SENATI

CARRERA DE
ADMINISTRACIN INDUSTRIAL

CURSO:

PROCESOS INDUSTRIALES

TEMA:

PRODUCCION DE TETRACICLINA

DOCENTE:

NILA CUTIPA

SEMESTRE:

III

AULA:

NAIDE301

ELABORADO POR:

JARA QUISPE DINA EDITH

REYNA RODRIGUEZ CRUZ
VARA MAMANI ANTHONY

2017

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INDICE

Contenido
Introduccin .......................................................................................................................................................3
Objetivos.............................................................................................................................................................4
I. General .......................................................................................................................... 4
II. Particulares.................................................................................................................... 4
Desarrollo experimental .....................................................................................................................................5
I. Materiales ..................................................................................................................... 5
Para la preparacin de la cepa de Streptomyces. ......................................................................................5
Para la preparacin del inoculo ..................................................................................................................5
Para la fermentacin liquida ......................................................................................................................6
Para el antibiograma ..................................................................................................................................6
II. Mtodos ........................................................................................................................ 7
1.1.1. Preparacin de la cepa para iniciar el cultivo ..............................................................................7
1.1.2. Preparacin del inculo para la fermentacin.............................................................................7
1.1.3. Fermentacin lquida ..................................................................................................................8
1.1.4. Antibiograma para la evaluacin de la actividad antimicrobiana y concentracin de la
tetraciclina en los medios de cultivo A y B. ................................................................................................9
Resultados ........................................................................................................................................................13
Anlisis de resultados .......................................................................................................................................14
Conclusiones .....................................................................................................................................................15
Referencias bibliogrficas .................................................................................................................................16

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Introduccin

Desde tiempos remotos el hombre ha sacado provecho de los microorganismos,

utilizndolos en su beneficio para producir alimentos y bebidas principalmente. Sin embargo,
desde el descubrimiento de la penicilina en 1929, tambin se han utilizado y cada vez en
mayor medida para producir antibiticos.

Los antibiticos son sustancias producidas naturalmente por los microorganismos

pero que no son esenciales para su crecimiento. Su funcin en la naturaleza es la de brindar
al microorganismo productor una ventaja competitiva sobre otra u otras poblaciones
microbianas al contar con un arma que las elimine del medio por el que compiten. Su uso
teraputico y medicinal en seres humanos, plantas y animales es destruir o detener el
crecimiento de microorganismos infecciosos que afecten al organismo vivo.

Fue la imperiosa necesidad de antibiticos durante la Primera Guerra Mundial lo que

llev primero a la bsqueda de mtodos ms eficaces para la produccin de penicilina, el
primer antibitico usado masivamente y descubierto por Alexander Flemming en 1929.
Posteriormente, la investigacin se encamin tambin a la bsqueda de nuevos antibiticos,
siendo la mayora obtenidos de bacterias aisladas del suelo, principalmente de las
pertenecientes al gnero streptomyces. As por ejemplo, tenemos a la actinomicina,
descubierta por Waksman en 1940, la estreptomicina, estreptotricina, tetraciclina y
clortetraciclina, por mencionar solo algunos de los ms conocidos.

Las tetraciclinas son un grupo de antibiticos de amplio espectro que se pueden

obtener por sntesis qumica o bien por sntesis microbiana a partir de cultivos de
Streptomyces aureofaciens, aunque se prefiere sta ltima sobre la sntesis qumica por su
bajo costo. Bsicamente, la estructura qumica de los tres derivados de tetraciclina es un
sistema de anillos de naftaceno al que se aaden diferentes tomos constituyentes. As, la
clortetraciclina tiene un tomo de cloro mientras que la oxitetraciclina un grupo oxhidrilo.

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Evaluacin de la actividad de un antibitico.

El mtodo ms utilizado para evaluar la actividad de un antibitico o bien la sensibilidad de

uno o ms microorganismos a ste es el antibiograma. Existen dos mtodos comunes para
realizar un antibiograma: por difusin en placa y por dilucin en caldo. El primer mtodo,
tambin conocido como mtodo Kirby-Bauer, consiste en sembrar sobre una placa de agar
al microorganismo de prueba y exponerlo a la accin del o los antibiticos a probar, que se
colocan sobre el medio slido en discos de papel filtro o cilindros metlicos para localizar su
difusin. Al cabo de cierto periodo de incubacin (comnmente 24 horas) aparecer un halo
de inhibicin alrededor del disco del o los antibiticos que indica la resistencia del
microorganismo. En el segundo, en tubos con caldo de cultivo se colocan distintas diluciones
del antibitico de concentracin conocida. Los tubos se inoculan con el microorganismo de
prueba y al trmino del periodo de incubacin se descartaran aquellos tubos en los que haya
turbiedad en el medio debida al crecimiento microbiano. El tubo que contenga ausencia de
microorganismos contendr la concentracin adecuada del antibitico.

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Objetivos

I. General

Utilizar un cultivo del actinomiceto Streptomyces aureofaciens para producir el antibitico

tetraciclina por fermentacin lquida en un medio sinttico.

II. Particulares

Evaluar la diferencia en la produccin de la tetraciclina al utilizar dos medios de cultivo

sintticos de diferente composicin.

Evaluar la actividad antimicrobiana y el rendimiento en la produccin del antibitico en el

medio de cultivo contra un estndar comercial de tetraciclina realizando un
antibiograma.

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Desarrollo experimental

I. Materiales

Para la preparacin de la cepa de Streptomyces.

Para la preparacin del inoculo

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Para la fermentacin liquida

Para el antibiograma

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II. Mtodos

1.1.1. Preparacin de la cepa para iniciar el cultivo

Preparar las cajas Petri de 15 x 100 mm conteniendo cada una por lo menos 30 mL de Agar

Waksman, de acuerdo con la siguiente formulacin:

Componente g/L
Glucosa 10.0
Peptona 5.0
KH2PO4 1.0
MgSO4*7H2O 0.5
Agar agar 20

Inocular las cajas Petri con suspensin de esporas o micelio de Streptomyces aureofaciens.
Incubar a 30C por un periodo de 10 das para favorecer la esporulacin.

1.1.2. Preparacin del inculo para la fermentacin

Preparar el medio para el inculo de acuerdo con la siguiente formulacin:

Componente Cantidad/L
Sucrosa 30.0 g
Harina de soya 5.0 g
Citrato de sodio (Na3C6H5O7*5H2O) 1.0 g
(NH4)2SO4 3.3 g
MgSO4*7H2O 0.25 g
KH2PO4 0.10 g
K2HPO4 0.10 g
CaCO3 1.00 g
MnSO4*4H2O 0.01 g
ZnSO4*7H2O 0.04 g
K2Cr2O7 0.016 mg
cido actico (CH3COOH) 0.40 mL

Colocar 50 mL de medio en un matraz Erlenmeyer de 125 mL y esterilizar a 121C por 15

minutos. Inocular con suspensin de esporas o suspensin miceliar (hechas con solucin
salina) de Streptomyces aureofaciens obtenidos de la cepa inoculada en el agar Waksman.
Incubar a 30C de 48 a 72 hr con agitacin reciprocante con 3 in a 97 ciclos/min o
agitacin rotatoria a 200 rpm.

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1.1.3. Fermentacin lquida

Preparar el medio A o B, segn la siguiente formulacin

Medio A Medio B
Componente Cantidad/L Cantidad/L
Sucrosa 30 g 40 g
cido ctrico
-------- 12.8 g
(H3C6H5O7*H2O
Citrato de sodio
2.5 g --------
(Na3C6H5O7*5H2O)
(NH4)2SO4 3.3 g 6.0 g
MgSO4*7H2O 0.25 g 0.25 g
KH2PO4 0.10 g 0.15 g
K2HPO4 0.10 g --------
CaCO3 1.0 g 11.0 g
cido actico (CH3COOH) 0.40 g --------
MnSO4*4H2O 0.01g 0.01 g
ZnSO4*7H2O 0.04 g 0.04 g
K2Cr2O7 0.016 mg 0.016 mg

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Colocar 50 mL de medio en un matraz Erlenmeyer de 125 mL y esterilizar a 121C por 15

minutos. Inocular el medio para fermentacin con 2.5 mL del inculo. Incubar a 30C
durante 4 a 6 das con agitacin rotatoria a 200 rpm.

1.1.4. Antibiograma para la evaluacin de la actividad antimicrobiana y

concentracin de la tetraciclina en los medios de cultivo A y B.

a) Preparacin de las placas para el antibiograma.

Preparar 1 caja Petri con 20 mL de medio para antibiticos 1 y 2 o agar Mueller-Hinton.

Paralelamente, preparar un cultivo de 24 horas de Escherichia coli en caldo Luria o
Staphylococcus aureus en caldo nutritivo. Empapar un hisopo estril en la suspensin del
cultivo cuidando de retirar el exceso presionando y rodando el hisopo sobre las paredes del
tubo antes de retirarlo. Extender de forma homognea (ver el esquema) en tres direcciones
sobre toda la superficie de la placa de agar, cuidando de no dejar sitios sin cubrir. Incubar
en posicin invertida a 37C durante 24 horas una vez que han sido colocados los discos con
el antibitico.

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Figura 1. Esquema para la siembra del inculo en las placas para antibiograma.

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b) Determinacin de la biomasa (en peso seco) y clarificacin del medio de cultivo

Retirar el matraz de fermentacin de la incubadora y filtrar el medio al vaco a travs de un

disco de papel filtro Whatman No. 4 (previamente tarado a peso constante) para retener la
biomasa. NO DESECHAR EL MEDIO FILTRADO. Posteriormente, colocar el papel filtro en un
horno de secado a 60C durante 1 hora. Dejar enfriar en un desecador y determinar la
biomasa producida en peso seco.

c) Antibiograma para determinar la actividad y concentracin de la tetraciclina

Preparar una solucin madre de 1000 g/mL a partir de un estndar comercial de

tetraciclina. De la solucin madre preparar las siguientes diluciones: 125 g/mL, 250 g/mL,

500 g/mL y 750 g/mL.

Colocar sobre las placas de agar Mueller-Hinton o medio para antibiticos 1 y 2 previamente
inoculadas con el microorganismo de prueba cinco crculos de papel filtro como lo muestra
el esquema, previamente embebidos en 200 L de cada una de las diluciones del estndar
de tetraciclina, incluida la dilucin madre. En el centro de la caja Petri colocar un sexto
crculo de papel filtro embebido en 200 L del medio de cultivo filtrado. Marcar sobre la tapa
de la caja las concentraciones correspondientes de tetraciclina. Incubar las cajas en posicin
invertida a 37C durante 24 horas.

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250

g/mL

125 500

g/mL g/mL

Medio
de
cultivo

1000 750

g/mL g/

Figura 2. Esquema para la colocacin de

los crculos de papel filtro en la caja Petri.

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Al trmino de la incubacin, medir el dimetro de los halos de inhibicin en los

estndares de tetraciclina y el medio de cultivo.

Para calcular la concentracin del antibitico en el medio de cultivo, graficar el

logaritmo de la concentracin de las diluciones de tetraciclina contra el dimetro
del halo de inhibicin. Interpolar en el grfico el dimetro del halo en el papel
embebido con el medio de cultivo para conocer la concentracin de antibitico en
el mismo. La ausencia de halo de inhibicin en el sexto crculo indicar que no
hubo produccin de antibitico.

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Resultados

Reportar los periodos reales y temperaturas de incubacin durante la

fermentacin y en el ensayo del antibiograma.

Reportar la biomasa producida en el medio de cultivo de fermentacin en peso

seco. Esquematizar o fotografiar los resultados de los antibiogramas para

cada antibitico

Trazar la grfica de del halo de inhibicin vs. Log [antibitico] y reportar la

concentracin para el antibitico en los medios A y B.

Reportar el dimetro del halo de inhibicin para los antibiticos obtenidos en los
medios A y B.

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Anlisis de resultados

Hacer un comparativo de las diferencias obtenidas en cantidad de biomasa,

actividad y produccin de antibitico entre los medios A y B, sustentando de
manera concisa y comprobable las respuestas con la bibliografa consultada.

Explicar si las diferencias obtenidas se deben a solo unos constituyentes del

medio de cultivo en particular o toda la formulacin en conjunto. Explicar tambin
el efecto de los componentes del medio de cultivo sobre la produccin del
antibitico.

Explicar tambin si el antibitico obtenido es tetraciclina, oxitetraciclina o

clortetraciclina y por qu.

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Conclusiones

Concluya de manera clara y concisa sobre el cumplimiento de los objetivos.

Incluya tambin perspectivas o puntos de vista.

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Referencias bibliogrficas

Brock D.T., Madigan T.M. Microbiologa. 6a ed. Prentice Hall. Mxico 1993

Darken, Berenson, Shirk, Sjolander. Production of tetracycline by

Streptomyces aureofaciens in synthetic media. Applied Microbiology. 1960

January; 8(1): 4651

Scragg, A. Biotecnologa para Ingenieros. Sistemas Biolgicos en

Procesos

Tecnolgicos. Ed. Limusa. Mxico 1992

ENCB-IPN. Microbiologa Prctica. 2 ed. Mxico 1998

ENCB-IPN. Manual de Prcticas de Bacteriologa Mdica. Mxico 2003

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