ periplasmtico

--1
..,>JI ... J>Jl'-
Mem brana....__
_ __
ADP plasmtica
+ Pi
ATP ADP ADP
ADP ADP
+ Pi + Pi
+ Pi + Pi ATP ATP
ATP ATP ATP

Citoplasma
Chaperona Chaperona

Protena
FIGURA 2.13 Sistemas de secreo de protena em bactrias gram-negativas. Cinco sistemas de secreo de bactrias gram-negativas so mos
trados. O sistema dependente da sece a via Tattransportam protenas do citoplasma para o espao periplasmtico. Os sistemas tipos li, Ve, s vezes,
do tipo IV completam o processo de secreo inciado pela via dependente da sec. O sistema Tat parece transportar protenas somente para a via tipo
1
li. Os sistemas tipos e Ili desviam das vias dependente da sece Tat, movendo as protenas diretamente do citoplasma, atravs da membrana externa
para o espao extracelular. O sistema de secreo tipo IV pode atuar tanto com a via dependente da secquanto sozinho para transportar protenas
para o espao extracelular. As protenas translocadas pela via dependente da sec e pelo tipo Ili so transportadas para esses sistemas por protenas
chaperonas. ADP, adenosina difosfato; ATP, adenosina trifosfato; EFGY, PulS, SecD, TolC, Yop (Reproduzida, com autorizao, de Willey JM, Sherwood
LM, Woolverton CJ (editors): Prescott, Harley, and Klein's Microbiology, 7th ed., New York: McGraw-Hill; 2008. McGraw-Hill Companies, lnc.)
CAPTULO 2 Estrutura celular 23

tipo V autotransportam-se, atravs da membrana externa, por bacteriana (ver Flagelos). Existem pelo menos 20 quimiorrecep
uma sequncia carboxiterminal removida enzimaticamen tores diferentes na membrana da E. coli, alguns dos quais tam
te sob a liberao da protena para a ME. Algumas protenas bm atuam como primeira etapa no processo de transporte.
extracelulares - por exemplo, a IgA protease da Neisseria go
norrhoeae e a citotoxina de vacuolizao do Helicobacter pylori
A parede celular
- so secretadas por este sistema.
As vias de secreo tipos I e III so independentes do sec e, A presso osmtica interna da maioria das bactrias varia de
por isso, no envolvem o processamento aminoterminal das 5 a 20 atm devido concentrao de solutos obtida atravs do
protenas secretadas. A secreo das protenas por essas vias transporte ativo. Na maioria dos ambientes, esta presso se
ocorre em um processo contnuo, sem a presena de qualquer ria suficiente para provocar a ruptura da clula, se no fosse a
intermedirio citoplasmtico. A secreo tipo I exemplificada presena de uma parede celular com elevada fora de tenso
pela a-hemolisina da E. coli e pela adenililciclase da Bordetella (Fig. 2.14). A parede celular bacteriana deve sua fora a uma
pertussis. A secreo tipo I requer trs protenas secretoras: um camada constituda por uma substncia conhecida como mu
cassete de ligao ao ATP (transportador tipo ABC), que for rena, mucopeptdeo ou peptidoglicano (termos sinnimos).
nece energia para a secreo proteica; uma protena da ME; e A estrutura do peptidoglicano discutida adiante.
uma protena de fuso da membrana, ancorada na membra A maioria das bactrias classificada como gram-positiva
na interna e que atravessa o espao periplasmtico (Fig. 2.13). ou gram-negativa, de acordo com sua resposta colorao
Em lugar do peptdeo de sinalizao, a informao localiza-se pelo mtodo de Gram. Este procedimento recebeu tal deno
dentro dos 60 aminocidos carboxiterminais da protena se minao do histologista Hans Christian Gram, que desenvol
cretada. veu essa tcnica de colorao diferencial na tentativa de corar
A via de secreo tipo III um sistema dependente de con bactrias em tecidos infectados. A colorao de Gram depende
tato. Este sistema ativado pelo contato com a clula hospe da capacidade de certas bactrias (as bactrias gram-positivas)
deira, e ento injeta uma toxina proteica diretamente na clula de reter o complexo cristal de violeta (um corante prpura) e
hospedeira. O aparelho de secreo tipo III constitudo por iodo aps breve lavagem com lcool ou acetona. As bactrias
aproximadamente 20 protenas, a maioria das quais localiza gram-negativas no retm o complexo corante-iodo e tornam
se na MI. Esses componentes da MI so, em sua maioria, ho se translcidas, podendo, assim, tomar a colorao de fundo
mlogos ao aparelho de biossntese flagelar das bactrias tanto com safranina* (um corante vermelho). Assim, as bactrias
. . , . , .

gram-positivas quanto gram-negativas. semelhana da se gram-pos1t1vas aparecem na cor purpura ao m1croscop10, e


creo tipo I, as protenas secretadas pela via de secreo tipo as gram-negativas, em vermelho. A distino entre esses dois
III no esto sujeitas a processamento aminoterminal durante grupos reflete diferenas fundamentais em seus envelopes ce
sua secreo. lulares (Fig. 2.15).
As vias de secreo tipo IV secretam tanto toxinas poli
peptdicas (direcionadas contra as clulas eucariticas) quanto
* N. de R.T. Pode-se empregar a fucsina como corante de fundo no lugar
complexos protena-DNA entre duas clulas bacterianas ou da safranina.
entre uma bactria e uma clula eucaritica. O tipo IV de se
creo exemplificado pelo complexo protena-DNA liberado
por Agrobacterium tumefaciens em clulas de plantas. Alm
desse microrganismo, a B. pertussis e H. pylori possuem sis
temas de secreo tipo IV que medeiam a secreo da toxina
pertussis e do fator de induo da interleucina-8, respectiva
mente. O sistema de secreo tipo VI independente de sec foi
recentemente descrito em P. aeruginosa, em que contribui para
a patogenicidade em pacientes com fibrose cstica. Este sistema
de secreo composto por 15 a 20 protenas cujas funes
bioqumicas ainda no esto bem compreendidas. Entretanto,
estudos recentes sugerem que algumas dessas protenas parti
lham homologia com as protenas da cauda de bacterifagos.
As caractersticas dos sistemas de secreo de protenas de
bactrias esto sintetizadas no Quadro 9.6.

4. Funes de biossntese - a membrana celular constitui o


local dos peptdeos transportadores sobre o qual se organizam
as subunidades da parede celular (ver discusso sobre a sntese
das substncias da parede celular no Cap. 6), bem como das
enzimas de biossntese da parede celular. As enzimas para a
FIGURA 2.14 Parede celular de bactria gram-positiva. Peptidogli
sntese dos fosfolipdeos tambm se localizam na membrana cano de Bacil/us megaterium, uma bactria gram-positiva. As esferas de
celular. ltex tm um dimetro de 0,25 m. (Reproduzida, com autorizao, de
Willey JM, Sherwood LM, Woolverton CJ [editors]: Prescott, Harley, and
5. Sistemas quimiotticos - as substncias atrativas e repe Klein's Microbiology, 7th ed. New York: McGraw-Hill; 2008. McGraw
lentes ligam-se a receptores especficos existentes na membrana Hill Companies, lnc.)
24 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Parede celular gram-negativa

MP Parede
Parede celular gram-positiva celular
r1-, -

..._11-1-1-
__, - - Membrana externa
------ Peptidoglicano t-t-t--- Peptidoglicano
1--- Membrana plasmtica +---- Membrana plasmtica

- -

LT

OParede celular
Espao
periplasmtico

FIGURA 2.15 Paredes bacterianas gram-positivas e gram-negativas. Envelope gram-positivo de Bacillus licheniiformis (esquerda) e micrografia
eletrnica de Aquaspirillum serpens (direita). M, peptidoglicano ou murena; ME, membrana externa; MP, membrana plasmtica; EP, espao peripls
mtico; P, parede (peptidoglicano) de bactria gram-positiva (Reproduzida, com autorizao, de T.J. Beveridge/Biological Photo Service.)

Alm de proporcionar uma proteo osmtica, a parede a maioria das bactrias gram-negativas tem o cido diaminopim
celular desempenha papel essencial na diviso celular e atua lico nessa posio, ao qual est ligado o componente lipoproteico
como modelo para a sua prpria biossntese. Vrias camadas da parede celular discutido adiante. As bactrias gram-positivas
da parede constituem os locais de importantes determinantes geralmente possuem L-lisina na posio 3; entretanto, algumas
antignicos da superfcie celular, em que um componente - podem ter o cido diaminopimlico ou outro aminocido nesta
o lipopolissacardeo das paredes celulares gram-negativas - posio.
responsvel pela atividade de endotoxina inespecfica das bac O cido diaminopimlico um elemento exclusivo das
trias gram-negativas. Em geral, a parede celular no seleti paredes celulares bacterianas, e no encontrado na parede
vamente permevel; entretanto, uma camada da parede celular celular das arqueobactrias ou dos eucariotos. o precursor
gram-negativa - a membrana externa - impede a passagem imediato da lisina na biossntese bacteriana desse aminocido
das molculas relativamente grandes (ver adiante). (Fig. 6.19). Os mutantes bacterianos cuja via de biossntese
A biossntese da parece celular e os antibiticos que interfe bloqueada antes do cido diaminopimlico crescem normal
rem nesse processo so discutidos no Captulo 6. mente quando o meio contm esse cido. Entretanto, quando
recebem apenas L-lisina, sofrem lise, visto que continuam a
crescer, porm so incapazes de formar especificamente o pep
A. Camada de peptidoglicano tidoglicano da nova parede celular.
O peptidoglicano um polmero complexo constitudo, para O fato de todas as cadeias de peptidoglicano exibirem li
fins de descrio, de trs partes: um arcabouo, composto de gaes cruzadas significa que cada camada de peptidoglicano
N-acetilglicosamina e cido N-acetilmurmico alternados; um uma nica molcula gigante. Nas bactrias gram-positivas,
conjunto de cadeias laterais idnticas de tetrapeptdeos ligadas existem at 40 camadas de peptidoglicano, constituindo at
ao cido N-acetilmurmico; e um conjunto de ligaes cruza 50% do material da parede celular; nas bactrias gram-negati
das peptdias idnticas (Fig. 2.16). O arcabouo o mesmo em vas, parece haver apenas uma ou duas camadas, constituindo
todas as espcies bacterianas; as cadeias laterais de tetrapept 5 a 10% do material da parede. As bactrias devem suas formas,
deos e as pontes cruzadas de peptdeos variam de uma esp que so caractersticas de cada espcie, estrutura de sua pa
cie para outra, e as de Staphylococcus aureus so ilustradas na rede celular.
Figura 2.16. Em muitas paredes celulares de bactrias gram
negativas, a ponte cruzada consiste em uma ligao peptdica B. Componentes especiais das paredes celulares
direta entre o grupo amino de uma cadeia lateral do cido dia
das bactrias gram-positivas
minopimlico (DAP) e o grupo carboxila da D-alanina termi
nal de uma segunda cadeia lateral. As paredes celulares da maioria das bactrias gram-positivas
Todavia, as cadeias laterais de tetrapeptdeos de todas as contm considerveis quantidades dos cidos teicoico e tei
espcies tm certas caractersticas importantes em comum. A curnico, que podem representar at 50% do peso seco da
maioria possui L-alanina na posio 1 (ligada ao cido N-ace parede e 10% do peso seco da clula total. Alm disso, algu
tilmurmico), D-glutamato ou D-glutamato substitudo na po mas paredes gram-positivas podem conter molculas de po
sio 2, e D-alanina na posio 4. A posio 3 a mais varivel: lissacardeos.
CAPTULO 2 Estrutura celular 25

A
Ligao 13-1,4 clivada pela lisozima

(N-acetil (Peptdeo do cido (N-acetil (Peptdeo do cido


glicosamina) N-acetilmurmico) glicosamina) N-acetilmurmico)

J-
6CH20H CH20H CH20H CH20H
5 --

-o J----o J--- - -- 0 J----o


H H H H
H H H
1 o o 1 o"
CH3 CH3

1 1
CH - CO CH-CO
H H H
OH
3 2
H o OH H O H

H NH- COCH3 H N H - COCH3 H N H - COCH3 H N H - COCH3


(a-NH) (a-NH)
1 1
L-Alanina L-Alanina
1 1
D-lsoglutamina D-lsoglutamina
1 1
L-Lisina L-Lisina
1 1
D-Alanina (a-COOH) D-Alanina (a-COOH)

B 1 1
[Gli]5 [Gli]5

----< GlcNAc >-----{ MurNAc >------+--< GlcNAc >------< MurNAc >------+--< GlcNAc >----

1
L-Ala L-Ala
1

1
D-1-Glu-N D-1-Glu-N
1

1
L-lis L-Lis
1

1 1
D-Ala D-Ala

[Gli]5 [Gli]5

1
L-Ala L-Ala
1

1
D-1-Glu-N D-1-Glu-N
1

1
L-Lis L-Lis
1

1 1
D-Ala D-Ala

[Gli]5 [Gli]5
1 1
FIGURA 2.16 (A) Segmento do peptidoglicano de Staphylococcus aureus. O arcabouo do polmero consiste em subunidades alternadas de
N-acetilglicosamina e cido N-acetilmurmico unidas por ligaes P14. Os resduos do cido murmico esto ligados a peptdeos curtos cuja
composio varia de uma espcie bacteriana para outra. Em algumas espcies, os resduos de L-lisina so substitudos por cido diaminopimlico,
um aminocido encontrado na natureza apenas nas paredes celulares procariticas. Observe os D-aminocidos, tambm componentes caracters
ticos das paredes celulares dos procariotos. As cadeias peptdicas do peptidoglicano apresentam ligaes cruzadas entre arcabouos paralelos de
polissacardeos, como mostra a Figura 2.168. (8) Representao esquemtica da rede de peptidoglicano formada por ligao cruzada. As pontes
compostas de cadeias peptdicas de pentaglicina ligam a a-carboxila do resduo terminal de D-alanina de uma cadeia ao grupo e-amino do resduo
de L-lisina da cadeia seguinte. A natureza da ligao cruzada varia entre diferentes espcies.
26 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

1 . Acidos teicoico e teicurnico a expresso cidos teicoi


- N-acetilgalactosamina ou succinato. Uma espcie pode exibir
cos abrange toda a parede, membrana ou polmeros capsulares mais de um tipo de molcula de acar alm da D-alanina; nesse
que contm resduos de glicerolfosfato ou ribitol fosfato. Estes caso, no se sabe ao certo se os diferentes acares ocorrem nas
polialcois so conectados por ligaes fosfodister e geralmen mesmas molculas ou em molculas distintas do cido teicoi
te possuem outros acares e D-alanina ligados (Fig. 2.17A). co. A composio do cido teicoico, formado por determinada
Por serem relativamente carregados, os cidos teicoicos so espcie bacteriana, pode variar de acordo com a composio
responsveis, em parte, pela carga negativa da superfcie celu do meio de crescimento.
lar como um todo. Existem dois tipos de cido teicoico: o cido Os cidos teicoicos constituem os principais antgenos
teicoico da parede (wall teichoic acid WTA), que apresen
- de superfcie das espcies de bactrias gram-positivas que os
ta ligao covalente com o peptidoglicano; e o cido teicoico possuem, e sua acessibilidade aos anticorpos foi tomada como
da membrana (cido lipoteicoico), ligado de modo covalente evidncia de que eles ocupam a superfcie externa do peptido
ao glicolipdeo da membrana. Em virtude de os dois tipos de glicano. Entretanto, sua atividade frequentemente mostra-se
cido teicoico da membrana estarem intimamente associados aumentada pela digesto parcial do peptidoglicano; sendo as
aos lipdeos, so chamados de cidos lipoteicoicos (lipotei sim, muito do cido teicoico pode ficar situado entre a membra
choic acids LTA). Junto com o peptidoglicano, o WTA e o
- na citoplasmtica e a camada de peptidoglicano, estendendo-se
LTA fazem uma rede ou matriz polianinica que proporciona possivelmente atravs dos poros da ltima (Fig. 2.17B). Nos
funes relacionadas com a elasticidade, a porosidade, a fora pneumococos (Streptococcus pneumoniae), os cidos teicoicos
tensional e propriedades eletrostticas do envelope. Embora suportam determinantes antignicos chamados antgenos de
nem todas as bactrias possuam WTA e LTA convencionais, Forssman. No Streptococcus pyogenes, o LTA est associado
as que no tm estes polmeros geralmente tm similares para protena M que se projeta da membrana celular atravs da ca
tais funes. mada do peptidoglicano. As longas molculas da protena M
Os cidos teicoicos contm, em sua maioria, grandes quan juntas com o LTA formam microfibrilas que facilitam a ligao
tidades de D-alanina, geralmente ligada posio 2 ou 3 do gli do S. pyogenes s clulas animais.
cerol, ou posio 3 ou 4 do ribitol. Todavia, em alguns dos Os cidos teicurnicos so polmeros semelhantes, porm
cidos teicoicos mais complexos, a D-alanina liga-se a um dos as unidades repetidas incluem os cidos dos acares (p. ex.,
resduos de acar. Alm da D-alanina, outras molculas podem cidos N-acetilmanosurnico ou D-glicosurnico) em lugar
estar ligadas aos grupos hidroxila livres do glicerol e do ribitol, dos cidos fosfricos; so sintetizados em lugar dos cidos tei
como, por exemplo, glicose, galactose, N-acetilglicosamina, coicos quando o fosfato constitui um fator limitante.

1
cido teicoico cido lipoteicoico

1
o

1
O= P - o-

1
o
CH2
1
H- C-0-R
1
o
e:
<O
CH2
o
Cl
-

1 o
'O
o .

1
O= P - o-
1
o
1
CH2 Espao
1 periplasmtico
H-C-0-R
1
CH2
1
o
1
O= P - o-
1
o
1 B

A
FIGURA 2.17 (A) Estrutura do cido teicoico. O segmento de um cido teicoico feito de glicerol, fosfato e uma cadeia lateral, R. R pode represen
tar o-alanina, glicose ou outras molculas. (8) Acido teicoico e lipoteicoico da parede celular gram-positiva. (Reproduzida, com autorizao, de Willey
JM, Sherwood LM, Woolverton CJ (editors): Prescott, Harley, and Klein's Microbiology, 7th ed., New York: McGraw-Hill; 2008.)
CAPTULO 2 Estrutura celular 27

2. Polissacardeos a hidrlise das paredes das clulas gram


- os fosfolipdeos do folheto externo contm um componente
positivas produz, em determinadas espcies, acares neutros, distintivo, um lipopolissacardeo (LPS). Em consequncia, os
como a manose, arabinose, ramnose e glicosamina, bem como folhetos dessa membrana so assimtricos, e as propriedades
acares cidos, como os cidos glicurnico e manurnico. dessa dupla camada diferem de modo considervel daquelas
Sugeriu-se que esses acares existem como subunidades dos de uma membrana biolgica simtrica, como a membrana
polissacardeos na parede celular; entretanto, a descoberta de celular.
que os cidos teicoico e teicurnico podem conter uma varie A capacidade da membrana externa de excluir molcu
dade de acares (Fig. 2.17A) faz que a verdadeira origem des las hidrofbicas constitui uma caracterstica peculiar entre as
ses acares permanea incerta. membranas biolgicas e serve para proteger a clula (no ca
so das bactrias entricas) das substncias deletrias, como os
sais biliares. Em virtude de sua natureza lipdica, seria de se
C. Componentes especiais das paredes celulares
esperar que a membrana externa tambm exclusse as molcu
dos microrganismos gram-negativos las hidroflicas. Entretanto, a membrana externa possui canais
As paredes celulares dos gram-negativos contm trs compo especiais, constitudos por molculas proteicas denominadas
nentes localizados fora da camada de peptidoglicano: lipopro porinas, que permitem a difuso passiva dos compostos hi
tena, membrana externa e lipopolissacardeos (Fig. 2.18). droflicos de baixo peso molecular, tais como acares, ami
nocidos e certos ons. As grandes molculas de antibiticos
1 . Membrana externa -a membrana externa quimica penetram de modo relativamente lento atravs da membrana
mente distinta de todas as outras membranas biolgicas. Forma externa, contribuindo para a resistncia relativamente alta das
uma estrutura em dupla camada; seu folheto interno asseme bactrias gram-negativas aos antibiticos. A permeabilidade
lha-se, em sua composio, ao da membrana celular, enquanto da membrana externa varia bastante de uma espcie bacteriana

_L
......,..
_ . ___ Antgeno O
repetido
--:;:
.. GlcNAc
Lipopolis- ..
Cerne
Glicose
sacardeo externo
.. Galactose
.. Heptose
Cerne
Porina interno
.. KOO

Lipdeo A
Membrana externa

Lipoprotena
y- Peptidoglicano

Periplasma
_. MOO

Fosfolipdeos
Membrana interna

Protenas
Citoplasma

FIGURA 2.18 Representao molecular da parede de uma bactria gram-negativa. As formas ovais e os retngulares representam resduos de
acar e as circulares indicam os grupos polares dos glicerofosfolipdeos (fosfatidiletanolamina e fosfatidilglicerol). (MOO, oligossacardeos deriva
dos da membrana.) A regio do cerne mostrada a da Escherichia coli K-12, cepa que normalmente no contm um antgeno O repetido, a no ser
que seja transformada com um plasmdeo apropriado. (Reproduzida, com autorizao, de Raetz CRH: Bacterial endotoxins: Extraordinary lipids that
activate eucaryotic signal transduction. J Bacteriol 1993;175:5745.)
28 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

gram-negativa para outra. Assim, por exemplo, em P. aerugi responsvel pela difuso transmembrana dos nucleosdeos e
nosa, extremamente resistente aos antibacterianos, a membra de alguns aminocidos. A protena LamB permite a passagem
na externa 100 vezes menos permevel do que a da E. coli. de outros solutos; entretanto, sua relativa especificidade pode
As principais protenas da membrana externa, denomina refletir interaes fracas de solutos com locais de configurao
das de acordo com os genes que as codificam, foram classifica especfica no interior do canal.
das em diversas categorias funcionais, com base nos mutantes A OmpA uma protena abundante na membrana exter
em que esto ausentes, bem como em experimentos nos quais na. Participa na ancoragem da membrana externa camada de
as protenas purificadas foram reconstitudas em membranas peptidoglicano como receptor de vrios bacterifagos, e atua
artificiais. As porinas, exemplificadas por OmpC, D e F, assim como receptor do pilus sexual na conjugao bacteriana me
como PhoE da E. coli e da Salmonella typhimurium*, so prote diada pelo fator F (Cap. 7).
nas trimricas que penetram em ambas as faces da membrana A membrana externa tambm contm um conjunto de
externa (Fig. 2.19). Formam poros relativamente inespecficos protenas menos abundantes, envolvidas no transporte de mo
que permitem a difuso livre de pequenos solutos hidroflicos lculas especficas, como a vitamina B12 e complexos de ferro
atravs da membrana. As porinas de espcies diferentes pos siderforos. Essas protenas exibem alta afmidade pelos seus
suem diferentes limites de excluso que variam desde pesos substratos, e provvel que atuem como os sistemas clssicos
moleculares de cerca de 600 na E. coli e na S. typhimurium at de transporte da membrana interna (citoplasmtica). A funo
mais de 3.000 na P. aeruginosa. adequada dessas protenas requer energia acoplada atravs de
Os membros de um segundo grupo de protenas da mem uma protena denominada TonB. Outras protenas de menos
brana externa, que se assemelham em muitos aspectos s po importncia incluem um nmero limitado de enzimas, entre
rinas, so exemplificados por LamB e Tsx. LamB, uma porina elas fosfolipases e proteases.
induzvel que tambm o receptor do bacterifago lambda, A topologia das principais protenas da membrana exter
responde pela maior parte da difuso transmembrana da mal na, com base em estudos de ligao cruzada e na anlise de
tose e da maltodextrina; Tsx, o receptor do bacterifago T6, relaes funcionais, apresentada na Figura 2.18. A membra
na externa est conectada tanto camada do peptidoglicano
* N. de RT. A nomenclatura mais atual seria: Salmonella enterica subes quanto membrana citoplasmtica. A conexo com a cama
pcie enterica sorovar Typhimurium ou Salmonella Typhimurium. O g da do peptidoglicano mediada principalmente pela lipopro
nero Salmonella, que apresenta uma taxonomia extremamente complexa, tena da membrana externa (ver adiante). Cerca de 33% das
formada por 3 espcies (S. enterica, S. bongori e S. subterranea). J a
espcie S. enterica apresenta seis subespcies (enterica, salamae, arizonae, molculas de lipoprotena apresentam ligao covalente com o
diarizonae, houtanae e indica), alm de mais de 2.460 sorovares, que so peptidoglicano, e ajudam a manter as duas estruturas unidas.
escritos com letra maiscula e no em itlico. Uma associao no covalente de algumas das porinas com a

A B

FIGURA 2.19 (A) Dobra geral de um monmero de porina (porina OmpF de Escherichia coli). A grande estrutura oca em barril formada pelo
arranjo antiparalelo de 16 fitas As fitas so ligadas por alas curtas ou giros regulares na borda periplasmtica (parte inferior), e alas irregulares
longas esto voltadas para o exterior da clula (parte superior). A ala interna, que liga os filamentos 5 e 6, estendendo-se no interior do barril, est
representada em escuro. As terminaes da cadeia esto indicadas. A superfcie mais prxima do observador envolvida em contatos de subuni
dades. (8) Representao esquemtica do trmero OmpF. Vista do espao extracelular ao longo do eixo de simetria molecular tripla. (Reproduzida,
com autorizao, de Schirmer T: General and specific porins from bacterial outer membranes. J Struct Bio/ 1998;121:101 .)
CAPTULO 2 Estrutura celular 29

camada de peptidoglicano desempenha um papel menor na Os outros cidos graxos, juntamente com grupos substituintes
conexo da membrana externa com essa estrutura. As prote nos fosfatos, variam de acordo com a espcie bacteriana.
nas da membrana externa so sintetizadas em ribossomos li O cerne do polissacardeo, mostrado nas Figuras 2.20A e B,
gados superfcie citoplasmtica da membrana interna; ainda semelhante em todas as espcies de bactrias gram-negativas
no foi estabelecido como essas protenas so transferidas para que possuem LPS e inclui dois acares caractersticos, o cido
a membrana externa, porm uma hiptese aventada sugere que cetodesoxioctanoico (KDO) e uma heptose. Todavia, cada es
a transferncia ocorre em zonas de adeso entre a membrana pcie contm uma unidade repetida peculiar, como, por exem
citoplasmtica e a membrana externa, visveis microscopia plo, o da Salmonella que est ilustrada na Figura 2.20A. Em
eletrnica. Infelizmente, as evidncias de tais reas de adeso geral, as unidades de repetio consistem em trissacardeos li
neares ou em tetra ou pentassacardeos ramificados. A unidade
tm sido difceis de ser demonstradas.
repetida classificada como antgeno O. As cadeias hidroflicas
de carboidrato do antgeno O cobrem a superfcie bacteriana e
2. Lipopolissacardeo (LPS) o LPS das paredes celulares
-

excluem os componentes hidrofbicos.


gram-negativas consiste em um glicolipdeo complexo, deno
As molculas de LPS de carga negativa so ligadas de modo
minado lipdeo A, ao qual est ligado um polissacardeo cons 2 2
no covalente por ctions divalentes (i. e., Ca e Mg +), forman
+
titudo de um cerne e uma srie terminal de unidades repetidas
do pontes cruzadas; isso estabiliza a membrana e proporciona
(Fig. 2.20A). O componente do lipdeo A encontra-se embebi uma barreira contra as molculas hidrofbicas. A remoo dos
do no folheto externo da membrana, ancorando o LPS. O LPS ctions divalentes com agentes quelantes ou seu deslocamento
sintetizado sobre a membrana citoplasmtica e transportado por antibiticos policatinicos, como as polimixinas e os ami
at sua posio exterior final. A presena do LPS necessria noglicosdeos, torna a membrana externa permevel as gran
para a funo de muitas protenas da membrana externa. des molculas hidrofbicas.
O lipdeo A consiste em unidades dissacardicas de glicosa O LPS, extremamente txico para os animais, foi denomi
mina fosforilada, s quais esto ligados vrios cidos graxos de nado endotoxina das bactrias gram-negativas, por estar firme
cadeia longa (Fig. 2.20). O cido -hidroximirstico, um cido mente ligado superfcie celular, sendo liberado apenas quando
graxo de Cl4, est sempre presente e exclusivo desse lipdeo. as clulas sofrem lise. Quando o LPS clivado em lipdeo A e

Man- Abe
1
Rha
1
Gal n
1 1--- Cadeia
Man- Abe lateral O
1
Rha
1
Gal
1
Glc- NAG
1
Gal
1
Glc- Gal
1
Hep
1
Hep- - 8 - etanolamina
1
KDO
1
KDO- KDO- - etanolamina

GlcN GlcN -

- Acido graxo
'

A B

FIGURA 2.20 Estrutura de lipopolissacardeo (A) Lipopolissacardeo de Salmonella. Este diagrama levemente simplificado ilustra uma forma
de LPS. (Abe, abequose; Gal, galactose; GlcN, glicosamina; Hep, heptulose; KDO, 2 ceto-3-desoxioctonato; Man, manose; NAG, N-acetilglicosamina;
P, fosfato; Rha, L-ramnose.) O lipdeo A est inserido na membrana externa. (8) Modelo molecular de um lipopolissacardeo de Escherichia coli. O lipdeo
A e o cerne polissacardeo esto em linha reta; a cadeia lateral O est dobrada em ngulo neste modelo. (Reproduzida, com autorizao, de Willey VM,
Sherwood LM, Woolverton CJ: Prescott, Harley, and Klein's Microbiology, 7th ed., New York: McGraw-Hill; 2008. The McGraw-Hill Companies, lnc.)
30 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

polissacardeo, toda a toxicidade est associada ao lipdeo A. O 5'-nucleotidase) que degradam substratos no transportveis
antgeno O altamente imunognico em animais vertebrados. em formas passveis de transporte e enzimas de desoxificao
A especificidade antignica, apresentada pelo antgeno O , de (p. ex., betalactamase e aminoglicosdeo fosforilase), que ina
corrente de sua alta variabilidade entre as espcies e at mesmo tivam determinados antibiticos. O periplasma tambm con
amostras dentro de uma mesma espcie bacteriana. O nmero tm altas concentraes de polmeros altamente ramificados de
de tipos antignicos possveis muito grande: cerca de 1.000 fo D-glicose com 8 a 10 resduos de comprimento, variadamente
ram reconhecidos apenas na Salmonella. substitudos por resduos de glicerolfosfato e fosfatidiletanola
Nem todas as bactrias gram-negativas possuem o LPS na mina; alguns contm steres de 0-succinil. Esses, denominados
membrana externa composto de um nmero varivel de uni oligossacardeos derivados de membrana, parecem desempe
dades repetidas de oligossacardeos (Fig. 2.20); os glicolipdeos nhar algum papel na osmorregulao, visto que as clulas cul
da membrana externa e bactrias que colonizam as mucosas tivadas em meio de baixa osmolaridade aumentam 16 vezes a
(p. ex., Neisseria meningitidis, N. gonorrhoeae, Haemophilus sntese desses compostos.
influenzae e Haemophilus ducreyi) possuem glicanos multian
tenares (i. e., ramificados) relativamente curtos. Esses glicolip
D. Parede de clulas lcool-acidorresistentes
deos menores foram comparados com as estruturas truncadas
do " tipo R" do LPS, que no tm antgenos O e so produzidas Algumas bactrias, notadamente o bacilo da tuberculose (M. tu
por mutantes de bactrias entricas, como a E. coli. Entretanto, berculosis) e bactrias semelhantes, possuem paredes celulares
suas estruturas assemelham-se mais estreitamente a dos glico que contm uma grande quantidade de ceras, hidrocarbonetos
esfingolipdeos das membranas celulares dos mamferos, sen complexos ramificados (70 a 90 carbonos de extenso), conhe
do mais apropriadamente denominadas lipo-oligossacardeos cidos como cidos miclicos. A parede celular composta de
(LOS). Estas molculas exibem extensa diversidade antignica peptidoglicano e de uma bicamada lipdica assimtrica; o fo
e estrutural mesmo dentro de uma nica cepa. O LOS um lheto interno contm cidos miclicos ligados ao arabinogalac
importante fator de virulncia. Foram identificados eptopos tano, e o folheto externo contm outros lipdeos. Esta uma
no LOS que imitam estruturas do hospedeiro e podem tornar bicamada lipdica altamente ordenada, na qual protenas esto
esses microrganismos capazes de escapar da resposta imunol embebidas, formando poros que contm gua, atravs dos quais
gica do hospedeiro. Alguns LOS (p. ex., os da N. gonorrhoeae, os nutrientes e certos medicamentos podem passar lentamente.
da N. meningitidis e da H. ducreyi) possuem um resduo de Alguns compostos tambm podem penetrar o domnio lipdi
N-acetilactosamina terminal (Gal-1 4-GlcNAc) que se as co da parede celular, embora de maneira lenta. Essa estrutura
semelha, do ponto de vista imunoqumico, ao precursor do an hidrofbica torna essas bactrias resistentes a muitos produtos
tgeno i dos eritrcitos humanos. Na presena de uma enzima qumicos, como detergentes e cidos fortes. Se um corante for
bacteriana denominada sialiltransferase e de um substrato do introduzido nessas clulas por meio de um leve aquecimento ou
hospedeiro ou bacteriano (cido citidina monofosfo-N-acetil tratamento com detergentes, no pode ser removido por cido
neuramnico, CMP-NANA), o resduo de N-acetilactosamina clordrico diludo, como em outras bactrias. Dessa forma, tais
sofre sialilao. Essa sialilao, que ocorre in vivo, confere ao organismos so chamados de lcool-acidorresistentes. A per
microrganismo as vantagens ambientais do mimetismo mole meabilidade da parede celular s molculas hidroflicas 100 a
cular de um antgeno do hospedeiro e do mascaramento biol 1.000 vezes menor do que para a E. coli e pode ser responsvel
gico proporcionado provavelmente pelos cidos silicos. pela lenta taxa de crescimento observada nas micobactrias.

3. Lipoprotena as molculas de uma lipoprotena inco


E. Parede celular das arqueobactrias
-

mum entrelaam-se entre a membrana externa e as camadas


do peptidoglicano (Fig. 2.18). A lipoprotena contm 57 ami As arqueobactrias no possuem parede celular como as bac
nocidos, representando repeties de uma sequncia de trias. Algumas possuem uma simples camada S (ver adiante)
15 aminocidos; um peptdeo ligado aos resduos do DAP na geralmente formada por glicoprotenas. Algumas arqueobac
cadeia lateral tetrapeptdica do peptidoglicano. O componente trias possuem uma parede celular rgida, composta por po
lipdico consiste em um diglicerdeo de tioter ligado a uma lissacardeos ou um peptidoglicano chamado pseudomurena.
cistena terminal, inserido de modo no covalente na membra A pseudomurena difere do peptidoglicano das bactrias por
na externa. A lipoprotena , numericamente, a protena mais terem L-aminocidos no lugar de D-aminocidos e unidades
abundante de clulas gram-negativas (cerca de 700.000 mol dissacardicas com uma ligao a.13 no lugar de 14. As
culas por clula). Sua funo (baseada no comportamento de arqueobactrias que possuem pseudomurena na parede celu
mutantes deficientes em lipoprotena) estabilizar a membra lar so gram-positivas.
na externa e ancor-la na camada do peptidoglicano.

F. Camadas cristalinas de superfcie


4. O espao periplasmtico - o espao entre a membrana
interna e a externa, denominado espao periplasmtico, con Muitas bactrias, gram-positivas e negativas, bem como arqueo
tm a camada de peptidoglicano e uma soluo de protenas bactrias, possuem uma camada em trelia, bidimensional e
semelhante a um gel. O espao periplasmtico representa cerca cristalina de molculas de protenas ou glicoprotenas (camada
de 20 a 40% do volume celular, o que bastante significativo. S) como o mais externo componente do envelope celular. Nas
As protenas periplasmticas incluem protenas de ligao pa bactrias gram-positivas e negativas, esta estrutura encontra-se,
ra substratos especficos (p. ex., aminocidos, acares, vita algumas vezes, em densas molculas; em algumas arqueobact
minas e ons), enzimas hidrolticas (p. ex., fosfatase alcalina e rias, est somente na camada externa da membrana celular.
CAPTULO 2 Estrutura celular 31

As camadas S geralmente so compostas de um nico tipo As prprias bactrias possuem um nmero de autolisinas,
de molcula, s vezes com carboidratos ligados. As molculas enzimas hidrolticas que atacam o peptidoglicano, como as
isoladas so capazes de se autoagrupar, ou seja, fazem camadas muramidases, glicosaminidases, endopeptidases e carboxipep
similares ou idnticas quelas presentes nas clulas. As protenas tidases. Estas enzimas catalisam a reciclagem ou a degradao
da camada S so resistentes ao das enzimas proteolticas e do peptidoglicano na bactria; presume-se que participem do
aos agentes desnaturantes. A funo da camada S incerta, mas crescimento da parede celular, da reciclagem e da diviso celu
provavelmente tem ao protetora; em alguns casos, foi demons lares, porm sua atividade mais evidente durante a dissoluo
trado que protege a clula da ao das enzimas de degradao da das clulas mortas (autlise).
parede celular, da invaso por Bdellovibrio bacteriovorous (um As enzimas que degradam as paredes das clulas bacteria
predador de bactrias) e dos bacterifagos; tambm desempenha nas tambm so encontradas nas clulas que digerem bactrias
um papel na manuteno da forma celular em algumas espcies (p. ex., os protozorios e as clulas fagocticas dos animais su
de arqueobactrias, e pode estar envolvida na adeso da clula s periores).
superfcies epidrmicas do hospedeiro.

H. Crescimento da parede celular


G. Enzimas que atacam a parede celular
A sntese da parede celular necessria para a diviso celular;
A ligao 1 4 da estrutura do peptidoglicano hidrolisada entretanto, a incorporao de novo material da parede celular
pela enzima lisozima (Fig. 2.16), encontrada nas secrees ani varia de acordo com a forma da bactria. As bactrias em forma
mais (na lgrima, na saliva e nas secrees nasais), bem como de basto (p. ex., E. coli, Bacillus subtilis) possuem dois modos
na clara do ovo. Bactrias gram-positivas tratadas com lisozi de sntese da parede celular; o novo peptidoglicano inserido ao
ma em meios de baixa fora osmtica sofrem lise; se a fora os longo de uma via helicoidal que leva ao alongamento da clula,
mtica do meio aumentada para equilibrar-se com a presso e inserido em um anel em volta do futuro local de diviso, le
osmtica da clula, so liberados corpos esfricos livres, cha vando formao de um septo de diviso. As clulas cocoides,
mados protoplastos. A membrana externa da parede celular como o S. aureus, parecem no ter um modo de alongamento na
das bactrias gram-negativas previne o acesso da lisozima, a sntese da parede celular. Em lugar disso, o novo peptidoglicano
menos que seja rompida por ao de um agente, como o cido inserido somente no local de diviso. Uma terceira forma de
etilenodiaminotetractico (EDTA), um composto quelante de crescimento da parede celular exemplificada por S. pneumo
ctions divalentes; em meio osmoticamente protegido, as c niae, que no um coco verdadeiro, pois no so totalmente re
lulas tratadas com EDTA-lisozima formam esferoplastos que dondas, mas tem a forma de uma bola de rgbi. O S. pneumoniae
ainda possuem remanescentes do complexo da parede gram sintetiza a parede celular no apenas pelo septo, mas tambm
negativa, inclusive a membrana externa. pelos chamados "anis equatoriais" (Fig. 2.21).

Bacil/us subtilis ou Escherichia coli Streptococcus pneumoniae Staphy/ococcus aureus

FIGURA 2.21 Incorporao de nova parede celular em bactrias de diferentes formatos. Bastonetes, como o Bacillus subtilis ou Escherichia coli,
tm dois modos de sntese da parede celular: o novo peptidoglicano inserido ao longo de uma via helicoidal (A), levando a uma elongao lateral
da parede, e inserido em um anel em volta do futuro septo de diviso, o que leva formao de um septo de diviso (8). As clulas do Streptococcus
pneumoniae tm a forma de uma bola de rgbi e alongam-se pela insero do novo material na parede celular, nos chamados anis equatoriais (A),
que correspondem a um crescimento extra da parede celular que engloba a clula. Um anel inicial duplicado, e os dois anis resultantes so pro
gressivamente separados, delimitando os futuros septos da diviso das clulas-filhas. Em seguida, o septo de diviso sintetizado no meio da clula
(8). As clulas arredondadas, como o Staphylococcus aureus, parecem no possuir um modo de alongamento durante a sntese da parede celular.
Em lugar disso, o novo peptidoglicano inserido somente no septo de diviso (8). (Reproduzida, com autorizao, de Scheffers DJ and Pinho MG:
Bacterial cell wall synthesis: new insights from localization studies. Microbiol Mo/ Biol Rev 2005;69:585.)
32 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

1. Protoplastos, esferoplastos e formas L Os micoplasmas perdem o alvo para os agentes antimicrobianos


que atuam na parede celular (p. ex., penicilinas e cefalospori
A remoo da parede bacteriana pode ser efetuada por hidr
nas) e, por conseguinte, so resistentes a eles. Algumas - como
lise om a lisozima ou por bloqueio da biossntese do pepti
o Mycoplasma pneumoniae, um agente da pneumonia - con
doglicano com um antibitico, como a penicilina. Em meios
tm esteris em suas membranas. A diferena entre as formas L
osmoticamente protegidos, esses tipos de tratamento liberam
e os micoplasmas que, quando possvel a murena (peptido
os protoplastos das clulas gram-positivas e esferoplastos
glicano) ser refeita, somente as formas L revertem sua forma
(que retm a membrana externa e o peptidoglicano aprisiona
bacteriana original, enquanto os micoplasmas nunca o fazem.
do) das clulas gram-negativas.
Se tais clulas forem capazes de crescer e sofrer diviso
denominam-se formas L. difcil obter a cultura das formas L : Cpsula e glicoclice
que em geral exigem um meio solidificado com gar bem co
Muitas bactrias sintetizam grandes quantidades de polmeros
mo uma fora osmtica adequada. As formas L so produzidas
extracelulares quando crescem em seus ambientes naturais.
mais facilmente com penicilina do que com lisozima, sugerin
Com uma exceo conhecida (as cpsulas de cido poli-n
do a necessidade de peptidoglicano residual.
glutmico do Bacillus anthracis e do Bacillus licheniformis), o
Algumas formas L podem reverter sua forma bacilar nor
material extracelular consiste em polissacardeo (Quadro 2.1).
mal aps a remoo do estmulo indutor. Por conseguinte, so
As denominaes cpsula e camada de muco so usadas fre
capazes de reiniciar a sntese normal da parede celular. Outras
quentemente para descrever as camadas de polissacardeo; um
so estveis e nunca sofrem reverso. Nesse caso, o fator que
determina sua capacidade de reverso pode tambm consistir

tro ?1ais clusivo, glicoclice, tambm utilizado. O glico
calice e definido como um material polissacardico ligado ao
na presena de peptidoglicano residual, que normalmente atua
lado exterior da clula. Uma camada condensada e bem defi
como modelo para a sua prpria biossntese.
nida, cirundano estreitamente a clula, que exclui partculas,
Algumas espcies bacterianas produzem formas L esponta
como a tinta da India,* denominada cpsula (Fig. 2.23). Se o
nene. A formao de formas L, espontnea ou induzida por
glicoclice estiver associado, de maneira frouxa, clula e no
antibioticos no hospedeiro, pode provocar infeces crnicas,
excluir partculas referido como camada de muco. O polme
favrescend? a persistncia desses microrganismos em regies
ro extracelular sintetizado por enzimas localizadas na super
mais protegidas do corpo. Como as infeces pelas formas L so
fcie da clula bacteriana. Por exemplo, o Streptococcus mutans
relativamente resistentes antibioticoterapia, representam pro
utiliza duas enzimas - a glicosiltransferase e a frutosiltrans
blemas especiais em quimioterapia. Sua reverso para a forma
fease - para sintetizar os dextranos de cadeia longa (poli-D
bacilar pode resultar em recidivas da infeco manifesta.
glicose) e levanos (poli-n-frutose) a partir da sacarose. Estes
polmeros so denominados homopolmeros. Os polmeros
J. Micoplasmas que contm mais de um tipo de monossacardeo denominam
se heteropolimeros.
Os micoplasmas so bactrias que no possuem parede ce
A cpsula contribui para a capacidade de invaso das bac
lular nem peptidoglicano (Fig. 2.22). Existem tambm ar
trias patognicas - as clulas encapsuladas ficam protegidas
queobactrias sem parede, mas estas no tm sido to bem
da fagocitose, a no ser que sejam recobertas por anticorpo an
estudadas. Anlises genmicas colocam os micoplasmas prxi
ticapsular. O glicoclice desempenha algum papel na aderncia
mo das bactrias gram-positivas, das quais podem ter derivado.
das bactrias s superfcies em seu meio ambiente, inclusive as
clulas dos hospedeiros vegetais e animais. O S. mutans, por
exemplo, deve a seu glicoclice a capacidade de aderir firme
mente ao esmalte dos dentes. As clulas bacterianas da mesma
ecie ou de espcies diferentes ficam aprisionadas no glico
clice, que forma a camada conhecida como placa na superf
cie dentria; os produtos cidos excretados por essas bactrias
provocam cries dentrias (Cap. 11). O papel essencial do gli
coclice em tal processo - e sua formao a partir da sacarose
- explica a correlao da crie dentria com o consumo de
sacarose pela populao humana. Devido ligao entre as ca
madas de polissacardeos externas e quantidades significativas
de gua, a camada do glicoclice tambm pode desempenhar
um papel na resistncia dessecao.

Flagelos
A. Estrutura

1 2 m 1 Os flagelos das bactrias so apndices piliformes compostos


totalmente de protena (com 12 a 30 nm de dimetro). Trata-se
FIGURA 2.22 Mycoplasma pneumoniae. As clulas variam em sua
forma em virtude da falta de parede celular. (Cortesia do Dr. Edwin
S. Boatman.) * N. de R.T. Tambm conhecida como tinta da China ou nanquim.
CAPTULO 2 Estrutura celular 33

QUADRO 2.1 Composio qumica do polmero extracelular em algumas bactrias


Organismo Polmero Subunidades qumicas

Bacillus anthracis Polipeptdeo Acido o-glutmico

Enterobacter aerogenes Polissacardeo complexo Glicose, fucose, cido glicurnico

Haemophi/us influenzae Sorogrupo B Ribose, ribitol, fosfato

Neisseria meningitidis Homopolmeros e heteropolmeros, como, p. ex.


Sorogrupo A N-acetilmanosamina fosfato parcialmente 0-acetilado
Sorogrupo B Acido N-acetilneuramnico (cido silico)
Sorogrupo C Acido silico acetilado
Sorogrupo 135 Galactose, cido silico

Pseudomonas aeruginosa Alginato Acido o-manurnico, cido L-glicurnico

Streptococcus pneumoniae Polissacardeo complexo (muitos tipos), como, p. ex.


(pneumococo) Tipo li Ramnose, glicose, cido glicurnico
Tipo Ili Glicose, cido glicurnico
Tipo VI Galactose, glicose, ramnose
Tipo XIV Galactose, glicose, N-acetilglicosamina
Tipo XVIII Ramnose, glicose

Streptococcus pyogenes (grupo A) Acido hialurnico Acido glicurnico, N-acetilglicosamina

Streptococcus sa/ivarius Levano Frutose

A B
FIGURA 2.23 Cpsulas bacterianas. (A) Bacil/us anthracis, colorao de cpsula M'Faydean, crescimento a 35( em sangue de cavalo desfibrina
do. (8) Demonstrao da presena de cpsula no Bacillus anthracis por colorao negativa com tinta da fndia. Este mtodo til para melhorar
a visualizao das bactrias encapsuladas em amostras clnicas, tais como sangue, garrafas de cultura de sangue (hemoculturas) ou lquido cere
brospinal. (CDC, cortesia de Larry Stauffer, Oregon State Public Health Laboratory.)

dos rgos de locomoo das formas que os possuem. So co constitudos de dois tipos de flagelina; entretanto, na maioria
nhecidos trs tipos de disposio: monotrquio (flagelo polar dos casos observa-se apenas um tipo. O flagelo formado pela
nico), lofotrquio (inmeros flagelos polares) e peritrquio agregao de subunidades, formando uma estrutura helicoidal.
(flagelos distribudos por toda a superfcie da clula). Os trs Se os flagelos so removidos pela agitao mecnica de uma
tipos esto ilustrados na Figura 2.24. suspenso de bactrias, verifica-se a rpida formao de novos
O flagelo bacteriano constitudo de vrios milhares de flagelos mediante a sntese, agregao e extruso de subunida
molculas de uma subunidade proteica, denominada flagelina. des de flagelina; a motilidade restaurada em 3 a 6 min. As
Em alguns microrganismos (p. ex., Caulobacter), os flagelos so flagelinas de diferentes espcies bacterianas presumivelmente
34 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

FIGURA 2.24 Tipos de flagelo bacteriano. (A) Vibrio metchnikovii, uma bactria monotrquia (ampliada 7.500 vezes). (Reproduzida, com autoriza
o, de van lterson W: Biochim Biophys Acta 1947;1:527.) (8) Micrografia eletrnica de Spirillum serpens, mostrando a flagelao lofotrquia (ampliada
9.000 vezes). (Reproduzida, com autorizao, de van lterson W: Biochim Biophys Acta 1947;1:527.) (C) Micrografia eletrnica de Proteus vulgaris, mos
trando a flagelao peritrquia (ampliada 9.000 vezes). Observe os grnulos basais. (Reproduzida, com autorizao, de Houwink A, van lterson W:
Electron microscopical observations on bacterial cytology; a study on flagellation Biochim Biophys Acta 1950;5:1 O.)

diferem umas das outras na sua estrutura primria; so alta que parece atuar como articulao universal entre o motor
mente antignicas (antgenos H), e algumas das respostas na estrutura basal e o flagelo. O corpsculo basal sustenta
imunolgicas infeco so dirigidas contra essas protenas. um conjunto de anis, um par nas bactrias gram-positivas e
O flagelo est fixado ao corpo celular da bactria por uma dois pares nas gram-negativas. A Figura 2.25 mostra um dia
estrutura complexa constituda de um gancho e um corpsculo grama representativo da estrutura gram-negativa; os anis de
basal. O gancho consiste em uma estrutura curta e recurvada, signados por L e P esto ausentes nas clulas gram-positivas.

""'
A B

Filamento Filamento
(FliC) cap (FliD)
Filamento
20 nm Hlice

Gancho
(Fig E)
Anel L (FlgH)
Casquilho
Corpo Membrana externa
Espao periplsmico
cu: -_?
_ _
Anel P (Flgl)
basal
O
e:::.'!!
---- Bastonete distal (Flgl)
Membrana celular Eixo de
[) Bastonete proximal
/ \
transmisso
\ Motor Q1 D (FliE,FlgB, FlgC, FlgF)
Interruptor
Aparato de
Interruptor
(FliG, FliM, FliN) CJ: :CJ Anel MS (FliF) } Placa de
exportao
Exportao --- 1 ) montagem
(FlhA, FliH, Flil)? Motor (MotA, MotB)

FIGURA 2.25 (A) Estrutura geral do flagelo de uma bactria gram-negativa, como Escherichia coli ou Salmonella Typhimurium. O complexo fila
mento-gancho-corpsculo basal foi isolado e extensamente caracterizado. A localizao do aparelho de exportao no foi ainda demonstrada.
(8) Diagrama fragmentado do flagelo, mostrando as subestruturas e protenas que o compem. A protena FliF responsvel pela caracterstica dos
anis M e S, bem como do colar da subestrutura mostrada, denominada em conjunto anel MS. A localizao de FliE com relao ao anel MS e a do
bastonete, bem como a ordem das protenas FlgB, FlgC e FlgF dentro do bastonete proximal, no so conhecidas. (Extrada de Macnab RM: Genetics
and biogenesis of bacterial flagella. Annu Rev Genet 1992;26:131. Reproduzida, com autorizao, de Annual Review ofGenetics, Volume. 26. 1992 by
Annual Reviews.)
CAPTULO 2 Estrutura celular 35

A complexidade do flagelo bacteriano revelada por estudos isolados e fechados sofrem rotao normal quando o meio
genticos, mostrando que mais de 40 produtos gnicos esto contm um substrato apropriado respirao, ou quando se
envolvidos em sua organizao e sua funo. estabelece artificialmente um gradiente de prtons.
Os flagelos so produzidos em etapas (Fig. 2.25). Primeira Quando uma bactria peritrquia se locomove, seus flage
mente, o corpo basal montado e inserido no envelope celular. los associam-se para formar um feixe posterior que impulsiona
Em seguida, o gancho adicionado e, por fim, o filamento a clula para a frente, em linha reta, por rotao anti-horria.
progressivamente produzido pela adio de subunidades de A determinados intervalos, os flagelos invertem seu sentido de
flagelina na extremidade nascente. As subunidades de flagelina rotao e sofrem dissociao momentnea, fazendo com que
so expelidas atravs de um canal central oco no flagelo; quan a clula pare at que o movimento seja retomado e uma nova
do alcana a extremidade, ele se condensa com os predecesso direo seja determinada aleatoriamente. Esse comportamen
res, e dessa forma o filamento se alonga. to propicia a propriedade da quimiotaxia: uma clula que est
se afastando da fonte de um agente qumico atraente para e se
reorienta mais frequentemente que uma clula que est se des
B. Motilidade
locando em direo ao agente de atrao, resultando no movi
Os flagelos bacterianos so rotores helicoidais semirrgidos que mento final da clula em direo fonte. A presena de uma
conferem clula um movimento de rotao, impulsionada pe substncia qumica atraente (p. ex., acar ou um aminocido)
lo fluxo de prtons no interior da clula ao longo do gradiente percebida por receptores especficos localizados na membrana
produzido pela bomba de prtons primria (ver anteriormen celular (em muitos casos, o mesmo receptor tambm participa
te); na ausncia de uma fonte de energia metablica, a rota no transporte de membrana dessa molcula). A clula bacteria
o pode ser impulsionada por uma fora motriz de prtons na muito pequena para ser capaz de detectar a existncia de
gerada por ionforos. As bactrias que vivem em ambientes um gradiente qumico espacial ( i. e., um gradiente entre seus
alcalinos (alcalfilas) utilizam a energia do gradiente de ons dois polos); em vez disso, experimentos mostram que a clula
sdio - em lugar do gradiente de prtons - para impulsionar detecta gradientes temporais, isto , concentraes que dimi
o motor flagelar (Fig. 2.26). nuem com o decorrer do tempo, quando a clula est se afas
Todos os componentes do motor flagelar localizam-se tando da fonte de atrao, e que aumentam com o decorrer do
no envelope celular. Os flagelos fDCados a envelopes celulares tempo, quando a clula est se movendo em sua direo.

Filamento

Gancho ----

Membrana externa

Murena
Corpo
basal
Espao
periplasmtico

Membrana celular

e e e e e

Interruptor Motor

FIGURA 2.26 Componentes estruturais no interior do corpsculo basal do flagelo que permitem a rotao da poro interna dessa estrutura,
dos bastonetes do corpsculo basal e do complexo gancho-filamento fixado. Os anis externos permanecem estticos em contato com as membra
nas celulares interna e externa, e com a parede celular {murena), ancorando o complexo do flagelo ao envelope da clula bacteriana. A rotao
impulsionada pelo fluxo de prtons, atravs do motor, a partir do espao periplasmtico, fora da membrana celular, para o citoplasma em resposta
ao campo eltrico e ao gradiente de prtons atravs da membrana, que juntos constituem a fora motriz de prtons. Uma "chave" determina a
direo da rotao, a qual estabelece se a bactria ir se movimentar para a frente {devido rotao anti-horrio do flagelo) ou de modo inverso
{devido rotao do flagelo no sentido horrio.) {Reproduzida, com autorizao, de Saier MH Jr: Peter Mitchell and his chemiosmotic theories.ASM
News 1997;63:13.)
36 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Alguns compostos atuam mais como repelentes do que co A motilidade via pili completamente diferente da motilida
mo atraentes. Um mecanismo pelo qual as clulas respondem de por flagelos. As molculas de pilina exibem disposio heli
a substncias atraentes e repelentes envolve metilao e desme coidal, formando um cilindro que no sofre rotao nem possui
tilao mediadas por cGMP de protenas especficas na mem corpsculo basal completo. Suas extremidades aderem forte
brana. Enquanto as substncias atraentes provocam a inibio mente s superfcies distantes das clulas. Em seguida, os pili se
transitria da desmetilao dessas protenas, as repelentes esti despolimerizam de sua extremidade terminal, retraindo-se para
mulam sua desmetilao. dentro da clula. O resultado de tal manobra que a bactria
O mecanismo pelo qual uma alterao do comportamento move-se na direo da ponta aderente. Esse tipo de motilidade
da clula desencadeada em resposta a alguma mudana no de superfcie chamado de contrao, sendo amplamente em
meio ambiente denomina-se transduo sensorial. A transdu pregado pelas bactrias que possuem pili. Diferentemente dos
o sensorial responsvel no apenas pela quiomiotaxia, mas flagelos, os pili crescem do interior para o exterior da clula.
tambm pela aerotaxia (movimento em direo concentra A virulncia de certas bactrias patognicas depende da pro
o ideal de oxignio), pela fototaxia (movimento das bactrias duo no apenas de toxinas como tambm de "antgenos de
fotossintticas em direo ao lmen) e pela taxia dos aceptores colonizao", reconhecidos como pili comuns, que conferem s
de eltrons (movimento das bactrias respiratrias em dire clulas suas propriedades de aderncia. Nas cepas enteropato
o aos aceptores de eltrons alternativos, como o nitrato e o gnicas de E. coli, tanto as enterotoxinas quanto os antgenos de
fumarato). Nessas trs respostas, bem como na quimiotaxia, o colonizao (pili) so geneticamente determinados por plasm
movimento final determinado pela regulao da resposta de deos transmissveis, conforme discutido no Captulo 7.
inverso do movimento. Em um grupo de cocos gram-positivos, os estreptococos, as
fmbrias constituem o local do principal antgeno de superfcie,
a protena M. O cido lipoteicoico, associado a essas fmbrias,
Pili (fmbrias)
responsvel pela aderncia dos estreptococos do grupo A s
Muitas bactrias gram-negativas so dotadas de apndices su clulas epiteliais de seus hospedeiros.
perficiais rgidos, denominados pili (latim; significa "pelos") Os pili de diferentes bactrias so antigenicamente distin
ou fmbrias (do latim, "franjas"), mais curtos e mais finos que tos e desencadeiam a formao de anticorpos pelo hospedeiro.
os flagelos; similar aos flagelos, so compostos de subunidades Os anticorpos contra os pili de uma espcie bacteriana no im
proteicas estruturais denominadas pilinas. Alguns pili contm pedem a fixao de outra espcie. Algumas bactrias (Cap. 21),
um tipo de pilina, enquanto os outros apresentam mais de um como a N. gonorrhoeae, so capazes de formar pili de diferen
tipo. As protenas menores, chamadas adesinas, esto localiza tes tipos antignicos (variao antignica), e, por conseguinte,
das nas pontas dos pili e so responsveis pelas propriedades so ainda capazes de aderir clulas na presena de anticorpos
de fixao. possvel distinguir duas classes: os pili comuns, contra o seu tipo original de pili. Assim como as cpsulas, os
que desempenham um papel na aderncia das bactrias sim pili inibem a habilidade fagoctica dos leuccitos.
biticas e patognicas s clulas hospedeiras, e os pili sexuais,
responsveis pela fixao das clulas doadoras e receptoras no
processo de conjugao bacteriana (Cap. 7). Os pili esto ilus Endsporos
trados na Figura 2.27, em que os pili sexuais foram recobertos Os membros de vrios gneros de bactrias so capazes de for
por partculas de fagos para os quais atuam como receptores mar endsporos (Fig. 2.28). Os dois mais comuns so bastone
especficos. tes gram-positivos: o gnero Bacillus, aerbio obrigatrio, e o
gnero Clostridium, anaerbio obrigatrio. As outras bactrias
conhecidas por formar endsporos so a Thermoactinomyces,
Sporolactobacillus, Sporosarcina, Sporotomaculum, Sporomu
sa e Sporohalobacter spp. Esses microrganismos sofrem um
ciclo de diferenciao em resposta a condies ambientais. O
Pilus
sexual processo, esporulao, desencadeado prximo da depleo
de algum dos diversos nutrientes (carbono, nitrognio ou fs
foro). Cada clula forma um nico esporo interno, liberado
quando a clula-me sofre autlise. O esporo uma clula em
repouso, altamente resistente dessecao, ao calor e a agentes
qumicos; quando reencontra condies nutricionais favor
Pili Flagelo veis e ativado (ver adiante), o esporo germina, produzindo
comuns uma nica clula vegetativa.

A. Esporulao

O processo de esporulao comea quando as condies nutri


1 m cionais se tornam desfavorveis, sendo a proximidade da de
FIGURA 2.27 Pili. Uma Eschericha coli expressando pili em sua pleo da fonte de nitrognio ou de carbono (ou de ambos) o
superfcie. Os pili curtos (fmbrias medeiam a aderncia; e o pilus se fator mais significativo. A esporulao ocorre maciamente em
xual est envolvido na transferncia do DNA. (Cortesia do Dr. Charles culturas no final de crescimento exponencial, em consequncia
Brinton Jr.) dessa proximidade da depleo.
CAPTULO 2 Estrutura celular 37

(')

b,,qm
...,
_

A B e

FIGURA 2.28 Clulas de Bacillus em esporulao. (A) Bacillus no identificado do solo. (8) Bacillus cereus. (C) Bacillus megaterium. (Reproduzida,
com autorizao, de Robinow CF: Structure, ln Gunsalus IC, Stanier RY [editors]. The Bacteria: A Treatise on Structure and Function, Vol 1. Academic
Press, 1960.)

A esporulao envolve a produo de muitas estruturas, B. Propriedades dos endsporos

-
enzimas e metablitos novos, juntamente com o desapareci
mento de vrios componentes celulares vegetativos. Essas alte 1 . Cerne o cerne o protoplasto do esporo; contm um
raes representam um verdadeiro processo de diferenciao: ncleo completo (cromossomo), todos os componentes do
uma srie de genes, cujos produtos determinam a formao aparelho de sntese das protenas e um sistema gerador de
e a composio final do esporo, ativada. Tais alteraes en energia baseado na gliclise. Os citocromos esto ausentes
volvem modificaes na especificidade de transcrio da RNA at mesmo nas espcies aerbias, cujos esporos dependem de
polimerase, determinada pela associao da protena central da uma via curta de transporte de eltrons que envolve as flavo
polimerase com uma ou outra protena especfica promotora, protenas. Diversas enzimas da clula vegetativa so encon
denominada fator sigma. So produzidos diferentes fatores tradas em maiores concentraes (p. ex., alanina racemase),
sigma durante o crescimento vegetativo e a esporulao. Du e verifica-se a formao de vrias enzimas peculiares (p. ex.,
rante o crescimento vegetativo, um fator sigma, denominado cido dipicolnico sintetase). Os esporos contm nucleotdeos
crA, predomina. Em seguida, no decorrer da esporulao, cinco piridina no reduzidos ou ATP. A energia para germinao
outros fatores sigma so formados, o que causa a expresso de armazenada mais em forma de 3-fosfoglicerato do que em
vrios genes de esporos em tempos diversos, em localizaes forma de ATP.
especficas. A resistncia dos esporos ao calor deve-se, em parte, a seu
A sequncia de eventos na esporulao altamente com estado desidratado e, em parte, presena, no cerne, de gran
plexa: a diferenciao de uma clula vegetativa de B. subtilis em des quantidades (5 a 15% do peso seco do esporo) de dipicoli
endsporo requer cerca de 7 h em condies laboratoriais. So nato de clcio, formado a partir de um intermedirio da via de
observados diferentes eventos morfolgicos e qumicos nos es biossntese da lisina (Fig. 6.19). De alguma maneira ainda no
tgios sequenciais do processo. Sete estgios diferentes foram totalmente elucidada, essas propriedades resultam em estabili
identificados. zao das enzimas do esporo, cuja maioria exibe termolabilida
Em termos morfolgicos, a esporulao comea com a de normal quando isolada na forma solvel.
formao de um filamento axial (Fig. 2.29). O processo pros
segue com a invaginao da membrana, de modo a produzir 2. Parede do esporo -
a camada mais interna que circunda
uma estrutura de membrana dupla cujas superfcies corres a membrana interna do esporo denominada parede do espo
pondem superfcie de sntese da parede celular do envelo ro; contm peptidoglicano normal e transforma-se na parede
pe. Os locais de crescimento movem-se progressivamente em celular da clula vegetativa em germinao.
direo ao polo da clula, de modo a envolver o esporo em
desenvolvimento. 3. Crtex - o crtex a camada mais espessa do envelope
As duas membranas do esporo passam a atuar na sntese do esporo; contm um tipo incomum de peptidoglicano, com
ativa de camadas especiais que iro formar o envelope celular: um nmero muito menor de ligaes cruzadas em compara
a parede do esporo e o crtex, situados fora das membranas. o com as encontradas no peptidoglicano da parede celular.
No citoplasma recm-isolado ou cerne, ocorre a degradao de O peptidoglicano do crtex extremamente sensvel lisozi
muitas enzimas da clula vegetativa, substitudas por um con ma, e sua autlise desempenha um papel na germinao do
junto de componentes prprios do esporo. esporo.
38 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

G)
Parede celular
Formao do
\ filamento axial

DNA

@ Formao do septo do
pr-esporo

Captao do pr-esporo
-

Clula
me do

0 Sntese do crtex
Deposio da capa
Maturao
-

Crtex
Parede Capas do
celular esporo
germinativa

(j) Lise da
clula
me

Esporo

FIGURA 2.29 Estgios de formao do endsporo. (Reproduzida, com autorizao, de Merrick MJ: Streptomyces. ln: Parish JH [editor]. Develop
mental Biology ofProcaryotes. Univ California Press, 1979.)

4. Capa - a capa constituda de uma protena semelhante C. Germinao


ceratina, contendo muitas ligaes de dissulfeto intramolecu
O processo de germinao ocorre em trs estgios: ativao,
lares. A impermeabilidade dessa camada confere aos esporos
iniciao e crescimento.
sua relativa resistncia aos agentes qumicos antibacterianos.
1 . Ativao - a maioria dos endsporos incapaz de ger
5. Exsporo - o exsporo composto por protenas, lip minar imediatamente aps a sua formao. Entretanto, podem
deos e carboidratos. Consiste em uma camada basal paracris germinar depois de permanecer em repouso por vrios dias ou
talina e uma regio externa semelhante ao cabelo. No se sabe ser inicialmente ativados, em meio nutricionalmente rico, por
qual a funo do exsporo. Os esporos de algumas espcies um ou outro agente capaz de lesionar a capa do esporo. Entre
de Bacillus (p. ex., B. anthracis e B. cereus) possuem exsporo, os agentes que podem vencer o estado de dormncia do esporo,
porm outras espcies (p. ex., B. atrophaeus) possuem esporos destacam-se o calor, a abraso, a acidez e os compostos que
sem essa estrutura. contm grupos sulfidrila livres.
CAPTULO 2 Estrutura celular 39

2. Iniciao - Aps ativao, o esporo ir iniciar o processo clulas gram-negativas descoradas adquirem uma cor contras
de germinao se as condies ambientais forem favorveis. tante; nessa etapa, as clulas gram-positivas exibem uma cor
,

Diferentes espcies desenvolveram receptores que reconhe purpura.


cem efetores distintos como sinalizao de um meio propcio. A base da reao diferencial de Gram a estrutura da pare
Assim, a iniciao deflagrada pela L-alanina em uma espcie de celular, conforme discutimos anteriormente neste captulo.
e pela adenosina em outra. A ligao do efetor ativa uma au
tolisina que degrada rapidamente o peptidoglicano do crtex.
Ocorre a captao de gua, o dipicolinato de clcio liberado, e Colorao lcool-acidorresistente
verifica-se a degradao de uma variedade de componentes do As bactrias lcool-acidorresistentes so as que retm carbol
esporo por enzimas hidrolticas. fucsina (fucsina bsica dissolvida em uma mistura de fenol
lcool-gua) mesmo quando descoradas com cido clordrico
3. Crescimento - a degradao do crtex e das camadas ex
em lcool. Um esfregao de clulas em lmina banhado com
ternas resulta no aparecimento de uma nova clula vegetativa,
carbolfucsina e aquecido ao vapor. Aps esta etapa, procede-se
constituda pelo protoplasto do esporo com sua parede circun
descolorao com cido-lcool e por fim aplica-se um con
dante. Segue-se um perodo de biossntese ativa; esse perodo,
tracorante contrastante (azul ou verde) (Cap. 47). As bactrias
que termina na diviso celular, denominado brotamento. O
lcool-acidorresistentes (micobactrias e alguns dos actinomi
brotamento exige o suprimento de todos os nutrientes essen
cetos relacionados) adquirem cor vermelha, enquanto as ou
ciais para o crescimento da clula.
tras apresentam a cor do contracorante.

COLORAO
Colorao negativa
Os corantes combinam-se quimicamente com o protoplasma um procedimento que envolve a colorao do material de
bacteriano; se a clula ainda no estiver morta, o prprio pro fundo com um corante cido, deixando as clulas incolores. O
cesso de colorao ir destru-la. Por conseguinte, trata-se de corante negro nigrosina comumente utilizado. Esse mtodo
um processo drstico, passvel de produzir artefatos.
empregado para as clulas ou estruturas que so difceis de
Os corantes comumente utilizados so os sais. Os corantes
serem coradas diretamente (Fig. 2.23B).
bsicos consistem em um ction dotado de cor com um nion
incolor (p. ex., azul de metileno+ cloreto- ); os corantes cidos
comportam-se de modo inverso (p. ex., sdio+ eosinato-). As Colorao dos flagelos
clulas bacterianas so ricas em cido nucleico, apresentando
Os flagelos so demasiado finos (12 a 30 nm de dimetro) para
cargas negativas em forma de grupos fosfato que se combinam
serem visveis ao microscpio ptico. Entretanto, sua presena
com os corantes bsicos de carga positiva. Os corantes cidos
e sua distribuio podem ser demonstradas ao se tratarem as
no coram as clulas bacterianas e, por conseguinte, podem ser
clulas com uma suspenso coloidal instvel de sais de cido t
utilizados para corar o material de fundo com uma cor con
nico, provocando a formao de um precipitado macio sobre
trastante (ver Colorao negativa).
Os corantes bsicos coram uniformemente as clulas bac
terianas, a no ser que o RNA citoplasmtico seja inicialmente . ..


destrudo. Entretanto, podem-se utilizar tcnicas especiais de

colorao para diferenciar os flagelos, cpsulas, paredes celula


"

res, membranas celulares, grnulos, nucleoides e esporos.


A colorao de Gram

Uma importante caracterstica taxonmica das bactrias con


siste na sua resposta colorao de Gram. A propriedade de

,


colorao de Gram parece fundamental, visto que a reao est


correlacionada com muitas outras propriedades morfolgicas ..

em formas filogeneticamente correlatas (Cap. 3). Um micror

ganismo potencialmente gram-positivo pode aparecer dessa


'


..
,
maneira apenas em determinado conjunto de condies am

bientais e em uma cultura jovem.


..

")

A colorao de Gram (Cap. 47) comea com a aplicao de '



um corante bsico, o cristal violeta. Em seguida, aplica-se uma

soluo de iodo; todas as bactrias coram-se em azul nessa eta



"

pa do processo. Depois, as clulas so tratadas com lcool. As '



- .

clulas gram-positivas retm o complexo cristal violeta-iodo,




permanecendo azuis; as clulas gram-negativas so totalmente


descoradas pelo lcool. Como etapa final, aplica-se um contra ..
,

-'


corante (como o corante vermelho safranina*), de modo que as 1



..

* N. de R.T. A fucsina tambm pode ser utilizada como contracorante no FIGURA 2.30 Colorao para flagelos de espcies Pseudomonas.
lugar da safranina. (Reproduzida, com autorizao, de Leifson E: J Bacterio/ 1951;62:377.)
40 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

as paredes celulares e os flagelos. Dessa maneira, o dimetro ALTERAESMORFOLGICASDURANTEO


aparente dos flagelos aumenta, de modo que a colorao subse
CRESCIMENTO
quente com fucsina bsica ir torn-los visveis ao microscpio
ptico. A Figura 2.30 mostra clulas coradas por esse mtodo.
Nas bactrias peritrquias, os flagelos formam feixes duran Diviso celular
te o movimento, podendo ser espessos o suficiente para serem A maior parte das bactrias se divide, por fisso binria, em
observados em clulas vivas microscopia de campo escuro ou duas novas clulas-filhas idnticas. Em uma cultura em cres
de contraste de fase. cimento de um bacilo, como E. coli, as clulas elongam-se,
formando uma partio que por fim separa a clula em duas
clulas-filhas. A partio referida como um septo, e o re
Colorao da cpsula
sultado do crescimento interno da membrana citoplasmtica e
Em geral, as cpsulas so evidenciadas pelo processo de colo da parede celular em direes opostas at que as duas clulas
rao negativa ou por uma modificao desta (Fig. 2.23). Um filhas sejam separadas. Os cromossomos, cujo nmero dupli
desses "corantes de cpsula" (mtodo de Welch) envolve o tra cou antes da diviso, distribuem-se igualmente para as duas
tamento com soluo quente de cristal violeta, seguido de la clulas-filhas.
vagem com soluo de sulfato de cobre, utilizada para remover Embora as bactrias no tenham fuso mittico, o septo
o excesso do corante, pois a lavagem convencional com gua formado de modo a separar os dois cromossomos-filhos for
dissolveria a cpsula. O sal de cobre tambm cora o fundo, re mados por replicao dos cromossomos, processo efetuado
sultando em uma clula e fundo de cor azul-escura, enquanto a pela fixao do cromossomo membrana celular. De acordo
cpsula aparece em azul bem mais claro. com o modelo, o trmino de um ciclo de replicao do DNA
deflagra a sntese ativa da membrana entre os locais de fixa
o dos dois cromossomos-filhos. Os cromossomos so ento
Colorao dos nucleoides
separados pelo crescimento interno do septo, indo uma cpia
Os nucleoides podem ser corados pelo corante de Feulgen, es para cada clula-filha.
pecfico do DNA (Fig. 2.5).

Agrupamentos celulares
Colorao dos esporos Se as clulas permanecerem temporariamente ligadas aps a di
Os esporos so observados mais simplesmente em forma de viso, verificar-se- o aparecimento de certos grupamentos ca
corpsculos intracelulares refrteis (Fig. 2.28) em suspenses ractersticos. Dependendo do plano de diviso e do nmero de
de clulas no coradas ou como reas incolores em clulas co divises durante as quais as clulas permanecem ligadas, pode
radas por mtodos convencionais. A parede do esporo relati ocorrer a seguinte disposio em forma de cocos: cadeias (estrep
vamente impermevel, porm os corantes podem atravess-la tococos), pares (diplococos), feixes cbicos (sarcinas) ou placas
mediante o aquecimento da preparao. Em seguida, a mesma achatadas. Os bastonetes podem formar pares ou cadeias.
impermeabilidade serve para evitar a descolorao do esporo Aps a diviso de algumas bactrias, so observados mo
pelo tratamento com lcool, suficiente para descorar as clulas vimentos ps-fisso caractersticos. Assim, por exemplo, um
vegetativas, que podem ser finalmente contracoradas. Comu movimento "em chicote" pode colocar as clulas em posies
mente, os esporos so corados com verde de malaquita ou car paralelas; a diviso repetida e o movimento em chicote resul
bolfucsina (Fig. 2.31). tam no arranjo em "paliada" tpico dos bacilos diftricos.

RESUMO DO CAPTULO
A microscopia tem desempenhado um papel importante na
nossa compreenso sobre as estruturas celulares.
As clulas eucariticas so caracterizadas pela presena de
membrana nuclear, retculo endoplasmtico, ribossomos
SOS e plastdeos (mitocndrias e cloroplastos). A membrana
plasmtica caracterizada pela presena de esteroides (co
lesterol). Enquanto as clulas procariticas no apresentam
membrana nuclear e so haploides. Seu citoplasma contm
ribossomos 70S e no possuem mitocndria e cloroplastos.
'
As principais funes da membrana citoplasmtica das c
' lulas procariticas so (1) permeabilidade seletiva e trans
porte de solutos (2) em espcies aerbias, atua no transporte
1 1 de eltrons e na fosforilao oxidativa (3) excreo de en
10 m

FIGURA 2.31 Colorao para endsporo. Os endsporos retm o zimas hidrolticas e de outras protenas (4) atua como lo
corante primrio, verde de malaquita. Contracolorao com safranina cal das enzimas e molculas carregadoras que participam
confere uma colorao avermelhada a outras clulas. ( Jack M. Bostra na biossntese do DNA, de polmeros da parede celular e
ck/Visuals Unlimited.) de lipdeos de membrana; e (5) local dos receptores e de
CAPTULO 2 Estrutura celular 41

protenas quimiotticos alm de outros sistemas de trans 4. Qual dos seguintes mecanismos de transporte funciona sem ne
duo sensorial. cessidade de energia?
A maioria das bactrias classificada em gram-positiva ou (A) Ligao dependente de protena
gram-negativa baseado na resposta colorao de Gram. A (B) Translocao de grupo
classificao dos dois grupos reflete diferenas fundamen (C) Simporte
tais na composio de suas paredes celulares. (D) Uniporte
A parede das bactrias gram-positivas consiste em uma (E) Difuso facilitada
membrana plasmtica e uma espessa camada de peptido 5. Qual dos seguintes componentes est presente nas bactrias
glicano; a parede celular das bactrias gram-negativas gram-negativas mas no nas gram-positivas?
composta de membrana plasmtica, de uma delgada cama Peptidoglicano
(A)
da de peptidoglicano e uma membrana externa contendo (B) Lipdeo A
lipopolissacardeo (entotoxina). O espao entre a membra (C) Cpsula
na plasmtica e a membrana externa denominado espao (D) Flagelos
periplsmico. (E) Pili
Muitas bactrias sintetizam uma grande quantidade de po
6. Qual dos seguintes componentes est presente em bactrias
lmeros extracelulares. Quando este polmero forma uma
gram-positivas mas no nas gram-negativas?
camada condensada e bem defmida ao redor da clula bac
teriana, que exclui partculas como a tinta da ndia, de (A) Peptidoglicano
(B) Cpsula
nominado cpsula. As cpsulas so importantes fatores de
(C) Flagelos
virulncia protegendo a clula bacteriana da fagocitose.
(D) Acido teicoico
As estruturas de superfcie celular como pili e flagelos so
(E) Acido diaminopimlico
importantes para a aderncia e motilidade, respectivamente.
A formao de endsporo uma caracterstica dos gne 7. No outono de 2001, uma srie de cartas que continham esporos
ros Bacillus e Clostridium, sendo desencadeada pela falta de do Bacillus anthracis foram postadas para membros da mdia e do
nutrientes no ambiente. O endsporo (esporos) so clulas Senado dos EUA. O resultado foram 22 casos de antraz, com cinco
quiescentes, extremamente resistentes dessecao, ao ca mortes. A resistncia ao aquecimento dos esporos bacterianos, tais
lor e a agentes qumicos. Quando as condies nutricionais como os do B. anthracis, deve-se, em parte, ao seu estado de desi
favorveis retornam, os esporos germinam e produzem a dratao e, em parte, presena de grandes quantidades de:
clula vegetativa. (A) Acido diaminopimlico
(B) Acido d-glutmico
(C) Dipicolinato de clcio
QUESTES DE REVISO (D) Protenas que contm sulfidrila
(E) Lipdeo A
1. Um homem de 22 anos apresenta-se com lcera indolor de 1 cm
8. Qual dos seguintes termos no descreve o cromossomo bacte
no corpo do pnis. Observa-se a presena de linfadenopatia in
riano?
guinal. O paciente admite negociar drogas por sexo e que teve
diversas parceiras sexuais. O teste RPR deu positivo e suspeita-se (A) Haploide
de sfilis; entretanto, a colorao de Gram de uma amostra reti (B) Diploide
rada da lcera no mostrou a presena de bactrias. O Treponema (C) Circular
pallidum, o agente causador da sfilis, no pode ser visualizado (D) Nucleoide
por microscopia ptica, pois (E) Feulgen positivo

(A) transparente 9. A lisozima cliva as ligaes Pl4 entre:


(B) No pode ser corado por corantes comuns (A) D-alanina e ponte pentaglicdica
(C) Possui um dimetro menor que 0,2 m (B) Acido N-acetilmurmico e D-alanina
(D) O comprimento de onda da luz branca muito longo (C) Lipdeo A e KDO
(E) O rpido movimento do organismo impede a visualizao (D) Acido N-acetilmurmico e N-acetilglicosamina
2. O cloranfenicol, um antibitico que inibe a sntese proteica bacte (E) D-alanina e D-alanina
riana, tambm afeta qual das seguintes organelas eucariticas? 10. As espcies de Mycoplasma no apresentam os seguintes com
(A) Mitocndria ponentes:
(B) Complexo de Golgi (A) Ribossomos
(C) Microtbulos (B) Membrana plasmtica
(D) Retculo endoplasmtico (C) DNA e RNA
(E) Membrana nuclear (D) Lipdeos
3. Qual das seguintes estruturas no parte do envelope celular (E) Peptideoglicano
bacteriano?
Respostas
(A) Peptidoglicano
(B) Lipopolissacardeo 1. c 4. E 7. c 10. E
(C) Cpsula
2. A 5. B 8. B
(D) Vacolo gasoso
(E) Camada s 3. D 6. D 9. D
42 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Messner P et al.: III. Biochemistry of S-layers. FEMS Microbial Ver


REFERNCIAS
1997;20:25.
Balows A et al. (editors): The Prokaryotes, A Handbook on the Biology Moat AG, Foster JW: Microbial Physiology, 3rd ed. Wiley-Liss, 1995.
of Bacteria: Ecophysiology, Isolation, Identification, Applications, Naroninga N: Morphogenesis of Escherichia coli. Microbial Mol Biol
2nd ed, 4 vols. Springer, 1992. Rev 1998;62:110.
Barreteau H, Kovac A, Boniface A, Sova M, Gobec S, Blanot D: Cyto Neuhaus FC, Baddiley J: A continuum of anionic charge: Structures
plasmic steps of peptidoglycan biosynthesis. FEMS Microbial Rev and functions of D-alanyl-teichoic acids in gram-positive bacte
2008;32: 168. ria. Microbial Mol Biol Rev 2003;67:686.
Barton LL: Structural and Functional Relationships in Prokaryotes. Nikaido H: Molecular basis of bacterial outer membrane permeability
Springer, 2005. revisited. Microbial Mol Biol Rev 2003;67:593.
Bermudes D, Hinkle G, Margulis L: Do prokaryotes contain microtu Rachel R et al.: Fine structure of S-layers. FEMS Microbial Rev 1997;
bules? Microbial Rev 1994;58:387. 20:13.
Blair DF: How bacteria sense and swim. Annu Rev Microbiol 1995; Sauvage E, KerffF, Terrak M, Ayala JA, Charlier P: The penicillinbin
49:489. ding proteins: Structure and role in peptidoglycan biosynthesis.
Craig L, Pique ME, Tainer JA: Type IV pilus structure and bacterial FEMS Microbial Rev 2008;32:234.
pathogenicity. Nat Rev Microbiol 2004;2:363. Schaechter M, Ingraham JL, Neidhardt FC: Microbe. American Socie
Dautin N, Bernstein HD: Protein secretion in gram-negative bacteria ty for Microbiology, 2006.
via the autotransporter pathway. Annu Rev Microbiol 2007;61:89. Scheffers DJ, Pinho MG: Bacterial cell wall synthesis: New insights
Drlica K, Riley M (editors): The Bacterial Chromosome. American So from localization studies. Microbial Mol Biol Rev 2005;69:585.
ciety for Microbiology, 1990. Schirmer T: General and specific porins from bacterial outer mem
Economou A, Christie PJ, Fernandez RC, Palmer T, Plano GV, Pugs branes. J Struct Biol 1998;121:101. (PMID: 9615433)
ley AP: Secretion by the numbers: Protein traffic in prokaryotes. Scott JR, Barnett TC: Surface proteins of gram-positive bacteria and
Mol Microbiol 2006;62:308. how they get there. Annu Rev Microbiol 2006;60:397.
Henriques AO, Moran CP Jr: Structure, assembly, and function of the Sonenshein AL, Hoch JA, Losick R: Bacillus subtilis and Its Closest
spore surface layers. Annu Rev Microbiol 2007;61:555. Relatives. American Society for Microbiology, 2002.
Hinnebusch J, Tilly K: Linear plasmids and chromosomes in bacteria. Vaara M: Agents that increase the permeability ofthe outer membra
Mol Microbiol 1993;10:917. ne. Microbial Rev 1992;56:395.
Hueck CJ: Type III protein secretion systems in bacterial pathogens of Vollmer W, Blanot D, de Pedro MA: Peptidoglycan structure andar
animais and plants. Microbial Mol Biol Rev 1998;62:379. chitecture. FEMS Microbial Rev 2008;32:149.
Leiman PG et ai.: Type VI secretion apparatus and phage tailassocia Walsby AE: Gas vesicles. Microbial Rev 1994;58:94.
ted protein complexes share a common evolutionary origin. Proc Whittaker CJ, Klier CM, Kolenbrander PE: Mechanisms of adhesion
Natl Acad Sei U S A 2009;106:4154. by oral bacteria. Annu Rev Microbiol 1996;50:513.
Liu J, Barry CE Ili, Besra GS, Nikaido H: Mycolic acid structure de
termines the fluidity of the mycobacterial cell wall. J Biol Chem
1996;271:29545.
C A P T U L O

TAXONOMIA O VOCABULRIO DA Os esquemas de identificao no so esquemas de classifi


cao, embora possam ter alguma semelhana superficial. Um
MICROBIOLOGIA MDICA esquema de identificao para um grupo de microrganismos
Uma olhada no sumrio deste livro suficiente para apreciar s possvel aps a classificao inicial desse grupo, isto , o
mos a diversidade dos patgenos clnicos que esto associa reconhecimento de que tais microrganismos so diferentes de
dos s doenas infecciosas. Estima-se que atualmente temos outros microrganismos. Por exemplo, a literatura popular tem
capacidade para identificar menos de 10% dos patgenos res relatado que Escherichia coli a causa da sndrome urmico
ponsveis por causarem doenas no homem, devido nossa hemoltica (SHU) em crianas. Existem centenas de diferentes
incapacidade de cultivar ou identificar esses microrganismos cepas que so classificadas como E. coli, mas poucas delas esto
utilizando sondas moleculares. No entanto, a diversidade dos associadas a SHU. Estas cepas podem ser diferenciadas de mui
patgenos identificveis to grande que importante conhe tas outras cepas de E. coli pela reatividade com anticorpos de
cermos as sutis diferenas associadas a esses agentes infeccio seus antgenos O e H, como foi descrito no Captulo 2 (p. ex.,
sos. A explicao para a importncia de se compreender essas E. coli 0157:H7). A taxonomia, e a nomenclatura que a acom
sutilezas que cada agente infeccioso especificamente adap panha, uma cincia imprecisa e em evoluo. Assim como
tado a um ou mais modos de transmisso, mecanismos para nosso vocabulrio social evolui, o mesmo ocorre com o voca
infectar hospedeiros humanos (colonizao) e mecanismos bulrio da microbiologia clnica. Qualquer profissional identi
para causar doena (patologia). Como tal, um vocabulrio que ficado com doenas infecciosas deve estar ciente da taxonomia
comunique de modo consistente as caractersticas nicas dos evolutiva dos microrganismos infecciosos.
agentes infecciosos para estudantes, microbiologistas e agentes As categorias formam a base da organizao das bactrias.
de sade crucial para evitar o caos que poderia ocorrer sem as A taxonomia de Lineu o sistema mais conhecido dos biolo
restries organizacionais da taxonomia bacteriana (do Grego gistas. Ela emprega as categorias taxonmicas formais de reino,
taxon arrumao, organizao; por exemplo, a classificao
=
filo, classe, ordem, famlia, gnero e espcie. As menores cate
de microrganismos em um sistema ordenado, indicando uma gorias so aprovadas por um consenso de especialistas na co
relao natural). munidade cientfica (Quadro 3.1). Dessas categorias, a famlia,
A , . - ,

A classificao, a nomenclatura e a identificao consti o genero e a espec1e sao os mais ute1s.


tuem trs reas distintas, porm inter-relacionadas da taxono
mia. A classificao pode ser definida como a categorizao
de microrganismos em grupos taxonmicos. A classificao
de bactrias exige um conhecimento adquirido por meio de
tcnicas experimentais e de observao, devido frequente
necessidade de se recorrer a propriedades bioqumicas, fisio QUADRO 3.1 Categorias taxonmicas
lgicas, genticas e morfolgicas para efetuar uma descrio
Categoria formal Exemplo
adequada de um txon. Nomenclatura refere-se designao
de um organismo segundo regras internacionais (estabeleci Reino Prokaryotae (Eubacteria)
das por um grupo de profissionais clnicos reconhecidos), de
Diviso Gracilicutes
acordo com suas caractersticas. A identificao o uso prti
co de um esquema de classificao para: ( 1) isolar e distinguir Classe Escotobacteria
microrganismos desejveis de outros indesejveis; (2) verificar
Ordem Eubacteriales
a autenticidade ou as propriedades especiais de determinada
cultura, (3) isolar e identificar o agente etiolgico de determi Famlia Enterobacteriaceae
nada doena. A ltima funo pode levar seleo de um trata
Gnero Escherichia
mento farmacolgico orientado para a erradicao do agente,
de uma vacina que atenue sua patologia, ou de uma medida de Espcie coli
sade pblica (p. ex., lavagem de mos ou uso de preservativo)
Subtipo Escherichia coli 01 57:H7
que previna sua transmisso.
44 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

CRITRIOS PARA A CLASSIFICAO metabolizar a lactose. Por exemplo, enquanto salmonelas e Shi
gelas patognicas no fermentam lactose, em placas de gar de
DAS BACTRIAS MacConkey, formam colnias transparentes, enquanto outras
espcies de enterobactrias fermentadoras de lactose (p. ex., E.
Crescimento em meio de cultura coli) formam colnias rosas ou vermelhas. O nmero de meios
Os critrios apropriados classificao das bactrias incluem diferenciais empregados atualmente em laboratrios clnicos
muitas das propriedades descritas no captulo anterior. Um est fora do escopo deste captulo. No entanto, deve-se notar
desses critrios o crescimento em meios bacteriolgicos. Ao que a identificao bioqumica uma importante maneira de
contrrio de vrus e de parasitos, muitos patgenos bacterianos classificar patgenos microbianos.
podem ser isolados em meios slidos que contenham gar. O
cultivo geral da maior parte das bactrias requer meio enriqueci Microscopia bacteriana
do em nutrientes metablicos. Esses meios geralmente incluem Historicamente, a colorao de Gram, junto com a visualizao
gar, uma fonte de carbono e um cido hidrolisado ou enzima em microscopia ptica, est entre os mtodos mais informativos
ticamente degradado de uma fonte de material biolgico (p. ex., para a classificao das eubactrias. Essa tcnica de colorao
casena). Devido composio indefinida deste ltimo, esses ti amplamente divide as bactrias com base em suas diferenas
pos de meio so conhecidos como meios complexos. fundamentais na estrutura de suas paredes celulares (Cap. 2).
Amostras clnicas de locais normalmente no estreis Em geral, a primeira etapa na identificao individual de um
(p. ex., a garganta ou o colo) contm mltiplas espcies de mi espcime bacteriano (p. ex., eles so gram-negativos ou gram
crorganismos, inclusive potenciais patgenos da microbiota positivos?) crescido em um meio de cultura ou at diretamente
residente. Os meios podem ser no seletivos ou seletivos e so de um material clnico do paciente (p. ex., urina)
usados para a distino entre vrias bactrias em uma amostra
clnica que contenha muitos microrganismos diferentes. Testes bioqumicos
Provas como o teste da oxidase, que usa um aceptor de eltrons
A. Meios no seletivos artificial, podem ser usadas para distino de organismos com
O gar-sangue e o gar-chocolate so exemplos de meios com base na presena ou ausncia de uma enzima respiratria, o ci
plexos, no seletivos, que sustentam o crescimento de diferentes tocromo C, cuja falta diferencia as enterobactrias de outros ba
bactrias. Esses meios so destinados ao isolamento de diferen cilos gram-negativos. De modo similar, a atividade da catalase
tes espcies tantas quanto possveis, produzindo inmeras col pode ser usada, por exemplo, para a diferenciao entre cocos
nias bacterianas. gram-positivos, as espcies de estaftlococos so catalase positivas
enquanto as espcies de estreptococcos so catalase negativas. Se
B. Meios seletivos o microrganismo for identificado como catalase positivo (Sta
phylococcus spp.), o teste da coagulase pode identific-lo como
Devido diversidade de microrganismos que residem em alguns
Stapylococcus aureus (coagulase positivo) ou Staphylococcus
locais de obteno de amostras (p. ex., a pele, e os tratos intestinal,
epidermidis (coagulase negativo)*, como demonstrado na Fi
respiratrio e vaginal), os meios seletivos so empregados para
gura 3.1. Em ltima anlise, existem muitos exemplos de testes
eliminar (ou reduzir) um grande nmero de bactrias contami
bioqumicos que podem determinar a presena de funes me
nantes nessas amostras. A base para um meio seletivo a incor
tablicas caractersticas e ser empregados para agrupar bactrias
porao de um agente que iniba especificamente o crescimento
em um txon especfico. Uma pequena lista dos testes bioqumi
de bactrias contaminantes. Exemplos desses agentes so:
cos mais comuns est descrita no Quadro 3.2.
Azida sdica - seleciona bactrias gram-positivas sobre
gram-negativas Testes imunolgicos sorotipos,
Sais biliares (desoxicolato de sdio) - seleciona bactrias
sorogrupos e sorovares
gram-negativas entricas e inibe bactrias gram-negativas
de mucosas e a maioria das bactrias gram-positivas A designao "sero/soro" simplesmente indica o uso de an
Colistina e cido nalidxico - inibem o crescimento de ticorpos (policlonais ou monoclonais) que reagem com uma
muitas bactrias gram-negativas estrutura especfica da superfcie bacteriana, como lipopolis
sacardeos (LPS), flagelos ou antgenos capsulares. Os termos
Exemplos de meios seletivos so o gar de MacConkey "sorotipo", "sorogrupos" e "sorovares" so, para finalidades
(contm bile), que seleciona enterobactrias, e o gar-sangue prticas, idnticos - todos utilizam a especificidade desses
CNA (contm colistina e cido nalidxico), que seleciona esta anticorpos para subdividir cepas de uma determinada espcie
filococos e estreptococos. bacteriana. Como descrito anteriormente, na correlao entre
E. coli 0157:H7 e a SHU.
C. Meios diferenciais
Em cultura, algumas bactrias produzem pigmentos caracte
rsticos e outros que podem ser diferenciados com base na ex * N. de R.T. Na realidade a prova da coagulase somente diferencia S. au
presso de enzimas extracelulares. A atividade dessas enzimas reus (coagulase positivo) de um grupo heterognio de estaftlococos de
pode ser detectada como zonas claras circundando colnias nominados de coagulase negativos - CoNS, que inclui, entre outros: S.
epidermidis, S. saprophyticus e S. lugdunensis. Para identificao correta
crescidas na presena de substratos insolveis (p. ex., zonas de de S. epidermidis necessria uma complexa bateria de testes bioqumi
hemlise em gar que contenha hemcias). Muitas enterobac cos incluindo, por exemplo, produo de fosfatase, produo de acetona,
trias podem ser diferenciadas com base em sua capacidade de produo de urease, entre outros.
CAPTULO 3 Classificao das bactrias 45

Cocos gram-positivos QUADRO 3.2 Testes bioqumicos mais comuns


Teste da catalase usados na diferenciao de bactrias
1
1 1 . Quebra de carboidratos. A capacidade de produzir metablitos
Catalase positiva Catalase negativa cidos por via fermentativa ou oxidativa, a partir de uma variedade
Staphy/ococcus Streptococcus de carboidratos (p. ex., glicose, sacarose e lactose) usada na
identificao da maioria dos grupos bacterianos. Tais testes, embora
imperfeitos, tm sido teis para fins taxonmicos. A identificao por
cromatografia gasosa na identificao de cidos graxos de cadeia
Teste da
curta, produzido na fermentao da glicose tambm tem sido til na
coagulase
classificao de diferentes bactrias anaerbias.
2. Produo de catalase. A enzima catalase catalisa a converso
1 1 do perxido de hidrognio em gua e oxignio. Quando uma
+
colnia bacteriana misturada com o perxido de hidrognio, a
-

S. aureus Staphylococcus
liberao do oxignio pode ser observada pelo aparecimento de
epidermidis
bolhas de gs. O teste particularmente til na diferenciao dos
estafilococos (positivos) dos estreptococos (negativos), porm
FIGURA 3.1 Diagrama simplificado para diferenciao de cocos tambm tem aplicao taxonmica para bactrias gram-negativas.
gram-positivos. 3. Utilizao do citrato. Um meio que contenha citrato de sdio
como nica fonte de carbono, pode ser usado para determinar
a capacidade de metabolizar o citrato. As bactrias que crescem
nesse meio so classificadas como citrato positivo.
lnstabil idade gentica 4. Coagulase. A enzima coagulase atua como um fator plasmtico,
convertendo o fibrinognio em fibrina. usado na diferenciao do
O valor de um critrio taxonmico depende do grupo biol Staphylococcus aureus de outros estafilococos*.
gico que est sendo comparado. Traos compartilhados por s. Descarboxilases e deaminases. A descarboxilao e a
todos ou por nenhum dos membros de um grupo no podem desaminao dos aminocidos lisina, ornitina e arginina so
detectadas pela presena de aminas alcalinas que modificam o pH.
ser usados para distinguir seus membros, mas podem definir
Tal modificao pode ser observada pela alterao na cor do meio.
um grupo (p. ex., todos os estaftlococos produzem a enzima Esses testes so utilizados primariamente para identificao de
catalase). Os avanos em biologia molecular hoje possibilitam bastonetes g ram-negativos.
a investigao do parentesco de genes ou genomas por compa 6. Sulfeto de hidrognio. A habilidade de algumas bactrias de
produzir H25 a partir de aminocidos e compostos sufurosos
rao de sequncias entre diferentes bactrias (Cap. 7). Nesses
til na classificao taxonmica. A colorao negra formada pela
casos, a instabilidade gentica pode fazer com que alguns tra interao dos sais de sulfeto com metais pesados tais como o ferro,
os sejam altamente variveis dentro de um grupo biolgico utilizada na deteco do H25.
ou mesmo dentro de um grupo taxonmico especfico. Assim, 7. lndol. A reao do indol testa a capacidade de um organismo em
produzir o indol (benzopirrol) a partir da metabolizao do aminoci
por exemplo, os genes de resistncia a antibiticos ou os genes
do triptofano. O indol detectado pela formao de uma colorao
que codificam enzimas (p. ex., utilizao da lactose) podem ser vermelha aps a adio do p-dimetilaminobenzaldedo. O teste de
transportados em plasmdeos ou bacterifagos (Cap. 7), ele spot pode ser realizado em segundos usando colnias isoladas.
mentos genticos extracromossmicos que podem ser trans 8. Reduo do nitrato. Bactrias podem reduzir nitratos por
feridos entre bactrias no relacionadas ou que podem ser diferentes mecanismos. Essa habilidade demonstrada pela
deteco de nitrito e/ou gs nitrognio formados nesse processo.
9. Quebra do 0-ortonitrofenil-o-galactopiranosdeo (ONPG).
perdidos de um subgrupo de cepas bacterianas idnticas em
todos os outros aspectos. Muitos microrganismos so de dif O teste de ONPG est relacionado com a fermentao da lactose.
cil cultivo e, nessas instncias, tcnicas que revelam o paren As bactrias que possuem a enzima -galactosidase necessria
tesco pela anlise de hibridizao de cidos nucleicos ou pela para fementao da lactose, mas que no apresentam a enzima
galactosdeo permease importante para o transporte da lactose
sequncia de DNA podem ser de especial valor. para o citoplasma bacteriano, so ONPG positivas e geralmente
lactose negativas ou lactose tardias.
1 O. Produo de oxidase. Os testes de oxidase detectam o componente
SISTEMAS DE CLASSIFICAO cdo complexo citocromo-oxidase. O reagente utilizado muda
de transparente para colorido, quando convertido de sua forma
reduzida para o estado oxidado. A reao de oxidase comumente
Chaves demonstrada em teste de spot utilizando colnias isoladas.
1 1 . Produo de proteinase. A atividade proteoltica detectada pelo
As chaves organizam os traos bacterianos de um modo que
crescimento do microrganismo na presena de substratos, tais
possibilita a identificao eficiente dos microrganismos. O como gelatina e gema de ovo.
sistema ideal deve conter o nmero mnimo de caractersticas 12. Produo de urease. A urease hidrolisa a urea em duas molculas de
necessrias para se estabelecer uma categorizao correta. Os amnia e C02 Essa reao pode ser detectada pelo aumento do pH
no meio causado pela produo de amnia. Espcies urease positivas
grupos so divididos em subgrupos menores baseados na pre
variam a concentrao da enzima produzida. Bactrias podem ser
sena (+) ou ausncia (-) de determinada caracterstica diag assim classificadas como positivas, fraca-positivas e negativas.
nstica. A continuao desse processo, utilizando-se diferentes 13. Test de Voges-Proskauer. O teste de Voges-Proskauer detecta
caractersticas, orienta o pesquisador para o menor subgrupo o acetilmetilcarbinol (acetona), um produto intermedirio da
fermentao da glicose pela via butilenoglicol.
definido que contm o microrganismo analisado. Nas etapas
iniciais desse processo, os microrganismos podem ser dividi * N. de R.T. Amostras de Staphylococcus sch/eiferi subespcie sch/eiferi, tm sido isoladas
dos em subgrupos com base em caractersticas que no refle de diferentes infeces humanas e se mostram positivas tanto para o fator de agre
gao quanto para a coagulase em tubo. Essas amostras podem ser diferenciadas de
tem qualquer relao gentica. Seria perfeitamente razovel, S. aureus pela ausncia de produo de cido a partir de maltose, manitol e sacarose.
por exemplo, que uma chave para bactrias inclusse um gru Copyright The McGraw-Hill Companies. {Reproduzido, com autorizao, de Ryan
po de "bactrias formadoras de pigmentos vermelhos quando KJ, Ray CG {editors): Sherris Medical Microbio/ogy, Sth ed. McGraw-Hill, 2010.)
46 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

propagadas em um meio definido", embora tal procedimento As propriedades genticas das bactrias possibilitam a tro
fosse incluir formas no relacionadas, como a Serratia marces ca de genes entre microrganismos remotamente relacionados.
cens (Cap. 15) e bactrias fotossintticas purpreas (Cap. 6). Alm disso, a multiplicao das bactrias quase totalmente ve
Esses dois agrupamentos de bactrias desiguais ocupam nichos getativa, e seus mecanismos de troca gentica raras vezes envol
distintos e dependem de formas totalmente diferentes de meta vem uma recombinao entre grandes pores de seus genomas
bolismo energtico. No obstante, o agrupamento preliminar (Cap. 7). Por conseguinte, o conceito de espcie - a unidade
dos referidos conjuntos seria til, pois poderia possibilitar ao fundamental da filogenia dos eucariotos - tem um significado
pesquisador a imediata identificao de uma cultura com pig totalmente diferente quando aplicado s bactrias. Uma espcie
mentao vermelha, limitando a margem de possibilidades a eucaritica refere-se a um grupo biolgico capaz de se repro
um nmero relativamente pequeno de grupos. duzir, com a inteno de produzir uma prole varivel. Como as
bactrias replicam-se de maneira clonal por fisso binria, elas
no necessitam de um grupo complementar de cromossomos
Taxonomia numrica
para se reproduzir. Por conseguinte, a definio de uma espcie
A taxonomia numrica (tambm definida como fentica ou ta bacteriana necessariamente pragmtica e operacionalmente
xometria) passou a ser amplamente utilizada na dcada de 1970. definida. Para as finalidades de categorizao de bactrias, uma
Esses esquemas de classificao numrica utilizam um nmero espcie uma categoria que circunscreve um grupo genomica
(frequentemente maior que 100) de caractersticas no pondera mente coerente de indivduos isolados ou cepas que compar
das e taxonomicamente teis. O ndice de Perfil Analtico (IPA/ tilhem um alto grau de similaridade em muitas caractersticas
API) um mtodo geralmente usado para identificar uma independentes, quando testadas de modo comparvel e em
ampla variedade de microrganismos. Esses testes (API) consis condies altamente padronizadas. A deciso de reunir grupos
tem em um nmero de tiras plsticas, cada qual com cerca de de microrganismos como determinada espcie bacteriana do
20 compartimentos em miniatura, contendo reagentes bioqu taxonomista, que pode escolher subdividir o grupo em biotipos
micos. Quase todos os grupos bacterianos cultivveis e mais de e reunir espcies dentro de gneros. Tambm possvel pro
550 diferentes espcies podem ser identificados com a utilizao por agrupamentos mais amplos, como as famlias. No Qua
dos resultados desses testes API. Estes sistemas de identificao dro 3.1 fornecemos as categorias formais usadas na taxonomia
possuem um grande banco de dados de reaes bioqumicas mi de bactrias. Para fins prticos, apenas as divises de famlia,
crobianas. Os agrupamentos numricos derivados desses testes gnero e espcie so comumente utilizadas.
identificam diferentes cepas de um nvel de seleo a partir da Existe considervel diversidade gentica entre as bactrias.
similaridade total (geralmente > 80% ao nvel de espcie) com A caracterizao qumica do DNA genmico bacteriano reve
base na frequncia com que esses traos so partilhados. Alm la ampla variedade de composies de bases de nucleotdeos
disso, a classificao numrica fornece percentuais de frequncia entre diferentes cepas bacterianas. O contedo de guanina +
de caracteres positivos para todas as cepas dentro de cada agrupa citosina (G + C) em bactrias prximas similar, indicando
mento. A limitao desta estratgia que se trata de um sistema que possvel empregar o parentesco gentico do DNA de or
esttico, que no permite a avaliao da evoluo bacteriana e a ganismos semelhantes para medir a relao taxonmica. O pa
descoberta regular de novos patgenos bacterianos (Fig. 3.2). rmetro de similaridade DNA-DNA baseado na diferena do
ponto de desnaturao trmica tem sido um mtodo impreciso
Classificaes filogenticas: em busca de empregado para o delineamento de espcies.
uma compreenso das relaes evolutivas Um mtodo mais preciso o sequenciamento do DNA.
Este mtodo tornou-se um procedimento de rotina e a com
entre as bactrias parao das sequncias do DNA de genes divergentes pode
As classificaes filogenticas constituem medidas entre dois fornecer uma medida de sua relao. Os genes para diversas
microrganismos e implicam que ambos tenham o mesmo an funes, tais como os que codificam antgenos de superfcie
cestral. O registro de fsseis possibilitou que a formulao dessas para evaso do sistema imunolgico, divergem a diferentes
dedues se tornasse relativamente fcil para muitos dos repre taxas em relao a genes constitutivos (housekeeping), como
sentantes dos reinos vegetal e animal. Entretanto, tal tipo de re os que codificam citocromos. Assim, as diferenas na sequn
gistro no existe para as bactrias e, na ausncia de evidncias cia do DNA entre genes rapidamente divergentes podem ser
moleculares, pode ser difcil estabelecer uma distino entre a utilizadas para se estabelecer a distncia gentica de grupos de
evoluo convergente e a divergente para traos bacterianos. bactrias estreitamente relacionados, enquanto as diferenas

...

FIGURA 3.2 O teste API demonstrando como as bactrias podem ser diferenciadas usando uma srie de testes bioqumicos. Cada comparti
mento pequeno contm um p desidratado de um teste bioqumico, em que uma cultura bacteriana inoculada. Aps incubao, as mudanas
colorimtricas podem ser pontuadas numericamente, produzindo um nmero que corresponde a uma espcie bacteriana especfica e ao gnero.
(Cortesia da bioMerieux, lnc.)
CAPTULO 3 Classificao das bactrias 47

QUADRO 3.3 Principais categorias e grupos de bactrias que causam doenas em seres humanos segundo o
esquema de identificao do Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 9 edio
Bergey's Manual ofSystematic Bacteriology

1. Eubactrias gram-negativas que possuem parede celular


Grupo 1 : Espiroquetas Treponema
Borre/ia
Leptospira
Grupo 2: Bactrias gram-negativas aerbias/microaeroflicas, mveis, helicoidais/vibrioides Campylobacter
Helicobacter
Spirillum
Grupo 3: Bactrias curvas, imveis (ou raramente mveis) Nenhuma
Grupo 4: Cocos e bastonetes gram-negativos aerbios/microaeroflicos Alcaligenes
Bordetella
Bruce/la
Francisella
Legionella
Moraxella
Neisseria
Pseudomonas
Rochalimaea
Bacteroides (algumas espcies)
Grupo 5: Bastonetes gram-negativos anaerbios facultativos Escherichia (e bactrias coliformes relacionadas)
Klebsiella
Proteus
Providencia
Salmonella
Shigella
Yersinia
Vibrio
Haemophilus
Pasteurella
Grupo 6: Bastonetes gram-negativos anaerbios, retos, curvos e helicoidais Bacteroides
Fusobacterium
Prevotel/a
Grupo 7: Bactrias dissimuladoras redutoras de enxofre ou sulfato Nenhuma
Grupo 8: Cocos gram-negativos anaerbios Nenhuma
Grupo 9: Riqutsias e clamdias Rickettsia
Coxiella
Chlamydia
Grupo 1 O: Bactrias fototrficas anoxignicas Nenhuma
Grupo 1 1 : Bactrias fototrficas oxignicas Nenhuma
Grupo 12: Bactrias aerbias quimiolitotrficas e organismos variados Nenhuma
Grupo 13: Bactrias com apndices ou brotamentos Nenhuma
Grupo 14: Bactrias com bainha Nenhuma
Grupo 15: Bactrias no fotossintticas, no frutificadas, deslizantes Capnocytophaga
Grupo 16: Bactrias frutificadas deslizantes: mixobactrias Nenhuma
li. Bactrias gram-positivas que possuem parede celular
Grupo 17: Cocos gram-positivos Enterococcus
Peptostreptococcus
Staphy/ococcus
Streptococcus
Grupo 18: Bastonetes e cocos gram-positivos formadores de endsporos Bacillus
Clostridium
Grupo 19: Bastonetes gram-positivos regulares, no formadores de esporos Erysipelothrix
Listeria
Grupo 20: Bastonetes gram-positivos irregulares, no formadores de esporos Actinomyces
Corynebacterium
Mobiluncus
Grupo 21: Micobactrias Mycobacterium
Grupos 22 a 29: Actinomicetos Nocardia
Streptomyces
Rhodococcus
Ili. Eubactrias desprovidas de parede celular: micoplasmas ou Mollicutes
Grupo 30: Micoplasmas Mycoplasma
Ureaplasma
IV. Arqueobactrias
Grupo 31: Metangenos Nenhuma
Grupo 32: Arqueobactrias redutoras de sulfato Nenhuma
Grupo 33: Arqueobactrias haloflicas extremfilas Nenhuma
Grupo 34: Arqueobactrias desprovidas de parede celular Nenhuma
Grupo 35: Bactrias termoflicas extremas e hipertermoflicas metabolizadoras de enxofre Nenhuma
48 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Bactria Archaea Eucarya

Bactrias
verdes Mixomicetos
filamentosas Animais
Espiroquetas Entamoebae
Fungos
Methanosarcina
g ram-

Methanobacterium Halfilos -- Plantas


Proteobactrias positivas
Methanococcus
Cianobactrias Ciliados
T. celer

Planctomyces Thermoproteus Flagelados


Pyrodicticum
Bacteroides Tricomnades
Cytophaga
Microspordeos
Thermotoga --------..:
-------"'
Diplomnades
Aquifex

FIGURA 3.3 Arvore filogentica baseada em dados do rRNA, mostrando a separao das famlias das bactrias, das arqueas e dos eucariotos.
Os grupos das principais bactrias patognicas conhecidas so indicados na rea em cinza. O nico grupo de bactrias patognicas que no est
agrupado nessa rea sombreada o grupo Bacteroides.

de sequncia entre genes constitutivos (housekeeping) podem of Determinative Bacteriology, serve para auxiliar na identifica
ser utilizadas para medir a relao de grupos amplamente di o das bactrias descritas e cultivadas. As principais bactrias
vergentes de bactrias. que causam doenas infecciosas, tal como so classificadas no
Bergey's Manual, esto listadas no Quadro 3.3. Devido proba
bilidade de surgirem informaes sobre relaes filogenticas
RNA ribossmico que iro resultar em modificaes adicionais na organizao dos
Os ribossomos desempenham papel essencial na sntese pro grupos bacterianos no Bergey's Manual, suas designaes devem
teica para todos os organismos. Sequncias genticas que ser consideradas um trabalho em andamento.
codificam tanto o RNA ribossmico (rRNA) quanto as prote Conforme discutido no Captulo 2, existem dois grupos
nas (ambos so necessrios para a incluso de um ribossomo diferentes de procariotos, as eubactrias e as arqueobactrias.
funcional) foram altamente conservadas em toda a evoluo Ambas so pequenos organismos unicelulares que se replicam
e divergiram mais lentamente do que outros genes cromoss sexualmente. Eubactrias referem-se s bactrias clssicas tal
micos. A comparao da sequncia de nucleotdeos do RNA como a cincia as conhece historicamente. No possuem um
ribossmico 16S de uma variedade de fontes procariticas re ncleo verdadeiro, possuem lipdeos caractersticos que cons
velou a existncia de relaes evolutivas entre microrganismos tituem suas membranas, so dotadas de parede celular com
amplamente divergentes e levou elucidao de um novo rei posta por peptidoglicano e dispem de um mecanismo para
no, o das Arqueobactrias. A rvore filogentica baseada nos sntese de protenas e cidos nucleicos que podem ser inibidos
dados do RNA ribossmico (rRNA), mostrando a separao seletivamente por agentes antimicrobianos. Em contraste, as
entre bactria, arquea e famlias eucariotas, est representada arqueobactrias no possuem uma parede celular clssica, com
na Figura 3.3, que mostra os trs principais domnios da vida peptidoglicano, e apresentam muitas caractersticas (p. ex., me
biolgica tal como os conhecemos atualmente. A partir desse canismo de sntese proteica e de replicao de cido nucleico ),
diagrama, dois Reinos - as Eubactrias (bactrias verdadeiras) que so similares s das clulas eucariticas (Quadro 3.4).
e as Arqueobactrias - so distintos do ramo dos Eucariotos.
Eu bactrias
A. Eubactrias gram-negativas
DESCRIO DAS PRINCIPAIS CATEGORIAS
E GRUPOS DE BACTRIAS Trata-se de um grupo heterogneo de bactrias que possuem
um complexo envelope celular (do tipo gram-negativo) cons
titudo de membrana externa, espao periplasmtico contendo
Manual de bacteriologia sistemtica de Bergey uma camada interna delgada de peptidoglicano (que contm
O trabalho definitivo em termos de organizao taxonmica cido murmico) e membrana citoplasmtica. A forma da c
de bactrias a ltima edio do Bergey's Manual of Systematic lula (Fig. 3.4) pode ser esfrica, oval, em bastonete reto ou cur
Bacteriology. Publicado pela primeira vez em 1923. Esta publica vo, helicoidal ou filamentosa; algumas dessas formas podem
o classifica, usando chaves taxonmicas, bactrias conhecidas, apresentar bainha ou ser encapsuladas. A reproduo feita
cultivveis ou no. Um volume suplementar, o Bergey's Manual por diviso binria, porm alguns grupos se reproduzem por
CAPTULO 3 Classificao das bactrias 49

QUADRO 3.4 Principais caractersticas partilhadas por arqueobactrias e clulas eucariticas que esto ausentes
em eubadrias
Caracterstica Eubactrias Arqueobactrias, Eucariotos

Fator de elongao 2 (EF-2) contm o aminocido diftamina e , portanto, ADP-ribosilvel No Sim


pela toxina diftrica
O iniciador metionil tRNA no formilado No Sim

Alguns genes tRNA contm ntrons No Sim, em eucariotos

A sntese proteica inibida por anisomicina, mas no por cloranfenicol No Sim

RNA polimerases dependentes de DNA so enzimas multicomponentes insensveis aos No Sim


antimicrobianos rifampicina e estreptomicina

RNA polimerases dependentes de DNA so enzimas multicomponentes e so insensveis No Sim


aos antibiticos rifampicina e estreptolidigina

brotamento. As mixobactrias podem formar corpos frutfe e esporogneas simples, bem como actinomicetos estrutural
ros e mixsporos. A motilidade, quando presente, realizada mente complexos e formas correlatas.
por meio de flagelos ou por deslizamento. Os membros dessa
categoria podem ser bactrias fototrficas ou no fototrficas C. Eubactrias desprovidas de parede celular
(Cap. 5) e incluir espcies aerbias, anaerbias, anaerbias Trata-se de microrganismos que carecem de parede celular
facultativas e microaerofilicas. (comumente denominados micoplasmas, compreendendo a
classe Mollicutes) e que no sintetizam os precursores do pep
B. Eubactrias gram-positivas tidoglicano. Delimitados por uma membrana, a membrana
Essas bactrias possuem uma parede celular do tipo gram-po plasmtica (Fig. 3.5). Assemelham-se s formas L, que podem
sitiva; em geral, mas nem sempre, as clulas exibem colorao ser produzidas por muitas espcies de bactrias (notadamen
Gram-positiva. O envelope dos organismos gram-positivos te as eubactrias gram-positivas); todavia, diferentemente das
consiste em uma espessa parede celular que determina a forma formas L, os micoplasmas nunca sofrem reverso para o estado
celular e uma membrana citoplasmtica. Essas clulas podem dotado de parede celular, e no existe relao antignica entre
ser encapsuladas e podem exibir motilidade mediada por flage os micoplasmas e as formas L eubacterianas.
los. As clulas podem ser esfricas, em forma de bastonete ou Seis gneros foram classificados como micoplasmas com
filamentos. Os bastonetes e filamentos podem no ser ramifi base no seu habitat; entretanto, apenas dois contm patgenos
cados ou exibir uma verdadeira ramificao. Em geral, a repro de animais. Os micoplasmas so microrganismos altamente
duo feita por diviso binria. Algumas bactrias includas pleomrficos cujo tamanho varia de formas vesiculares a for
nessa categoria produzem esporos (p. ex., Bacillus e espcies mas filtrveis muito pequenas (0,2 m) (so muito pequenos
Clostridium) como formas de latncia que so altamente resis para serem capturados em filtros que rotineiramente retm a
tentes a desinfeco. Em geral, as eubactrias gram-positivas maior parte das bactrias).
so hetertrofas quimiossintticas (Cap. 5) e incluem esp A reproduo pode ocorrer por brotamento, fragmentao
cies aerbias, anaerbias e anaerbias facultativas. Os grupos ou diviso binria, isoladamente ou em combinao. A maio
que compem essa categoria incluem bactrias asporogneas ria das espcies necessita de um meio de cultura complexo para

11. ,

I


o'
-
.. 1
. ..
/1 11' '

...


#
\

...

-
I



.. .

..
\4


II
17
/
li


-=-- .


#
\_1 '""
,,,,,,,.
A B e

FIGURA 3.4 As formas celulares que ocorrem entre bactrias unicelulares verdadeiras. (A) Coco. (8) Bastonete. (C) Espiroqueta. (Contraste de
fase, ampliada 1.500 vezes.) (Reproduzida, com autorizao, de Stanier RY, Doudoroff M, Adelberg EA. The Microbial World, 3rd ed. Copyright 1970.
Com autorizao, de Prentice- Hall, lnc., Englewood Cliffs, NJ.)
50 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

uma diversidade de formas, como formas esfricas, espirala


das, em placas ou em bastonetes; alm disso, ocorrem formas
unicelulares e multicelulares, em filamentos ou agregados. A
multiplicao ocorre por diviso binria, brotamento, constri
o, fragmentao ou por outros mecanismos desconhecidos.

SUBTIPAGEM E SUA APLICAO


Em certas circunstncias (como em caso de epidemia), im
portante distinguir entre cepas de determinada espcie ou iden
tificar uma cepa em particular. Este processo denominado
subtipagem e consiste no exame de bactrias isoladas procura
de caractersticas que permitam uma discriminao abaixo do
nvel de espcie. Classicamente, a subtipagem efetuada por bio
tipagem, sorotipagem, teste de suscetibilidade a antimicrobianos
e fagotipagem. Por exemplo, foram identificados mais de 130 so
rogrupos de Vibrio cholerae com base em diferenas antignicas
no polissacardeo O de seu LPS; entretanto, apenas os sorogru
pos 01 e 0139 esto associados clera pandmica e epidmica,
respectivamente. Dentro desses sorogrupos, apenas as cepas que
produzem um pilus particular em forma de feixe e a toxina da
FIGURA 3.5 Micrografia eletrnica de clulas de um membro do
grupo dos micoplasmas, o agente da broncopneumonia no rato (am clera so virulentas e provocam clera. Contudo, cepas O 1 no
pliada 1 .960 vezes). (Reproduzida, com autorizao, de Klieneberger toxignicas de V. cholerae, no associadas clera epidmica,
Nobel E, Cuckow FW: A study of organisms of the pleuropneumonia tambm foram isoladas de amostras do ambiente, de alimentos
group by electron microscopy. J Gen Microbiol 1955;1 2:99.) e de pacientes com diarreia espordica.

Tipagem sorolgica
crescer e tende a formar colnias caractersticas em forma de"ovo A clonalidade em termos de microrganismos isolados de um
frito" em meio slido. Uma caracterstica peculiar dos Mollicutes surto de origem comum (fonte pontual de disseminao)
que alguns gneros necessitam de colesterol para crescerem; o constitui um importante conceito na epidemiologia das doen
colesterol no esterificado, quando presente, constitui um com as infecciosas. Agentes etiolgicos associados a esses surtos de
ponente nico das membranas tanto de espcies que necessitam infeces so geralmente clonais; em outras palavras, consti
quanto de espcies que no necessitam de esterol. tuem a prognie de uma nica clula e, portanto, para todos
os fins prticos, so geneticamente idnticos. Assim, a subti
Arqueobactrias pagem desempenha importante papel na discriminao desses
Esses microrganismos habitam predominantemente em am microrganismos. Avanos recentes, obtidos em biotecnologia,
bientes terrestres e aquticos de condies extremas (elevado melhoraram notavelmente nossa capacidade de subtipar mi
teor de sal, altas temperaturas, anaerbios) e so frequentemente crorganismos. A tecnologia do hibridoma resultou no desen
denominados "extremfilos"; alguns so simbiontes no trato di volvimento de anticorpos monoclonais contra antgenos de
gestrio humano e de animais. As arqueobactrias consistem em superfcie celular que tm sido utilizados para criar sistemas de
microrganismos aerbios, anaerbios e anaerbios facultativos subtipagem altamente padronizados, que descrevem sorotipos
que so quimiolitotrficos, heterotrficos ou heterotrficos bacterianos. Esta uma importante ferramenta para definio
facultativos. Algumas espcies so mesoflicas, enquanto outras da disseminao epidemiolgica de uma infeco bacteriana.
so capazes de crescer a temperaturas superiores a lOOC. Tais Outros microrganismos no podem ser identificados como
arqueobactrias hipertermoflicas so peculiarmente adaptadas sorotipos nicos. Por exemplo, alguns patgenos (Neisseria
ao crescimento em altas temperaturas. Com poucas excees, gonorrhoeae) so transmitidos como um inculo composto
as enzimas isoladas desses microrganismos so intrinsecamente de quasiespcies (que significa que existe uma extensa varia
mais termoestveis do que as enzimas correspondentes encon o antignica entre as bactrias presentes no inculo). Nesses
tradas nos microrganismos mesoflicos. Algumas dessas enzimas casos, grupos de hibridomas que reconhecem variantes dos
termoestveis, como a DNA polimerase do Thermus aquaticus microrganismos originais so empregados para categorizar so
(Taq polimerase), so um importante componente dos mtodos rovariantes ou sorovares.
de amplificao do DNA, tais como a reao em cadeia da poli
merase (PCR, na sigla em ingls). Genotipagem
As arqueobactrias podem ser diferenciadas das eubactrias A genotipagem por eletroforese de enzimas multilocal (MLEE,
em parte pela ausncia de parede celular com peptidoglicano, na sigla em ingls), o mtodo-padro para a pesquisa gentica da
presena de lipdeos diter isoprenoide ou tetrater diglicerol, e populao eucaritica, tambm foi utilizada para estudo da di
sequncias caractersticas do RNA ribossmico. As arqueobac versidade gentica e da estrutura clonal dos microrganismos pa
trias tambm compartilham algumas caractersticas molecu tognicos. A MLEE envolve a determinao das mobilidades de
lares com as eubactrias (Quadro 3.4). As clulas podem exibir um conjunto de enzimas solveis (em geral, 15 a 25 enzimas) por
CAPTULO 3 Classificao das bactrias 51

eletroforese em gel de amido. Como a velocidade de migrao de com endonucleases de restrio e, em seguida, a comparao
uma protena durante a eletroforese e a sua carga eletrosttica do nmero e do tamanho dos fragmentos de restrio resul
efetiva so determinadas pela sequncia de seus aminocidos, tantes frequentemente fornecem informaes adicionais teis.
as variantes de mobilidade (conhecidas como eletromorfos ou A anlise dos plasmdeos mostrou-se extremamente til para o
alozimas) de uma enzima refletem as substituies de amino estudo de surtos restritos no tempo e no espao (p. ex., surto
cidos na sequncia proteica, que reflete alteraes na sequncia em um hospital), particularmente quando combinada com
do DNA que codifica a protena. Os genes estruturais que codifi outros mtodos de identificao.
cam enzimas na Escherichia coli exibem extensa diversidade ge
ntica; todavia, ao utilizar a MLEE, os pesquisadores dos Centers Anlise de endonucleases de restrio
for Disease Control and Prevention verificaram que as cepas de
O uso de enzimas de restrio para a clivagem do DNA em frag
E. coli do sorotipo 0157:H7 descendiam de um clone ampla
mentos distintos constitui um dos procedimentos mais bsicos
mente distribudo na Amrica do Norte.
em biologia molecular. As endonucleases de restrio reconhe
cem sequncias curtas de DNA (sequncias de restrio) e cli
Fingerprint* qumico vam o DNA de filamento duplo no interior dessa sequncia ou
A caracterizao ou a identificao de isolados tem sido aperfei adjacente a ela. As sequncias de restrio, cujo comprimento
oada pela aplicao de mtodos fsicos para as clulas procari varia de quatro a mais de 12 bases, ocorrem em todo o cromos
ticas, tais como a espectroscopia infravermelha transformada de somo bacteriano. As enzimas de restrio que reconhecem se
Fourier (FTIR), a espectroscopia de pirlise de massa e a ioniza quncias curtas (p. ex., quatro pares de base) ocorrem com maior
o/dessoro assistida a laser com tempo de fuga (Maldi/Tof) frequncia do que as que reconhecem sequncias longas (p. ex.,
ou a espectroscopia de massa por ionizao. O equipamento ne 12 pares de base). Por conseguinte, as enzimas que reconhecem as
cessrio para aplicao dessas tcnicas poderosas caro e no sequncias curtas de DNA produzem mais fragmentos do que as
est disponvel na rotina dos laboratrios clnicos**. enzimas que reconhecem sequncias de restrio longas. Vrios
mtodos de subtipagem empregam o DNA digerido por endo
nucleases de restrio. O mtodo bsico consiste na digesto do
TAXONOMIA BASEADA EM CIDOS
DNA com uma enzima capaz de reconhecer um local de restri
NUCLEICOS o de ocorrncia frequente, com separao de fragmentos, cujo
comprimento em geral varia de 0,5 a 50 kb, por eletroforese em
Desde 1975, os desenvolvimentos no isolamento, na amplifica
gel de agarose seguida de visualizao sob luz ultravioleta aps
o e na determinao da sequncia dos cidos nucleicos estimu
colorao com brometo de etdio. Uma das principais limitaes
laram a evoluo de sistemas de subtipagem baseados em cidos
dessa tcnica a dificuldade de interpretao dos perfis comple
nucleicos. Esses sistemas incluem a anlise do perfil de plasm
xos constitudos de centenas de bandas que podem apresentar
deos; anlise da endonuclease de restrio; ribotipagem, eletrofo
m resoluo e sobrepor-se. Este problema foi solucionado com
rese em gel de campo pulsado; amplificao com PCR e digesto
o uso de endonucleases de restrio que efetuam clivagens em
de genes especficos com a endonuclease de restrio; AP-PCR
locais de restrio de ocorrncia rara. Em geral, a digesto do
(PCR com sequncias iniciadoras escolhidas de maneira arbitr
DNA com tais enzimas resulta em cinco a 20 fragmentos, cujo
ria); bem como anlise da sequncia de cidos nucleicos.
comprimento varia de cerca de 10 a 800 kb. A separao desses
grandes fragmentos de DNA efetuada por uma tcnica deno
Anlise de plasmdeos minada eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE, na sigla
A anlise do perfil de plasmdeos foi a primeira tcnica, e a em ingls), que exige equipamento especializado. Teoricamente,
mais simples, baseada no DNA aplicada a estudos epidemio todas as bactrias isoladas podem ser tipadas por esse mtodo.
lgicos. Os plasmdeos, elementos genticos extracromoss Sua vantagem que o perfil de restrio consiste em poucas ban
micos (Cap. 7), so isolados de cada bactria e, em seguida, das de boa resoluo representando todo o cromossomo bacte
separados por eletroforese em gel de agarose para determinar riano em um nico gel.
seu nmero e tamanho. Entretanto, muitas bactrias podem
apresentar plasmdeos de tamanho idntico, porm com dife Anlise por Southern blot
rentes sequncias. Por conseguinte, a digesto dos plasmdeos
Esta anlise foi assim denominada em homenagem ao seu
inventor, Edwin Mellor Southern, e tem sido utilizada como
* N. de R.T. O termo fingerprint utilizado para designar mtodos ana
mtodo de subtipagem para identificao de microrganismos
lticos capazes de detectar diferenas sutis entre compostos similares.
** N. de R.T. A rpida identificao de microrganismos, com base na tec isolados associados a surtos. Para essa anlise, as preparaes
nologia MALDI-TOF alcanada atravs da obteno de espectros e os de DNA de isolados bacterianos so submetidas digesto por
comparando a um banco de dados. Os picos dos espectros obtidos so endonucleases de restrio. Aps eletroforese em gel de agaro
comparados com o padro caracterstico de uma espcie, gnero, ou fa
se, os fragmentos de restrio separados so transferidos para
mlia de microrganismos, resultando assim na identificao do organis
mo. Aps a cultura os isolados so simultaneamente preparados para o uma membrana de nitrocelulose ou nilon. Esses fragmentos
MALDI-TOF e para outro aparelho automatizado de identificao e teste de DNA de fita dupla so primeiramente convertidos em se
de sensibilidade a antimicrobianos. Em cerca de dois minutos, a identifi quncias lineares de fita simples. Com a utilizao de um frag
cao do organismo obtida. As n i formaes podem ser m i ediatamente mento marcado de DNA como sonda, possvel identificar os
transmitidas ao mdico como auxlio ao diagnstico. Os resultados dos
testes de sensibilidade podem estar disponveis em menos de cinco horas, fragmentos de restrio que contm sequncias (Zoei) homlo
dependendo do aparelho auxiliar utilizado. Atualmente alguns laborat gas sonda por complementao com os fragmentos ligados
rios no Brasil esto testando essa metodologia. fita simples (Fig. 3.6). Os polimorfismos do comprimento dos
52 SEO 1 Fu nda m entos da Microbiologia

Enzimas de restrio

1) Digesto do DNA com o


uso de enzimas de restrio

2) Separao dos fragmentos


Gel de agarose por eletroforese em gel de agarose

Membrana de nilon

3) Fragmentos separados
so transferidos para uma
membrana de nilon


J
Sonda de DNA marcado
Filme de deteco

4) Sonda de DNA marcado hibridiza com 5) Deteco do fragmento marcado


o DNA ligado membrana de nilon

FIGURA 3.6 Anlise por Southern blot mostrando como toei especficos em fragmentos de DNA separados podem ser detectados com uma son
da de DNA marcado. Este procedimento possibilita, em essncia, a discriminao do DNA em trs nveis: (1) no nvel de reconhecimento por enzima
de restrio, (2) pelo tamanho do fragmento de DNA, e (3) pela hibridizao de uma sonda de DNA a um locus especfico definido por uma banda
especfica, em uma posio especfica da membrana.

fragmentos de restrio (RFLP, na sigla em ingls) referem-se microrganismos possuem vrias cpias (5 a 7) desses genes, re
s variaes tanto no nmero de Zoei homlogos com a sonda sultando em padres com um nmero suficiente de bandas para
quanto nos locais de restrio no interior desses Zoei ou adja proporcionar um poder de discriminao satisfatrio; entretan
centes a eles. to, a ribotipagem de valor limitado para alguns microrganis
mos, tais como as micobactrias, que s possuem uma cpia de
tais genes.
Ribotipagem
Este mtodo utiliza a anlise por Southern bZotpara detectar poli
morfismos de genes de rRNA encontrados em todas as bactrias.
Sequncias repetitivas
Como as sequncias ribossmicas so altamente conserva Na era atual da genmica na medicina molecular, centenas de
das, podem ser detectadas com uma sonda comum preparada genomas microbianos tm sido sequenciados. Com esta era,
a partir do rRNA 16S e 23S de uma eubactria, E. eoZi. Muitos surgiram as ferramentas de bioinformtica, para explorar essa
CAPTULO 3 Classificao das bactrias 53

riqueza de informaes sobre as sequncias de DNA na iden em muito o nmero de organismos cultivveis (Quadro 3.5).
tificao de novos alvos para subtipar patgenos, tais como Entretanto, estimativas mais recentes sugerem que o total de
as sequncias repetitivas encontradas em diferentes espcies espcies bacterianas no mundo situa-se entre 107 e 109 At re
(Cap. 7). Essas sequncias repetitivas foram chamadas de DNA centemente, a identificao microbiana exigia o isolamento de
satlite e possuem unidades repetitivas que variam de 10 pb culturas puras seguido de testes para inmeros traos fisiol
(pares de base) a 100 pb. Em geral so chamadas de sequncias gicos e bioqumicos. Os mdicos j esto familiarizados com
repetidas de nmero varivel (VNTR de variable number as doenas humanas associadas a microrganismos visveis,
tandem repeats). As VNTR foram encontradas em regies porm no cultivveis. Na atualidade os cientistas esto utili
que controlam a expresso gnica de dentro de fases abertas zando uma abordagem auxiliada pela PCR, utilizando o rRNA
de leitura. A unidade repetida e o nmero de cpias repetidas para a identificao de microrganismos patognicos in situ. A
lado a lado definem cada locus VNTR. Uma estratgia de ge primeira fase dessa abordagem envolve a extrao do DNA de
notipagem que emprega PCR, citada como anlise VNTR de uma amostra apropriada, o uso de tcnicas moleculares padro
mltiplos locus (MLVA, de multiple-locus VNTR analysis), tem nizadas para se obter uma "biblioteca" de clones, a recuperao
como vantagem os nveis de diversidade gerados pelo tamanho da informao de sequncias do rDNA e a anlise compara
das unidades repetidas e pela variao do nmero de cpias tiva das sequncias recuperadas. Todos esses dados fornecem
em um nmero conhecido de Zoei. Essa tcnica mostra-se espe informaes sobre a identidade ou relao das sequncias em
cialmente til na subtipagem de espcies monomrficas, como comparao com a base de dados disponveis. Na segunda fase,
Bacillus anthracis, Yersinia pestis e Francisella tularensis. a prova de que as sequncias provm de clulas da amostra ori
ginal obtida por hibridizao in situ, utilizando-se sondas es
pecficas para sequncias. Essa abordagem vem sendo utilizada
Microbiologia forense
na identificao de microrganismos patognicos. Por exemplo,
Os mtodos de genotipagem esto progredindo em direo um patgeno previamente no caracterizado foi identificado
identificao de polimorfismos de um nico gene em fases como a bactria, em forma de bastonete, associada doena
abertas de leitura e regies intergnicas para responder a uma de Whipple, atualmente designado Tropheryma whipplei. A
grande variedade de questes de epidemiologia e evoluo. O abordagem com o rRNA tambm foi utilizada para identificar
campo da microbiologia forense desenvolveu-se na onda dos o agente etiolgico da angiomatose bacilar como Bartonella
ataques bioterroristas com esporos de Bacillus anthracis (an henselae e mostrar que o patgeno oportunista Pneumocystis
traz ou carbnculo) no outono de 2001 nos EUA. A micro jiroveci um fungo. Indubitavelmente esta e outras tcnicas
biologia forense foi parte da investigao criminal usada para iro identificar outros agentes etiolgicos no futuro.
identificao exata de cepas e subcepas do microrganismo usa
do nesse crime de bioterrorismo.
OBJETIVOS
MTODOS PARA A IDENTIFICAO 1. Compreender como o vocabulrio taxonmico crtico na
DE MICRORGANISMOS PATOGNICOS comunicao cientfica no campo das doenas infecciosas.
SEM O USO DE CULTURAS 2. Como a taxonomia classifica.
3. Compreender as caractersticas de crescimento, bioqumi
As tentativas de estimar o nmero total de bactrias, arqueo cos e genticos, que so usadas na identificao bacteriana.
bactrias e vrus so problemticas devido a dificuldades como 4. Entender as diferenas entre eubactria, arqueobactria e
deteco e recuperao do meio ambiente, ou conhecimento eucariontes.
incompleto de associaes microbianas obrigatrias, e o pro 5. Entender como as diferentes tcnicas moleculares podem
blema do conceito de espcie nesses grupos. Contudo, estimati auxiliar na taxonomia.
vas indicam que o nmero de micrbios no cultivveis excede

QUESTES DE REVISO
QUADRO 3.5 Nmeros estimados e conhecidos das 1. As eubactrias desprovidas de parede celular e que no sinteti
espcies biolgicas zam precursores do peptidoglicano so chamadas:
Total de Porcentagem (A) Bactrias gram-negativas
. (B) Vrus
Espcies espec1es de espcies
,

Grupo conhecidas estimadas conhecidas (C) Micoplasmas


(D) Sorovares variantes
Vrus 5.000 1 30.000 4
(E) Bacilos
Bactrias 4.760 40.000 12
2. As arqueobactrias podem ser distinguidas das eubactrias pela
Fungos 69.000 1 .500.000 5
ausncia de:
Algas 40.000 60.000 67 (A) DNA
Protozorios 30.800 100.000 31 (B) RNA
(C) Ribossomos
Reproduzido, com autorizao, de Annual Reviews, lnc., from Buli AT et ai.:
Biodiversity as a source of innovation in biotechnology. Ann RevMicrobiol 1992;46:219. (D) Peptidoglicano
Permission comveyed through Copyright Clearance Center, lnc. (E) Ncleo
54 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

3. Um paciente de 16 anos admitido no hospital com fibrose cs Amann RI, Ludwig W, Schleiffer K-H: Phylogenetic identification
tica. Uma cultura de escarro indica Burkholderia cepacia. Poste and in situ detection of individual microbial cells without culture.
riormente, surgem dois outros pacientes com bacteriemia por B. Microbiol Rev 1995;59:143.
cepacia, e o organismo cultivado a partir do escarro de outros Boone DR, Castenholz RW (editors): Bergey's Manual of Systematic
quatro pacientes. Durante esse surto hospitalar por B. cepacia, Bacteriology: The Archaea and the Deeply Branching and Pho
50 isolados do ambiente e de sete pacientes esto sendo subtipa totrophic Bacteria, vol. l, 2nd ed. Springer, 2001.
dos para identificao da origem do surto. Qual das seguintes Breeze RG, Budowle B, Schutzer SE (editors): Microbial Forensics.
tcnicas pode ser a melhor nessa tentativa? Elsevier, 2005.
(A) Cultura Brenner DJ, Krieg NR, Staley JT (editors): Part A. Introductory essays.
(B) Ribotipagem Bergey's Manual of Systematic Bacteriology: The Proteobacteria,
(C) Sequenciamento do rRNA 16S vol 2. Springer, 2005.
(D) Teste de sensibilidade aos antimicrobianos Brenner DJ, Krieg NR, Staley JT (editors): Part B. The gammapro
(E) Sequenciamento dos cidos nucleicos teobacteria. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology: The Pro
teobacteria, vol 2. Springer, 2005.
4. Um microrganismo gram-positivo no cultivvel foi identificado Brenner DJ, Krieg NR, Staley JT (editors): Part C. The alpha-, beta-,
em amostras de tecidos obtidas de pacientes com doena prvia delta-, and epsilonproteobacteria. Bergey's Manual of Systematic
no descrita. Qual das seguintes tcnicas pode ser a mais til na Bacteriology: The Proteobacteria, vol 3. Springer, 2005.
identificao desse microrganismo? Colwell RR, Grimes DJ (editors): Nonculturable Microorganisms in
(A) Sorologia the Environment. ASM Press, 2000.
(B) Amplificao por PCR e sequenciamento dos genes do rRNA Curtis TP, Sloan WT, Scannell JW: Estimating prokaryotic diversity
(C) Eletroforese enzimtica de mltiplos locus and its limits. Proc Natl Acad Sei U S A 2002;99:10494.
(D) Eletroforese em gel de poliacrilamida-SDS Edman JC et al.: Ribosomal RNA sequence shows Pneumocystis car
(E) Eletroforese em campo pulsado inii to be a member of the fungi. Nature (London) 1988;334:519.
Fernandez LA: Exploring prokaryotic diversity: There are other mo
5. O DNA polimerase do Thermus aquaticus um importante com
lecular worlds. Molec Microbiol 2005;55:5-15.
ponente dos mtodos de amplificao do DNA, como a reao
Fredericks DN, Relman DA: Sequence-based identification of mi
em cadeia da polimerase. Esse microrganismo capaz de crescer
crobial pathogens: A reconsideration of Koch's postulates. Clin
em temperaturas superiores a lOOC. Os microrganismos capa
Microbiol Rev 1996;9:18.
zes de crescer a tais temperaturas so chamados:
Holt JG et al. (editors): Bergey's Manual ofDeterminative Bacteriology,
(A) Mesfilos
9th ed. Williams & Wilkins, 1994.
(B) Psicrfilos
Medini D et al.: Microbiology in the post-genomic era. Nat Rev Mi
(C) Halfilos
crobiol 2008;6:429.
(D) Termfilos
Persing DH et al. (editors): Molecular Microbiology. Diagnostic Prin
(E) Quimiolittrofos
cipies and Practice. ASM Press, 2004.
Riley LW: Molecular Epidemiology of Infectious Diseases. Principies
Respostas
and Practices. ASM Press, 2004.
1. c 3. E 5. D Rosello-Mora R, Amann R: The species concept for prokaryotes.
FEMS Microbiol Rev 2001;25:39.
2. D 4. B
Schloss PD, Handelsman J: Status of the microbial census. Microbiol
Molec Biol Rev 2004;68:686.
Stringer JR et al.: A new name (Pneumocystisjiroveci) for Pneumocys
REFERNCIAS tis from humans. Emerg Infect Dis 2002;8:891.
Achtman M, Wagner M: Microbial diversity and the genetic nature of Whitman WB, Coleman DC, Wiebe WJ: Prokaryotes: The unseen
microbial species. Nat Rev Microbiol 2008;6:431. majority. Proc Natl Acad Sei U S A 1998;95:6578.
C A P T U L O

Crescimento, sobrevida e

SOBREVIDA DOS MICRORGANISMOS unidade de volume de cultura) ou de concentrao de biomas


sa (peso seco de clulas por unidade de volume de cultura).
NO AMBIENTE NATURAL Esses dois parmetros nem sempre so equivalentes, visto que
A populao de microrganismos na biosfera permanece apro o peso seco mdio da clula varia em diferentes estgios da vida
ximadamente constante, visto que o crescimento microbiano de uma cultura. Tampouco tm significado idntico: em estu
contrabalanceado pela sua prpria morte. A sobrevivncia dos de gentica microbiana e de inativao microbiana, a con
de qualquer grupo microbiano em um nicho especfico , em centrao celular constitui fator significativo; j em estudos de
ltima anlise, influenciada pela competio bem-sucedida bioqumica ou nutrio microbiana, o fator significativo passa
por nutrientes e pela manuteno de um reservatrio de clu a ser a concentrao de biomassa.
las vivas, frequentemente composto por clulas hospedeiras e
por diferentes microrganismos. Consequentemente, o enten A. Concentrao celular
dimento da competio pelos recursos nutricionais dentro de
um dado microambiente essencial para compreenso sobre o A contagem de clulas viveis (Quadro 4.1) em geral, con
crescimento, sobrevivncia e a evoluo das espcies bacteria siderada uma medida da concentrao celular. Para muitos
nas (tambm conhecido como fisiologia). propsitos, a turvao de uma cultura, medida por mtodos
A maior parte do conhecimento adquirido sobre a fisiolo foteltricos, pode estar relacionada com a contagem vivel na
gia microbiana provm do estudo em laboratrios de culturas forma de uma curva-padro. Como alternativa, possvel uma
crescidas em condies ideais (excesso de nutrientes), consti estimativa visual aproximada. Por exemplo, uma suspenso
tuindo assim a base de discusso desse captulo. Entretanto, pouco turva de Escherichia coli contm cerca de 107 clulas por
muitos microrganismos competem no ambiente natural em mililitro, enquanto uma suspenso bastante turva contm cerca
condies de estresse nutricional. Alm disso, preciso reco de 108 clulas por mililitro. Quando se utilizam medidas turbi
nhecer que um nicho microbiano vazio no meio ambiente ser dimtricas, a correlao entre a turvao e a contagem de clu
logo preenchido por outras bactrias. De certa forma, um di las viveis pode variar durante o crescimento e a morte de uma
lema que os procedimentos de sade pblica ainda enfatizem a cultura; as clulas podem perder a viabilidade sem produzirem
simples eliminao de microrganismos mediante a limpeza de perda na turvao da cultura.
seu nicho, uma vez que estes espaos tendem a ser preenchi
dos com outras espcies bacterianas. Logo, a compreenso das B. Densidade da biomassa
complexas interaes que asseguram a sobrevivncia de uma
bactria especfica, em uma biosfera microbiana diversificada Em princpio, a biomassa pode ser medida diretamente ao se
uma questo de eficcia fisiolgica. determinar o peso seco de uma cultura microbiana aps sua
lavagem com gua destilada. Na prtica, esse procedimento
trabalhoso, e o pesquisador geralmente prepara uma curva
O SIGNIFICADO DO CRESCIMENTO padro que relaciona o peso seco com a turvao. Como al
ternativa, pode-se estimar indiretamente a concentrao da
O crescimento consiste no aumento ordenado da soma de todos biomassa ao medir-se um importante componente celular,
os componentes de um organismo. O aumento de tamanho que como as protenas, ou determinar-se o volume ocupado pelas
ocorre quando uma clula capta gua ou forma depsitos de lip clulas que se sedimentaram na suspenso.
deos ou polissacardeos no constitui um crescimento verdadeiro.
A multiplicao celular uma consequncia do crescimento; nos
organismos unicelulares, o crescimento leva a um aumento no CRESCIMENTO EXPONENCIAL
nmero de indivduos que compem uma populao ou cultura.
A constante da velocidade de crescimento
Determinao das concentraes microbianas A velocidade de crescimento das clulas no limitada por nu
As concentraes microbianas podem ser medidas em ter trientes de primeira ordem: a velocidade de crescimento (me
mos de concentrao celular (o nmero de clulas viveis por dida em gramas de biomassa produzida por hora) o produto
56 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

QUADRO 4.1 Exemplo de contagem vivel 16

Diluio Contagem em placa

No diludo Muito numerosa para contar


10-1 Muito numerosa para contar 8

10-2 510 f'


-

, 0-3 72 (
(/)
(/)
, 0-4 6 (
E 4

1 o-s 1 cc

Cada contagem corresponde mdia de trs placas (triplicata).

2
do tempo (t), da constante da velocidade de crescimento (k),
e da concentrao da biomassa, B:

1
dB 2td 3td
= kB (1)
dt Tempo de duplicao (td)
FIGURA 4.1 Crescimento exponencial. A biomassa (B) duplica a cada
O rearranjo da equao (1) demonstra que a constante da
tempo de duplicao (td).
velocidade de crescimento aquela em que as clulas produ
zem mais clulas:

Bdt funo do tempo; o tempo necessrio para duplicar a biomassa


k= (2) td (Fig. 4.1). A constante da velocidade de crescimento pode
dB
ser calculada a partir do tempo de duplicao ao substituirmos
B /B0 pelo valor 2 e t1 -t0 por td na equao (3), o que resulta
Uma constante da velocidade de crescimento de 4,3 h- 1, em
1
uma das mais altas registradas, significa que cada grama de c
lulas produz 4,3 g de clulas por hora durante esse perodo de ln2 = ktd
crescimento. Os microrganismos de crescimento lento podem ln2 (4)
k=
apresentar constantes de velocidade de crescimento muito bai td
xas, de at 0,02 h- 1 Com essa constante de crescimento, cada
grama de clulas da cultura produz 0,02 g de clulas por hora. Um tempo de duplicao rpido corresponde a uma alta
A integrao da equao (1) fornece constante da velocidade de crescimento. Por exemplo, um tem
po de duplicao de 10 minutos (0,17 h) corresponde a uma
- 1
B, BI constante da velocidade de crescimento de 4,1 h O tempo de
ln - = 2 3 1og10
'
- = k(t1 - to ) (3) duplicao relativamente longo de 35 h indica a uma constante
Bo Bo
da velocidade de crescimento de 0,02 h- 1
A constante da velocidade de crescimento calculada pode
O logaritmo natural da relao entre B (a biomassa no ser utilizada para se determinar a quantidade de crescimento
1
tempo 1 [t1 ]) e B0 (a biomassa no tempo zero [t0]) igual ao que ocorrer em um perodo especfico ou calcular o tempo
produto da constante da velocidade de crescimento (k) e di necessrio para que ocorra um aumento especfico de cresci
ferena no tempo (t1 - t0). O crescimento que obedece equa mento.
o (3) denominado exponencial porque a biomassa aumenta A quantidade de crescimento em um perodo especfico po
exponencialmente com relao ao tempo. Correlaes lineares de ser prevista com base no seguinte rearranjo da equao (3):
de crescimento exponencial so produzidas atravs da repre
sentao grfica do logaritmo da concentrao da biomassa (B)
como uma funo do tempo (t). (5)

possvel determinar a quantidade de crescimento que


Clculo da constante da velocidade ocorrer se uma cultura com constante de velocidade de cres
de crescimento e previso da cimento de 4,1 h- 1 crescer exponencialmente durante 5 h:
quantidade de crescimento
As bactrias se reproduzem por diviso binria, e o tempo m log io li_ = 4,lh-1 X 5h
(6)
dio necessrio para que a populao ou a biomassa duplique Bo 2,3
conhecido como tempo de gerao ou tempo de duplicao
(td). Em geral, o td determinado ao traar-se um grfico da Nesse exemplo, o aumento da biomassa de 10-9; uma
1
quantidade de crescimento em uma escala semilogartmica em nica clula bacteriana com peso seco de 2 x 10- 3 g originaria
CAPTULO 4 Crescimento, sobrevida e morte dos microrganismos 57

0,2 mg de biomassa, quantidade que povoaria densamente QUADRO 4.2 Fases da curva de crescimento
uma cultura de clulas de 5 mL. Obviamente, essa velocidade bacteriano
de crescimento no pode ser mantida por muito tempo. Um
perodo adicional de 5 h de crescimento a essa velocidade pro Fase Taxa de crescimento
duziria 200 kg de peso seco de biomassa, ou aproximadamente Latncia Zero
uma tonelada de clulas.
Exponencial Constante
Outro rearranjo da equao (3) permite-nos calcular a
quantidade de tempo necessria para que ocorra uma quanti Estacionria mxima Zero
dade especfica de crescimento. Na equao (7) a concentrao Declnio Negativa (morte)
de biomassa, B, substituda pela concentrao celular, N, para
possibilitar o clculo do tempo necessrio para que haja um
aumento especfico no nmero de clulas. apresentado na Figura 4.2. As fases da curva de crescimento
bacteriano mostradas na Figura 4.2 so reflexes dos eventos
em uma populao de clulas, e no em clulas individuais.
(7) Esse tipo de cultura classificado como cultura em batelada.
Uma tpica curva de crescimento pode ser analisada em quatro
fases (Quadro 4.2). A cultura em batelada um sistema fecha
Utilizando a equao (7), possvel, por exemplo, deter do com recursos limitados, sendo muito diferente de um hos
minar o tempo necessrio para que um organismo de cresci pedeiro humano.
mento lento com constante da velocidade de crescimento de
1
0,02 h- cresa de uma nica clula at uma suspenso celular
A fase de latncia (fase lag)
pouco turva com concentrao de 107 clulas/mililitro.
A fase de latncia representa um perodo durante o qual as c
lulas, com depleo de seus metablitos e enzimas, em conse
2,3 7
X
t -t = --- (8) quncia das condies desfavorveis existentes no final de sua
1 o 0,02h -l cultura anterior, adaptam-se ao seu novo ambiente. Verifica-se
a formao de enzimas e intermedirios que se acumulam at
A soluo da equao (8) revela que seriam necessrias cer alcanarem concentraes suficientes para permitir o reincio
ca de 800 h - pouco mais de 1 ms - para que ocorresse tal do crescimento.
quantidade de crescimento. A sobrevida dos microrganismos Se as clulas forem obtidas de um meio totalmente diferen
de crescimento lento implica que a corrida pela sobrevida bio te, s vezes ocorre de serem geneticamente incapazes de crescer
lgica nem sempre se baseia na velocidade - as espcies que no novo meio. Nesses casos, poder ocorrer uma fase de latn
crescem competem com xito por nutrientes e evitam sua des cia longa no crescimento, representando o perodo necessrio
truio por predadores e outros riscos ambientais. para que alguns mutantes presentes no inculo possam multi
plicar-se o suficiente para produzirem um aumento efetivo e
aparente no nmero de clulas.
A CURVA DE CRESCIMENTO
Se um volume fixo de meio lquido for inoculado com clulas
A fase exponencial
microbianas retiradas de uma cultura que previamente cres Durante a fase exponencial, as clulas encontram-se em estado
ceu at a saturao e o nmero de clulas viveis por milili de equilbrio dinmico. Novo material celular est sendo sin
tro for determinado periodicamente, bem como representado tetizado a uma velocidade constante, porm o novo material
em forma de grfico, em geral se obtm uma curva do tipo , em si, cataltico, e a massa aumenta de modo exponencial.
Tal situao prossegue at que ocorra uma de duas alternativas:
esgotamento de um ou mais nutrientes no meio, ou acmulo
de produtos metablicos txicos que inibem o crescimento. No
Fase caso dos microrganismos aerbios, o oxignio costuma ser o
..... estacionria
<O nutriente que se torna limitante. Quando a concentrao de
:::::1 Fase de morte
Q) clulas ultrapassa cerca de 1 x 107/mL (no caso das bactrias),
o ou fase
o Fase log ou a velocidade de crescimento diminui, a no ser que seja acres
t<O logartmica
de crescimento de declnio centado oxignio ao meio por agitao ou por borbulhamento
-
e: exponencial de ar. Quando a concentrao bacteriana atinge 4 a 5 x 109/mL,

e: a velocidade de difuso do oxignio no consegue suprir as de
o
o Fase de
<O latncia mandas mesmo em um meio de cultura arejado, o que retarda
'O progressivamente o crescimento.
Cl (fase lag)
.3

A fase estacionria mxima


Tempo
Por fim, a exausto de nutrientes ou o acmulo de produ
FIGURA 4.2 Curva de crescime nto bacte riano. tos txicos resulta em interrupo completa do crescimento.
58 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Entretanto, na maioria dos casos ocorre renovao celular na Biofilmes


fase estacionria: verifica-se uma lenta perda de clulas por
Tem sido cada vez mais reconhecido, que muitas infeces so
morte, compensada pela formao de novas clulas por cresci
causadas por bactrias que no crescem individualmente (ou
mento e diviso. Quando isso ocorre, a contagem total de clu
planctonicamente). Em vez disso, as clulas bacterianas cres
las aumenta lentamente, embora a contagem vivel permanea
cem em comunidades complexas em que comunicam-se entre
constante.
si. rotina, por exemplo, escovar os dentes todos os dias pa
ra remover a pelcula de bactrias que cresce continuamente,
A fase de declnio: a fase de morte at mesmo enquanto se dorme. De forma similar, os biofilmes
esto associados a infeces pulmonares causadas por Pseudo
Depois de um perodo na fase estacionria, que varia de acordo
com o microrganismo e as condies de cultura, a velocidade
monas aeruginosa e colonizao de cisternas de hospitais por
de morte aumenta at atingir o nvel de equilbrio dinmico.
Legionella pneumophila, entre outros. Esse padro de cresci
mento comea com uma nica clula bacteriana, que se adere a
A matemtica da morte no estado de equilbrio dinmico ser
uma determinada superfcie. Em seguida, essa clula se autor
discutida adiante. Na maioria dos casos, a taxa de morte celular
replica, sucessivamente, ou ocorre o recrutamento de outras
mais lenta do que o crescimento exponencial. Com frequn
espcies bacterianas na estrutura colonial em formao.
cia, aps ocorrer a morte da maioria das clulas, a velocidade
de morte diminui drasticamente, de modo que um pequeno
O reconhecimento desse padro de crescimento tem sido
amplamente estudado. A estratgia conceitua! da formao
nmero de sobreviventes pode persistir durante meses ou mes
do biofilme tem um sentido lgico: (1) atravs do crescimento
mo anos. Em alguns casos, essa persistncia pode refletir reno
bacteriano na forma de camadas sucessivas, as bactrias iniciais
vao celular com o crescimento de algumas clulas custa dos
(presentes nas camadas mais internas do biofilme) so menos
nutrientes liberados pelas clulas que morrem e sofrem lise.
suscetveis a ao do sistema imune e a (2) penetrao de an
Acredita-se que um fenmeno, no qual as clulas so cha
timicrobianos, que so protegidas pelo crescimento bacteriano
madas viveis, mas no cultivveis (VMNC), seja resultado de
das camadas mais externas. O estudo dos bioftlmes in vitro e in
uma resposta gentica desencadeada pela privao de nutrien
tes na fase estacionria. Assim como algumas bactrias for
vivo uma cincia em constante evoluo.
mam esporos como mecanismo de sobrevivncia, outras so
capazes de se tornar dormentes, sem alterao em sua morfolo
DEFINIO E MEDIDA DA MORTE
gia. Quando as condies adequadas esto disponveis (p. ex.,
migrao direta de um animal) os micrbios VMNC retomam
o crescimento.
O significado da morte
Para uma clula microbiana, a morte significa perda irreversvel
da capacidade de reproduo (crescimento e diviso). O teste
MANUTENO DAS CLULAS NA FASE emprico de morte consiste em uma cultura de clulas em meios
slidos: uma clula considerada morta se no conseguir formar
EXPONENCIAL uma colnia em qualquer meio. Naturalmente, a confiabilida
As clulas podem ser mantidas na fase exponencial mediante sua de do teste depende da escolha do meio de cultura e das condi
repetida transferncia em meio de cultura fresco de composio es: uma cultura em que 99% das clulas parecem "mortas", em
idntica, enquanto ainda esto crescendo de modo exponencial. termos de sua capacidade de formar colnias em determinado
Esse processo conhecido como cultura contnua; o aparelho meio, poder mostrar-se 100% vivel se for testada em outro

de cultura contnua de uso mais comum um quimiostato. Uma meio. Alm disso, a deteco de algumas clulas viveis em uma
cultura contnua mais similar s condies encontradas pelos amostra clnica grande pode no ser possvel por semeadura di

microrganismos no mundo real (p. ex., corpo humano) onde os reta, visto que o seu lquido pode ser inibitrio para o crescimen

nutrientes so constantemente substitudos. to microbiano. Em tais circunstncias, pode ser necessrio diluir
inicialmente a amostra em meio lquido, permitindo o cresci
mento das clulas viveis antes de tal semeadura.
O quimiostato As condies de incubao na primeira hora aps o trata
O quimiostato consiste em um recipiente de cultura equipado mento tambm so decisivas para a determinao da "morte".
com um sifo de fluxo e um mecanismo de gotejamento no meio Assim, por exemplo, se as clulas bacterianas forem irradiadas
de cultura fresco a partir de um reservatrio, a uma velocidade com luz ultravioleta e semeadas imediatamente em qualquer
controlada. O meio de cultura no recipiente agitado por uma meio de cultura, poder parecer que 99,99% delas foram des
corrente de ar estril; cada gota do meio de cultura fresco que trudas. Entretanto, se essas clulas irradiadas forem inicial
entra determina a sada de uma gota da cultura pelo sifo. mente incubadas em tampo apropriado durante 20 minutos,
O meio preparado de modo que um nutriente limite o a semeadura indicar que apenas 10% delas morreram. Em ou
crescimento. O recipiente inoculado e as clulas crescem at a tras palavras, a irradiao determina que uma clula "morrer"
exausto do nutriente limitante; em seguida, o meio de cultura se for semeada imediatamente, mas pode sobreviver se tiver
fresco do reservatrio flui a uma velocidade tal que as clulas a oportunidade de proceder ao reparo da leso por irradiao
utilizam o nutriente limitante mesma velocidade com que ele antes de sua semeadura.
fornecido. Nessas condies, a concentrao celular perma Por conseguinte, uma clula microbiana no fisicamente
nece constante, e a velocidade de crescimento diretamente rompida est "morta" apenas em termos das condies utiliza
proporcional velocidade de fluxo do meio. das para testar sua viabilidade.
CAPTULO 4 Crescimento, sobrevida e morte dos microrganismos 59

A medida da morte A 6

Quando se trata de microrganismos, no se costuma determi- ....J


E
nar a morte de cada clula, mas de uma populao. Esse aspecto (15 5
Q)
constitui um problema estatstico: em qualquer condio pas- -
e:
Q)
svel de levar morte celular, a probabilidade de determinada .<:!:
clula morrer constante por unidade de tempo. Por exemplo, >
.....

.o 4
se for utilizada uma condio capaz de provocar a morte de o
cn
cn
90% das clulas nos primeiros 1 O minutos, a probabilidade de co
:::::l
que qualquer clula morra em um intervalo de 10 minutos ser -Q) 3
(.)
de 0,9. Por conseguinte, pode-se esperar que 90% das clulas Q)
"O
sobreviventes iro morrer a cada intervalo sucessivo de 10 mi- e
Q)
nutos, obtendo-se uma curva de morte semelhante as curvas E 2
:::::l
'e:
mostradas na Figura 4.3.
o
Assim, o nmero de clulas que morrem a cada intervalo "O
o

de tempo constitui uma funo do nmero de sobreviventes Cl 1


presentes, de modo que a morte de uma populao segue um .9
processo exponencial de acordo com a frmula geral
o
10 20 30 40 50 60
S =
S e -kt
o
(9)
Minutos
em que S0 o nmero de sobreviventes no tempo zero, e S, B 7
o nmero de sobreviventes em qualquer momento posterior
t. Como no caso do crescimento exponencial, -k representa a
velocidade de morte exponencial quando a frao ln (S/S0) 6
....J
representada graficamente com relao ao tempo. E
..._

A curva de impacto nico mostrada na Figura 4.3A tpica -


fil
e:
da cintica de inativao observada em muitos agentes antimi- Q) 5
.<:!:
crobianos. O fato de ser uma linha reta a partir do tempo zero >
.....

(dose zero) - em lugar de exibir um desvio inicial - significa .g


cn
que um nico "impacto" pelo agente inativador suficiente pa- cn
co 4
ra matar a clula, ou seja, apenas um nico alvo precisa ser le- :::::l
Q)
(.)
sionado para que toda a clula seja inativada. Esse alvo pode ser Q)
"O 3
o cromossomo de uma bactria haploide ou uma membrana
e
celular, mas no pode ser uma enzima ou outro componente Q)
E
celular presente em vrias cpias. :::::l
'e:
Uma clula que contenha vrias cpias do alvo a ser inati- o 2
"O
o
vado exibe curva de mltiplo impacto do tipo apresentado na

Cl
Figura 4.3B. A extrapolao da poro reta da curva na orde- o
....J
nada permite uma estimativa do nmero de alvos (p. ex., 4 na 1
Figura 4.3B).

Esterilizao 10 20 30 40 50 60

Na prtica, define-se "esterilizao" como processo de destrui Minutos


o de todos os microrganismos em uma preparao. Entre FIGURA 4.3 Curva da morte de uma suspenso de 106 organismos vi
tanto, com base nas consideraes expostas anteriormente, veis por mililitro. (A) Curva de impacto nico. (8) Curva de mltiplo impac
percebe-se que nenhum conjunto de condies assegura a es to. A poro da linha reta extrapolada para 6,5 corresponde a 4 x 106 clu
terilizao de uma preparao. Considere a situao exemplifi las. Portanto, o nmero de alvos de 4 x 106, ou quatro por clula.
cada na Figura 4.3. Aos 60 minutos, existe um microrganismo
(10) por mililitro. Aos 70 minutos, haveria 10- 1, aos 80 minu
tos, 10-2 e assim por diante. Logo, pode-se dizer que em uma um tempo seguro de esterilizao. Entretanto, um volume de
soluo contendo uma concentrao de 10-2 microrganismos 1.000 mL pode conter ainda um microrganismo vivel.
por mililitro,, em um volume total de 100 mL, haveria um Observe que esses clculos dependem de a inclinao da curva
microrganismo sobrevivente. Quanto tempo, ento, seria ne permanecer inalterada durante todo o perodo decorrido. Infeliz
cessrio para "esterilizar" a cultura? Tudo que pode-se dizer mente, muito comum que a curva se incline para cima depois
que, aps dado perodo de tratamento, a probabilidade de ha de certo perodo, em virtude da heterogeneidade da populao
ver quaisquer microrganismos sobreviventes em 1 mL aquela quanto sua sensibilidade ao agente inativador. As extrapolaes
apresentada pela curva na Figura 4.3. Aps 2 h, no exemplo ci so perigosas e podem levar a erros, como os encontrados nas
tado, a probabilidade de 1 x 10-6 Em geral, isso considerado primeiras preparaes da vacina estril contra a plio.
60 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

O efeito da concentrao do frmaco 2,4

Quando so utilizadas substncias antimicrobianas (frmacos)


para inativar as clulas microbianas, comum verificar-se que a
2,0
concentrao empregada est relacionada com o tempo neces
srio para destruir determinada frao da populao atravs da Inclinao n
=

seguinte expresso: -

cn 1,6
o
:::::l
-

e:
C"t = K (10) E
-

E 1,2
Q)
-
Nesta equao, C a concentrao do frmaco, t o tempo ......

o
necessrio para destruir determinada frao das clulas, e ne Cl

o
K so constantes. ...J 0,8
Tal expresso mostra que, por exemplo, se n = 6 (como no
caso do fenol), a duplicao da concentrao do frmaco ir
reduzir o tempo necessrio para se obter o mesmo grau de ina 0,4
tivao 64 vezes. O fato de a eficcia de um frmaco variar de
acordo com a sexta potncia da concentrao, sugere serem
necessrias seis molculas dele para inativar uma clula, em 0 '---'--'---'
1 ,00 1 ,1o 1 ,20 1 ,30
bora no haja evidncias qumicas diretas que corroborem essa
concluso. Log10 C (em partes por 1 .000)
Para se determinar o valor de n de qualquer frmaco, so
obtidas curvas de inativao para cada uma das vrias con
FIGURA 4.4 Relao entre a concentrao do frmaco e o tempo
necessrio para destruir determinada frao de populao celular.
centraes, determinando-se o tempo necessrio, em cada
concentrao, para inativar uma frao fDCa da populao. Por
exemplo, considere-se C1 a primeira concentrao utilizada e
t o tempo necessrio para inativar 99% das clulas, bem como B. Bacteriosttico
1
C e t a segunda concentrao e o tempo necessrio para inati Termo referente propriedade pela qual um agente biocida
2 2
var 99% das clulas. A partir da equao (10), verifica-se que tem a capacidade de inibir a multiplicao bacteriana que re
comea com a retirada do agente. (Os termos "fungisttico" e
(11) "esporosttico" referem-se aos biocidas que inibem, respecti
vamente, o crescimento de fungos e esporos.)
Resolvendo a partir de n, tem-se

logt2 - logt1
C. Bactericida
n= (12)
logC1 - logC2 Termo que se refere propriedade pela qual um biocida
capaz de matar bactrias. A ao bactericida difere da bacte
Por conseguinte, possvel determinar n medindo a in riosttica apenas por ser irreversvel, isto , o microrganismo
clinao da linha que resulta quando o log t representado "morto" no pode mais se reproduzir mesmo aps a remoo
graficamente contra o log C (Fig. 4.4). Se n for determinado ex do contato com o agente. Em alguns casos, o agente provoca a
perimentalmente dessa maneira, K poder ser determinado ao lise (dissoluo) das clulas; em outros, as clulas permanecem
substituir os valores observados para C, t e n na equao (10). intactas, podendo mesmo continuar metabolicamente ativas.
(Os termos, "fungicida'', "esporicida" e "virucida" referem-se
propriedade pela qual os biocidas so capazes de matar, respec
tivamente, fungos, esporos e vrus.)
AGENTES ANTIMICROBIANOS

Definies D. Esterilizao
Os termos a seguir so comumente utilizados com relao aos Um processo definido, utilizado para deixar uma superfcie ou
antimicrobianos e seus usos. um produto livres de organismos viveis, inclusive bactrias e
esporos.

A. Biocida
E. Desinfetantes
um agente qumico ou fsico, em geral de amplo espectro,
que inativa microrganismos (Quadro 4.3). Os qumicos in Produtos ou biocidas utilizados para reduzir o nmero de mi
cluem o perxido de hidrognio,, fenis, alcois, hipoclorito crorganismos viveis, ou a carga biolgica em um produto ou
de sdio e clorexidina; e os biocidas fsicos incluem o calor e superfcie a um nvel previamente especificado como apropria
a radiao. Os biocidas geralmente so de largo espectro, em do para seu manuseio ou sua posterior utilizao. Os desinfe
contraste com os anti-infecciosos, que tm um espectro da ati tantes no so necessariamente esporicidas, mas mostram-se
vidade antimicrobiana mais restrito. esporostticos, inibindo a germinao ou o crescimento.
CAPTULO 4 Crescimento, sobrevida e morte dos microrganismos 61

QUADRO 4.3 Alguns biacidas usados em antissepsia, desinfeco, preservao e outras finalidades
Agente Frmula Usos

Alcois Antissepsia, desinfeco, preservao


Etanol CH3 -CHOH

lsopropanol CH3"-
CHOH
CH3/

Aldedos Desinfeco, esterilizao, preservao


Glutaraldedo

Formaldedo H"-
C=O
H/
Biguanidas
Clorexidina CI f ' N(HCN)2H(CH2)6N(HCN)2H f ' CI
Antissepsia, atividade biofilme dental,
preservao, desinfeco
11 11
NH NH

Bifenis CI OH Antissepsia, atividade antiplaca


Triclosana
o
j
CI CI

Hexaclorofeno OH OH Desodorante, preservao


CI CI

CI CI
CI CI

Agentes liberadores de halognio Desinfeco, antissepsia


Compostos clorados OCI-, HOCI, Cl2

Compostos iodados

Derivados de metais pesados


Compostos de prata Ag Preservao, antissepsia

Compostos de mercrio Hg Desinfeco


Acidos orgnicos COOH Preservao
Acido benzoico

Acido propinico Sais de sdio ou clcio usados para


preservao
Peroxignios Desinfeco, esterilizao
Perxido de hidrognio

Oznio

Acido peractico
Fenis e cresis Desinfeco, preservao
Fenol

Cresol OH

CH3
Compostos de amnio quaternrio + Desinfeco, antissepsia, preservao
Rl R3
" /
N
/ " x-

R2 R4

(continua)
62 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

QUADRO 4.3 Alguns biocidas usados em antissepsia, desinfeco, preservao e outras finalidades (continuao)

Agente Frmula Usos

Cetrimida Desinfeco, antissepsia, preservao


+
H3C CH3
' /
N sr-
/ '
H3C CoH2n+1

Cloreto de benzalcnio
+
O- cH2 CH3
' /
N
/ '
H3C C0H2n+l

Fase de vapor Esterilizao, desinfeco


xido de etileno

Formaldedo H
1
H - C=O
Perxido de hidrognio

F. Sptico e pirimidnicas para formar complexos de DNA ou ligaes


cruzadas entre filamentos. A radiao lesiona o DNA de vrias
Caracteriza-se pela presena de micrbios patognicos em te
maneiras: a luz ultravioleta, por exemplo, induz a formao de
cido vivo ou fluidos corpreos.
ligaes cruzadas entre pirimidinas adjacentes em um dos dois
filamentos de polinucleotdeos, formando dmeros de pirimi
G. Antissptico dina; as radiaes ionizantes induzem quebras em filamentos
Um biocida ou produto que destri ou inibe o crescimento de simples ou duplos. As leses do DNA induzidas pela radiao
microrganismos em tecido vivo (p. ex., pele) ou fluidos biol ou por agentes qumicos destroem a clula principalmente por
gicos (p. ex., secrees de mucosa). interferir na replicao do DNA. Ver no Captulo 7 uma dis
cusso sobre os sistemas de reparo do DNA.

H. Assptico
Livre de, ou que emprega mtodos para ficar livre de micror-
B. Desnaturao das protenas
gan1smos.

As protenas ocorrem em um estado tridimensional compacta


do, determinado primariamente, por ligaes covalentes de dis
1. Preservao sulfeto intramoleculares e por vrias interaes no covalentes,
como ligaes inicas, hidrofbicas e de hidrognio ou ligaes
Preveno da multiplicao de microrganismos em produtos covalente dissulfeto. Esse estado, denominado estrutura terci
ria da protena, facilmente desorganizado por diversos agentes
formulados, como produtos farmacuticos e alimentos.

fsicos (p. ex., calor) ou qumicos (p. ex., lcool), resultando em


J. Antibiticos uma protena no funcional. A ruptura da estrutura terciria de
uma protena denominada desnaturao proteica.
Compostos orgnicos de ocorrncia natural ou sinttica que
inibem ou destroem bactrias de maneira seletiva, geralmente
a baixas concentraes. C. Ruptura da membrana ou da parede celular
A membrana celular atua como barreira seletiva (melhor ca
Modos de ao racterizada como uma rede de pesca), permitindo a passagem
de alguns solutos e excluindo outros. Muitos compostos so
A. Dano ao DNA transportados ativamente atravs da membrana, concentran
Vrios agentes fsicos e qumicos atuam danificando o DNA. do-se no interior da clula. A membrana tambm constitui o
Tais agentes incluem radiaes ionizantes, luz ultravioleta e local das enzimas envolvidas na biossntese de componentes
substncias qumicas que reagem com o DNA. Na ltima ca do envelope celular. As substncias que se concentram na su
tegoria esto includos os agentes alquilantes e outros com perfcie celular podem alterar as propriedades fsicas e qumi
postos que reagem de modo covalente com as bases purnicas cas da membrana, impedindo o desempenho de suas funes
CAPTULO 4 Crescimento, sobrevida e morte dos microrganismos 63

normais e, portanto, destruindo ou inibindo a viabilidade da cidos nucleicos (nucleotdeos). Em alguns casos, o anlogo
clula. simplesmente impede a incorporao do metablito normal
A parede celular atua como estrutura de sustentao (me (p. ex., o 5-metiltriptofano impede a incorporao do triptofa
lhor caracterizada como uma rede de pesca) protegendo a clula no protena), ao passo que, em outros casos, o anlogo subs
contra a lise osmtica. Assim, os agentes que destroem a parede titui o metablito normal na macromolcula, tornando-a no
celular (p. ex., lisozima, que cliva ligaes glicosdicas) ou im funcional. A incorporao da p-fluorofenilalanina em lugar da
pedem sua sntese normal (p. ex., penicilina, que interrompe as fenilalanina em protenas constitui um exemplo do ltimo tipo
ligaes cruzadas peptdicas) podem provocar a lise celular. de antagonismo.

D. Ruptura dos grupos sulfidrila livres Reverso da ao antibacteriana


As enzimas que contm cistena possuem cadeias laterais que Na seo sobre definies, foi assinalado que a ao bacterios
terminam em grupos sulfidrila. Alm disso, as coenzimas, co ttica , por definio, reversvel. Essa reverso pode ser obtida
mo a coenzima A e o diidrolipoato, contm grupos sulfidrila de diversas maneiras.
livres. Tais enzimas e coenzimas no podem funcionar, a no
ser que os grupos sulfidrila permaneam livres e no estado re
A. Remoo do agente
duzido. Por conseguinte, os agentes oxidantes interferem no
metabolismo, formando ligaes de dissulfeto entre grupos Quando as clulas inibidas pela presena de um agente bac
sulfidrila vizinhos: teriosttico so removidas por sucessivas lavagens e cen
trifugaes do meio, contendo a substncia bacteriosttica,
2
R - SH + HS - R - H >R-S-S-R readquirem sua capacidade de multiplicao normal.

Muitos metais, como o on mercrico, tambm interferem


B. Reverso pelo substrato
ao se combinarem com grupos sulfidrila. Existem muitas enzi
mas sulfidrlicas na clula; por conseguinte, os agentes oxidan Quando um antagonista qumico do tipo anlogo se liga rever
tes e os metais pesados provocam leso disseminada. sivelmente enzima, possvel desloc-lo ao adicionar-se uma
alta concentrao do substrato normal. Esses casos so deno
minados "inibio competitiva". A relao entre a concentra
E. Antagonismo qumico o do inibidor e a concentrao do substrato que reverte a
A interferncia de um agente qumico na reao normal entre inibio denominada ndice antimicrobiano; em geral, esse
uma enzima e seu substrato conhecida como antagonismo valor apresenta-se muito alto (100 a 10.000), indicando afmi
qumico. O antagonista atua ao combinar-se com alguma parte dade muito maior da enzima para o anlogo do que para seu
da holoenzima (a apoenzima proteica, o ativador mineral ou a substrato normal.
coenzima), impedindo assim a fixao do substrato normal. (O
termo substrato usado aqui no sentido amplo para incluir os
C. lnativao do agente
casos em que o inibidor se combina com a apoenzima, impe
dindo assim a ligao com a coenzima.) Com frequncia, um agente pode ser inativado mediante o
Um antagonista combina-se com uma enzima em virtu acrscimo ao meio de uma substncia que se combina com
de de sua afinidade qumica por um local essencial existente ele, impedindo assim sua combinao com componentes ce
na enzima. As enzimas desempenham sua funo cataltica lulares. Por exemplo, o on mercrico pode ser inativado pelo
em virtude de sua afinidade por seus substratos naturais; por acrscimo de compostos sulfidrlicos ao meio, como o cido
conseguinte, qualquer composto estruturalmente semelhante tiogliclico.
ao substrato em certos aspectos essenciais tambm pode exi
bir afmidade pela enzima. Se essa afmidade for intensa o sufi
D. Proteo contra a lise
ciente, o "anlogo" ir deslocar o substrato normal e impedir a
ocorrncia da reao apropriada. possvel evitar a ocorrncia da lise osmtica ao se tornar o
Muitas holoenzimas incluem um on mineral como ponte meio isotnico para os protoplastos bacterianos desnudos. So
entre a enzima e a coenzima ou entre a enzima e o substrato. necessrias concentraes de sacarose de 10 a 20%. Nessas con
As substncias qumicas que se combinam facilmente com es dies, os protoplastos induzidos pela penicilina (p. ex., o ma
ses minerais tambm impedem a ligao da coenzima ou do terial vivo de uma clula bacteriana incluindo o protoplasma e
substrato; por exemplo, o monxido de carbono e o cianeto membrana aps a parede celular ser removida), permanecem
combinam-se com o tomo de ferro nas enzimas que contm viveis e continuam a crescer como formas L.
heme, impedindo sua funo na respirao.
Os antagonistas qumicos podem ser convenientemente
classificados em duas categorias: (a) antagonistas de proces
Resistncia aos agentes antibacterianos
sos produtores de energia e (b) antagonistas de processos de A capacidade das bactrias de adquirir resistncia aos antibac
biossntese. Os primeiros incluem venenos que afetam as en terianos constitui um importante fator para seu controle. Os
zimas respiratrias (monxido de carbono, cianeto) e a fosfo mecanismos pelos quais a resistncia adquirida so discuti
rilao oxidativa (dinitrofenol); os ltimos incluem anlogos dos nos Captulos 7, Gentica microbiana; e 28, Quimioterapia
das unidades formadoras das protenas (aminocidos) e dos antimicrobiana.
64 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Agentes fsicos pouca atividade contra Pseudomonas aeruginosa e bolores. A


triclosana e o hexaclorofeno so bactericidas e esporostticos.
A. Calor
A aplicao de calor constitui a maneira mais simples de esteri E. Agentes que liberam halognios
lizar materiais, contanto que o prprio material seja resistente
Os tipos mais importantes de agentes que liberam cloro so o
ao calor. A temperatura de lOOC ir destruir todas as formas
hipoclorito de sdio, o dixido de cloro e o dicloroisocianura
bacterianas, exceto os esporos, em 2 a 3 minutos nas culturas em
to de sdio, agentes oxidantes que tm a propriedade de des
escala laboratorial. A temperatura de 121 C durante 15 minutos
truir a atividade celular das protenas. O cido hipocloroso o
usada para matar os esporos. Em geral utiliza-se o vapor, visto
composto ativo responsvel pelos efeitos bactericida e virucida
que as bactrias so mais rapidamente destrudas em condies
de tais compostos. Em concentraes mais altas, esse grupo
midas e o vapor proporciona um meio de distribuio do ca
esporicida. O iodo fortemente bactericida, fungicida, tuber
lor em todas as partes do recipiente de esterilizao. No nvel
culocida, virucida e esporicida. Os iodforos (p. ex., iodopovi
do mar, o vapor deve ser mantido a uma presso de 15 lb/sq
dona) so complexos de iodo com um agente solubilizante ou
(meia atmosfera) acima da presso atmosfrica a fim de se obter
transportador, que atua como reservatrio do 12 ativo.
uma temperatura de 121 C; para essa finalidade, utilizam-se au
toclaves ou panelas de presso. Em altitudes maiores, a presso
pode ser superior a 15 psi para se alcanar 121 C. Para esterilizar F. Derivados de metais pesados
materiais que devem permanecer secos, dispe-se de estufas el A sulfadiazina de prata (Ag+), uma combinao de dois anti
tricas com ar quente circulante; como o calor se mostra menos bacterianos, Ag+ e sulfadiazina, tem amplo espectro de ativida
eficaz em material seco, comum a aplicao de uma tempera de. A ligao a componentes celulares, como o DNA, pode ser
tura de 160 a 170C durante 1 hora ou mais. responsvel pelas suas propriedades inibitrias.
Nessas condies (i. e., temperaturas excessivas aplicadas
por longos perodos), o calor atua desnaturando as protenas
e os cidos nucleicos das clulas e rompendo as membranas G. cidos orgnicos
celulares. Os cidos orgnicos so usados como preservativos na inds
tria farmacutica e de alimentos. O cido benzoico fungistti
B. Radiao co; o cido propinico bacteriosttico e fungisttico.
A luz ultravioleta e a radiao ionizante tm vrias aplicaes
como agentes esterilizantes. Seus mecanismos de ao foram H. Peroxignios
discutidos anteriormente.
O perxido de hidrognio tem atividade de amplo espectro
contra vrus, bactrias, leveduras e esporos bacterianos. A ati
Agentes qumicos vidade esporicida exige concentraes mais altas (10 a 30%) de
As estruturas qumicas e os usos dos biocidas so apresentados H202 e maior tempo de contato.
no Quadro 4.3.

A. Alcois 1. Fenis

O lcool etlico, o lcool isoproplico e o n-propanol exibem O fenol e muitos compostos fenlicos tm propriedades antis
rpida atividade antimicrobiana de amplo espectro contra bac spticas, desinfetantes ou conservantes.
trias vegetativas, vrus e fungos, mas no so esporicidas. A
atividade tima quando estes so diludos em uma concen J. Compostos de amnio quaternrio
trao com 60 a 90% de gua.
Estes compostos tm duas regies nas suas estruturas molecu
B. Aldedos lares, ou seja, um grupo que repele a gua (hidrofbico) e outro
que a atrai (hidroflico). Os detergentes catinicos, exemplifica
Utiliza-se o glutaraldedo para desinfeco e esterilizao a
dos pelos compostos de amnio quaternrio (CAQ), so antis
baixa temperatura de endoscpios e equipamentos cirrgicos.
spticos e desinfetantes teis. Os CAQ tm sido utilizados com
Normalmente, utilizado em forma de soluo a 2% para se
vrias finalidades clnicas (p. ex., desinfeco pr-operatria da
obter atividade esporicida. O formaldedo bactericida, espo
pele ntegra), bem como para a limpeza de superfcies duras.
ricida e virucida.
So esporostticos, e inibem o desenvolvimento dos esporos,
mas no o processo de germinao em si. Os CAQ tambm
C. Biguanidas
so micobacteriostticos e tm efeito sobre vrus com envelope
A clorexidina amplamente utilizada na lavagem das mos e de lipdico, mas no sobre vrus sem envelope.
produtos orais, e como desinfetante e conservante. Em geral, as
micobactrias so altamente resistentes a esses compostos, em
virtude de sua parede celular rica em cidos miclicos. K. Esterilizantes com fase de vapor
Os dispositivos mdicos e os suprimentos cirrgicos sensveis
D. Bifenis ao calor podem ser efetivamente esterilizados por sistemas com
So amplamente utilizados em sabes antisspticos e para lava fase de vapor que usam xido de etileno, formaldedo, perxi
gem das mos. Em geral, so de amplo espectro, porm exibem do de hidrognio ou cido peractico.
CAPTULO 4 Crescimento, sobrevida e morte dos microrganismos 65

OBJETIVOS (C) Constante


(D) Decrescente
1. Compreender as diferenas entre crescimento em um sis (E) Negativa
tema fechado (cultura lquida), crescimento em cultura 5. A taxa de crescimento bacteriano durante o pico da fase estacio
contnua e crescimento em biofilme. nria de crescimento :
2. Ententer as diferenas entre conceitos bacteriostticos e
(A) Zero
bactericidas. (B) Crescente
3. Conhecer as condies para esterilizao microbiana. (C) Constante
4. Ter conhecimento dos mecanismos de ao dos principais (D) Decrescente
agentes desinfectantes. (E) Negativa

QUESTES DE REVISO Respostas


1. Uma mulher de 23 anos teve dez clulas de Escherichia cali inocu 1. A 3. c 5. A
ladas em sua bexiga durante uma relao sexual. Essas clulas de E.
2. c 4. c
coli tm um tempo de gerao de 20 min. Aps 20 min em fase de
latncia, a bactria entra em fase exponencial de crescimento. De
pois de 3 horas em fase exponencial de crescimento, o nmero total
de clulas :
(A) 2.560
REFERNCIAS
(B) 5.012 Block SS (editor): Disinfectian, Sterilizatian, and Preservatian, 5th ed.
(C) 90 Lippincott Williams & Wilkins, 2001.
(D) 1.028 Colwell RR, Grimes DJ (editors): Nanculturable Micraarganisms in
(E) 1.000.000 the Enviranment. ASM Press, 2000.
Donohue WD: The cell cycle of Escherichia coli. Annu Rev Microbiol
2. Uma mulher de 73 anos admitida em um hospital para trata
1993;47:199.
mento intravenoso de abscesso causado por Staphylacoccus au
Gerhardt P et al. (editors): Manual afMethodsfar General Bacteriology.
reus. Aps o tratamento e a alta hospitalar, necessrio fazer a
American Society for Microbiology, 1981.
desinfeco do leito hospitalar. Mil clulas de S. aureus ficam
Hans-Curt Flemming, Jost Wingender: The bioftlm matrix. Nat Rev
expostas ao desinfetante. Aps 10 minutos, 90% das clulas esto
Microbiol 2010;8:623-633.
mortas. Quantas clulas permanecem viveis aps 20 minutos?
Kjelleberg S (editor): Starvatian in Bacteria. Plenum Press, 1993.
(A) 500 Kjelleberg S, Hermansson M, Mrdn P, Jones GW: The transient
(B) 100 phase between growth and nongrowth of heterotrophic bacteria.
(C) 10 Annu Rev Micrabial 1987;41:25.
(D) 1
Kolter R, Siegels DA, Tormo A: The stationary phase of the bacterial
(E) O
life cycle. J Bacterial 1992;174:345.
3. Qual dos seguintes agentes ou processos tem ao sobre as bact McDonnell GE: Antisepsis, Disinfectian, and Sterilization: Types,
rias em que pode ocorrer uma reverso bacteriana? Actian, and Resistance. ASM Press, 2007.
(A) Um desinfetante McDonnell G, Russell AD: Antiseptics and disinfectants: Activity,
(B) Um agente bactericida action, and resistance. Clin Microbial Rev 1999; 12:147.
(C) Um agente bacteriosttico Olmstad RN (editor): APIC Infectian Cantrol and Applied Epidemio
(D) Autoclavao a 121C por 15 minutos logy: Principies and Practices. Mosby Year Book, 1996.
(E) Aquecimento a seco a 160 a 170C por 1 hora Russell AD, Hugo WB, Ayliffe GAJ (editors): Principies and Practice
of Disinfectian, Preservation and Sterilizatian, 3rd ed. Blackwell
4. A taxa de crescimento bacteriano durante a fase exponencial do Scientific Publications, 1999.
crescimento : Sanear A, Sanear GB: DNA repair enzymes. Annu Rev Biachem
(A) Zero 1988;57:29.
(B) Crescente Siegels DA, Kolter R: Life after log. J Bacterial 1992;174:345.
C A P T U L O

Cultura de microrganismos

Cultura refere-se ao processo de propagao de microrganis uma combinao desses fatores. Alternativamente, as clulas
mos pelo fornecimento de condies ambientais apropriadas. supridas com uma fonte de ATP podem utilizar a energia de
Os microrganismos em crescimento duplicam-se e necessitam suas ligaes de anidrido para criar uma fora motriz dos pr
dos elementos presentes na sua composio qumica. Os nu tons que pode ser empregada para mover a clula e manter os
trientes devem proporcionar tais elementos em uma forma gradientes qumicos.
metabolicamente acessvel. Alm disso, os microrganismos Para crescer, um organismo necessita de todos os elemen
necessitam de energia metablica para sintetizar macromol tos que compem sua matria orgnica e de todo o comple
culas e manter gradientes qumicos essenciais atravs de suas mento de ons indispensveis aos processos energticos e
membranas. Os fatores que precisam ser controlados durante catlise. Alm disso, deve haver uma fonte de energia dispo
o crescimento consistem em nutrientes, pH, temperatura, ae nvel para estabelecer a fora motriz dos prtons e possibili
rao, concentrao de sal e fora inica do meio. tar a sntese das macromolculas. H uma ampla variao nas
demandas nutricionais e nas fontes de energia metablica dos
m1crorgan1smos.

EXIGNCIAS PARA O CRESCIMENTO


A maior parte do peso seco dos microrganismos consiste em FONTES DE ENERGIA METABLICA
matria orgnica constituda pelos elementos carbono, hi
drognio, nitrognio, oxignio, fsforo e enxofre. Alm des Os trs principais mecanismos para a produo de energia me
ses, so necessrios ons inorgnicos, como potssio, sdio, tablica so a fermentao, a respirao e a fotossntese. Pelo
ferro, magnsio, clcio e cloreto, para facilitar a catlise enzi menos um desses mecanismos tem de ser usado para que o or-
mtica e manter os gradientes qumicos atravs da membrana gan1smo possa crescer.

celular.
Em sua maior parte, a matria orgnica consiste em macro
molculas formadas por ligaes de anidrido entre as unida
Fermentao
des precursoras. A sntese das ligaes anidrido requer energia A formao de ATP na fermentao no est acoplada trans
qumica, fornecida pelas duas ligaes fosfodister do ATP ferncia de eltrons. A fermentao caracteriza-se pela fosfori
(trifosfato de adenosina; Cap. 6). A energia adicional necess lao de substratos, processo enzimtico em que uma ligao
ria para manter uma composio citoplasmtica relativamente de pirofosfato diretamente doada para o ADP (difosfato de
constante durante o crescimento, em uma variedade de am adenosina) por um intermedirio metablico fosforilado. Os
bientes qumicos extracelulares, provm da fora motriz dos intermedirios fosforilados so formados por rearranjo meta
prtons. Esta fora a energia potencial que pode ser obtida blico de um substrato passvel de fermentao, como a gli
pela passagem de um prton atravs de uma membrana. Nos cose, a lactose ou a arginina. Dado que a fermentao no
eucariotos, essa membrana pode ser parte da mitocndria ou acompanhada de qualquer alterao no estado de oxirreduo
do cloroplasto. Nos procariotos, essa membrana a membrana global do substrato passvel de fermentao, a composio ele
citoplasmtica da clula. mentar dos produtos de fermentao deve ser idntica a dos
A fora motriz dos prtons um gradiente eletroqumico substratos. Por exemplo, a fermentao de uma molcula de
com dois componentes: uma diferena de pH (concentrao glicose (C6H1 06) pela via de Embden-Meyerhof (Cap. 6) re
2
de ons hidrognio) e outra na carga inica. A carga existente sulta em um ganho lquido de duas ligaes de pirofosfato no
do lado externo da membrana bacteriana mais positiva do ATP e forma duas molculas de cido lctico (C3H603).
que a do lado interno, e a diferena de carga contribui para a
energia livre liberada quando um prton penetra no citoplas
ma a partir do lado externo da membrana. Os processos me
Respirao
tablicos que geram a fora motriz dos prtons so discutidos A respirao anloga ao acoplamento de um processo depen
no Captulo 6. A energia livre pode ser utilizada para mover dente de energia descarga de uma bateria. A reduo qumica
a clula, manter gradientes inicos ou moleculares atravs da de um oxidante (aceptor de eltrons) por uma srie especfi
membrana, sintetizar ligaes de anidrido no ATP ou para ca de transportadores de eltrons na membrana estabelece a
68 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

fora motriz dos prtons atravs da membrana bacteriana. O suficientes para preencher essa necessidade, enquanto outros
redutor (doador de eltrons) pode ser orgnico ou inorgnico: precisam de uma fonte de dixido de carbono em seu meio de
por exemplo, o cido lctico atua como redutor para alguns crescimento.
organismos, enquanto o gs hidrognio um redutor para
outros. O oxignio gasoso (02) frequentemente usado como
oxidante, mas existem outros oxidantes usados por alguns or
Fonte de nitrognio
ganismos, como o dixido (C02), o sulfato (So- ) e o nitrato O nitrognio um importante componente das protenas, dos
(NO;) de carbono. cidos nucleicos e de outros compostos, e representa cerca de
5% do peso seco de uma clula bacteriana tpica. O nitrognio
inorgnico (N2) altamente prevalente, compreendendo 80%
Fotossntese da atmosfera terrestre. tambm um composto muito estvel,
A fotossntese assemelha-se respirao, uma vez que a redu devido principalmente alta energia de ativao necessria pa
o de um oxidante por uma srie especfica de transportadores ra quebrar a tripla ponte nitrognio-nitrognio. Entretanto, o
de eltrons estabelece a fora motriz dos prtons. A diferena nitrognio pode ser fornecido de vrias maneiras diferentes, e
entre os dois processos que, na fotossntese, o redutor e o os microrganismos variam quanto sua capacidade de assimi
oxidante so criados fotoquimicamente pela energia luminosa lar o nitrognio (Quadro 5.1). O produto final de todas as vias
absorvida por pigmentos presentes na membrana. Por conse de assimilao do nitrognio a forma do elemento mais redu
guinte, a fotossntese s poder continuar enquanto houver zida, a amnia (NH3). Quando est disponvel, a NH3 difunde
uma fonte de energia luminosa. As plantas e algumas bactrias se na maioria das bactrias atravs de canais transmembrana,
so capazes de utilizar uma quantidade significativa de energia como NH3 dissolvida em forma gasosa, em vez do on amnio
luminosa ao transformarem a gua em redutor para o dixi (NH4+).
do de carbono. H formao de oxignio nesse processo, com A capacidade de assimilar N2 pela reduo por NH3, de
a produo de matria orgnica. A respirao - a oxidao nominada fixao do nitrognio, constitui uma propriedade
energeticamente favorvel de matria orgnica por um aceptor exclusiva dos procariotos, e relativamente poucas bactrias so
de eltrons, como o oxignio - pode fornecer energia a mi capazes de quebrar a ligao tripla nitrognio-nitrognio. Esse
crorganismos que realizam a fotossntese na ausncia de luz. processo (Cap. 6) exige grande quantidade de energia meta
blica e rapidamente inativado pelo oxignio. A capacidade
de fixao do nitrognio observada em bactrias amplamente
NUTRIO divergentes que desenvolveram estratgias qumicas muito di
ferentes para proteger do oxignio suas enzimas fixadoras de
Os nutrientes nos meios de crescimento devem conter todos nitrognio.
os elementos necessrios sntese biolgica de novos micror A maioria dos microrganismos tem a capacidade de utili
ganismos. Na discusso a seguir, os nutrientes so classificados zar NH3 como nica fonte de nitrognio, e muitos microrga
de acordo com os elementos que eles fornecem. nismos tm a capacidade de produzir NH3 a partir de aminas
(R-NH2) ou aminocidos (RCHNH2COOH), geralmente no
modo intracelular. A produo de amnia a partir da desami
Fonte de carbono nao de aminocidos denominada amonificao. A amnia
Conforme analisado anteriormente, as plantas e algumas bact introduzida na matria orgnica por vias bioqumicas que en
rias tm a propriedade de utilizar a energia da fotossntese para volvem o glutamato e a glutamina, discutidas no Captulo 6.
reduzir o dixido de carbono custa de gua. Esses organismos Muitos microrganismos possuem a capacidade de assimi
pertencem ao grupo dos auttrofos, isto , seres que no ne lar nitrato (No;> e nitrito (NO) reduzindo por converso es
cessitam de nutrientes orgnicos para seu crescimento. Outros tes ons em NH3 Esses processos so denominados reduo
auttrofos so os quimiolitotrfos, organismos que utilizam assimiladora de nitrato e reduo assimiladora de nitrito,
um substrato inorgnico, como o hidrognio ou o tiossulfato, respectivamente. Essas vias para assimilao diferem daquelas
como redutor, e dixido de carbono como fonte de carbono. utilizadas para dissimilao de nitrato e de nitrito. As vias de
Os hetertrofos necessitam de carbono orgnico para seu dissimilao so usadas por organismos que empregam esses
crescimento, e esse carbono orgnico deve estar em uma forma
passvel de ser assimilada. Por exemplo, o naftaleno pode forne
cer todo o carbono e a energia necessrios para o crescimento
QUADRO 5.1 Fontes de nitrognio na nutrio
heterotrfico respiratrio; todavia, um nmero muito pequeno
microbiana
de microrganismos dotado da via metablica necessria assi
milao do naftaleno. J a glicose pode sustentar o crescimento Composto Valncia de N
fermentativo ou respiratrio de muitos organismos. impor
N03- +5
tante que os substratos para o crescimento sejam fornecidos em
nveis adequados para a cepa microbiana que est sendo cultiva N02- +3
da: os nveis que sustentam o crescimento de determinado mi o
crorganismo podem inibir o crescimento de outro. -3
O dixido de carbono necessrio para diversas reaes
R-NH2 -3
de biossntese. Muitos microrganismos respiratrios produ
zem dixido de carbono em quantidades maiores do que as R, radical orgnico.
CAPTULO 5 Cultura de microrganismos 69

ons como aceitantes de eltrons terminais na respirao. Al sideraminas, e derivados do catecol (p. ex., 2,3-di-hidroxi
gumas bactrias autotrficas (p. ex., Nitrosomonas, Nitrobacter benzoilserina). Os siderforos determinados por plasmdeos
spp.) so capazes de converter NH3 em N gasoso em condi desempenham importante papel na capacidade de invaso de
2
es anaerbias; este processo conhecido como denitrifi alguns patgenos bacterianos (Cap. 7). Os mecanismos depen
cao. Nossa compreenso do ciclo do nitrognio continua a dentes de siderforo e no dependente de siderforo de capta
expandir-se. Em meados da dcada de 1990, a reao anamox o de ferro pelas bactrias so discutidos no Captulo 9.
foi descoberta. A reao
Fatores de crescimento
Um fator de crescimento um composto orgnico de que a
na qual a amnia oxidada pelo nitrito, um processo micro clula necessita para crescer, mas o qual ela incapaz de sin
biano que ocorre em guas anxicas dos oceanos e a maior tetizar. Muitos microrganismos, quando supridos com os nu
via pela qual o nitrognio retorna para a atmosfera. trientes anteriormente citados, so capazes de sintetizar todas
as unidades formadoras de macromolculas (Fig. 5.1), as quais
so os aminocidos; as purinas, pirimidinas e pentoses (os pre
Fonte de enxofre cursores metablicos dos cidos nucleicos); os carboidratos
De modo similar ao nitrognio, o enxofre um componente adicionais (precursores dos polissacardeos); os cidos graxos e
de muitas substncias orgnicas da clula. Forma parte da es os compostos isoprenoides. Alm disso, os microrganismos de
trutura de vrias coenzimas e encontrado nas cadeias laterais vida livre devem ser capazes de sintetizar as vitaminas comple
cisteinil e metionil das protenas. O enxofre em sua forma ele xas que atuam como precursores de coenzimas.
mentar no pode ser utilizado por plantas ou animais, mas al Cada um desses compostos essenciais sintetizado por uma
gumas bactrias autotrficas so capazes de oxid-lo em sulfato sequncia distinta de reaes enzimticas; cada enzima produ
(S042- ). A maioria dos microrganismos tem a capacidade de zida sob o controle de um gene especfico. Quando o organismo
utilizar sulfato como fonte de enxofre, reduzindo o sulfato ao sofre mutao gnica, resultando em incapacidade funcional de
nvel de sulfeto de hidrognio (H S). Alguns microrganismos uma dessas enzimas, a cadeia interrompida, e o produto final
2 no mais gerado. Em tais circunstncias, o organismo preci
podem assimilar diretamente o H S do meio de crescimento,
2 sa obter esse composto a partir do meio ambiente: o composto
mas esse composto pode ser txico para muitos deles.
torna-se um fator de crescimento para o organismo. Tal tipo de
mutao pode ser facilmente induzido em laboratrio.
Fonte de fsforo Diferentes espcies microbianas variam amplamente nas
O fosfato (P043-) necessrio como componente do ATP, dos suas necessidades de fatores de crescimento. Os compostos
cidos nucleicos e de coenzimas, como NAD, NADP e flavinas. envolvidos so encontrados em todos os organismos, sendo
Alm disso, muitos metablitos, lipdeos (fosfolipdeos, lipdeo essenciais; as diferenas nas exigncias refletem diferenas na
A), componentes da parede celular (cido teicoico), alguns polis capacidade de sntese. Algumas espcies no necessitam de
sacardeos capsulares e certas protenas so fosforilados. O fosfa fatores de crescimento, enquanto outras - como alguns lac
to sempre assimilado em forma de fosfato inorgnico livre (Pi). tobacilos - perderam, durante a evoluo, a capacidade de
sintetizar at 30 a 40 compostos essenciais, cuja presena no
meio de cultura se faz necessria.
Fontes de minerais
Vrios minerais so necessrios para a funo das enzimas. O
on magnsio (Mg2+) e o on ferroso (Fe2+) tambm so encon FATORES AMBIENTAIS QUE AFETAM
trados em derivados da porfirina: o magnsio na molcula da O CRESCIMENTO
clorofila e o ferro como parte das coenzimas dos citocromos e
das peroxidases. Tanto o Mg2+ quanto o K+ so essenciais para Para ser apropriado, um meio de crescimento deve conter to
a funo e a integridade dos ribossomos. O Ca2+ necessrio dos os nutrientes necessrios cultura do microrganismo, e
como componente das paredes celulares dos microrganismos determinados fatores, como pH, temperatura e aerao, pre
gram-positivos, embora seja dispensvel nas bactrias gram cisam ser cuidadosamente controlados. Utiliza-se um meio
negativas. Muitos organismos marinhos necessitam de Na+ pa lquido, que pode ser gelificado para finalidades especiais me
ra o seu crescimento. Ao formular-se um meio para a cultura diante o acrscimo de gar ou gel de slica. O gar, um extrato
da maioria dos microrganismos, necessrio fornecer fontes de polissacardeo alga marinha, especialmente apropriado
de potssio, magnsio, clcio e ferro, geralmente em forma de para cultura microbiana por ser resistente ao microbiana
seus ons (K+, Mg2+, Ca2+ e Fe2+). Muitos outros minerais e dissolver-se a lOOC, porm no se solidifica at ser resfriado
(p. ex., Mn2+, Mo2+, Co2+, Cu2+ e Zn2+) so necessrios; com abaixo de 45C. possvel suspender clulas em um meio a
frequncia, podem ser fornecidos atravs da gua potvel ou 45C, resfriando-o rapidamente at a obteno de um gel sem
como contaminantes de outros ingredientes do meio. lesionar as clulas.
A captao de ferro, que forma hidrxidos insolveis em
pH neutro, facilitada em muitas bactrias e fungos pela pro
duo de siderforos - compostos que atuam como quelantes
Nutrientes
do ferro e promovem seu transporte em forma de complexo Nas pginas anteriores, foi descrita a funo de cada tipo de
solvel, como os hidroxamatos (-CONH 0H), denominados nutriente e apresentada uma lista de substncias apropriadas.
2
70 SEO 1 Fundamentos da Microbiologi a

Percentual de peso seco


Blocos de formao _________ _,_
_____ .,._ Macromolculas em clulas tpicas

H2 0
Aminocidos Protenas 50
H2 0
Mononucleotdeos Acidas nucleicos
'

20
H2 0
Monossacardeos Polissacardeos 10

Precursores
isoprenoides

Acetato Lipdeos 10

DH2

cidos graxos

FIGURA 5.1 Sntese macromolecular. A polimerizao das unidades formadoras nas macro molculas efetuada, em grande parte, pela introdu
o de ligaes de anidrido. A formao de graxos a partir do acetato requer vrias etapas de reduo bioqumica por meio de doadores orgnicos
de hidrognio (D H2).

Em geral, devem ser fornecidos os seguintes itens: (1) doa Os microrganismos regulam seu pH interno dentro de uma
dores e aceptores de hidrognio, cerca de 2 gL; (2) fonte de ampla faixa de valores do pH externo. Os microrganismos aci
carbono: cerca de 1 gL; (3) fonte de nitrognio, cerca de 1 gL; dfilos mantm um pH interno de cerca de 6,5 com relao a
(4) minerais: enxofre e fsforo, cerca de 50 mgL de cada, e oli uma faixa externa de 1,0 a 5,0. Os neutralftlos mantm um
goelementos, 0,1 a 1 mgL de cada; (5) fatores de crescimento: pH interno de cerca de 7,5 em uma faixa externa de 5,5 a 8,5 e
aminocidos, purinas e pirimidinas, cerca de 50 mgL de cada; os alcalfilos mantm um pH interno de cerca de 9,5 em uma
vitaminas, O, 1 a 1 mgL de cada. faixa externa de 9,0 a 1 1 ,0. O pH interno regulado por um
Para estudos do metabolismo microbiano, geralmente ne conjunto de sistemas de transporte de prtons na membrana
cessrio preparar um meio totalmente sinttico cujas caractersti citoplasmtica, inclusive uma bomba primria de prtons im
cas e concentraes exatas de cada ingrediente sejam conhecidas, pulsionada por ATP e um intercambiador de Na+/H+. Tambm
porm muito mais barato e simples utilizar materiais naturais, sugerida a contribuio de um sistema de troca de K+/H+ na
como extrato de levedura, digesto de protenas ou substncias regulao do pH interno dos microrganismos neutralftlos.
semelhantes. Os micrbios de vida livre, em sua maioria, cres
cem adequadamente em extrato de levedura; j as formas para Temperatura
sitrias podem exigir substncias especiais, encontradas apenas
As faixas de temperatura tima para o crescimento das diferen
no sangue ou em extratos de tecidos animais. Todavia, alguns
tes espcies microbianas variam amplamente (Fig. 5.2): as psi
parasitos microbianos (p. ex., Treponema pallidum) que no po
crfilas crescem melhor a baixas temperaturas (entre -5 e 15C)
dem crescer in vitro s se desenvolvem no interior das clulas
e normalmente so encontradas em ambientes como o rtico
eucariticas (p. ex., Chlamydia trachomatis).
e regies rticas; os psicotrficos apresentam uma temperatura
Para muitos microrganismos, um nico composto (p. ex.,
tima de crescimento entre 20 e 30C, porm no crescem muito
um aminocido) pode servir como fonte de energia, carbono
bem em temperaturas menores. Eles so importantes causas de
e nitrognio; outros necessitam de um composto distinto para
contaminao de alimentos*. As mesftlas crescem mais ade
cada uma dessas fontes. Se os materiais naturais para meios
quadamente entre 30e 37C; enquanto a maioria das termfilas
no sintticos forem deficientes em qualquer nutriente, deve
vive em temperaturas entre 50C e 60C. Alguns microrganis
ro ser suplementados.
mos so hipertermfilos e podem crescer melhor em tempe
ratura de ebulio da gua, o que ocorre em condio de alta
Concentrao de ons hidrognio (pH) presso nas profundezas do oceano. Os microrganismos so, em
A maioria dos microrganismos apresenta uma faixa bastante
estreita de pH timo, que deve ser determinado empiricamente * N. de R.T. Embora as pisocrotolerantes no crescam muito bem em tem
para cada espcie. A maioria dos microrganismos (neutralfi peraturas mais baixas, podem suportar e se manter viveis a temperatura
de refrigerao (-4C). Assim, importantes em sade pblica por conta
los) cresce mais adequadamente a um pH de 6,0 a 8,0, embora minarem alimentos como carnes e derivados; leite e derivados; vegetais
algumas formas (acidftlas) tenham um pH timo de 3,0, e e frutas mantidas em refrigerao (p. ex., Salmonella, Yersinia, Listeria e
outras (alcalftlas) de 10,5. Staphylococcus).
CAPTULO 5 Cultura de microrganismos 71

timo

i
Hipertermfilo
Mesfilo Termrfilo

Psicrotfico
t

-10 o 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120

Temperatura (C)

FIGURA 5.2 Temperatura necessria para o crescimento. Os pro


cariontes so comumente classificados em cinco grupos baseados na Alta Temperatura Baixa
temperatura tima de crescimento. Nota-se que a temperatura tima temperatura normal temperatura
de crescimento, no ponto em que a taxa de crescimento maior est
prxima do limite superior da faixa de crescimento. (Reproduzida, com
autorizao, de Nester EW, Anderson DG, Roberts CE, Nester MT [edi 1/T (K)
tors]: Microbiology: A Human Perspective, 6th ed. MacGraw-Hill, 2009, p.
FIGURA 5.3 Forma geral de um grfico de Arrhenius para o cres
91. The McGraw-Hill Companies, lnc.)
cimento bacteriano. (Reproduzida, com autorizao, de lngraham JL:
Growth of psychrophilic bacteria,J Bacteriol July 76(1):75-80, 1958.)
sua maioria, formas mesfilas; a temperatura de 30C tima
para muitas formas de vida livre, enquanto a temperatura cor
37C para 5C, pode matar 90% das clulas. Diversos compostos
poral do hospedeiro ideal para os simbiontes de animais de
protegem as clulas do congelamento ou do choque pelo frio; o
sangue quente.
glicerol e o dimetil sulfxido so os mais comumente utilizados.
A extremidade superior da faixa de temperatura tolerada
por qualquer espcie correlaciona-se bem com a termoestabili
dade geral das protenas dessa espcie, conforme determinado Aerao
em extratos celulares. Os microrganismos compartilham com O papel do oxignio como aceptor de hidrognio discutido no
as plantas e os animais a resposta de choque trmico, isto , a Captulo 6. Muitos microrganismos so aerbios obrigatrios,
sntese transitria de um conjunto de "protenas de choque tr e exigem especificamente a presena de oxignio como aceptor
mico" (heat-shock proteins) quando expostos a uma sbita ele de hidrognio; alguns so anaerbios facultativos, isto , tm a
vao da temperatura acima do ideal para o crescimento. Essas capacidade de viver em condies de aerobiose ou anaerobiose;
protenas parecem notavelmente termorresistentes e capazes e outros so anaerbios obrigatrios, exigindo outra substncia
de estabilizar as protenas termossensveis da clula. diferente do oxignio como aceptor de hidrognio, e sendo sen
A relao entre a velocidade de crescimento e a tempera sveis inibio pelo oxignio. Alguns microrganismos tambm
tura em determinado microrganismo pode ser observada em podem ser microaerfilos, necessitando de uma concentrao
um grfico tpico de Arrhenius (Fig. 5.3). Este fsico sueco reduzida de oxignio (2-10%) para seu metabolismo aerbio
mostrou que o logaritmo da velocidade de qualquer reao (concentraes maiores so inibitrias)*; ou ainda anaerbios
qumica (log k) uma funo linear da recproca da tempera aerotolerantes, que suportam a presena do oxignio, porm
tura (1/1); como o crescimento celular resulta de um conjun no o utiliza como aceptor de hidrognio (Fig. 5.4).
to de reaes qumicas, pode-se esperar esse tipo de relao. Os subprodutos naturais do metabolismo aerbio so os
A Figura 5.3 demonstra ser esse o caso na faixa normal de tem compostos reativos perxido de hidrognio (H202) e super
peraturas para determinada espcie: o log k diminui linear xido de hidrognio (02- ). Na presena de ferro, essas duas es
mente com 1/T. Todavia, acima e abaixo da faixa normal, o log pcies podem produzir radicais hidroxila (OH), passveis de
k cai rapidamente, de modo que os valores mximo e mnimo lesionar qualquer macromolcula biolgica:
de temperatura so definidos.
Alm de terem efeitos sobre a velocidade do crescimento,
os extremos de temperatura matam os microrganismos. O ca
lor extremo utilizado para esterilizar preparaes (Cap. 4); o
frio extremo tambm mata as clulas microbianas, embora no * N. de R.T. Em geral, microrganismos microaerftlos tambm crescem
possa ser utilizado com segurana para esterilizao. As bact melhor quando n i cubados a 5% de C02 (capnoftlia). Essa condio pode
rias tambm exibem um fenmeno denominado choque pelo ser obtida incubando as placas semeadas em uma jarra com uma vela ace
sa, que depois colocada na estufa. Quando a chama consumir o oxignio
frio: a destruio de clulas por resfriamento rpido em vez de necessrio para manter a combusto, o C02 produzido no interior da jarra
lento. Por exemplo, o resfriamento rpido da Escherichia coli, de manter a condio de capnofilia.
72 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Aerbio obrigatrio Anaerbio Anaerbio Microaerfilo Aerotolerantes


facultativo obrigatrio
Bactria
Bactria

.; .. .. .. . .

:. . ..:-.
. ! ..

.. . .. . \.





. .

. . . . .

.

. .. .. . .. .: . .. .
. .. ..
. ..
...:: :.
. . .
. .
.... :

Enzimas celulares para a detoxificao do 02

Catalase: 2H202 --+ 2H20 + 02 Catalase, Ausncia tanto Pequena concentrao Superxido dismutase
Superxido dismutase: Superxido de catalase quanto de catalase e de
dismutase de superxido dismutase superxido dismutase
202- + 2H+--+ 02 + H202

FIGURA 5.4 Necessidade de oxignio (02) pelos procariontes. (Reproduzida, com autorizao, de Nester EW, Andersen DG, Roberts CE, Nester
MT [editors]: Microbiology: A Human Perspective, 6th ed. McGraw-Hill, 2009, p. 92. The McGraw-Hill Companies, lnc.)

Muitos aerbios e anaerbios aerotolerantes so protegidos o microrganismo pode ser manipulado dentro de uma cmara
desses produtos pela presena da superxido dismutase, enzi anaerbia por mos enluvadas.
ma que catalisa a reao
Fora inica e presso osmtica
202- + 2H+ 02 + H202
Pode ser necessrio controlar, em menor grau, certos fatores,
e pela presena da catalase, enzima que catalisa a reao como a presso osmtica e a concentrao de sal. Para a maio
ria dos microrganismos, as propriedades dos meios comuns
2H202 2H20 + 02 so satisfatrias; entretanto, para as formas marinhas e os mi
crorganismos adaptados ao crescimento em solues ricas em
Alguns microrganismos fermentativos (p. ex., Lactobacillus
acar, por exemplo, preciso considerar esses fatores. Os mi
plantarum) so aerotolerantes, mas no contm catalase sem
crorganismos que necessitam de altas concentraes de sal so
superxido dismutase. O oxignio no reduzido e, por con
denominados haloflicos, enquanto os que necessitam de altas
seguinte, no h produo de H202 e 02- . Todos os anaerbios
presses osmticas chamam-se osmoflicos.
estritos no tm superxido dismutase nem catalase. Alguns
A maioria das bactrias capaz de tolerar ampla faixa de
microrganismos anaerbios (p. ex., Peptococcus anaerobius)
presses osmticas externas e de foras inicas em virtude de sua
tm considervel tolerncia ao oxignio em virtude de sua ca
capacidade de regular a osmolalidade e a concentrao inica
pacidade de produzir altos nveis de uma enzima (NADH oxi
internas. A osmolalidade regulada pelo transporte ativo de ons
dase) que reduz o oxignio a gua de acordo com a reao
K+ no interior da clula; a fora inica interna mantida cons
NADH + H+ + Y202 NAD+ + H20 tante pela excreo compensatria de uma poliamina orgnica
de carga positiva, a putrescina. Como a putrescina possui vrias
O perxido de hidrognio deve grande parte de sua toxicida cargas positivas por molcula, obtm-se uma acentuada queda
de leso que provoca no DNA. Os mutantes com deficincia de da fora inica com pequeno custo na fora osmtica.
reparo do DNA so excepcionalmente sensveis ao perxido de
hidrognio; constatou-se que o produto do gene recA, que atua
tanto na recombinao quanto no reparo genticos, mais im MTODOS DE CULTURA
portante que a catalase ou a superxido dismutase na proteo
Dois problemas devem ser considerados: a escolha de um meio
da E. coli contra a toxicidade do perxido de hidrognio.
de cultura apropriado e o isolamento de um microrganismo
O suprimento de ar a culturas de aerbios constitui um srio
bacteriano em cultura pura.
problema tcnico. Em geral, os recipientes so agitados mecani
camente para introduzir oxignio no meio, ou o ar forado atra
vs do meio de cultura por presso. Com frequncia, a difuso de
O meio de cultura
oxignio torna-se o fator limitante no crescimento das bactrias A tcnica utilizada e o tipo de meio escolhido dependem da na
aerbias; quando a concentrao celular atinge 4 a 5 x 109/mL, a tureza da investigao. Em geral, podem ser encontradas trs
velocidade de difuso do oxignio para as clulas limita acentua situaes: (1) pode haver necessidade de cultivar um grupo de
damente a velocidade do crescimento posterior. clulas de uma determinada espcie disponvel; (2) pode haver
J os anaerbios obrigatrios apresentam o problema a necessidade de certo nmero e dos tipos de microrganismos
da excluso do oxignio. Existem muitos mtodos para isso: presentes em determinado material; ou (3) pode-se desejar iso
podem-se acrescentar agentes redutores, como o tioglicato de lar determinado tipo de microrganismo de uma fonte natural.
sdio, as culturas lquidas; os tubos de gar podem ser selados
com uma camada de petrolato e parafina; o recipiente de cul A. Crescimento de clulas de determinada espcie
tura pode ser colocado em outro recipiente a partir do qual o Os microrganismos cujo crescimento no ambiente natural
oxignio removido por evacuao ou por meios qumicos; ou podem ser observados ao microscpio podem exibir extrema
CAPTULO 5 Cultura de microrganismos 73

dificuldade de crescer em cultura pura em um meio artificial. Deve-se utilizar um meio lquido para permitir a competi
Por exemplo, certas formas parasitrias nunca foram cultiva o e, portanto, a seleo ideal, mesmo quando o tipo desejado
das fora do hospedeiro. Todavia, em geral pode-se preparar representado no solo em forma de apenas algumas clulas em
um meio apropriado com a cuidadosa reproduo das condi uma populao de milhes. Pode-se tirar proveito do "enrique
es encontradas no ambiente natural do microrganismo. cimento natural". Assim, por exemplo, na pesquisa de oxidan
simples reproduzir o pH, a temperatura e a aerao; os nutrien tes do querosene, escolhe-se um solo carregado de leo, visto
tes constituem o principal problema. A contribuio feita pelo que se trata de um meio de enriquecimento para essas formas.
ambiente vivo importante e difcil de analisar; assim, um pa A cultura de enriquecimento, portanto, constitui um proce
rasito pode necessitar de um extrato do tecido do hospedeiro, dimento pelo qual o meio preparado de modo a reproduzir o
enquanto uma forma de vida livre pode exigir uma substncia ambiente natural ("nicho") do microrganismo desejado, levando
excretada por um microrganismo ao qual est associada na na sua seleo. Um princpio importante envolvido nesta seleo
tureza. Pode ser necessria considervel experimentao para o seguinte: o microrganismo selecionado ser do tipo cuja ne
determinar as necessidades do microrganismo, de modo que o cessidade nutricional for dificilmente satisfeita. O Azotobacter,
sucesso ir depender do suprimento de uma fonte apropriada por exemplo, cresce melhor em um meio de cultura que conte
de cada categoria de nutriente relacionada no incio deste cap nha nitrognio orgnico, porm sua exigncia mnima consiste
tulo. A cultura de parasitos obrigatrios, como as riqutsias, na presena de N2; por conseguinte, ele ser selecionado em um
discutida no Captulo 27. meio que contenha N2 como nica fonte de nitrognio. Se for
acrescentado nitrognio orgnico ao meio, as condies no iro
selecionar mais Azotobacter, mas uma forma cuja exigncia m
B. Exame microbiolgico de materiais naturais
nima seja a presena de nitrognio orgnico.
Um material natural pode conter muitos microambientes dis Ao pesquisar um determinado tipo de microrganismo, que
tintos, proporcionando, cada qual, um nicho para uma espcie parte de uma populao mista, meios seletivos e diferenciais
diferente. A semeadura de amostra do material em determina devem ser usados. Os meios seletivos inibem o crescimento de
do conjunto de condies ir permitir que um grupo selecio diferentes microrganismos, permitindo o crescimento dos mi
nado de formas produza colnias, mas far com que muitos crorganismos desejveis. Por exemplo, o gar Thayer-Martin
outros tipos passem despercebidos. Por essa razo, habitual usado no isolamento de Neisseria gonorrhoeae (agente etio
semear amostras do material em diferentes meios e condies lgico da gonorreia) de um espcime clnico. Os meios dife
de incubao. Seis a oito condies diferentes de cultura no renciais contm substncias que podem ser metabolizadas ou
representam um nmero exagerado quando se pretende des no pelos microrganismos, permitindo a distino entre eles.
cobrir a maioria das formas presentes. Por exemplo, as colnias de E. coli exibem um brilho met
Como cada tipo de microrganismo presente deve ter a opor lico caracterstico em gar que contenha os corantes eosina e
tunidade de crescer, so utilizados meios slidos, e evita-se a azul de metileno (gar-EMB). O gar-EMB, que contm alta
aglomerao de colnias. Caso contrrio, a competio ir impe concentrao de um acar, far com que os microrganismos
dir a formao de colnias por alguns tipos de microrganismo. que fermentam esse acar formem colnias avermelhadas.
So utilizados meios diferenciais para certos propsitos, como
a identificao de bactrias entricas em gua ou leite e a pre
C. Isolamento de determinado tipo de microrganismo
sena de determinados patgenos em amostras clnicas.
Uma pequena amostra de solo, quando processada adequada O Quadro 5.2, apresenta vrios exemplos de condies de
mente, ir produzir um tipo diferente de microrganismo para cultura de enriquecimento, bem como os tipos de bactrias que
cada microambiente presente. No caso de solo frtil (mido, elas iro selecionar. Contudo, a despeito dos melhores esfor
arejado, rico em minerais e matria orgnica), isso significa a os, muitos ambientes contm vrias bactrias no cultivadas.
possibilidade de isolar centenas ou mesmo milhares de tipos
de microrganismo. Esse isolamento efetuado ao selecionar
se o tipo desejado. Por exemplo, inocula-se 1 g de solo em um Isolamento de microrganismos
recipiente com meio lquido preparado com a fmalidade de em cultura pura
favorecer determinado tipo de microrganismo, por exemplo, Para se estudarem as propriedades de determinado microrga
fixadores aerbios de nitrognio (Azotobacter). Nesse caso, o nismo, necessrio manipul-lo em uma cultura pura livre de
meio no contm nitrognio combinado, sendo incubado em todos os outros tipos de microrganismos. Para isso, necessrio
condies aerbias. Se houver Azotobacter no solo, as clulas isolar uma nica clula de todas as demais; essa clula isolada
iro crescer bem nesse meio; as formas incapazes de filar o deve ser cultivada de modo que sua prognie coletiva tambm
nitrognio s iro crescer medida que o solo tiver introduzi permanea isolada. Existem vrios mtodos disponveis.
do nitrognio filado contaminante no meio. Por conseguinte,
quando a cultura estiver totalmente desenvolvida, a porcenta
A. Semeadura em placa
gem de Azotobacter na populao total ter aumentado acentua
damente; por esse motivo, o mtodo denominado cultura de Diferentemente das clulas em meio lquido, as clulas em
enriquecimento. A transferncia de uma amostra dessa cultura meio slido ou sobre ele ficam imobilizadas. Desse modo, se
para um novo meio ir resultar em maior enriquecimento de for colocado um nmero suficiente de clulas sobre, ou dentro
Azotobacter; depois de vrias transferncias seriadas, a cultura do meio slido, cada clula ir crescer, formando uma colnia
poder ser semeada em meio slido de enriquecimento, po isolada. O agente slido ideal para a maioria dos meios de cul
dendo isolar colnias de Azotobacter. tura microbiolgica o gar, um polissacardeopolissacardeo
74 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

QUADRO 5.2 Alguns meios de cultura enriquecidos


Fonte de Organismo predominante
nitrognio Fonte de carbono Atmosfera Iluminao inicialmente enriquecido

Aerbia ou anaerbia Escura Nenhum


Luz Cianobactrias
lcool, cidos graxos, etc. Anaerbia Escura Nenhum
Ar Escura Azotobacter
Glicose Anaerbia Escura Clostridium pasteurianum
Ar Escura Azotobacter
Aerbia ou anaerbia Escura Nenhum
Luz Algas verdes e cianobactrias
lcool, cidos graxos, etc. Anaerbia Escura Desnitrificadores
Ar Escura Aerbios
Glicose Anaerbia Escura Fermentadores
Ar Escura Aerbios
Anaerbia Escura Nenhum
Aerbia Escura Nitrosomonas
Aerbia ou anaerbia Luz Algas verdes e cianobactrias
lcool, cidos graxos, etc. Anaerbia Escura Redutores de sulfato ou de carbonato
Aerbia Escura Aerbios
Glicose Anaerbia Escura Fermentadores
Aerbia Escura Aerbios

Nota: componentes de todos os meios: MgS04, K2HP04, FeCl3, CaCl2, CaC03 e oligoelementos.

cido extrado de determinadas algas vermelhas. Uma suspen incubada, e qualquer colnia bem isolada removida, suspensa
so a 1,5 a 2% em gua dissolvida a lOOC, formando uma novamente em gua e mais uma vez semeada na superfcie do
soluo transparente que se solidifica a 45C. Por conseguinte, gar. Se uma suspenso (e no apenas um pequeno crescimento
uma soluo estril de gar pode ser resfriada a 50C; em segui de uma colnia ou de material em tubo inclinado) for semeada
da, so adicionadas bactrias ou outras clulas microbianas, e com ala, esse mtodo ser to confivel quanto o mtodo de
depois a soluo rapidamente resfriada abaixo de 45C para semeadura em profundidade, alm de ser muito mais rpido.
formar um gel. (Embora as clulas microbianas sejam, em sua Na tcnica de semeadura por espalhamento, um pequeno
maioria, destrudas a 50C, o tempo necessrio para o processo volume da suspenso microbiana diluda contendo cerca de
de morte suficientemente lento a essa temperatura para pos 30 a 300 clulas transferido para o centro de uma placa de
sibilitar o procedimento; ver a Fig. 4.3.) Uma vez solidificado, gar e espalhado igualmente sobre a superfcie com uma ala
o gar no se liquefaz novamente at ser aquecido acima de de vidro estril*. As clulas dispersas desenvolvem-se em col
SOC, de modo que qualquer temperatura apropriada incuba nias isoladas. Uma vez que o nmero de colnias deve ser igual
o de uma cultura microbiana pode ser utilizada subsequente ao nmero de organismos viveis em uma amostra, pode-se
mente. No mtodo de semeadura em profundidade (mtodo usar as placas semeadas para contar a populao microbiana.
de pour-plate), uma suspenso de clulas misturada com gar
liquefeito a 50C e distribuda em uma placa de Petri. Quando B. Diluio
o gar se solidifica, as clulas so imobilizadas no gar e cres
Um mtodo muito menos confivel consiste em diluio at
cem em colnias. Se a suspenso de clulas tiver sido diluda
a extino. A suspenso diluda de modo seriado e faz-se a
o suficiente, as colnias ficaro bem separadas, de modo que
semeadura de amostras de cada diluio. Se apenas algumas
cada uma delas ter alta probabilidade de originar-se de uma
amostras de determinada diluio exibirem crescimento, pre
nica clula (Fig. 5.5). Entretanto, para se ter certeza disso,
sume-se que algumas dessas culturas foram iniciadas a partir
necessrio escolher uma colnia do tipo desejado, suspend-la
de clulas isoladas. Tal mtodo s dever ser utilizado se a
em gua e seme-la novamente. A repetio desse procedimen
semeadura em placas for, por algum motivo, impossvel. Um
to vrias vezes ir garantir a obteno de uma cultura pura.
aspecto indesejvel desse mtodo que ele s pode ser utiliza
Uma alternativa consiste em semear a suspenso original em
do para isolar o tipo predominante de microrganismo em uma
placa de gar com ala de metal (tcnica da placa estriada).
populao mista.
medida que se procede a isso, o nmero de clulas deixa
das na ala torna-se cada vez menor, de modo que, fmalmente, a * N. de R.T. As alas de vidro empregadas em semeadura microbiolgica
ala poder depositar clulas isoladas no gar (Fig. 5.6). A placa tambm sao conhecidas como alas de Drigalski.
CAPTULO 5 Cultura de microrganismos 75

1 ,0 mL 1 ,0 mL 1 ,0 mL 1 ,0 mL

Amostra 9 m L de H20 9 mL de H20 9 mL de H20 9 mL de H20


original (diluio 10-1) (diluio 10-2) (diluio 1 Q-3) (diluio 10-4)

Misturar com gar


morno e verter
na placa

FIGURA 5.5 Tcnica de semeadura em profundidade (mtodo de pour-plate). A amostra original diluda diversas vezes, a fim de reduzir a
populao. As amostras mais diludas so misturadas com gar morno e vertidas em placas de Petri. As clulas isoladas crescem em colnias e so
usadas para a obteno de colnias puras. As colnias de superfcie so circulares; as colnias imersas no gar so lenticulares (em forma de lente).
(Reproduzida, com autorizao, de Willey JM, Sherwood LM, Woolverton CJ: Prescott, Harley & Klein's Microbiology, 7th ed., McGraw-Hill, 2008. The
McGraw-Hill Companies, lnc.)

Nota: este mtodo s funciona se a ferramenta


usada para a semeadura (geralmente uma ala
de inoculao) for reesterilizada aps cada um
dos passos 1 a 4.

\...
..

! ..

/
1 2 3 4 5

A Passos da tcnica da placa estriada. B

FIGURA 5.6 Tcnica da placa estriada. (A) Um tpico padro de semeadura. (Reproduzida, com autorizao de Willey JM, Sherwood CJ, Wool
verton CJ: Prescott, Harley, & Klein's Microbiology, 7th ed., McGraw-Hill, 2008. The McGraw-Hill Companies, lnc.) (B) Um exemplo de placa estriada.
(Reproduzida, com autorizao, de Kathy Park Talaro.)

RESUMO DO CAPTULO Fatores de crescimento so compostos orgnicos que as


clulas necessitam para o seu desenvolvimento, porm so
Todos os organismos necessitam de compostos orgnicos incapazes de sintetiz-los.
e inorgnicos necessrios para o seu crescimento. Os nu necessria uma fonte de energia para manter uma fora
trientes so classificados de acordo com os elementos que motriz de prtons e para permitir a sntese de macromol
eles fornecem, incluindo fontes de carbono, de nitrognio, culas. H trs principais mecanismos de metabolismo cata
de fsforo, de enxofre e de sais minerais. blico: fermentao, respirao e fotossntese.
76 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Fatores ambientais, tais como pH, temperatura e aerao so 6. Qual das seguintes alternativas NO um exemplo de metabo
importantes para o crescimento microbiano. A maioria dos lismo catablico realizada por microrganismos?
patgenos humanos neutrfilos (cresce melhor em pH 6,0 a (A) Fermentao
8,0) e mesfilos (cresce melhor entre 30 e 37C). (B) Sntese proteica
Os organismos variam enormemente na sua habilidade (C) Respirao
de usar o oxignio como aceptor de hidrognio e pela sua (D) Fotossntese
capacidade de inativar produtos txicos do metabolismo (E) C eD
aerbio. Eles podem ser agrupados como: aerbios obri 7. Qual dos seguintes termos melhor descreve um microrganismo
gatrios, anaerbios obrigatrios, anaerbios facultativos, que cresce a 20C?
microaerfilos e aerotolerantes. (A) Neutrfilo
Os meios microbiolgicos so formulados para permitirem (B) Psicrfilo
o crescimento de diferentes espcies bacterianas (meio en (C) Mesfilo
riquecido), distinguir entre as espcies presentes em uma (D) Osmfilo
amostra (meio diferencial) ou isolar um organismo presen (E) Termfilo
te em uma amostra mista (meio seletivo).
8. A habilidade de assimilar N2 via NH3 denominada:
(A) Amonificao
(B) Anammox (oxidao anaerbia de amnia)
QUESTES DE REVISO (C) Reduo do nitrato
(D) Deaminao
1. A maior parte dos microrganismos patognicos para seres hu
(E) Fixao do nitrognio
manos cresce melhor em laboratrio quando incubada a
(A) 15 a 20C 9. Qual das seguintes molculas NO absorvida pelas clulas eu
(B) 20 a 30C cariontes?
(C) 30 a 37C (A) Glicose
(D) 38 a 50C (B) Lactato
(E) 50 a 55C (C) Sulfato (SOi-)
(D) Nitrognio (N2)
2. O processo pelo qual os microrganismos formam ATP durante a
(E) Fosfato (PO-)
fermentao da glicose caracterizado por
(A) Acoplamento da produo de ATP com a transferncia de 10. As bactrias que so patgenos humanos intracelulares obrigat
eltrons rios (p. ex., Chlamydia trachomatis) so consideradas:
(B) Desnitrificao (A) Autotrficas
(C) Reduo do oxignio (B) Fotossintticas
(D) Fosforilao do substrato (C) Quimiolitotrficas
(E) Respirao anaerbia (D) Hipertermfilas
(E) Heterotrficas
3. Qual das seguintes tcnicas de cultura e meios pode enumerar o
maior nmero de espcies microbianas em uma amostra de solo?
Respostas
(A) Cultura de enriquecimento
(B) Placa de meio seletivo 1. e 4. A 7. B 10. E
(C) Placa de meio diferencial
(D) Tubo com caldo nutriente 2. D 5. e 8. E
(E) Diferentes meios de cultura e diferentes condies de incu 3. E 6. B 9. D
bao

4. A polimerizao das unidades formadoras (p. ex., aminocidos) em


macromolculas (p. ex., protenas) grandemente alcanada por
REFERNCIAS
(A) Desidratao
(B) Reduo Adams MW: Enzymes and proteins from organisms that grow near or
(C) Oxidao above lOOC. Annu Rev Med 1993;47:627.
(D) Assimilao Koch AL: Microbial physiology and ecology ofslow growth. Microbial
(E) Hidrlise Molec Biol Rev 1997;61:305.
Maier RM, Pepper IL, Gerba CP: Environmental Microbiology. Aca
5. Uma cepa de E. coli sofre mutao que a impede de crescer bem demic Press, 1992.
em um meio que contenha glicose, sais minerais e cloreto de Marzlut GA: Regulation of sulfur and nitrogen metabolism in fila
amnio. Entretanto, a cepa ser capaz de crescer nesse meio se mentary fungi. Annu Rev Microbiol 1993;42:89.
for adicionada metionina, referida como Pelczar MJ Jr, Chan ECS, Krieg NR: Microbiology: Concepts and Ap
(A) Um sal inorgnico plications. McGraw-Hill, 1993.
(B) Uma fonte de enxofre Schloss PD, Handelsman J: Status of the microbial census. Microbial
(C) Um fator de crescimento Molec Biol Rev 2004;68:686.
(D) Uma fonte de energia Wood JM: Bacterial osmoregulation: A paradigm for the study of cel
(E) Uma fonte de nitrognio lular homeostasis. Annu Rev Microbiol 2011;65:215.
C A P T U L O

Metabolismo microbiano

O PAPEL DO METABOLISMO NA relativamente simples, como o benzoato, e uma nica via para
a assimilao do benzoato pode ser regulada por qualquer um
BIOSSNTESE E NO CRESCIMENTO
de mais de meia dzia de mecanismos de controle. O objetivo
O crescimento microbiano exige a polimerizao das subuni ilustrar os princpios subjacentes s vias metablicas e sua re
dades bioqumicas em protenas, cidos nucleicos, polissaca gulao. O princpio bsico que determina as vias metablicas
rdeos e lipdeos. As subunidades precursoras precisam estar que elas sejam seguidas mediante a organizao de um n
pr-formadas no meio ou devem ser sintetizadas pelas clulas mero relativamente pequeno de reaes bioqumicas em uma
em crescimento. A necessidade de coenzimas que participam sequncia especfica. Muitas vias de biossntese podem ser de
na catlise enzimtica constitui uma demanda adicional de duzidas pela verificao das estruturas qumicas das substncias
biossntese. As reaes de polimerizao nos processos de bios de partida, do produto final e, talvez, de um ou dois interme
sntese exigem a transferncia das ligaes de anidrido a partir dirios metablicos. O princpio bsico subjacente regulao
da adenosina trifosfato (ATP). O crescimento requer uma fon metablica consiste no fato de que as enzimas tendem a atuar
te de energia metablica para a sntese das ligaes de anidrido, apenas quando sua atividade cataltica se faz necessria. A ati
bem como manuteno dos gradientes transmembrana de ons vidade de uma enzima pode ser modificada ao variar-se a sua
e metablitos. quantidade ou a do substrato. Em alguns casos, a atividade das
O metabolismo apresenta dois componentes: o catabo enzimas pode ser alterada pela ligao de efetores especficos
lismo e o anabolismo (Fig. 6.1). O metabolismo catablico - metablitos que modulam a atividade enzimtica.
engloba processos de obteno de energia, liberada pela cliva
gem de diferentes compostos (p. ex., glicose), que usada para
sntese de ATP. O metabolismo anablico, ou de biossntese METABLITOS FOCAIS E SUAS
inclui processos que utilizam a energia armazenada no ATP INTERCONVERSES
para sintetizar e montar as subunidades das macromolculas
que compem a clula. lnterconverses de gl icose-6-fosfato
A sequncia das subunidades em uma macromolcula deter
minada de duas maneiras. Nos cidos nucleicos e nas protenas, a
e carboidratos
sequncia dirigida por um modelo: o DNA atua como modelo As origens da biossntese das subunidades que formam as
para sua prpria sntese e a sntese dos vrios tipos de RNA; o macromolculas e as coenzimas podem ser rastreadas at aos
RNA mensageiro serve de modelo para a sntese das protenas. precursores denominados metablitos focais. As Figuras 6.2 a
J nos carboidratos e lipdeos, a disposio das subunidades 6.5 ilustram como os respectivos metablitos focais (gli
totalmente determinada por especificidades enzimticas. Uma cose-6-fosfato ( G6PD ), fosfoenolpiruvato, oxaloacetato e
vez sintetizadas, as macromolculas organizam-se para formar as a-ketoglutarato) do origem a maioria dos produtos finais da
estruturas supramoleculares da clula, como, por exemplo, ribos biossntese.
somos, membranas, parede celular, flagelos e pili. A Figura 6.2 ilustra como a G6PD convertida em uma
A velocidade da sntese macromolecular e a atividade das srie de produtos finais de biossntese atravs de steres de fos
vias metablicas precisam ser reguladas, de modo que a bios fato de carboidratos com cadeias de diferentes comprimentos.
sntese seja equilibrada. Todos os componentes necessrios Os carboidratos possuem a frmula emprica (CH20)n, e o ob
sntese macromolecular devem estar presentes para que o cres jetivo primeiro de seu metabolismo modificar o valor de n,
cimento seja ordenado, e o controle tem de ser exercido para o comprimento da cadeia de carbonos. Os mecanismos pelos
que as reservas das clulas no sejam consumidas em produtos quais os comprimentos das cadeias de fosfatos de carboidratos
que no contribuem para o crescimento ou a sobrevida. so interconvertidos encontram-se resumidos na Figura 6.6.
Este captulo faz uma reviso sobre o metabolismo micro Em um caso, so utilizadas reaes oxidativas para remover um
biano e sua regulao. Os microrganismos representam extre nico carbono da G6PD, produzindo-se o derivado de pentose,
mos de divergncia evolutiva, encontrando enorme variedade a ribulose-5-fosfato. As reaes da isomerase e da epimerase
de rotas metablicas dentro desse grupo. Assim, por exemplo, interconvertem as formas bioqumicas mais comuns das pen
qualquer uma de mais de meia dzia de vias metablicas dife toses: ribulose-5-fosfato, ribose-5-fosfato e xilulose-5-fosfato.
rentes pode ser utilizada para a assimilao de um composto As transcetolases transferem um fragmento de dois carbonos
78 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

adenina dinucleotdeo reduzido (NADH), que atua como re


CATABOLISMO ANABOLISMO
dutor para a respirao no escuro. Muitos microrganismos
Fonte energtica
(glicose) utilizam o derivado de hexose monofosfato para reduzir a ni
.__-'---- cotinamida adenina dinucleotdeo fosfato (NADP+) em nico
tinamida adenina dinucleotdeo fosfato reduzido (NADPH),
Estruturas
celulares
utilizado em reaes de reduo biossintticas. As primeiras
(Parede celular, etapas na derivao da hexose-monofosfato so as reaes oxi
membrana, ribossomos,
estruturas de superfcie) dativas que encurtam seis hexoses-6-fosfato (abreviadas como
6 C6 na Fig. 6.7) em seis pentoses-5-fosfato (abreviadas co
Energia mo 6 C5). As reaes de rearranjo dos carboidratos convertem
Macromolculas as seis molculas C5 em cinco molculas C6 de modo que o ciclo
(Protenas, cidos oxidativo possa continuar.
nucleicos)
Evidentemente, todas as reaes de interconverso de
Energia
comprimentos de cadeias de carboidratos no atuam ao mes
mo tempo. A seleo de conjuntos especficos de enzimas,
Subunidades
(aminocidos, essencialmente a determinao da via metablica tomada,
nucleotdeos) condicionada pela fonte de carbono e pelas necessidades de
biossntese da clula. Assim, por exemplo, a clula que rece
Energia be uma triose-fosfato como fonte de carboidrato utilizar a
Precursores combinao aldolase-fosfatase para formar frutose-6-fosfato;
a quinase que atua sobre a frutose-6-fosfato na sua converso
Dejetos metablitos Nutrientes
em triose-fosfato no seria ativa nessas circunstncias. Se as
(cidos, dixido (Fonte de nitrognio, necessidades de pentose-5-fosfato forem altas, como no caso
de carbono) enxofre, etc.) da assimilao fotossinttica de dixido de carbono, as trans
cetolases que podero dar origem a pentoses-5-fosfato sero
FIGURA 6.1 A relao entre o metabolismo catablico e o anab
muito ativas.
lico. O catablico compreende processos que, pela clivagem de com
postos, resultam na liberao de energia usada na sntese de adenosina Em suma, a G6PD pode ser considerada um metablito fo
trifosfato (ATP); alm de precursores metablicos usados na biossnte cal, visto que atua tanto como precursor direto de subunidades
se. O anablico ou a biossntese incluem processos que utilizam ATP metablicas quanto como fonte de carboidratos de compri
e os precursores metablicos para sintetizar e montar as subunidades mento varivel, utilizados para fins de biossntese. A prpria
das macromolculas que constituem a clula. (Reproduzida, com auto G6PD pode ser produzida a partir de outros carboidratos fos
rizao, de Nester EW, Anderson DG, Roberts CE, Nester MT [editors]: forilados pela seleo de vias a partir de um conjunto de rea
Microbiology: A Human Perspective, 6th ed. McGraw-Hill, 2009, p. 127. es para interconverso de comprimentos de cadeias. As
The McGraw-Hill Companies, lnc.). reaes escolhidas so determinadas pelo potencial gentico da
clula, pela fonte primria de carbono e pelas necessidades de
biossntese do microrganismo. necessrio haver uma regula
de um doador para uma molcula aceptora, reaes que pos o metablica para garantir a escolha das reaes que supriro
sibilitam s pentoses formar ou serem formadas a partir de as demandas do organismo.
carboidratos com cadeias de comprimentos variveis. Como
mostra a Figura 6.6, duas pentoses-5-fosfato (n 5) so inter =

conversveis com a triose-3-fosfato (n 3) e com a heptose-7-


=
Formao e utilizao do fosfoenolpiruvato
fosfato (n 7); a pentose-5-fosfato (n 5) e a tetrose-4-fosfato
= = As trioses-fosfato formadas pela interconverso de fosfos
(n 4) so interconversveis com a triose-3-fosfato (n 3) e a
= = teres de carboidratos so convertidas em fosfoenolpiruvato
hexose-6-fosfato (n 6). = pela srie de reaes mostradas na Figura 6.8. A oxidao do
A cadeia hexose de seis carbonos da frutose-6-fosfato pode gliceraldedo-3-fosfato pelo NAD+ acompanhada pela for
ser convertida em dois derivados triose de trs carbonos pela mao da ligao acilfosfato no carbono 1 do 1,3-difosfoglice
ao consecutivamente de uma quinase e uma aldolase sobre a rato. Esse anidrido-fosfato acilfosfato transferido mediante
frutose-6-fosfato. Como alternativa, podem ser utilizadas aldo a fosforilao do substrato em adenosina difosfato (ADP),
lases, que atuam em conjunto com fosfatases, para aumentar o produzindo uma ligao rica em energia (ATP). Outra ligao
comprimento das molculas dos carboidratos: as trioses-fos fosfato rica em energia formada pela desidratao do 2-fos
fato do origem frutose-6-fosfato; uma triose-fosfato e uma foglicerato em fosfoenolpiruvato; por meio de outra fosfori
tetrose-4-fosfato formam heptose-7-fosfato. A forma final da lao de substrato, o fosfoenolpiruvato pode doar a ligao
interconverso do comprimento das cadeias de carboidratos rica em energia ao ADP com a consequente formao de ATP
a reao da transaldolase, que interconverte a heptose-7-fosfa e piruvato. Por conseguinte, podem ser obtidas duas ligaes
to e a triose-3-fosfato em tetrose- 4-fosfato e hexose-6-fosfato. ricas em energia do ATP pela converso metablica da triose
A coordenao das diferentes reaes de rearranjo dos car fosfato em piruvato. Trata-se de um processo oxidativo, e, na
boidratos, para atingir um objetivo metablico global, ilus ausncia de um aceptor exgeno de eltrons, o NADH gera
trada pela derivao da hexose-monofosfato (Fig. 6.7), ciclo do pela oxidao do gliceraldedo-3-fosfato deve ser oxidado
metablico utilizado pelas cianobactrias para a reduo do em NAD+ pelo piruvato ou por metablitos derivados a partir
nicotinamida adenina dinucleotdeo (NAD+) em nicotinamida do piruvato. Os produtos formados em consequncia desse
CAPTULO 6 Metabolismo microbiano 79

Metablito focal Intermedirios Produtos finais

Hexase fosfatos Polissacardeos

cidos nucleicos

Pentase fosfatos Histidina

Triptofano

G 1 icose-6-fosfato Tetrase fosfato Corismato Fenilalanina

Tirosina

Triase-fosfatos Lipdeos

Glicina

3-Fosfoglicerato Seri na Cistena

Triptofano

FIGURA 6.2 Produtos finais da biossntese formados a partir da glicose-6-fosfato. Os steres de fosfato dos carboidratos com cadeias de compri
mento varivel atuam como intermedirios nas vias biossintticas.

Metablito focal Intermedirios Produtos finais

Triase fosfatos Glicina


t
3-Fosfoglicerato Serina Cistena

Triptofano

Corismato ........, Fenilalanina

Tirosina

Fosfoenolpiruvato Polissacardeos

Alanina

Piruvato Valina

lsoleucina

Acetil-CoA -------- Lipdeos

FIGURA 6.3 Produtos finais da biossntese formados a partir do fosfoenolpiruvato.

processo variam e, conforme descreveremos adiante neste ca do ATP. Alguns microrganismos - por exemplo, Escherichia
ptulo podem ser utilizados na identificao de bactrias de coli - fosforilam diretamente o piruvato com ATP, havendo,
importncia clnica. em seguida, a formao de adenosina monofosfato (AMP) e
A formao de fosfoenolpiruvato a partir do piruvato re fosfato inorgnico (Pi). Outros microrganismos utilizam duas
quer uma quantidade substancial de energia metablica, e no etapas metablicas: uma ligao pirofosfato do ATP utilizada
processo so utilizadas invariavelmente duas ligaes anidrido na carboxilao do piruvato em oxaloacetato, e uma segunda
80 SEO 1 Funda m entos da Microbiologia

Metablito focal Produtos finais

Asparagina

Oxaloacetato Aspartato Treonina lsoleucina

Metionina
Coenzimas
Pirimidinas
cidos nucleicos

FIGURA 6.4 Produtos finais da biossntese formados a partir do oxaloacetato. Os produtos finais: aspartato, treonina e pirimidinas atuam como
intermedirios na sntese de outros compostos.

Metablito focal Intermedirios Produtos finais

Lisina

a-Cetoglutarato Glutamato Glutamina

Semialdedo glutmico Arginina

Prolina

FIGURA 6.5 Produtos finais da biossntese formados a partir do a-cetoglutarato.

ligao pirofosfato (frequentemente transportada mais pelo a formao do oxaloacetato, a acetil-CoA necessria como
guanosina trifosfato [GTP] do que pelo ATP) utilizada para efetor metablico positivo desse processo. Por conseguinte, a
gerar fosfoenolpiruvato a partir do oxaloacetato. sntese do oxaloacetato equilibrada com a produo de acetil
CoA. A condensao do oxaloacetato com acetil-CoA produz
citrato. A isomerizao da molcula de citrato produz isocitra
Formao e utilizao do oxaloacetato to, descarboxilado de modo oxidativo em a-cetoglutarato.
Conforme previamente descrito, muitos microrganismos for
mam oxaloacetato mediante a carboxilao, dependente de
ATP, do piruvato. Outros microrganismos, como a E. coli, VIAS DE ASSIMILAO
que formam fosfoenolpiruvato diretamente a partir do piru
vato, sintetizam o oxaloacetato por carboxilao do fosfoe Crescimento com acetato
nolpiruvato. O acetato metabolizado via acetil-CoA, tendo inmeros
A succinil-CoA um precursor biossinttico necessrio microrganismos com a capacidade de formar acetil-CoA
sntese das porfirinas e outros compostos essenciais. Alguns (Fig. 6.10), utilizada na biossntese do a-cetoglutarato e, na
microrganismos formam a succinil-CoA mediante a reduo maioria dos microrganismos respiratrios, o fragmento acetil
do oxaloacetato via malato e fumarato. Tais reaes represen da acetil-CoA oxidado por completo em dixido de carbono
tam uma reverso do fluxo metablico observado no ciclo con pelo ciclo dos cidos tricarboxlicos (Fig. 6.11). Entretanto, a
vencional dos cidos tricarboxlicos (Fig. 6.11). capacidade de usar o acetato como fonte efetiva de carbono
limita-se a um nmero relativamente pequeno de microrganis
Formao do a-cetoglutarato a partir do mos e vegetais. A sntese final dos precursores biossintticos a
partir do acetato efetuada por reaes de acoplamento do ci
p1ruvato clo dos cidos tricarboxlicos com duas outras reaes catalisa
A converso do piruvato em a-cetoglutarato requer uma via das pela isocitrato-liase e pela malato-sintase. Conforme ilustra
metablica divergente e, em seguida, convergente (Fig. 6.9). a Figura 6.12, essas reaes possibilitam a converso oxidati
Por um caminho, o oxaloacetato formado por carboxilao va final de duas pores acetil provenientes da acetil-CoA em
do piruvato ou do fosfoenolpiruvato. Pelo outro, o piruvato uma molcula de succinato. O succinato pode ser utilizado
sofre oxidao em acetil-CoA. interessante assinalar que, para fins de biossntese aps sua converso em oxaloacetato,
independentemente do mecanismo enzimtico utilizado para a-cetoglutarato, fosfoenolpiruvato ou G6PD.
CAPTULO 6 Metabolismo microbiano 81

Desidrogenases

Glicose-6-fosfato Ribulose 5-fosfato


(Ca) (Cs)

Transcetolases

Xilulose 5-fosfate Gliceraldedo 3-fosfato


( Cs) (C3)
Ribose 5-fosfato Sedoeptulose 7-fosfato
(Cs) (C1)

Xilulose 5-fosfato Gliceraldedo 3-fosfato


( Cs) (C3)
Eritrose 4-fosfato Frutose 6-fosfato
(C4) (Ca)

Quinase, aldolase

Di-hidroxiacetona fosfato
ADP ATP
(C3)
Frutose 6-fosfato '") . Frutose 1 ,6-difosfato
(Ca)
Gliceraldedo 3-fosfato
(C3)

Aldolase, fosfatase

Di-hidroxiacetona fosfato H20 Fosfato


(C3)
Frutose 1 ,6-difosfato \. /. Frutose 6-fosfato
(Ca)
Gliceraldedo 3-fosfato
(C3)

Di-hidroxiacetona fosfato H20 Fosfato


(C3)
Sedoeptulose 1 ,7-difosfato \. /. Sedoeptulose 7-fosfato
(Cy)
Eritrose 4-fosfato
(C4)

Transaldolase

Sedoeptulose 7-difosfato Eritrose 4-fosfato


(C1) (C4)

Gliceraldedo 3-fosfato Frutose 6-fosfato


(C3) (Ca)

FIGURA 6.6 Mecanismos bioqumicos para modificao do comprimento das molculas dos carboidratos. A frmula emprica geral dos steres
de fosfato dos carboidratos - (C0H2000)-N-fosfato - est abreviada (C0) para enfatizar as alteraes no comprimento das cadeias.
82 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Sistema de reao
+ H20
Glicose 6-fosfato + 1 2NAD+ 6C02 + 12NADH + Fosfato

Trans Trans
cetolase aldolase

6NADH 6NADH

Trans
cetolase

Fosfato

Aldolase,
fosfatase

FIGURA 6.7 A derivao de hexose-monofosfato. As reaes oxidativas (Fig. 6.6) reduzem o NAD+ (nicotinamida adenina dinucleotdeo fosfato) e
produzem C02, resultando em encurtamento das seis hexases-fosfato (abreviadas por C6) em seis pentases-fosfato (abreviadas por C5). Os rearranjos
dos carboidratos (Fig. 6.6) convertem as pentases-fosfato em hexases-fosfato, de modo que o ciclo oxidativo possa prosseguir.

FOSFORILAO
OXIDAO DO SUBSTRATO
o
11
CH 0H CHO COPO32- ADP ATP co2-
1 2 1 1
c=o HCOH 6
H 0H \_ _/ HCOH
1 1 1 1
CH2OPO32- CH2OPO32- p1. CH20P032- CH20P032-
Triase fosfato 1 ,3-Difosfoglicerato 3-Fosfoglicerato

FOSFORILAO
DO SUBSTRATO

ATP ADP
co2- co2- co2-
1
C=O \. .) 1
COPO32-
1
HCOPO32-
1 ll I
CH3 CH2 CH20H
Piruvato Fosfoenolpiruvato 2-Fosfoglicerato
FIGURA 6.8 Formao do fosfoenolpiruvato e do piruvato a partir da triase-fosfato. A figura chama a ateno para dois locais de fosforilao do
substrato e para a etapa oxidativa que resulta na reduo do (nicotinamida adenina dinucleotdeo fosfato (NAD+) em nicotinamida adenina dinucle
otdeo hidreto (NADH). A repetio dessa via de produo de energia requer um mecanismo para a oxidao do NADH em NAD+. Os microrganismos
fermentativos atingem esse objetivo ao utilizar o piruvato ou metablitos derivados do piruvato como oxidantes.

Crescimento com dixido de carbono: converso da triose fosfato no derivado pentose, ribulose-5-
fosfato, que sofre fosforilao para regenerar a molcula acep
o ciclo de Calvin
tora, ribulose-1,5-difosfato (Fig. 6.13B). O carbono reduzido
De forma similar as plantas e algas, diversas espcies microbia adicional, formado por assimilao redutora do dixido de
nas so capazes de utilizar o dixido de carbono como nica carbono, convertido em metablitos focais para as vias bios
fonte de carbono. Em quase todos esses organismos, a prin sintticas.
cipal via de assimilao do carbono a do ciclo de Calvin, em As clulas que podem utilizar o dixido de carbono co
que o dixido de carbono e a ribulose-difosfato combinam-se mo nica fonte de carbono so denominadas autotrficas, e
para formar duas molculas de 3-fosfoglicerato (Fig. 6.13A). as exigncias para esse padro de assimilao do carbono po
O 3-fosfoglicerato fosforilado em 1,3-difosfoglicerato, com dem ser resumidas brevemente como a seguir: alm da reao
posto reduzido no derivado triose, o gliceraldedo 3-fosfato. As primria de assimilao que d origem ao 3-fosfoglicerato,
reaes de rearranjo dos carboidratos (Fig. 6.6) possibilitam a deve existir um mecanismo para a regenerao da molcula
CAPTULO 6 Metabolismo microbiano 83

NAD+ HSCoA C02 NADH+H+

co2-
1
C=O o
1 11
CH3 CH3CSCoA
Piruvato Acetil-CoA

HSCoA
CH2Co2- CHC02-
ATP ADP I I
co2- HOCC02- eco2-
I '
1
c=o o = cco2- CH2C02- CH2C02-
1 Acetil CoA 1 Citrato Aconitato
CH 3 CH2Co2-
-

necessana
, .

Piruvato para reao 0xaloacetato

co2-
ATP 1 2
COPO3 -
ll
AMP CH2
Fosfoenol o = cco2-
piruvato 1
CH2
1
CH2Co2-
a-Cetoglutarato Oxalossuccinato lsocitrato

FIGURA 6.9 Converso do piruvato em a-cetoglutarato. O piruvato convertido em a-cetoglutarato por uma ramificao da rota de biossntese.
Em uma ramificao, o piruvato oxidado em acetil-CoA; em outra, o piruvato carboxilado em oxaloacetato.

------NAD
co2-
1 NAD+
c=o H+H+
1
CH3
Piruvato HSCoA

HSCoA pp.1
o
11
CH3Co2- CH3CSCoA
Acetato Acetil-CoA
ATP AMP

P-OXIDAO

HSCoA pp.1

Acidos graxos
,

ATP AMP

FIGURA 6.10 Fontes bioqumicas de acetil-CoA. AMP, adenosina monofosfato; ATP, adenosina trifosfato.
84 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Acetil-CoA
CHC02-
ll
o = cco2- cco2-
1 1
CH2Co2- CH2C02-

0xaloacetato Aconitato
NADH+H+

HOCHC02-
I
CHC02-
I
HOCHC02- CH 2C02-
I
CH2Co2- lsocitrato
LMalato
Sistema de reao
Acetil-CoA + 3NAD+ + Enz(FAD) + GDP + Pi + 2H20
HSCoA + 2C02 + 3NADH + 3H+ + Enz(FADH2) + GTP NADH+H+
o =cco2-
CHC02- 1
ll CHC02-
I
CHC02-
CH2C02-
Fumarato
0xalosuccinato

o =cco2-
1
CH2C02- CH2
I 1
Enz(FAD) CH CO -
CH2C02- HSCoA HSCoA
Succinato o a-Cetoglutarato
11
CH2CSCoA
1
GTP CH2C02-
GDP NADH
Succinil-CoA +
H+

FIGURA 6.11 Ciclo do cido tricarboxlico. Existem quatro etapas oxidativas, trs delas originando nicotinamida adenina dinucleotdeo hidreto
(NADH), enquanto uma d origem a uma flavoprotena reduzida, Enz(FADH2). O ciclo s pode prosseguir se houver aceptores de eltrons disponveis
para oxidar o NADH e a flavoprotena reduzida. GDP, guanosina difosfato; GTP, guanosina trifosfato.

aceptora, a ribulose 1,5-difosfato, processo que requer a redu Oxigenases


o, dependente de energia, do 3-fosfoglicerato para o nvel do
carboidrato. Por conseguinte, o autotrofismo exige a presena Muitos compostos presentes no meio ambiente so relativa
mente resistentes modificao enzimtica, de modo que a sua
de dixido de carbono, ATP, NADPH e um conjunto espec
utilizao como substratos para crescimento exige uma classe
fico de enzimas.
especial de enzimas, denominadas oxigenases, que usam dire
tamente o oxignio molecular oxidante potente como subs
Despolimerases trato em reaes que convertem um composto relativamente
Existem muitos substratos potenciais de crescimento que ser intratvel em uma forma na qual pode ser assimilado por rea
vem como subunidades formadoras dentro da estrutura dos es favorecidas termodinamicamente. A ao das oxigenases
polmeros biolgicos. Essas molculas grandes no so facil ilustrada na Figura 6.14, que mostra o papel de duas oxigena
mente transportadas atravs da membrana celular sendo, com ses na utilizao do benzoato.
frequncia, fixadas a estruturas celulares ainda maiores. In
meros microrganismos elaboram despolimerases extracelula
res que hidrolisam protenas, cidos nucleicos, polissacardeos
Vias de reduo
e lipdeos. O padro das atividades de despolimerase pode ser Alguns microrganismos vivem em ambientes extremamen
til na identificao de microrganismos. te redutores, os quais favorecem reaes qumicas que no
CAPTULO 6 Metabolismo microbiano 85

o CH2Co2-
11 I
CH3CSCoA HOCC02-
Acetil-CoA I
CH2Co2-

HSCoA Citrato

CHC02-
ll
O = CC02- cco2-
I 1
CH2Co2- CH2Co2-
0xaloacetato Aconitato

NADH+H+

HOCHC02-
I
o
HOCHC02- 11 CHC02-
I I
CH3CSCoA
CH2C02- CH2C02-
Acetil-CoA
LMalato HSCoA lsocitrato

MALATO SINTASE ISOCITRATO LIASE

O = CHC02-
Glioxilato
CH2C02-
I
CH2C02-
Succinato

Sistema de reao
2Acetil-CoA + NAD+ + 2H20 Succinato + 2HSCoA + NADH + H+

FIGURA 6.12 O ciclo do glioxilato. Observe que as reaes que convertem o maiato em isocitrato so compartilhadas pelo ciclo do cido tricar
boxlico (Fig. 6.11). A divergncia metablica no nvel do isocitrato e a ao de duas enzimas, a isocitrato-liase e malato-sintase, modificam o ciclo do
cido tricarboxlico, resultando em converso redutora de duas molculas de acetil-CoA em succinato.

ocorreriam em microrganismos que utilizam o oxignio como microrganismos capazes de fixar o nitrognio, na maioria deles
aceptor de eltrons. Nesses microrganismos, podem ser utili o complexo nitrogenase semelhante (Fig. 6.15). A nitroge
zados redutores potentes para impulsionar reaes que possi nase um complexo de duas enzimas - uma (dinitrogenase
bilitam a assimilao de compostos relativamente intratveis. redutase) contendo ferro e a outra (dinitrogenase) contendo
Um exemplo a assimilao redutora do benzoato, processo ferro e molibdnio. Juntas, elas catalisam a seguinte reao:
em que o anel aromtico reduzido e aberto para formar o pi
melato do cido dicarboxlico. Reaes metablicas posteriores N2 + 6H+ + 6e- + 12ATP -- + 12ADP+ 12P
convertem o pimelato em metablitos focais.
Devido alta energia de ativao para quebrar as fortes liga
es triplas que unem dois tomos de nitrognio, essa assimila
Assimilao do nitrognio o redutora do nitrognio exige uma quantidade substancial
A assimilao redutora do nitrognio molecular, tambm de energia metablica: 20 a 24 molculas de ATP so hidroli
conhecida como fixao do nitrognio, necessria para a sadas, enquanto uma nica molcula de N2 reduzida a duas
manuteno da vida em nosso planeta. Tal fixao efetua molculas de NH3
da por uma variedade de bactrias e cianobactrias que utili Outras demandas fisiolgicas so impostas pelo fato de a
zam um sistema de inmeros multicomponentes denominado nitrogenase ser facilmente inativada pelo oxignio. Os micror
complexo enzimtico nitrogenase. Apesar da variedade dos ganismos aerbios que utilizam a nitrogenase desenvolveram
86 SEO 1 Fundamentos da M icrobiologia

2 2ATP o 2NADPH
CH20H CH2OPO3 -
=O ATP ADP I
c=o co2
co2- 2ADP
11 2
COPO3 - 2NADP+ CHO

H OH "" ) io

H OH "" io
1
2HCOH
I
2HCOH 2HCOH
1
1 1 1 2 1 2 1 2
HCOH HCOH CH2OPO3 - CH2OPO3 - CH2OPO3 -
1 2 1 2
CH20P03 - CH20P03 -
Ribulose Ribose 2 3-Fosfo 2 1,3-Difosfo 2 Gliceraldedo
5-fosfato 1 ,5-difosfato glicerato glicerato 3-fosfato
(Cs) (2 C3)

Metablitos focais e biossntese

Aldolase,
fosfatase

Trans
cetolase

Aldolase,
fosfatase
2C7 2C5
Trans
cetolase

Assimilao redutora de C02

12NADP+
("\ T\
12NADPH 12ADP 12ATP 6ADP 6ATP

Sistema de reao
6C02 + 12NADPH + 1 8ATP 2 Triase fosfato (C 3) + 12NADP+ + 18ADP + 18Pi

FIGURA 6.13 O ciclo de Calvin. (A)Assimilao redutora do C02 A adenosina trifosfato (ATP) e a nicotinamida adenina dinucleotdeo fosfato
(NADPH) so utilizadas para converso redutora da pentase 5-fosfato (C5) em duas molculas de triase fosfato (C3). (8) O ciclo de Calvin concludo
atravs de reaes de rearranjo dos carboidratos (Fig. 6.6) que possibilitam a sntese final do carboidrato e a regenerao da pentase fosfato, de
modo que o ciclo possa continuar. ADP, adenosina difosfato.

mecanismos elaborados para proteger a enzima da inativao. fIXam simbioticamente o nitrognio nos ndulos das razes das
Alguns formam clulas especializadas nas quais ocorre a fIXa plantas leguminosas.
o do nitrognio, enquanto outros desenvolveram cadeias de A capacidade de utilizar a amnia como fonte de nitrognio
transporte de eltrons elaboradas para proteger a nitrogenase amplamente observada entre os microrganismos. A principal
da inativao pelo oxignio. As mais importantes dessas bac porta de entrada do nitrognio no metabolismo do carbono o
trias na agricultura so as Rhizobiaceae, microrganismos que glutamato, formado por aminao redutora do a-cetoglutarato.
CAPTULO 6 Metabolismo microbiano 87

CD
o2 C02 02
co2- co2-

OH
?"' co2-
1 OH 1 )1

co2-
OH OH
Benzoato NADH NAD+ NAD+ NADH Catecol
+ +
H+ H+

Succinil-CoA + Acetil-CoA ------ 5 etapas ----

FIGURA 6.14 O papel das oxigenases na utilizao aerbia do benzoato como fonte de carbono. O oxignio molecular participa diretamente nas
reaes que rompem o anel aromtico do benzoato e do catecol.

Leghemoglobina

Sistema
Carboidrato - oxidase
(da gliclise ou terminal
fotossntese)

16MgATP 16MgADP + Pi
2H+ + 2e

H2
/c aptao de
hidrogenase
8NADH + H+ 8Fd

FIGURA 6.15 Reduo do N2em duas molculas de NH3 Alm do redutor, a reao da nitrogenase requer uma quantidade significativa de ener
gia metablica. O nmero de molculas de adenosina trifosfato (ATP) necessrio para a reduo de uma nica molcula de nitrognio em amnia
incerto, e parece situar-se entre 12 e 16. A reao global requer nicotinamida adenina dinucleotdeo fosfato - 8NADH + H+, seis utilizados para reduzir
o N2 em 2NH3, enquanto dois so empregados para formar H2 A hidrogenase de captao devolve o H2 ao sistema, conservando, assim, a energia.
(Redesenhada e reproduzida, com autorizao, de Moat AG, Foster JW: Microbial Physiology, 4th ed., Wiley-Liss, 2002. Reproduzida, com autorizao,
de John Wiley & Sons, lnc.)

Conforme ilustra a Figura 6.16, existem dois mecanismos bio que aparece nas estruturas das purinas, pirimidinas, arginina,
qumicos pelos quais isso pode ser feito. Um deles, que consiste triptofano e glicosamina. A atividade e a sntese da glutami
na reduo em uma nica etapa catalisada pela glutamato-desi na-sintase so reguladas pelo suprimento de amnia e pela
drogenase (Fig. 6.16A), efetivo em ambientes em que existe su disponibilidade de metablitos que contenham nitrognio,
primento de amnia abundante. O outro, um processo em duas
derivado diretamente do nitrognio amida da glutamina.
etapas em que a glutamina atua como intermedirio (Fig. 6.16B),
A maior parte do nitrognio orgnico nas clulas provm
usado em ambientes nos quais h pouco suprimento de am
do grupo a-amino glutamato, e o mecanismo primrio pelo
nia. O ltimo mecanismo possibilita que a clula utilize a energia
qual o nitrognio transferido consiste na transaminao.
livre formada por hidrlise de uma ligao pirofosfato no ATP
para assimilar a amnia a partir do meio ambiente. Nessas reaes, o aceptor habitual um a-cetocido, transfor
O nitrognio amida da glutamina, um intermedirio na as mado no a-aminocido correspondente. O a-cetoglutarato, o
similao em duas etapas da amnia em glutamato (Fig. 6.16B), outro produto da reao de transaminao, pode ser converti
tambm transferido diretamente para nitrognio orgnico, do em glutamato por aminao redutora (Fig. 6.16).
88 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

A. Altas concentraes de amnia.


co2- co2
1 +1
C=O H3NCH
1 1
CH2 + NH3 + NADPH CH2 + NADP+
1 1
CH2 CH2
1 1
co2- co2-
a-Cetoglutarato Glutamato

B. Baixas concentraes de amnia.


co2-
+ 1
H3NCH
1
CH2 + ATP + NH3
1
CH2
1
co2-

Glutamato Glutamina

co2- co2- co2- co2-


+ 1 1 + 1 +1
H3NCH C=O H3NCH H3NCH
1 1 1 1
CH2 + CH 2 + NADPH CH2 + CH2 + NADP+
1 1 1 1
CH2 CH 2 CH2 CH2
1 1 1 1
C=O co2- co2- co2-
1
NH2

Glutamina a-Cetoglutarato 2-Glutamatos

FIGURA 6.16 Mecanismos de assimilao do NH3 (A).


Quando a concentrao de NH3se apresenta elevada, as clulas so capazes de assimilar o
composto atravs da reao da glutamato desidrogenase. (8) Quando a concentrao de NH3 baixa, como ocorre mais frequentemente, as clulas
acoplam as reaes da glutamina sintase e da glutamato sintase para utilizar a energia produzida por hidrlise de uma ligao de pirofosfato na
assimilao da amnia.

VIAS DE BIOSSNTESE encontrados unicamente nos procariotos. O cido diaminopi


mlico um componente do peptidoglicano da parede celular,
enquanto o cido dipicolnico representa um componente ma
Traado das estruturas dos precursores joritrio dos endosporos.
biossintticos: glutamato e aspartato
Em muitos casos, possvel estabelecer a origem biossintti
ca do esqueleto de carbono de um produto final metablico.
co2
+1
A glutamina, que fornece um exemplo bvio, claramente co2 H3NCH
derivada do glutamato (Fig. 6.17). O esqueleto do glutamato +1 1
H3NCH CH2
nas estruturas da arginina e da prolina (Fig. 6.17) menos evi 1 1
dente, porm facilmente discernvel. De modo semelhante, o CH2 CH2
1 1
esqueleto de carbono do aspartato, derivado diretamente do CH2 CH2
metablito focal oxaloacetato, evidente nas estruturas da as 1 1
C=O NH
paragina, treonina, metionina e pirimidinas (Fig. 6.18). 1 1
Em alguns casos, diferentes esqueletos de carbono combi NH2 C = NH
nam-se em uma via de biossntese. Assim, por exemplo, o as 1
NH2
partato semialdedo e o piruvato combinam-se para formar os
Glutamina Arginina Prolina
precursores metablicos da lisina, o cido diaminopimlico e o
cido dipicolnico (Fig. 6.19). Os dois ltimos compostos so FIGURA 6.17 Aminocidos formados a partir do glutamato.
CAPTULO 6 Metabolismo microbiano 89

adio catalisada por uma enzima diferente, envolvendo, cada


co2
+ 1 qual, a clivagem do ATP em ADP + Pi.
co2 co2 H3NCH
-

+ 1
O UDP-cido-N-acetilmurmicopentapeptdeo liga-se ao
+ 1 1
H3NCH H3NCH CH2 bactoprenol (um lipdeo da membrana celular) e recebe uma
1 1 1 molcula de N-acetilglicosamina do UDP. Algumas bactrias
CH2 CHOH CH2
1 1 1 (p. ex., Staphylococcus aureus) formam um derivado pen
C=O CH3 s taglicina em uma srie de reaes que utilizam glicil-RNAt
1 1
NH2 CH3 como doador; o dissacardeo obtido polimerizado em um
intermedirio oligomrico antes de ser transferido para a
Asparagina Treonina Metionina Uracila
poro terminal de um polmero de glicopeptdeo na parede
FIGURA 6.18 Produtos finais da biossntese formados a partir do celular.
aspartato. A ligao cruzada final (Fig. 6.20B) efetuada por meio de
uma reao de transpeptidao, em que o grupo amino livre de
um resduo de pentaglicina desloca o resduo o-alanina termi
nal de um pentapeptdeo vizinho. A transpeptidao catalisa
da por uma enzima de um conjunto de enzimas denominadas
Sntese do peptidoglicano da parede protenas de ligao da penicilina (PBP). As PBP ligam-se
celular penicilina e a outros antibiticos betalactmicos de modo co
A estrutura do peptidoglicano mostrada na Figura 2.16; a valente, devido, em parte, a uma semelhana estrutural entre
via pela qual ele sintetizado encontra-se ilustrada de modo esses antibiticos e o pentapeptdeo precursor. Algumas PBP
simplificado na Figura 6.20A. A sntese do peptidoglicano exibem atividades de transpeptidase ou carboxipeptidase, sen
comea com a sntese em etapas do UDP-cido N-acetilmu do provvel que suas velocidades relativas controlem o grau de
rmicopentapeptdeo no citoplasma. A N-acetilglicosamina formao de ligaes cruzadas no peptidoglicano (fator impor
liga-se inicialmente ao uridina difosfato (UDP) e, em seguida, tante na septao celular).
convertida em UDP-cido N-acetilmurmico por condensa A via de biossntese tem importncia especial em medicina,
o com o fosfoenolpiruvato e reduo. Os aminocidos do visto que proporciona uma base para a ao antibacteriana sele
pentapeptdeo so sequencialmente adicionados, sendo cada tiva de vrios quimioterpicos. Diferentemente de suas clulas

H H
e e -:::::-
H2C / -:::0 ::- H 2C / CH -2H
1 + 1 1
HC '-.... HC '-.... C
HOOC ,..,. NH2 HOOC ,..,. N -...... COOH HOOC N ,,,,;:. COOH
Aspartato semialdedo Piruvato cido di-hidropicolnico Acido dipicolnico
,

(esporos)

CoA
H2
,...,... e ""'
Succinil-CoA
H2e cH2
1 1
C HC
O 1 -...... COOH
HOOC ,..,. -::: ::-
Acido tetraidropicolnico NH
,

1
(Succ)

COOH
1
HC - NH2
1
(CH2)3
1
HC -NH2
1
COOH
cido diaminopimlico Lisina
(paredes celulares) (protenas)

FIGURA 6.19 Produtos finais da biossntese formados a partir do aspartato semialdedo e do piruvato.
90 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

O Derivados de UDP do NAM e O O NAM -pentapeptdeo transferido O O UDP transfere o NAG para o bactoprenol
do NAG so sintetizados para o bactoprenol fosfato. Eles so NAM-pentapeptdeo. Se for necessria uma ponte
(no mostrado). ligados por uma ponte pirofosfato. pentaglicina, esta criada com o emprego de
molculas especiais glicil-tRNA, e os ribossomos
UDP-NAM no so empregados. A formao das pontes
L-Ala L-Ala ocorre na membrana.
f) Adio sequencial de aminocidos
a UDP-NAM para formar o
NAM-pentapeptdeo. O ATP D-Glu
usado para complet-lo, mas o
Cicloserina 0 O bactoprenol carreador transfere
tRNA e os ribossomos no L-Lys (DAP) as unidades repetidas NAM-NAG

0r
esto envolvidos na formao pentapeptdeo atravs da membrana.
das pontes peptdeas que ligam
os aminocidos. D-Ala -D-A a

r
Lipdeo 1 UDP- NAG Lipdeo li
Citoplasma Pentapeptdeo
UDP-NAM - pentapeptdeo
1
A
R o UMP UDP 8 - NAM -NAG
Pi

Bacitracina Membrana

o
Periplasma Peptidoglicano - NAM -NAG Peptidoglicano P. R - NAM- NAG
1 . .
Vancom1c1na
1
Pentapeptdeo Pentapeptdeo

O As ligaes peptdicas entre as cadeias O O bactoprenol carreador retorna atravs O O NAM-NAG-pentapeptdeo acoplado
do peptidoglicano so formadas por da membrana. Nessa operao, perde um regio terminal crescente de uma cadeia
transpeptidao (no mostrado) fosfato, tornando-se bactoprenol fosfato, do peptidoglicano, aumentando a extenso
ficando pronto para iniciar um novo ciclo. da cadeia em uma unidade repetida.

B Transpeptidao de Escherichia coli

... NA - NAM ... ... - NAM


D-Ala
D-Ala
1 1 1 1
L -Ala D-Ala L-Ala D-Ala
1 1 1 1
D- Glu H2N- DAP .. D-Glu DAP
1 1 1 1
D-Glu DAP D - Glu
DAP 1
1
e
1
f
1 L-Ala
D- ia L-Ala D-Ala
1 1
D - Ala ... - NAM ... ... NA - NAM ...

Transpeptidao de Staphylococcus aureus Penicilinas

... - NAM ... - NAM ... D -Ala


D - Ala
1 1 1 1
L-Ala D - Ala L-Ala D - Ala
1 1
-

1 1 ..
D-GluNH2 L - Lys D-G luNH 2 / / L - Lys
1 1 1 1
L- Lys D - GluNH2 L- Lys (Gly)5 D - GluNH2

e I 1 1 1
D-Ala H2N-(Gly)5 L - Ala D-Ala L-Ala
1 1 1
D-Ala ... NA - NAM ... ... - NAM ...

FIGURA 6.20 (A) Biossntese do peptidoglicano. NAM o cido N-acetilmurmico e NAG a N-acetilglicosamina. O pentapeptdeo contm L-lisina
no peptidoglicano de Staphylococcus aureus e cido diaminopimlico (DAP) em Escherichia coli. Tambm mostrada a inibio por bacitracina, ci
closserina e vancomicina. Os nmeros correspondem a seis dos oito estgios discutidos no texto. O oitavo estgio mostrado na Figura 6.208.NAM,
cido N-acetilmurmico; NAG, N-acetilglicosamina; UDP, uridina difosfato. (8) Transpeptidao. As reaes de transpeptidao na formao do
peptidoglicano de Escherichia coli e de Staphylococcus aureus. (Reproduzida, com autorizao, de Willey JM, Sherwood LM, Woolverton CJ: Prescott,
Harley, & Klein's Microbiology, 7th ed. MacGraw-Hill, 2008. The McGraw-Hill Companies, lnc.).
CAPTULO 6 Metabolismo microbiano 91

hospedeiras, as bactrias no so isotnicas com os lquidos como fonte da subunidade apropriada, por isso sua sntese de
biolgicos. O contedo das bactrias encontra-se sob elevada pende da presena de sacarose no meio.
presso osmtica, e sua viabilidade depende da integridade da
rede de peptidoglicano na parede celular, que deve ser mantida
por todo o ciclo de crescimento. Qualquer composto capaz de
Sntese dos grnulos de reserva
inibir uma etapa no processo de biossntese do peptidoglicano alimentar
provoca o enfraquecimento da parede da clula bacteriana em Quando existe um excesso de nutrientes com relao s neces
crescimento e a lise celular. As Figuras 6.20A e B mostram os sidades de crescimento, as bactrias convertem alguns deles em
locais de ao de vrios antibiticos. grnulos intracelulares de reserva alimentar. Os principais so
o amido, glicognio, poli--hidroxibutirato e a volutina, que
Sntese do lipopolissacardeo do consiste principalmente em polifosfato inorgnico (Cap. 2).
O tipo de grnulo formado prprio da espcie. Os grnu
envelope celular
los so degradados quando ocorre a depleo dos nutrientes
A Figura 2.20 mostra a estrutura geral do lipopolissacardeo exgenos.
antignico dos envelopes celulares de microrganismos gram
negativos. A biossntese do grupo terminal repetitivo, que
confere ao envelope sua especificidade antignica, apresen
tada na Figura 6.21. Observe a semelhana com a sntese do PADRES DE METABOLISMO PRODUTORES
peptidoglicano: em ambos os casos, uma srie de subunida DE ENERGIA EM MICRBIOS
des organizada em um transportador lipdico na membrana
e, em seguida, transferida para as extremidades abertas do Conforme descrito no Captulo 5, existem dois mecanismos
polmero. metablicos principais para a gerao de ligaes de pirofos
fato cido ricas em energia no ATP: a fosforilao do subs
trato (a transferncia direta de uma ligao acilfosfato de um
Sntese dos polmeros capsulares doador orgnico para o ADP) e a fosforilao do ADP pelo
extracelulares fosfato inorgnico. A ltima reao desfavorvel do ponto
Os polmeros capsulares, alguns deles relacionados no Qua de vista energtico e tem de ser impulsionada por um gradien
dro 2.1, so sintetizados enzimaticamente a partir de subu te eletroqumico transmembrana, a fora motriz de prtons.
nidades ativadas. Nenhum transportador lipdico ligado Na respirao, o gradiente eletroqumico criado a partir de
membrana tem sido envolvido nesse processo. A presena de um redutor e um oxidante fornecidos externamente. A energia
uma cpsula frequentemente determinada pelo ambiente: os liberada por transferncia de eltrons do redutor para o oxi
dextranos e os levanos, por exemplo, s podem ser sintetiza dante atravs de transportadores ligados membrana aco
dos com a utilizao do dissacardeo sacarose (frutose-glicose) plada formao do gradiente eletroqumico transmembrana.

GDP BP- --(gal-rha-man)n-1


BP- --gal-rha-man

GDP-man BP- -
BP- --gal-rha BP- --(gal-rha-man) n

TOP Polissacardeo
principal

TDP-rha Polissacardeo

--gal -
(gal-rha-man)n
BP- BP- principal

UMP BP-
p.1
UDP-gal

FIGURA 6.21 Sntese da unidade repetida da cadeia lateral do polissacardeo da Salmonella enterica sorovar Newington e sua transferncia para o
cerne do lipopolissacardeo. BP, bactoprenol; GDP, guanosina difosfato; TOP, timidina difosfato; UDP, unidina difosfato; UMP, uridina monofosfato.
92 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Na fotossntese, a energia luminosa gera redutores e oxidantes a estrutura quanto a localizao de um substrato so modifi
associados membrana; a fora motriz de prtons gerada cadas. Convm assinalar que a escolha do ATP ou do fosfoe
medida que esses transportadores de eltrons retornam ao es nolpiruvato como agente de fosforilao no altera a produo
tado basal. Tais processos so discutidos a seguir. de ATP da fermentao, visto que o fosfoenolpiruvato utili
zado como fonte de ATP nos estgios finais da fermentao
(Fig. 6.8).
Vias de fermentao
A. Estratgias para a fosforilao de substratos C. A via de Embden-Meyerhof
Na ausncia de respirao ou de fotossntese, as clulas de Esta via (Fig. 6.22), um mecanismo comumente encontrado
pendem totalmente da fosforilao de substratos para obter na fermentao da glicose, utiliza uma quinase e uma aldolase
energia: a gerao de ATP precisa ser acoplada ao rearranjo (Fig. 6.6) para transformar a hexose (C6) fosfato em duas mo
qumico de compostos orgnicos. Muitos compostos podem lculas de triose (C3) fosfato. A converso da triose-fosfato em
atuar como substratos de crescimento passveis de fermenta duas molculas de piruvato acompanhada de quatro reaes
o, e vrias vias foram desenvolvidas, apresentando trs est de fosforilao dos substratos. Por conseguinte, tendo em vista
gios gerais: (1) converso do composto passvel de fermentao as duas ligaes de pirofosfato do ATP necessrias formao de
no doador de fosfato para a fosforilao de substrato; esse es triose-fosfato a partir da glicose, a via de Embden-Meyerhofpro
tgio com frequncia abrange reaes metablicas nas quais duz um ganho lquido de duas ligaes de pirofosfato de ATP.
o NAD+ reduzido a NADH; (2) fosforilao do ADP pelo A formao do piruvato a partir da triose-fosfato um proces
doador de fosfato rico em energia; (3) etapas metablicas que so oxidativo, e o NADH formado na primeira etapa metablica
colocam os produtos da fermentao em equilbrio qumico (Fig. 6.22) deve ser convertido em NAD+ para que a fermentao
com os materiais de partida. A exigncia mais frequente nesse prossiga. A Figura 6.23 ilustra dois dos mecanismos mais sim
ltimo estgio consiste em um mecanismo para a oxidao do ples para se atingir esse objetivo. A reduo direta do piruvato
NADH, gerado no primeiro estgio de fermentao, em NAD+, pelo NADH gera o lactato como o produto final da fermentao
de modo que a fermentao possa prosseguir. Nas prximas e, portanto, resulta em acidificao do meio. Como alternativa,
sees so fornecidos exemplos de cada um dos trs estgios o piruvato pode ser descarboxilado em acetaldedo, que ento
da fermentao. utilizado para oxidar o NADH com a consequente formao do
produto neutro etanol. A via escolhida determinada pela hist
ria evolutiva do microrganismo e, em alguns deles, pelas condi
B. Fermentao da glicose es de crescimento.
A diversidade das vias ilustrada ao se considerarem alguns
dos mecanismos utilizados por microrganismos para efetuar D. As fermentaes de Entner-Doudoroff e do
a fosforilao de substratos custa da glicose. Em princpio, a heterolactato
fosforilao do ADP em ATP pode ser acoplada a uma de duas
transformaes quimicamente balanceadas: A Figura 6.24 mostra vias alternativas para a fermentao da
glicose, inclusive algumas reaes enzimticas especializadas.
A via de Entner-Doudoroff diverge das outras vias do meta
Glicose - 2 cido ltico bolismo dos carboidratos em virtude de uma desidratao do
(C6H12 06) (C3 H603 ) 6-fosfogliconato, seguida de uma reao de aldose ou aldolase
que produz piruvato e triose fosfato (Fig. 6.24A). A fermenta
ou o do heterolactato e algumas outras vias fermentativas de
pendem de uma reao da fosfocetolase (Fig. 6.24B), que cliva
Glicose - 2 Etanol + 2 Dixido de carbono fosforoliticamente uma cetose fosfato, produzindo acetilfosfa
(C6 H12 06 ) (C2H6 0) (C02) to e triose fosfato. O acetilfosfato pode ser utilizado para sin
tetizar o ATP ou possibilitar a oxidao de duas molculas de
NADH em NAD+ medida que reduzido a etanol.
Os mecanismos bioqumicos pelos quais essas transforma As Figuras 6.25 e 6.26 do uma viso geral das vias de En
es ocorrem variam de modo considervel. tner-Doudoroff e do heterolactato, respectivamente, que pro
Em geral, a fermentao da glicose iniciada pela sua fos duzem apenas uma nica molcula de triose fosfato a partir
forilao em G6PD. Existem dois mecanismos pelos quais da glicose, com produo de energia correspondentemente
essa reao pode ser efetuada: ( 1) a glicose extracelular pode baixa: diferentemente da via de Embden-Meyerhof, as vias de
ser transportada, atravs da membrana citoplasmtica, para o Entner-Doudoroff e do heterolactato produzem apenas uma
interior da clula e, em seguida, fosforilada pelo ATP, produ fosforilao do substrato de ADP por molcula de glicose fer
zindo G6PD e ADP; (2) em muitos microrganismos, a glicose mentada. Por que outras vias de fermentao da glicose tm
extracelular fosforilada medida que est sendo transportada sido selecionadas no ambiente natural? Para responder a esta
atravs da membrana citoplasmtica por um sistema enzim pergunta, preciso ter em mente dois fatos. Em primeiro lu
tico existente na membrana, que fosforila a glicose extracelular gar, na competio direta pelo crescimento entre duas espcies
custa do fosfoenolpiruvato, produzindo G6PD e piruvato in microbianas, a velocidade de utilizao de substrato pode ser
tracelulares. O ltimo processo um exemplo do metabolismo mais importante do que a quantidade de crescimento. Em se
vetorial, um conjunto de reaes bioqumicas em que tanto gundo lugar, a glicose apenas um dos inmeros carboidratos
CAPTULO 6 Meta boli smo microbiano 93

G licose
A glicose fosforilada custa de uma molcula de
ATP, criando glicose 6-fosfato, um precursor metablico
e molcula de partida para a via da pentose-fosfato.
ADP

Glicose 6-fosfato
lsomerizao da glicose 6-fosfato (um aldedo) para
frutose 6-fosfato (uma cetona e um precursor
metablico).
Frutose 6-fosfato
Mais uma molcula de ATP consumida para
fosforilar C1 da frutose. A clula dispensa uma
parte de sua energia para poder ganhar mais na
etapa seguinte da gliclise. Fase 6C
Frutose 1 , 6-bifosfato
\ 1I
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Di-hidroxiacetona:' po ".:
- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

\ /


Fase 3C
FA frutose 1 ,6-bifosfato convertida em duas
molculas de trs carbonos, uma das quais um
---
- -- - -- ---- f ta '' e
' ''4'-
"\ -

precursor metablico.

Gliceraldedo 3-fosfato Gliceraldedo 3-fosfato

e2 NAD 1 e2 NAD 1
O gliceraldedo 3-fosfato oxidado e simultaneamente
fosforilado, criando uma molcula de alta energia. Os
eltrons liberados reduzem o NAD1 a NADH.
C NADH 1 H1 C NADH 1 H1
....--.... p.1 ....--.... p.1

1 ,3-bifosfoglicerato 1 ,3-bifosfoglicerato
,,..--o. ADP ADP
O ATP produzido como substrato de fosforilao.
E produzido outro precursor metablico. C ATP
'

3-fosfoglicerato 3-fosfoglicerato

t
2-fosfoglicerato
t
2-fosfoglicerato

Outro precursor metablico produzido.

Fosfoenolpiruvato Fosfoenolpiruvato

A clivagem oxidativa de uma molcula de glicose ,,,_-, ADP


resulta na formao de duas molculas de piruvato.
O piruvato um dos precursores metablicos mais ..,_,_.e ATP
importantes.
Piruvato -- Piruvato

FIGURA 6.22 A via de Embden-Meyerhof. Esta uma das trs vias glicolticas usadas para catabolizar a glicose em piruvato e que ocorre durante
a respirao aerbia, a respirao anaerbia e a fermentao. Quando utilizada durante o processo respiratrio, os eltrons aceitos pelo NAD+ (nico
tinamida adenina dinucleotdeo fosfato) so transferidos para uma cadeia de transporte de eltrons e finalmente aceitos por um receptor exgeno
de eltrons. Quando utilizada durante a fermentao, os eltrons aceitos pelo NAD+ so doados para um aceptor de eltrons endgeno (p. ex., o
piruvato). A via de Embden-Meyerhof tambm uma importante via anfiblica, pois gera vrios precursores metablitos (acima, em azul). ADP,
adenosina difosfato; ATP, adenosina trifosfato. (Reproduzida, com autorizao, de Willey JM, Sherwood LM, Woolverton CJ: Prescott, Harley, & Klein's
Microbiology, 7th ed, McGraw-Hill, 2008.)

encontrados pelos microrganismos em seu ambiente natural. presente. Por exemplo, existem vrios mecanismos para a oxi
Por exemplo, as pentoses podem ser fermentadas com muita dao do NADH custa do piruvato. Uma dessas vias consiste
eficincia pela via usada pelo heterolactato. na formao do succinato por reduo. Muitas bactrias de im
portncia clnica formam piruvato a partir da glicose pela via
de Embden-Meyerhoff, podendo ser distinguidas com base nos
E. Outras variaes na fermentao dos carboidratos
produtos de reduo formados a partir do piruvato, o que re
As vias de fermentao dos carboidratos podem englobar mui flete a constituio enzimtica de diferentes espcies. Os prin
tos outros substratos alm dos j descritos, e os produtos finais cipais produtos de fermentao, relacionados no Quadro 6.1,
podem ser muito mais diversificados do que o sugerido at o formam a base de muitos testes diagnsticos.
94 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

F. Fermentao de outros substratos


co2-
1 Os carboidratos no so os nicos substratos passveis de fer
C=O
1 mentao. O metabolismo dos aminocidos, das purinas e das
CH3 pirimidinas pode possibilitar a ocorrncia da fosforilao dos
Piruvato substratos. Assim, por exemplo, a arginina pode atuar como
fonte de energia, dando origem ao carbamoil-fosfato, que pode
ser utilizado na fosforilao do ADP em ATP. Alguns micror
NADH+H+ ganismos fermentam pares de aminocidos, utilizando um de
H les como doador de eltrons e o outro como aceptor.
1
c=o
1
CH3 Padres de respirao
Acetaldedo
co2- A respirao exige uma membrana fechada. Nas bactrias, tal
1 NADH+H+ membrana a prpria membrana celular. Os eltrons passam
CHOH
1 de um redutor qumico para um oxidante qumico atravs de
CH3 um conjunto especfico de transportadores de eltrons no in
Lactato terior da membrana, resultando no estabelecimento da fora
motriz de prtons (Fig. 6.27); o retorno dos prtons atravs
da membrana est acoplado sntese do ATP. Conforme su
gere a Figura 6.27, o redutor biolgico para a respirao fre
quentemente o NADH, enquanto o oxidante costuma ser o
' A '

ox1gen10.
FIGURA 6.23 Dois mecanismos bioqumicos pelos quais o piruva
to pode oxidar o nicotinamida adenina dinucleotdeo hidreto (NADH). Existe uma enorme diversidade microbiana no que concer
A esquerda: formao direta do lactato, resultando em produo efeti ne s fontes de redutores utilizados para a gerao do NADH,
va de cido lctico a partir da glicose. A direita: formao dos produtos sendo muitos microrganismos capazes de utilizar aceptores
neutros dixido de carbono e etanol. de eltrons diferentes do oxignio. Os substratos orgnicos de

A co2-
1
co2- co2- C=O
1 1 1
HCOH H20 C=O CH3
1 1
HOCH
1 ) )
CH2
1
Piruvato

HCOH HCOH
1 1 CHO
HCOH HCOH 1
1 2 1 2 HCOH
CH2OPO3 - CH2OPO3 - 1 2
CH2OPO3 -
6-Fosfogliconato 2-Ceto-3-desoxi- Gliceraldedo
6-fosfogliconato 3-fosfato

B o
CH20H 11 2
1 p,1
CH3COPO3 -
C=O
1
HOCH
1
HCOH CHO
1 1
2 HCOH
CH2OPO3 -
1 2
CH20P03 -
Xilulose 5-fosfato Gliceraldedo
3-fosfato

FIGURA 6.24 Reaes associadas a vias especficas de fermentao dos carboidratos. (A) Reaes de desidratase e aldolase utilizadas na via de
Entner-Doudoroff. (8) A reao da fosfocetolase, encontrada em diversas vias de fermentao dos carboidratos, que gera o cido anidrido acetilfos
fato misto, o qual pode ser utilizado para a fosforilao de substrato da adenosina difosfato (ADP).
CAPTULO 6 Metabolismo microbiano 95

Glicose Glicose
ATP ATP

ADP ADP
Glicose 6-fosfato Glicose 6-fosfato
NAD+ NAD+
(Ver Figs. 6.5
e 6-6)
NADH+H+ NADH+H+
6-Fosfogliconato

H20 (Ver Fig. 6.7) NADH+H+


Pentose 5-fosfato
(Ver Fig. 6.238)

Piruvato Triose fosfato o Triase fosfato


11 2
NADH+H+ NAD+ CH3COPO3 - NAD+

Acetil fosfato
NADH+H+ NADH+H+
NADH+H+
Lactato ADP ADP
(Ver Fig. 6.7) (Ver Fig. 6. 7)
ATP ATP
NADH+H+

ADP ADP

ATP ATP
Piruvato Piruvato
NADH+H+ NADH+H+

Lactato Lactato
FIGURA 6.25 A via de Entner-Doudoroff. ADP, adenosina difosfato; FIGURA 6.26 Fermentao heterolctica da glicose. ADP, adenosi
ATP, adenosina trifosfato. na difosfato; ATP, adenosina trifosfato.

crescimento so convertidos em metablitos focais, que podem conhecida como capacidade de respirao anaerbia, consti
reduzir o NAD+ a NADH mediante a derivao de hexose-mo tui uma caracterstica microbiana disseminada. Os aceptores
nofosfato (Fig. 6.7) ou o ciclo do cido tricarboxlico (Fig. 6.11). apropriados de eltrons consistem em nitrato, sulfato e di
Outros redutores podem ser gerados durante a degradao de xido de carbono. O metabolismo respiratrio dependente de
alguns substratos de crescimento, como, por exemplo, os ci dixido de carbono como aceptor de eltrons uma proprie
dos graxos (Fig. 6.10). dade encontrada entre os representantes de um grande grupo
Algumas bactrias, denominadas quimiolitotrficas, so microbiano, as arqueobactrias. Por exemplo, os representan
capazes de utilizar redutores inorgnicos para a respirao. Es tes desse grupo tm a capacidade de reduzir o dixido de car
sas fontes de energia consistem em hidrognio, ferro ferroso, bono a acetato como mecanismo para a produo de energia
bem como vrias formas reduzidas de enxofre e nitrognio. O metablica.
ATP derivado da respirao e o NADPH gerado a partir dos
redutores podem ser utilizados para impulsionar o ciclo de
Calvin (Fig. 6.13).
Fotossntese bacteriana
Podem ser utilizados compostos e outros ons, alm do Os organismos fotossintticos utilizam a energia lumino
02, como oxidantes terminais na respirao. Essa capacidade, sa para separar cargas eletrnicas, a fim de criar redutores
96 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

QUADRO 6.1 Fermentaes microbianas baseadas na via de Embden-Meyerhof


Fermentao Organismos Produtos

Etanol Alguns fungos (particularmente algumas leveduras) Etanol, C02

Lactato (homofermentao) Streptococcus Lactato (contando com pelo menos 90% das fontes de
Algumas espcies Lactobacillus energia do carbono)

Lactato (heterofermentao) Enterobacter, Aeromonas, Bacillus polymyxa Etanol, acetona, 2,3-butileno glicol, C02, lactato,
acetato, formato (total de cidos = 21 mol)

Propio nato Clostridium propionicum, Propionibacterium, Propionato, acetato, succinato, C02


Corynebacterium diphtheriae
Algumas espcies Neisseria, Veillonella,
Micromonospora

cidos mistos Escherichia, Salmonella, Shigella, Proteus Lactato, acetato, formato, succinato, H2, C02, etanol
(total de cidos = 159 mol)

Butanol-butirato Butyribacterium, Zymosarcina maxima Butanol, butirato, acetona, isopropanol, acetato,


Algumas espcies Clostridium etanol, H2, C02

Por 100 mol de glicose fermentada.

e oxidantes associados membrana como resultado de um energia metablica, e o carbono para o crescimento provm
evento fotoqumico. A transferncia de eltrons do redutor de compostos orgnicos (fotoeterotrficos) ou de uma com
para o oxidante cria uma fora motriz de prtons. Muitas binao de redutor inorgnico (p. ex., tiossulfato) e dixido
bactrias utilizam um mecanismo fotossinttico totalmente de carbono (fotolitotrficos). Essas bactrias possuem um
independente do oxignio. A luz utilizada como fonte de nico fotossistema que, apesar de suficiente para fornecer a
energia necessria sntese do ATP e a gerao de gradien
tes inicos transmembrana essenciais, no permite a redu
o altamente exergnica do NADP+ custa de gua. Esse
Membrana processo, essencial fotossntese que envolve o oxignio,
- NADH + H+ baseia-se na energia aditiva proveniente do acoplamento de
2H dois eventos fotoqumicos diferentes, impulsionados por dois
sistemas fotoqumicos independentes. Entre os procariotos,
essa caracterstica s encontrada nas cianobactrias (bac
trias azul-esverdeadas). Entre os organismos eucariticos,
Meio compartilhada por algas e plantas cujo cloroplasto constitui a
exterior organela essencial que fornece energia.
Citoplasma

REGULAO DAS VIAS METABLICAS


--_..k\ 2H+ 0 Em seu ambiente normal, as clulas microbianas geralmente re

2e- -- ('2H 20 + 2H' gulam suas vias metablicas de modo que no haja a formao
,
excessiva de qualquer intermedirio. Cada reao metablica
I
I regulada no apenas com relao a todas as outras reaes na
1 2 ADP + p1.
1 clula, mas tambm com relao s concentraes de nutrien
1
\ tes existentes no ambiente. Por conseguinte, quando uma fon
\
' te esporadicamente disponvel de carbono se torna de repente
'
'
ATP
...
...
abundante, as enzimas necessrias ao seu catabolismo aumen
..
..
..
..
tam tanto em quantidade quanto em atividade; em contrapar
tida, quando uma subunidade (p. ex., um aminocido) torna-se
subitamente abundante, as enzimas necessrias sua biossntese
diminuem tanto em quantidade quanto em atividade.
FIGURA 6.27 O acoplamento do transporte de eltrons na respira
A regulao da atividade e da sntese das enzimas propor
o para a gerao de adenosina trifosfato (ATP). Os movimentos de
prtons e eltrons indicados so mediados por transportadores (flavo ciona tanto um controle aprimorado quanto um controle
protena, quinona, citocromos) associados membrana. O fluxo de pr grosseiro das vias metablicas. Assim, por exemplo, a inibio
tons atravs de seu gradiente eletroqumico, via ATPase da membrana, da atividade enzimtica pelo produto final de uma via constitui
fornece a energia para a gerao de ATP a partir de adenosina difosfato um mecanismo de controle aprimorado, visto que o fluxo de
(ADP) e fosfato inorgnico (P1). Analisar explicao no texto. carbono atravs dessa via regulado instantaneamente e com
CAPTULO 6 Metabolismo microbiano 97

preciso. No entanto, a inibio da sntese das enzimas pelo Em geral, as protenas alostricas so oligomricas. Em al
mesmo produto final constitui um mecanismo de controle guns casos, as subunidades so idnticas, e cada uma delas pos
grosseiro. As molculas preexistentes de enzima continuam a sui tanto um local cataltico quanto um efetor; em outros casos,
funcionar at que sejam diludas em consequncia do cresci as subunidades so diferentes, e um tipo tem apenas um local
mento adicional, embora a sntese desnecessria de protena cataltico, enquanto o outro exibe somente um local efetor.
cesse imediatamente.
Os mecanismos pelos quais a clula regula a atividade enzi
mtica so discutidos na prxima seo. A regulao da sntese B. Inibio por retroalimentao (Feedback)
das enzimas discutida no Captulo 7. O mecanismo geral que evoluiu nos microrganismos para re
gular o fluxo de carbono atravs das vias de biossntese mais
eficaz do que se possa imaginar. Em cada caso, o produto final
Regulao da atividade enzimtica inibe alostericamente a atividade da primeira - e apenas dela
A. Enzimas como protenas alostricas - enzima da via. Por exemplo, a primeira etapa na biossntese
da isoleucina que no envolva qualquer outra via consiste na
Em muitos casos, a atividade de uma enzima que catalisa uma converso da L-treonina em cido a-cetobutrico, catalisada
etapa inicial de uma via metablica inibida pelo produto final pela treonina-desaminase, inibida alostericamente e de mo
dessa via. Entretanto, a referida inibio no pode depender da do especfico pela L-isoleucina e por nenhum outro composto
competio pelo local de ligao do substrato da enzima, visto (Fig. 6.28); as outras quatro enzimas da via no so afetadas
que as estruturas do produto final e do intermedirio inicial (embora sua sntese seja reprimida).
(substrato) em geral so muito diferentes. Na verdade, a inibi
o depende do fato de que as enzimas reguladas so alostri
C. Ativao alostrica
cas: cada enzima possui no apenas um local cataltico, que se
liga ao substrato, mas tambm um ou mais locais que se ligam Em alguns casos, vantajoso para a clula que o produto fi
a pequenas molculas reguladoras, ou efetores. A ligao de nal, ou um intermedirio, possa ativar determinada enzima
um efetor ao seu local provoca uma alterao na configurao em vez de inibi-la. No processo de degradao da glicose por
da enzima, de modo que a afinidade do local cataltico pelo E. coli, por exemplo, a produo excessiva dos intermedirios
substrato diminui (inibio alostrica) ou aumenta (ativao G6PD e fosfoenolpiruvato assinala o desvio de alguma glicose
alostrica). para a via de sntese do glicognio; esse processo efetuado

L-Treonina

L-Treonina
-----------------------------------------------------
desaminase \
1
1
1
a-Ceto a-Aceto-a a,p-Di-hidroxi a-Ceto-p
L-lsoleucina
butirato hidroxibutirato p-metilvalerato metilvalerato

a-Aceto a,p-Di-hidroxi a-Ceto


Piruvato L-Valina
lactato isovalerato isovalerato

t
t
t
FIGURA 6.28 Inibio por retroalimentao da L-treonina-desaminase pela L-isoleucina (linha tracejada). As vias de biossntese da isoleucina e da
vali na so mediadas por um conjunto comum de quatro enzimas, como representado na figura.
98 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Glicose
!

Glicose 6-fosfato Glicose 1-fosfato ---.. ADP - Glicose



! !
1
1
1
Frutose 6-fosfato 1 Glicognio
1

, - - ------ ! - - - - - ADP
1
1
1
1

-- - - - - - - - - - - - - - - - -
I
Frutose 1 ,6-difosfato ....
'

'
-

3-Fosfoglicerato
!

'- - - - Fosfoenol-piruvato - - - - - - - - - - - - - - - - - - - .. '


T

AMP - - - - -
e
! e _ _ _ _ _ _ _ _ )

Piruvato
!

FIGURA 6.29 Regulao da utilizao da glicose por uma combinao de ativao alostrica (e) e inibio alostrica (). AMP, adenosina
monofosfato; ATP, adenosina trifosfato (Reproduzida, com autorizao, de Stanier RY, Adelberg EA, lngraham JL: The Microbial World, 4th ed.
Prentice-Hall, 1976.)

pela ativao alostrica da enzima que converte a glicose- 1- RESUMO DO CAPTULO


fosfato em ADP-glicose (Fig. 6.29).
Metabolismo consiste em dois componentes, o catabolismo
e o anabolismo. O catabolismo compreende processos de
D. Cooperatividade
clivagem de diferentes compostos, produzindo energia que
Muitas enzimas oligomricas, por exibirem mais de um local usada para sntese de ATP. O anabolismo (ou biossnte
de ligao de substrato, apresentam interaes cooperativas de se), consiste em processos que usam a energia estocada na
molculas de substrato. A ligao do substrato por um local molcula de ATP para sintetizar as subunidades das macro
cataltico aumenta a afmidade dos outros locais por molculas molculas que formam as clulas.
adicionais de substrato. O efeito final dessa interao consiste A origem biossinttica das subunidades pode ser rastreada
em aumento exponencial da atividade cataltica em resposta a at os precursores denominados metablitos focais.
um aumento aritmtico na concentrao do substrato. A biossntese do peptidoglicano somente encontrada em
bactrias. Alguns antibiticos destroem seletivamente bact
rias, inibindo diferentes etapas da sntese dessa estrutura.
E. Modificao covalente das enzimas As vias Embden-Meyerhof, Entner-Doudoroff e do hete
As propriedades reguladoras de algumas enzimas so alte rolactato so trs vias usadas para o catabolismo da glicose
radas mediante a modificao covalente da protena. Assim, em bactrias. O padro dos produtos finais, uma caracters
por exemplo, a resposta da glutamina-sintetase a efetores tica usada na identificao bacteriana.
metablicos alterada por adenilao, a fixao covalente Na ausncia de respirao ou fotossntese, bactrias so in
do ADP a uma cadeia lateral de tirosil especfica no interior teiramente dependentes da fosforilao de substrato para
de cada subunidade enzimtica. As enzimas que controlam obteno de energia.
a adenilao tambm so controladas por modificao co A assimilao redutiva do nitrognio molecular (ou fixao
valente. A atividade de outras enzimas alterada pela sua do nitrognio) necessria para a manuteno da vida em
fosforilao. nosso planeta. um processo intensivo de energia realiza
do por uma variedade de bactrias e pelas cianobactrias,
usando um complexo enzimtico nitrogenase.
F. lnativao das enzimas A regulao da atividade enzimtica possibilita tanto um
A atividade de algumas enzimas eliminada por sua hidrlise. controle especfico quanto geral das vias metablicas, de
Esse processo pode ser regulado e, s vezes, sinalizado por mo modo que no haja o acmulo de nenhum metablito in
dificao covalente da enzima destinada a ser removida. termedirio em excesso.
CAPTULO 6 Metabolismo microbiano 99

QUESTES DE REVISO 8. A regulao da atividade enzimtica resulta no controle das vias


metablicas. Qual dos seguintes mecanismos regulatrios for
1. Qual dos seguintes componentes da clula tem sua sntese de nece um controle da via biossinttica?
pendente de um molde (template)? (A) Represso catablica
(A) Lipopolissacardeo (B) Induo
(B) Peptidoglicano (C) Inibio por feedback (retroalimentao)
(C) Polissacardeo capsular (D) Atenuao
(E) Nenhuma das respostas anteriores
(D) Acido desoxirribonucleico
(E) Fosfolipdeo 9. A origem biossinttica das subunidades das macromolculas e
coenzimas pode ser rastreada pelos poucos precursores denomi
2. Qual dos seguintes componentes da clula tem sua sntese total
nados metablitos focais. Qual das molculas um metablito
mente determinada pela especificidade enzimtica?
focal?
(A) DNA
(A) a-cetoglutarato
(B) RNA ribossmico
(B) Oxaloacetato
(C) Flagelos
(C) Fosfoenolpiruvato
(D) Lipopolissacardeo
(D) Glicose 6-fosfato
(E) Protena
(E) Todas as alternativas acima
3. As principais etapas da sntese do peptidoglicano ocorrem no ci
10. Qual das seguintes alternativas NO um componente do pep
toplasma, na membrana citoplasmtica e no espao extracelular.
tidoglicano?
Que antibitico inibe a etapa extracelular na biossntese do pep
(A) Acido N-acetil-murmico
tidoglicano?
(B) N-acetil-glicosamina
(A) Ciclosserina (C) Lipdeo A
(B) Rifampicina (D) Pentaglicina
(C) Penicilina (E) Acido diaminopimlico
(D) Bacitracina
(E) Estreptomicina
Respostas
4. Os aminocidos so encontrados nas protenas, no peptidogli
1. D 4. B 7. D 10. c
cano e na cpsula das bactrias. Qual dos seguintes aminocidos
encontrado somente no peptidoglicano? 2. D 5. c 8. c
(A) L-Lisina
3. c 6. E 9. E
(B) Acido diaminopimlico
(C) D-Glutamato
(D) L-Alanina
(E) Nenhuma das opes anteriores REFERNCIAS
5. A capacidade de empregar outros compostos e ons alm do oxi Atlas RM,Bartha R: Microbial Ecology: Fundamentais and Applica
gnio como oxidante terminal na respirao disseminada no tions, 4th ed. Benjamin Cummings, 1998.
trato microbiano. Esta capacidade chamada: Downs DM: Understanding microbial metabolism. Annu Rev Micro
(A) Fotossntese biol 2006;60:533.
(B) Fermentao Fuchs G: Alternative pathways of carbon dioxide fixation: Insights
(C) Respirao anaerbia into the early evolution oflife? Annu Rev Microbiol 2011;65:631.
Gibson J, Harwood CS: Metabolic diversity in aromatic compound uti
(D) Fosforilao de substrato
lization by anaerobic microbes. Annu Rev Microbiol 2002;56:345.
(E) Fixao de nitrognio
Hillen W, Stlke: Regulation of carbon catabolism in Bacillus species.
6. A rota primria da assimilao do carbono usado pelos orga Annu Rev Microbiol 2000;54:849.
nismos que usam o co2 como nica fonte de carbono : Hurst CJ et al. (editors): Manual ofEnvironmental Microbiology, 2nd
(A) Via hexose monofosfato ed. ASM Press, 2002.
(B) Via Entner-Doudoroff Ishihama A: Functional modulation of Escherichia coli RNA polyme
(C) Via Embden-Meyerhof rase. Annu Rev Microbiol 2000;54:499.
(D) Ciclo Glioxilato Leigh JA, Dodsworth JA: Nitrogen regulation in bacteria and archaea.
(E) Ciclo de Calvin Annu Rev Microbiol 2007;61:349.
Moat AG, Foster JW: Microbial Physiology, 4th ed. Wiley-Liss, 2002.
7. A biossntese do peptidoglicano de particular importncia na Neidhardt FC et al. (editors): Escherichia coli and Salmonella. Cellular
medicina, uma vez que serve de base para o uso de antibiticos and Molecular Biology, vols 1 and 2, 2nd ed. ASM Press, 1996.
que atuam seletivamente. Todos os seguintes antibiticos inibem Peters JW, Fisher K, Dean DR: Nitrogenase structure and function.
alguma etapa da sntese do peptidoglicano EXCETO: Annu Rev Microbiol 1995;49:335.
(A) Cicloserina Roberts IS: The biochemistry and genetics of capsular polysaccharide
(B) Vancomicina production in bacteria. Annu Rev Microbiol 1996;50:285.
(C) Bacitracina Russell JB, Cook GM: Energetics ofbacterial growth: Balance of ana
(D) Estreptomicina bolic and catabolic reactions. Microbiol Rev 1995;59:48.
(E) Penicilina Schaechter M, Ingraham JL, Neidhardt FC: Microbe. ASM Press, 2006.
C A P T U L O

Gentica microbiana

A cincia da gentica define e analisa a hereditariedade, na somente em procariotos, mas tambm em eucariotos. Esta
grande variedade de funes estruturais e fisiolgicas que tecnologia responsvel pelos enormes avanos no campo da
constituem as propriedades dos organismos. A unidade da medicina nos dias atuais.
hereditariedade o gene, um segmento do cido desoxirribo
nucleico (DNA) que codifica, em sua sequncia de nucleot
deos, a informao sobre determinada propriedade fisiolgica. ORGANIZAO DOS GENES
A abordagem tradicional da gentica tem sido identificar os
genes com base na sua contribuio para o fentipo, isto , as
A estrutura do DNA e a do RNA
propriedades estruturais e fisiolgicas coletivas de um organis
mo. Uma propriedade fenotpica, seja ela a cor dos olhos ou a A informao gentica em bactrias armazenada em forma de
resistncia a antibiticos em uma bactria, geralmente obser uma sequncia de bases no DNA (Fig. 7.2). Em bacterifagos
vada no nvel do organismo. A base qumica para a variao e em vrus, a informao gentica pode ser armazenada como
no fentipo consiste em alterao do gentipo, ou alterao sequncias de bases no cido ribonucleico (RNA) (Cap. 29).
na sequncia de DNA dentro de um gene ou na organizao A maioria das molculas de DNA constituda por duas fitas
dos genes. entrelaadas com bases complementares (A-T; G-C), pareadas
O DNA como o elemento fundamental da hereditarieda por pontes de hidrognio voltadas para o centro da molcula
de foi sugerido na dcada de 1930 a partir de um experimento (Fig. 7.3). A orientao das duas fitas do DNA antiparale
seminal, realizado por Frederick Griffith. Nesse experimento la: uma fita quimicamente orientada na direo 5' 3', e
(Fig. 7.1), a inoculao de Streptococcus pneumoniae tipo sua fita complementar orientada na direo 3' 5'. A com
111-S virulento (que possui uma cpsula) mortos, em camun plementaridade das bases permite que uma fita (fita-modelo)
dongos junto com pneumococos vivos mas no virulentos do fornea a informao necessria cpia ou expresso da infor
tipo 11-R (sem cpsula) resultou em uma infeco letal, da mao na outra fita (a fita de codificao). Os pares de bases
qual foram recuperados pneumococos vivos do tipo 111-S. A esto localizados no centro da dupla hlice do DNA (Fig. 7.2)
implicao foi que alguma entidade qumica havia transfor e determinam sua informao gentica. Cada circunvoluo da
mado a cepa viva (no virulenta) no fentipo virulento. Uma hlice possui uma fenda principal e uma fenda menor. Algu
dcada mais tarde, Avery, MacLeod e McCarty descobriram mas protenas tm a capacidade de se ligar ao DNA e regular a
que o agente transformante era o DNA, dando incio for expresso gnica interagem predominantemente com a fenda
mao da biologia molecular tal como a conhecemos hoje. principal, onde os tomos das bases esto mais expostos. Cada
Pesquisas subsequentes com bactrias revelaram a presena uma das quatro bases est ligada fosfo-2'-desoxirribose para
de enzimas de restrio, protenas que clivam o DNA em formar um nucleotdeo. O esqueleto fosfodister do DNA, car
locais especficos, dando origem a fragmentos de restrio regado negativamente, fica voltado para o solvente. Em geral, o
de DNA. Os plasmdeos foram identificados como pequenos comprimento de uma molcula de DNA expresso em milha
elementos genticos portadores de genes e capazes de repli res de pares de bases ou pares de quilobases (kbp). Enquanto
cao independente em bactrias e leveduras. A introduo um pequeno vrus pode conter uma nica molcula de DNA
de um fragmento de restrio do DNA em um plasmdeo de menos de 0,5 kbp, o genoma de Escherichia coli formado
permite que esse fragmento seja amplificado muitas vezes. por > 4.000 kbp. Em ambos os casos, cada par de base separa
A amplificao de regies especficas do DNA tambm pode do do par seguinte por uma distncia de cerca de 0,34 nm, ou
ser obtida com enzimas bacterianas, utilizando-se o mtodo 3,4 x 10-7 mm, de modo que o comprimento total do cromosso
da reao em cadeia da polimerase (PCR) ou outros mto mo de E. coli de aproximadamente 1 mm. Como as dimenses
dos de amplificao do cido nucleico baseados em enzimas. globais da clula bacteriana so cerca de 1.000 vezes menores do
O DNA amplificado por essas fontes e digerido com enzimas que esse comprimento evidente que uma quantidade signifi
de restrio apropriadas pode ser inserido em plasmdeos. Os cativa de dobramentos, ou superespiral, contribui para a estru
genes podem ficar sob o controle de promotores bacteria tura fsica da molcula in vivo.
nos de alta expresso, que permitem a expresso de prote O RNA ocorre mais frequentemente em forma de fita sim
nas codificadas em nveis aumentados. A gentica bacteriana ples. A base uracila (U) substitui a timina (T) no DNA, de modo
favoreceu o desenvolvimento da engenharia gentica, no que as bases complementares que determinam a estrutura do
102 SEO 1 Fundamentos da Microbiolog ia

Experimento A
Injeo

o Camundongos ----... Camundongos

o morrem

Cepa A, viva, encapsulada

Experimento B
Injeo

o Camundongos ----... Camundongos


o sobrevivem

Cepa A, morta, encapsulada

Experimento e
Injeo

o Camundongos ----... Camundongos

o sobrevivem

Cepa B, viva, no encapsulada

Experimento D
Injeo

o +
o Camundongos > Camundongos
o
Bactrias vivas
o morrem
isoladas dos

Cepa B, morta, Cepa B, viva,


t camundongos mortos

o
encapsulada no capsulada _ Pneumococos
encapsulados

o
FIGURA 7.1 Experimento de Griffiths mostrando a evidncia do fator transformante, posteriormente identificado como o DNA. Em uma srie
de experimentos, camundongos receberam injeo de Streptococcus pneumoniae, vivos ou mortos, encapsulados ou no encapsulados, como indi
cam os experimentos A a D. O experimento-chave o D, mostrando que a bactria encapsulada morta poderia fornecer um fator que permitiria
bactria no encapsulada matar os camundongos. Alm de fornecer a chave da importncia da cpsula para a virulncia do pneumococo, o experi
mento D tambm ilustra o princpio do DNA como a base fundamental da transformao gentica. (Reproduzida, com autorizao, de McClane and
Mietzner, Microbial Pathogenesis: A Principles-Oriented Approach, Fence Creek Publishing, 1999.)

RNA so A-U e C-G. A estrutura global das molculas de RNA estendem por alguns milhares de bases. Os ribossomos bacte
de uma s fita determinada pelo pareamento entre as bases rianos contm trs tipos de RNAr, com tamanhos respectivos
dentro das fitas que formam alas, de modo que as molculas de 120, 1.540 e 2.900 bases, juntamente com diversas protenas
de RNA de uma nica fita assumem uma estrutura compacta (Fig. 7.4). As molculas correspondentes de RNAr nos ribos
capaz de expressar a informao gentica contida no DNA. somos eucariticos so um pouco maiores. A necessidade de
A funo mais geral do RNA consiste na comunicao das expresso de cada gene muda em resposta s demandas fisio
sequncias gnicas do DNA na forma de RNA mensageiro lgicas, e as necessidades de expresso gnica flexvel se refle
(RNAm) para os ribossomos. Esses processos so denomina tem na rpida renovao metablica da maioria dos RNAm.
dos transcrio e traduo. O RNAm (tambm referido como J os RNAt e os RNAr - associados funo universalmen
RNAss+) transcrito como RNA complementar para codificar te necessria de sntese proteica - tendem a ser estveis e,
a fita de DNA. Esse RNAm ento traduzido pelos ribosso juntos, so responsveis por mais de 95% do RNA total em
mos. Os ribossomos, que contm RNA ribossmico (RNAr) uma clula bacteriana. Comprovou-se que poucas molcu
e protenas, traduzem essa mensagem na estrutura primria las de RNA atuam como enzimas (ribozimas). Por exemplo,
das protenas via aminoacil-RNA de transferncia (ou RNA o RNA 23S, na subunidade ribossmica SOS (Fig. 7.4), cata
transportador) (RNAt). O tamanho das molculas de RNA lisa a formao da ponte peptdea durante a sntese proteica.
varia desde as pequenas, que contm menos de 100 bases, at Recentemente, uma nova classe de molculas de RNA, cha
os RNAm, capazes de transportar mensagens genticas que se madas RNA de interferncia (RNAi) foi descrita em plantas.
CAPTULO 7 Gentica microbiana 103

HN-H ---------- 0 CH
3' 5'
N 3
Hc,,f'7 e - e/ \\ /
T-G
A T a

g_ Js sN ---- ---- -- H - N3 s\ H
ctl
- / \ 3
4
a.

e:

......
(dR) N=cH
2 /
ij
e N
2 1 /
\
a. O
ctl (dR)
"O
e:
E Ponte de
N 0---------- H
H-N
e:
-
-.::t"
hidrognio
//
C')
H 7 \

f/51 - H ---------- Jft.


11
Q)
o
/l'f-6\3
89
Q)
.s:::. -2 2e'-ct1:1
//
ctl
-
(dR)
"C


NH H ----------0 (dR)
\ \

ctl
E .co
::::> ctl
......

FIGURA 7.3 Pareamento normal de bases no DNA. Em cima: par


"O Esqueleto de
e:
::::1 de adenina-timina (A-T). Embaixo: par de guanosina-citosina (G-C).
acar-fosfato
As pontes de hidrognio esto indicadas por linhas pontilhadas. No
cn
ctl tar que o par G-C compartilha trs pontes de hidrognio, enquanto o
"O
e: par A-T possui somente duas pontes. Consequentemente, as interaes
G-C so mais fortes do que as A-T. (dR, desoxirribose do esqueleto de
C G acar e fosfato do DNA.)

Base

R NAr
T A
23S ss 1 6S
3' 5' (2,9 kb) (0,12 kb) (1,54 kb)

FIGURA 7.2 Desenho esquemtico da estrutura do DNA segundo o


modelo de Watson-Crick, mostrando o esqueleto de acar e fosfato
helicoidal das duas fitas mantidas unidas por pontes de hidrognio en Protenas 31 (L1-L31) -
21 (S 1 S21)
tre as bases. (Redesenhada, com autorizao, de Snyder L, Champness
W: Molecular Genetics ofBacteria, Washington,DC: ASM Press, 2nd ed.
2002.)

Os RNAi so molculas de RNA de fita dupla, com 20 a 25 nu


cleotdeos, que desempenham uma variedade de papis em bio
logia. Foi demonstrado que algumas atuam como reguladores Subunidades SOS e 3os)
pela ligao com a regio terminal 5' de um RNAm, impedindo
os ribossomos de traduzir a mensagem, ou pelo pareamento de
bases diretamente com a fita de DNA prxima do promotor,
prevenindo a transcrio.

O genoma eucaritico ?OS

O genoma refere-se totalidade da informao gentica conti


da em determinado organismo. Quase todo o genoma eucari
N
FIGURA 7.4 Composio de um ribossomo que contm uma cpia
tico est contido em dois ou mais cromossomos, separados do
de cada um dos R A 165, 235 e 55, bem como muitas protenas. As
citoplasma pela membrana do ncleo. As clulas eucariticas protenas da grande subunidade SOS so designadas como L1 a L31; as
diploides contm dois homlogos (cpias evolutivas diver protenas da pequena subunidade 305 so designadas como 51 a 521.
gentes) de cada cromossomo. As mutaes ou alteraes ge (Redesenhada, com autorizao, de Snyder L, Champness W: Molecular
nticas frequentemente no podem ser detectadas nas clulas Genetics ofBacteria, Washington, DC: ASM Press, 2nd ed. 2002.)
104 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

diploides, visto que a contribuio de uma cpia gnica com QUADRO 7.1 Comparao dos tamanhos dos
pensa as alteraes na funo de sua homloga. O gene que no genomas em alguns procariotos, bacterifagos e vrus
consegue uma expresso fenotpica na presena de seu hom
logo recessivo, enquanto aquele que sobrepuja o efeito de seu Organismo Tamanho (kbp)
homlogo dominante. Os efeitos das mutaes podem ser Procariotos
mais facilmente percebidos nas clulas haploides, que contm
uma nica cpia da maioria dos genes. As leveduras (eucari Arqueas Methanococcusjannaschii 1 .660
ticas) so frequentemente investigadas, visto que podem ser Archaeoglobus fulgidus 2.180
mantidas e analisadas no estado haploide.
Eubactrias Mycoplasma genitalium 580
As clulas eucariticas contm mitocndrias e, no caso das
Mycoplasma pneumoniae 820
plantas, cloroplastos. No interior de cada uma dessas orga
Borre/ia burgdorferi 910
nelas encontra-se uma molcula circular de DNA que contm
Chlamydia trachomatis 1 .040
poucos genes cuja funo est relacionada com a organela em
Rickettsia prowazekii 1 .1 1 2
questo. Entretanto, os genes associados funo da organela
. .

encontram-se, em sua ma1or1a, nos cromossomos eucar1ot1-


. , .
Treponema pallidum 1 .140
cos. Muitas leveduras contm um elemento gentico adicional, Chlamydia pneumoniae 1 .230
um crculo de 2 m de replicao independente que contm Helicobacter pylori 1 .670
cerca de 6,3 kbp de DNA. Esses pequenos crculos de DNA, Haemophilus influenzae 1 .830
denominados plasmdeos ou epissomas, so frequentemente Francisella tularensis 1 .893
associados com a gentica de procariotos. O pequeno tamanho Coxiella burnetii 1 .995
dos plasmdeos torna-os acessveis manipulao gentica e, Neisseria meningitidis 2.180
aps sua alterao, possibilita sua introduo nas clulas. Por sorogrupo A
isso, os plasmdeos so geralmente utilizados na engenharia Neisseria meningitidis 2.270
gentica. sorogrupo B
O DNA repetitivo, que ocorre em grandes quantidades nas Bruce/la melitensisa 2. 1 1 7 + 1 .1 78
clulas eucariticas, vem sendo cada vez mais identificado nos Mycobacterium tuberculosis 4.410
procariotos. Nos genomas eucariticos, raramente est asso Escherichia coli 4.640
ciado a regies de codificao e localiza-se principalmente em Bacillus anthracis 5.227
regies extragnicas. Essas repeties de sequncia curta (SSR) Burkholderia pseudomalle1'a 4. 126 + 3. 182
ou sequncias curtas repetidas em srie (STR) ocorrem em mi
lhares de cpias dispersas por todo o genoma. A presena de Bacterifago Lambda 48
SSR e STR procariticas est bem documentada, algumas delas Vrus Ebola 19
exibindo polimorfismos de longo comprimento. Acredita-se Varola (principal) 186
que tal variabilidade seja causada por pareamento inapropria Vacnia 1 92
do das fitas de DNA, constituindo um pr-requisito impor
Citomegalovrus 229
tante para a variao de fase e adaptao bacterianas. Muitos
genes eucariticos so interrompidos por ntrons, sequncias Organismos com dois cromossomos circulares diferentes.
intermedirias de DNA ausentes no RNAm processado quan
do traduzido. Os ntrons tm sido observados em arqueobac
trias, mas, com algumas raras excees, no so encontrados membrana no separa os genes bacterianos do citoplasma, co
nas eubactrias (ver Quadro 3.3). mo ocorre nos eucariotos.
Algumas espcies bacterianas so eficientes para causar
doena em organismos superiores, pois possuem genes espe
O genoma procaritico cficos para determinantes patognicos. Tais genes esto fre
Os genes procariticos so, em sua maioria, transportados no quentemente agrupados no DNA, sendo conhecidos como
cromossomo bacteriano. Com poucas excees, os genes bac ilhas de patogenicidade. Esses segmentos de genes podem
terianos so haploides. Os dados sobre a sequncia do genoma ser bastante grandes (at 200 kbp) e codificar uma coleo de
de mais de 340 genomas microbianos demonstram que a maio genes de virulncia. As ilhas de patogenicidade ( 1) possuem
ria (> 99%) dos genomas procariticos consiste em uma nica diferentes quantidades G + C do restante do genoma; (2) esto
molcula de DNA circular contendo desde 580 kbp at mais intimamente ligadas no cromossomo a genes do tRNA; (3) so
de 5.220 kbp de DNA (Quadro 7.1). Um nmero pequeno de flanqueadas por repeties diretas; e (4) contm diversos genes
bactrias (p. ex., espcies de Brucella melitensis, Burkholderia importantes para a patognese, incluindo resistncia a antibi
pseudomallei e Vibrio cholerae) possui genomas que consistem ticos, adesinas, invasinas e exotoxinas, bem como outros genes
em duas molculas de DNA circular. Muitas bactrias contm que podem estar envolvidos na mobilizao gentica.
genes adicionais em plasmdeos, cujo tamanho varia desde v Os genes essenciais ao crescimento bacteriano (frequen
rios pares de bases a 100 kbp. temente chamados "housekeeping") esto localizados no cro
Os crculos de DNA covalentemente fechados (cromos mossomo, enquanto os plasmdeos contm genes associados a
somos bacterianos e plasmdeos), que contm a informao funes especializadas (Quadro 7.2). Muitos plasmdeos tam
gentica necessria sua prpria replicao, so denominados bm codificam sequncias genticas (p. ex. aquelas que codi
rplicons. Uma vez que os procariotos no contm ncleo, a ficam para pili sexuais) que medeiam sua transferncia de um
CAPTULO 7 Gentica microbiana 105

QUADRO 7.2 Exemplos de atividades metablicas plasmdeos so transferidos entre as clulas bacterianas. Alm
determinadas por plasmdeos disso, a insero de transpsons nesses plasm.deos um veculo
que resulta na sua disseminao em uma populao bacteriana.
Organismo Atividade

Pseudomonas spp. Degradao de cnfora, tolueno, octano O genoma virai


e cido salicl ico
Os vrus so capazes de sobreviver, mas no de crescer, na au
Bacillus a-Amilase sncia de uma clula hospedeira. A replicao do genoma virai
stearothermophi/us
depende da energia metablica e da maquinaria macromole
Alcaligenes eutrophus Utilizao de H2 como fonte de energia cular da sntese do hospedeiro. Com frequncia, essa forma de
oxidvel parasitismo gentico resulta em debilitao ou morte da clula
Captao e metabolismo de sacarose, hospedeira. Por conseguinte, a propagao bem-sucedida do
Escherichia coli
captao de citrato vrus exige ( 1) uma forma estvel que possibilite ao vrus so
breviver na ausncia de seu hospedeiro, (2) um mecanismo de
Klebsiella spp. Fixao de nitrognio
invaso de uma clula hospedeira, (3) a informao gentica
Streptococcus Utilizao de lactose, sistema galactose necessria replicao dos componentes virais no interior da
(grupo N) fosfotransferase, metabolismo de clula e (4) informaes adicionais que possam ser necessrias
citrato ao acondicionamento dos componentes virais e liberao dos
Rhodospirillum rubrum Sntese de pigmento fotossinttico vrus resultantes da clula hospedeira.
Frequentemente, so feitas distines entre vrus associa
Flavobaderium spp. Degradao de nilon dos a eucariotos e vrus associados a procariotos, sendo os
ltimos denominados bacterifagos ou fagos. Com mais de
5.000 isolados com morfologia conhecida, os fagos constituem
microrganismo para outro, bem como outros genes associados o maior dos grupos virais. Grande parte do conhecimento a
aquisio gentica ou rearranjo do DNA. Por isso, genes de respeito dos vrus - na verdade, muitos conceitos fundamen
origens evolutivas independentes podem ser assimilados por tais de biologia molecular - surgiu da pesquisa sobre os bac
plasmdeos amplamente disseminados entre as populaes terifagos.
bacterianas. A consequncia desses eventos genticos tem sido Os bacterifagos ocorrem em mais de 140 gneros bacte
observada na rpida propagao, entre populaes bacterianas, rianos e em diferentes habitats. A molcula de cido nuclei
da resistncia a antibiticos transmitida por plasmdeos aps o co dos bacterifagos circundada por um envelope proteico.
uso indiscriminado de antibiticos nos hospitais. Observa-se considervel variabilidade no cido nucleico dos
Tanspsons so elementos genticos que contm vrios ge fagos. Muitos fagos contm DNA de fita dupla, outros contm
nes, inclusive aqueles necessrios para sua migrao de um locus RNA de fita simples, e alguns possuem DNA de fita simples;
gentico para outro. Ao faz-lo, criam mutaes de insero. outros, ainda, contm RNA de fita dupla, RNA de fita simples
O envolvimento de transpsons relativamente curtos (0,75 a ou DNA de fita simples. Algumas vezes, so encontradas bases
2,0 kbp de comprimento), conhecidos como elementos de in incomuns, como a hidroximetilcitosina, no cido nucleico do
sero, produz a maioria das mutaes de insero. Esses ele fago. Os bacterifagos exibem ampla variedade de morfologias.
mentos de insero (tambm conhecidos como sequncias de Muitos fagos contm estruturas especializadas semelhantes a
insero [IS]) transportam unicamente os genes at as enzimas seringas (i. e., caudas), que se ligam a receptores sobre a super
necessrias para promover sua prpria transposio para outro fcie da clula e injetam o cido nucleico para o interior de uma
locus gentico, mas no pode replicar em seu prprio locus. Quase clula hospedeira (Fig. 7.5).
todas as bactrias possuem elementos de IS, e cada espcie abriga Os fagos podem ser distinguidos com base no seu modo
seus prprios elementos caractersticos. s vezes, podem ser en de propagao. Os fagos lticos produzem muitas cpias de
contrados elementos de IS relacionados em diferentes bactrias, si mesmos medida que matam a clula hospedeira. Entre
o que significa que em algum ponto da evoluo eles cruzaram
a barreira das espcies. Os plasmdeos tambm transportam ele
mentos de IS importantes na formao de cepas recombinantes
de alta frequncia (Hfr) (ver adiante). Os transpsons com
-- Cabea (presena
plexos contm genes para funes especializadas, como para a .
de cido nucleico) vazia
resistncia a antibiticos, e so flanqueados por sequncias de
insero. Contudo, no carreiam as informaes genticas ne
-- Bainha
cessrias para acoplar sua prpria replicao diviso celular,
-- Bainha (contrada)
sendo sua propagao dependente da sua integrao fsica a um
(expandida) - Fibras da
rplicon bacteriano. Essa associao, estimulada por enzimas,
cauda
confere aos transpsons a capacidade de se reproduzirem vrias -......._ Placa basal
vezes. Essas enzimas podem permitir que transpsons se inte
grem a um mesmo rplicon ou a um rplicon independente. A FIGURA 7.5 Ilustraes do fago T2 com e sem cido nucleico. Note
especificidade da sequncia no local da integrao geralmente que, quando o fago contm cido nucleico, toma uma forma diferente
baixa. Assim, essa insero frequentemente aleatria, porm do que quando o cido nucleico est ausente. Estes diagramas foram
h uma tendncia a regies codificadoras para RNAt. Muitos redesenhados a partir de observaes de microscopia eletrnica.
106 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

os fagos lticos mais extensamente estudados, os fagos T pa molcula do DNA enrola-se como um fio de telefone, o que
res (p. ex., T2, T4) de E. coli demonstraram necessidade de acarreta um encurtamento da molcula.) As topoisomerases
expresso precisamente cronometrada dos genes virais pa atuam cortando transitoriamente uma ou ambas as fitas do
ra coordenar os eventos associados sua formao. Os fagos DNA para relaxar o enrolamento e estender a molcula de
temperados so capazes de assumir um estado de pr-fagos DNA. Como as topoisomerases bacterianas so essenciais e
no ltico (inseridos no cromossomo bacteriano), em que a re nicas, elas so alvo dos antibiticos (p. ex., quinolonas). Pro
plicao do seu cido nucleico est ligada replicao do DNA cessos semelhantes levam replicao do DNA de plasmdeo,
da clula hospedeira. As bactrias que transportam pr-fagos exceto quanto ao fato de que, em alguns casos, a replicao
so denominadas lisognicas, visto que um sinal fisiolgico unidirecional.
pode deflagrar um ciclo ltico, resultando em morte da clula
hospedeira e liberao de inmeras cpias do fago. O fago tem
perado mais bem caracterizado o (lambda) da E. coli. Os Fago
genes que determinam a resposta ltica ou lisognica infeco Os bacterifagos exibem considervel diversidade no que con
foram identificados, e suas complexas interaes foram estu cerne natureza de seu cido nucleico, e essa diversidade se
dadas em detalhe. reflete em diferentes modos de replicao. Os fagos lticos e
Os fagos filamentosos, exemplificados pelo fago M13 da os temperados exibem estratgias de propagao fundamental
E. coli, que foi bem estudado, so excepcionais em vrios as mente diferentes. Os fagos lticos produzem muitas cpias de
pectos. Seus filamentos ou fitas contm DNA de fita simples, si mesmos em um nico surto de crescimento; os fagos tempe
formando complexo com protenas, e so expelidos de seus rados se estabelecem como pr-fagos, tornando-se parte de um
hospedeiros, que se mostram debilitados, mas que no so rplicon estabelecido (cromossomo ou plasmdeo) ou forman
mortos pela infeco do fago. A engenharia do DNA no fago do um rplicon independente.
M13 proporcionou fitas simples que constituem fontes valiosas O DNA de fita dupla de muitos fagos lticos linear, e o pri
para a anlise e a manipulao do DNA. meiro estgio de sua replicao consiste na formao de DNA
circular. Esse processo depende de extremidades coesivas, as
quais consistem em caudas de fita simples complementares de
REPLICAO DNA que sofrem hibridizao. A ligao, formao de uma li
gao fosfodister entre as regies 5' e 3' do DNA, origina o
O DNA de fita dupla sintetizado por replicao semicon
DNA fechado e circular ligado de modo covalente, que pode
servativa. medida que a dupla hlice original se abre, cada
sofrer replicao de maneira semelhante utilizada por outros
fita funciona como molde (i. e., como fonte de informao da
rplicons. A clivagem dos crculos produz DNA linear, acondi
sequncia) para a replicao do DNA. As novas fitas so sin
cionado em envelope proteicos, formando fagos-filhos.
tetizadas com suas bases em ordem complementar das fitas
O DNA de fita simples de fagos filamentosos convertido
preexistentes. Concluda a sntese, cada molcula-filha contm
em uma forma replicativa circular de fita dupla. Uma fita da for
uma fita original e uma fita recm-sintetizada.
ma replicativa utilizada como modelo em um processo cont
nuo que produz DNA de fita simples. O modelo consiste em um
DNA bacteriano crculo de rotao, e o DNA de fita simples produzido clivado e
acondicionado com uma protena para extruso extracelular.
A replicao do DNA bacteriano comea em um ponto e pros
segue em ambas as direes (i. e., replicao bidirecional). No Os fagos de RNA de fita simples esto entre as menores par
processo, as duas fitas antigas de DNA so separadas e utili tculas extracelulares que contm informao capaz de permitir
zadas como modelos para a sntese de novas fitas (replicao sua prpria replicao. Por exemplo, o RNA do fago MS2 con
semiconservativa). A estrutura em que as duas fitas so sepa tm (em menos de 4.000 nucleotdeos) trs genes que podem
radas e na qual ocorre a nova sntese denominada forqui atuar como RNAm aps infeco. Um gene codifica a protena
llia de replicao. A replicao do cromossomo bacteriano do envelope, enquanto outro codifica uma RNA-polimerase
rigorosamente controlada, e o nmero de cada cromossomo que produz uma forma replicativa de RNA de fita dupla. O RNA
(quando mais de um est presente) por clula em crescimento de fita simples, produzido a partir da forma replicativa, o cerne
varia de 1 a 4. Alguns plasmdeos bacterianos podem apresen de novas partculas infecciosas.
tar at 30 cpias em uma clula bacteriana, e as mutaes que Alguns bacterifagos temperados, exemplificados pelo fago
provocam a reduo do controle da replicao dos plasmdeos Pl da E. coli, podem se estabelecer em um estado de pr-fago
podem resultar em 10 vezes mais esse nmero. como plasmdeos. O DNA de fita dupla de outros bacterifa
A replicao do DNA bacteriano circular de fita dupla co gos temperados estabelece-se como pr-fago pela sua insero
mea no locus ori e envolve interaes com vrias protenas. no cromossomo do hospedeiro. O local de insero pode ser
Em E. coli, a replicao cromossmica termina em uma regio muito especfico, conforme exemplifica a integrao do fago
denominada ter. A origem (ori) e os locais de terminao da E. coli em um nico locus int no cromossomo bacteriano.
(ter) para replicao esto localizados em pontos opostos no A especificidade da integrao determinada pela identidade
DNA circular cromossmico. Os dois cromossomos-filhos so da sequncia de DNA compartilhada pelo locus cromossmico
separados antes da diviso celular, de modo que cada prog int e uma regio correspondente no genoma do fago. Outros
nie adquire um dos DNA-filhos. Isso feito com o auxlio da fagos temperados, como o Mu da E. coli, integram-se em qual
recombinao e das topoisomerases, enzimas que alteram o quer um de uma ampla variedade de locais cromossmicos, e
superenrolamento do DNA de fita dupla. (Em superespiral a nesse aspecto assemelham-se aos transpsons.
CAPTULO 7 Gentica microbiana 107

Os pr-fagos contm genes necessrios replicao ltica estritamente relacionado de bactrias. Outros, exemplificados
(tambm denominada replicao vegetativa), e a expresso por alguns plasmdeos de resistncia a frmacos, replicam-se
desses genes reprimida durante a manuteno do estado de em uma ampla faixa de gneros bacterianos. Em alguns casos,
pr-fago. Uma manifestao de represso que um pr-fago dois ou mais plasmdeos podem coexistir de modo estvel em
estabelecido frequentemente confere imunidade celular con uma clula, porm outros pares iro interferir na replicao
tra a infeco ltica por um fago semelhante. Uma cascata de ou na diviso. Se tais plasmdeos forem introduzidos na mes
interaes moleculares deflagra a desrepresso (liberao da ma clula, um deles ser perdido a uma taxa maior do que
represso), de modo que o pr-fago sofre replicao vegetativa, o normal quando a clula sofrer diviso. Esse fenmeno
resultando na formao de muitas partculas infecciosas. Cer denominado incompatibilidade dos plasmdeos; dois plas
tos estmulos artificiais, como a luz ultravioleta (UV), podem mdeos incapazes de coexistir de modo estvel pertencem ao
causar a desrepresso do pr-fago. A mudana entre a lisoge mesmo grupo de incompatibilidade (Inc), e dois plasmdeos
nia - propagao do genoma do fago com o hospedeiro - capazes de exibir coexistncia estvel pertencem a grupos lnc
e o crescimento do fago vegetativo custa da clula pode ser diferentes.
determinada, em parte, pelo estado fisiolgico da clula. Uma
bactria que no se encontra em fase de replicao no ir sus
tentar o crescimento vegetativo do fago, porm uma clula em
Mecanismos de recombinao
crescimento ativo contm energia e subunidades formadoras O DNA doador que no transporta a informao necessria
suficientes para sustentar a rpida replicao do fago. sua prpria replicao precisa recombinar-se com o DNA
receptor para se estabelecer em uma cepa receptora. A recom
binao pode ser homloga, uma consequncia da estreita se
TRANSFERNCIA DE DNA melhana nas sequncias do DNA doador e do DNA receptor,
ou no homloga, constituindo o resultado da recombinao
Poder-se-ia presumir que a natureza haploide do genoma bac enzimaticamente catalisada entre sequncias diferentes de
teriano limita a plasticidade do genoma de uma bactria. No DNA. A recombinao homloga quase sempre envolve uma
entanto, a ubiquidade de bactrias diversas no ambiente forne troca entre genes que compartilham uma ancestralidade co
ce um conjunto abundante de genes que contribui para a sua mum. O processo exige um conjunto de genes designados rec.
notvel diversidade gentica, atravs de mecanismos de troca A recombinao no homloga depende de enzimas codifica
de material gentico. A troca gentica bacteriana exemplifica das pelo DNA integrado, sendo mais claramente exemplificada
da pela transferncia de um fragmento relativamente pequeno pela insero do DNA em um receptor para formar uma cpia
de um genoma doador para uma clula receptora, seguida de de um transpson doador.
recombinao gentica. A recombinao gentica bacteriana O mecanismo de recombinao mediado pelos produtos
um tanto diferente da fuso dos gametas observada com euca gnicos rec recproco: a introduo de uma sequncia doa
riotos. Ela exige que esse DNA doador seja replicado no mi dora em um receptor se reflete pela transferncia da sequncia
crorganismo recombinante. A replicao pode ser obtida pela homloga do receptor no DNA do doador. As atenes cien
integrao do DNA doador no cromossomo do receptor ou tficas esto sendo cada vez mais dirigidas para o papel de
pelo estabelecimento do DNA do doador como rplicon in sempenhado pela converso de genes - a transferncia no
dependente. recproca de sequncias de DNA do doador para o do receptor
- na aquisio da diversidade gentica.
Restrio e outras limitaes na
transferncia de genes Mecanismos de transferncia de genes
As enzimas de restrio (endonucleases de restrio) proporcio A composio do DNA dos microrganismos extraordinaria
nam s bactrias um mecanismo para distinguir em seu prprio mente fluida. O DNA pode ser transferido de um organismo
DNA daquele de outras fontes biolgicas e hidrolisam (clivam) o para outro e incorporado de modo estvel no receptor, alte
DNA em locais de restrio determinados por sequncias espe rando permanentemente sua composio. Esse processo cha
cficas de DNA que variam de 4 a 13 bases. Cada cepa bacteriana mado de transferncia horizontal de genes, para difereni-lo
que possui um sistema de restrio tem a capacidade de mas da herana de genes parentais, um processo chamado herana
carar esses locais de reconhecimento no seu prprio DNA ao vertical. Trs mecanismos principais so responsveis pelo
modific-los mediante a metilao de um resduo de adenina ou movimento eficiente do DNA entre as clulas - conjugao,
citosina dos mesmos. Tais sistemas de modificao de restrio transduo e transformao.
podem ser divididos em duas grandes classes: os sistemas tipo I, A conjugao requer o contato da clula doadora com a c
em que as atividades de restrio e modificao so combinadas lula receptora para transferir apenas uma fita de DNA (Fig. 7.6).
em uma nica protena de inmeras subunidades; e os sistemas O receptor completa a estrutura do DNA de fita dupla sinte
tipo li, que consistem em endonucleases e metilases distintas. tizando a fita que complementa aquela adquirida a partir do
Uma consequncia biolgica direta da restrio pode consistir doador. Na transduo, o DNA do doador transportado em
na clivagem do DNA doador antes de ter a oportunidade de se um envelope de fago e transferido para o receptor pelo meca
estabelecer como parte de um rplicon recombinante, tornando nismo utilizado na infeco por fagos. A transformao, que
a bactria "imune" a esse DNA. se refere captao direta do DNA "nu" do doador pela clula
Alguns plasmdeos exibem limitada variedade de hospe receptora, pode ser natural ou forada. A transformao for
deiros e so capazes de se replicar unicamente em um grupo ada induzida em laboratrio, em que, aps tratamento com
108 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Doador Receptor A. Conjugao

Os plasmdeos so frequentemente transferidos por conju


gao. As funes genticas necessrias transferncia so
codificadas pelos genes tra, transportados por plasmdeos
autotransmissveis. Alguns plasmdeos autotransmissveis so
capazes de mobilizar outros plasmdeos ou pores do cromos
Formao de pares somo para a transferncia. Em alguns casos, a mobilizao
de acasalamento
obtida pelo fato de os genes tra fornecerem as funes necess
rias transferncia de um plasmdeo que, de outro modo, no
seria transmissvel (Figs. 7.7 e 7.8). Em outros casos, o plasm
deo autotransmissvel integra-se ao DNA de outro rplicon e,
como extenso de si prprio, transporta uma fita desse DNA
para uma clula receptora.
Entalhe da fita simples em
oriT e deslocamento da fita

Transferncia da fita Plasmdeo autotransmissvel


e replicao codifica funes tra que
possibilitam o contato
entre as clulas

Separao do par de Entalhe efetuado na


acasalamento oriTdo plasmdeo
mobilizvel

Doador Transconjugante
Plasmdeo mobilizvel
FIGURA 7.6 Mecanismo de transferncia do DNA durante a con transferido
jugao. A clula doadora produz um pilus, codificado pelo plasm
deo, e estabelece contato com uma clula receptora potencial que
no contm o plasmdeo. A retrao do pilus determina um estreito
contato entre as clulas, e forma-se um poro nas membranas celu
lares contguas. A formao do par de acasalamento constitui o sinal
para que o plasmdeo inicie a transferncia a partir de um entalhe
da fita simples na oriT. O entalhe feito por funes tra codificadas
pelo plasmdeo. A extremidade 5' de uma fita simples do plasmdeo Plasmdeo mobilizvel
replicado no receptor
transferida para o receptor atravs do poro. Durante a transferncia,
o plasmdeo no doador replicado, sendo a sntese do DNA iniciada
pela 3' OH do entalhe oriT. A replicao da fita simples no receptor
prossegue por um mecanismo diferente com primers de RNA. Nesse
estgio, ambas as clulas contm plasmdeos de fita dupla, e o par de
acasalamento separa-se. (Redesenhada, com autorizao, de Snyder
L, Champness W: Molecular Genetics ofBacteria, Washington, DC: ASM
Press, 2nd ed. 2002.) FIGURA 7.7 Mecanismo de mobilizao de plasmdeos. A clula
doadora transporta dois plasmdeos, um autotransmissvel, F, o qual
codifica as funes tra que promovem o contato entre as clulas e a
transferncia do plasmdeo, bem como um plasmdeo mobilizvel.
As funes mob codificadas pelo plasmdeo mobilizvel efetuam um
alta concentrao de sal e choque trmico, muitas bactrias
entalhe da fita simples em oriT na regio mob. Em seguida, ocorrem
tornam-se competentes para a captao dos plasmdeos ex a transferncia e a replicao do plasmdeo mobilizvel. O plasmdeo
tracelulares. A capacidade de forar bactrias a incorporarem autotransmissvel tambm pode ser transferido. (Redesenhada, com
plasmdeos extracelulares por transformao fundamental na autorizao, de Snyder L, Champness W: Molecular Genetics of Bacteria,
engenharia gentica. Washington, DC: ASM Press, 2nd ed., 2002.)
CAPTULO 7 Gentica microbiana 109



.
.
.
'





.
\


.


.


. . .



,
1



.

'






. .


. .

- 11

'

- ,

I
.

..

.

B -
e

FIGURA 7.8 (A)


"Clula-macho" e "clula-fmea" unidas por um pilus F (pilus sexual). (8) Pares acasalados de clulas de E. coli. As clulas Hfr so
alongadas. (C) Micrografia eletrnica de um corte fino de um par em acasalamento. As paredes celulares das bactrias acasaladas esto em ntimo
contato na rea da "ponte". (A fotografia [A] foi cortesia de Carnahan J e Brinton C. As fotografias [BJ e [CJ foram reproduzidas, com autorizao, de
Gross JD and Caro LG: DNA transfer in bacterial conjugation. J Mo/ Bo/ 1966;16:269.)

A anlise gentica da E. eoli progrediu enormemente com A integrao do DNA cromossmico em um plasmdeo
a elucidao dos fatores de fertilidade transportados por um conjugativo pode produzir um rplicon recombinante - um
plasmdeo denominado f+. Esse plasmdeo confere determina prime F (fertilidade) ou um prime R (resistncia), dependendo
das caractersticas do doador s clulas, como um pilus sexual, do plasmdeo - no qual o DNA cromossmico integrado pode
uma protena de extruso multimrica extracelular que liga as ser replicado no plasmdeo independentemente do cromosso
clulas doadoras aos microrganismos receptores que carecem mo, o que ocorre quando o plasmdeo integrado (p. ex., F)
do fator de fertilidade. Uma ponte entre as clulas possibilita flanqueado por duas cpias de um elemento de IS. As bact
que uma fita do plasmdeo f+, sintetizado pelo doador, passe rias que transportam cpias de genes, um conjunto completo
para o receptor, onde a fita complementar de DNA formada. no cromossomo e um conjunto parcial em um prime, so di
O fator de fertilidade f+ pode integrar-se em inmeros Zoei no ploides parciais ou merodiploides, e mostram-se teis para
cromossomo das clulas doadoras. O fator de fertilidade inte estudos de complementao. Com frequncia, um gene do ti
grado cria doadores de alta frequncia de recombinao (Hfr) po selvagem complementa seu homlogo mutante, e a seleo
a partir dos quais o DNA cromossmico transferido (do local do fentipo do tipo selvagem pode possibilitar a manuteno
de insero) em uma direo determinada pela orientao da de merodiploides em laboratrio. Tais cepas podem tornar
insero (Fig. 7.9). possvel a anlise das interaes entre diferentes alelos, isto ,
A taxa de transferncia cromossmica das clulas Hfr variantes genticas do mesmo gene. Com frequncia, os mero
constante, e a compilao dos resultados de muitos experimen diploides so geneticamente instveis, visto que a recombina
tos de conjugao possibilitou a preparao de um mapa gen o entre o plasmdeo e o cromossomo homlogo pode resultar
tico da E. eoZi, em que as distncias entre os Zoei so medidas em perda ou troca de alelos mutantes ou do tipo selvagem. Esse
em nmero de minutos necessrios para que ocorra a trans problema pode frequentemente ser evitado pela manuteno
ferncia na conjugao. Um mapa semelhante foi construdo de merodiploides em uma base gentica em que o gene reeA,
para a SalmoneZZa typhimurium, uma bactria coliforme (tipo necessrio recombinao entre segmentos homlogos de
E. eoZi) relacionada, onde a comparao entre os dois mapas DNA tenha sido inativado.
mostra padres relacionados de organizao gnica entre as Os genes homlogos de diferentes microrganismos podem
duas espcies bacterianas. ter divergido a ponto de impedir a recombinao homloga en
Procedimentos anlogos com outros plasmdeos possibi tre eles, mas sem alterar a capacidade de um gene complemen
litaram aos pesquisadores mapear os cromossomos circula tar a atividade ausente do outro. Por exemplo, improvvel
res de membros de gneros bacterianos distantes; assim, por que a origem gentica de uma enzima necessria biossntese
exemplo, os plasmdeos de resistncia a frmacos, denomi dos aminocidos influencie a atividade cataltica no citoplasma
nados fatores R, podem promover a transferncia cromoss de um hospedeiro biologicamente distante. Um merodiploi
mica de diferentes bactrias, como espcies de Pseudomonas. de que transporte um gene para essa enzima tambm trans
A comparao dos mapas cromossmicos de Pseudomonas portaria genes flanqueadores provenientes do microrganismo
aeruginosa e Pseudomonas putida mostra que a divergncia doador. Por conseguinte, a gentica microbiana convencional,
dessas duas espcies estreitamente relacionadas foi acom baseada na seleo de plasmdeos iniciais, pode ser utilizada
panhada de um nmero pequeno, embora significativo, de para isolar genes de microrganismos exigentes na E. eoZi ou na
rearranjos genticos. Os mapas da Pseudomonas tm pouco P. aeruginosa. A importncia dessa tecnologia reside na sua
em comum com os mapas das bactrias coliformes biologica capacidade de simplificar ou evitar os procedimentos relativa
mente distantes. mente dispendiosos exigidos pela engenharia gentica.
110 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Hfr bactria para outra. Os fagos temperados so os veculos pre


feridos para a transferncia de genes, visto que a infeco de
bactrias receptoras em condies que favorecem a lisogenia
minimiza a lise celular e, por isso, favorece a sobrevida das
cepas recombinantes. De fato, uma bactria receptora, trans
portando um pr-fago apropriado, pode formar um repressor,
O plasm deo F codifica tornando a clula imune a infeco ltica; tais clulas podem,
funes tra, incluindo pili ainda, captar o DNA bacteriano de partculas transdutoras.
Em condies que favorecem o ciclo dos fagos lticos, pos
svel preparar misturas transdutoras transportando DNA do
doador.
Em geral, o tamanho do DNA nas partculas transdutoras
no ultrapassa certa porcentagem do cromossomo bacteriano,
de modo que a cotransduo - transferncia de mais de um
Um entalhe em oriT
inicia a transferncia gene de uma vez - limita-se aos genes bacterianos ligados. Es
se processo de grande valia no mapeamento dos genes situa
dos muito prximos uns dos outros para serem colocados em
ordem pelo mtodo de transferncia por conjugao.
As ilhas de patogenicidade so frequentemente transpor
tadas por fagos. Por exemplo, dois fagos transportam ilhas de
patogenicidade responsveis pela converso de uma forma
A replicao ocorre no benigna do Vibrio cholerae na forma patognica responsvel
doador com a transferncia
de uma fita pela clera epidmica (ver Cap. 17). Esses fagos codificam ge
nes para a toxina do clera (responsvel pelos sintomas) e dos
pili bfp (Bunble forming pili) formadores de tufos responsveis
pela aderncia.
A velocidade com que os fagos se combinam e se replicam
fez com que eles se tornassem objeto central para o estudo
O fragmento transferido desses processos, tendo surgido muitas generalizaes acerca
sofre recombinao dos mecanismos subjacentes a partir da gentica dos fagos. A
no receptor
capacidade dos fagos de efetuar rpidas rplicas de seu DNA
torna-os valiosos para a engenharia gentica. De especial va
lor so os fagos recombinantes elaborados por engenharia
que contm inseres de DNA de outras fontes biolgicas. O
DNA inserido pode ser replicado com a velocidade que carac
Hfr teriza o DNA do fago e recuperado em uma forma til para
manipulao.
FIGURA 7.9 Transferncia do DNAcromossmico por um plasmdeo
integrado. A formao de pares acasalados, o entalhamento ou corte
da sequncia oriT de F e a transferncia da extremidade 5' de uma fita C. Transformao
simples de DNA do F prosseguem como na transferncia do plasmdeo
F. A transferncia de um DNA cromossmico ligado covalentemente A captao direta do DNA do doador por bactrias receptoras
tambm ocorrer enquanto o par acasalado for estvel. A transferncia depende de sua competncia para transformao. A competn
cromossmica completa raramente ocorre, de modo que a clula re cia natural dessa propriedade pouco comum entre bactrias,
ceptora permanece F- mesmo aps o acasalamento. Em geral, a trans sendo algumas dessas cepas passveis de transformao apenas
ferncia do DNA acompanhada de replicao no doador. Alm disso, na presena de fatores de competncia produzidos unicamen
pode ocorrer alguma replicao da fita simples transferida. Uma vez no
te em um ponto especfico do ciclo de crescimento. Outras
interior da clula receptora, o DNA transferido pode se recombinar com
sequncias homlogas no cromossomo receptor. (Redesenhada, com cepas sofrem transformao natural facilmente, mostrando-se
autorizao, de Snyder L, Champness W: Molecular Genetics ofBacteria ,
esses microrganismos promissores para a engenharia gentica
Washington, DC: ASM Press 2nd ed. 2002.) devido facilidade com que incorporam o DNA modificado
em seus cromossomos. Bactrias passveis de transformao e
naturalmente competentes so encontradas em diversos gne
ros, como o Bacillus subtilis, Haemophilus influenzae, Neisseria
B. Transduo
gonorrhoeae, Neisseria meningitidis e Streptococcus pneumo
A transduo a recombinao gentica mediada por fagos niae. Os fragmentos de DNA contendo genes desses micror
nas bactrias. Em termos mais simples, uma partcula trans ganismos podem ser facilmente identificados com base na sua
dutora pode ser considerada o cido nucleico bacteriano em capacidade de transformar clulas mutantes no tipo selvagem.
um envelope de fago. Mesmo uma populao de fagos lticos Tais tcnicas representam um substancial avano com relao
pode conter algumas partculas nas quais o envelope do fago aos procedimentos trabalhosos utilizados por Avery e seus co
circunda o DNA proveniente da bactria, e no do fago. Essas legas para demonstrar que o princpio de transformao do
populaes tm sido utilizadas para transferir genes de uma pneumococo era o DNA (ver Fig. 7.1).
CAPTULO 7 Gentica microbiana 111

A transformao gentica reconhecida como uma das reverso. Outras mutaes provocam a duplicao, frequen
foras principais na evoluo microbiana. A transformao temente em srie, de comprimentos comparveis de DNA.
natural um processo ativo que exige protenas especficas Em geral, essas mutaes so instveis e revertem facilmente.
produzidas pela clula receptora. Para Neisseria e espcies de Outras mutaes podem inverter sequncias longas de DNA
Haemophilus, so necessrias sequncias de DNA especficas ou transferi-las para novos Zoei. Mapas genticos comparati
(sequncias de captao) para a captao do DNA. Essas se vos de cepas bacterianas relacionadas tm mostrado que tais
quncias de captao so especficas da espcie, o que restringe rearranjos podem ser fDCados nas populaes naturais. Essas
a troca gentica a uma nica espcie. O DNA no incorporado observaes apontam para o fato de que a separao linear de
pode ser degradado e usado como fonte de nutrientes de apoio fragmentos de DNA no elimina por completo as possibilida
ao crescimento microbiano. des de interao fsica e qumica entre eles.
As bactrias so, em sua maior parte, incapazes de sofrer
transformao natural. Nesses casos, a transformao pode ser
forada mediante tratamento com cloreto de clcio e choque
Mutgenos
trmico. A transformao com plasmdeos recombinantes, A frequncia de mutao grandemente aumentada pela ex
obtidos por engenharia gentica por esse processo, constitui a posio das clulas a mutgenos. A luz ultravioleta um mut
pedra angular da biologia molecular moderna, visto que possi geno fsico que danifica o DNA pela ligao de bases timinas
bilita que o DNA de diversas fontes biolgicas seja estabelecido vizinhas formando dmeros. Erros de sequncia podem ser in
como parte de rplicons bacterianos bem caracterizados. troduzidos durante o reparo enzimtico desse dano gentico.
Os mutgenos qumicos podem atuar ao alterarem a estrutura
qumica ou a estrutura fsica do DNA. As substncias qumicas
MUTAO E REARRANJO DE GENES reativas alteram a estrutura das bases no DNA. Por exemplo,
o cido nitroso (HN02) substitui grupos hidroxila por grupos
amino. O DNA resultante apresenta atividade de modelo al
Mutaes espontneas terada durante os ciclos subsequentes de replicao. As mu
Em geral, as mutaes espontneas para determinado gene em taes por deslocamento - introduo ou remoo de um
uma situao normal (gene selvagem) geralmente ocorrem a nico par de bases do DNA - so causadas por deslizamento
uma frequncia de 10-6 a 10-s em uma populao provenien leve das fitas de DNA, favorecido por exposio aos corantes
te de uma nica bactria (dependendo da espcie bacteriana e de acridina (p. ex., laranja de acridina), que podem intercalar
das condies usadas para identificar a mutao). As mutaes se entre as bases.
consistem em substituies, delees, inseres e rearranjos Em geral, os efeitos diretos dos mutgenos qumicos ou f
de bases. As substituies de bases podem surgir em decorrn sicos constituem danos ao DNA. As mutaes resultantes so
cia do emparelhamento incorreto entre bases complementares introduzidas pelo processo de replicao e escapam das enzi
durante a replicao. Em E. coli, esse processo ocorre cerca de mas descritas anteriormente. As mutaes que modificam a
uma vez a cada 1010 vezes em que o microrganismo incorpora atividade de replicao ou reparo dessas enzimas podem tor
um nucleotdeo; trata-se de um processo notavelmente raro. A nar uma bactria mais suscetvel a mutgenos biolgicos, e so
ocorrncia de bases no pareadas minimizada por enzimas designadas como uma cepa mutadora.
associadas ao reparo de combinao imprpria, mecanismo
que essencialmente efetua a reviso de uma fita recm-sinteti
zada para assegurar que seja perfeitamente complementar ao
Reverso e supresso
seu molde. As enzimas de combinao imprpria distinguem A recuperao de uma atividade perdida em consequncia da
a fita recm-sintetizada da fita preexistente com base na me mutao, denominada reverso fenotpica, pode ou no resul
tilao da adenina nas sequncias GATC da fita preexistente. tar da restaurao da sequncia original do DNA, como seria
Quando o dano ao DNA grande, um sistema de reparo espe exigido pela reverso genotpica. Com frequncia, uma muta
cial do DNA, a resposta SOS, recupera as clulas cujo DNA foi o em um segundo locus, denominado mutao supressora,
danificado. A resposta SOS uma ps-replicao do sistema de restaura a atividade perdida. Na supresso intragnica, aps
reparo do DNA que possibilita que a replicao do DNA burle a mutao primria ter modificado a estrutura de uma enzi
as leses ou erros no DNA. ma com a consequente perda de sua atividade, a ocorrncia de
Muitas substituies de base escapam deteco no nvel uma segunda mutao em local diferente no gene da enzima
fenotpico porque no alteram significativamente a funo do restaura a estrutura necessria atividade. A supresso extra
produto gnico. Por exemplo, as mutaes de sentido errado gnica produzida por uma segunda mutao fora do gene
(missense), que resultam na substituio de um aminocido originalmente afetado.
por outro, podem no ter efeito fenotpico discernvel. As mu
taes sem sentido (nonsense) interrompem a sntese das pro
tenas e, por isso, resultam em uma protena truncada no local EXPRESSO GNICA
da mutao. Os produtos gnicos das mutaes sem sentido
em geral so inativos. A enorme separao evolutiva observada entre os genomas
Os rearranjos so o resultado de delees que removem eucariticos e procariticos ilustrada quando se comparam
grandes pores ou mesmo grupos de genes. Essas grandes seus mecanismos de expresso gnica, que compartilham so
delees envolvem recombinao entre sequncias diretamen mente um pequeno subgrupo de propriedades. Em ambos os
te repetidas (p. ex., elementos de IS) e quase nunca sofrem grupos, a informao gentica codificada no DNA, transcrita
112 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

no RNAm e traduzida nos ribossomos pelo tRNA em estrutura Os ribossomos eucariticos e procariticos diferem em
de protenas. Os cdons de nucleotdeos triplos, utilizados na muitos aspectos. Os ribossomos eucariticos so maiores,
traduo, so, em geral, compartilhados, e muitas enzimas as apresentando coeficiente de sedimentao de SOS em com
sociadas sntese das macromolculas nos dois grupos biolgi parao com o coeficiente de sedimentao de 70S dos ri
cos exibem propriedades semelhantes. O mecanismo pelo qual bossomos procariticos. As subunidades ribossmicas 40S e
a sequncia de nucleotdeos, em determinado gene, estabelece 60S dos eucariotos so maiores do que as correspondentes
a sequncia de aminocidos em uma protena muito similar subunidades ribossmicas 30S e SOS dos procariotos, e os
em eucariotos e procariotos, como se segue: ribossomos eucariticos so relativamente ricos em prote
na. Diferenas significativas so inerentes sensibilidade
1. A RNA polimerase forma uma nica fita de polirribonu
das atividades ribossmicas aos antibiticos (p. ex., tetraci
cleotdeo, denominado RNA mensageiro (RNAm), utili
clina), muitos dos quais inibem seletivamente a sntese das
zando o DNA como modelo; esse processo denomina-se
protenas no citoplasma procaritico, mas no no eucaritico
transcrio. O RNAm possui uma sequncia de nucleot
(ver Cap. 9). Entretanto, preciso lembrar que os ribosso
deos complementar a uma fita-modelo na dupla hlice de
mos mitocondriais dos eucariotos assemelham-se aos dos
DNA (lido na direo de 3-5'). Desse modo, um RNAm
procariotos.
orientado na direo 5'-3'.
2. Os aminocidos so ativados enzimaticamente e transfe
ridos para molculas adaptadoras especficas de RNA, de Regulao da expresso gnica procaritica
nominadas RNA de transferncia (RNAt). Cada molcula
Protenas especficas, produtos de genes reguladores, determi
adaptadora possui uma trade de bases (anticdon) com
nam a expresso dos genes estruturais que codificam enzimas.
plementar a uma trade de bases no RNAm e, em uma das
A transcrio do DNA em RNAm comea no promotor, a
extremidades do seu aminocido especfico. A trade de ba
sequncia de DNA que se liga RNA polimerase. O nvel de
ses no RNAm denominada cdon para esse aminocido.
expresso gnica determinado pela capacidade do promotor
3. O RNAm e o RNAt juntam-se na superfcie do ribossomo.
de se ligar polimerase, e a eficcia intrnseca dos promotores
medida que cada RNAt encontra sua trade de nucleo
difere amplamente. Outros controles da expresso gnica so
tdeos complementares no RNAm, o aminocido que ele
exercidos por protenas reguladoras que podem se ligar a re
transporta colocado em uma ligao peptdea com o ami
gies do DNA prximas aos promotores.
nocido da molcula de RNAt anterior (vizinho). A enzima
Muitos genes estruturais procariticos, que codificam uma
peptidiltransferase (na verdade, o RNA 23S, i. e., uma ribo
srie de reaes metablicas relacionadas, so agrupados em
zima) catalisa a formao da ligao peptdea. O ribossomo
perons. Essas sries contguas de genes so expressas em for
move-se ao longo do RNAm, com crescimento sequencial
ma de um nico RNAm transcrito, e a expresso da transcrio
do polipeptdeo at que toda a molcula de RNAm tenha si
pode ser regida por um nico gene regulador. Por exemplo,
do traduzida em uma sequncia correspondente de amino
cinco genes associados biossntese do triptofano esto agru
cidos. Esse processo, denominado traduo, apresentado
pados no peron trp da E. coli. A expresso gnica regida por
em forma de diagrama na Figura 7.10.
atenuao, conforme descrita adiante, e tambm controlada
Em procariotos, genes associados a funes relacionadas por represso. A ligao do aminocido triptofano por uma
esto normalmente agrupados em perons. Uma vez que protena repressora fornece a este uma configurao que pos
no h ncleo, a transcrio e a traduo so acopladas, o que sibilita sua fixao ao operador trp, uma curta sequncia de
significa que o RNAm produzido liga-se a um ribossomo e DNA que ajuda a regular a expresso gnica. A ligao da pro
traduzido ao mesmo tempo em que transcrito. Esse sistema tena repressora ao operador impede a transcrio dos genes
acoplado de transcrio e traduo possibilita uma resposta trp, uma vez que a bactria percebe com essa ligao que j
rpida a mudanas no ambiente. Da mesma forma, o RNAm existe triptofano suficiente para seu metabolismo normal. A
rapidamente revertido, passando a ter uma meia-vida da or represso pode ser encarada como um mecanismo de contro
dem de segundos a minutos. le em curso, um enfoque tipo tudo-ou-nada para a regulao
Em eucariotos, esse tipo de agrupamento entre genes re gnica. Essa forma de controle independe da atenuao, um
lacionados incomum. As sequncias ativadoras so regies mecanismo de sintonia fina que tambm utilizado para de
de DNA eucaritico que aumentam a transcrio, podendo es terminar a expresso dos genes trp.
tar localizadas a certa distncia do gene transcrito. Os genes A atenuao um mecanismo regulador de algumas ro
eucariticos transportam ntrons, inseres de DNA que no tas de biossntese (p. ex., a via biossinttica do triptofano)
so encontradas nos genes procariticos. Os ntrons separam que controlam a eficincia da transcrio depois que ela ti
os xons, isto , as regies de codificao dos genes eucari ver se iniciado mas antes que a sntese do RNAm dos genes
ticos. Os ntrons transcritos so removidos das transcries do peron ocorra, especialmente quando o produto final da
eucariticas durante o processamento do RNA por uma srie via esteja estocado em pequena quantidade. Por exemplo,
de reaes enzimticas que ocorrem no ncleo. O RNAm dos em condies normais de crescimento, a maior parte dos
eucariotos poliadenilado no final 3', protegendo-o das exo RNAm do trp transcritos termina antes de alcanarem os ge
nucleases e podendo, dessa forma, atravessar a membrana nu nes estruturais do peron trp. Entretanto, durante os pero
clear para o citosol, onde os ribossomos esto localizados; nesse dos de grave escassez de triptofano, o trmino prematuro
caso, a traduo desacoplada da transcrio. Devido a essa da transcrio abolido, possibilitando a expresso do pe
poliadenilao, os RNAms eucariticos possuem meia-vida ron em nveis 10 vezes mais altos do que em condies nor
da ordem de horas ou dias. mais. A explicao para este fenmeno baseia-se na sequncia
CAPTULO 7 Gentica microbiana 113

1 1
NH NH NH2
1 1 1
IAA11 1 11 I
AA1 AA2
1 1 1
C=O C=OC=O
1 1 1
o o o
Local A Local B
- - - -
\

'
' \
'
- Anticdon 2 '

'
\

'
'

1
\

' 1 ' ' 1


1 ' 1
'

'

' 1

1 1
' 1 1 1 1
L - ...1

RNAm RNAm
1 2 3 4 1 2 3 4
Cdon
1 1
NH NH2
1 1
I 1
AA1
I 1
AA1
1 1
C=O C=O
1
o NH NH
1 1

RNAt1
I I
AA2
1
>$
0/
o,.,. \\

I I
AA2
1
C=O o C=O
1 1
o OH o

- -
I \

1
I

1
\

'
- Anticdon 3 '

1
\
1
'

1
\
1

1 1 ' ' 1
1 1 1 1
1 ' ' 1
1 ' ' 1
' ' 1 1
1 ' 1 1
' 1 1
1 1 1
1 ' 1 1
L - ...1

RNAm Ili Ili Ili Ili


1 2 3 4

FIGURA 7.10 Quatro estgios no alongamento de uma cadeia polipeptdea sobre a superfcie de um ribossomo 705. Em cima, esquerda:
Molcula de RNAt transportando o anticdon complementar ao cdon 1 em uma das extremidades e AA.,. Na outra, liga-se ao local A. AA., est
ligado ao RNAt atravs do seu grupo carboxila; o nitrognio amino apresenta um grupo formil (F). Em cima, direita: Molcula de RNAt, trans
portando AA2, liga-se ao local B; seu anticdon complementar ao cdon 2. Embaixo, direita: Complexo enzimtico catalisa a transferncia
de AA., para o grupo amino de AA2, formando uma ligao peptdea. (Observe que a transferncia na direo oposta bloqueada pela formilao
prvia do grupo amino de AA1 .) Embaixo, esquerda: O ribossomo move-se para a direita, a fim de que os locais A e B fiquem agora opostos
aos cdons 2 e 3; no processo, o RNAt1 deslocado, e o RNAt2 move-se para o local A. O local B novamente est desocupado e pronto para aceitar
o RNAt3 transportando AA3 (Quando o peptdeo se encontra completo e liberado, o grupo formil removido enzimaticamente.) (Redesenha
da e reproduzida, com autorizao, de Stanier RY, Doudoroff M, Adelberg EA: The Microbial Wor/d, 3rd ed. Copyright 1970. Prentice-Hall, lnc.,
Englewood Cliffs, NJ.)

regulatria de 162 pb, situada frente dos genes estruturais estrutura secundria do RNAm para sentir a quantidade de
trp (Fig. 7.11), conhecidos como sequncia-lder ou trpL. A triptofano na clula (como RNAt-trp), conforme o modelo
sequncia-lder trp pode ser transcrita no RNAm e traduzida mostrado na Figura 7 . 1 1 .
subsequentemente em um polipeptdeo de 14 aminocidos A preveno da transcrio por uma protena repressora
com dois resduos de triptofano adjacentes, uma ocorrncia denominada controle negativo. A forma oposta de regulao
muito rara. No final do trpL e posterior aos sinais regulatrios da transcrio - a iniciao da transcrio em resposta liga
que controlam a traduo dos genes estruturais trp, encontra o de uma protena ativadora - chama-se controle positivo.
se um terminador Rho-independente. A sequncia do DNA Ambas as formas de controle so exercidas sobre a expresso
dessa regio sugere que o RNAm codificado tem alta proba do peron lac, genes associados fermentao da lactose na
bilidade de formar estruturas secundrias em forma de ala, E. coli. O peron contm trs genes estruturais. O transporte
nomeadas ala de pausa ( 1 :2), ala de terminao (3:4) e ala de lactose para o interior da clula mediado pelo produto do
de antiterminao (2:3). A atenuao do peron trp usa a gene lacY. A -galactosidase, a enzima que hidrolisa a lactose
114 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Terminador Rho-independente

p
P1 o RBS trpL RBS trpE

AUG AUG

RNA DNA
polimerase

Passo 1

AUG

Passo 2
1 2

AUG

Passo 3 2

UGGUGG

Passo 4
1
3 4
UGGUGG

Passo alternativo 4

4
2 3

UGGUGG

Passo alternativo 5
4
2 3 RBS trpE

UGGUGG

FIGURA 7.11 Predies do modelo de atenuao. (Passo 7) A transcrio/traduo ocorre como para qualquer gene bacteriano. (Passo 2) A RNA
polimerase para, e ocorre a formao de uma ala na posio 1:2. (Passo 3) Interrupo do ribossomo na ala 1:2 e encontro de dois cdons trp.
(Passo 4) Se existe triptofano em quantidade suficiente, os RNAt-trp correspondentes sero apresentados, e os ribossomos iro traduzir trpl. Isso
levar a uma parada da RNA polimerase no terminador Rho-independente, composto por uma ala em 3:4. (Passo alternativo 4) Se o triptofano
limitante (ausncia de RNAt-trp), o ribossomo para em dois cdons trp, enquanto a RNA polimerase continua. Forma-se uma ala na posio 2:3.
(Passo alternativo 5) O terminador 3:4 pode no se formar, e a RNA polimerase continua a transcrio dos genes estruturais trp. Isso expe o local
de ligao do ribossomo (RBS) acima de trpE, possibilitando a traduo. (Reproduzida, com autorizao, de Trun N, Trempy J: Fundamental Bacterial
Genetics. Blackwell Science Ltd., 2004.)

em galactose e glicose, codificada pelo gene lacZ. O produto lactose no influi na regulao transcricional; em vez disso, es
do terceiro gene (lacA) uma transacetilase, cuja funo fisio sa funo exercida pela alolactose, o indutor do peron lac,
lgica ainda no foi claramente elucidada. uma vez que o metablito que evoca mais diretamente a ex
Como subproduto de sua funo normal, a -galactosidase presso gnica. Na ausncia de alolactose, o repressor lac, um
produz alolactose, um ismero estrutural da lactose. A prpria produto do gene lacl controlado independentemente, exerce
CAPTULO 7 Gentica microbiana 115

controle negativo sobre a transcrio do peron lac ao ligar-se replicao do cido nucleico viral. Alm disso, certas prote
ao operador lac. Na presena do indutor, o repressor liberado nas que desempenham funes teis, como a insulina, podem
do operador, e ocorre a transcrio. ser preparadas em grandes quantidades a partir de bactrias
A expresso do peron lac e de muitos outros perons as que expressam genes clonados.
sociados gerao de energia intensificada pela ligao da
protena de ligao do AMP cclico (CAP, na sigla em ingls) Preparao de fragmentos de DNA
a uma sequncia especfica do DNA situada prximo ao pro
motor do peron regulado. A protena exerce controle positivo
com enzimas de restrio
pelo aumento da atividade da RNA polimerase. O metabli A diversidade gentica das bactrias reflete-se na sua extensa
to que desencadeia o controle positivo pela ligao CAP variedade de enzimas de restrio disponveis, que exibem
o 3',5'-AMP cclico (AMPc). Esse composto, formado em c considervel seletividade, que possibilita o reconhecimento
lulas privadas de energia, atua atravs da CAP para aumentar de regies especficas do DNA para clivagem. As sequncias
a expresso das enzimas catablicas que produzem energia de DNA reconhecidas pelas enzimas de restrio so predo
metablica. minantemente palindrmicas (repeties de sequncias in
O AMP cclico no o nico na sua capacidade de exercer vertidas). Uma sequncia palindrmica tpica, reconhecida
controle sobre os genes no ligados na E. coli. Vrios genes di pela enzima de restrio frequentemente utilizada EcoRl,
ferentes respondem ao nucleotdeo ppGpp (em que "p" deno GAATTC; a repetio invertida, inerente complementari
ta fosfodister, e "G", guanina) como um sinal de escassez de dade dos pares de bases G-C e A-T, resulta na sequncia 5'
aminocidos, e os genes no ligados so expressos como parte TTC, refletida como AAG na fita 3'.
da resposta SOS ao dano ao DNA. Outro conjunto de genes O comprimento dos fragmentos de DNA produzidos por
no ligados tambm atua na resposta ao choque trmico. enzimas de restrio varia enormemente, devido individuali
dade das sequncias de DNA. O comprimento mdio do frag
mento de DNA determinado, em grande parte, pelo nmero
ENGENHARIA GENTICA de bases especficas reconhecidas por uma enzima. As enzimas
de restrio reconhecem, em sua maioria, 4, 6 ou 8 sequncias
A engenharia a aplicao da cincia s necessidades sociais. de bases; entretanto, outras enzimas de restrio reconhecem
Nas ltimas quatro dcadas, a engenharia baseada na gentica 10, 11, 12 ou 15 sequncias de bases. O reconhecimento de
bacteriana transformou a biologia. possvel isolar e ampli quatro bases produz fragmentos com comprimento mdio de
ficar fragmentos especficos de DNA, e seus genes podem ser 250 pares de bases (pb) e, por conseguinte, geralmente til
expressos em altos nveis. A especificidade de nucleotdeos ne para a anlise ou manipulao de fragmentos de genes. Genes
cessria clivagem por enzimas de restrio possibilita a liga completos so frequentemente abrangidos por enzimas de res
o (ou incorporao) de fragmentos que contenham genes ou trio que reconhecem 6 bases e produzem fragmentos com
partes de genes em plasmdeos ("vetores"), que podem, por sua tamanho mdio de cerca de 4 kbp. As enzimas de restrio que
vez, ser usados para transformar clulas bacterianas. As col reconhecem 8 bases produzem fragmentos com tamanho tpi
nias bacterianas, ou clones que transportam genes especficos, co de 64 kbp e mostraram-se teis para a anlise de grandes re
podem ser identificadas por hibridizao do DNA ou do RNA gies genticas. As enzimas de restrio que reconhecem mais
com sondas marcadas (semelhante ao que se v na Fig. 3.4). de 1 O bases so teis construo de um mapa fsico e tipagem
Ou ento, os produtos proteicos codificados pelos genes po molecular por eletroforese em gel em campo pulsado (Pulsed
dem ser reconhecidos pela atividade enzimtica ou por meio Field Gel Electrophoresis - PFGE).
de tcnicas imunolgicas. Estes ltimos procedimentos tm si
do facilitados pela notvel seletividade com que os anticorpos Separao fsica de fragmentos de DNA
monoclonais (Cap. 8) se ligam a determinantes antignicos
especficos nas protenas. Assim, as tcnicas de engenharia ge
de diferentes tamanhos
ntica podem ser utilizadas para isolar praticamente qualquer Grande parte da simplicidade subjacente s tcnicas de enge
gene, e muitos deles podem ser expressos como uma proprie nharia gentica reside no fato de que a eletroforese em gel pos
dade reconhecvel bioquimicamente, que pode ser estudada ou sibilita a separao de fragmentos de DNA de acordo com seu
explorada. tamanho (Fig. 7.12): quanto menor o fragmento, mais rpida a
Os genes isolados podem ser utilizados para uma varie velocidade de sua migrao. A velocidade global de migrao e
dade de propsitos. A mutagnese stio-dirigida para o local a faixa de tamanho tima para separao so determinadas pela
pode identificar e alterar a sequncia do DNA de um gene. natureza qumica do gel e pela quantidade de ligaes cruzadas.
Em seguida, resduos de nucleotdeos essenciais funo do Os gis com grande quantidade de ligaes cruzadas otimizam
gene podem ser determinados e, se for desejvel, alterados. Pe a separao de pequenos fragmentos de DNA. O corante bro
las tcnicas de hibridizao, o DNA pode ser utilizado como meto de etdio forma um complexo fluorescente brilhante ao
sonda para reconhecer os cidos nucleicos correspondentes ligar-se ao DNA, possibilitando que pequenas quantidades de
sequncia complementar de seu prprio DNA. Por exemplo, fragmentos separados de DNA possam ser visualizadas nos
um vrus latente em um tecido animal pode ser detectado com gis (Fig. 7.12A). Fragmentos especficos de DNA podem ser
uma sonda de DNA, mesmo na ausncia de uma infeco vi reconhecidos pelo uso de sondas contendo sequncias comple
ral evidente. Os produtos proteicos de genes virais isolados mentares (Figs. 7.12B e C).
mostram-se muito promissores para uso como vacinas, vis A eletroforese em gel em campo pulsado possibilita a
to que podem ser preparados sem os genes que codificam a separao de fragmentos de DNA contendo at 100 kbp que
116 SEO 1 Fu nda mentos da Microbiologia

A. Fragmentos de restrio C. Hibridizao dos fragmentos de restrio


Tamanho do Enzimas Tamanho do Enzimas
fragmento fragmento
(kbp) E E/H E/S E/H/S (kbp) E E/H E/S E/H/S
4 4

3 3

2 2

1 1

0,5 0,5

B. Stios de restrio
Comprimento (kbp) 1 2 3 4

---
1 l ----.-
1----.1
Stio
enzimtico
E
-----....

H
- ---r-
------ --.---

S \ E
Sonda

FIGURA 7.12 (A). Separao de fragmentos de DNA, com base no seu tamanho, por eletroforese em gel. Os fragmentos menores migram mais
rapidamente que os fragmentos grandes, e, dentro de uma faixa determinada pelas propriedades do gel, a distncia de migrao aproximada
mente proporcional ao logaritmo do tamanho do fragmento. Os fragmentos de DNA podem ser visualizados com base na sua fluorescncia aps
colorao. (8) O tamanho dos fragmentos de restrio determinado pelo espao onde ficam os locais de restrio no DNA. Neste exemplo, um
fragmento de 4,0 quilobases de pares (kbp), formado pela enzima de restrio fcoR1 (E), contm stios para as enzimas de restrio Hindlll (H) e
Sall (S), em posies que correspondem a 1,0 e 3,5 kbp. O modelo eletrofortico em A revela que a enzima de restrio E no corta o fragmento de
4,0 kbp (primeira coluna); a clivagem com a enzima de restrio H produz fragmentos de 3,0 a 1,0 kbp (segunda coluna); a clivagem com a enzima
de restrio S produz fragmentos de 3,5 a 0,5 kbp (terceira coluna); a clivagem com H e S forma fragmentos de 2,5 1,0 e 0,5 kbp (quarta coluna).
O fragmento de 0,5 kbp, situado entre os locais S e E, foi selecionado como sonda para determinar o DNA com sequncias de hibridizao (con
forme ilustrado em C). (C) Identificao de fragmentos hibridizados. Os fragmentos de restrio foram separados como em A. O procedimento de
hibridizao revela os fragmentos que hibridizaram com a sonda de 0,5 kbp e inclui o fragmento de 4,0 kbp, formado pela enzima de restrio E, o
fragmento de 3,0 kbp situado entre os locais E e H, bem como o fragmento de 0,5 kbp, situado entre os locais S e H.

so separados em gis de poliacrilamida de alta resoluo. A extremidades assegura que eles no sero ligados para formar
caracterizao desses fragmentos grandes possibilitou a cons o plasmdeo circular original. A ligao na presena de outros
truo de um mapa fsico para os cromossomos a partir de fragmentos de DNA contendo grupos fosfato livres produz
vrias espcies bacterianas e tem sido inestimvel na tipa plasmdeos recombinantes, que contm fragmentos de DNA
gem de isolados bacterianos associados a surtos de doenas como inseres no DNA circular fechado por ligaes covalen
infecciosas. tes. Os plasmdeos devem encontrar-se na forma circular para
sofrer replicao em um hospedeiro bacteriano.
Os plasmdeos recombinantes podem ser introduzidos
Clonagem dos fragmentos de restrio
em um hospedeiro bacteriano, frequentemente a E. coli, por
do DNA transformao. Alternativamente, a eletroporao um pro
Muitas enzimas de restrio clivam assimetricamente o DNA, cesso desenvolvido para a introduo do DNA em bactrias,
produzindo fragmentos com extremidades coesivas (aderen com o uso de um gradiente eltrico. As clulas transformadas
tes) que podem hibridizar entre si. Esse DNA pode ser utiliza podem ser selecionadas com base em um ou mais fatores de
do como doador com receptores de plasmdeos para formar resistncia a frmacos codificados por genes do plasmdeo. A
plasmdeos recombinantes geneticamente modificados. Por populao bacteriana resultante contm uma biblioteca de
exemplo, a clivagem do DNA com EcoRl produz DNA conten plasmdeos recombinantes contendo vrios fragmentos de res
do a sequncia final 5' AATT e sequncia final 3' complemen trio inseridos clonados, derivados do DNA doador. Tcnicas
tar TTAA (Fig. 7.13). A clivagem de um plasmdeo (poro de hibridizao podem ser utilizadas para identificar colnias
circular de DNA) com a mesma enzima de restrio produz bacterianas contendo fragmentos especficos de DNA, ou, se
um fragmento linear com extremidades coesivas idnticas en o plasmdeo expressa o gene inserido, as colnias podem ser
tre si. A remoo enzimtica dos grupos fosfato livres dessas verificadas quanto ao produto gnico (Fig. 7.14).
CAPTULO 7 Gentica microbiana 117

Vetor receptor
ampR

DNA doador EcoR1


EcoR1 EcoR1 Stio de restrio
Stio de restrio Stio de restrio
------GAArrc=-----
5' --- GAATTC ---- GAATTC --- 3' ------- CTTAAG -----
3' --- CTTAAG CTTAAG --
5'
RESTRIO

RESTRIO

5' --- G p AATTC -- 3'

3' --- CTTAA P


.. G --- 5'
G p AATTC
+ CTTA p G
A
p AATTC G

G ---- CTTAA p Fosfatase

_.,_ p.
1

HIBR IDIZAO DAS


EXTREMIDADES
COESIVAS

------ G AATTC ------


------ CTTAA G L----

___ e
G P A
e .....
ATT-
c
-- G AAT'f _...... G
1TAA G -TTA ?
c

ATP
LIGAO

amp R

Plasmdeo recombinante (ou quim rico)

FIGURA 7.13 Formao de um plasmdeo recombinante ou quimrico a partir do DNA de doador e de um vetor receptor. O vetor, um plasmdeo
que transporta um local de restrio fcoR1, clivado pela enzima e preparado para ligao pela remoo dos grupos fosfato terminais. Essa etapa
impede a ligao das extremidades coesivas do plasmdeo na ausncia de uma insero. O DNA do doador tratado com a mesma enzima de res
trio, e formam-se crculos fechados por ligaes covalentes. Pode-se utilizar um marcador de resistncia a frmacos, indicado por ampR no plas
mdeo, para se selecionarem os plasmdeos recombinantes aps sua transformao dentro da Escherichia coli. As enzimas da bactria hospedeira
completam a ligao covalente do DNA circular e intermedeiam sua replicao.
118 SEO 1 Fu nda mentos da Microbiologia

Transferncia
0 0
o o para o filtro o o
o o o o
o o
o
o

Fixao
do DNA

Adio da sonda
- de DNA marcado -
1 t 1
1 -
- , ..,
, ,, 1
1 t
t
- , ..,


, ..,
1 1
, ..,

-
-
1 1 1
1 -
, ..,
, ..,
t 1
- , - , ..,
1 1 1
1 ,
, ,, , ,,
,

-
r
1 \
, ,, Lavagem da sonda
no ligada

Autorradiografia

FIGURA 7.14 Uso de sondas para a identificao de clones que contenham um fragmento especfico de DNA. As colnias podem ser transferidas
para um filtro e tratadas para que as clulas sofram lise e o DNA possa ser aderido ao filtro. Em seguida, o filtro pode ser tratado com uma soluo
contendo uma sonda de DNA adequadamente marcada, a qual hibridiza especificamente com os clones desejados. A autorradiografia subsequente
do filtro identifica esses clones (crculos escuros). Como alternativa, pode-se efetuar uma sondagem dos clones com anticorpos para determinar se
sintetizaram um produto proteico especfico.

CARACTERIZAO DO DNA CLONADO microrganismos e vrus. Essas comparaes podem facilitar a


identificao de regies conservadas, que podem ser especial
mente teis como sondas de hibridizao especficas na detec
Mapeamento de restrio
o dos microrganismos ou vrus em amostras clnicas.
A manipulao do DNA clonado exige o conhecimento da se Os dois mtodos geralmente empregados na determinao
quncia dos cidos nucleicos. A preparao de um mapa de da sequncia do DNA so a tcnica de Maxam-Gilbert, que se
restrio constitui a primeira etapa para se adquirir esse co baseia na suscetibilidade qumica relativa de diferentes ligaes
nhecimento. Um mapa de restrio construdo, de modo nucleotdeas, e o mtodo de Sanger (terminao didesoxi),
muito semelhante a um quebra-cabea, a partir de fragmen que interrompe o alongamento das sequncias do DNA pela
tos produzidos por digestes nicas, as quais so preparadas incorporao de didesoxinucleotdeos nas sequncias. Ambas
com enzimas de restrio individuais, e por digestes duplas, as tcnicas produzem um conjunto de oligonucleotdeos que se
obtidas com pares de enzimas de restrio. Os mapas de restri iniciam a partir de uma nica origem e acarretam a separao
o tambm constituem a etapa inicial para o sequenciamento sobre um gel de sequenciamento de fitas de DNA, diferencian
do DNA, uma vez que identificam fragmentos que fornecero do-se entre si pelo aumento de um nico nucleotdeo. O gel de
subclones (fragmentos relativamente pequenos de DNA) que sequenciamento (poliacrilamida) separa as fitas que diferem no
podem ser objeto de anlise mais rigorosa, podendo envolver seu comprimento a partir de uma a algumas centenas de nucleo
o sequenciamento do DNA. Alm disso, os mapas de restrio tdeos e revela sequncias de DNA de comprimento varivel.
fornecem informaes bsicas altamente especficas que pos Quatro colunas paralelas no mesmo gel revelam o compri
sibilitam que fragmentos de DNA, identificados em funo do mento relativo do filamento ou fitas submetidos interrupo
seu tamanho, sejam associados a funes gnicas especficas. didesoxi na adenina, na citidina, na guanidina e na timidina.
A comparao das quatro colunas contendo misturas de rea
o que diferem apenas no mtodo de interrupo da cadeia
Sequenciamento do DNA
possibilita que se determine a sequncia do DNA pelo mto
O sequenciamento do DNA exibe a estrutura dos genes, possibi do de Sanger (Fig. 7.15). A relativa simplicidade do mtodo de
litando aos pesquisadores deduzir a sequncia de aminocidos Sanger levou a seu uso mais generalizado; entretanto, a tcnica
dos produtos gnicos. Tal informao possibilita a manipula de Maxam-Gilbert amplamente utilizada, uma vez que pode
o dos genes para compreenso ou alterao de suas funes. expor regies do DNA protegidas por protenas de ligao es
Alm disso, a anlise da sequncia do DNA revela regies regu pecficas contra modificaes qumicas.
ladoras que controlam a expresso gnica e "pontos quentes" A determinao da sequncia do DNA enormemente
(hot-spots) genticos particularmente suscetveis mutao. A facilitada pela manipulao gentica do bacterifago M13 da
comparao das sequncias do DNA revela relaes evolutivas E. coli, que contm DNA de fita simples. A forma replicativa
que formam uma base para a classificao no ambgua dos do DNA do fago consiste em um crculo fechado por ligaes
CAPTULO 7 Gentica microbiana 119

fragmentos sequenciado para assegurar uma cobertura ade


Terminao em
quada do genoma, de modo que, quando forem reunidos, a
maior parte do genoma esteja representada sem que haja um
A e G T
nmero excessivo de lacunas. (Para obter isso, o genoma com
pleto coberto 5 a 8 vezes, deixando cerca de 0,1 % do DNA to
tal sem sequenciamento.) Depois que os fragmentos aleatrios
so reunidos por reas de sequncia superpostas, as lacunas
remanescentes podem ser identificadas e fechadas. Um avan
ado processamento dos dados permite a anotao dos dados
da sequncia, em que supostas regies de codificao, perons
e sequncias reguladoras so identificados. At o momento,
foram sequenciados os genomas de vrios microrganismos im
portantes. A anlise contnua dos dados das sequncias obtidas
a partir de patgenos humanos importantes, combinada com
estudos de patognese molecular, facilitar nossa compreenso
Sequncia: CACGTG
de como esses microrganismos causam doenas e, em ltima
FIGURA 7.15 Determinao de uma sequncia de DNA pelo mto
instncia, possibilitar o desenvolvimento de vacinas e melho
do de Sanger (terminadores de cadeia ou mtodo didesoxi). O alonga res estratgias teraputicas.
mento enzimtico do DNA interrompido pela incluso de anlogos
didesoxi dos trinucleotdeos correspondentes a A, C, G e T separada
mente, em misturas de reaes paralelas. Os grupos resultantes de fila MUTAGNESE STIO-DIRIGIDA
mento alongados interrompidos so separados sob um gel de sequen
ciamento, e a sequncia pode ser deduzida por observao da base A sntese qumica dos oligonucleotdeos permite aos pesquisa
correspondente a cada aumento do comprimento da cadeia. O gel de dores efetuar a introduo controlada de substituies de bases
sequenciamento lido a partir da extremidade superior; cada banda em uma sequncia de DNA. A substituio especfica pode ser
corresponde ao aumento de uma base. utilizada para explorar o efeito de uma mutao predeterminada
sobre a expresso do gene, examinar a contribuio de um ami
nocido substitudo na funo das protenas ou - com base em
covalentes do DNA de fita dupla manipulado por engenharia informaes prvias sobre resduos essenciais para funo - ina
gentica para conter um local de clonagem mltipla que per tivar um gene. Os oligonucleotdeos de fitas simples que contm
mite a integrao de fragmentos especficos de DNA previa a mutao especfica so sintetizados quimicamente e hibridiza
mente identificados por mapeamento de restrio. As bactrias dos com DNA de bacterifago de fita simples, a qual transporta
infectadas com a forma replicativa secretam fagos modificados a sequncia do tipo selvagem em forma de insero (Fig. 7.16). O
que contm, no interior de seu revestimento proteico, DNA de DNA de fita dupla parcialmente resultante convertido enzima
fita simples que inclui a sequncia inserida. Esse DNA serve de ticamente na forma replicativa de filamento duplo ou fita dupla.
molde para as reaes de alongamento. A origem do alonga Esse DNA, que contm a sequncia do tipo selvagem em uma
mento determinada por um primer (sequncia iniciadora) de das fitas e a sequncia mutante na outra, utilizado para infec
DNA, que pode ser sintetizado por mquinas altamente auto tar um hospedeiro bacteriano por transformao. A replicao
matizadas para a sntese qumica dos oligonucleotdeos. Essas resulta em segregao do DNA do tipo selvagem e mutante, e o
mquinas, que so capazes de produzir fitas de DNA contendo gene mutante de fita dupla pode ser isolado e subsequentemente
75 ou mais oligonucleotdeos em uma sequncia predetermi clonado a partir da forma replicativa do fago.
nada, so essenciais para determinar o sequenciamento e para
modidifao do DNA por mutagnese stio-dirigida.
Os oligonucleotdeos quimicamente sintetizados podem ANLISE COM DNA CLONADO: SONDAS
servir como primers para a PCR, procedimento que possibilita DE HIBRIDIZAO
a amplificao e o sequenciamento do DNA situado entre os
primers. Por isso, em muitos casos o DNA no precisa ser clo As sondas de hibridizao (Southern blotting, Fig. 3.4) so uti
nado para ser sequenciado ou ficar disponvel para engenharia lizadas rotineiramente na clonagem do DNA. A sequncia dos
gentica. aminocidos de uma protena pode ser utilizada para se dedu
O estudo da biologia foi radicalmente modificado pelo de zir a sequncia do DNA, a partir da qual uma sonda pode ser
senvolvimento da tecnologia que possibilita a determinao da construda e empregada para detectar uma colnia bacteriana
sequncia e a anlise de genomas completos, desde os de v contendo o gene clonado. O DNA complementar, ou DNAc,
rus, microrganismos procariticos unicelulares e eucariticos codificado pelo RNAm, pode ser utilizado para detectar o gene
at os de seres humanos. Isso tem sido facilitado pelo proce que codificou esse RNAm. A hibridizao do DNA em RNA por
dimento conhecido como tiro de espingarda (shotgunning), Northern blots pode fornecer informaes quantitativas sobre a
em que o DNA rompido em fragmentos aleatrios menores sntese do RNA. Sequncias especficas de DNA nos fragmen
para se criar uma "biblioteca" de fragmentos. Esses fragmentos tos de restrio separados sobre gis podem ser reveladas por
desordenados tm a sua sequncia determinada por sequencia Southern blots, mtodo que utiliza a hibridizao do DNA em
dores de DNA automticos, e so reunidos na ordem correta DNA. Tais manchas (blots) podem ser empregadas para a detec
pelo uso de um poderoso software. Um nmero suficiente de o de fragmentos de restrio superpostos. A clonagem desses
120 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

Primer com mutao


C CGTG
G\G

0c GTGc..q
Sequncia
selvagem -

Replica ._
o
Molde do motde

Transformao na
bactria hospedeira
Heterodplex replicativo

Forma replicativa mutante Forma replicativa selvagem

FIGURA 7.16 Mutagnese stio-dirigida. Um primer quimicamente sintetizado, contendo a mutao G (no quadrado), hibridizado com uma
sequncia do tipo selvagem inserida no DNA de um fago de fita simples. Reaes de polimerizao so utilizadas para formar o heterodplex de
fita dupla, transportando a mutao em uma das fitas. A introduo do heterodplex em uma bactria hospedeira, seguida de segregao, produz
cepas de derivao que transportam formas replicativas com a insero do tipo selvagem ou uma insero que adquiriu a mutao quimicamente
produzida.

fragmentos possibilita o isolamento de regies flanqueadoras de oligonucleotdeos que correspondem a uma regio especfica
DNA por uma tcnica conhecida como migrao cromossmi do DNA. As sondas maiores podem proporcionar maior exa
ca. Com o Western blot, outra tcnica de deteco utilizada com tido, visto que so menos sensveis a alteraes de uma nica
frequncia, anticorpos so usados para detectar genes clonados base no DNA-alvo. J as reaes de hibridizao ocorrem mais
pela ligao a seus produtos proteicos. rapidamente com sondas pequenas, podendo ser planejadas
As sondas podem ser utilizadas em uma ampla variedade contra regies conservadas do DNA nas quais a ocorrncia de
de procedimentos analticos. Algumas regies do DNA huma substituies de bases improvvel. A amplificao de um alvo
no exibem substancial variabilidade na distribuio dos locais por PCR, seguida da deteco do produto amplificado aps hi
de restrio. Essa variabilidade denominada polimorfismo bridizao com uma sonda, tem-se mostrado mais sensvel do
do comprimento dos fragmentos de restrio, ou RFLP, si que os mtodos de deteco direta.
gla da expresso em ingls. As sondas dos oligonucleotdeos Recentemente, ocorreram melhorias significativas nos mto
que hibridizam com fragmentos de DNA do RFLP podem ser dos de diagnstico molecular, especialmente entre os que usam
utilizadas para identificar o doador humano do DNA de uma tecnologias de amplificao dos cidos nucleicos, tais como a
pequena amostra. Por conseguinte, a tcnica mostra-se valiosa PCR. Vrios instrumentos comerciais que combinam a ampli
para a cincia forense. As aplicaes do RFLP em medicina in ficao por PCR de um alvo de DNA com a deteco dos ampli
cluem a identificao de regies genticas estreitamente ligadas cons no mesmo recipiente fechado tornaram-se disponveis. Por
a genes humanos com disfunes acopladas a doenas genti meio desta tecnologia, conhecida como PCR em tempo real, os
cas. Essa informao tem sido e continuar sendo valiosa no amplicons da reao provocada pela PCR podem ser detectados
aconselhamento gentico. em tempo real. Atualmente, o "tempo real" refere-se deteco
As sondas de DNA oferecem a promessa de tcnicas para a de amplicons aps cada ciclo de PCR. Os formatos das sondas
rpida identificao de microrganismos exigentes em amostras de deteco envolvem a deteco de fluorforos. Os resultados
clnicas, que dificilmente crescem em um laboratrio de micro so semiquantitativos e podem ser obtidos em um tempo consi
biologia. Alm disso, extenses de tal tcnica oferecem oportuni deravelmente menor do que os alcanados pelos testes conven
dade para a identificao rpida e direta de agentes patognicos cionais de PCR.
em tecidos infectados. Kits para a identificao de muitos pat
genos bacterianos e virais esto disponveis comercialmente.
A aplicao de sondas diagnsticas de DNA exige uma MANIPULAO DO DNA CLONADO
avaliao (1) das prprias sondas, (2) dos sistemas emprega
dos para deteco das sondas, (3) dos alvos (o DNA com o As tcnicas de engenharia gentica permitem a separao e a
qual as sondas hibridizam) e (4) das condies de hibridiza expresso totalmente independentes de genes associados a pa
o. As sondas podem consistir em fragmentos de restrio tgenos. As vacinas preparadas com genes manipulados por en
relativamente grandes, provenientes de DNA clonado ou de genharia gentica oferecem medidas de segurana previamente
CAPTULO 7 Gentica microbiana 121

inatingveis. Por exemplo, pode-se preparar uma vacina con diretrizes para o uso progressivo e benfico das tcnicas de en
tra uma protena do envelope viral produzida na ausncia de genharia gentica, facilitando a determinao de situaes em
quaisquer genes associados s funes de replicao do vrus; que se justifica extrema cautela.
assim, a inoculao dessa vacina no estaria associada a risco
algum de introduo de vrus funcionais. As dificuldades po
tenciais no desenvolvimento dessas vacinas decorrem da faci OBJETIVOS
lidade com que as mutaes virais podem produzir variantes
1. Descrever a estrutura bsica de um nucleotdeo, dos pares
genticas no reconhecidas pelo sistema imunolgico de defesa
de base e da estrutura linear e tridimensional da dupla fita
de um indivduo vacinado. Finalmente, hoje (e no futuro) as
do DNA.
vacinas contm uma variedade de protenas que antecipam a
2. Compreender as diferenas entre o RNA e o DNA com re
resposta gentica de patgenos.
lao a sua estrutura, complexidade e tamanhos relativos.
3. Conhecer as funes do RNA (RNAm, RNAr e RNAt) e
Cepas recombinantes no meio ambiente das ribozimas.
4. Ser capaz de detalhar as diferenas bsicas entre o cromos
Os maiores avanos cientficos tm, algumas vezes, provoca
somo procaritico e o eucaritico.
do reaes adversas do pblico, de modo que prudente con
5. Explicar os termos associados recombinao bacteriana,
siderar as possveis consequncias da engenharia gentica. A
transpsons, conjugao, transduo e transformao.
preocupao mais imediata est relacionada com patgenos 6. Descrever os mecanismos de mutao bacteriana e rear
conhecidos que sofreram modificao gentica relativamente ranjo gentico.
leve, os quais tm sido e devem ser investigados em laborat 7. Ser capaz de compreender os fundamentos pelos quais os
rios especialmente preparados para abrig-los. A necessidade genes bacterianos so transcritos, incluindo os conceitos
de conteno diminui aps a separao dos genes envolvidos de transcrio acoplada e traduo, ativador, repressor e
em funes especficas, como o envelope proteico, dos genes atenuao.
associados replicao ou toxicidade de determinado patge 8. Compreender as diferenas entre os ribossomos proca
no. Na maioria das vezes, devem ser observadas as precaues riticos e eucariticos e descrever as etapas da traduo
padronizadas associadas aos laboratrios de microbiologia, a ribossomal procaritica.
fim de criar hbitos valiosos a serem empregados quando um 9. Compreender o conceito de engenharia gentica e dis
patgeno potencial entra no laboratrio. cutir sobre as importantes ferramentas envolvidas nesse
So excees interessantes a essa regra geral os micror processo (p. ex., enzimas de restrio, ligao, clonagem e
ganismos manipulados por engenharia gentica que podem expresso).
proporcionar benefcio social se forem introduzidos no meio 10. Descrever as ferramentas envolvidas na caracterizao do
ambiente. Muitos provm de bactrias no patognicas de DNA (mapeamento de restrio, sequenciamento, muta
ocorrncia natural, com uma frequncia de at 105/g do solo. gnese, hibridizao e outros mtodos de deteco).
As evidncias disponveis sugerem que a predao e a compe 11. Ser capaz de avaliar os benefcios e os possveis aspectos
tio eliminam rapidamente as cepas bacterianas obtidas por negativos da recombinao bacteriana no ambiente.
engenharia gentica aps sua introduo no meio ambiente.
Por conseguinte, o principal desafio parece ser, em condies
ideais, a manuteno dos microrganismos biologicamente be QUESTES DE REVISO
nficos obtidos por engenharia gentica no meio ambiente em
1. As mutaes em bactrias podem ocorrer por qual dos seguintes
vez da sua eliminao. Entretanto, isto no ocorre sem uma mecanismos?
consequncia social. Entre os exemplos de microrganismos
(A) Substituio de bases
obtidos por engenharia gentica esto as cepas de Pseudomo
(B) Delees
nas que produzem uma protena que favorece a formao de (C) Inseres
cristais de gelo. O valor desses microrganismos do tipo selva (D) Rearranjos
gem apreciado por proprietrios de pistas de esqui que deli (E) Todas as alternativas anteriores
beradamente introduziram as bactrias no meio ambiente sem
suscitar qualquer preocupao do pblico. Um efeito colateral 2. A forma de troca gentica na qual o DNA doado introduzido no
prejudicial da introduo desses microrganismos que os cris receptor por um vrus bacteriano a
tais de gelo assim produzidos podem afetar safras sensveis, tais (A) Transformao
como as de alface durante estaes em que podem ocorrer gea (B) Conjugao
das. Bactrias mutantes que no formam cristais de gelo foram (C) Transfeco
elaboradas por microbiologistas que esperavam que os micror (D) Transduo
ganismos mutantes pudessem proteger as plantaes de alface, (E) Transferncia horizontal
ocupando temporariamente os nichos normalmente habitados 3. A forma de troca gentica em bactrias mais suscetveis atividade
pelas cepas formadoras de gelo; entretanto, as tentativas de uti de desoxirribonuclease durante o processo de captao do DNA a
lizar microrganismos mutantes em estudos de campo foram (A) Transformao
alvo de protestos significativos, e os estudos s foram condu (B) Conjugao
zidos aps adiamentos legais prolongados e dispendiosos. Os (C) Transfeco
precedentes legais que surgiram desses procedimentos, e mais (D) Transduo
recentemente, de aplicaes correlacionadas estabelecero (E) Todas as alternativas anteriores
122 SEO 1 Fundamentos da Microbiologia

4. Qual a replicao em que o elemento requer integrao fsica Fraser CM, Read TD, Nelson KE (editors): Microbial Genomes. Hu
com o rplicon bacteriano? mana Press, 2004.
(A) Bacterifago de DNA de fita simples Grohmann E, Muuth G, Espinosa M: Conjugative plasmid transfer in
(B) Bacterifago de DNA de fita dupla gram-positive bacteria. Microbial Mol Biol Rev 2003;67:277.
(C) Bacterifago de RNA de fita simples Hatfull GF: Bacteriophage genomics. Curr Opin Microbiol 2008; 5:447.
(D) Plasmdeo Koonin EV, Makarova KS, Aravind L: Horizontal gene transfer in
(E) Transpson prokaryotes: Quantification and classification. Annu Rev Micro
biol 2001;55:709.
5. A formao de um cruzamento durante o processo de conjuga Kornberg A, Baker T: DNA Replication, 2nd ed. Freeman, 1992.
o na Escherichia coli requer Lengler JW, Drews G, Schlegel HG (editors): Biology of the Prokaryo
(A) A lise do doador tes. Blackwell Science, 1999.
(B) Um pilus sexual Liebert CA, Hall RM, Summers AO: Transposon Tn21, fl.agship ofthe
(C) A transferncia das duas fitas do DNA floating genome. Microbial Mol Biol Rev 1999;63:507.
(D) Uma endonuclease de restrio Murray NE: Type I restriction systems: Sophisticated molecular ma
(E) A integrao de um transpson chines (a legacy of Bertani and Weigle). Microbial Mol Biol Rev
2000;64:412.
Respostas Ptashne M: A Genetic Switch: Phage Lambda and Higher Organisms,
2nd ed. Blackwell, 1992.
1. E 3. A 5. B Rawlings DE, Tietze E: Comparative biology of IncQ and IncQ-like
plasmids. Microbial Mol Biol Rev 2001;65:481.
2. D 4. E
Reischl U, Witter C, Cockerill F (editors): Rapid Cycle Real-Time
PCR-Methods and Applications. Springer, 2001.
Rhodius V, Van Dyk TK, Gross C, LaRossa RA: Impact of genomic
technologies on studies of bacterial gene expression. Annu Rev
REFERNCIAS Microbiol 2002;56:599.
Alberts B et al.: Molecular Biology of the Cell, 4th ed. Garland, 2002. Riley MA, Wertz JE: Bacteriocins: Evolution, ecology, and applica
Ausubel FM. et al.: Current Protocols in Molecular Biology. Wiley, tion. Annu Rev Microbiol 2002;56:117.
1987. Sambrook J, Russell NO: Molecular Cloning: A Laboratory Manual,
Avery O, Mcleod C, McCarty M. Studies on the chemical nature of 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory, 2001.
the substance inducing transformation of pneumococcal types: Singleton P, Sainsbury D: A Dictionary ofMicrobiology and Molecular
Induction of transformation by a desoxyribonucleic acid fraction Biology, 3rd ed. Wiley, 2002.
isolated from pneumococcus type III. J Exp Med 1944;79(2):137. Snyder L, Champness W: Molecular Genetics of Bacteria. ASM Press,
Bushman F: Lateral DNA Transfer. Mechanisms and Consequences. 1997.
Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2002. Trun N, Trempy J: Fundamental Bacterial Genetics. Blackwell Science
Charlebois RL (editor): Organization of the Prokaryotic Genome. Ltd, 2004.
American Society for Microbiology, 1999. van Belkum A, Scherer S, van Alphen L, Verbrugh H: Short-sequence
Condon C: RNA processing and degradation in Bacillus subtilis. Mi DNA repeats in prokaryotic genomes. Microbial Mol Biol Rev
crobial Mol Biol Rev 2003;67:157. 1998;62:275.
Drlica K, Riley M (editors): The Bacterial Chromosome. American So Zimmer C, Strl K, Strl J: Microbial DNA topoisomerases and their
ciety for Microbiology, 1990. inhibition by antibiotics. J Basic Microbiol 1990;30:209-224.
C A P T U L O

Imunologia

INTRODUO A primeira linha de defesa contra o patgeno invasor deno


minada resposta imune inata. Essa resposta inespecfica e ,
A difcil funo do sistema imunolgico garantir proteo. rapidamente, mobilizada para o stio inicial da infeco, porm
Ele serve como um sistema de defesa do hospedeiro contra do no produz memria imunolgica. J o segundo sistema de de
enas infecciosas e contra antgenos externos (nonselj). Para fesa denominado resposta imune adaptativa e especfica,
atingir esse objetivo, o sistema imune apresenta um mecanis podendo conferir imunidade protetora contra uma reinfeco
mo de resposta rpida e especfica, alm de uma grande adap pelo mesmo patgeno. A resposta adaptativa pode, especi
tabilidade e de uma intrincada rede regulatria e de memria ficamente, reconhecer e destruir um patgeno, uma vez que
imunolgica. os linfcitos apresentam receptores celulares especcifos para
Nas ltimas dcadas, grandes progressos foram alcanados o reconhecimento antignico, alm de produzirem anticorpos
no campo da imunologia, tendo como consequncia avanos especficos contra os antgenos. Uma protena produzida em
significativos no somente no campo da pesquisa bsica, mas resposta a um patgeno especfico denominada anticorpo, e
tambm na rea de diagnstico e clnico. Esses avanos per uma substncia que induz a produo de anticorpos deno
mitiram melhor compreenso de como o sistema imunol minada antgeno. Em resumo, a resposta imune inata efetiva
gico funciona, e sobre variedade de distrbios imunolgicos, e crtica na eliminao da maioria dos patgenos. Contudo, se
tais como doenas infecciosas, alergias, doenas autoimunes esse mecanismo inicial falhar, a resposta imune adaptativa ini
imunodeficincias, cncer e transplantes. Essas informaes cia uma resposta mais especfica e direcionada ao patgeno in
proporcionaram um melhor diagnstico, novas estratgias de vasor. Assim, ambos os sistemas interagem e colaboram entre
tratamento e melhorias na conduta clnica de pacientes com si para alcanar o objetivo final de destruir o patgeno.
esses distrbios.
Este captulo apresenta os princpios bsicos da imunolo
gia, em particular ao que se refere resposta contra infeco. IMUNIDADE INATA
Discusses mais detalhadas sobre vrios aspectos do sistema
imunolgico esto disponveis na seo de referncia. A imunidade inata uma resposta imediata contra um patge
no que no confere proteo duradora ou memria imunol
gica. um sistema de defesa inespecfico, que inclui barreiras
A resposta imune contra agentes infecciosos, tais como a pele (epitlio) e muco
Quando o sistema imunolgico defende o hospedeiro contra sas. Tambm composta por vrios componentes importantes
um determinado patgeno, ele usa diferentes mecanismos de da resposta imune adaptativa incluindo macrfagos, clulas
reconhecimento, visando de forma eficiente eliminar o patge NK (natural killer, clulas matadoras naturais), receptores
no invasor ou seus fatores de virulncia. A resposta gerada con do tipo toll (Toll-like receptors
- TLRs), citocinas e o sistema
tra um patgeno em potencial denominada resposta imune. complemento.
124 SEO li Imunologia

Barreiras fisiolgicas bacteriana ou efeito de barreira), desempenhando, assim, im


portantes funes fisiolgicas. Por exemplo, na vagina da mu
A. Pele lher adulta, o pH cido mantido por lactobacilos normais,
Poucos microrganismos so capazes de penetrar atravs da inibindo, desse modo, o estabelecimento de leveduras, anaer
pele ntegra, mas muitos podem penetrar pelas glndulas su bios e bactrias gram-negativas.
dorparas ou sebceas e pelos folculos pilosos, estabelecendo
se nesses locais. As secrees sudorparas e sebceas - em Mecanismos da imunidade inata
virtude de seu pH cido e da presena de certas substncias
qumicas (particularmente cidos graxos) - tm propriedades Embora a resposta imune inata no estabelea uma imunida
antimicrobianas que tendem a eliminar os microrganismos de direcionada e protetora, dependente do reconhecimento
patognicos. A lisozima, uma enzima que desestabiliza as pare especfico de determinado patgeno, ela fornece uma pode
des celulares de algumas bactrias, encontrada na pele e pode rosa linha de defesa. Esse sistema apresenta diferentes tipos
ajudar a proteger o hospedeiro contra esses microrganismos. celulares, como os leuccitos polimorfonucleares neutrofilicos
Tambm est presente na lgrima, bem como nas secrees (polymorphonuclear neutrophilic leukocytes [PMNs]), macr
respiratrias e cervicais. Alm disso, a pele produz uma va fagos e clulas NK, que so a primeira linha de defesa contra os
riedade de agentes antimicrobianos, incluindo a protena com microrganismos. A interao dessas clulas com os patgenos
atividade antibacteriana denominada psoriasina*. Assim, tan desencadeia a liberao de diferentes citocinas, quimiocinas
to a pele quanto esses agentes antimicrobianos fornecem uma e a ativao das protenas do sistema complementar. Muitas
barreira fisiolgica contra a entrada de patgenos. dessas citocinas pr-inflamatrias, como interleucina-1 (in
terleukin-1 [IL-1]), fator de necrose tumoral a (tumor necrosis
factor-a [TNF-a]), IL-6 e interferon-gama (IFN-y), so induzi
das via interao com molculas de TLRs, iniciando assim uma
B. Mucosas
resposta contra os patgenos invasores.
A superfcie das vias respiratrias recoberta por uma pelcula
de muco constantemente impelida para cima por clulas cilia
das em direo aos orifcios naturais. As bactrias tendem a A. Sensores microbianos
aderir a essa pelcula. Alm disso, tanto o muco quanto a lgri Quando um patgeno entra em contato com a pele con
ma contm lisozima e outras substncias dotadas de proprieda frontado com os macrfagos e outras clulas fagocticas, que
des antimicrobianas. Para alguns microrganismos, a primeira possuem "sensores microbianos". H trs principais grupos
etapa no processo infeccioso consiste na sua fixao a clulas de sensores microbianos: (1) TLRs, (2) NOD-like receptors
epiteliais superficiais atravs de protenas adesivas da superf (Nucleotide-binding oligomerization domain receptors, recep
cie bacteriana (p. ex., os pili dos gonococos e Escherichia coli). tores de domnio de oligomerizao ligador de nucleotdeo)
Se essas clulas possurem anticorpos IgA em sua superfcie - e (3) RIG-1-like helicases (retinoic acid-inducible gene I-like
um mecanismo de resistncia do hospedeiro -, a fixao do helicases, helicases do tipo RIG-1 [gene induzvel por cido
microrganismo poder ser impedida. (O microrganismo pode retinico-1]) e MDA-5 (Melanoma differentiation-associated
vencer tal mecanismo de resistncia ao degradar o anticorpo protein 5 [protena associada diferenciao do melanoma
com uma protease.) 5]). Entre esses trs grupos de sensores, os TLRs so os mais
Quando determinado microrganismo penetra no corpo estudados e conhecidos. Os TLRs so uma importante familia
atravs das mucosas, tende a ser capturado por fagcitos e de receptores de reconhecimento-padro conservados evoluti
transportado em vasos linfticos regionais para os linfonodos. vamente (Pattem Recognition Receptors [PRRs]), que reconhe
Os fagcitos atuam como barreiras contra a disseminao pos cem diferentes padres moleculares associados a patgenos
terior de grandes nmeros de bactrias. O aparelho mucociliar (pathogen-associated molecular patterns [PAMPs] ), sendo a
para a remoo de bactrias nas vias respirat