FACULTAD DE INGENIERIAS

ESCUELA DE INGENIERIA DE ALIMENTOS

GUIAS DE LABORATORIO

PLAN DE ESTUDIOS: Tecnologa en Alimentos

ASIGNATURA: Microbiologa de alimentos

2017
 NORMAS DE SEGURIDAD PARA EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA

INTRODUCCIN
Los laboratorios de microbiologa constituyen ambientes de trabajo especiales,
que pueden presentar riesgos de enfermedades infecciosas para las personas que
se encuentren en o cerca de ellos. El trabajo diario en el laboratorio es un trabajo
de grupo, en donde la actitud de cada uno de los integrantes ante las prcticas,
as como el entrenamiento que posean en las tcnicas requeridas para el manejo
de material contaminado, determinan su propia seguridad, as como la de sus
compaeros y la de la colectividad en general.
Es por ello que antes de comenzar con las actividades prcticas, todas las
personas involucradas (estudiantes y profesores) tenemos la obligacin de
conocer cules son las normas de seguridad a seguir en el laboratorio de manera
tal, que el trabajo se realice con un riesgo mnimo de exposicin, tanto para las
personas que lo ejecutan como para el medio ambiente.

El objetivo de este documento, es ofrecerle al estudiante una gua que contribuya

a lograr un ambiente de trabajo adecuado y seguro, durante la ejecucin de las
actividades prcticas en el Laboratorio de Microbiologa.

PRINCIPIOS DE BIOSEGURIDAD

Bioseguridad
La seguridad biolgica o bioseguridad, es la aplicacin del conocimiento, de las
tcnicas y de los equipos necesarios para prevenir la exposicin del personal, del
rea de laboratorio y del medio ambiente a agentes potencialmente infecciosos o
biopeligrosos.

Riesgo Microbiolgico
El Riesgo Microbiolgico se encuentra presente cada vez que se realiza una
actividad prctica en el Laboratorio, donde se requiera la manipulacin de cultivos
de microorganismos, los cuales pueden alcanzar concentraciones muy elevadas y
pueden llegar a provocar una infeccin si no son manipulados adecuadamente.

Vas de Infeccin
Los microorganismos pueden ingresar al organismo a travs de: la boca, los
pulmones, la piel (intacta o lesionada), la conjuntiva, etc. Las vas de
contaminacin ms frecuentes en el laboratorio se dan a travs de:
La boca
Comer, beber y fumar en el laboratorio.
Realizar transferencias con pipetas sin utilizar ningn tipo de proteccin.
Transferencia indirecta de microorganismos a travs de los dedos o utensilios
contaminados (lpices, bolgrafos, etc.).
 La piel
Inoculacin accidental con una aguja hipodrmica u otros instrumentos punzantes
o de vidrio, Cortaduras o rasguos.

Los ojos
Salpicaduras de materiales infecciosos.
Transferencia indirecta de microorganismos a travs de los dedos contaminados.

Los pulmones
Inhalacin de microorganismos transportados por el aire (aerosoles).

NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGA

Entrar al laboratorio en forma ordenada, dejar las carteras, libros y otros objetos
personales en el lugar que se les indique para tal fin. (Mueble de la entrada)

Llevar puesta la bata de laboratorio en todo momento. La misma debe

permanecer completamente cerrada.

Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar

la sesin prctica.

Lavar las manos con agua y jabn antes de realizar las actividades programadas,
antes de salir del laboratorio y siempre despus de manejar materiales que se
sabe o se sospecha que son contaminantes.

Trabajar cerca del mesn, adoptando una buena postura y estando fsicamente
cmodo.

Llevar un calzado apropiado, cerrado y de suela antideslizante en las reas de

laboratorio.

Evitar llevar en el laboratorio accesorios que podran ser fuente de contaminacin

(por ejemplo joyas).

Recoger el cabello largo. Para todo mundo es obligatorio el uso de toca

No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios,

aplicarse cosmticos ni ponerse o quitarse lentes de contacto en ningn rea del
laboratorio.

Conocer el manejo de todos los equipos y reactivos a emplear antes de iniciar las
actividades indicadas en la prctica. Si usted tiene alguna duda, dirjase al
profesor.
 Mantener el rea de trabajo ordenada, libre de libros, cuadernos u objetos
personales, exceptuando aquellos equipos y materiales necesarios para la
realizacin del trabajo prctico.

Tener cuidado con el alcohol cuando manipule el mechero. Nunca debe dejar
ste desatendido.

Regresar los reactivos y equipos empleados (microscopio, mechero, etc.),

limpios de manera ordenada a su respectivo lugar una vez finalizada la actividad.
Reporte cualquier dao de los mismos al profesor.

Colocar los materiales de vidrio contaminados (laminas) en los recipientes

dispuestos para tal fin. Nunca lavar material contaminado; devolverlo en la
bandeja que fue entregada con el material para que el personal de laboratorio lo
esterilice; por ejemplo: las pipetas en los pipeteros, tubos y placas de Petri, etc.

No usar ningn reactivo que no est debidamente identificado, verificar las

etiquetas de los mismos y estar seguro de cmo emplearlo.

No devolver sustancias a sus envases originales.

Emplear la propipeta al medir lquidos. Est rigurosamente prohibido pipetear con

la boca. De igual manera las pipetas tendrn tapones de algodn para reducir la
contaminacin de estos dispositivos de pipeteo.

Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el profesor y descritas en

la gua de prctica, no llevar a cabo experimentos no autorizados.

Reportar inmediatamente cualquier accidente al profesor (derrame de material

contaminado, heridas, quemaduras, etc.), ninguno puede ser catalogado como
menor.

Emplear tcnicas aspticas para el manejo de cultivos de microorganismos.

MEDIDAS EN CASO DE EMERGENCIA

A continuacin mencionaremos los pasos que se deben seguir en caso de que
ocurran los siguientes accidentes:

Derrame de material biolgico sobre el cuerpo:

Remover la ropa inmediatamente.
Lavar vigorosamente el rea expuesta con agua y jabn por un minuto.
Reportar el incidente al profesor.
Buscar atencin mdica si es necesario.
La ropa contaminada debe ser colocada en una solucin desinfectante antes de
ser lavada.
 Salpicaduras en los ojos con materiales biopeligrosos:

Lavar inmediatamente el globo ocular e interior de la superficie del prpado con

abundante agua durante 15 minutos aproximadamente. Abrir el ojo para asegurar
efectivamente el lavado, comenzando por los prpados.
Reportar el incidente al profesor.

Cortadas menores y heridas por pinchazo:

Lavar vigorosamente la herida con agua y jabn por varios minutos.
Aplicar un antisptico adecuado
Reportar el incidente al profesor.

En el caso de derrames:
Reportar el incidente al profesor.
Colocarse guantes y cubrir con papel absorbente el rea del derrame.
Verter un desinfectante adecuado y dejar actuar por el tiempo necesario.
Retirar el material absorbente junto al material roto y colocarlos en un recipiente
para residuos contaminados o bolsa de desechos, la cual debe esterilizarse junto
con los guantes utilizados.
Limpiar y desinfectar nuevamente el rea empleando nuevas toallas de papel y
desinfectante.
Lavarse las manos con abundante agua y jabn

El xito de estas normas depende de la sinceridad, la constancia, la

participacin activa y cooperativa de cada estudiante, por ello antes de
asistir al laboratorio, deben leer el fundamento y las actividades a realizar,
para as evitar posibles accidentes, con el conocimiento y las tcnicas de
trabajo apropiadas.
 NORMAS GENERALES PARA LA ELABORACION DE INFORMES DE
LABORATORIO

Las ideas e investigaciones cientficas deben someterse a verificaciones por

parte de otros investigadores a fin de determinar su validez, para ello es
necesario que las personas que investigan comuniquen los resultados de sus
trabajos, directamente o en algn medio de publicacin.

El informe de laboratorio es el ejercicio que permite al estudiante usar estas

tcnicas y normas de comunicacin, que se usan para transmitir los hallazgos
en forma clara y precisa. Un informe se elabora bsicamente con las
anotaciones de laboratorio, por ello es necesario tomar los datos y dibujos en la
forma mas clara posible.

Un informe debe contener bsicamente la siguiente informacin:

a) Titulo del trabajo: Breve y exacto, de tal forma que el lector pueda
tener una idea rpida de su contenido.
b) Nombre de los autores: Se escribirn indicando el apellido y luego el
nombre completo, separados por comas.
c) Resumen: Muy brevemente se especifica que se hizo, la metodologa
utilizada y los resultados obtenidos.
d) Introduccin: En ella se especifica el problema investigado, su
importancia y justificacin. los objetivos y/o propsitos de la
investigacin,
e) Materiales y mtodos: Se describen las tcnicas utilizadas, teniendo en
cuenta los equipos, reactivos y materiales. La descripcin debe ser muy
clara, de tal forma que permita a otras personas replicar las tcnicas
utilizadas. La redaccin se hace en pasado y en tercera persona, Ej:
Se tomo el cultivo con el asa y se sembr sobre una caja de petri
f) Resultados: La presentacin de los resultados es fundamental, ya que
en esta parte se describen los resultados obtenidos, los cuales se
ilustran con tablas, figuras, fotografas y cualquier otro tipo de
representacin que abrevie y de claridad a la presentacin de los datos
obtenidos.
g) Discusin: Este es el eje central del informe, en donde se hace una
interpretacin de los resultados obtenidos, se hace uso de la capacidad
de anlisis del investigador, aqu se debe analizar la informacin
obtenida y se confronta con otros investigadores, se describen tambin
las causas de error.
h) Conclusiones: En forma breve se resalta la importancia del trabajo
realizado, as como los resultados obtenidos despus de haber sido
analizados.
i) Referencias bibliogrficas: Se elabora una lista de la literatura
consultada, segn las normas establecidas para elaboracin de
informes, igualmente a lo largo del texto se deben citar en forma
abreviada.
GUIA DE LABORATORIO 1

DEMOSTRACIN DE LA PRESENCIA DE MICROORGANISMOS EN

DIFERENTES AMBIENTES

INTRODUCCIN
La microbiologa es la ciencia que estudia los microorganismos, estos incluyen
bacterias, mohos, levaduras y virus. Es decir, aquellos organismos que no
pueden ser observados a simple vista y para poder verlos se requiere del uso
del microscopio.
Los microorganismos se encuentran en los ms diversos ambientes y
materiales cumpliendo funciones beneficiosas o perjudiciales. Esta ubicuidad
de los microorganismos es algo que debemos tener en mente para tomar las
precauciones pertinentes e impedir que estos vayan a interferir en el trabajo
que estamos realizando sea en una farmacia, un laboratorio, una produccin de
alimentos o incluso en la cocina de nuestra casa.
Aunque no podemos ver a los microorganismos a simple vista, cuando los
cultivamos en un medio adecuado, s podemos ver manifestaciones de su
crecimiento, por ejemplo, todos hemos visto el crecimiento algodonoso y
coloreado de mohos sobre alimentos, cueros, etc.

OBJETIVO
Al finalizar el trabajo prctico el estudiante estar en capacidad de comprobar
la existencia de los microorganismos en diversos ambientes, superficies
corporales, lquidos y objetos inanimados.

MATERIALES

4 Cajas de petri con agar nutritivo

Aplicadores
Mechero
Goteros
Alcohol
Toallas de papel

FUNDAMENTO
Los microorganismos al ser colocados en medios de cultivo slido, se
multiplican dando un crecimiento caracterstico

PROCEDIMIENTO
1. Marcar con el nmero de su grupo las tapas de cada una de las placas
de Petri que contienen agar y escoja 4 de los puntos sealados en
instrucciones y siga el procedimiento en cada uno, rotule con el nmero
de la instruccin la respectiva placa.
2. Tapar las placas e incubar en posicin invertida a 37oC durante 48 horas
INSTRUCCIN
1. Colocar una gota de saliva sobre el agar y diseminarla mediante un
movimiento de vaivn.
2. Colocar la punta de la lengua sobre el agar
3. Tocar el agar
4. Abrir la placa sobre el mesn y dejar el agar expuesto al aire durante 10
minutos.
5. Toser sobre el agar
6. Pasar una toalla de papel impregnada con desinfectante sobre una
porcin del mesn de ms o menos 25 cm 2 , dejar secar y luego
pasar un hisopo estril por esa superficie y trazar sobre el agar sobre el
agar varias lneas paralelas con el hisopo.
7. Tomar un hisopo estril y pasarlo por el cuello, luego trazar sobre el agar
varias lneas paralelas con el hisopo.
8. Tomar un hisopo estril y pasarlo por el piso, luego trazar sobre el agar
varias lneas paralelas con el hisopo.
9. Tomar un hisopo estril y pasarlo por la pared, luego trazar sobre el agar
varias lneas paralelas con el hisopo.
10. Colocar una gota de agua del chorro sobre el agar y diseminarla
mediante un movimiento de vaivn.
11. Colocar una gota de agua destilada sobre el agar y diseminarla sobre el
agar con un movimiento de vaivn.
12. Colocar una gota de alcohol al 70% sobre el agar y diseminarla con
movimientos de vaivn.
13. Colocar una gota de desinfectante sobre el agar y diseminarla mediante
un movimiento de vaivn.
14. Colocar una moneda sobre el agar y retirarla despus de nos segundos
de contacto.
15. Colocar goma de borrar sobre el agar y retirarla despus de algunos
segundos de contacto.
16. Colocar una llave sobre el agar y retirarla despus de algunos segundos
de contacto.
17. Colocar el dedo pulgar sobre el agar y retirarlo rpidamente. Tomar un
copo de algodn impregnado en alcohol etlico de 70 o, pasarlo por el
dedo pulgar. Dejar evaporar el alcohol y colocar nuevamente sobre el
agar.
18. Tomar la brocha o la mota de un cosmtico y sacudirla sobre el agar
19. Tomar un hisopo estril y trazar lneas sobre la superficie de la placa
20. Pasar un hisopo estril por la superficie hmeda del fregadero y trazar
lneas sobre la superficie de la placa. (Escoger alguno de los ejercicios
propuestos).

RESULTADOS

Pasadas las 48 horas de incubacin, observar a simple vista y con ayuda de la

lupa, la superficie del agar
Realice una descripcin y esquematice algunos de los tipos de colonias y
crecimiento observados, de acuerdo a lo representado en la Figura 1.
OBSERVACIN E INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS

Observar las placas de sus compaeros

Discutir durante 10 minutos las observaciones y sacar conclusiones sobre los
resultados de este trabajo prctico.

CONCLUSIONES
Anotar las conclusiones

CUESTIONARIO

1. Qu es una colonia bacteriana?

2. Podra usted observar colonias bacterianas en un medio lquido?
3. De qu modo podran incidir los microorganismos del aire en los
trabajos del laboratorio? Explique.
4. Cmo evitara que los trabajos del laboratorio se contaminen?
5. Al i n c r e m e n t a r e l t i e m p o d e i n c u b a c i n s e p r e s e n t a u n
a u m e n t o indefinido en el tamao de las colonias?
6. Qu factor podra limitar ese crecimiento?
GUIA DE LABORATORIO 2:

PREPARACIN DE EXTENDIDOS

INTRODUCCIN
La determinacin de la morfologa en la identificacin de los microorganismos
juega un papel fundamental. A travs de las determinaciones morfolgicas, se
puede efectuar el reconocimiento de los microorganismos soportada con una
adecuada consulta bibliogrfica.

MATERIALES

Lminas porta objetos

Lminas cubre objetos
Asa de inoculacin
Mechero
Goteros
Agua destilada

METODO

Preparacin del extendido

FIGURA 1. Preparacin de extendidos

1. Colocar en cada una de las lminas limpias, secas y desengrasadas, una gota
de solucin salina utilizando el asa de platino previamente esterilizada.
2. Tomar aspticamente con el filamento una pequea muestra de cultivo slido
suministrado y mezclar con una gota de solucin salina o agua destilada para
obtener una suspensin. Tambin puede utilizarse un cultivo lquido, en dicho
caso la muestra se toma con el asa de platino y no es necesario colocar la gota de
solucin salina o de agua destilada.
3. Extender la suspensin con el asa de platino previamente esterilizada y
enfriada.
4. Dejar secar la lmina a temperatura ambiente
5.Fijar la muestra extendida a la lmina utilizando calor
Esto se logra pasando la lmina por la llama del mechero mximo 3 veces. La
lmina no debe calentarse mucho y ello se verifica tocndola suavemente con el
dorso de la mano la lmina. El operario debe soportar el calor sin quemarse.

NOTA: Cuando se realizan extendidos a partir de un medio lquido, no es

necesario colocar agua en el porta objetos.

COLORACIONES DIFERENCIALES

INTRODUCCIN

La morfologa de las bacterias se puede confirmar de dos maneras.

Observndolas muertas teidas con colorantes. Algunos colorantes sirven para
observar la estructura interna de las clulas que de otro modo seran invisibles. Es
importante que todos los colorantes se preparen en el laboratorio siguiendo las
instrucciones especficas del fabricante. Es preciso seguir paso a paso los detalles
cuando se preparan las mezclas o compuestos colorantes simples, el perodo y las
condiciones de almacenamiento pueden ser factores crticos para determinar la
composicin y la calidad tintorial de la solucin final.

Las tinciones que ms se usan son principalmente:

1. Coloracin de Gram
2. Coloracin de cpsula
3. Coloracin de esporas

Objetivo

Identificar las tcnicas de coloracin ms comunes utilizadas para identificar

morfologa y estructuras de bacterias.
1. COLORACIN DE GRAM

En 1884, un bacterilogo dans Christian Gram, desarroll una tcnica de tincin

que permite separar a las bacterias en dos grandes grupos: Gram positivos y
Gram negativos, basados en que si retienen o no el colorante primario (cristal
violeta), luego del proceso de decoloracin. Los organismos que retienen el cristal
violeta luego de la adicin de agentes decolorantes como el alcohol, aparecen
como azul oscuro o violeta y se designan como Gram positivos: aquellos que
pierden e cristal violeta y se tien con el colorante secundario, la safranina,
aparecen como rojos y se designan como Gram negativos.
Un examen minucioso de un extendido bacteriano teido diferencialmente, provee
una informacin muy importante sobre la caracterizacin morfolgica e
identificacin de la muestra. Por ejemplo, una reaccin positiva o negativa a la
tincin de Gram es sumamente con importante como medio primario de
clasificacin.
El procedimiento puede resumirse de la siguiente manera: Una vez que la
preparacin ha sido fijado a la lmina porta objeto, se aade el colorante cristal
violeta, el cual se deja en contacto por 1 minuto y las clulas se tien de color
violeta: posteriormente se lava el exceso de colorante con agua destilada y luego
se aade la solucin de lugol que acta como mordiente y se deja en contacto por
un minuto. El yodo se combina con el cristal violeta y forma un compuesto que
precipita en el interior de la clula, este complejo puede extraerse fcilmente con
alcohol etlico de las Gram negativas, pero no se remueve fcilmente de las Gram
positivas. Una vez realizada la decoloracin se aade el colorante de contraste, la
safranina, la cual se deja en contacto por 30 segundos; el exceso de colorante se
elimina con agua destilada. Las lminas as preparadas se secan a temperatura
ambiente o con ayuda de toallas absorbentes.
El por qu las bacterias Gram positivas retienen el complejo cristal violeta- yodo y
las Gram negativas no, ha sido un tema muy controversial. Una de las
explicaciones que se dan, est relacionada con la naturaleza qumica de la pared
celular de las bacterias Gram positivas que previenen la remocin del complejo
con el alcohol.

FIGURA 2. Esquema comparativo de pared celular de bacterias Gram (+) y (-)

Otra teora asevera que la gruesa envoltura celular de las Gram positivas,
especialmente la capa gruesa de peptidoglucano, se deshidrata y al encogerse por
el efecto del alcohol, ocasiona el cierre de los poros lo cual impide la salida del
complejo cristal violeta-lugol.

En definitiva la pared celular es la barrera para la decoloracin si se altera la pared

celular de las bacterias Gram positivas se transforman en Gram negativas.

MATERIALES
Cristal violeta
Lugol de Gram
Alcohol-acetona (decolorante)
Safranina
Cultivos bacterianos (Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus
cereus, Pseudomona aeruginosa)
Bandejas de coloracin
Lminas porta objetos
Mechero
Asa de siembra

METODO DE COLORACIN

PREPARACIN DE LAS LMINAS

Para realizar una coloracin ya sea simple o diferencial, es necesario como primer
paso, preparar la extensin de la muestra sobre la lmina porta-objeto y fijarlo,
para posteriormente aadir el o los colorantes y observar la muestra teida bajo el
microscopio de luz en lente 100X con aceite de inmersin. En la tabla 1 a
continuacin muestra el uso, secuencia y tiempo de permanencia de los colorantes
a aplicar con los resultados que dara en caso de ser Gram positivas o negativas.

TABLA 1. Aplicacin y resultado de coloracin de Gram

REACTIVOS TIEMPO RESULTADO

Gram + Gram -
Colorante primario Cristal violeta 1 minuto Color violeta
Mordiente Sol. de lugol 1 minuto Color violeta
Agente decolorante Alcohol-acetona 10-20 segundos Incoloro
Colorante de contraste, Safranina 30 segundos Morado Rosado
Procedimiento de la tincin de Gram:

1. Colocar las lminas extendidas y fijadas en una bandeja adecuada y cubrir el

extendido con cristal violeta por un minuto. Lavar con agua destilada y escurrir.
2. Cubrir la superficie de la lmina con solucin de lugol por un minuto. Lavar con
agua destilada y escurrir.
3. Colocar cada una de las lminas en posicin inclinada y decolorarlas con
alcohol-acetona hasta que el color libre deje de salir (10-20 segundos
aproximadamente). Este es el paso ms importante de la coloracin ya que
una excesiva adicin de alcohol-acetona permite la salida del colorante
primario de las clulas Gram positivas.
4. Cubrir las lminas con safranina por 30 segundos. Lavar con agua destilada y
escurrir.

La figura 3 esquematiza el procedimiento de la coloracin de Gram

Coloracin de Gram

Coloracin
de Gram

Cristal Lugol 1min lcohol-acetona safranina 30s

violeta 1 Hasta decolorar
min.

Observacin bajo el microscopio de luz

1. Colocar una gota de aceite de inmersin sobre las lminas teidas y secas y
examinarlas bajo un microscopio de luz con el objetivo de inmersin 100X.
2. Observar varios campos hasta encontrar aquel donde las clulas estn
adecuadamente separadas para permitir la visualizacin de la morfologa, arreglo
de las clulas, presencia de endosporas y su reaccin a la coloracin de Gram.
Precauciones
Para obtener una buena lmina de Gram, es necesario tomar en cuenta ciertas
precauciones tanto en su preparacin como en su observacin bajo el microscopio
con el objetivo de inmersin.
1. Extendido: Este paso es importante ya que la preparacin debe ser fina y no
gruesa. Si se coloca demasiada muestra del cultivo bacteriano, el extendido
quedar una gran mancha coloreada, pero vista bajo el microscopio, con el
objetivo de inmersin, se observar una masa oscura de estructuras que no
podrn ser distinguidas en forma individualizada y el proceso de identificacin de
la morfologa, arreglos, estructuras tipo endosporas etc. Se dificulta.
2. Fijacin: Si el extendido bacteriano no se fija adecuadamente, las clulas
bacterianas se pierden durante el proceso de tincin que involucra varios lavados
y trae como consecuencia la ausencia de bacterias teidas. Por el contrario, un
sobrecalentamiento puede ocasionar la aparicin de artefactos y la deformacin
de la morfologa de las clulas bacterianas.
3. Enfoque: Antes de colocar la lmina en la platina determinar en cul lado de la
lmina portaobjeto est localizado el extendido, para efectuar la observacin.
4. Observacin: Observe varios campos hasta encontrar aquel que permitir una
identificacin de la morfologa, estructura y reaccin de Gram.

RESULTADOS
Una vez realizada la observacin al microscopio, complete el siguiente cuadro y
reporte los resultados al profesor en el informe:

Dibujo o foto de las

clulas bacterianas en el
campo observado
Descripcin de lo
observado
Coloracin de la bacteria
teida
Reaccin a la coloracin
de Gram

BIBLIOGRAFIA
Benson, H. 1979. Microbiological Aplications. A Laboratory Manual in General Microbiology. Third Ed. Wm. C.
Brown Company Publishers. Dubuque Lowa.
Clavel, L. Pederique de Aulacio, M. 1992. Microbiologa. Manual de Mtodos Generals Seg. Ed. Facultad de
Farmacia Uiversidad Central de Venezuela.
Pelczar and Chan. 1977. Laboratory Exercisas in Microbiology. Fourth ED. Mc Graw-Hill Book Company.
Seely, H.: van Demark, P. 1982. Microbios en accin. Manual de Laboratorio para Microbiologa. Ed Blume.
Madrid Espaa.
Tortola, G.J.: Funke, B.R.and Case, C.L. 2001. Microbiology Introduction. Seventh Ed. The Benjamin
Cummings Company, INC.
GUIA DE LABORATORIO 3:
COLORACIONES DIFERENCIALES

COLORACIN DE CPSULA

La cpsula se puede definir como una estructura superficial que est presente en muchas
bacterias en sus ambientes naturales, consistente en acumulacin de material mucoso
viscoso, situado externamente respecto de la pared celular.

Las cpsulas son estructuras inertes no vivas carentes de papel activo (metablico),
pero que confiere a las bacterias importantes propiedades:

Adhesin a clulas hermanas, generando microcolonias y consorcios

Adhesin a sustratos inertes o vivos, lo que les permite la colonizacin de sus
nichos ecolgicos ( p. ej. Tejidos de organismos superiores)
Proteccin contra agentes antibacterianos

Su observacin a microscopa ptica en fresco es difcil, ya que su ndice de refraccin es

similar al del medio. Al ser una estructura muy hidratada (99% de agua), su observacin
con las tcnicas habituales de microscopa electrnica de transmisin (MET) y de barrido
(MEB) revela una notable contraccin de su estructura. Adems, los colorantes habituales
tienen poca afinidad hacia ella.
Cpsula

Figura 1. Fotografa de cpsula bacteriana de Lb. Plantarum 100X

La cpsula de las bacterias no tiene la misma afinidad por los colorantes que otros
componentes de las clulas y por eso exige el empleo de mtodos de coloracin
especiales.

Algunos estn destinados a colorear la clula y el fondo pero no la cpsula de manera

que en la envoltura se aprecia por contraste, como el mtodo de Anthony. Otros
procedimientos producen un efecto colorante diferencial, cuando la cpsula admite un
contra colorante. Otro procedimiento utiliza el principio de la coloracin negativa como el
mtodo de tinta china.
MATERIALES

- Cristal violeta al 1%
- Cultivos bacterianos (Klebsiella pneumoniae.)
- Bandejas de coloracin

METODO DE ANTHONY

1. Preparar un extendido fino y uniforme de un cultivo de Klebsiella pneumoniae

extendindolo con un portaobjetos en ngulo recto.
2. Secar al aire. No fijar al calor
3. Colorear con solucin acuosa de cristal violeta al 1% durante 2 minutos
4. Lavar con solucin de sulfato de cobre al 20%
5. Dejar secar al aire en posicin vertical y observar al microscopio

La cpsula aparece sin colorear contra un fondo de color prpura; las clulas se tien de
violeta intensamente (Fig. 1).

COLORACIN DE ESPORAS

Ciertas especies de bacterias producen en su interior estructuras especiales denominadas

endosporas. Las endosporas son clulas diferenciadas extraordinariamente resistentes al
calor y difciles de destruir incluso recurriendo a compuestos qumicos muy agresivos. Las
bacterias que forman esporas se encuentran habitualmente en el suelo y se puede decir
que prcticamente cualquier muestra del suelo contiene endosporas.

El descubrimiento de las endosporas bacterianas tuvo una gran trascendencia para la

microbiologa porque el conocimiento de estas formas de gran resistencia al calor fue
decisivo para el desarrollo de mtodos de esterilizacin, no solo para medios de cultivo
sino tambin para alimentos y otros productos perecederos. Aunque muchos otros
organismos distintos a las bacterias forman esporas, la endospora bacteriana es nica en
cuanto a su grado de termo resistencia. Las endosporas son resistentes igualmente a
otros agentes nocivos como la desecacin, radiacin, cidos y desinfectantes qumicos;
pueden adems permanecer en estado latente por perodos de tiempo muy prolongados.

Por lo tanto, los mtodos de rutina para coloracin como en la coloracin de Gram,
aparecen como cuerpos retrctiles no coloreados. Por lo general en mtodos especiales
de coloracin se requiere que el calor penetre para permitir que las esporas se coloreen.
en la figura 2. Las formas de estas estructuras se observan en la Figura 2. De acuerdo
con la ubicacin en la clula se clasifican en terminales, sub-terminales y centrales.

MATERIALES

- Solucin acuosa de Verde de Malaquita al 5%

- Solucin acuosa de safranina al 0.5%
- Cultivo bacteriano de Bacillus cereus
- Bandejas de coloracin
 . A B C

Figura 2. Microfotografias de esporas bacterianas. A.Centrales. B. Subterminales C. Terminales

METODO
1. Realizar un extendido de una colonia bacteriana tomada del gar con el asa
bacteriolgica, fije al calor.
2. Cubrir el portaobjetos con una tira de papel filtro
3. Baar todo el portaobjetos con la solucin de verde malaquita
4. Calentar sobre la llama del mechero hasta que se expulsen los primeros
vapores, retire del fuego y agregue ms colorante, repita la operacin
aproximadamente por 5 minutos. Es importante no dejar secar el colorante.
5. Lave con agua destilada sobre la bandeja de coloracin, de manera que el
papel caiga sobre la bandeja.
6. Agregar solucin de safranina al 0.5% y djela por 1 minuto.
7. Lave con agua destilada, deje secar la preparacin y observe al microscopio.
Las esporas se observan en forma de esferas verdes en las clulas
bacterianas coloreadas de rojo.

PRUEBA DE MOTILIDAD

Algunas bacterias presentan movilidad debido a La presencia de flagelos.

Este hecho puede ser fcilmente demostrable en condiciones de laboratorio.
MATERIALES

- Cultivo de Pseudomonas sp.

- Tubos con agua destilada
- Lminas cubreobjetos y portaobjetos
- Asas

METODO

1. Colocar una gota de agua sobre la lmina portaobjetos

2. Con un asa previamente esterilizada, tome suavemente un poco de muestra
de cultivo bacteriano y disolver en la gota de agua sin esparcir.
3. Observar los movimientos y reportar

CUESTIONARIO

1. Las esporas son ms difciles de colorear que las clulas vegetativas por qu?
2. En su preparacin se observan esporas libres y en el interior de las clulas
vegetativas. Como puede incrementarse el contenido del material capsular?
3. Los frotis de bacterias encapsuladas no se lavan con agua ni se calientan.
Por qu?
4. Como se correlaciona la presencia de cpsula con la virulencia de una bacteria
patgena.

Tome fotografas y seale las estructuras observadas de acuerdo con las

coloraciones diferenciales preparadas.
GUIA DE LABORATORIO 4:

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO Y MTODOS DE AISLAMIENTO

DE MICROORGANISMOS

Las bacterias son organismos supremamente adaptables a diferentes

sustratos. Con base en sus requerimientos nutricionales se consideran como
exigentes y no exigentes. Su estudio se ha hecho posible gracias a la
implementacin de los medios de cultivo que le suministran a los organismos
los elementos necesarios para su crecimiento. Los medios de cultivo son
preparaciones utilizadas para muchos propsitos.

1. Aislamiento e identificacin de microorganismos

2. Pruebas de esterilidad
3. Anlisis de agua, ambientales, alimentos y productos bacteriolgicos
4. Pruebas de sensibilidad a los antibiticos

Composicin de los medios de cultivo:

Aunque los diferentes medios contienen gran cantidad de sustancias

dependiendo del microorganismo que se desee aislar, bsicamente estn
compuestos de:

Peptonas:
Varan de pureza y calidad dependiendo del tipo de hidrlisis realizado. Estas
hidrlisis se llevan a cabo por lcalis que tienden a destruir el contenido
vitamnico de la protena y tambin hacen perder parte de los aminocidos; la
hidrlisis enzimtica conserva las vitaminas y aminocidos; la casena pura no
contiene carbohidratos y tiene alto contenido vitamnico y de triptfano.

Infusin y extractos:
Son de carne y otros tejidos; se trata del material de origen protico, soluble en
agua, sin accin enzimtica. Las protenas mismas se desnaturalizan por el
calor, afortunadamente la accin enzimtica microbiana y el tiempo de
incubacin aumentan la facilidad de utilizacin.

Agentes solidificantes:
Agar, gelatina, agarosa, agar nutritivo.

Agentes selectivos:
Colorantes: Cristal violeta o brillante, inhiben Gram positivos.
NaCl, Azida de sodio, Citrato de sodio, telurito de potasio, lauril sulfato
de sodio.
PH 8.0-9.0 es selectivo para bacterias como Vibrio cholerae
Agentes antimicrobianos.

Otros componentes:
Indicadores de pH.
Indicadores de xido-reduccin: azul de metileno.

1
Cuidado y recomendaciones:
Los medios de cultivo pueden prepararse a partir de sus componentes o
segn las recomendaciones del fabricante, cuando este se consigue
comercialmente hay varias reglas que se deben guardar para asegurar
la buena calidad del medio preparado.
El agua utilizada debe ser destilada o desmineralizada, bidestilada o
desmineralizada, proveniente de un sistema adecuado de destilacin; su
medida debe ser exacta y en ningn momento con aproximaciones que
generalmente traducen en una alteracin de la consistencia del medio,
especialmente cuando se trata de agares.
Antes de someterse a la accin de la autoclave el medio debe estar
completamente disuelto. No disolviendo con la temperatura del
autoclave, pues generalmente el exceso de calor produce un medio con
grumos debido a una deficiente disolucin.
Los medios de cultivo que contienen yema de huevo, carbohidratos,
urea o cualquier otro nutriente, no pueden ser esterilizados en autoclave;
estos medios se preparan esterilizando por separado lo que conocemos
como base (se esteriliza en autoclave) y los suplementos por filtracin o
vapor fluente; la mezcla de los componentes se efecta cuando la base
se ha enfriado entre 45 y 50oC
Todos los medios de cultivo despus de preparalos y vertirlos en la caja
de petri estriles, deben ser secados, con la finalidad de eliminar el
exceso de agua que queda en la superficie para evitar la condensacin y
mezcla de las colonias cuando se hace la siembra. El secado de la
superficie tambin previene la contaminacin; se lleva a cabo en la
incubadora a 37oC durante 20 minutos aproximadamente, quitando la
tapa de la caja y colocando el medio con una superficie hacia abajo.
Despus del secado las cajas de petri se pueden guardar en
refrigeracin envueltas en bolsas plsticas hasta por tres meses,
dependiendo del medio de cultivo. Los medios que contienen antibiticos
deben ser utilizados en corto tiempo.

Clasificacin de los medios:

a. Slidos: Aquellos que contienen agar, gelatina o huevo coagulado.

b. Lquidos: son los tambin llamados calos de cultivo

c. Selectivos: Poseen sustancias que favorecen el crecimiento de ciertos
microorganismos, Ej.: Mc Conkey
d. Diferenciales: Son aquellos donde el metabolismo bacteriano produce
cambios en el medio, lo cual permite la diferenciacin de la bacterias.
e. Mantenimiento: Son preparaciones utilizadas para conservar cepas
bacterianas. Ej.: CASOY
f. Medios no selectivos: Permiten el desarrollo de diversos tipos
microbianos. Ej.: Caldo nutritivo y agar nutritivo.
g. Enriquecidos: Contienen sangre, leche, suero, extracto de animales o
vegetales; los cuales incrementan el nmero de bacterias deseadas.
Estos medios de cultivo y su utilizacin se basan en el aprovechamiento

2
 ptimo de nutrientes combinados con temperaturas y pH adecuado. Por
Ej.: Agar sangre.

OBJETIVO

Aplicar tcnicas para el desarrollo de los medios de cultivo y la importancia de

sus componentes para crecimiento bacteriano.

MATERIALES Y METODOS

Observacin de los medios deshidratados comerciales. Para cada uno de los

medios que estn dispuestos en exhibicin, anotar los siguientes datos:
nombre, composicin, usos, preparacin. Destapar el envase y determinar (sin
tocar el contenido): Color, olor, textura (cristales, grnulos, polvo)

Preparacin de medios de cultivo comerciales: Hacer el clculo de material

necesario de acuerdo a lo recomendado por el fabricante, para preparar el agar
nutritivo necesario para el aislamiento de microorganismos, envasar en un
erlenmeyer, llevar a estilizar en autoclave a 15 libras de presin y 121C por 15
minutos.

AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

La observacin e interpretacin de los cultivos primarios (24 a 48 horas)

despus de la incubacin es el paso definitivo en la decisin de continuar o no
con la identificacin de los microorganismos aislados. La decisin se basa en la
observacin de las caractersticas, nmero de cada tipo de colonia, grado de
pureza, coloracin de Gram y los cambios en el medio de cultivo que rodea la
colonia (los cuales reflejan la actividad metablica de la bacteria aislada,
elemento de importancia en la identificacin.

Caractersticas del crecimiento. Se debe tener en cuenta el aspecto que

presente, el tamao, elevacin, margen, superficie, consistencia y forma
(puntiforme, circular, filamentosa, rizoide, etc.)

Cambios en medios diferenciales: Varios colorantes indicadores de pH

evidencian la actividad metablica y ayudan a identificar las colonias aisladas.

OBJETIVOS

Aplicar los mtodos bacteriolgicos ms usuales para el crecimiento y

aislamiento de microorganismos.

MATERIALES

- 1 Tubo con caldo nutritivo

- 1 Tubos con agar nutritivo inclinado
- 2 Cajas de petri con agar nutritivo
- 1 Caja de petri vaca y estril

3
 - 20 mL Agar nutritivo fundido y enfriado a 45oC
- Cultivos bacterianos en agar nutritivo
- Dilucin de S.aureus en agua peptonada
- Pipeta de 1 mL estril
- Propipeta

METODO DE SIEMBRA
SIEMBRA EN CALDO DE CULTIVO
Caractersticas de los cultivos bacterianos en medio lquido

* Esterilice el asa en la llama del mechero calentndola completamente hasta el

rojo vivo.
* Con el asa tome una muestra de los microorganismos entregados para la
prctica.
* Abra el tubo con el caldo nutritivo estril, flamee la boca del tubo con el
mechero e inocule, agitando bien el asa dentro del caldo. (Ver figuras) Incubar
a 37C

Toma de muestra

Tcnica de siembra en caldo

TECNICA DE SIEMBRA EN TUBO INCLINADO

* Esterilice el asa en la llama del mechero calentndola completamente hasta el

rojo vivo.
* Con el asa tome una muestra de los microorganismos entregados para la
prctica.

4
* Abra el tubo con el agar nutritivo inclinado estril, flamee la boca del tubo con
el mechero e inocule, haga un rayado en la superficie del agar. (Ver figuras)
Incubar a 37C

TECNICA DE SIEMBRA EN PLACA DE PETRI

Obtencin de cultivos axnicos

a. Siembra por agotamiento:

Flamear el asa redonda con el mechero, dejar enfriar, tomar una colonia de
los cultivos entregados, sembrar sobre una caja de agar nutritivo, colocando
la asada sobre el extremo superior de la caja y extenderlo suavemente
realizando un rayado suave horizontal en forma de zigzag. Invertir la caja e
incubar a 37C.

5
 b. Siembra por estras:

Con el asa bacteriolgica flameada, tomar una colonia de los cultivos

entregados, realizar un rayado suave horizontal sobre un tercio de la
caja de petri que contiene agar nutritivo.
Flamear el asa
En un extremo de la caja con agar realizar rayados suaves en forma
horizontal sobre la superficie del agar utilizando el asa (formando
estras) para realizar el primer aislamiento bacteriano, gire la caja 90 o y
flamee el asa; contine el aislamiento en los tres extremos restantes de
la caja realizando el mismo procedimiento en los tres extremos restantes
de la caja. En el ltimo extremo, cuando est realizando la estriacin,
tenga cuidado de no tocar con el asa el primer aislamiento realizado,
(ver esquema)- Invertir la caja e incubar a 37C.

c. En profundidad

Tcnica usada para hacer recuento a partir de diluciones. Con este mtodo
de siembra es ms fcil observar reacciones metablicas bacterianas, tales
como liplisis, protelisis etc.

El medio de cultivo preparado en tubos debe estar fundido y a 45 oC

Se le agrega 1 mL de la dilucin a sembrar en el centro de la caja
de petri estril.
Verter el medio de cultivo en la caja de petri y homogenizar
por movimientos giratorios horizontales en varias direcciones, teniendo

6
cuidado de no formar burbujas. Dejar solidificar e incubar. (Ver
esquema).

7
PRACTICA NO 5

CARACTERIZACIN BIOQUMICA DE ENTEROBACTERIAS Y BACILOS

La familia de Enterobacteriaceas est compuesta por bacilos Gram negativos

de tamao mediano, anaerobios facultativos, mviles o inmviles pero no
esporulados.

Las enterobacteriaceas crecen en medios artificiales, tienen necesidades

nutritivas simples, fermentan la glucosa con produccin de cido lctico y gas,
reducen los nitratos a nitritos y son oxidasas negativos. Las enterobacteriaceas
son organismos ubicuos de distribucin mundial, encontrndose en el suelo, el
agua, la vegetacin y formando parte de la flora bacteriana normal de casi
todos los animales incluido el ser humano.

Algunos miembros de esta familia se encuentran asociados a cuadros

disentricos mientras que otros pueden producir infecciones oportunistas. Las
infecciones pueden afectar a casi todas las localizaciones del cuerpo.

OBJETIVO

Proporcionar al estudiante cepas conocidas de Enterobacterias para lograr

identificacin del gnero y especie.

MATERIALES

De los caldos suministrados con diferentes cepas, realizar una siembra

por agotamiento en agar Mc Conkey, medio diferencial que nos separa
colonias fermentadoras de lactosa de las que no lo hacen. Incubar a
37oC.
Observar morfologa, tamao, aspecto y color de las colonias. Aquellas
que presenten color rosado habrn fermentado lactosa.
De las colonias aisladas, procedentes de agar Mc Conkey sembrar en
las siguientes pruebas bioqumicas:

TSI: Contiene glucosa 0.5-1% fenol, sacarosa y lactosa. Adems, rojo de fenol,
que indica fermentacin y sulfato ferroso, para demostrar la produccin de H2S.
La primera se hace con asa recta en profundidad y estra en superficie.

REACCIN
Fondo amarillo produccin de cido
Superficie inclinada alcalina- color rojo
Todo el medio cido
Burbujas
Ennegracimiento en el fondo
Medio alcalino coloracin roja
INTERPRETACIN
Fermentacin a glucosa (K/A)
Fermentacin de glucosa, lactosa (A/A)
Aergenos
Produccin de H2S
No fermentador de azcar (K/A)
Lisina decarboxilasa: La decarboxilasa es el proceso por el cual las bacterias
producen la enzima decarboxilasa y son capaces de atacar los aminocidos en
su grupo carboxilo (-COOH), dando una amina o una diamina y anhdrido
carbnico. Se siembra igual que en TSI.

Citrato de Simons: Contiene citrato como nica fuente de carbono y sales de

amonio como fuente de nitrgeno, no contiene aminocidos. Las bacterias que
pueden utilizar el citrato tambin extraen nitrgeno con la produccin de
amonio que alcaliniza el medio de cultivo. El indicador de pH es azul de
bromotimol. Se siembra solamente en la superficie.
Interpretacin: La prueba es positiva cuando se observa crecimiento de color
azul intenso. La prueba es negativa cuando no se observa crecimiento ni
cambio de color.

Urea de Christensen: Si la bacteria posee la enzima ureasa, hidroliza urea del

medio liberando amonio y CO2; el indicador utilizado es el rojo de fenol. Se
siembra en superficie con estra.

Movilidad: Se observa en el medio SIM por desplazamiento alrededor de la

lnea de inoculacin, realizada en profundidad y en el centro del agar.

Prueba de indol: Las bacterias que poseen la enzima triptofanasa, son

capaces de hidrolizar y desaminar el triptfano con la produccin de indol,
cido pirvico y amonio. Despus de la incubacin a las 24 horas adiciones 0,1
mL de reactivo de Kovacs a los tubos con medio SIM , la presencia de indol se
destaca por la coloracin rojiza que se desarrolla en la superficie del tubo.

Reaccin del rojo de etilo: sembrar con el asa un tubo con caldo MRVP,
incubar por 24- 48 horas, pasado este tiempo adiciona 5 gotas de la solucin
rojo de metilo.
Algunas bacterias utilizan la glucosa con gran formacin de cido de forma que
el valor del pH del medio desciende a menos de 4.4. Otras bacterias producen
menos cido reduciendo en menor cantidad el pH del medio. Esta distincin
puede hacerse a travs del rojo de metilo que presenta color amarillo por
encima del pH 5.1 y color rojo cuando el pH desciende a 4.4.

Reaccin de Vogues Proscaver: Sembrar con el asa un tubo con caldo

MRVP, incubar por 24-48 horas, pasando este tiempo adicional 5 mL de la
solucin de sulfato de cobre. En caso positivo se presenta un viraje a rojo,
despus de algunos minutos.
A partir de la glucosa, numerosos microorganismos forman acetona-
acetilmetilcarbinol-2,3 butanodiol o diacetilo. La demostracin de estos
productos m e t a b l i c o s s e l l e v a a c a b o c o n l o s r e a c t i v o s d e
OMEARA,
 mejorado por Levine y Col. (1932) con sulfato de cobre o con el reactivo de
BARRIT.

REACCIONES BIOQUIMICAS DE ALGUNAS ENTEROBACTERIAS

PRUEBA MICROORGANISMOS A EVALUAR

E. coli Proteus Salmonella Klebsiella Serratia

vulgaris typhi pneumoniae
Fermentacin + - - + +
de lactosa
TSI Gas + D - + D

H2 - + + - -
A/A
S A/A K/A K/A A/A
TSI
SIM Movilidad + + + - +

Indol -
+ + - -
H2 -
S - + + -

MRVP Voges - - - + +
Proskauer

Rojo de
metilo -
+ + + -

Citrato - D - + +

Urea - + - + D

Lisina K/K R/A K/K K/K K/K

+: Ms del 90% positivos

-: Ms del 90% negativos
D: 11 al 89% positivos/diferentes reacciones en distintas cepas de una especie

CARACTERIZACIN BIOQUMICA DE Bacillus cereus

INTRODUCCIN

La bsqueda de bacterias capaces de producir toxiinfecciones alimentarias es

de especial importancia en la microbiologa de alimentos. El incremento de
estas infecciones ha llevado a que la presencia de agentes determine cada vez
ms en forma rutinaria y completa. El Bacillus cereus es un bacilo esporulado y
aerbico que normalmente se encuentra presente en el suelo, polvo, agua; los
alimentos en los cuales se puede encontrar este bacilo, pueden ser platos de
cereales a partir de maz o almidn de maz, pur de papas, verduras, carne
picada, embutido de hgado, platos de arroz al estilo oriental, sopas etc. El
nmero mnimo de organismos necesarios para causar los sntomas, es de
unos 107 UFC/g excepto en el caso de nios pequeos en los que se produce
enfermedad con solo 105 UFC/g.

OBJETIVO:

Se trata de proporcionar al estudiante los elementos necesarios para hacer el

diagnstico bacteriolgico de Bacillus cereus, mediante la identificacin del
mismo.

MATERIALES
1 caja de petri con agar selectivo para Bacillus cereus
Tubos de ensayo con medios. Agar leche, agar almidn, agar gelatina,
caldo nutritivo, caldo glucosa, caldo arabinosa, caldo xilosa.
Solucin de lugol
Reactivo de Griess
Cloruro de mercurio al 15%

METODOS

De la caja de petri que contiene el cultivo bacteriano siembre con un asa una
muestra de cada uno de los tubos que contienen los siguientes medios:

Agar leche, agar almidn, agar gelatina, caldo nitrato, caldo glucosa,
caldo arabinosa, caldo xilosa.
Incube a 37oC por 24 horas
Al da siguiente lea las pruebas bioqumicas de la siguiente manera:

AGAR ALMIDN: Cubrir la superficie del tubo con solucin de lugol; si se ha

producido la hidrlisis de almidn, se tie de azul. Las reas hidrolizadas,
aparecen como zonas claras.

AGAR GELATINA: Aada al tubo 5 gotas de cloruro de mercurio al 15%,

elimnelo despus de 5 minutos, lave el tubo con agua corriente. La reaccin es
positiva cuando una zona clara rodea la estra.

AGAR LECHE: Observe una zona clara que aparece alrededor del crecimiento
que indica degradacin de la casena.
CALDO GLUCOSA, ARABINOSA Y XILOSA: Observe si hubo o no
fermentacin indicada por un color rosado en el medio de cultivo y si hubo o no
produccin de gas, indicada por la aparicin de burbujas en el caldo.

Glucosa (+) sin gas

Arabinosa (-)
Xilosa (-)

CALDO NITRATO: Aada al tubo unos miligramos de reactivo de Griess y

observe el color que presenta. El color rojo representa prueba positiva de
reduccin de nitratos. Si no hay cambios de color representa una prueba
negativa.
GUIA DE LABORATORIO No 6

ANALISIS MICROBIOLOGICO DE ALIMENTOS

INTRODUCCIN

La investigacin sobre los productos alimenticios requiere especial atencin para detectar
aquellos microorganismos que los deterioran o que son patgenos para el consumidor. El
examen microbiolgico permite obtener pautas para el establecimiento de normas de
higiene aplicables durante la produccin, as como mtodos eficaces de conservacin.

Microorganismos indicadores: Este trmino se aplica a cualquier grupo taxonmico,

fisiolgico o ecolgico de microorganismos cuya presencia proporcione evidencia indirecta
de que los alimentos estuvieron expuestos a condiciones que pudieron determinar la
llegada de microorganismos peligrosos o permitir la proliferacin de especies patgenas o
toxignicas. Los organismos patgenos son de gran utilidad tanto para determinar la
calidad bacteriolgica de los alimentos como la garanta que ofrecen al consumidor.

Escherichia coli y coliformes: Son organismos que habitan en el tracto digestivo del
hombre y otros animales. Su presencia en un alimento indica contaminacin directa o
indirecta de origen fecal. La presencia de E. coli advierte el riesgo de que pudieran estar
presentes bacterias patgenas entricas, entre ellas algunas de los gneros Salmonella,
Shiguella y Vibrio; as como virus entricos y parsitos diversos.

Los otros coliformes (especies de varios gneros de la familia Enterobacteriaceae), son

buenos indicadores de limpieza y desinfeccin inadecuadas, o de una manipulacin o
tratamiento incorrecto de los alimentos. La presencia de niveles altos de coliformes en un
alimento tratado, no indica necesariamente un contacto inmediato con heces o con
superficies contaminadas con heces. Indica que pudieron existir circunstancias
favorecedoras de la multiplicacin de estos microorganismos introducidos probablemente
por deficiente limpieza o desinfeccin.

Streptococcus salivarus Se ha utilizado como indicador de contaminacin oral, debido a

que est casi siempre presente en la boca humana.

Staphylococcus aureus, Su presencia se interpreta como contaminacin proveniente de la

piel, la boca o las fosas nasales de los manipuladores.

Clostridium botulinum y Clostridium perfringens: La presencia de esporas en alimentos

enlatados no cidos, es seal de que posiblemente el tratamiento trmico fue insuficiente.

OBJETIVOS

Determinar la calidad del producto alimenticio en trminos de contaminacin microbiana.

MATERIALES

Muestra de alimentos
12 Cajas de petri esterilizadas.
4 Pipetas estriles
1 Frasco con 90 mL de agua peptonada.
120 mL de Agar cuenta grmenes fundido
2 Tubos de ensayo con 18 mL de agua peptonada.
9 Tubos de ensayo con 10 mL de caldo LS.
Mechero.
Gradilla para tubos.
Reactivo de Kovac's.

PROCEDIMIENTO

1. Dilucin de la muestra de alimento.

1. Comenzar el trabajo lo ms pronto posible. Se preparan diluciones del alimento

10-1 a 10-3.
2. La dilucin 10-1 se prepara pesando 10 gramos de la muestra, que se vierte
aspticamente en un frasco con 90 mL de diluyente (agua peptonada).
3. La dilucin as preparada se vierte luego en una bolsa plstica y se lleva al
stomaker (homogenizador) para obtener fragmentos muy pequeos.
4. Transferir luego 2.0 mL de la dilucin 10-1 a un tubo que contenga 18 mL de
diluyente para obtener la dilucin 10-2
5. Transferir 2 mL de la dilucin 10-2 a un tubo con 18 mL de diluyente para obtener la
dilucin 10-3
6. Cada dilucin sucesiva disminuir 10 veces la concentracin. No olvide marcar
convenientemente los tubos.

2. Recuento de Mesfilos. (Agar cuenta grmenes)

Su presencia puede reflejar deficiencias en el proceso de elaboracin y contaminacin en

la manipulacin durante el empaque.

1. Tomar 1 mL de cada una de las diluciones (10-1 a 10-3) transfiralo a la base de

una cada de petri vaca y estril, por cada dilucin. Realizar este procedimiento
por duplicado. Rotular cada caja indicando la dilucin que corresponde.
2. Inmediatamente adicione el agar cuenta grmenes fundido, aproximadamente 20
mL por caja de petri.
3. Mezcle el inculo con el medio fundido, moviendo suavemente la caja hacia arriba,
hacia abajo y en forma circular.
4. Deje solidificar el agar.
5. Invierta e incube las cajas de petri a 37 C durante 24 horas.
6. Pasado este tiempo, cuente las colonias que hayan crecido en las cajas.

2.1 Lectura de resultados:

Seleccione las cajas de la misma dilucin que tengan entre 30 y 300 colonias. Cuente el
nmero de colonias de ambas cajas, haga promedio aritmtico y multiplique por el
reciproco de la dilucin leda.

Los resultados se deben expresar con dos cifras decimales, como un nmero entre 1.0 y
9.9 multiplicado por la potencia de 10 correspondiente.

Ejemplo: Si el recuento se realiza en una dilucin 10-2 y el promedio fue 148 UFC, el
tercer dgito por ser mayor a 5 se aproxima al siguiente nmero, o sea que el recuento
sera 150x102, se expresa mejor como 1,5x104

Si el recuento fue 234, por ser el tercer dgito menor que 5, se anula y se expresa:
230x102, o mejor 2,3x104.

Reporte el recuento de microorganismos mesfilos como Unidades Formadoras de

Colonia (UFC) por gramo o mililitro segn el tipo de muestra analizada.

Recuento de Mesfilos = UFC/g mL

Cuando el recuento se utiliza para determinar la aceptacin de un alimento, se compara

con los valores lmites establecidos segn la normatividad del Ministerio de Salud, del
INVIMA o las Normas Icontec.

3. Nmero ms probable de coliformes totales y fecales:

3.1 Prueba para coliformes totales.

Pipetee 1 mL de cada una de las diluciones (10-1 a 10-3) en tubos con Caldo Lauryl sulfato,
utilizando 3 tubos por dilucin.
Incube los tubos a 352C por 24-48 horas.
Pasadas las 24-48 horas, anote como positivos los tubos que muestren turbiedad y
produccin de gas, que se puede observar por el desplazamiento del tubo de Durham.

3.2 Prueba para coliformes fecales

Esta prueba se realiza despus de pasado el tiempo de incubacin. Para su
determinacin se adicionan 2-3 gotas del reactivo de Kovacs a los tubos positivos para
coliformes totales, este reactivo permite revelar la presencia del indol, que se produce a
consecuencia del crecimiento de este grupo de bacterias, anote como positivos aquellos
tubos que formen un anillo rosado salmn en la superficie.

3.3 Interpretacin de los resultados.

Leer la tabla del NMP (Nmero Ms Probable), para saber el resultado de acuerdo con el
nmero de tubos positivos, tanto para los coliformes totales, como para los coliformes
fecales. Ver Tabla 1.

4. Recuento total de mohos y levaduras

1. Pipetee 1 mL de cada una de las diluciones (10-1 a 10-3), a la base de una caja de
petri vaca y estril, realizar esto por cada dilucin y por duplicado.
2. Inmediatamente adicione el agar Base Ogye. Aproximadamente 20 mL por caja.
3. Mezcle el inculo con el medio fundido, moviendo suavemente la caja hacia arriba,
hacia abajo y en forma circular.
4. Deje solidificar el agar.
5. Invierta e incube las cajas de petri a 25 C durante 3 a 5 das.
6. Pasado este tiempo, cuente las colonias que hayan crecido en las cajas

4.1 Lectura de resultados

Seleccione las cajas de la misma dilucin que tengan entre 10 y 100 colonias. Cuente el
nmero de colonias de ambas cajas, haga promedio aritmtico y multiplique por el
reciproco de la dilucin leda.
Los resultados se deben expresar con 2 dgitos y el resto en potencia de 10.
Reporte como recuento de mohos y levaduras en Unidades Formadoras de Colonia (UFC)
por gramo o mililitro segn el tipo de muestra analizada

Recuento de mohos y levaduras: UFC/g mL

5. Recuento de enterobacterias totales.

La contaminacin de alimentos generalmente se adquiere por un proceso de

manipulacin inadecuada y posterior a la preparacin misma del producto.

Transferir por duplicado alcuotas de 1 mL de cada una de las diluciones

10-1 a 10-3 en cajas de petri estriles, previamente
marcadas.
Inmediatamente verter el agar cristal violeta rojo neutro bilis glucosa,
aproximadamente 15 mL. Mezcle el inculo con el medio fundido,
moviendo suavemente la caja hacia arriba, hacia abajo y en forma circular.
Deje solidificar el agar.
Agregar una capa adicional de agar de aproximadamente de 5 mL sobre la
superficie del agar solidificado en cada caja.
Deje solidificar el agar.
Invierta e incube las cajas de petri a 37 C durante 24 horas.
Pasado este tiempo, seleccione las placas que contengan entre 30 y 300
colonias violetas, rodeadas de precipitado rojo violeta.
Confirmar estas colonias con la prueba de oxidasa.

5.1 Prueba de oxidasa

Tomar una colonia del crecimiento del agar cristal violeta rojo neutro bilis glucosa,
sembrar en la superficie de agar nutritivo inclinado, incubar a 37 oC por 24 horas.

Despus de la incubacin realizar la prueba, tomando una colonia del crecimiento

del agar nutritivo, colocndola sobre un papel blanco, adicionarle una gota del
reactivo de oxidasa; si la colonia se torna de color rosado la prueba es positiva; si
permanece del mismo color, la prueba ser negativa.

5.2 Lectura de resultados

Siga el mismo procedimiento descrito en 2.1 para reportar el recuento de enterobacterias
en la muestra.
Recuento de enterobacterias totales: UFC/g mL
CUESTIONARIO:
1. Cul es el fundamento de las diferentes pruebas que se han realizado?.
2. Cules son los componentes de cada uno de los medios de cultivo y porqu se
utilizan?
3. Qu importancia tienen los tipos de microorganismos analizados en la calidad de los
alimentos?

Tabla 1. Nmero Ms Probable (NMP) por g/mL de muestra, usando tres tubos de
0.1, 0.01 y 0.001 g/mL

Numero de Tubos Numero de Tubos Numero de Tubos Numero de Tubos

positivos positivos positivos positivos
0.1 0.01 0.001 NMP 0.1 0.01 0.001 NMP 0.1 0.01 0.001 NMP 0.1 0.01 0.001 NMP
0 0 0 3 1 0 0 3.6 2 0 0 9.1 3 0 0 23
0 0 1 3 1 0 1 7.2 2 0 1 14 3 0 1 39
0 0 2 6 1 0 2 11 2 0 2 20 3 0 2 64
0 0 3 9 1 0 3 15 2 0 3 26 3 0 3 95
0 1 0 3 1 1 0 7.3 2 1 0 15 3 1 0 43
0 1 1 6.1 1 1 1 11 2 1 1 20 3 1 1 75
0 1 2 9.2 1 1 2 15 2 1 2 27 3 1 2 120
0 1 3 12 1 1 3 19 2 1 3 34 3 1 3 160
0 2 0 6.2 1 2 0 11 2 2 0 21 3 2 0 93
0 2 1 9.3 1 2 1 15 2 2 1 28 3 2 1 150
0 2 2 12 1 2 2 20 2 2 2 35 3 2 2 210
0 2 3 16 1 2 3 24 2 2 3 42 3 2 3 290
0 3 0 9.4 1 3 0 16 2 3 0 29 3 3 0 240
0 3 1 13 1 3 1 20 2 3 1 36 3 3 1 460
0 3 2 16 1 3 2 24 2 3 2 44 3 3 2 1100
0 3 3 19 1 3 3 29 2 3 3 53 3 3 3 1100
GUIA DE LABORATORIO No 7

HONGOS

Los hongos constituyen un grupo muy heterogneo de organismos eucariotas,

hetertrofos no fotosintticos y con pared celular. Basndose en la apariencia
macroscpica de la colonia se pueden diferenciar dos tipos de hongos: si
producen colonias opacas, cremosas o pastosas se denominan levaduras; si
producen crecimientos areos, velludos, algodonosos o pulverulentos se llaman
hongos filamentosos o mohos. Existe un tercer grupo que se desarrolla como
levaduras cuando crece a 37C y como hongo filamentoso a 25C. Este fenmeno
se denomina dimorfismo.

El conjunto de elementos que constituyen un hongo se denomina talo. El talo

puede ser unicelular (en levaduras). En hongos filamentosos el talo incluye una
parte vegetativa, el micelio, compuesto por hifas y una parte reproductora.

Las hifas son tubos que contienen ncleos y citoplasma. Pueden presentar septos
(micelio tabicado) o no (micelio no tabicado).

Los septos presentan poros que conectan los distintos segmentos de la hifa. A
veces las levaduras constituyen cadenas de clulas denominadas pseudomicelio.

Los hongos se pueden reproducir asexuada y sexualmente. En algunas especies

coexisten las dos formas de reproduccin en el mismo organismo que se
denomina entonces holomorfo. El holomorfo tiene a la vez una forma de
multiplicacin asexuada, el anamorfo o estado imperfecto y una sexuada, el
teleomorfo o estado perfecto.

La reproduccin asexuada puede ocurrir por propagacin vegetativa a partir de

fragmentos de micelio, o por formacin de esporas de distinto tipo (conidios,
esporangiosporas, etc.). La reproduccin sexuada se caracteriza por la unin de
dos ncleos que dan lugar a esporas sexuadas (zigosporas, ascosporas, etc.).

Los hongos son clulas eucariticas (con ncleo y dems orgnelos membranas:
aparato de Golgi, mitocondrias, retculo endoplasmtico, etc.), carecen de clorofila
(son acloroflicos, no realizan la fotosntesis, por lo que son hetertrofos y
necesitan un aporte de carbono y nitrgeno fijado orgnicamente), tienen una
pared celular rgida bien definida de quitina; normalmente son inmviles, no
presentan tallos, races, hojas, ni vasos conductores como presentan las plantas.
LEVADURAS Y CARACTERES MORFOLOGICOS
Las caractersticas de las levaduras se determinan por examen microscpico.
Forma y estructura.-
La forma de las levaduras es muy variable: esfricas, ovoides, alimonada,
piriforme, cilndrica, triangular o incluso alargada en forma de micelo verdadero o
falso. Partes estructurales que pueden observarse son la pared celular,citoplasma,
vacuolas acuosas, amilceo. Para poner de manifiesto el ncleo hacen falta
tinciones especiales.
Reproduccin.-
La mayora se reproducen asexualmente por gemacin polar o multilateral,
proceso durante el cual se forma en la periferia de la clula una protuberancia con
crecimiento centrfugo; la yema aumenta de tamao hasta que finalmente se
desprende de la pared celular, constituyendo unas nuevas levaduras. En ciertas
levaduras principalmente las que forman pelcula, la yema crece en un saliente
tubuliforme que sobresale de la clula madre.

Conidios
Esporas exgenas en forma de rosario producidas por gemacin en el extremo de
una hifa (Penicillium).
Esporangios
Masas de esporas endgenas que se forman tambin en el extremo de una hifa
(Mucor o Rhizopus).

DESCRIPCIN DE LOS PRINCIPALES HONGOS INVASORES DE ALIMENTOS

Levaduras
Las levaduras se han definido como hongos microscpicos, unicelulares, la
mayora se multiplican por gemacin y algunas por escisin. Este grupo de
microorganismos comprende alrededor de 60 gneros y unas 500 especies.
Histricamente, los estudios sobre microbiologa enolgica se han centrado en las
levaduras pertenecientes al gnero Saccharomyces, que son las responsables de
la fermentacin alcohlica. La mayora se reproducen asexualmente por
gemacin, y otras especies lo hacen por fisin mltiple. Las levaduras que pueden
reproducirse sexualmente se conocen como verdaderas, este proceso implica la
formacin de ascosporas, sirviendo la propia levadura como asca, de aqu que
ellas se clasifican como Ascomicetos; por el contrario las falsas que no producen
ascosporas, pertenecen a los hongos imperfectos. Algunas levaduras son
alterantes de los alimentos, principalmente aquellos con elevado contenido de
azcares. La figura 1 muestra las estructuras propias de las levaduras.
Figura 1. Formas de levadura y levaduras en gemacin

Aspergillus
Los mohos del gnero Aspergillus causan el deterioro de muchos productos
alimenticios. Los productos metablicos de la invasin fngica suelen ser muy
txicos, tanto para el hombre como para otros animales. Tambin producen la
inhibicin de la germinacin junto con cambios de color, calentamiento,
enmoheciendo, apelmazado y finalmente podredumbre de las semillas.

Caractersticas microscpicas delas colonias de Aspergillus sp.

Los conidiforos son de pared lisa, hialina o pig-mentada y miden de 1,5 a 3 mm
de largo y de15 a 20 m de dimetro. La vescula es globosa con 50 - 100 m de
dimetro y produce filides alrededor de ella. Las filides son biseriadas, las
ramas primarias miden 30 m de largo y pueden estar tabicadas, mientras que las
secundarias son cortas y miden 8 m de longitud, a partir de las cuales brotan los
conidios, los cuales son globosos y rugosos con 4 a 5 m de dimetro, de color
castao o marrn a negro.
Figura 2- Esquema de las principales estructuras de Aspergillus sp.

A B

Figura 3. Morfologa observada en microscopio A.100X y B. 40X

Gnero Penicillium
El Penicillium es un gnero grande y encontrado casi por todas partes, y siendo
comnmente el gnero de hongos ms abundante en suelos. La fcil proliferacin
de los Penicillium en los alimentos es un problema. Algunas especies producen
toxinas y pueden hacer el alimento no comestible o an peligroso. Es una
buena prctica desechar los alimentos que demuestran el desarrollo de cualquier
moho. Por otra parte otras especies de Penicillium son beneficiosas para los seres
humanos. Los quesos tales como el roquefort, brie, camembert, stilton, etc. se
crean a partir de su interaccin con algunos Penicillium y son absolutamente
seguros de comer.
Este gnero se caracteriza por formar conidios en una estructura ramificada
semejante a un pincel que termina en clulas conidigenas llamadas filides. En
la figura 4 se esquematizan los tipos de conidiforos del gnero Penicillium, cuyas
ramificaciones se ubican formando verticilos. Si hay slo un verticilo de filides el
pincel es monoverticilado. Las ramificaciones de un pincel poliverticilado son
ramas, rmulas, mtulas y filides. Los conidios generados en filides suelen
llamarse fialoconidios para indicar su origen. En la filide, al dividirse el ncleo, se
extiende simultneamente el extremo apical que luego se estrangula separando a
la espora recin formada. La figura 3 muestra el Penicillium observado al
microscopio.

Figura 4. Observacin de Penicillium en 100X

Branquias
Branquias

CONIDIOFO

Figura 5. A. P. monoverticilado. B. P, terverticilado; C. biverticilado; D. Poliverticilado

Gnero Fusarium sp.

La forma y tamao de las esporas es la caracterstica principal para el
reconocimiento de los fusarios. Las esporas estn dispersas en el micelio areo o
en esporodoquios o masas limosas (pionotos). Los macroconidios son curvados,
pluriseptados, con una clula apical ms o menos puntiaguda y en muchas
especies con una clula basal en forma de pie. Los microconidios son
comnmente unicelulares, elipsoidales, fusiformes, claviformes, piriformes o
subglobosos, similares en ancho a los macroconidios, con una base redondeada o
truncada, por lo general formando cabezuelas mucosas. La presencia de una
clula basal con forma de pie en los macroconidios (Fig. 5 y 6) se considera
caracterstica de Fusarium. Las especies de Fusarium se encuentran en los
vegetales antes de la cosecha. Como persisten en los productos almacenados, si
la actividad del agua lo permite crecern causando alteraciones y a veces
produciendo toxinas.

.
Fig.6. Microconidios de Fusarium 100X

MACRO
CONIDIOS

CLULA BASAL

Fig 7. Esquema de Fusarium

Gnero Rhizopus.
Hongo filamentoso que presenta esporangiforos sin ramificar (de hasta 2 mm x
20 m), de color pardo oscuro que nacen de un nudo de rizoides bien
desarrollados (Figura 7 B, C, D, E.). Esporangios esfricos negros (de hasta 275
m de dimetro) con columela (Figura 7 B,C,D). Esporangiosporas negras de 8 a
15 m. Abundantes rizoides y zigosporas esfricas de pared gruesa, desnuda (de
hasta 200 m de dimetro) Fig. 7 E y F. Algunos presentan zigosporas,
estructucturas reproductivas sexuales Fig. 7. A.

A B C

D E F

Figura 8 Estructuras de Rhizoides

Figura 9. Esquema de las estruturas caractersticas de Rhizopus

El micelio carece de septos. Presentan estolones y rizoides. Los esporangiforos
no son ramificados, tienen una longitud de 2 mm, generalmente estn en grupos,
formando verticilios en cuya base se sitan los rizoides. Las apfisis pueden estar
presentes pero son poco evidentes. Presentan esporangios esfricos cuyo ancho
es de 50 a 300 m, los cuales son de color gris pardusco a negro. La columnela es
subesfrica abarcando entre 50 a 70% del esporangio. Las esporangiosporas son
angulares y con estras longitudinales, grisceas, subesfricas o elipsoidales con
dimensiones de 6 a8 x 4 a 5 m.

Gnero Tricoderma

El Trichoderma es un tipo de hongo anaerobio facultativo que se encuentra de

manera natural en un nmero importante de suelos agrcolas y otros tipos de
medios. Pertenece a la subdivisin Deuteromycetes que se caracterizan por no
poseer, o no presentar un estado sexual determinado. De este microorganismo
existen ms de 30 especies, todas con efectos benficos para la agricultura y
otras ramas. El Trichoderma probablemente sea el hongo beneficioso, ms verstil
y polifactico que abunda en los suelos. No se conoce que dicho microorganismo
sea patgeno de ninguna planta; sin embargo, es capaz de parasitar, controlar y
destruir muchos hongos, nemtodos y otros fitopatgenos, que atacan y destruyen
muchos cultivos; debido a ello, muchos investigadores le llaman el hongo
hiperparsito. Ello convierte al Trichoderma en un microorganismo de
imprescindible presencia en los suelos y cultivos, y de un incalculable valor
agrcola.

Posee conidiforos erectos y arrastrados, altamente ramificados, ms o menos

cnicos, dbil o fuertemente verticilados. Fialides con apariencia de juego de bolos
en racimos o separadas, desde las que se sostienen las condias subglobosas o
elipsoidales
 A B C

D E F

Figura 10. Estructuras de Tricoderma. A. Conidios globosos. B. Conidioforo poco

ramificado.

C. Esquena de la estructura. D. Clamidiosporas. E. Ramificacin intrincada.

F. Fialides ampuliformes

OBJETIVOS:

1.Conocer la morfologa de las estructuras somticas y reproductoras de las

levaduras y de los hongos filamentosos ms importantes que atacan alimentos
2.Identificar las caractersticas macroscpicas de colonias de hongos
filamentosos.

MATERIALES:
Microscopio compuesto.
Microscopio estereoscpico.
 Cultivos de Mohos.
Cultivos de Levaduras.
Portaobjetos y Cubreobjetos.
Lugol, azul de metileno y de lactofenol
Agujas de diseccin.
Cinta adhesiva
Mecheros

PROCEDIMIENTO PARTE 1. (Levaduras)

1. Coloca una gota de agua destilada en el porta objetos y con el asa tome un poco
de cultivo de levadura activada y aada una gota de lugol, o azul de metileno
coloque un cubreobjetos y observe al microscopio con los objetivos de 10X y 40X y
100X Observa la preparacin elabore esquemas y conteste lo siguiente:

a) Cmo es el talo o forma celular de estos hongos?

b).El mecanismo de reproduccin que se observa?
(Dibuje y esquematice Tome las fotografas) seale los detalles en los esquemas

PROCEDIMIENTO PARTE 2 (Hongos)

Observacin microscopica
1. Coloque una gota de azul de lactofenol en el centro del portaobjetos
2. Tome unos 8 cm. de cinta adhesiva transparente entre los dedos pulgar en
ndice, con el adhesivo hacia fuera.
3. Presione suavemente el lado adhesivo de la cinta sobre la superficie de una
caja de la muestra de hongo.
4. Coloque la cinta con el lado adhesivo hacia abajo y pegada sobre el portaobjeto
con el colorante.
5. Observe al microscopio con los objetivos de 10X y 40X realice esquemas de lo
observado

Observacin macroscopica
Registre las caractersticas macroscpicas de las colonias en los cultivos de mohos
para cada uno de los mohos que se te proporcionen de la siguiente manera:

Numere las cajas de petri para poder contestar el cuadro de resultados de esta parte:
1. Color del anverso y reverso de la colonia
2. Aspecto: liso, polvoso, vellloso, pulverulento, algodonoso, mucilaginoso,
aterciopelado, brilloso, plegado, etc. (ver algunos ejemplos en las fotografas
suministradas en la gua)
3. Cmo es el talo de estos hongos y como son las hifas: septadas o aseptadas
4. El mecanismo de reproduccin que se observa y si hay presencia de cuerpos
fructferos.?

RESULTADOS:
1. Menciona las estructuras de reproduccin asexual y sexual que se observaron.
Qu hongos crees que presentan mayor grado de organizacin estructural en
sus cuerpos fructferos?
2. Todos los hongos observados presentan micelio? Explique

3. Completa la siguiente tabla:

Tabla 1. Cuadro de resultados con Caractersticas de las colonias observadas

Especie Color del Color del Aspecto de Tipo de hifa Tipo de

del hongo verso de la reverso de la colonia (septada o cuerpo
colonia la colonia no septada) fructfero