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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES


CUAUTITLN

DESEMPEO PROFESIONAL EN LABORATORIOS DE ESPECIALIDADES


INMUNOLGICAS S.A. DE C.V. COMO ANALISTA DE BIOTERIO

TRABAJO PROFESIONAL

PARA OBTENER EL TTULO DE:

MDICA VETERINARIA ZOOTECNISTA

P R E S E N T A
ITZE GUERRERO CAMPOS

ASESOR: Dr. Jos Gabriel Ruiz Cervantes

CUAUTITLN IZCALLI, EDO. MXICO 2014


Ensear es dejar una huella en las vidas para siempre..
Annimo

Por lo tanto agradezco infinitamente a todas aquellas personas que me han dejado esa huella, a
mis padres por guiarme toda mi infancia, a mis hermanas por acompaarme durante nuestras
aventuras, a mi esposo por compartir parte de nuestra vida juntos, a mis dos hermosas hijas por
ensearme tanto, dejndome crecer junto a ellas, a todos mis profesores que les respeto y
admiro, sin dejar a un lado a mis grandes amigos que siempre se encuentran junto a mi.

NDICE
1. Objetivo.... 1
2. Introduccin.. 1

Captulo 1 Generalidades
3. Antecedentes de los roedores... 3
4. Clasificacin de los bioterios conforme a sus diferentes
caractersticas............................................................................................... 4
4.1Clasificacin en base al uso del bioterio. 4
4.2 Clasificacin en base al estado microbiolgico de los animales alojados. 5
4.3 Clasificacin en base al destino de los animales de laboratorio. 6
4.4 Clasificacin en base al riesgo de los bioterios.. 6
4.5 Tipos de distribucin interna de las reas.. 6
5. Descripcin de los Laboratorios de Especialidades Inmunolgicas
(LEI)..... 7
5.1 Historia de LEI ...... 7
5.2 Visin y estrategia de LEI.. 8
5.3 reas / servicios..... 8
5.4 Ubicacin de LEI 8
5.5 Perfil de puesto como analista de bioterio..... 9
5.6 Mapas de los bioterios con sus diferentes reas..... 9
5.6.1 Bioterio de roedores..... 10
5.6.2 Bioterio de conejos.. 11
6. Principales caractersticas de las especies albergadas. 11
6.1 Ratn (Rt)... 11
6.1.1 Caractersticas de los ratones ICR... 12
6.2 Rata (Rta)... 13
6.2.1 Caractersticas de las ratas SD.... 14
6.3 Cobayo (Cb)... 15
6.3.1 Caractersticas los cobayos Hartley..... 15
6.4 Conejo (Cj). 17
6.4.1 Caractersticas del conejo NZ...... 17
7. Manejo bsico de los animales..... 19
7.1 Manejo del ratn (Rt) 19
7.2 Manejo de la rata (Rta) .. 21
7.3 Manejo del cobayo (Cb). 22
7.4 Manejo del conejo (Cj)... 22
8. Marcaje de los animales... 24
9. Mtodos de inoculacin 26
9.1 Inoculacin en ratones.... 28
9.1.1 Va subcutnea (SC)................ 28
9.1.2 Va intraperitoneal (IP)................ 29
9.1.3 Va intravenosa (IV).... 30
9.1.4 Va esofgica....... 30
9.2 Inoculacin en ratas 31
9.2.1 Va subcutnea (SC)........................ 31
9.2.2 Va intraperitoneal (IP).... 32
9.2.3 Va intravenosa (IV).... 32
9.2.4 Va intramuscular (IM).... 33
9.3 Inoculacin en cobayos . 34
9.3.1 Va intraperitoneal (IP).... 34
9.4 Inoculacin en conejos... 34
9.4.1 Va subcutnea (SC)............ 35
9.4.2 Va intravenosa (IV).... 35
10.Obtencin de fluidos....... 36
10.1 Obtencin de sangre en ratones por va caudal.... 37
10.2 Obtencin de sangre por seno orbitario....... 38
10.3 Obtencin de gnadas en ratas................. 39
10.3.1 Obtencin de ovarios..... 39
10.3.2 Obtencin de prstata y vesculas seminales.... 39
10.4 Obtencin de sangre va auricular en conejo.... 40
10.5 Puncin cardiaca... 41
11. Baja y sacrificio...... 41
11.1 Dislocacin cervical............. 41
11.2 Dixido de carbono.............. 42
11.3 Sangrado... 43
11.4 Anestsicos... 43
12. Desecho de animales.. 44

Captulo II Actividades realizadas


13. Jornada laboral... 46
14. Equipo de proteccin.. 46
15. Revisin diaria de los animales.. 47
16. Revisin de temperatura y humedad...... 47
17. Ventilacin. 48
18. Iluminacin. 48
19. Ruido...... 49
20. Agua... 49
21. Verificacin de la balanza...... 50
22. Recepcin y alojamiento de los animales.. 50
22.1 Distribucin de los animales..... 57
22.2 Periodo de adaptacin.. 58
23. Pruebas analticas... 58
23.1 Metodologas............ 59
23.1.1 Inocuidad general de productos biolgico (MPB 0680)... 59
23.1.2 Seguridad General (MGA 0795)... 60
23.1.3 Irritabilidad en piel de conejo (MGA 0515).............. 60
23.1.4 Actividad biolgica de hormonas sexuales .............. 63
23.1.5 Evaluacin de eritropoyetina........................ 65
23.1.6 Prueba de Pirgenos(MGA 0771)..... 65
24. Legislacin. 67
25. CICUAL. 68
26. Problemas de salud pblica 68
27. Evaluacin del personal...... 69
28. Anlisis comparativo de la bibliografa con el trabajo en LEI... 69
29. Recomendaciones... 72
30. Conclusiones.. 72
31. Glosario.. 74
32. Bibliografa. 77
1. OBJETIVO

Informar sobre las actividades realizadas, como parte de los servicios profesionales, en los
Laboratorios de Especialidades Inmunolgicas (LEI), bajo el cargo de analista en el rea de
Bioterio, durante el periodo de Mayo del 2010 a Mayo del 2012.

2. INTRODUCCIN

El siguiente trabajo esta realizado para obtener el grado de licenciatura en medicina


veterinaria y zootecnia, los siguientes datos son retomados de diversas fuentes de
informacin sobre el manejo de roedores, con la finalidad de analizar los productos
farmacuticos.

Cabe aclarar que parte de la referencia son los instructivos de trabajo, empleados en el
mismo, al igual que la experiencia adquirida durante mi labor dentro de dichos laboratorios,
por dos aos, periodo que comprende de mayo del 2010 a mayo del 2012, en los cuales
tuve la oportunidad de trabajar en el rea de bioterio, actividad que se describe a lo largo
del presente escrito.

Dicho trabajo habla sobre el desempeo profesional realizado en un bioterio como analista
dividido en 2 captulos; el primero se tratar sobre generalidades y el segundo sobre la
funciones realizadas en dicho laboratorio.

Iniciando con los antecedentes histricos del uso de roedores dentro de la investigacin
farmacutica, al igual que las clasificacines que comprende a un bioterio en cuanto al uso,
tipos de animales, instalaciones entre otras, tambin se dar una breve resea de LEI, el
perfil de puestos, los planos de bioterio, especificando las caractersticas de las especies
utilizadas dentro del bioterio, a partir de la descripcin de las especies, su manejo,
identificacin, inoculacin, obtencin de fluidos, su eutanasia y desecho de los mismos.

En el segundo captulo se realizar una breve descripcin de las actividades rutinarias


llevadas a cabo dentro del bioterio de LEI, como es el alojamiento de los animales, en
cuanto a la temperatura, humedad, ventilacin, ruido e iluminacin y ocasionalmente su
recepcin.

Asimismo se mencionar la asignacin de las pruebas basadas en la Farmacopea de los


Estados Unidos Mexicanos (FEUM), respecto a los Mtodos de Productos Biolgicos
(MPB), las cuales se realizan en el bioterio:

Inocuidad general de productos biolgicos


Seguridad general
Irritabilidad
Actividad biolgica de hormonas sexuales
Evaluacin de eritropoyetina
Pirgenos
1
Tambin se tratar la parte de la legislacin que regula a un bioterio y al anlisis de los
medicamentos, conformacin y funcin del Comit Interno para el Cuidado y Uso de los
Animales de Laboratorio (CICUAL) y los problemas de salud pblica que pudieran surgir.

Se realizar un anlisis de las condiciones de trabajo respecto al manejo de animales dentro


del LEI, a partir de los datos obtenidos de diversas fuentes de informacin, lo que permite
mencionar algunas recomendaciones sobre el mismo y hacer patente las condiciones
favorables con las cuales cuentan actualmente los laboratorios, que fueron resumidas de
manera breve dentro de las conclusiones.

2
CAPTULO I
GENERALIDADES
3. ANTECEDENTES DE LOS ROEDORES

En realidad, el ratn fue animal de experimentacin desde mucho antes; ya en el siglo


XVIII el descubridor del oxgeno Joseph Priestley (1733-1804) lo utiliz en sus
experiencias que dieron lugar a la clebre teora del flogisto y el qumico Lavoissier para
sus estudios sobre la respiracin. En Europa durante los siglos XVIII y XIX, en tiempos de
hambruna, las ratas fueron utilizadas como fuente de alimentacin. A principios del siglo
XIX, se ocuparon como cebo durante las peleas de perros terrier, de ah surgi la necesidad
de criar a la rata, principalmente a la albina, la cual haba sido muy til en la comprobacin
de las leyes de la herencia establecidas por Mendel en vegetales.1 Formalmente, el primer
uso del ratn como animal de experimentacin data del ao 1664, cuando Robert Hooke lo
uso para estudiar las propiedades del aire.2

Por fin en 1828 se llevaron a las ratas albinas a los laboratorios para realizar estudios
fisiolgicos, antes de 1850 ya existan criaderos de ratas albinas para estudios de fisiologa,
anatoma y nutricin. Los primeros informes provienen de Francia donde Philpeaux en
1856 las utilizaba para practicar la suprarrenalectoma; en Inglaterra Savory en 1863
determinaba el valor nutritivo de las protenas en ratas negras, pardas y blancas. 1,2

En Alemania Crampe, realiz los primeros experimentos en las cras en 1877, se crea el
primer criadero de ratas albinas, mientras que en los EEUU no se cran hasta la dcada de
los noventa, cuando el profesor suizo Adolf Meyer llev consigo una rata albina al
Instituto de Neurologa de Nueva York, al que se incorporaron, unos cuantos ejemplares
provenientes del Departamento de Zoologa de la Universidad de Ginebra y de esa colonia
fue que el investigador Donaldson (1857-1938) llamado padre de la rata de laboratorio,
adquiri cuatro parejas para el Instituto Wistar de Filadelfia, las cuales dieron origen a la
conocida estirpe que lleva el nombre de dicha institucin.1, 4

En los aos siguientes se extendi con rapidez la cra y utilizacin experimental de las ratas
tal como hoy las conocemos; fue ms adelante, en 1925, que el profesor Robert W. Dawley
(1897-1949), de Wisconsin, cra y tipifica la cepa que lleva su apellido al que antepuso el
de su esposa Sprague. 4

Todas las especies salvajes de cobayo son originarias de Amrica del Sur, se cree que los
europeos ingresaron, en el siglo XVII, varios ejemplares para venderlos como mascota
pasando finalmente a Estados Unidos2; pero ya a principios del siglo XX su gentica fue
estudiada por William .E. Castle (1905), considerado hoy como el padre de la gentica en
mamferos y S. Wright (1915), hasta que se establece la lnea Dunkin-Hatley en 1926.1
En este mismo siglo de nuevo el genetista William E. Castel en colaboracin con Lucien
Cunot, experimentaron sobre el ratn siendo el elegido sobre la herencia del color del
pelaje. Despus de la segunda guerra mundial, en los aos 1950, cuando fue necesario
evaluar el riesgo que generaba la utilizacin de la energa nuclear para el patrimonio
gentico humano, el ratn fue el animal de eleccin. Recientemente el ratn ha sido el

3
animal de experimentacin por excelencia para elucidar diversos procesos biolgicos como
la patognesis de cncer, el determinismo gentico, la biologa del desarrollo o el
funcionamiento del sistema inmune, entre otros.2

Como se puede apreciar los roedores han sido centro de investigacin desde siglos atrs,
son considerados por muchos investigadores como modelo casi perfecto por su talla
pequea, su corto tiempo generacional, su fcil mantenimiento y su gran rendimiento
reproductivo a lo largo de todo el ao; tienen varias caractersticas que consideradas en
conjunto los hacen un modelo nico para la experimentacin. 2

La rata despus del ratn, es el animal de experimentacin ms utilizado en investigaciones


biomdicas, especialmente en fisiologa, toxicologa, farmacologa, comportamiento e
inmunologa. Esto se ve apoyado por el hecho de que algunas lneas de rata de laboratorio
presentan una susceptibilidad especfica para ciertas enfermedades complejas como la
obesidad o el cncer, actualmente la rata est siendo utilizada como modelo para el
estudio de varias enfermedades genticas, como lo son la hipertensin, diabetes,
enfermedades renales, enfermedades autoinmunes y los desrdenes del comportamiento. 4

Por lo anterior, tanto los roedores como los conejos son los ms empleados en el Bioterio
de LEI, para determinar la potencia de los productos, como las repercusiones que podran
tener en el humano, todo esto con base a lo establecido por la FEUM y la Farmacopea
Europea, garantizando la salud pblica.

4. CLASIFICACIN DE LOS BIOTERIOS CONFORME A SUS DIFERENTES


CARCTERSTICAS

4.1 Clasificacin en base al uso del bioterio:

Tipo A de produccin
Reproduccin, crianza, manutencin/distribucin:
Su estructura fsica y organizacional especialmente diseada para la cra y mantenimiento
de animales de laboratorio. De ubicacin exclusiva, fuera del alcance de peligros
sanitarios.3

Tipo B de experimentacin
Investigacin cientfica, desarrollo tecnolgico e innovacin, pruebas de laboratorio y
enseanza. Destinado solamente para alojar animales durante el tiempo que dure un estudio
o una investigacin. Se debe tener en cuenta que existan instalaciones con barreras
como de los animales, con el
equipamiento necesario y los procedimientos normativos operacionales correspondientes
para dichos fines. 3

Tipo C mixto
Incluye la combinacin de los tipos A y B.3

4
4.2 Clasificacin en base al estado microbiolgico de los animales alojados

Los animales de laboratorio se clasifican de acuerdo a la presencia o ausencia de


microorganismos patgenos. Los patgenos por controlar son parsitos, virus, bacterias y
hongos.3

Animales convencionales o haloxnico


Criados bajo condiciones normales, sin precauciones especiales para impedir que
contraigan las bacterias y los virus que se encuentran comnmente presentes en el
ambiente. Estos animales tienen muchos tipos diferentes de microbios en y sobre sus
cuerpos, 20 pero se encuentran libres de enfermedades transmisibles al hombre, apropiados
para demostraciones y enseanzas.5

Animales miroxnicos
Son comparables a los animales convencionales mantenidos bajo condiciones sanitarias
estrictas y estndares. Albergan una fraccin inoculada de microorganismos no patgenos
tomados de la microbiota de un haloxnico. 3

Animales gnotobitico con microbiota definida


Animales que contienen una flora microbiana cuidadosamente definida, ninguna de las
cuales se considera patognica. Todos los tipos de microorganismos presentes en o sobre
sus cuerpos se conocen de mantera tan precisa como lo permiten el conocimiento y la
tecnologa, 20 de ser necesario se pueden contaminan intencionalmente con
microorganismos conocidos. 5

Animales libres de patgenos especficos o Specific Pathogens Free (SPF)


Son aquellos animales que se han eliminado ciertos agentes causantes de enfermedades o
patgenos. Para que tenga sentido, este trmino se debe clasificar mediante las
enfermedades o lo patgenos de los que estn libres los animales. El mismo describe slo
aquellos microorganismos que no contienen.20 Se encuentran mantenidos en zonas
protegidas (sistemas cerrados) mantenidas en estrictas normas de manejo, utilizando
barreras fsicas.5
Animales axnicos (libre de grmenes, GF)
Son animales que no albergan ninguna especie microbiana viviente detectable. Son el
resultado del uso de sistemas cerrados estriles y se encuentran libres de todo organismo
demostrable (virus, bacterias, hongos, parsitos y organismos saprfitos), exceptundolos
pocos organismos que son capaces de atravesar la placenta para llegar al tero. Se les
conoce como animales Germ Free o axnicos, derivados por histerotoma (cesrea) o
histerectoma asptica (remocin completa del tero), criados y mantenidos en un aislador
mediante tcnicas gnotobiticas. Bajo circunstancias normales, los animales adquieren su
microflora y microfauna despus del nacimiento. Los animales axnicos se mantendrn
libres de los microorganismos indeseables mientras se mantengan en un ambiente estril.20,
5

5
4.3 Clasificacin en base al destino de los animales de laboratorio:
Tipo A De venta y distribucin.
Tipo B Uso en investigacin cientfica, desarrollo tecnolgico e innovacin.
Tipo C Uso para produccin de biolgicos y su calidad.
Tipo D Uso con fines de diagnstico
Tipo E Uso de enseanza

4.4 Clasificacin en base al riesgo de los bioterios:


EL organismo, a ser utilizado en el trabajo, ser clasificado en funcin de su potencial
patgeno en cuatro clases de riesgo:

Clase 1 Organismo que no cause enfermedad al hombre o animal.6

Clase 2 Microrganismo asociado con enfermedad humana o animal, pero que no consiste
en un serio riesgo a quin lo manipula, al ambiente de trabajo y al medio ambiente.
Normalmente la forma de contaminacin se da por auto inoculacin, ingestin o exposicin
de las membranas mucosas.6

Clase 3 Microrganismo patgeno que cause enfermedad grave al hombre o la especie


animal. Puede representar serio riesgo para quien lo manipula y riesgo a la comunidad.
Existen formas de tratamiento y/o de prevencin. En la mayora de los casos, de alto
potencial de contaminacin por aerosoles.6

Clase 4 Microrganismo patgeno que ponen en riesgo la vida del hombre o de la especie
animal por inexistencia de tratamiento o prevencin. Representando gran riesgo a quin lo
manipula y teniendo gran poder de diseminacin de un individuo a otro. La transmisin se
da por aerosoles o por otra forma desconocida de transmisin.6

4.5 Tipos de distribucin interna de las reas


Segn la American Association for Laboratory Animal Science (AALAS) y la diferencia
entre ellas radica en la disposicin del acceso y salida de las salas. 3

Bioterio convencional o corredor nico: El trnsito es mediante una nica puerta, la cual
comunica hacia un corredor comn de acceso y salida.3

Bioterio con dos corredores de acceso: En donde se separan el acceso y retorno de la sala,
los cuales se efectan por corredores independientes, diseado para albergar animales de
mayor calidad. Se separan dos reas bsicas, una destinada a la preparacin del material y
el otro es el corredor de retorno destinada a la limpieza de materiales. 3

En base a lo anterior podemos determinar las caractersticas con del bioterio de LEI:

6
En cuanto al uso es de tipo B, de experimentacin, ya que los animales se encuentran
albergados solo el tiempo en que dura el anlisis, contando con barreras sanitarias y equipo
de proteccin, durante el manejo de los mismos, al llegar los roedores llegan con un
certificado de salud otorgado por la empresa que los proporciona, indicando los patgenos
de los que estn libres por lo tanto se tratan de animales tipo SPF, en cuanto al destino de
los animales es de tipo B ya que se utilizan para investigar si los frmacos son aptos para el
consumo humano.

Conforme a su riesgo se encuentra en clase 2 ya que se ha ocupado la toxina botulnica


aunque su uso es poco frecuente todos los desechos que tengan contacto con esta son
incinerados.

El bioterio cuenta con un solo pasillo para la entrada como para salida siendo su
distribucin interna de tipo convencional.

5. DESCRIPCIN DE LOS LABORATORIOS DE ESPECIALIDADES


INMUNOLGICAS (LEI)

Es un laboratorio de tercera, autorizado por la Secretaria de Salud con nmero de


autorizacin TA-76-11. La cual brinda los servicios de ciencia, tecnologa e innovacin,
llegando a la atencin de clientes nacionales e internacionales, en los ramos de la salud y
farmacutico, apoyando a la autoridad sanitaria para el control y vigilancia sanitarios, es
decir que con la autorizacin de la Comisin Federal para la Proteccin contra Riesgos
Sanitarios (COFEPRIS) se puede realizar actividades relacionadas con la salud humana,
revisar toda la documentacin necesaria para obtener un permiso de importacin,
comercializacin o registro sanitario.

5.1 Historia de LEI

1991. LEI inici operaciones realizando anlisis clnicos de alta especialidad dirigidos a
pacientes infectados de VIH.

1993-1995. LEI inicia la Divisin Farmacia y empieza a brindar el servicio de control de


calidad a la industria farmacutica humana. Se inician las lneas analticas de cultivos
celulares y propagacin viral as como la de bioterio de ratones y cobayos. Adems, se
participa en EXPOFARMA por primera vez.

2001-2004. Se cre la Divisin de Alimentos y Cosmticos para ofrecer el servicio de


Anlisis Microbiolgico a la Industria Nacional y Transnacional aplicando mtodos
oficiales y de vanguardia tecnolgica. Tambin se inicia el rea de Investigacin y
Desarrollo.

En este mismo periodo, se iniciaron operaciones en el rea de Sistemas permitiendo una


administracin y documentacin eficaz de la informacin, as como el desarrollo de
modelos de anlisis estadstico.

7
2007. Se construy e inici actividades el rea de conejos.

2008. Se inici la participacin de Transferencias de Tecnologa en las reas de control de


calidad de productos farmacuticos y biotecnolgicos.

2009 Se inaugur el rea de Biologa Molecular.

5.2 Visin y estrategia de LEI

LEI es una empresa que ofrece servicios de desarrollo analtico en las reas de farmacia,
biotecnologa, alimentos, cosmticos, anlisis clnicos y biologa molecular. La estrategia
est basada en la innovacin cientfica, gestin de la tecnologa y en ofrecer servicios y
productos altamente diferenciados.

5.3 reas / servicios

En LEI se cuenta con servicios que se brindan a diversas reas relacionadas al campo de la
salud y de las ciencias biomdicas; alimentos y cosmticos, productos farmacuticos
biolgicos y biotecnolgicos y de diagnstico clnico.

Dichas reas son:

Control de calidad, investigacin, desarrollo, transferencia de la tecnologa, validacin y


capacitacin.

5.4 Ubicacin de LEI

Av. Gran Canal sin nmero,


Mdulos para la Microindustria,
Locales 3 y 4, Col. Ampliacin
Casas Alemn.
C.P. 07580, Mxico D.F.
Tel. (55) 5753-2696
www.lei.com.mx (figura 1)

Figura 1. Ubicacin LEI

8
5.5 Perfil de puesto como analista de bioterio:

Actividades:
Mantener la gestin de la calidad.
Inspeccin de la salud de los animales.
Realizar las pruebas conforme a los manuales.
Sacrificar a los animales cuando se haya concluido la prueba de forma humanitaria
conforme a la NOM-062-ZOO-1999.
Notificar si la prueba no cumple con las especificaciones.
Elaborar informes en tiempo y forma.
Realizar registros de temperatura y humedad relativa en los cuartos y equipos.
Mantener limpias las instalaciones.
Participar en los mejoramientos de los instructivos, formatos y reas.

Conocimientos (algunos de estos fueron adquiridos, durante el trabajo):


Manejo de PC.
Nivel de ingls bsico.
Manejo de animales.
Ser analtico.
Buenas prcticas de laboratorio.

Capacidades:
Tolerante a la presin.
Trabajar en equipo.
Organizado.
Adaptabilidad.
Tomar decisiones.
Atencin a los detalles.

5.6 Mapas de los bioterios con sus diferentes reas

El bioterio en general se encuentra dividido en dos reas; la primera y en donde se realiza el


mayor nmero de pruebas llamado bioterio de roedores, donde se albergan los ratones,
ratas y cobayos; y el bioterio de conejos, donde como su nombre lo indica solo se alojan
los conejos.

Ambos bioterios cuentan con un cuarto de adaptacin o cuarentena, en el cual se albergan


los animales recin llegados, otro cuarto de animales en prueba donde se alojan los
animales que estn siendo ocupados para algn estudio.
A continuacin se muestran los mapas de los bioterios con sus diferentes reas.

9
5.6.1 Bioterio de roedores

Se reciben a los animales en el rea de recepcin, de ah se certifican si son los solicitados,


al igual que la documentacin este correcta, al ingresarlos se procede a pesarlos en el cuarto
de inoculacin y pesaje, colocndolos e identificndolos en sus respectivas cajas, al finalizar
se desinfecta el lugar de trabajo, ya sea con clidox o alcohol, de ah son llevados al rea de
adaptacin de animales.

Despus de haber cumplido con un periodo mnimo de 24 horas y al ser solicitados para
algn estudio, se prepara tanto a los animales (muesquear, pesar e identificar su caja) como
la muestra en el cuarto de preparacin de muestras, procediendo a inyectarlos en el cuarto
de inoculacin y pesaje para posteriormente llevarlos al cuarto de animales en proceso
dependiendo si son roedores o cobayos, se colocan cada uno en el cuarto indicado.
Terminada la prueba se procede a darlos de baja conforme a la NOM-062-ZOO-1999
(figura 2).

Figura 2. Se muestra la distribucin del Bioterio de roedores, donde se encuentran albergados los ratones,
ratas y cobayos.

10
5.6.2 Bioterio de conejos

De manera similar sucede en el bioterio de conejos, ya que a la llegada de los conejos se


colocaba en el cuarto de adaptacin y despus de cumplir la semana, se procede a realizar
las pruebas en el cuarto de procedimientos para despus ser colocados en el cuarto de
animales en prueba (figura 3).

Figura 3. Se muestra la distribucin del rea, donde se alojan a los conejos.

6. PRINCIPALES CARACTERSTICAS DE LAS ESPECIES ALBERGADAS

6.1 Ratn (Rt)

Los ratones son mamferos muy prolficos y econmicamente fciles de mantener; poseen
una gran diversidad gentica y son manipulables.

Taxonoma:
Clase: Mamfera
Orden: Rodentia
Familia: Muridae
Gnero: Mus
Especie: M. Musculus

11
El ratn tiene varias caractersticas que lo distingue de la mayora de otras especies, por
ejemplo; el cartlago costo-condrial, localizado entre las costillas y el esternn, es a menudo
calcificado y la mdula sea de los huesos largos del ratn permanece funcional a travs de
toda la vida del animal, cuando en la mayora de los mamferos la mayor parte de la mdula
sea es remplazada por grasa. El tejido de la glndula mamaria se extiende sobre la espalda
y hombros; por esta razn los tumores mamarios son encontrados a menudo fuera de esta
regin. El bazo de los machos es 50% ms largo que el de las hembras.7

Entre los ratones no consanguneos ms populares podemos citar los Swiss-Webster, CD-1,
los originarios del Institute of Cancer Research conocidos tambin como ICR, y CF-1,
todos de uso general.2

En el bioterio la especie utilizada con mayor frecuencia son los ratones ICR, por las
siguientes caractersticas.

6.1.1 Caractersticas del ratn ICR

Los ratones ICR originalmente HA (ICR), derivan totalmente de ratones Swiss-Webster.


Estos grupos de roedores son los que mejor representan la variabilidad gentica de una
poblacin humana tpica; rasgo que puede ser
confirmado al estudiar la frecuencia gnica de
un grupo de genes (isoenzimas) o el porcentaje
de heterocigosis de marcadores moleculares
(microsatlites). Por esta caracterstica, los
grupos de ratas y ratones exocriados son muy
usados en toxicologa y farmacologa, de igual
manera son animales muy resistentes a las
condiciones ambientales y a la manipulacin
(figura 4).2
Figura 4 ratn ICR8

Su promedio de la camada es de 11.5, es un animal dcil, consanguneamente el ratn ms


utilizado. Cuenta con buenas caractersticas maternas y con un alto rendimiento
reproductivo, tiene una alta incidencia en la degeneracin de la retina y es un ratn robusto.

Se utiliza ampliamente en la investigacin para la toxicologa, oncologa, envejecimiento,


teratologa, modelo quirrgico y modelo de investigacin.

A continuacin se muestra la curva de crecimiento de los ratones ICR, en el cual se puede


apreciar, tiende a crecer de manera rpida, los ratones para la prueba de inocuidad llegaban
con un peso aproximado de 14-16 g, acoplndose durante el fin de semana y utilizndolos
en un peso aproximado de 17-22 g, teniendo a crecer rpidamente, por lo tanto este ratn es
idneo por su curva de crecimiento, su robustez, al igual que es empleado para estudios de
toxicologa (figura 5).

12
Figura 5 Curva de crecimiento de los ratones ICR.8

6.2 Rata (Rta)

Las variedades domstica y albina de la rata gris, o noruega (Rattus norvegicus) originaria
de Europa, es quizs la especie ms frecuentemente empleada en la investigacin
biomdica, en general es un animal muy dcil

Taxonoma:
Clase: Mamfera
Orden: Rodentia
Familia: Muridae
Gnero: Rattus
Especie: R. norvegicus

Muchas de las distincines anatmicas de la rata son similares a las del ratn, con pocas
excepciones significantes. Las ratas crecen estructuralmente durante toda su vida, es decir,
el centro de crecimiento de sus huesos largos no cierran sino que continan creciendo
durante toda la vida del animal. En la ratas adultas la mayor parte de la mdula sea de los
huesos largos son remplazados por grasa. El tejido mamario se extiende dorsalmente pero
no tanto como en los ratones por esta razn los tumores mamarios son encontrados
mayormente en la regin ventral. La rata no tiene vescula biliar, caracterstica anatmica
que comparte con el caballo, a falta de esta el flujo de la bilis entra al duodeno.7

colonias de ratas albinas fueron comenzadas en 1906 en el Wistar Institute, donde se

13
o

.2 Entre las cepas ms empleadas se encuentran Sprague-Dawley


(SD), Winstar y la Long-Evans. 9

6.2.1 Caractersticas de las rata SD

Su promedio de la camada es de 10.5 es un


animal muy dcil, consanguneamente es la
rata ms utilizada en la investigacin, con un
excelente rendimiento reproductivo y con
buenas caractersticas maternas.
Se utiliza en la investigacin para estudios de
toxicologa, envejecimiento, oncologa,
teratologa, nutricin y propsitos quirrgicos
(figura 6).

Figura 6 rata SD

A continuacin se muestra la curva de crecimiento de la rata SD (figura 7), se ha observado


que es proporcional es peso de la rata con respecto al peso de las gnadas sexuales.

Figura 7 curva de crecimiento de la rata.8

14
6.3 Cobayo (Cb)

El cobayo Cavia porcellus, es un roedor realmente manso, muy empleado como mascota y
animal de laboratorio.

Taxonoma:
Clase: Mamfera
Orden: Rodentia
Familia: Cavidae
Gnero: Cavia
Especie: C. Porcellus

Tambin conocido como conejo de Indias o cobayo, originario de Sudamrica, perteneciente


al suborden de los histricomorfos (como son por ejemplo, la chinchilla, y el puerco espn);
entre sus variedades se encuentra la inglesa o de pelo corto, cuyos representantes ms
caractersticos son las lneas Duncan y Hartley.9

6.3.1 Caractersticas del cobayo Hartley

La precocidad de sus cras es una caracterstica notable, ya que nacen con los ojos abiertos
y con dientes, asimismo nacen cubiertos completamente de pelo y son capaces de caminar.
Pocas horas despus de nacer son capaces de comer y beber en charolas u otro recipiente.
Su tracto digestivo cuenta con un ciego alargado, que es tpico de una fermentador cecal.
El ciego, sin embargo, es atpico para roedores porque compromete una significante porcin
de la parte terminal del tracto digestivo. El ciego tiene forma de C y esta doblado hacia la
izquierda. Un aspecto importante de la anatoma del cobayo hembra es la habilidad de la
pelvis de acomodar el tamao de las cras durante el nacimiento. Durante la parte tarda
de la gestacin y bajo la influencia de la
hormona relaxina, la sfilis pbica se separa. Al
parto, esta separacin puede ser hasta de 22
mm. Conforme la hembra vaca envejece, dicha
habilidad decrece, por esta razn la hembra
debe ser cruzada antes de los nueve meses para
evitar una distocia (figura 8).7

Figura 8 Cobayo Hartley

Es utilizado como modelo de estudio por su dependencia a la vitamina C exgena, cuya


caracterstica la comparte con los primates, as que es ideal para estudiar la sntesis de
colgeno. Tambin se elige para el estudio de los eventos hormonales y glandulares a lo
largo de la gestacin por su larga duracin de la gestacin, permitiendo obtener animales
libres de patgenos especficos o Specific Pathogen Free (SPF), mediante la cesrea.

15
Otro uso es para la sensibilidad a la histamina, la cual tiene una rpida y potente, accin
sobre la musculatura lisa bronquial determinando espasticidad en ocasiones incluso letal.
Sensibilidad a s hetlaeroprotenas, produciendo en la cobaya antgenos frente a protenas
especficas y la anafilaxia es un indicador de la presencia o ausencia de las pequeas
cantidades de antgenos. Al contrario de lo que ocurre en el conejo o el pollo la
administracin de anticuerpos protege a la cobaya frente a los fenmenos anafilcticos. Los
cobayos son excelentes fuentes de complemento por lo tanto se emplean en cualquier tipo
de investigacin serolgica.9

A continuacin se muestra la curva de crecimiento del cobayo (figura 9).

Figura 9 Curva de crecimiento de los cobayos8

16
6.4 Conejo (Cj)

El conejo domstico Oryctolagus cuniculus, se utiliza como animal productor de carne,


como animal de laboratorio o como mascota.

Taxonoma:
Clase: Mamfera
Orden: Lagomorpha
Familia: Leporidae
Gnero: Oryctolagus
Especie: O. cuniculus

Solamente el 8% del peso total del conejo es atribuible al esqueleto, en comparacin al gato
que representa el 30% del total del cuerpo. Uno de los resultados de este bajo peso del
esqueleto es la fragilidad de la espalda del conejo. Una patada de sus miembros posteriores
puede causar fcilmente, que se quiebre la espalda. Por esta razn, se deben tomar con
mucha precaucion cuando se manipulan conejos. La superficie de su lengua es dorsalmente
suave, anteriormente porosa al igual que dura y posteriormente lisa. La pared del estmago
es muy delgado por lo tanto se deteriora rapidamente despus de su muerte. Tienen
membrana nictitante muy prominente. Adems, las orejas, por la vascularizacin tambin
funcionan en la regulacin del calor.7

Actualmente, la Asociacin Americana de


Criadores de Conejo reconoce ms de 50
razas de conejos. Las razas ms populares
incluyen el Nueva Zelanda (NZ), Holands,
California, y Gigante de filandes. El
holandes es una raza pequea, con un peso
entre 0,9 y 1,8 kg., es el segundo en
importancia como una raza de laboratorio,
siendo el primero el NZ.

El NZ es una raza de tamao mediano pesa


entre 3 y 5 kg. Es la raza ms popular para
fines de investigacin y produccin de carne,
siendo el ideal para ocupar en LEI (figura
10).
Figura 10 conejo Nueva Zelanda

6.4.1 Caractersticas del conejo NZ

Su camada suele ser de 8.5 cras, al igual pueden ser empleados para muchos propsitos,
entre ellos:

Para sangrado o inoculaciones endovenosas se prefiere razas de orejas grandes


En la determinacin de pirgenos de preparados farmacuticos
En la preparacin de antisueros

17
Para pruebas de toxicidad de drogas y productos biolgicos
Pruebas rutinarias de diagnstico
Prueba de irritantes cutneos y oculares, debido a su alta sensibilidad para estos
productos
En la investigacin de ciruga cardiovascular y estudios de hipertensin,
enfermedades infecciosas, teratologa, arteriosclerosis y serologa
El conejo es apropiado para estudios sobre reproduccin, puesto que
la ovulacin no es espontnea, no hay anestro estacional, la gestacin es corta y
el semen se puede recolectar fcilmente. Se usan para el estudio de
anticonceptivos orales
En la investigacin de enfermedades infecciosas e inmunolgicas, por la alta
calidad y cantidad de sus anticuerpos
Tambin se usan en serologa y para screening de agentes embriotxicos
y teratognicos
Entre otras aplicaciones tambin son usados para cra de moscas ts-ts
Tambin se utiliza con fines pedaggicos para anatoma, fisiologa
experimental, nutricin, reproduccin, embriologa y otros.10

A continuacin se muestra la curva de crecimiento de los conejos Nueva Zelanda (figura


11)

Figura 11 Curva de crecimiento de conejo NZ8

18
7. MANEJO BSICO DE LOS ANIMALES

Todos los animales se deben sujetar con firmeza, gentileza y respeto, aunque tambin se
debe tener en cuenta factores como la especie, cepa, edad, sexo, microambiente, si estn
habituados al manejo, experiencia previa, personalidad, estado de nimo y cualquier
lesin que pueda causar dolor y sufrimiento de los animales en el momento de la
manipulacin.11

Casi todo el trabajo con los animales en LEI parten de los prximos puntos a tratar, aunque
varan un poco dependiendo de la va de inoculacin o actividades a realizar, pero ms
adelante se menciona si es el caso. Al realizar un buen manejo se disminuyen drsticamente
las posibilidades de salir daado, como son las mordidas, el giro inesperado de los ratones
por intentarse soltar, las patadas y rasguos de los conejos, el que se den a la huida o
simplemente que el propio animal salga daado por un inadecuado manejo, al igual que
incrementar el estrs del mismo por no realizar los procedimientos de forma rpida,
eficiente, ahorrando tiempo, trabajo y sin que los animales se orinen mucho.

7.1 Manejo del ratn (Rt)

Para transferir un ratn de su jaula a otra, puede ser


sujetado por la base de la cola con los dedos o con un
par de pinzas. Nunca se agarra a un ratn por la punta
de la cola, ya que puede resultar en una prdida de la
piel y la exposicin de las vrtebras caudales (figura
12).12, 13
Figura 12 transfiriendo al ratn con pinzas.12
Otra forma de sostener a un ratn es tomarlo de la base
de la cola con el dedo pulgar e ndice, colocndolo
sobre una superficie que se pueda adherir como la tapa
de la jaula de alambre, justo cuando el ratn intente
avanzar se sostiene rpidamente de la piel suelta
localizada en la parte posterior de cuello entre el dedo
pulgar e ndice, de la otra mano. Con esto se inmoviliza
la cabeza del ratn para que no pueda girar y morder13
(figura 13).

Figura 13 sujecin del ratn12

19
En el laboratorio si solo se necesita pesar, contar y trasferir a
otra caja, se toma al ratn de la cola como se muestra en la
figura 14, siendo un manejo rpido por lo tanto no ha habido
ningun problema de prdida de la cola o exposicin de
vrtebras.

Figura 14 transferencia del ratn sujetado de la cola.

Por otro lado la sujecin tambin se realiza con una sola mano,
primero se debe colocar al ratn en cualquier superficie si es
que no se tiene suficiente experiencia, se puede colocar e la
rejilla de la caja donde se sostiene el ratn, despus se toma la
base de la cola con el dedo meique y se realiza una ligera
presin con la palma de la mano y con un movimiento rpido
se colocan los dedos ndice y pulgar detrs del cuello con la
finalidad de inmovilizarlo (figura 15) sujetndolo del pliegue
del cuello para poder manipularlo completamente de esta
manera se puede realizar inoculaciones, marcar orejas, pesar y
anotar.
Figura 15 sujecin e inmovilizacin del ratn en forma manual

En esta toma se puede apreciar como el dedo meique sostiene


la cola mientras los dedos ndice y pulgar lo tienen del pliegue
del cuello (figura 16).

Dependiendo del manejo a realizar es la posicin en la que se


mantiene al ratn, como se ver ms adelante.

Figura 16 sujecin de ratn

20
7.2 Manejo de la rata (Rta)

La rata se maneja con cuidado aunque no suele ser


agresiva, por lo que slo ante situaciones de autntica
tensin llegan a morder al que las maneja. Si se sujeta
por la cola, debe hacerse por la base de esta, y slo
durante breves periodos de tiempo.9

Se pueden sujetar por diferentes medios, uno de ellos


implica tomarla de la base de la cola y colocarla sobre
una tapa de alambre u otra superficie en la que se
pueda agarrar. A medida que se va moviendo hacia
delante, con la otra mano se sujeta firmemente la parte
trasera y la caja torcica, colocando el pulgar e ndice
directamente detrs de los codos de la rata e
inmediatamente se empuja una de las patas hacia
delante, de modo que se cruzan debajo de la barbilla de
la rata (figura 17).
Figura 17 sujecin e inmovilizacin de forma manual.14

Con este mtodo de inmovilizacin se debe tener cuidado de no poner demasiada presin
sobre el trax de la rata, ya que esto puede dificultar la respiracin y causar su muerte. Otro
mtodo implica los mismos pasos iniciales, pero el dedo ndice y el dedo medio se colocan
inmediatamente detrs de las mandbulas para frenar la cabeza.14

Los guantes de cuero se pueden utilizar para manejar ratas feroces, pero a menudo son
incmodos y puede hacer que las ratas sean ms temibles al igual que difciles de manejar.
Tambin se puede ocupar una toalla de mano puede ser envuelto alrededor el cuerpo de la
rata para evitar el riesgo de que el controlador pueda ser mordido mientras que se inyecta.9

En el LEI debido a que las ratas con las


que se trabajaba son comnmente
pequeas, se saca de su caja por la base
de la cola o bien sujetndolas de todo el
cuerpo, despus se colocan los dedos
ndice y medio alrededor del cuello por
detrs de la mandbula inmovilizndola,
los dedos pulgar y anular detrs de los
codos de los miembros anteriores, esta
forma nos facilita el poder inocularlos va
subcutnea en el brazo (figura 18).

Figura 18 sujecin e inmovilizacin de manera manual.

21
Cuando se requiere inocular por va intraperitoneal se sostiene de la misma forma pero las
patas traseras se anclan entre los dedos para poder exponer la cavidad abdominal (observar
punto 8.22). Las ratas mayores a 400 g se inoculan va intramuscular colocndolas en una
caja y con ayuda de otro compaero apoyndose y dejando una hendidura donde se pueda
sacar la cola para as sostenerla con firmeza y poder inyectar en los glteos. En cuanto a los
guantes de cuero si se tienen pero casi no se utiliza ya que son incmodos y no permite una
manipulacin gil.

7.3 Manejo del cobayo (Cb)

Los cobayos se manipulan con facilidad sujetndolos por el tronco, con una mano, mientras
se apoyan las extremidades posteriores en la otra, ya que, cuando se sujeta al animal, por la
parte dorsal del tronco puede producirse graves lesiones pulmonares.9

En el laboratorio se trasladan por cortos perodos con una


mano por el tronco, en el caso de ser largas se sujeta
apoyando al animal en el antebrazo y recargndolo sobre
el cuerpo, de ser necesario se puede ayudar de la otra
mano para mantenerlo quieto.

Cuando se inocula por va peritoneal, se sujeta


colocndolo boca abajo para que todas las vsceras
desciendan; la mano derecha toma los miembros
posteriores entre los dedos ndice y medio, con la
finalidad de separaros y estirarlos sostenindolos con
firmeza, con la mano izquierda se bajan los miembros
anteriores desde los codos para tener una buena sujecin
y proteger nuestra mano de posibles mordidas.

Figura 19 sujecin del cobayo para inocular va peritoneal.

7.4 Manejo del conejo (CJ)

Se realiza con la mano derecha suspendindolo de la piel


floja en la regin del dorso y la nuca del conejo, con la
mano izquierda se le sujeta por debajo de los muslos
como si se fuera a sentar sobre la palma de la mano, con
el objetivo de sostener el peso del animal (figura 20).

Figura 20 sujecin del conejo para traslados cortos

22
Para transportar al conejo distancias largas se realiza su sujecin, colocndolo debajo del
antebrazo, haciendo presin con el dorso, luego abrazar al animal por la regin posterior de
su cuerpo, de tal manera que debe quedar prensado entre el brazo y el cuerpo del operador
(figura 21). Si se les maneja de forma
inadecuada, estos animales forcejean,
pudiendo producirse una fractura o daar
al que los manipula, finalmente, para
desplazamientos considerables, son
aconsejables jaulas, cepos o cajas. En
cualquier caso conviene recordar que las
orejas del conejo son sumamente frgiles
y sensibles, por lo tanto evitar emplearlas
para sujetar o levantar a los animales. 9, 10

Figura 21 sujecin para traslados un poco ms largos.

En el laboratorio para colocarlos de la


jaula al cepo o en distancias cortas se
toman de la piel del dorso al conejo y se
colocan ya sea en los cepos o en un carrito
que se tiene para poderlos mover de un
cuarto a otro (figura 22 y 23).

Figura 22 sujecin de los conejos para trayectos largos en cepos.

Figura 23 se muestra la sujecin de conejo para trayectos cortos, de igual


manera se sostiene para pesarlos en la bscula.

23
Cuando se colocan en mesas de acero
inoxidable, los conejos se tienden a
resbalar y eso ocasiona que se sientan
inseguros, por lo tanto se puede colocar una
toalla, para que el conejo se sienta ms
tranquilo y sea ms fcil su manejo (figura
24).9

Figura 24 colocacin del conejo en la mesa de exploracin, como se observa no se cuenta con una toalla como
recomienda la literatura.

8. MARCAJE DE LOS ANIMALES

En el cuadro 1 la NOM-062-ZOO-1999 marca los siguientes tipos de marcajes en nuestras


especies utilizadas.

Especie Tipo de identificacin Zona de aplicacin

Rata y Ratn Colorantes Pelaje y cola


Perforaciones y muescas Orejas
Tatuaje Parte superior interna de orejas y
cola
Cuyo Colorantes Pelaje
Aretes Orejas (lo ms cercano a la base)
Marcas Naturales De acuerdo al fenotipo
Conejo Tatuaje Parte distal interna de la oreja
Aretes metlicos Oreja lo ms cercano a la base
Collares Cuello
Cuadro 1. Marcaje de los animales15

Tarjetas.- Se colocan en las jaulas o cajas y los datos que en ella figuran corresponden a la
identificacin que llevan los animales que contienen. Se pueden asentar datos sobre la
procedencia, mtodo de reproduccin, inoculaciones, cirugas a que han sido sometidos y el
responsable del proyecto de investigacin.15

Marcas naturales.- Se consideran las caractersticas fenotpicas, siempre y cuando sean


fcilmente detectables y sin posible confusin. Deben estar perfectamente identificadas en
las fichas, mediante dibujos o seales particulares.15

24
Colorantes o tinturas.- Slo se recomiendan en
casos de identificaciones temporales, en un tiempo
no mayor de 20 das y usar colorantes que no sean
txicos para los animales (figura 25)15.

Figura 25 ejemplo de identificacin con colorantes en la cola del ratn.

Perforaciones y muescas.- Estas se aplican en las orejas de ratas, ratones y porcinos


principalmente, de acuerdo a un cdigo preestablecido.15

Aretes.- Se colocan en la(s) oreja(s) y pueden ser de plstico o bien de metal. En ellos se
graban o insertan letras, nmeros o una combinacin de ambos para facilitar la
identificacin.15

Tatuaje.- Es aplicable en diversas partes del cuerpo del animal de acuerdo con la especie.15

Collares.- Lo ms importante a tener en cuenta es que los dispositivos de ajuste sean


cmodos y sobre todo que contengan los distintivos con los datos de identificacin. Se
utilizan preferentemente en perros, gatos y primates no humanos.15

En LEI los ratones y ratas que requieren ser identificados individualmente, se marcan con
una muesca en la oreja hecha mediante un
perforador de membrana. A cada muesca
corresponde a un nmero del 1 al 3 en la oreja
derecha del animal y del 4 al 6 del lado
izquierdo, en el caso de necesitar un mayor
nmero se pueden sumar estos, por ejemplo el 11
se hacen las muescas en la posicin 4, 6, 1 (figura
26).

Figura 26 asignacin numrica del marcaje en orejas en ratones y ratas.

25
Los cobayos se marcan con tinta indeleble
en la parte externa de la oreja (figura 27),
como la prueba dura una semana se
recomienda remarcar los nmeros a mitad de
semana para evitar que se borre o posibles
confusiones en los nmeros.

Figura 27 se muestra el marcaje en cobayo.

As mismo, los conejos como en los cobayos


se marcan con tinta indeleble en la parte
interna de la oreja (figura 28)

Figura 28 se muestra el marcaje en conejo, con plumn indeleble.

9. MTODOS DE INOCULACIN

La inoculacin se refiere al proceso de introducir cualquier substancia dentro del


organismo, para posteriormente ser absorbidos. Existen varias vas de administracin como
lo son: la oral, tpica o cutnea, administracin por mucosas, sublingual, intravenosa,
intramuscular, subcutnea, intraperitoneal.16, 17

El animal debe ser manejado siempre con cuidado pero con firmeza, procurando la
seguridad del personal que lo manipula. Se debe evitar la lucha y el estrs en todo momento,
ya que la excitacin prolongada puede alterar la circulacin y el estado metablico del
individuo e inducir un estado de choque. Para evitar esto se menciona el manejo bsico
de los animales en el punto 6 del presente escrito.

Para una buena inoculacin primero se necesitan saber cules son las rutas de
administracin (intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutnea y oral) tambin
depender de la especie, volumen, calibre de la aguja, los cuales sern descritos ms
adelante.

26
En los animales de laboratorio las vas de inoculacin ms utilizada es la intraperitoneal, la
cual se realiza en la regin subumbilical.18 En tanto las vas de administracin de fluidos y
sustancias la NOM 062-ZOO-1999, describe las venas autorizadas y no autorizadas a
utilizar en los diferentes animales de laboratorio
.
En los cuadros 2 y 3 se citan las vas de administracin, calibres de aguja y volmenes de
administracin en los animales de laboratorio.

Cuadro 2. Vas de administracin de fluidos y sustancias en animales de laboratorio.15


Animal Vena Vena Vena Vena *Vena Vena *Vena *Vena
auricular caudal ceflica femoral peleana safena sublingual yugular
Rata - + - - + + + +
Ratn - + - - - - - -
Cuyo - - - + + + + +
Conejo + - - - - - - -

Fuente: NOM 062-ZOO-1999


* Previa anestesia o sedacin
+Permitido
- No permitido

Cuadro 3. Volmenes de inoculacin y tamaos de aguja recomendados.20


Especie Intravenosa Intraperitoneal Intramuscular Subcutnea
Ratn Vena lateral de la 2-3 ml, calibre Cudriceps parte Debajo de la piel
cola, 0.2 ml, < 21G posterior del muslo, de la nuca, 2-3
calibre < 25G 0.05 ml, calibre < ml, calibre < 20G
23G
Rata Vena lateral de la 5-10 ml, Cudriceps parte Debajo de la piel
cola, 0.5 ml, calibre < 21G posterior del muslo, de la nuca,
calibre < 23G 0.3 ml, calibre < 21G espalda, 3-4 ml,
calibre < 20G
Cobayo Vena de la oreja, 10-15 ml, Cudriceps parte Debajo de la piel
vena safena 0.5 ml, calibre < 21G posterior del muslo, de la nuca,
calibre < 23G 0.3 ml, calibre < 21G espalda, 5-10 ml,
calibre < 20G
Conejo Vena marginal de 50-100 ml, Cudriceps parte Debajo de la piel
la oreja, 1-5 ml calibre < 20G posterior del muslo, de la nuca, flanco,
(lentamente), msculos lumbares, 30-50 ml, calibre
calibre < 21G 0.5 ml, calibre < 20G < 20G
Fuente: Lawson P.T., 2000

27
9.1 INOCULACION EN RATONES

En el laboratorio, las inoculaciones se realizan con agujas de calibre 27GX 13mm, previa
asepsia de la zona con una torunda impregnada de alcohol al 96%.

9.1.1 Va subcutnea (SC)


Se aplica a una profundidad mayor que las inyecciones intradrmicas y en el espacio ms
vascularizado que se encuentra entre la piel y el msculo subyacente. Generalmente se
realiza en la regin de la nuca o en la piel de la espalda.21Si se tira de la piel, se expone por
lo general una rea grande de tejido subcutneo para una inyeccin.20

Partiendo de la sujecin realizada en el punto 7.1, se procede a realizar asepsia con una
torunda impregnada con alcohol al 96% e introducir la aguja con el bisel hacia arriba, de
forma paralela al dorso del ratn, atravesando la piel por la parte superior del pliego que
se forma al momento de la sujecin. Introduciendo la aguja 4 a 6 mm atravesando el tejido
subcutneo, para hacer prominente el rea a inocular se puede empujar un poco el dedo
medio hacia el frente y debajo de este
inyecta (figura 29).

Posteriormente se retira la aguja,


observando que no se produzca
sangrado, si se raliza correctamente se
forma un abultamiento en el lugar de
la inoculacin el cual va desapareciendo
a medida que el fluido sea absorbido.

Figura 29 inoculacin SC

En la literatura se menciona otra forma de inocular en la cual se deposita al ratn sobre la


rejilla permitindole agarrarse a ella con las patas delanteras y levantar la piel de la espalda
con los dedos ndice y pulgar (figura 30).21

Figura 30 inoculacin por va SC apoyado en una rejilla.

28
9.1.2 Va intraperitoneal (IP)

La aplicacin de inyecciones intraperitoneales requiere cuidado, para no penetrar varios


rganos que se encuentran dentro de la cavidad abdominal. Al aplicar una inyeccin IP se
encontrar una ligera resistencia, a medida que la aguja atraviesa la piel y los msculos
abdominales. Sin embargo esta disminuir conforme se vaya incidiendo. Es importante
aspirar antes de inocular, ya que se si se aspira un fluido amarillento quiz haya penetrado
vejiga, si es marrn-verdoso quiz se localice en el intestino o ciego, si es sangre
seguramente sea un vaso sanguneo. En cualquiera de estos casos, se debe descartar la
jeringa e iniciar de nuevo el procedimiento, debido a que la substancia se encuentra
contaminada.20

Para realizar la inoculacin se inmoviliza colocndolo


decbito dorsal elevando ligeramente los miembros
posteriores (con el fin de que los rganos desciendan y
as evitar una inoculacin accidental a las vsceras), se
traza una lnea imaginaria que cruza su abdomen
longitudinalmente sobre la lnea media y otra
transversalmente dividiendo al abdomen en cuatro
cuadrantes (figura 31).
Se realiza asepsia de toda el rea y se inserta la aguja en
los cuadrantes marcados con la X, de preferencia del
lado derecho el animal y lo ms cercano a la lnea
longitudinal del abdomen. De esta manera disminuimos
el riesgo de inyectar en ciego o vejiga urinaria.20

Figura 31 cuadrantes para la inoculacin en ratones

La aguja debe alcanzar una profundidad


de aproximadamente medio centmetro y
debe insertarse con una inclinacin de
unos 30 con respecto a la superficie del
abdomen, se aspiraba para asegurarse de
que no se ha alcanzado ningn vaso
sanguneo, ciego o vejiga urinaria (figura
32).

Figura 32 inoculacin IP en ratones.

29
9.1.3 Va intravenosa (IV)

Antes de la inoculacin se puede realizar vasodilatacin de la vena para facilitar su


canulacin. Utilizando lmparas de luz infrarrojo (evitando que incida directamente sobre
los ojos del animal o causarle quemaduras por exposicin excesiva), inmersin de la cola
en agua caliente (T no superior a 43C) o utilizacin de agentes vasodilatadores (como
xilacina o acepromacina). En el laboratorio se utiliza una torunda impregnada con alcohol,
creando una ligera vasodilatacin por presin, la cual tambin sirve como asepsia. 24

Despus se coloca al ratn dentro de una rejilla pasando su cola por un espacio de la
misma, realizando asepsia en las venas dorsales, las cuales se encuentran de manera
superficial y laterales a la lnea central de la cola, se inserta la aguja cuidadosamente con el
bisel hacia arriba, de 2 a 3 mm de la vena dorsal y con un ngulo de aproximadamente 30
con la superficie de la piel, si se est en la vena al aspirar se llena la aguja de sangre y al
presionar el mbolo de la jeringa no muestra dificultad para verter el fluido (figura 33/34),
se puede observar como la sangre se va desplazando por el lquido que se est inoculando.
Al concluir la inoculacin se debe aplicar presin sobre el sitio de la inoculacin mientras
se retira el agua. Esta presin se debe mantener durante un breve tiempo (unos segundos),
para permitir que el sitio de la puncin deje de sangrar y se impida una posible formacin
de un hematoma.20

Figuras 33 y 34 se muestra la inoculacin IV en ratones y un esquema de cmo colocar el bisel al igual que la
profundidad de las venas.

9.1.4 Va esofgica

En ocasiones, puede ser necesario restringir la ingesta de alimento a los animales antes de
la inoculacin, ya que puede verse afectada la absorcin; se ha demostrado que al
sobrecargar la capacidad del estmago para inmediatamente al intestino delgado;
volmenes grandes pueden ocasionar reflujo.22

Por esta va se puede administrar pequeas dosis de una sustancia con la ayuda de una
cnula o si se requieren mayores cantidades, se utilizan una sonda estomacal.

30
La tcnica que se usa ms en los roedores es la administracin intragstrica, que consiste en
la colocacin directa de una preparacin lquida en el estmago, usando una sonda esofgica
normal unida a una jeringa hipodrmica. El
animal se mantiene en posicin vertical, sujetndolo
por la piel de la nuca. La sonda tiene un
agrandamiento esofgico en la punta, para impedir
lesiones.20 De manera similar se realiza en el
laboratorio, la diferencia radica que en lugar de
introducirla hasta el estmago se introduce en el
esfago realizando los siguientes pasos, sostener al
animal y haciendo presin en ambos lados de la
mandbula, hasta que abra la boca, con ayuda de la
cnula de metal se administra la dosis en la pared
posterior de la lengua atravesando el esfago y
teniendo precaucin de no introducirla por la trquea;
si se realiza correctamente se puede sentir la sonda
desplazndola libremente y en ese momento se debe
administrar la sustancia lentamente para evitar reflujo
del lquido y/o la aspiracin del mismo (figura 35).
Figura 35 inoculacin de ratn va oral

9.2 Inoculacin en ratas

En el laboratorio la inoculacin por va subcutnea e intraperitoneal se realiza con agujas


de calibre 27GX 13mm y para ratas con un peso mayor a 400 g se ocupan agujas calibre
21Gx 1 para va intraperitoneal y muscular. Se realiza la asepsia con alcohol al 96%.

9.2.1 Va subcutnea (SC).

Inmovilizar al animal sujetndolo por el cuello con el dedo ndice y medio, a su vez el
mismo dedo ndice y pulgar levanta un
poco la piel del antebrazo, formndose un
pliegue en forma triangular donde se
inocula lo ms central al mismo. Se
introduce la aguja con el bisel hacia arriba
de 4 a 6 mm atravesando el tejido
subcutneo, se retira la aguja y si se hizo
bien la inoculacin se forma una cpsula o
abultamiento en el lugar de la inyeccin
que se ira dispersando a medida que el
fluido es absorbido (figura 36).

Figura 36 inoculacin SC en rata.

31
As mismo se debe tener cuidado al introducir ms de lo los 6 mm el bisel ya que corremos
el riesgo de daar el tejido adyacente debido a que la inoculacin es por 7 das seguidos
por lo tanto se puede formar callosidades.

La literatura cita que al igual como se procede con el ratn, se puede proceder con las
ratas; es decir que la zona ideal es en el rea de la escpula. Solo que si se realiza con
frecuencia se tiene que alternar el rea de aplicacin.

9.2.2 Va intraperitoneal (IP)

Inmovilizar al animal sujetndolo por el cuello con el dedo ndice y medio. Posteriormente
se entrelaza el miembro posterior
izquierdo entre el dedo meique y el
otro miembro con la base del dedo
pulgar. La cabeza debe quedar ms
abajo que el resto del cuerpo (con
respecto al plano horizontal). Realizar
asepsia de la zona a inocular con una
torunda impregnada con el alcohol
96%. Dicha inoculacin se hace ente el
ombligo y cerca de la regin inguinal,
de la misma manera como se realiz en
el ratn (figura 37), de igual manera se
debe aspirar antes de la inoculacin
para observar si no se punciona algn
rgano como se mencion en el caso de
los ratones.
Figura 37 inoculacin de la rata va IP
9.2.3 Va intravenosa (IV)

Al igual que con el ratn se puede realizar vasodilatacin de la vena para facilitar su
canulacin. Utilizando lmparas de luz infrarrojo (evitando que incida directamente sobre
los ojos del animal o causarle quemaduras por exposicin excesiva), inmersin de la cola
en agua caliente (T no superior a 43C) o utilizacin de agentes vasodilatadores (como
xilacina o acepromacina). En el laboratorio se utiliza una torunda impregnada con alcohol,
creando una ligera vasodilatacin por presin, la cual tambin sirve como asepsia.24

La sujeccion se realiza de la misma manera que con el ratn. Con ayuda de una rejilla de
caja se coloca a la rata y por uno de sus espacios se sujeta la cola realizando asepsia e
insertar cuidadosamente la aguja con el bisel hacia arriba, de 2 a 3 mm de la vena dorsal y
con un ngulo de aproximadamente 30 con la superficie de la piel (figura 38)

Por esta va se debe inocular lentamente el contenido de la jeringa, evitando que el animal
se mueva bruscamente para que la aguja no se salga. Cuando la puncin es correcta se
observa como la sangre se iba desplazando por el lquido que estaba siendo inoculado o
bien, si al jalar del mbolo de la jeringa se llena de sangre.
32
Al concluir la inoculacin se debe
aplicar presin sobre el sitio de la
inoculacin mientras se retira el agua.
Esta presin se debe mantener durante
un breve tiempo (unos segundos), para
permitir que el sitio de la puncin deje
de sangrar y se impida una posible
formacin de un hematoma.20

Figura 38 inoculacin va IV en rata

Otra opcin de administracin es realizarla por la la vena safena colocando a la rata en un


cilindro es el mtodo ms usual. Anestesia ligera con ketamina-xilazina o CO son medios
tiles para el correcto trabajo con la rata. Una administracin intravenosa o toma de sangre
prolongada debe ser acompaada de una catter va vena yugular. Esta tcnica requiere de
elementos de ciruga.23

9.2.4 Va intramuscular

En el laboratorio solo se inoculan por esta va a ratas mayores de 400 g debido a que se
tienen que sedar para poder realizar la prueba. Con aguja de calibre 27GX 13mm, es
importante mencionar, que tambin se puede hacer uso de otros calibres de acuerdo al
cuadro 3.

Se procede a colocar a la rata dentro de una caja, con ayuda de otro compaero que sostiene
la tapa con fuerza, dejando un pequeo espacio para poder tomar de lo ms cercano a la
base de la cola a la rata accediendo al miembro posterior para inocular, dichos movimientos
deben ser rpidos ya que se estresan mucho.

Otra forma es que mientras una persona sujeta firmemente a la


rata del tronco, con su otra mano sostiene el miembro posterior,
mientras otra persona procede a la inoculacin, realizando
asepsia, e introduciendo la aguja en la cara externa del msculo
formando un ngulo de 35 a 40 en forma casi transversal al
fmur (figura 39)21

Figura 39 inoculacin va IM en ratas

33
9.3 Inoculacin en cobayos

Debido a que los cobayos son animales nerviosos, es mejor realizar las inoculaciones con
ayuda ya que tienden a moverse mucho durante el manejo. Para realizar la inoculacin se
utiliza una aguja de 27GX 13mm y la asepsia con alcohol al 96%.

9.3.1 Va intraperitoneal (IP)

Para dicho procedimiento se requieren dos personas, una que sujete al cobayo y la otra que
se encargue de la inoculacin. La primera persona sostiene al cobayo de los dos miembros
anteriores y con la otra mano se sujetan los miembros posteriores, colocando la cabeza
hacia abajo para permitir que las vsceras desciendan. Mientras la otra persona se dispone a
la inoculacin. Primero se tiene que realizar asepsia con
una torunda impregnada con alcohol de la zona y
trazando una lnea imaginaria en el abdomen, de forma
similar a los ratones. Se introduce la aguja en el lado
derecho, aproximadamente 2.5 cm por arriba del pubis.
Manteniendo un ngulo aproximado de 45 atravesando
la piel y la pared muscular del abdomen (Figura 40). De
igual manera se succiona para observar que no se haya
puncionando ningn rgano o algn vaso sanguneo,
despus se procede a retirar con cuidado la jeringa y
observar que no haya sangrado.

Figura 40 inoculacin IP en cobayo

Si no se tiene ayuda para la inoculacin se puede inmovilizar, colocando la cabeza y


miembros anteriores del cobayo debajo de la axila de la persona que lo est manejando con
los dedos meique y anular se toma de un miembro posterior y con los dedos medial, ndice
y pulgar el otro miembro, esto se realiza con el mismo brazo que est sosteniendo la
cabeza. Se elevan los miembros posteriores con el fin de descender las vsceras y poder
observar la cavidad abdominal, como se puede apreciar se tiene libre la otra mano para
poder realizar la inoculacin.

9.4 Inoculacin en conejos

Para la inoculacin en conejos por va subcutnea e intramuscular se ocupan agujas de


calibre 27GX13mm y para la va intravenosa se usa agujas de calibre 22 Gx25mm. Para
volmenes mayores de 5 ml se recomienda utilizar agujas para infusin (mariposas).

34
9.4.1 Va subcutnea (SC)

Colocar al conejo en un cepo y realizar


asepsia con una torunda impregnada de
alcohol sobre el lomo del conejo.10
Levantar la piel del dorso del conejo con los
dedos ndice y pulgar, posteriormente
introducir la aguja de la jeringa en la pequea
cavidad formada a 45 e inocular.

Con la inoculacin se nota un abultamiento


sobre la misma zona, para hacerlo ms
evidente es necesario rasurar el rea. Despus
se procede a sacar la jeringa y soltar la piel
del conejo con cuidado observando de que no
haya sangrado (figura 41). Figura 41 Inoculacin SC de conejo

9.4.2 Va intravenosa (IV)

Se procede a inmovilizar al conejo colocndolo


en el cepo, despus se localiza la vena
marginal (figura 42) que se encuentra
en la parte externa de la oreja la cual es muy
fina, por lo que antes de la administracin se
dilata la vena por presin con una torunda de
algodn impregnado de alcohol, frotando desde
la base de la oreja hacia el extremo. Tambin
se puede eliminar pelo para tener una mejor
visualizacin al igual que un campo ms
limpio.
Figura 42 Localizacin de la vena marginal

La inoculacin se realiza con aguja de 22 Gx25mm o las mariposas con el bisel hacia
arriba, siguiendo la trayectoria de la vena,
cuando la puncin es correcta se puede
observar como la sangre se va desplazando
por el lquido que est siendo inoculado o bien,
si se jala del mbolo de la jeringa sta se llena
de sangre. Cuando se termina se extrae
suavemente la aguja y se realiza ligera presin
con la finalidad de evitar el sangrado
(figura 43).10

Figura 43 inoculacin IV en conejo

35
10. OBTENCIN DE FLUIDOS

En el laboratorio se obtiene sangre de ratones normocitmicos, sangre de cobayo para


extraccin de complemento, sangre de conejos para obtencin de anticuerpos, extraccin de
mdula sea de ratones, obtencin de pulmones para la prueba de poder antignico y
obtencin de gnadas en ratas (valoracin de hormonas sexuales). Slo se mencionaran los
realizados con mayor frecuencia y los que no perjudican con el contrato de
confidencialidad.24

En animales pequeos es muy comn utilizar la vena coccgea para la puncin venosa. Otra
opcin en roedores, es amputar la punta de la cola, a diferencia de las ratas, no parece
implicar la eliminacin de ninguna vertebra coccgea. El corte de la cola tiene que realizarse
una sola vez o dos como mximo. (En ratas topo desnudas se puede hacer pequeas
extirpaciones al final de la cola, que vuelve a crecer en 4-6 semanas y entonces
puede realizarse de nuevo) 24

En cobayos y hmster, se puede utilizar la vena yugular o la de la oreja, pero requiere gran
habilidad; en estos mamferos, la puncin cardiaca con anestesia general puede ser el
mtodo ms adecuado. Para toda toma de muestra es necesario conocer el lugar o vena
ideal para la obtencin de sangre al igual que los lmites, tiempo de recuperacin y
volmenes de obtencin de sangre.24

En el siguiente cuadro se muestran los lugares de obtencin de sangre ms idneos para


algunos animales de laboratorio.

Cuadro 4. Lugares para la venopuncin y la venoseccin 24


Animal Vena de la Amputacin Vena Seno Vena Femoral Corazn
oreja de la cola coccgea orbital yugular
Cobayo + - - - + - +++
Ratn + +++ + - +/-
Rata - + +++ - ++ - +
Conejo +++ - - - + - +/-
- No recomendado
+ Alternativa posible
++ Va aceptable
+++ Va preferente

El volumen total de sangre que se encuentra en el cuerpo de un animal equivale


aproximadamente al 6% de su peso corporal. Esta cifra vara un poco dependiendo de la
especie, edad, sexo, entre otros, pero el 6% es un buen promedio. Esto significa que un
conejo de 3 kg tendr aproximadamente 180 ml de sangre. Cuando se extraen muestra de
sangre intervalos regulares, existen pautas para garantizar que no se afecte adversamente la
salud del donante. La pauta que se usa ms a menudo es que se puede tomar un volumen
igual al 1% del peso corporal del animal cada dos semanas. Para un conejo de 3 kg esto
significa que se pueden tomar 30 ml de sangre a intervalos de dos semanas, sin causar
efectos secundarios relacionados con la prdida de sangre (tales como anemia).20

36
Como se mencion para la puncin cardiaca se recomienda anestesiar al animal, por lo
tanto aqu presentamos un cuadro con las anestesias recomendadas as como la dosis, va de
inoculacin, y duracin.

Cuadro 5. Anestesia recomendada en algunas especies de laboratorio.22


Especie Anestesia Dosis mg/kg Va de inoculacin Duracin min
Conejo ketamina//xilacina 35/5 IM 20-60 min
Tiletamina/zolazepam 50 IM 20-60
Pentobarbital 45 IV 20-60
Cobayo Ketamina/xilacina 40-80/5-10 IM/ IP 20-60 min
Tiletamina/zolazepam 50 IM /IP 20-60
Pentobarbital 37 IP 20-60
Rata Ketamina/xilacina 100/10 IM/ IP 20-60 min
Tiletamina/zolazepam 80 IM /IP 20-60
Pentobarbital 30-50 IP 20-60
Ratn Ketamina/xilacina 80/10 IM/ IP 20-60 min
Tiletamina/zolazepam 20-40 IM /IP 20-60
Pentobarbital 40-60 IP 20-60

10.1 Obtencin de sangre en ratones por va caudal

Se utiliza una bombilla como fuente de calor, pero se debe de tener cuidado para evitar que
se produzcan quemaduras en las orejas o cegar a los animales. Las ratas y los ratones
utilizan sus colas para ayudar en la termo-regulacin; otra prctica es introducir la cola de
estos roedores en agua templada (una temperatura aproximadamente alrededor de los 45 C
es adecuada) antes de sacar sangre. Aunque no es tan efectivo como un calentamiento
general del cuerpo, en ratas viejas tiene el efecto de suavizar la piel de la cola haciendo el

erupciones cutneas y se tiende a abusar de l, causando un efecto irritante, que hace que
los vasos sanguneos se dilaten. Si se utiliza regularmente y no se retira adecuadamente
puede ocasionar daos en los tejidos incluyendo el engrosamiento, por la formacin de
costras (por ejemplo en parte de la oreja de los conejos).24

En el laboratorio se utiliza la bombilla para poder dilatar los vasos sanguneos, despus se
coloca al ratn sobre una superficie plana, para poder hacer una pequea incisin con una
navaja de bistur a una distancia de 2 cm a partir de la base de la cola, la sangre es
recolectada en tubos eppendorf y se puede masajear la cola hacia abajo para obtener mayor
cantidad de sangre.

Una vez obtenida la sangre se debe aplicar una presin continua con ayuda de una torunda,
en el lugar de la puncin por lo menos 30-60 segundos. Se debe entonces observar la zona
unos 30 segundos ms, para asegurarse de no volver a producir el sangrado. El animal
puede ser devuelto a su jaula y controlado de nuevo despus de 10-15 minutos. Si hubiera

37
que tener cuidado en el manejo de los animales despus de la extraccin de sangre, ya que
una mala manipulacin puede estimular el sangrado debido a traumas fsicos y/o elevar la
presin sangunea. La utilizacin de cauterizacin trmica y selladores artificiales de piel
para la hemostasis no es recomendable, como tampoco lo son los lpices custicos y otros
astringentes, ya que pueden provocar molestias.24

En este ltimo punto en LEI se realiza la cauterizacin trmica debido que en ocasiones son
demasiados ratones por sangrar y es una forma rpida de parar el sangrado, al igual que la
mayora de las ocasiones se sangran a todos los animales de la caja evitando hasta cierto
grado el canibalismo.

10.2 Obtencin de sangre por seno orbitario

El sangrado retroocular es un mtodo para extraer sangre proveniente de animales, que


generalmente no tienen venas lo suficientemente grandes como para permitir la extraccin
mediante una puncin intravenosa con una aguja y jeringa venosa grande detrs del ojo. La
tcnica se limita a los roedores con un seno (ratn, hmster, gerbo y cobayo) o plexo (rata).
Inicialmente el procedimiento se practica en animales bajo anestesia general profunda.
Sujetar la cabeza del ratn entre el pulgar e ndice, incertando un tubo capilar o una aguja
roma en el borde medial del globo ocular y dirigindola hacia la parte posterior de la
cuenca del ojo. Hacerla girar cuidadosamente el tubo para perforar el seno. La sangre llena
el tubo gracias al efecto del capilar. Esta tcnica se puede usar tambin para inyectar
pequeos volmenes (<0.05 ml). Despus de la extraccin se deben mantener los prpados
cerrados durante algunos segundos, para permitir que el vaso sanguneo puncionado deje de
sangrar. Es tambin una prctica comn poner una pequea cantidad de ungento oftlmico
en el ojo despus de este procedimiento. La toma de muestra repetida se debe limitar a
intervalos semanales.20

En el laboratorio se realiza de la siguiente manera:

Se sujeta al ratn por la nuca con firmeza y gentileza, evitando que se mueva; es importante
tener cuidado de no imprimir mucha fuerza, ya que el sujeto se puede asfixiar. Con una
navaja de bistur se hace una incisin profunda de la comisura externa del ojo, para recolectar
la sangre se coloca debajo de la incisin un tubo eppendorf, con 100 microlitos de heparina
como anticoagulante, hasta colectar 0.5 ml. Si se necesita mayor cantidad de sangre o esta
se obtiene con lentitud, se puede masajear el cuerpo del ratn estimulndolo a que haya
mayor irrigacin. Se homogeniza el tubo, colocndolo en una bolsa con su etiqueta
correspondiente. Al finalizar la obtencin de sangre se procede a sacrificarlo colocando
el dedo ndice y pulgar en la nuca del ratn, la otra mano sostiene la base de la cola y se
realiza una traccin separando la cabeza del cuerpo, si este procedimiento es correcto el
animal muere inmediatamente (revisar apartado 11). Todo esto tiene que hacerse con mucha
rapidez y respeto hacia el animal, con la finalidad de que no sufra.

38
10.3 Obtencin de gnadas en rata

10.3.1 Obtencin de ovarios.

Se sacrifica a los animales por medio de CO2 (apartado 11), despus se realiza la diseccin
de los rganos para evitar que el rigor mortis impida el procedimiento. Para obtener los
ovarios se coloca a la rata en posicin decbito ventral, fijando los miembros con agujas a
la mesa de diseccin o un pedazo de unicel, con una torunda impregnada de alcohol se
realiza asepsia del dorso (figura 44), procediendo a realizar una incisin de la piel en forma
de ojal a la altura de cada rin. Se disecciona el msculo en la misma regin, buscando los
ovarios que se encuentran superficialmente junto a los riones, los cuales tienen forma de
mora de color rosado (figura 45).
Se toman con las pinzas cortando la vena y arteria ovrica; al igual que los cuernos
uterinos. Acto seguido, con la navaja del bistur se limpia por completo cada ovario
eliminando cualquier exceso de tejido conjuntivo o tejido adiposo. Quedando as la
apariencia de racimo de uvas (figura 46).

Fig. 44 coloca a la rata en posicin Fig. 45 Realizar incisin y Fig. 46 se elimina el exceso de
decbito ventral. diseccionar a nivel del rin en tejido conjuntivo y adiposo de los
busca del ovario. ovarios,

10.3.2 Obtencin de prstata y vesculas seminales.

De igual manera se sacrifica a los animales por medio de CO2, inmediatamente despus se
realiza la diseccin de los rganos para evitar que el rigor mortis impida el procedimiento.
Colocando a la rata macho en posicin decbito dorsal sujetndolo a la charola de unicel
por medio de agujas (figura 47). Se procede a realizar asepsia en la regin pbica, con unas
pinzas se toma del pene cortar cranealmente (Figura 48).

39
Al incidir cavidad abdominal se procede a subir las vsceras para permitir una mejor
visibilidad, buscando la vescula seminal y la prstata, la cuales se encuentran por debajo
de los intestinos a lado de la vejiga urinaria. Es de forma acorazonada de color rosado, se
toma el rgano con las pinzas realizando ligera traccin para liberarlo por completo, con las
tijeras se corta por debajo, cuidando de no lesionar la vejiga urinaria. Se procede a limpiar
el rgano cuidadosamente para quitar los conductos deferentes y la uretra, al igual que el
tejido adiposo y fibroso que lo rodeaba sin afectar a los rganos de inters (Figura 49).

Fig. 47 se coloca al ratn en Fig. 48 del pene se realiza un corte Fig. 49 se limpian las vesculas
posicin decbito dorsal. craneal incidiendo a la cavidad seminales y la prstata de tejido
plvica. adiposo y conectivo.

10.4 Obtencin de sangre va auricular en conejo

Hacer de forma similar a la que se realiza para inocular al conejo en el punto 9.4.2, pero
ahora ocupando la arteria central, primero se
procede a efecta asepsia en la parte externa
de la oreja e introducir una aguja
hipoalergnica de 22 Gx 1 en la arteria
central del conejo, con el bisel de la aguja
hacia arriba, inmediatamente empieza a salir
la sangre, la cual se recolecta en un tubo,
tambin se puede ocupar el vacutainer para
obtener una muestra de forma ms rpido
(Figura 50).

Figura 50 Vista de la arteria central para recolectar sangre de conejo.


40
Partiendo de este punto se puede obtener plasma de conejo de la siguiente manera:
Colocando en un tubo con 2 ml de anticoagulante (EDTA, citratos, oxalatos o heparina)
con la finalidad de evitar la coagulacin de la sangre, aadir 10 ml de sangre y
homogenizando de manera suave para evitar la hemolisis se procede a centrifugar a 3000
rpm durante 10 min; posteriormente hay que separar el plasma y colocarlo en un tubo de 15
ml para su almacenamiento, el cual tiene una caducidad de 12 meses cuando se almacena a
menos 30C. Esta es obtenda debido a que el rea de alimentos lo requieren para sus
pruebas de coagulasa positiva.

10.5 Puncin cardiaca

La extraccin de una gran cantidad de sangre proveniente de roedores. Se realiza a menudo


perforando el msculo cardaco. Se puede alcanzar el corazn a travs de los espacios
intercostales con el animal acostado de lado, o introduciendo la aguja debajo del esternn
con el animal acostado de espaldas. La sangre se debe extraer lentamente para impedir el
colapso del corazn. Este es un procedimiento peligroso, ya que se puede lacerar el pulmn,
el sacopericrdico o la pared del corazn sin desearlo, matando as al animal. Por lo tanto
este procedimiento debe ser realizado bajo anestesia general y con cuidado. La tcnica
se usa principalmente como un procedimiento terminal (sin supervivencia), en el
que los animales se sacrifican despus de extraer la sangre.20

11. BAJA Y SACRIFICIO

Aquellas situaciones que producen dolor o incomodidad a los humanos, pueden tambin
producirlas a otras especies de vertebrados, el personal encargado tiene la obligacin tica
de evitar o reducir al mximo tales situaciones antes, durante y al finalizar los
experimentos; por lo tanto los animales deben recibir una muerte digna, rpida y con un
mnimo de dolor, por lo que se procura la eutanasia con sobredosis de anestsicos o bien
por inhalacin de gases como el CO2. Los mtodos de eutanasia fsicos (electrocucin,
desnucamiento, decapitacin o puncin cardiaca) deben ser evitados siempre que sea
posible. 25

En la NOM-062-ZOO-1999 se describe que la eutanasia son los procedimientos empleados


para inducir de manera humanitaria la muerte de los animales, con el propsito de eliminar
o disminuir al mnimo e dolor o estrs previo y durante el procedimiento; causando una
rpida inconsciencia, paro cardiaco y/o respiratorio y prdida de la funcin cerebral.
Despus de haber concluido la prueba, se procede a la baja de los animales la cual se
registra en la Bitcora de eutanasia y debe realizarlo el analista que hizo el ensayo.

11.1 Dislocacin cervical

La NOM-062-ZOO-1999 menciona que este mtodo slo debe utilizarse para sacrificar
animales que pueden manejarse con facilidad y que tengan el crneo relativamente fino
(ratas, ratones, que pesen menos de 200 g. y en cobayos, conejos que pesen menos de 1
Kg). Es preciso cierta habilidad manual pero una vez que se haya familiarizado con la
tcnica, el recelo y el sufrimiento del animal es mnimo y la muerte es rpida.

41
Cuando el mtodo es ejecutado apropiadamente, induce inconsciencia rpida. Se aplica
porque no contaminan los tejidos con substancias qumicas.

Ratones y ratas menores a 200g se toma al


animal de la base de la cola con una mano para
su acomodo y colocar al mismo sobre una
superficie donde se sostenga. Los dedos ndice y
pulgar de la otra mano, se colocan sobre la base
del crneo atrs de la mandbula y ejerciendo
traccin hacia atrs a travs de la base de la cola,
ocasionando la dislocacin (figura 51).
Figura 51 Dislocacin de ratn.

Conejos menores a 1 kg se coloca al animal


sobre una superficie lisa, con una mano tomar al
animal y dirigir las patas traseras caudalmente;
los dedos ndice, anular, medio y meique de la
otra mano, se colocan sobre la base del crneo y
el dedo pulgar es colocado sobre el maxilar
inferior, acto seguido proceder a levantarlo y
llevar a cabo la hiperextensin del animal al
ejercer traccin de los miembros posteriores
hacia atrs, al tiempo de que la cabeza es
detenida y se le da un pequeo giro para
ocasionar la dislocacin. En la figura 52 se
ejemplifica otra manera como se puede realizar
ya que solo cambia la forma de apoyar al
conejo.

Figura 52 dislocacin en conejo.26

Cobayo est tcnica se realiza coloca al animal sobre una superficie lisa; con una mano
sujetar el cuello y con la otra sujetar los miembros posteriores. Enseguida, realizar un
movimiento de traccin con ambas manos, lo suficientemente fuerte como para lograr la
dislocacin de una solo intencin.

11.2 Dixido de carbono

Es un gas comprimido, barato, no inflamable, no explosivo, seguro de operacin para el


personal, no se acumula en los tejidos y no deforma la arquitectura celular, de acuerdo a la
norma NOM-062-ZOO-1999, es el mtodo ms recomendable para la eutanasia de varias
especies de mamferos debido a su rpido efecto depresivo y anestsico que conduce a la
muerte por hipoxia en pocos minutos.15

42
Se gasifica la caja de plstico o unicel (30mmhg) previa a la introduccin de los animales;
posteriormente se coloca dentro de la caja animales de la misma especie y gasificando con
CO2 (en ratas y ratones aproximadamente 1 min y medio; y para cobayos 3 min); se revisan
los signos vitales del animal para determinar su muerte (latidos de corazn, reaccin ocular
y respiracin figura 53).

Figura 53 Revisin signos vitales

11.3 Sangrado

Este mtodo se puede llevar a cabo en ratones, cobayos y conejos bajo profunda sedacin,
anestesia o conmocin y cuando el producto de inters, es la sangre o derivados. El
procedimiento se realiza como lo indica en el punto de obtencin de fluidos, apartado 10
del presente escrito. Despus de obtener la sangre se procede a colocarlos en la caja con
CO2 para garantizar su muerte.

11.4 Anestsicos

Este mtodo es ms recomendable siempre y cuando no cause miedo o estrs al animal. Los
animales asustados deben sedarse antes de aplicar el agente eutansico (cuadro 6).
La aplicacin de estos frmacos puede ser intraperitoneal o intravenosa y se realiza como se
mencion con anterioridad.

Cuadro 6. La dosis para lograr la eutanasia se indica a continuacin:

Especie Frmaco Dosis


Cobayos y conejos ketamina/xilacina mayores a 80 mg/ 5-10kg
Ratas y ratones ketamina/xilacina mayores a 100 mg/10 kg
La NOM-062-ZOO-1999 que se encuentran prohibidos el empleo, como nico agente eutansico, de
sustancias que inducen parlisis muscular sin causar inconsciencia, como lo son; el curare, succinil colina,
galamina, estricnina, sales de magnesio y potasio, pancuronio, decametonio, vecuronio, atracurio, pipecuronio
y doxacurio.

43
12. DESECHO DE ANIMALES

Despus de aplicar la eutanasia es imperativo que el analista verifique la muerte del animal,
confirmando el cese de los signos vitales (latidos de corazn, reaccin ocular y
respiracin).

La NOM 087- ECOL-SSA1-2002 se encarga de la proteccin, salud ambiental y el manejo


de los residuos peligrosos biolgicos infeccioso, como es el caso de los cadveres, agujas,
desechos patolgicos entre otros, clasificndolos en tres niveles los establecimientos.

Cuadro 7. Clasificacin de los establecimientos generadores de residuos peligrosos


biolgico-infeccioso.27

NIVEL I NIVEL II NIVEL III

Unidades hospitalarias de 1 a Unidades hospitalarias de 6 Unidades hospitalarias de


5 camas e instituciones de hasta 60 camas; ms de 60 camas;
investigacin con excepcin
de los sealados en el Nivel Laboratorios clnicos y Centros de produccin e
III. bancos de sangre que investigacin experimental
realicen anlisis de 51 a 200 en enfermedades
Laboratorios clnicos y muestras al da; infecciosas;
bancos de sangre que
realicen anlisis de 1 a 50 Bioterios que se dediquen a Laboratorios clnicos y
muestras al da. la investigacin con agentes bancos de sangre que
biolgico-infecciosos, o realicen anlisis a ms de
Unidades hospitalarias 200 muestras al da, o
psiquitricas. Establecimientos que
generen de 25 a 100 Establecimientos que
Centros de toma de muestras kilogramos al mes de RPBI. generen ms de 100
para anlisis clnicos. kilogramos al mes de RPBI.

Conforme a la tabla anterior el bioterio se clasifica en nivel II en cuanto a los residuos biolgico-infecciosos,
ya que se generan desechos patolgicos como lo son los cadveres de ratones, ratas, cobayos, conejos,
rganos y todo lo que ha tenido contacto con la sangre y sus derivados entre otros punzocortantes (agujas,
navaja de bistur) y no anatmicos (medios de cultivo, la cama de los ratones).

La norma tambin marca que se deben seguir las siguientes disposiciones:


Identificar los residuos
Envasado de los residuos
Almacenamiento temporal
Recoleccin y transporte externo
Tratamiento
Disposicin final.27

44
En el cuadro 8 se indica cmo se tienen que identificar y envasar los residuos ya sean
recipientes o bolsas al igual que el color del mismo, para su adecuado manejo

Cuadro 8 envasado e identificacin de los residuos en base al color del contenedor,


conforme a la NOM 087- ECOL-SSA1-2002
TIPO DE RESIDUOS ESTADO ENVASADO COLOR
Fsico
Sangre Lquidos Recipientes hermticos Rojo
Cultivos y cepas de agentes Slidos Bolsas de polietileno Rojo
infecciosos
Patolgicos Slidos Bolsas de polietileno Amarillo
Lquidos Recipientes hermticos Amarillo
Residuos no anatmicos Slidos Bolsas de polietileno Rojo
Lquidos Recipientes hermticos Rojo
Objetos punzocortantes Slidos Recipientes rgidos Rojo
polipropileno
Las bolsas debern ser de polietileno de color rojo traslcido de calibre mnimo 200 y de color amarillo
traslcido de calibre mnimo 300, impermeables y con un contenido de metales pesados de no ms de una
parte por milln y libres de cloro, adems debern estar marcadas con el smbolo universal de riesgo
biolgico y la leyenda Residuos Peligrosos Biolgico-Infecciosos.

Los desechos patolgicos se colocan en bolsas amarillas como se menciona, se pesan e


identifican con plumn indeleble, el peso, iniciales del analista y fecha. Posteriormente
depositan en el congelador del rea de bioterio, destinado para almacenar los cadveres
temporalmente (figura 54).

Figura 54 se colocan los cadveres en el congelador a -21 C aproximadamente.

Dicho peso se registra en la Bitcora de animales sacrificados. Estos residuos son


entregados semanalmente a una compaa colectora de Residuos Peligrosos Biolgico
Infecciosos (RPBI), al igual que se entregan los contenedores de punzocortantes y los
residuos no anatmicos, para posteriormente ser incinerados.

45
CAPITULO II
ACTIVIDADES REALIZADAS

13. JORNADA LABORAL

La jornada laboral es de lunes a viernes de 07:00 horas a 17:00 horas, de ser necesario se
cubre tiempo extra, hasta terminar todas las labores del da, si alguna pruba lo requier se
asiste los sbados.

Al llegar al laboratorio es necesario colocarse el equipo de proteccin, para despus revisar


a los animales, temperatura y humedad de los cuartos, verificar la balanza, las pruebas a
realizar, si se cuenta con todo el material necesario para empezar incluyendo a los animales,
se procede a realizar la prueba registrndose en las bitcoras todas las anotaciones. Tanto
en bitcoras como en formato se deben llenar con pluma azul, por cuestiones de calidad, ya
que de esta manera se impide duplicar los documentos, al cancelar los espacios se coloca
una lnea de derecha a izquierda cruzando todo el espacio a cancelar, despus se colocan las
iniciales del analista, junto con la fecha.

Cabe mencionar que los formatos que presentaremos sern modificados, por fines de
confidencialidad del laboratorio.

14. EQUIPO DE PROTECCIN

Solo personal autorizado puede ingresar al


bioterio ya que la credencial de trabajo tiene un
chip especial con la cual solo el personal
autorizado puede ingresar a las reas, vistiendo
la indumentaria especfica y obligatoria, la cual
es la filipina (nica del rea de color guinda),
cofia, zapatos del trabajo y botas quirrgicas
(cuando se pasaba del rea de oficina a los
cuartos de bioterio); si se va a tener contacto
directo con los animales o se preparar alguna
muestra se utilizan guantes, cubre boca y lentes
de seguridad (figura 55). Al igual en el rea
est prohibido ingerir alimentos, as como el
uso de tabaco, joyera y la aplicacin de
maquillaje siguiendo la NOM-062-ZOO-1999.

Figura 55. Revisin diaria de los animales utilizando el


equipo de proteccin obligatorio

46
15. REVISIN DIARIA DE LOS ANIMALES

Todos los das al inicio y al final de la jornada laboral debe hacer una revisin de los
animales, si se encuentran decados, con alteraciones fsicas, decesos, o estables; los
hallazgos se anotan en el formato de supervisin de los animales alojados en el bioterio;
cada cuarto cuenta con dicha hoja pegada en la puerta (formato1).

Formato 1. Supervisin de los animales alojados en el bioterio

Fecha Hora Analista Observaciones Notificaciones

15. REVISIN DE TEMPERATURA Y HUMEDAD

Estas se revisan al inicio y final de la jornada, en cada uno de los cuartos ya que
generalmente la exposicin de los animales no adaptados a temperaturas superiores a los
29.4C o por debajo de 4.4C que no cuentan con acceso a proteccin en un refugio u otro
mecanismo, pueden producir efectos clnicos. Los animales se pueden adaptar a
condiciones extremas mediante mecanismos morfolgicos, fisiolgicos y de conducta, pero
tales adaptaciones llevan tiempo y pueden alterar los resultados experimentales o afectar los
rendimientos segn la National Research Council, 2002.

Las instalaciones de los animales de laboratorio en experimentacin, deben mantenerse a


una temperatura estable dentro de los cuartos, misma que oscila de acuerdo a lo establecido
en el cuadro 9.

Cuadro 9. Rangos de temperatura (C) y humedad relativa (%) del bioterio conforme a la
NOM-062-ZOO-1999.

ANIMAL Grados centgrados Humedad relativa


Ratn, rata, hmster, jerbo, cobayo 18-26C 40-70%

Conejo 16-26C 40-70%


Perro, gato, primates no humanos 18-29C 40-70%

Porcinos 16-27C 40-70%


Nota: Temperatura tomada con termmetro de bulbo seco 15.

47
La temperatura y humedad se apuntan en el formato de registro de temperatura de cada
cuarto, en el caso de que se encuentr fuera de rango 1C antes de los lmites, se registra y
se notifica a la jefatura, este a su vez le norifica a metrologa los cuales revisan la instalacin
y realizan el mantenimiento pertinente (Formato 2).

Formato 2. Registro de Temperatura y humedad en el cuarto de cobayos


Lmite de control: Identificacin del termohigrometro:
Temperatura: 18-26C
Humedad: 40-70 %
Mes: Analista:

Fecha y hora: Temperatura Humedad por la Temperatura Humedad por la


por la maana: maana: por la tarde: tarde:

Observaciones / notificaciones
Regisro de Temperatura y humedad

17. VENTILACIN

De acuerdo a la National Research Council 2002, el propsito de la ventilacin es


suministrar oxgeno adecuado, eliminar la carga trmica producto de la respiracin animal,
la iluminacin y los aparatos; diluir los contaminantes gases y partculas, ajustar el
contenido de la humedad del aire del cuarto y en donde sea apropiado criar diferenciales de
presin de aire entre espacios adyacentes.

Como lo seala la NOM-062-ZOO-1999 las instalaciones del bioterio en cuestin poseen


un sistema de ventilacin eficaz, que permite un recambio de aire ambiental que cubre un
rango mnimo de 15 a 18 recambios de aire por hora. El sistema funciona
ininterrumpidamente las 24 horas, a fin de favorecer una definicin ambiental aceptable
que no afecte negativamente la salud animal y la respuesta experimental. Dicho anlisis lo
analiza el rea de metrologa siendo registrados en el formato de recambios de aire y los
resultados son entregados a la misma para ser analizados por la jefatura de bioterio. En caso
de no percibir la ventilacin de los cuartos, se procede a notificar a la jefatura, est a su vez
notifica a metrologa para revisar su buen funcionamiento.

18. ILUMINACIN

La National Research Council, 2002, indica que la luz puede afectar la morfologa, fisiologa
y conducta de los animales. Los fotoestresores potenciales son: fotoperiodo,
fotointensidad y calidad espectral de la luz inapropiados; al establecer los niveles de
iluminacin apropiados para los cuartos de ocupacin animal, se deben considerar
numerosos factores que puedan afectar las necesidades de la luz que tienen los animales;
entre estos se incluyen la intensidad de luz, la duracin de la exposicin, la longitud de
onda, la exposicin previa, la pigmentacin del animal, las horas de exposicin en relacin

48
al ciclo circadiano, la temperatura corporal, el estatus hormonal, la edad, especie, sexo,
cepa o estirpe del animal. En muchas especies el fotoperiodo es un regulador crtico de la
conducta reproductiva y tambin puede alterar la ganancia de peso y la ingestin de
alimento. Se debe evitar o reducir al mnimo la exposicin accidental de la luz durante el
ciclo de obscuridad. Debido a que algunas especies no comen en condiciones de baja
intensidad de luz u obscuridad, tales horarios de iluminacin se beben limitar a una duracin
que no comprometa el bienestar de los animales.

Las instalaciones del bioterio de LEI se encuentran iluminadas mediante luz artificial tipo
luz de da usando lmparas fluorescentes. El control de los ciclos de luz se efectuar por
medio del uso de timer automticos, ajustados de acuerdo con las necesidades de los
animales en cuestin. La intensidad lumnica no debe exceder de 1,345 lmenes para el
desarrollo de tareas generales de limpieza, observacin y registro dentro de los locales. Sin
embargo, debe considerarse la recomendacin de mantener 300 lmenes de intensidad
lumnica para reas de alojamiento de roedores, cumpliendo con la NOM-062-ZOO-1999.

Los ciclos de iluminacin del bioterio son de 12 por 12 de luz/obscuridad, regulados por un
controlador automtico que es verificado por el rea de mantenimiento. Este parmetro es
medido por el rea de metrologa cada mes. Los resultados se registran en el formato
iluminacin en las reas de bioterios y entregados a la jefatura. De igual manera si
observamos algun foco descompuesto se le notifica a jefectura y esta a su vez avisa a
metrologa.

19. RUIDO

En cuanto al control de ruidos las instalaciones cuentan con dispositivos de contencin y


control de ruidos. La intensidad de ruido no debe ser mayor a 85 decibeles (dB); como lo
menciona la NOM-062-ZOO-1999. .

La National Research Council, 2002 indica que la exposicin a sonidos ms altos de 85 dB


puede tener efectos auditivos como no auditivos que incluyen eosinopenia y aumento del
peso de las adrenales y disminucin de la fertilidad en roedores.

Este control se logra mediante buenas prcticas de cuidado animal, la orientacin al personal
de anlisis y personal del apoyo. Dicho parmetro es evaluado cada mes por el rea de
metrologa durante una jornada laboral comn, los resultados son anotados en el formato
de ruidos en las reas de bioterios y entregados a la jefatura.

20. AGUA

El agua proporcionada a los animales es potable, purificada y de libre acceso, a travs de un


bebedero automtico con un tamao de gota adecuado para cada animal, y se coloca en el
momento en que se realiza el acondicionamiento de los animales. El personal de apoyo
revisa el agua todos los das. Siendo lavados los bebederos 2 veces a la semana.
Para purificar el agua se utiliza un filtro con lmpara de luz ultra-violeta (UV) cuyo
mantenimiento se realizaba cada 6 meses.

49
El agua filtrada es analizada cada 3 meses por el rea de Alimentos y Cosmticos bajo las
siguientes normas que son la modificacin de la Norma Oficial Mexicana NOM-127-
SSA1-1994, agua para uso y consumo humano, lmites permisibles de calidad y
tratamientos a que deben someterse el agua para su potabilizacin28; y la Norma Oficial
Mexicana NOM-092-SSA1-1994, bienes y servicios, mtodo para la cuenta de bacterias
aerobias en placa29. Los resultados son entregados a la jefatura del bioterio y analizados
para realizar acciones correctivas en caso de ser necesario.

21. VERIFICACIN DE LA BALANZA

Despus de revisar las condiciones


ambientales y fsicas de los
animales, se procede a verificar la
balanza analtica con un marco de
pesas cuyos pesos son 200, 100, 50 y
1g, (figura 56) imprimiendo en un
ticket y registrandose en la bitcora
de uso de la balanza analtica, donde
se coloca la fecha, hora de inicio,
hora final, nmero de registro,
motivo de uso, usuario y
observaciones; esto con la finalidad
de que se pueda hacer uso de ella y
comprobar su certeza al pesaje.

Figura 56 Verificacin de la balanza

22. RECEPCIN Y ALOJAMIENTO DE LOS ANIMALES

Se cuenta con un stock establecido ya que se tiene contemplado el trabajo que llega de
manera rutinaria, de ser necesario se solicita un mayor o menor cantidad de animales,
dependiendo de las pruebas a realizar.

A la llegada de los animales se revisa el Certificado de Salud en el que se debe mencionar


el cumplimiento, la calidad en que se producen, cran y mantienen hasta antes de su
embarque o salida del lugar de origen. Dicho certificado contiene la siguiente informacin,
como se menciona en NOM-062-ZOO-1999 (figura 57).

a. Nombre, direccin y razn social del proveedor.


b. Nmero de expediente que se otorga por la notificacin de aviso de funcionamiento.
c. Especie animal a la que se refiere el certificado.
d. Raza, cepa.
e. Cantidad total de animales.
f. Sexo, indicando la cantidad de cada uno.
g. Fecha de nacimiento, cuando se conozca.

50
h. Pruebas de laboratorio y/o gabinete, incluyendo fecha de la ltima realizacin para
determinar el estado microbiolgico cuando se requiera.
i. Nombre y firma del Mdico Veterinario Zootecnista certificado en animales de
laboratorio que avala el certificado.

Figura 57. Certificado de salud expedido por Harlan.

Figura 57. Se muestra el certificado de salud emitido por Harlan los cuales se encargan de traer a los ratones
y ratas, el Cinvestav se encargan de traer a los cobayos.

A continuacin se muestra la hoja anexa al certificado donde se encuentran las pruebas de


laboratorio realizada por el proveedor a sus animales (figura 58).

51
Figura 58 monitoreo de salud 8

52
Para una mejor visualizacin se muestran la evaluacin microbiolgica:

Evaluacin microbiolgica

Serologa Ratn
Cilia Associated Respiratory Bacillus (CAR Bacillus)
Clostridium piliforme
Ectromelia
Enchephalitozoon cuniculi
Hantaan virus
Lactic Dehydrogenase-Elevating Virus (LDEV)
Lymphocytic Choriomeningitis (LCM)
Mouse Adenovirus 1+2
Mouse Cytomeglovirus (MCMV)
Mouse Hepatitus Virus (MHV)
Mouse K Virus
Mouse Minute Virus (MMV)
Mouse Norovirus (MNV)
Mouse Parvovirus (MPV)
Mouse Rotavirus (EDIM)
Mycoplasma pulmonis
Pneumonia Virus of Mice (PVM)
Polyoma Virus
Reovirus 3 (Reo-3)
Sendai
Theilers Mouse Encephalomyelitis (TMEV)

Serologa Rata
Cilia Associated Respiratory Bacillus (CAR Bacillus)
Clostridium piliforme
Enchephalitozoon cuniculi
Hantaan virus
Kilhams Rat Virus (MMV)
Lymphocytic Choriomeningitis (LCM)
Mouse Adenovirus 1+2
Mycoplasma pulmonis
Pneumonia Virus of Mice (PVM)
Rat Coronavirus (SDAV/RCV)
Rat Minute (RMV)
Rat Parvovirus (RPV)
Reovirus 3 (Reo-3)
Rotavirus
Sendai
Toolans H-1 (H-1)
Theilers Mouse Encephalomyelitis (TMEV)

53
PCR
Corynebacterium bovis (solo ratones desnudos)
Helicobacter spp (solo ratones, ratas y
Pneumocystis spp (slo animales inmunodeficientes y ratas, debido al agente causante
de la RRV)

Evaluacin microscpica
Ectoparsitos
Endoparsitos
Enteric protozoan
Lesiones patolgicas

Bacteriologa
De modo rutinario, se realizan cultivos de nasofaringe y ciego para controlar la presencia
de los siguientes microorganismos:

Bordetella bronchiseptica
Citrobacter rodentium
Corynebacterium kutscheri
Dermatofitos
Klebsiella oxytoca
Klebsiella pneumoniae
Pasteurella multocida
Pasteurella pneumotropica
Proteus spp
Pseudomonas aeruginosa
Salmonella sp.
Staphylococcus aureus
Streptobacillus moniliformis

De igual manera las cajas deben


estar debidamente identificadas y
que corresponda a los animales
solicitados en cuanto a especie,
cepa, sexo y peso. Ya que de esta
manera nos guiamos para separar
y colocar a los animales (fig. 59).

Figura 59 etiqueta del proveedor.

Posteriormente se procede a pesar a cada uno de los animales en el cuarto de inoculacin y


pesaje, asignndole un lote interno, fecha de entrada, especie, sexo, procedencia, cepa,

54
cantidad, edad o intervalo de peso, anotndolo en el formato de recepcin de animales
(formato 3). El pesar uno por uno, sirve para realizar una inspeccin externa de los
animales al igual que confirmar su sexo; si se encontraba algn hallazgo diferente se
notificaba a la jefatura y esta nos deca que proceda
(figura 60).

Figura 60 pesajes de los animales

Formato 3. Recepcin de animales

Fecha de recepcin: Lote asignado:


Especie: Cepa:
Sexo: Cantidad:
Lugar de origen: Peso promedio:

Peso de los animales:


1 6 11 16 21
2 7 12 17 22
3 8 13 18 23
4 9 14 19 24
5 10 15 20 25

Requisitos Analista: Observaciones:


Transporte:
Empaque:
Inspeccin:
En el formato 3 se muestra la hoja a llenar con todos los datos necesarios para poder llevar una trazabilidad de
la informacin al igual que autentificar que los animales recibidos correspondan a los solicitados.

Los animales recin llegados se revisan y cumplen con los requisitos, de acuerdo al
instructivo de trabajo:

55
Transporte: Debe contar con ventilacin para protegerlos de las condiciones
climticas externas.

Empaque: Evitar el hacinamiento, proporcionar agua y comida cuando este


indicado y protegerlos contra traumatismo y riesgo de zoonosis.

Inspeccin: Se verifican que no presenten signos sobresalientes de enfermedad


como lo son la piloereccin, anemia, deshidratacin, incoordinacin motora,
ectoparsitos o cualquier otra enfermedad, anomalas congnitas, de ser as se
procede al sacrificio del animal.

As mismo se les coloca la etiqueta de animales sin inocular (formato 4), donde se registra
la informacin necesaria de los animales para identificarlos con el mismo lote, fecha en
que termina su cuarentena y as poderlos utilizar.

Formato 4. Animales sin inocular


Fecha de llegada: Fin de la cuarentena (fecha):
Especie y cepa: Prueba a realizar:
Sexo: Lote interno:
Observaciones:
Formato 4 etiqueta que se coloca en la caja de los animales del bioterio, al ingresarlos.

En el caso de conejos se llena el formato 5 de identificacin de conejos y se coloca en la


parte posterior del comedero de cada jaula o en la puerta de los conejos ya que esta
identificacin est realizada con acrlico, lo cual permite que los conejos no lo quiten y que
perdure por ms tiempo en la jaula, la ventaja de este formato es que nos permite llevar
todo un historial del uso, por decirlo de alguna manera, de ese conejo en especial.

Formato 5. Identificacin de conejos


Fecha de llegada: Fin de cuarentena (fecha):
No. Animal Lote:
Sexo: Cepa:
Fecha:
Prueba:
Observaciones:

Formato 5. Etiqueta de conejos al ingresar y durante toda su estancia en el bioterio.

Despus se procede a colocarlos en el cuarto de adaptacin, hasta terminar el perido de


acondicionamiento o hasta su uso. Como hace mencin la NOM-062-ZOO-1999.

56
22.1 Distribucin de animales

Siguiendo las especificaciones de la NOM-062-ZOO-1999, las cajas y jaulas se mantienen


limpias, secas con cama de biruta y en condiciones
ambientales aceptables, ya que se controla la
temperatura y humedad.

Se colocan a los roedores en jaulas con las siguientes


dimensiones de 25x45x15 cm, se colocan hasta 10
ratones (figura 61) y no ms de 6 ratas (figura 62).

Figura 61 distribucin de los ratones

Cuando son ratas mayores a 400 g se coloca una por


jaula.

Todas cuentan con alimento ad libitum, al igual que


agua a libre acceso.

Figura 62 distribucin de ratas.

Los cobayos se colocan en jaulas ms grandes,


comunmente se llegan a colocar 6 cobayos por caja, y
se separan por sexo, ya que tienden a ser animales muy
precoces (figura 63).

Figura 63 distribucin de cobayos

Los conejos son colocados en jaulas metlicas


individuales. Dichas jaulas tienen ventanas en los
costados esto como enriquecimiento animal, para
poder sociabilizar un poco (Figura 64).

Figura 64 distribucin de conejos

57
22.2 Perido de adaptacin

El perido de estancia establecido para los animales


de nuevo ingreso para los roedores (ratas, ratones y
cobayos) es como mnimo de 24 horas y una semana
para conejos, esto en base a los instructivos de
trabajo o, de igual manera pueden permanecer en esta
rea hasta que sean utilizados en alguna prueba.

En ese cuarto son alojados los ratones, ratas y


cobayos, debido a que, se tiene un rack de
microambiente (figura 65).

Figura 65 rack microambiente, el cual se encuentra en el


cuarto de adaptacin.

23. PRUEBAS ANALTICAS

Despus de la revisin rutinaria de los animales al igual que de las instalaciones, se procede
a revisar las pruebas asignadas por la jefatura, por medio de las rdenes de estudio y
registrandose en la bitcora de muestras en proceso, donde menciona la clave de la prueba,
lote interno LEI, nmero de piezas entregadas o por entregar, animal en el que se va a
realizar, fecha de entrega y analista que va a realizar la prueba y observaciones.

Si se cuentan con los animales en las condiciones que indica la prueba, las muestras,
soluciones se procede a realizar la prueba, se registra en la bitcora de ingreso al bioterio, al
igual que la bitcora de consumo de animales donde se determinan los animales utilizados
al igual que el lote del producto.

De igual manera existe una bitcora independiente para los conejos llamada bitcora de
consumo de conejos, que cotiene los mismos datos.

Al terminar de registrarse se prepara la muestra para inocular, realizandose en el cuarto de


inoculacin y pesaje; de ah son colocados en el cuarto de animales en proceso cambiando
su etiqueta por animales inoculados (formato 6), esta etiqueta se puede aplicar tanto en
roedores como en conejos.

Formato 6. Animales inoculados

Fecha de inicio de prueba: Fecha de terminacin:


Prueba: No. Registro:
No. Animales: Lote de animales:
Observaciones: Analista:

58
23.1 Metodologas

Dichas metodologas estan basadas en la FEUM, Farmacopea Europea o las del mismo
cliente, aqu citaremos generalidades de las pruebas en base a las dos primeras, ya que las
del cliente no se pueden mencionar debido a la carta de confidencialidad firmada por la
presente.

23.1.1 Inocuidad general de productos biolgicos (MPB 0680)

Se comprueba la ausencia de toxicidad anormal inyectando por va intraperitoneal 0.5 ml


del producto de prueba a por los menos cinco ratones de 17 g a 22 g de peso y al menos una
dosis pero no ms de 5.0 ml por la misma va por los menos dos cobayos sanos de 250 a
350g de peso, de una cepa conocida y que no hayan sido empleados previamente.

Para la prueba se debe registrar el peso de cada animal inmediatamente antes de la inyeccin
y al final del periodo de la prueba el cual ser de 7 das y durante las cuales se revisan los
animales diariamente. Incluir al menos un animal testigo de cada especie de las
caractersticas especficas en cada grupo de prueba a los que se les inyecta el mismo
volumen de solucin salina fisiolgica. El producto se considera inocuo si los animales
sobreviven al perodo de prueba, no presentan signos significativos de toxicidad ni prdida
de peso. 30

En el laboratorio se ocupaban 5 ratones hembras por producto y otros 5 como testigo de la


cepa ICR con un peso de 17-22 g numerndolos del 1-10 y 2 cobayos de sexo indistinto por
producto, con otros 2 como testigo de la cepa Hartley con un peso de 250-350g. Conforme
se iba realizando la prueba se llena el formato 7 de inocuidad general de productos
biolgicos, el cual se presenta en la siguiente hoja.

Formato 7. Inocuidad general de productos biolgicos

Fecha de inicio de la Fecha de terminacin Lote de animales: No. De Registro:


prueba: de la prueba:
Control negativo y No. De piezas de las Identificacin del equipo:
lote: muestras: Micropipeta:
Micropipeta:

Muestra en ratones: Muestra en cobayos:

Peso inicial (g): Peso final (g): Peso inicial (g): Peso final (g):
1.-
-5.
Testigo en ratones: Testigo en cobayos:
Peso inicial: Peso final: Peso inicial: Peso final:
6.-
-10.
Analizo: Superviso Observaciones:

59
23.1.2 Seguridad general (MGA 0795)

Esta prueba permite detectar cualquier toxigenicidad inesperada o inaceptable que pudieran
haberse inducido durante su manufactura o que se hubiese desarrollado durante el
almacenamiento del producto al inyectar el producto de la prueba por va intraperitoneal en
ratones observndolos por un periodo de 3 a 7 das dependiendo del producto y al trmino
de este los animales deben de sobrevivir y no presentar signos significativos de toxicidad,
ni prdida de peso.30

Se ocupan 5 ratones hembras por muestra y 5 como testigo de la cepa ICR con un peso
entre los 18-25 g y se numeran como se mencion con anterioridad y se llena el formato 8.

Formato 8. Seguridad en ratn


Fecha de inicio de Fecha de terminacin Lote de animales: No. de Registro:
la prueba: de la prueba:

Control negativo y No. de piezas de las Identificacin del equipo:


lote: muestras: Micropipeta:
Micropipeta:

Muestra en ratones
Peso inicial (g): Peso final (g):
1-.
-5.
Testigo en ratones
Peso inicial: Peso final:
6.-
-10.
Clculos: Analiz: Observaciones:

23.1.3 Irritabilidad en piel de conejo (MGA 0515)

Esta prueba pone de manifiesto las reacciones inflamatorias locales que se presentan sobre
la piel intacta y erosionada de conejos, despus de la aplicacin de alguna substancia.30
Brinda informacin sobre los efectos adversos que pueden observarse, luego de la
aplicacin del producto en la piel de conejos y ofrece adems datos de toxicidad inicial para
fines de regulacin, calificacin, clasificacin, transportacin y estudios posteriores de
toxicidad crnica y subcrnica drmica del producto.31

60
Se aplica el producto sobre el dorso de 6 conejos nueva Zelanda rasurados, dividindolo en
4 cuadrantes, el cuadrante 1 y 3 solo se aplica el producto, en cambio en los cuadrantes 2 y
4 se irritan colocando el producto, y se observa a las 24 y 72
horas, observando si hay presencia de eritema, edema y
escarla (figura 66), se procede a evaluarla en una escala del 0-
4 como se menciona en el cuadro 10. Toda la informacin se
reporta en el formato de irritabilidad en piel de conejo.

Figura 66 se muestra los cuadrantes en los conejos

Cuadro 10 escala para evaluar es la siguiente32:


ERITEMA EDEMA
0 No eritema 0 No edema

1 Eritema ligero, apenas perceptible 1 Edema ligero, apenas perceptible

2 Eritema bien definido 2 Edema ligero con bordes sobresalientes


con elevacin definida
3 Eritema de moderado a severo
3 Edema moderado, con una elevacin
4 Eritema severo mxima de 1 mm, aproximadamente.

4 Edema severo, elevacin mayor de 1 mm


extendindose ms all del sitito de
aplicacin.

Se promedian los resultados obtenidos durante las 24 y 72 horas, a partir de estos promedios
se podr calcular el ndice de irritacin primaria (la cual se obtiene el promedio de eritema+
promedio de edema). Para la interpretacin de resultados, los productos se ubican en
alguna de las siguientes categoras (cuadro11).32

61
Cuadro 11 interpretacin de resultados.32

NDICE DE IRRITACIN CATEGORA TIPO DE PRODUCTO


PRIMARIA
0-1 No irritante Producto apto para bebe no deben de
1.1- 2 Ligeramente irritante ser mayor a 2.
2.1-5 Moderadamente Producto apto para adultos no mayor
irritante a5
5.1-6 Irritante moderado a Se bebe colocar la leyenda de
severo Precaucin producto irritante
6.1-8 Irritante severo Producto no aceptado para el uso en
humanos

Formato 9 Irritabilidad en piel de conejo


Fecha de inicio Fecha de terminacin de Lote de No. de Registro:
de la prueba: la prueba: animales:
Identificacin del equipo:
Micropipeta: Balanza:
24 Horas
Eritema y formacin de escarla: Formacin de edema:
Piel intacta Piel Piel intacta
Piel erosionada
erosionada
Conejo rea1 rea 3 rea2 rea4 Conejo rea1 rea3 rea2 rea4
1.- 1.-
-6. -6.
72 Horas
Eritema y formacin de escarla: Formacin de edema:
Piel intacta Piel Piel intacta Piel erosionada
erosionada
Conejo rea1 rea3 rea2 rea4 Conejo rea1 rea3 rea2 rea4
1.- 1.-
-6. -6.

Conejo Tipo de reaccin: Observaciones:


24 horas 72 horas
1.. Eritema
Edema
..6 Eritema
Edema
Contina en la siguiente pgina

62
Continuacin del formato 9 Irritabilidad en piel de conejo
Valores promedios 24 72 Promedio general
horas horas
Eritema
Edema
ndice de aceptacin primaria: promedio del
eritema+promedio de edema
Analiz: Observaciones:

23.1.4 Actividad biolgica de hormonas sexuales

Actividad estrognica

La actividad de la gonadotropina corinica es estimar por comparacin entre condiciones


dadas de su capacidad de aumentar la masa de las vesculas seminales (o glndula
prosttica) de ratas inmaduras, con respecto a la que presenta el Patrn Internacional de
gonadotropina corinica o la preparacin de referencia calibrada en Unidades
Internacionales. Se utilizan ratas macho inmaduras de la misma raza, de 19 a 28 das de
edad.

Distribuir las ratas aleatoriamente en seis grupos iguales de al menos cinco animales. Elegir
tres dosis de la preparacin de referencia y tres dosis de la preparacin en prueba, de modo
que la dosis menor sea suficiente para producir una respuesta positiva en alguna de las
dosis y que la dosis mayor no produzca una respuesta mxima en todas las ratas. Siendo las
dosis totales de 4, 8 y 16 UI. Inyectar por va subcutnea a cada rata la dosis diaria asignada
para su grupo durante cuatro das consecutivos a la misma hora cada da. El quinto da, se
sacrifican a las ratas y extraen las vesculas seminales.30

Otras hormonas que se pueden analizar son las siguientes: la hormona folculo estimulante
(FSH) en hembras; gonadotrofina corinica humana (HCG) y hormona luteinizante (LH) en
machos. Lo que cambia es la preparacin al igual que el tipo de hormona a analizar.

Se utilizan 6 ratas albinas por cada dosis (alta, media y baja) de la cepa Sprague Dawley,
segn la hormona a determinar es el sexo de eleccin de 40-50 g de peso, si el producto lo
requiere se pesan y marcara los animales, se inoculan va subcutnea a los ratones de 4 a 5
das continuos, al finalizar dicho periodo se procede a la obtencin de gnadas sexuales y al
pesaje de las mismas.

El formato 10 de potencia de hormonas sexuales es el mismo formato para cualquier


hormona que se vaya a analizar, de igual manera se llena al inicio y al final de la prueba,
colocando los pesos obtenidos, de las gnadas sexuales.

63
Formato 10 Potencia de hormonas sexuales

Fecha de inicio de la Fecha de Lote de animales: No. de Registro:


prueba: finalizacin:
Control negativo y lote: Datos del estndar: Datos de la Datos de la
Lote: intensificadora: muestra:
Caducidad: Hormona:
Concentracin:
Identificacin del equipo:
Micropipetas:
Muestra
Dosis alta Dosis media Dosis baja
Rata Peso del Rata Peso del Rata Peso del rgano
rgano rgano
1 1 1
2 2 2
3 3 3
4 4 4
5 5 5
6 6 6

Testigo Resultados
Rata Peso del Potencia:
rgano
1 Especificacin:
2
3
4
5

Clculos: Analista: Observaciones:

64
23.1.5 Evaluacin de eritropoyetina

La eritropoyetina es una hormona que permite la liberacin de eritrocitos de la mdula sea


en casos en los que se presenta una hipoxia, as mismo cuando los niveles de clulas rojas
aumentan esta hormona disminuye la liberacin de clulas rojas de la mdula sea. En
concentraciones muy elevadas la hormona puede inducir la liberacin de clulas de la lnea
roja an inmaduras.
Se utilizan ratones machos ICR de 25-30 g de peso, se utilizan 10 ratones por dosis las
cuales son alta media y baja, se realiza una sola inoculacin por va subcutnea,
previamente se enumeran para identificarlos y as poderlos regresar a su jaula inicial, ya
que dice la prueba que se tienen que mezclar. Al cuarto da se sangran, va ocular y se
sacrifican. De igual manera se llena el formato 11 durante la prueba.

Formato 11 Potencia por el mtodo de ratones normocitmicos.


Fecha de inicio de la Fecha de trmino de Lote de animales: No. de Registro:
prueba: la prueba:

Soluciones y fecha Datos del estndar: Identificacin del equipo:


de caducidad: Lote: Micropipeta:
Caducidad: Micropipeta:
Citmetro:

Clculos para ajustar la muestra y el estndar a la misma concentracin :

Especificaciones Resultados
Potencia % (de 80-120%)
Potencia de UI (1600-2400 3200 4800)

Analista: Observaciones:

23.1.6 Prueba de pirgenos (MGA 0711)

Consiste en el aumento de la temperatura en conejos como respuesta a la presencia de


agentes pirognicos, principalmente endotoxinas bacterianas, despus de la inoculacin
por va endovenosa de una solucin estril.30

Se colocan en el cepo 3 conejos por producto he introducir el termopar va anal, habiendo


realizado antes la prueba como un periodo de acondicionamiento, pero sin inocular
producto, en dicho periodo se seleccionan a los animales que hayan pasado el
acondicionamiento los cuales se dejan descansar 24 horas y despus se procede utilizarlos
ya corriendo la prueba e inoculndolos. Se dejan por 240 minutos para ver si se presenta
algn incremento de temperatura. Durante el proceso se llena el formato 12.

65
Formato 12 Pirgenos
Fecha: Lote de animales: Registro:
Hora de inicio: Hora de trmino: Hora de inoculacin:
Soluciones Identificacin de equipo: Dosis/ kg de peso:
Lote: Balanza gran atara:
Caducidad: Pirmetro:
Pipeta:

Clculos:

No. de conejo 1 2 3
Peso (kg)
Dosis de inoculacin
Temperatura inicial
(C)
Temperatura antes de 30 minutos
la inoculacin de la 60 minutos
muestra (C) 90 minutos
30 minutos
Temperatura despus 60 minutos
de la inoculacin de la 90 minutos
muestra 120 minutos
(C) 180 minutos
240 minutos
RESULTADO
Temperatura mxima
despus de la
inoculacin de la
muestra (C)
Ningn conejo debe tener un incremento mayor de 0,5 C con
ESPECIFICACIN
respecto a su temperatura control.

Analista: Observaciones:

En caso de que alguna de las pruebas no cumplan con los requisitos se procede a repetir la
misma en base a lo que marca la FEUM, la Farmacopea Europea o la metodologa del
cliente, de la misma manera se procede al llenando del formato de Resultados Fuera de
Especificaciones.

Despus de haber concluido la prueba se da de baja a los animales, como se mencion con
anterioridad.

66
24. LEGISLACIN

Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones tcnicas para la


produccin, cuidado y uso de los animales de laboratorio.

En Mxico la principal norma que regula el uso, cuidado y produccin de los animales de
laboratorio es la NOM-062-ZOO-1999 y de manera muy especial la que regula la
determinacin de irritabilidad en conejos ya sea ocular o cutnea es la NOM-039-SSA1-
1993.

Como se mencion al inicio, el laboratorio es tercer autorizado lo cual quiere decir que la
Secretara de Salud a travs de la Comisin Federal para la Proteccin contra Riesgos
Sanitarios (COFEPRIS), autorizo al laboratorio para emitir informes tcnicos respecto al
cumplimiento de requisitos establecidos por la Secretara o en las normas correspondientes,
expidiendo informes tcnicos que COFEPRIS reconoce para actos de autoridad.

Por lo tanto el laboratorio debe cumplir con ciertos lineamientos marcados por la
COFEPRIS como lo son:

NMX-EC-17025-IMNC-2006 la cual establece los requisitos generales para


la competencia en la realizacin de ensayos o calibraciones, incluido el
muestreo, es aplicable a los laboratorios en que los ensayos o las
calibraciones forman parte de la inspeccin y certificacin de productos.
NOM-177-SSA1-1998 establece las pruebas y procedimientos para
demostrar que un medicamento es intercambiable. Requisitos a que deben
sujetarse los terceros autorizados que realicen las pruebas.

En contraparte a la COFEPRIS, en los Estados Unidos se encuentra la Administracin y


Medicamentos Food and Drug Administration (FDA) la cual es responsable de determinar
la seguridad y eficiencia de los nuevos medicamentos y dispositivos mdicos antes de que
se apruebe su venta en los Estados Unidos, al igual que se encarga de monitorear el uso de
drogas y dispositivos despus de su aprobacin.22

Existen otras instituciones las cuales se encargan de la difusin y cuidado de animales de


laboratorio como lo son la Asociacin Mexicana de la Ciencia de los Animales de
Laboratorio (AMCAL), la cual se encarga de capacitar a las personas que manejan los
animales con plticas, talleres prcticos, apoyando a obtener la certificacin internacional
por parte de American Association for Laboratory Animal Science (AALAS), apoyndose
de la Gua para el cuidado y uso de los animales de laboratorio la cual proporciona
informacin bsica sobre el manejo de animales (tamao de jaula, mcroambiente y
microambiente, alimento, cama, agua, entre otros), el cuidado que debe tener el veterinario
hacia ellos (monitoreo de salud, procedimientos de la cuarentena, anestesia, eutanasia, entre
otros), las instalaciones fsicas (diseo del bioterio, pisos, paredes, techos, almacentamiento
entre otros).22

En todo bioterio debe existir un Comit Interno para el Cuidado y Uso de los Animales de
Laboratorio (CICUAL), cuyas funciones se tratarn a continuacin.
67
25. CICUAL

La norma NOM-062-ZOO-1999 marca que debe existir el CICUAL, cuya funcin es la de


asegurar la existencia de un mecanismo institucional encargado de revisar que el cuidado y
uso de los animales de laboratorio con propsitos de investigacin, pruebas y/o enseanza,
sea de manera apropiada y humanitaria.

LEI es una empresa donde se adquieren y mantiene animales de laboratorio, de


caractersticas genticas y sanitarias, especficas para atender las necesidades de los clientes
e investigadores de la empresa, realizando pruebas de laboratorio por lo tanto su categora
es de tipo B como se mencion con anterioridad.

Las atribuciones del Comit son las siguientes15,33

Debe reunirse regularmente y realizar un informe anual acerca del estado que guarda
el cuidado y uso de los animales de laboratorio en su institucin.
Verificar las normas y guas establecidas para el cuidado y uso de los animales de
laboratorio segn sus propias necesidades institucionales.
Evaluar y aprobar los protocolos de investigacin cientfica, desarrollo tecnolgico e
innovacin, pruebas y enseanza. Que impliquen el uso de animales.
Tener autoridad para detener procedimientos relacionados con el uso de los animales,
si no cumplen con el procedimiento aprobado por el comit y someter a eutanasia a
aquellos animales en los que el dolor no puede ser aliviado.
Resolver situaciones imprevistas no consideradas en la presente norma
Otras funciones de acuerdo a las necesidades establecidas por la Secretaria. Las
atribuciones del comit deben especificarse en el Manual de Organizacin y
Procedimientos.

El bioterio se encuentra verificado ante SAGARPA desde el 28 de Mayo del 2012.

26. PROBLEMAS DE SALUD PBLICA

Es interesante sealar la inconveniencia de alojar en un mismo local conejos y cobayos,


ante la posibilidad de transmisin de Bordetella bronchiseptica por parte de los conejos que
presentan una infeccin subclnica pero en los cobayos puede causar una enfermedad
respiratoria severa. 9

Las zoonosis en las que Rattus norvegicus acta como portador o transmisor incluyen la
leptospirosis, siendo la principal que ataca tanto a animales como a humanos, la cual se da
por contacto con la orina contaminada.

Tambin se han reportado infecciones por Streptobacillus moniliformis tambin conocida


como fiebre por mordedura de rata, cuya contaminacin es ocasionada por la mordida del
roedor cuya saliva se encuentra infectada. La fiebre selvtica o plaga ocasionada por
Yersinia pestis cuyo vector son las pulgas y se da por la mordida o inhalacin de la pulga.
Al igual la fiebre de conejo ocasionada por F. Tularensis que se da por la inhalacin y
68
contacto con la picadura de insecto o garrapata al igual que por comida y agua
contaminada.

27. EVALUACIN DEL PERSONAL

Como lo menciona la NOM-062-ZOO-1999, el personal de nuevo ingreso es sometido a


evaluacin mdica con el objeto de determinar riesgos potenciales individuales, la cual
incluye la realizacin de biometra hemtica completa, qumica sangunea, examen general
de orina y coproparasitoscpico, repitindose cada ao a todo el personal.

Asimismo, se realiza una evaluacin de desempeo laboral en qu consiste en una prueba


de pipeteo, evaluacin de puntualidad y faltas, un cuestionario en el cual el jefe inmediato
evala tu forma de trabajo durante el ao y una auditora interna a todo el personal.

28. ANALISIS COMPARATIVO DE LA BIBLIOGRAFA CON EL TRABAJO EN


LEI

Como se pudo observar a lo largo del trabajo, existen diferencias en el manejo e inoculacin
sugerida en la bibliografa con el que se realiza en el laboratorio, por lo tanto presento un
cuadro comparativo, mencionando las principales diferencias, lo cual nos ayudara a poder
determinar algunas recomendaciones al respecto.

Actividad Bibliografa Realizado en LEI


Transferencia de ratones Se realiza con pinzas, Se realiza con la mano
sostenindolo de la base de sostenindolo de la base de
la cola. la cola, de igual manera se
puede sostener del dorso.
Sujecin de ratones Se coloca en una superficie Se coloca en una superficie
donde se pueda adherir y con el dedo meique se toma
con el dedo ndice y pulgar de la base de la cola y se
sostienes de la base de la realiza ligera presin hacia
cola, despus con la otra la palma de la mano, con un
mano se sostiene movimiento rpido se
rpidamente de la piel suelta colocan los dedos ndice y
localizada en la parte pulgar detrs del cuello con
posterior de cuello entre el la finalidad de inmovilizarlo
dedo pulgar e ndice. y se sujeta del pliegue del
cuello para poder
manipularlo.
Sujecin de ratas Las ratas pueden sujetarse Las ratas se sacan de su caja
por diferentes medios, uno por la base de la cola o bien
de ellos implica tomarla de se sostienen de todo el
la base de la cola y colocarla cuerpo, despus se sujetan
sobre una tapa de alambre situando el dedo ndice y
donde se pueda agarrar. A medio alrededor del cuello

69
medida que se va moviendo por detrs de la mandbula,
hacia delante, con la otra el dedo pulgar y anular
mano se sujeta firmemente detrs de los codos de las
la parte trasera y la caja patas delanteras.
torcica, colocando el pulgar
e indicie directamente detrs Cuando se requiere inyectar
de los codos de la rata e de manera intramuscular a
inmediatamente se empuja las ratas de mayor tamao,
una de las patas hacia se colocan en una caja y con
delante, de modo que se ayuda de otro compaero se
cruzan debajo de la barbilla apoya en la reja dejando solo
de la rata. una hendidura donde se
Otro mtodo implica los puede sacar la cola.
mismos pasos iniciales, pero
el dedo ndice y el dedo Para as sostenerla con
medio se colocan firmeza y poderla inyectar
inmediatamente detrs de las en los glteos.
mandbulas para frenar la
cabeza.
Tambin se puede utilizar
guantes de cuero o
envolverlo en una talla.
Sujecin cobayo Los cobayos se manipulan Se sujetan con una mano por
con facilidad sujetndolos el tronco pero nunca se
por el tronco, con una mano, apoyan las extremidades
mientas se apoyan las posteriores debido a que se
extremidades posteriores en mueven distancias cortas, o
la otra, ya que, cuando se si son largas se cargan
coge al animal, por la parte apoyando al animal en el
dorsal del tronco podran antebrazo y recargndolo
producirse graves lesiones sobre nuestro cuerpo, de ser
pulmonares necesario se puede ayudar
de la otra mano para
mantenerlo quieto.
Sujecin conejo Se suspende de la piel floja Se suspende de la piel floja
de la regin del dorso y la del dorso pero nunca se
nuca del conejo, y con la sostiene de los muslos
mano izquierda se le sujeta debido a que dura poco el
por debajo de los muslos traslado de las jaulas se
como si se lo fuera a sentar colocan a los cepos o a un
sobre la palma de la mano, carrito, pero se tiene que
con el objeto de sostener el tener en consideracin que
peso del animal. la columna de los conejos es
muy frgil.
Cuando se colocan en mesas En el laboratorio no se
de acero inoxidable, los coloca ninguna toalla ya que

70
conejos se tienden a resbalar no duran mucho tiempo en
y eso ocasiona que se sientan la mesa, debido a que la
inseguros, por lo tanto se mayor parte del tiempo el
puede colocar una toalla, manejo se realiza dentro de
para que el conejo se sienta los cepos.
ms tranquilo y sea ms fcil
su manejo
Inoculacin SC en ratones Se deposita al ratn sobre la Se toma de la base de la cola
rejilla o tapa permitindole con el dedo meique y se
agarrarse a ella con las patas pega a la palma de la mano e
delanteras y levantar la piel inmediatamente se sostiene
de la espalda con los dedos con el dedo pulgar e ndice
ndice y pulgar formando un atrs de la mandbula
tringulo en el cual se evitando que se mueva, se
inocula. puede empujar un poco el
dedo medio con la finalidad
de que debajo de este se
inocule con la seguridad de
que se realiza de forma
correcta y sin temor de
atravesarnos con la aguja.
Inoculacin SC en rata Se puede realizar de misma Se realiza en el brazo de la
manera como se procede en rata, realizando un pequeo
el ratn, es decir en la zona pellizco con los dedos ndice
de la escpula, solo que si se y pulgar, formando un
realiza con frecuencia se pequeo pliegue en donde se
tiene que alternar el rea de inocula.
aplicacin.
Obtencin de sangre va No se recomienda la Se aplica presin continua y
caudal cauterizacin trmica, ya despus se procede a la
que puede ocasionar
cauterizacin trmica ya que
molestias. son demasiados ratones por
sangrar y es una forma
rpida de detener el
sangrado.
Obtencin de sangre por Se realiza previa anestesia Incidiendo la comisura
seno orbitario con una micropipeta externa se obtiene rpido la
sangre para proceder a la
eutanasia.

71
29. RECOMENDACIONES

En realidad son pocas las recomendaciones que puedo dar, ya que en general se manejan
con sumo cuidado y respeto a los animales con la intencin de disminuir el dolor que las
pruebas les puedan ocasionar. Basndome en la literatura citada, he podido observar que en
el caso de los conejos se podra mejorar su manejo, la forma de cargarlos con un soporte en
las patas no se realiza, al igual que colocar una toalla en la mesa de acero para evitar que
estos se resbalen, con esto se pretende mejorar su seguridad evitando posibles accidentes,
debido a que dichos animales son muy sensibles de la columna y es fcil que se fracturen
(aunque en el tiempo en que labore nunca tuvimos un accidente de este tipo).

Asimismo, se podran utilizar otros mtodos de inoculacin citados por la literatura y no


realizados en el laboratorio, como sera el inocular por va subcutnea a las ratas en la
zona de la escapula para ver pros y contras.

Como se tratan de animales SPF tambin se puede recomendar el uso de batas desechables
ya que estas cubren todo el cuerpo y las filipinas solo la parte superior del cuerpo.

Al igual que por principios quirrgicos se recomienda rasurar el rea de inoculacin o a


incidir.

30. CONCLUSIONES

El MVZ que labora en un bioterio obtiene mucho aprendizaje el cual es poco explorada y
tomado en cuenta por los estudiantes de dicha carrera, a lo largo de mi experiencia laboral
pude aprender desde como sujetarlos, realizar pruebas con ellos, dndoles las gracias por
brindar su vida, para un fin til como lo es el salvaguardar la salud de las personas que
utilizan dichos productos.

Si es cierto para poder desempear esta labor se tiene que tener la sangre fra, de lo
contrario realizas el trabajo con miedos, de forma ms lenta y pausada, lo que origina que el
animal sufra ms, por lo tanto me concientic que gracias a los animales de laboratorio se
pueden estudiar muchas enfermedades que afectan a los humanos, realizar anlisis de
vacunas al igual que la creacin de las mismas o de otros medicamentos, la mejora y
desarrollo en la investigacin.

Aprend la disciplina y manejo que se lleva a cabo en una empresa privada, los protocolos a
llevar, el llevar un control de calidad como son las bitcoras, el cual es un respaldo de todo
el trabajo realizado sirviendo como una herramienta para fundamentar en las auditoras
internas y externas. El tener una responsabilidad con la empresa y la sociedad ya que de los
resultados obtenidos, se decida si el producto era propio para su uso y venta o no.

Gracias al trabajo tengo una mayor organizacin en cuanto al manejo de informacin, saber
llevar bitcoras, la curiosidad por revisar cada uno de los animales albergados en el
laboratorio, conocer sus parmetros ambientales, conductuales, etolgicos, entre otros.

72
Pude experimentar que es lo que se siente una mordida de ratn y por lo tanto aprender a
sujetarlos para que esto no volviera a pasar, al igual el saber cul es la manera correcta de
sostenerlos con el fin de no lastimarlos a ellos y a su vez que no volviera a ser mordida, el
ser rpida en el manejo con el fin de disminuir lo ms posible su dolor.

Comprend que todo trabajo debe de estar sujeto a normas como lo es la NOM 062 ZOO-
1999 y el contenido de esta, al igual que el control de calidad en todo trabajo que se realice,
por otra parte, como se tienen que envasar, desechar y las especificaciones de los RPBI`S
para su desecho en base a la NOM-087-ECOL-SSA1-2002.

Conoc lo que es el CICUAL, su formacin y ser integrante de uno, comprender si las


pruebas realizadas respetaban lo establecido en las normas al igual que las instalaciones del
bioterio son idneas, el manejo de los animales, el indicado, al igual que el mtodo de
eutanasia y el desecho de los mismos, entre otras funciones.

73
31. GLOSARIO

Analgsico: Frmaco que disminuye el dolor

Anestsico: Frmaco que causa la parcial o total ausencia de sensibilidad

Animal de laboratorio: Animal usado en la investigacin cientfica, desarrollo tecnolgico e


innovacin, pruebas de laboratorio y enseanza.

Animal neonato: Animal recin nacido.

Animales axnicos: Aquellos que son libres de microorganismos demostrables.

Animales gnotobiticos: Aquellos que estn completamente libres de agentes patgenos o


que pueden hospedar uno o ms microorganismos claramente identificados.

Animales SPF: Aquellos que estn libres de patgenos especficos para la especie.

Anticoagulante: Substancia como el EDTA, citrato de sodio o heparina, que se aade a


muestras de sangre para impedir la coagulacin, permitiendo as que la sangre se separa en
sus componentes slido y lquido.

Asepsia: Mtodos o procedimientos que impiden o evitan el acceso de grmenes patgenos


o infecciosos.

Bioterio: Local destinado al alojamiento permanente de animales de laboratorio, para su


cra y reproduccin, que rene las condiciones necesarias para el trato humanitario de las
especies que ah sean explotadas.

Desechos de Sangre: incluye las clulas progenitoras, hematopoyticas y las fracciones


celulares o acelulares de la sangre resultante (hemoderivados).

Desechos no anatmicos: recipientes desechables que contengan sangre lquida. Materiales


de curacin, empapados, saturados o goteados con sangre o cualquier fluido corporal (liquido
sinovial, pericardio, pleural, cefalorraqudeo o peritoneal)

Desechos patolgicos: se refiere a los tejidos, rganos y partes que se extirpan o remueven
durante las necropsias, la ciruga o algn otro tipo de intervencin quirrgica, que no se
encuentre en formol. Tambin los cadveres y partes de animales que fueron inoculados
con agentes enteropatgenos en centros de investigacin y bioterios.

Desechos punzocortantes: los que han estado en contacto con humanos o animales o sus
muestras biolgicas durante el diagnstico y tratamiento, nicamente: tubos capilares,
navajas, lancetas, agujas de jeringas desechables, agujas hipodrmicas, de sutura, de
acupuntura y para tatuaje, bisturs y estiletes de catter, excepto todo material de vidrio roto

74
utilizado en el laboratorio, el cual deber desinfectar o esterilizar antes de ser dispuesto
como residuo municipal.

Desinfeccion: procedimiento destinado a destruir los agentes patgenos para los animales y se
aplican a los locales, vehculos, instrumental mdico quirrgico y de laboratorio, as como a
los utensilios diversos que sean utilizados en los establecimientos.

Se debe efectuar posterior a la limpieza. Edema: acumulacin de lquido en el espacio


tisular intracelular o intersticial y tambin en las cavidades del organismo. Cuando es
intenso provoca una hinchazn difusa de todos los tejidos y rganos del cuerpo.

Eritema: es una reaccin de la piel caracterizada por enrojecimiento.

Eritropoyetina o EPO: es una hormona glicoproteica que estimula la formacin


de eritrocitos y es el principal agente estimulador de la eritropoyesis natural.

Escara: tejido cutneo desvitalizado cuyo componente principal es la piel y a veces el tejido
subyacente, se torna seco y duro de color blanco perlado, grisceo o negruzco.

Eutanasia: Procedimiento humanitario empleado para terminar con la vida de los animales
de laboratorio, sin producirles dolor, angustia o sufrimiento.

FEUM: Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos.

Gonadotrofina corinica humana (HCG): hormona secretada por la placenta, que estimula
la esteroidognesis en las gnadas en virtud de un efecto biolgico parecido al de la LH; en
el macho estimula la produccin de testosterona y esperma, en la hembra la produccin de
estrgenos y particularmente de progesterona despus de la ovulacin.

Hematoma: Una acumulacin anormal de sangre que resulta de un dao a un vaso


sanguneo.

Hormona folculo estimulante (FSH) es la hormona folculo-estimulante la cual se produce


en la glndula hipfisis y que es responsable en la mujer de la maduracin de los vulos y
en el hombre de la espermatognesis.

Hormona luteinizante (LH) Hormona secretada por la hipfisis bajo la regulacin del
hipotlamo, es decir la que a mitad del ciclo estimula la liberacin del ovulo de un folculo
maduro. En el hombre contribuye tambin en el proceso de espermatognesis.

Hormonas: permanecen al grupo de los mensajeros qumicos, son sustancias liberadas por
clulas especializadas, localizadas en glndulas de secrecin interna o glndulas endcrinas
y transportadas por va sangunea o por el espacio intersticial hasta un rgano especfico o
tejido (blanco) donde acta controlando el crecimiento, el metabolismo, caractersticas
sexuales y otros procesos orgnicos.

Ketamina: Hipntico general de accin ultracorta derivado de la fenciclidina.

75
MPB: Mtodos de productos biolgicos

RPBI: Residuos peligrosos biolgico-infecciosos.


Pirgeno: cualquier agente productor de fiebre, es decir sustancias que actan sobre los
centros termorreguladores del hipotlamo produce un aumento de temperatura (fiebre). Por
lo general son molculas de alto peso molecular y de naturaleza polimrica, con los
lipopolisacaridos. Un pirgeno puede ser microbial, con los productos de la pared celular
de bacterias o no microbial.
Pruebas "in vivo": Procedimiento para identificar un constituyente, descubrir cambios de
funcin o establecer la naturaleza verdadera de un trastorno que se lleva a cabo dentro de
un organismo.

RPBI: Residuos Peligrosos Biolgico-Infeccioso.


Sacrificio humanitario: Acto que provoca la muerte sin sufrimiento de los animales por
mtodos fsicos o qumicos.

Sacrificio zoosanitario: Sacrificio humanitario que se realiza en uno o varios animales


como medida profilctica.

Salud: Estado normal de las funciones orgnicas de los animales.

Testosterona: Una hormona esteroide producida principalmente por los testculo, que es
responsable del desarrollo y mantenimiento de las caractersticas sexuales secundarias del
macho.

Tetraloga: Estudio del desarrollo fetal anormal.

Tranquilizacin: Efecto que se produce con la aplicacin de un sedante por va oral,


intramuscular o intravenosa en un animal.

Toxicologa: La ciencia de los venenos y los efectos dainos o nocivos que estas
substancias ejercen sobre los organismo.

Trombocitos: llamados tambin plaquetas, estas pequeas clulas contribuyen a la


coagulacin de la sangre.

Vectores: Organismos vivos que transmiten enfermedades.

Venas: Vasos sanguneos que traen la sangre pobre en oxgeno desde las diversas partes del
cuerpo de vuelta al corazn.

Vesculas seminales: Un par de glndulas en forma de bolsa que se encuentran a cada lado
de la vejiga urinaria del macho, las cuales secretan fluidos seminal y nutren y promueven el
movimiento de los espermatozoides a lo largo de la uretra.

Xilacina: Es un frmaco analgsico, tranquilizante, no narctico y relajante muscular, que


se administra por vas intramuscular o intravenosa.

76
32. BIBLIOGRAFA

1. Girldez D. A, y Zuiga J. M. La ciencia del animal de laboratorio y el procedimiento


experimental, Centro de Instrumentacin Cientfica, Universidad de Granada, Espaa 2001.

2. Benavides J. F. y Gunet J. L. Manual de gentica de roedores de laboratorio principio


bsico y aplicaciones, Universidad de Alcal, Madrid, 2003.

3. Fuentes P., Mendoza Y., Rosales F., Cisneros T.; Gua de manejo y cuidado de animales
de laboratorio: ratn, Centro Nacional de Productos Biolgicos Instituto Nacional de
Salud (Per), Lima, 2008.

4. Manson Katherine, Environmental enrichment for laboratory rats - VIP, Consultado en


julio 2013. Disponible en:
http://vip.vetsci.usyd.edu.au/contentUpload/content_2685/MasonKatherine.pdf

5. Normas tcnicas empleadas en el diseo y Construccin de un bioterio, 2012.


Consultado en junio - noviembre 2013.
Disponible en: animalbioterio.files.wordpress.com/2012/06/bioterios.pdf

6. Majerowicz Joel, Bioseguridad en bioterios de Experimentacin Riesgo Biolgico y


niveles de proteccin, parte 1 Procedimientos y Prcticas Aprendiendo de los animales
de laboratorio, de Bioterios .com, 2013. Consultado de junio-noviembre, 2008. Disponible
en:
http://www.bioterios.com/2013/post.php?s=2013-08-15-bioseguridad-en-bioterios-de-
experimentacin-parte-i

7. Quezada D. Introduccin al Manejo de Animales de Laboratorio, Roedores y Pequeas


especie, Universidad Autnoma de Yucatan, 1997.

8. Lista de Precios Harlan Laboratories Models 2012, Centro de Instrumentacin


Cientfica. Consultado en junio - noviembre 2013.
Disponible en: cic.ugr.es/descargas/ListaPreciosHarlan2012.pdf

9. Harkness J. y Wagner J. The biology and Medicine of Rabbits and Rodents; 5 ta.edicin,
Editorial Wiley-Blackwell, U.S.A 2010.

10. Fuentes P., Mendoza Y., Rivera R. Y Vara M.; Gua de manejo y cuidado de animales
de laboratorio: conejo, Ministerio de Salud, Instituto Nacional de Salud (Per), Lima,
2010.

11. Kaliste Eila and Mering Satu, The Welfare of Laboratory Animals; State Provincial
Office of Southern Finland Social and Health Affairs, by Springer, Finland, 2007.
Consultado en junio - noviembre 2013. Disponible en: deney.ibu.edu.tr/kitap/animals

77
12. Falconi de la Fuente E., Garca Magaa L., Martn Reyes O., Padrn Lpez R. M.,
Rivas Acua M. G., Vargas Siomn Georgina, Manual para el manejo de los animales
con fines de experimentacin y enseanza, Universidad Jurez Autnoma de Tabasco,
Divisin Acadmica de Ciencias Biolgicas, Enero 2010. Consultado el junio-noviembre,
2008. Disponible en:
http://www.archivos.ujat.mx/dacbiol/docencia/lineamientos/manejo_animales.pdf

13. Hrapkiewica K., Holmes D., Medina L., Clinical Laboratory Animal Medicine an
Introducction, 2a ed. Ed. Wiley John y Sons Incorporated, Iowa State University Press,
January 1998.

14. Arenciaba Arrebola, Fernndez R. Surez Fernndez y Sonora Millan, Consideracines


importantes acerca de la cuarentena de ratas y ratones como biomodelos experimentales,
Revista veterinaria argentina, noviembre 2010.Consultado en junio-noviembre. Disponible:
http://www.veterinariargentina.com/revista/2010/11/consideraciones-importantes-acerca-
de-la-cuarentena-de-ratas-y-ratones-como-biomodelos-experimentales-en-toxicologia-
revision

15. Norma Oficial Mexicana NOM-062-ZOO-1999, Especificaciones tcnicas para la


produccin, cuidado y uso de los animales de laboratorio.

16. Sumano, L. H. Gutierrez O. y Ocampo, Manual de Farmacologa Cnica para


pequeas espeies; 4ta Editorial McGraw Hill, Mxico, 2012.

17. Ruiz Cervantes J.G. y Hernndez valos I. Farmacologa para mdcos veterinarios
zootecnistas, UNAM Facultad de Estudios Superiores Cuautiln, 2005.

18. Saiz M. y Garca O. et al., Animales de laboratorio, cra manejo y control sanitario,
Ministerio de Agricultura Pesca y Alimentacin, Instituto Nacional de Investigaciones
Agrarias, Madrid, 1983

19. Report of the BVAAWF/ FRAME/ RSPCA/ UFAW joint working group on
refinement, Guidelines for the Administration of Substances, Including Routes ......
Laboratory Animals 35, 1-41, 2001. Consultado de junio-noviembre, 2008.
Disponible en: http://profiler.bgu.ac.il/general policy/Documents/Guide4Substances.doc
(Report of the BVAAWF/ FRAME/ RSPCA/ UFAW Laboratory Animals 35, 1-41, 2001)

20. Lawson T. Manual de entrenamiento LAT Tcnico de animales de laboratorio,


American Association for Laboratory Animal Science (AALAS), 4ta. Edicin, Estados
Unidos de America, 2000.

21. Ministerio de ciencia e innovacin junto con el Consejo Superior de Investigaciones


Cientficas, CEEA, Tcnicas de obtencin e inoculacin de muestras. Consultado en
junio-noviembre 2013.
Disponible en: www.cnb.csic.es/~animalario/CEEA/CEEA_Tecnicas61_2.doc.

78
22. Heinz K. y Hull R. et al., A good practice guide to the administration of substances
and removal of blood, including routes and volumes. Journal of Applied Toxicology 21
15-23 ao 2001. Consultado en junio - noviembre 2013.
Disponible en:

23. Angarita Bautista Leidy Yudith, Ed. Attribution Non-commercial. Consultado de junio-
noviembre, 2008. Disponible en:
http://es.scribd.com/doc/3288391/TECNICAS-DE-INOCULACION-Y-SANGRIA-DE-
ANIMALES

24. Primer Informe del Grupo conjunto de trabajo BVA/FRAME/RSPCA/UFAW sobre el


refinamiento, Extraccin de Sangre en los Mamferos y Aves de laboratorio, Artculo
original en Ingls publicado en Laboratory Animals (1993) 27, 1-22. Consultado de junio-
noviembre, 2008. Disponible en:
www.fcv.unl.edu.ar/.../ExtracciondeSangre

25. Vanda-Cantn B, La experimentacin biomdica en animales en los cdigos


bioticos; LABORAT-acta Vol. 15 No.2 2003; 15:69-73 Seccion humanidades y ciencia.

26. Gaviria M.G., Sistema de produccin cuncula, Universidad Nacional Abierta y a


distancia UNDA, leccin 36, Medelln, Colombia, 2010. Consultado de junio-noviembre,
2008. Disponible en:
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201530/SPC%202010%20I%20-
%20UNIDAD%203/leccin_36.html

27. Norma Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002, Proteccin ambiental- salud


ambiental- residuos peligrosos biolgico- infecciosos-clasificacin y especificaciones de
manejo.

28. Norma Oficial Mexicana NOM-127-SSA1-1994, Salud ambiental. Agua para uso y
consumo humano. Lmites permisibles de calidad y tratamientos a que deben someterse el
agua para su potabilizacin.

29. Norma Oficial Mexicana NOM-092-SSA1-1994, Bienes y servicios. Mtodo para la


cuenta de bacterias aerobias en placa.

30. Secretaria de Salud Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 10a ed, Mxico,
2011.

31. MGQ Rodrguez, Prueba de irritabilidad drmica primaria del Plantago major 1; Rev
Cubana plant med 1(3): 46-48 septiembre-diciembre, 1996 pg 46-48. Consultado en
junio-noviembre 2013.
Disponible en: www.bvs.sld.cu/revistas/pla/vol1_3

32. Norma Oficial Mexicana NOM-039-SSA1-1993, Bienes y Servicios. Productos de


Perfumera y Belleza. Determinacin de los ndices de irritacin ocular, primaria drmica y
sensibilizacin.

79
33. National Research Council, Gua para el cuidado y uso de los animales de
laboratorio; Academia Nacional de Medicina, Mxico, 2002.

80