CURSO DE INMUNOLOGA

GENERAL
4. Antgenos
Enrique Iez Pareja

Departamento de Microbiologa

Universidad de Granada

Espaa

NDICE:
4.1 PROPIEDADES GENERALES *

4.2 FACTORES QUE CONDICIONAN LA INMUNOGENICIDAD *

4.2.1 Factores de la molcula inmunognica *

4.2.1.1 Carcter de no-propia *

4.2.1.2 Tamao molecular *

4.2.1.3 Heterogeneidad en la composicin qumica *

4.2.1.4 Degradabilidad *

4.2.2 Factores del sistema biolgico *

4.2.2.1 Genotipo del receptor *

4.2.2.2 Dosis y ruta de administracin del antgeno *

4.2.2.3 Adyuvantes ( coadyuvantes) *

4.3 EPITOPOS *
4.3.1 Propiedades de los epitopos de clulas B *

4.3.2 Propiedades de los epitopos reconocidos por clulas T *

4.4 HAPTENOS *

4.5 MITGENOS Y SUPERANTGENOS *

4.5.1 Mitgenos *

4.5.2 Superantgenos *

4.1 PROPIEDADES GENERALES

Se definen como antgenos aquellas sustancias capaces de inducir una
repuesta inmune especfica.

Los antgenos exhiben (o pueden mostrar) una serie de propiedades

inmunolgicas:

inmunogenicidad: capacidad de inducir una respuesta inmune especfica,

humoral y/o celular. En este sentido, antgeno sera sinnimo de
inmungeno.
clulas B + Ag clulas plasmticas + clulas B de memoria
clulas T + Ag clulas T efectoras + clulas T de memoria.
antigenicidad: capacidad de combinarse con anticuerpos y/o con
receptores de clulas T (TCR).
si una molcula es inmunognica, tambin es antignica;
sin embargo, la inversa no siempre es verdad: p. ej., ms adelante en este
captulo hablaremos de los haptenos, que por s mismos no desencadenan
respuesta inmune, pero que pueden ligarse a Ac preformados.
alergenicidad: capacidad de inducir algn tipo de respuesta
alrgica. Los alergenos son inmungenos que tienden a activar ciertos
tipos de respuestas humorales o celulares que dan sntomas de
alergia. tolerogenicidad: capacidad de inducir una falta de
respuesta especfica en la rama celular o en la humoral.
4.2 FACTORES QUE CONDICIONAN LA
INMUNOGENICIDAD
El sistema inmune reconoce molculas de los microorganismos, pero
no todos los tipos de molculas tienen la misma capacidad
inmunognica:

las ms inmunognicas son las protenas

los hidratos de carbono poseen menor capacidad inmunognica
los lpidos y los cidos nucleicos slo son inmunognicos cuando van unidos
a protenas o a carbohidratos.

Por otro lado, hay que tener ya presente que en la rama humoral
pueden actuar de inmungenos todos los tipos moleculares que
acabamos de citar, mientras que en la rama celular slo lo son las
protenas.

A continuacin trataremos los factores que condicionan la

inmunogenicidad de los antgenos, diferenciando los que dependen de
la propia molcula antignica y los que dependen del sistema
biolgico (el hospedador donde ocurre la respuesta inmune).

4.2.1 Factores de la molcula inmunognica

4.2.1.1 Carcter de no-propia

Ante todo, la molcula ha de ser reconocida como una molcula

extraa, ajena al individuo. Tenemos pues, que un primer rasgo
condicionador de la inmunogenicidad es el grado de falta de parecido
entre el antgeno con respecto a molculas propias.

En general, molculas que han divergido ampliamente en los distintos linajes

evolutivos actan como buenos inmungenos en especies heterlogas.
En cambio, molculas evolutivamente conservadas (como el colgeno, el
citocromo c) no son buenas inmungenas.
Por otro lado, ciertas molculas propias pueden actuar como autoantgenos,
debido a que proceden de rganos inmunolgicamente privilegiados
(secuestrados respecto del sistema inmune) en las fases tempranas del
desarrollo (p. ej., del esperma, tejido de la crnea).

4.2.1.2 Tamao molecular

En general, se puede decir que, a mayor tamao, mayor
inmunogenicidad. Sustancias de unos 100.000 dalton (Da) suelen ser
buenos inmungenos, mientras que las de menos de 5.000-10.000 Da
son malos inmungenos.

4.2.1.3 Heterogeneidad en la composicin qumica

A mayor heterogeneidad de composicin qumica, mejor

inmunogenicidad.
Los copolmeros sintticos repetitivos de un solo aminocido, o los polisacridos a base de un solo
azcar son malos inmungenos.
La poli [glu-lys] requiere tener 30-40 kDa de p.m. para ser inmunognica;
pero el poli {[glu-lys]-tyr} slo requiere 10 kDa;
si al anterior copolmero lo volvemos ms complejo aadiendo unidades de phe, ya slo se necesitan
tamaos moleculares de 4 kDa para desencadenar respuesta inmune.

La complejidad qumica se expresa tambin en el hecho de que

contribuye la estructura secundaria, terciaria y cuaternaria de las
protenas.

4.2.1.4 Degradabilidad

Slo las molculas degradables por el hospedador son buenas

inmungenas. Como veremos, ello se debe a que la inmunidad
humoral y la celular dependen de la activacin de los linfocitos TH, que
a su vez depende de que ste reconozca antgeno degradado,
procesado y presentado por molculas MHC-II de las clulas
presentadoras de antgeno (APC).

Las molculas no degradables no son buenas inmungenas. Por

ejemplo, los polmeros de D-aminocidos no pueden ser degradados
por los macrfagos (stos no tienen enzimas hidrolticas adecuadas),
por lo que no pueden se procesados y presentados a los linfocitos TH.

En general, las molculas grandes e insolubles son mejores

inmungenos, ya que son mejor fagocitadas y procesadas.

4.2.2 Factores del sistema biolgico

4.2.2.1 Genotipo del receptor

La influencia del genotipo del hospedador se puede comprobar en

experimentos usando razas puras de animales de laboratorio.
Supongamos que disponemos de una raza pura A que induce altos
niveles de Ac en respuesta a un determinado Ag, y otra raza B que
produce bajos niveles de Ac ante ese mismo Ag. Los individuos de la
F1 procedentes del cruce de AxB exhiben niveles intermedios de Ac al
ser enfrentados con el citado Ag.

Por anlisis de retrocruzamiento se comprob que los genes que

controlan la mayor o menor respuesta se cartografiaban en una zona
concreta de un cromosoma, dentro del llamado complejo principal de
histocompatibilidad (MHC).

Las protenas sintetizadas por dicho complejo MHC funcionan para

presentar el Ag procesado a las clulas T, y juegan un papel esencial
en determinar el grado de respuesta a cada antgeno.

Aparte de la dotacin de alelos del complejo MHC que cada individuo

posee, existen otros genes que tambin influyen en el grado de
respuesta inmune, como los que codifican el BCR, el TCR y los de
citoquinas. Esto ser tratado en el captulo dedicado a la regulacin de
la respuesta inmune.

4.2.2.2 Dosis y ruta de administracin del antgeno

Para cada inmungeno experimental existe un protocolo de

administracin ms adecuado, que supone usar una determinada ruta
y cierta dosis, lo que condiciona una respuesta inmune ptima.
Determinar estos parmetros reviste un especial inters a la hora de
la administracin de las vacunas.

Dosis:

dosis muy bajas de Ag pueden no estimular a los linfocitos (falta de

respuesta);
dosis demasiado altas pueden provocar un estado activo de tolerancia
inmunolgica, por el que los linfocitos entran en una situacin de no
respuesta.
dosis adecuadas son capaces de estimulacin.
Un protocolo de dosis repetidas espaciadas a lo largo de varias semanas es
mejor que una dosis nica, porque provoca una mayor proliferacin clonal
de linfocitos t y B especficos.

Rutas de administracin: determinan a qu organo linfoide ir a

parar el antgeno.

por va oral se estimula sobre todo el MALT del tracto digestivo (pero al
mismo tiempo se puede inducir tolerancia sistmica: vase tema 15).
 por va parenteral:
intravenosa: el antgeno podr quedar retenido en el bazo
intradrmica
subcutnea: el antgeno terminar en algn ganglio regional
intramuscular
intraperitoneal

4.2.2.3 Adyuvantes ( coadyuvantes)

Los adyuvantes son sustancias que cuando se mezclan con un Ag y se

inyectan con l, mejoran la inmunogenicidad de ese antgeno.

Algunos adyuvantes y sus mecanismos de accin:

Almina: sales insolubles de sulfato alumnico-potsico. Acta

mediante varios mecanismos:

1. precipita el antgeno. Al inyectarse va liberando el antgeno

lentamente, con lo que se suministra un estmulo persistente (el
Ag dura varios das en el lugar donde se inocul).
2. El Ag precipitado tiene mayor tamao, por lo que puede ser
fagocitado ms fcilmente, y por lo tanto es presentado ms
efectivamente.
3. Induccin de granulomas.

Adyuvantes de Freund: el adyuvante incompleto de Freund consiste

en una solucin acuosa con el Ag, junto con un aceite mineral y un
agente dispersante (p. ej., el manoleato). El adyuvante completo de
Freund es como el incompleto, pero incorpora una suspensin
de Mycobacterium muertos por calor.

1. Ambas versiones liberan lentamente el Ag, con lo que se logra

un estmulo persistente.
2. El macrfago aumenta en su superficie el nmero de molculas
B7, lo que facilita su interaccin con el receptor CD28 del
linfocito TH. Como veremos en otro captulo, ello suministra la
llamada seal coestimulatoria, que potencia la interaccin entre
MHC (del macrfago), Ag procesado y TCR (de la clula T).
3. Adems, el completo es ms potente porque suministra
muramil-dipptidos de la pared celular de las micobacterias: ello
permite una buena activacin de macrfagos, que liberan la
citoquina IL-1, que a su vez activa a los linfocitos TH.
4. El completo induce igualmente mejor los granulomas. El
granuloma es una infiltracin celular, con una masa densa y rica
 en macrfagos, con lo que se mejora el procesamiento y
presentacin del Ag. Se provoca una buena liberacin de IL-1 de
los macrfagos, que activan a los linfocitos TH.

Polirribonucletidos sintticos: estimulan la proliferacin

inespecfica de linfocitos.

Lipopolisacrido bacteriano (LPS): igual efecto que el anterior.

Recientemente se estn ensayando los liposomas: el antgeno se

encierra en liposomas o se une a la bicapa lipdica de este tipo de
vesculas membranosas.

4.3 EPITOPOS
Los epitopos o determinantes antignicos son cada uno de los sitios
discretos de una macromolcula que son reconocidos individualmente
por un anticuerpo especfico o por un TCR especfico. Son las regiones
inmunolgicamente activas de un inmungeno (las que se unen de
hecho a un receptor de linfocitos o a un Ac libre).

Por lo tanto, a partir de ahora habremos de acostumbrarnos a pensar

en los antgenos como estructuras complejas que suelen constar de
varios tipos de epitopos, cada uno de ellos capaz de unirse con un Ac
o un TCR especfico diferente. En este sentido, las macromolculas
son antgenos multivalentes, con muchos tipos de determinantes
antignicos distintos.

Si hablamos de Ag proteicos, esta unin suele implicar varios niveles de la

estructura del antgeno, desde la primaria a la terciaria (y, en su caso) a la
cuaternaria.
En el caso de los polisacridos, las ramificaciones debidas a distintos enlaces
glucosdicos suponen conformaciones peculiares que son reconocidas de
modo especfico.

Diferencias en el modo de reconocimiento por parte de clulas

ByT

Epitopos de clulas Epitopos de clulas

 B T
unin con el Ag binaria: Ig - Ag ternaria: TCR - Ag-
MHC

(reconocimiento
restringido por el
haplotipo)
se une a Ag S No
soluble?

requiere MHC? No S

naturaleza qumica Protena nicamente protenas

del epitopo
Lpido

Polisacrido
Propiedades del parte externa, parte interna,
epitopo accesible desnaturalizada

hidrfilo anfiptico

movilidad pptido lineal; unin

(flexibilidad) a MHC

secuencial o
conformacional

4.3.1 Propiedades de los epitopos de clulas B

1. El tamao de un epitopo depende del tamao del sitio de unin
que posea la inmunoglobulina especfica respectiva. Cada sitio de
unin a un epitopo en una inmunoglobulina se denomina
paratopo.
 2. Los epitopos de clulas B de protenas nativas suelen consistir en
varios aminocidos hidrfilos de la superficie de la protena, y
son los que estn ms accesibles al Ac libre o al Ac de
membrana (del BCR).
3. Los epitopos reconocidos por clulas B pueden ser secuenciales
(es decir, una serie de aminocios contiguos) o no secuenciales
(tambin llamados conformacionales).

Los epitopos secuenciales suelen depender de regiones en forma de bucle,

situadas entre cadenas consecutivas.
Los epitopos conformacionales dependen de la configuracin nativa de la
protena.

4. Si desnaturalizamos una protena, se perdern los epitopos

conformacionales pero permanecern los secuenciales.
5. Los epitopos de B tienden a situarse en regiones flexibles de la
molcula, capaces de "moverse" molecularmente. Parece que
ello tiende a facilitar el encaje con las regiones complementarias
(paratopo) del Ac.
6. La mayor parte de la superficie de una protena globular es
potencialmente antignica, y consiste en numerosos epitopos
parcialmente superpuestos. Ahora bien, dada una determinada
protena, no todos los epitopos son igualmente inmunognicos
para distintos individuos de la misma especie. Para cada
individuo y para cada Ag suele existir un epitopo llamado
inmunodominante.

4.3.2 Propiedades de los epitopos reconocidos por

clulas T
Antes de desarrollar las caractersticas de estos epitopos describiremos sucintamente una serie de estudios
clave que sealaron las diferencias esenciales entre el modo en que las clulas T reconocen los epitopos
respecto a lo visto para las clulas B:

Estudios de Benacerraf (1959):

si inmunizamos un animal por primera vez con una protena nativa, se

puede observar una respuesta celular primaria.
Si inmunizamos al mismo animal una segunda vez con la misma protena
nativa, se
La "sorpresa" (para las expectativas de la poca) llega cuando esa segunda
inoculacin se hace con la protena desnaturalizada: tambin ocurre una
respuesta celular secundaria (algo que no ocurre con la respuesta humoral).
La explicacin a este fenmeno no lleg hasta los aos 80: fue
entonces cuando se descubri que los linfocitos T no reconocen Ag
soluble, sino Ag procesado, de modo que los pptidos resultantes son
presentados en asociacin con MHC.

1. El tamao del epitopo de clulas T queda determinado por el

tamao del surco de unin al Ag de la molcula de MHC.

Las molculas de MHC-I unen pptidos de entre 8 y 11 aminocidos.

Las molculas de MHC-II unen pptidos de entre 11 y 17 aminocidos.

2. Los pptidos antignicos reconocidos por clulas T forman un

complejo trimolecular junto con el TCR del linfocito T y el MHC
de la clula presentadora o diana. El antgeno reconocido por
clulas T tiene dos zonas de unin: una para ligarse al TCR,
denominada epitopo, y otra para engarzar al MHC, denominada
agretopo.
3. Los pptidos antignicos implicados en el complejo trimolecular
proceden del procesamiento intracelular del inmungeno proteico
original.
4. Los antgenos reconocidos por las clulas T presentan pptidos
anfipticos. Precisamente, quiz la funcin del procesamiento
sea "desplegar" el Ag y exponer estas regiones internas
anfipticas, de modo que la porcin hidrfoba suele actuar de
agretopo, mientras que la porcin hidrfila acta de epitopo
propiamente dicho.

Por programas de ordenador es posible predecir en una protena aquellas

regiones anfipticas de tamao adecuado que tericamente podran actuar
como pptidos antignicos. Esto se refleja en el llamado "ndice anfiptico", y
se est aplicando actualmente al diseo de vacunas sintticas peptdicas
(como en el caso de la malaria).
Tambin se puede recurrir por ordenador a medir el "ndice de protrusin" de
distintas partes de las protenas: las zonas con menor protrusin son mejores
candidatas a funcionar como pptidos de clulas T.

5. Debido a que los Ag reconocidos por clulas T lo son unidos a las

molculas de MHC del individuo, y debido a que a su vez existe
una gran diversidad de alelos de MHC en las poblaciones de una
especie, los epitopos inmunodominantes en cada individuo
dependen en parte del juego de molculas MHC de ese individuo
(lo cual, depende de su dotacin gentica, obviamente). En una
protena slo una minora de zonas peptdicas tienen capacidad
 para unirse a las molculas MHC de cada individuo, y de esas
zonas, slo algunos estimulan de hecho a la clula T.

4.4 HAPTENOS
Se define como hapteno aquel grupo qumico definido, de pequeo
tamao, que por s mismo es incapaz de desencadenar una respuesta
inmune (es decir, no es inmungeno), pero que unido covalentemente
a una molcula portadora se comporta como inmungeno (llegando a
constituir el nico determinante inmunodominante del conjugado).

En los aos 20 y 30 Karl Landsteiner realiz unos famosos

experimentos que mostraron por primera vez la asombrosa
especificidad del sistema inmune.

como haptenos emple una serie de derivados del benceno, como el

dinotrofenol (DNP), en configuraciones distintas (orto, meta, para), as como
distintos derivados a base de distintos sustituyentes en determinadas
posiciones conocidas.
Como molcula portadora emple la seroalbmina bovina (BSA).
Obtena as distintas versiones de conjugados BSA-DNP.
Inyectaba conjugados BSA-DNP en un animal de laboratorio, esperaba a que
se produjera la respuesta inmune, y tras una sangra, obtena suero
enriquecido en anticuerpos frente al hapteno (antisuero especfico).
Finalmente, pona en contacto el antisuero con el hapteno original, y en
paralelo, con otros haptenos consistentes en variantes del original (lugar del
localizacin de algn radical, naturaleza qumica del radical).

Las conclusiones que se pueden extraer de estos experimentos son:

Casi ms importante que la naturaleza qumica concreta del hapteno es la

configuracin global del mismo (obsrvese que el hapteno equivale a un
epitopo inmunodominante) a la hora de determinar si dicho hapteno puede
reaccionar (y en qu cuanta) con el antisuero (anticuerpos).
En los experimentos se puede comprobar igualmente la existencia de
algunas reacciones cruzadas, sobre todo cuando dos haptenos comparten
una configuracin parecida.
Igualmente se puede advertir de estos experimentos la enorme diversidad
posible de anticuerpos: cualquier estructura qumica definida, natural o
artificial, puede dar origen, si va unida a un portador, a anticuerpos
especficos.
4.5 MITGENOS Y SUPERANTGENOS
4.5.1 Mitgenos
Los mitgenos son agentes capaces de inducir la proliferacin de una
gran cantidad de clones de linfocitos T y/o B, de modo inespecfico
(por lo que tambin se denominan activadores policlonales).

Ejemplos de mitgenos:

Lectinas: conllevan la aglutinacin de clulas (entre ellas linfocitos), pero

aqu nos interesan sobre todo por su capacidad de activacin policlonal de
clulas T, B, o de ambas. Como ejmplos de lectinas tenemos:
concanavalina A (conA), que es mitgeno de clulas T
fitohemaglutinina (PHA), que es mitgenos de clulas T
mitgeno de fitolaca (PWM), que es mitgeno tanto de T como de B.
Lipopolisacrido (LPS) de bacterias Gram negativas. Su actividad
como mitgeno reside en la porcin de lpido A.

4.5.2 Superantgenos
Los superantgenos son unos potentes activadores policlonales de
clulas T que expresan secuencias comunes en sus receptores: llegan
a activar hasta la quinta parte del total de estos linfocitos). Esta
activacin es independiente de la especificidad hacia una combinacin
particular de Ag procesado-MHC.

Unen la porcin V del TCR y lo entrecruzan con la parte externa del

MHC, fuera del surco que normalmente sirve para exponer y presentar
el antgeno. De esta forma, entrecruzan de modo inespecfico las
clulas TH con las APC, de modo que los linfocitos T se activan sin
haber reconocido Ag procesado y presentado en el surco de MHC-II de
las APC. El resultado es que un gran nmero de clones de clulas T
segregan grandes niveles de citoquinas, lo que puede llevar a shock y
a muerte.

Ejemplos de superantgenos son ciertas toxinas de Staphylococcus

aureus, como la toxina del sndrome del choque txico (TSS-1), o la
enterotoxina.

14. CITOQUINAS *

14.1 INTRODUCCIN *
14.2 PROPIEDADES GENERALES DE LAS CITOQUINAS *

14.3 ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS CITOQUINAS *

14.4 RECEPTORES DE CITOQUINAS *

14.4.1 Estructura general de las familias de receptores de citoquinas *

14.4.2 Transduccin de seal *

14.5 ANTAGONISTAS DE CITOQUINAS *

14.6 CONSECUENCIAS BIOLGICAS DE LA SECRECIN DE CITOQUINAS POR PARTE DE LOS

LINFOCITOS TH1 Y TH2 *

14. INTRODUCCIN
Las citoquinas (o citocinas) son un grupo de protenas de bajo peso molecular
que actan mediando interacciones complejas entre clulas de linfoides,
clulas inflamatorias y clulas hematopoyticas.

Sus funciones son muy variadas, pero se pueden clasificar en unas pocas
categoras:

diferenciacin y maduracin de clulas del sistema inmunitario;

comunicacin entre clulas del sistema inmunitario;
en algunos casos, ejercen funciones efectoras directas.

En el pasado reciente hubo un cierto galimatas con la cuestin de su

denominacin. As, muchas de las primeras citoquinas se descubrieron como
sealizadoras entre leucocitos, por lo que se denominaron interleuquinas; otras
eran secretadas por monocitos/macrfagos, por lo que se llamaron
monoquinas. Sin embargo, muchas de esas sustancias son producidas por
otros tipos celulares, por lo que se desaconseja el uso de esas
denominaciones, para agruparlas a todas bajo el concepto de citoquinas. Las
quimioquinas (o quimiocinas) son un tipo de citoquinas de pequeo tamao,
con papeles en la respuesta inflamatoria y la quimiotaxis de fagocitos.

14.2 PROPIEDADES GENERALES DE

LAS CITOQUINAS
Las citoquinas son un grupo de protenas secretadas de bajo peso molecular
(por lo general menos de 30 kDa), producidas durante las respuestas inmunes
natural y especfica. Se unen a receptores especficos de la membrana de las
clulas donde van a ejercer su funcin, iniciando una cascada de transduccin
intracelular de seal que altera el patrn de expresin gnica, de modo que
esas clulas diana producen una determinada respuesta biolgica.

Las citoquinas son producidas por mltiples tipos celulares, principalmente

del sistema inmune. Dentro del sistema inmune natural, los macrfagos son
de las clulas ms productoras de citoquinas, mientras que en el sistema
especfico lo son las clulas T colaboradoras.
La produccin de las citoquinas suele ser breve (transitoria), limitada al
lapso de tiempo que dura el estmulo (es decir, el agente extrao). En
muchos casos ello se debe a que los correspondientes ARNm tienen una
corta vida media, que a su vez depende de que las zonas 3 no traducibles
son ricas en A y U.
Considerando las diversas citoquinas, stas pueden exhibir una o varias de
las siguientes cualidades:

- pleiotropa (mltiples efectos al actuar sobre diferentes clulas).

- redundancia (varias citoquinas pueden ejercer el mismo efecto).

- sinergismo (dos o ms citoquinas producen un efecto que se potencia

mutuamente).

Por ejemplo, la accin conjunta de IL-4 e IL-5 induce en clulas B el cambio de clase para que produzcan
IgE.

- antagonismo (inhibicin o bloqueo mutuo de sus efectos).

Por ejemplo, el IFN- bloquea el cambio de clase promovido por IL-4.

Las citoquinas ejercen su accin al unirse a receptores especficos para cada

citoquina en la superficie de la clula en la que ejercen el efecto. La afinidad
de cada receptor hacia su citoquina correspondiente suele ser bastante alta,
del orden de lo femtomolar (10-15 M) a lo picomolar (10-12 M).
Utilizando la analoga de lo que ocurre con las hormonas del sistema
endocrino, las accin de las citoquinas se puede clasificar en:

- de tipo autocrino

- de tipo paracrino

- (en pocas ocasiones) de tipo endocrino.

Las citoquinas "controlan" el sistema inmune de varias maneras, que podemos

agrupar de la siguiente manera:
 regulando (activando o inhibiendo) la activacin, proliferacin y
diferenciacin de varios tipos de clulas;
regulando la secrecin de anticuerpos y de otras citoquinas.

14.3 ESTRUCTURA Y FUNCIN DE LAS

CITOQUINAS
Las citoquinas son protenas o glucoprotenas de menos de 30 kDa. Muchas de
ellas pertenecen a la llamada familia de las hematopoyetinas, y tienen
estructuras terciarias parecidas: una configuracin a base de un conjunto de
cuatro hlices , con poca estructura en lmina .

Generalmente actan como mensajeros intercelulares que suelen intervenir en

la maduracin y amplificacin de la respuesta inmune, provocando mltiples
actividades biolgicas una vez que se unen a los receptores especficos de las
clulas diana adecuadas.

Aunque existen muchos tipos de clulas productoras citoquinas (ya hemos ido
viendo unas cuantas en los temas anteriores), los ms importantes son los
linfocitos TH y los macrfagos, ya que sus citoquinas son esenciales para que
se produzca la respuesta inmune una vez que se activan las clulas T y B por
el contacto con las correspondientes clulas presentadoras de antgeno.

Principales tipos de respuesta mediatizados por la accin de las

citoquinas:

1. activacin de los mecanismos de inmunidad natural:

a. activacin de los macrfagos y otros fagocitos
b. activacin de las clulas NK
c. activacin de los eosinfilos
d. induccin de las protenas de fase aguda en el hgado (ver tema
16, sobre el complemento).
2. Activacin y proliferacin de clulas B, hasta su diferenciacin a clulas
plasmticas secretoras de anticuerpos.
3. Intervencin en la respuesta celular especfica.
4. Intervencin en la reaccin de inflamacin, tanto aguda como crnica.
5. Control de los procesos hematopoyticos de la mdula sea.
6. Induccin de la curacin de las heridas.

Hay una aparente paradoja de las citoquinas que debemos explicar: Por qu
las citoquinas, que son inespecficas respecto del antgeno, pueden ejercer
acciones de modo especfico? Veamos varios mecanismos:

Regulacin muy fina de los receptores de cada citoquina: los

 receptores celulares indispensables para que una citoquina ejerza su papel
slo se expresan en tipos celulares concretos una vez que stos han
interaccionado con el antgeno (pensemos por ejemplo en los linfocitos
cebados con antgeno).
Requerimientos de contactos estrechos clula a clula: la citoquina
slo alcanza concentraciones adecuadas para actuar en el estrecho espacio
que queda entre dos clulas interactuantes; recordar por ejemplo las
"bolsas" que se forman en el conjugado TH:B, donde se alcanzan mejor esos
niveles de citoquinas.
Corta vida media de las citoquinas en sangre y fluidos, lo que asegura
que slo van a actuar en un estrecho margen de tiempo, en las cercanas de
la zona donde se produjeron.

14.4 RECEPTORES DE CITOQUINAS

14.4.1 Estructura general de las familias de
receptores de citoquinas
Hay diversos tipos de receptores de membrana para citoquinas, pero se
pueden agrupar en cinco familias:

Familia de receptores de citoquinas de la superfamilia de las

inmunoglobulinas, que poseen varios dominios extracelulares de tipo Ig.
Como ejemplo, el receptor especfico para la IL-1.
Familia de clase I de receptores de citoquinas (=familia de receptores de
hematopoyetinas). (Veremos ms detalles de esta familia un poco ms
adelante).
Familia de clase II de receptores de citoquinas (=familia de receptores de
interferones). Ejemplos de ligandos son los interferones no inmunes (IFN-
y ) y el IFN-.
Familia de receptores de TNF: sus miembros se caracterizan por un dominio
extracelular rico en cistenas. Ejemplos de ligandos: TNF-, TNF-, CD40.
Familia de receptores de quimioquinas: son protenas integrales de
membrana, con 7 hlices inmersas en la bicapa lipdica. Interaccionan, por
el lado que da al citoplasma con protenas de sealizacin trimricas que
unen GTP. Ejemplos de quimioquinas que se unen a miembros de esta
familia: IL-8, RANTES.

La mayor parte de los receptores de citoquinas del sistema inmune pertenecen

a la familia de clase I (de receptores de hematopoyetinas). Todos sus
miembros tienen en comn poseer una protena anclada a membrana, con un
dominio extracelular en el que hay al menos un motivo caracterstico llamado
CCCC (cuatro cistenas cercanas en posiciones equivalentes) y el llamado
motivo WSXWS (Trp-Ser-X-Trp-Ser). (Adicionalmente, algunos miembros
poseen dominios de tipo Ig y/o dominios de tipo fibronectina). Tras su porcin
transmembrana se encuentra una larga cola citoplsmica con ciertas tirosinas
susceptibles de fosforilacin.

La mayor parte de los receptores de clase I poseen dos protenas de

membrana:

Cadena , que es la subunidad especfica de la citoquina, sin capacidad de

enviar seales al citoplasma;
Cadena , una subunidad transductora de seal, que a menudo no es
especfica de citoquina, sino que es compartida por receptores de otras
citoquinas. Esta cadena es del tipo que hemos descrito ms arriba
(motivos CCCC y WSXWS).

La subunidad transductora de seal se necesita para formar el receptor de alta

afinidad, y para transducir la seal al interior. Ello se logra porque tras la
unin, se fosforilan ciertas tirosinas de la larga cola citoplsmica de la cadena
transductora de seal.

En los esquemas comparativos de distintos receptores se puede apreciar que algunos de ellos poseen el
mismo tipo de subunidad . Este hecho permite explicar dos cualidades a las que ya hemos aludido: la
redundancia y el antagonismo.

Por ejemplo: consideremos los receptores de IL-3, IL-5 y GM-CSF, que como se ve, comparten el mismo
tipo (llamado KH97) de cadena .

Redundancia: por separado, las tres citoquinas citadas, al tener sendos receptores que tienen el mismo
tipo de cadena , provocan los mismos efectos biolgicos: proliferacin de eosinfilos y desgranulacin de
basfilos.

Antagonismo: las tres citoquinas compiten entre s por la unin de un nmero limitado de cadenas con
las especficas de cada receptor.

La subfamilia de receptores a la que pertenece el receptor de IL-2 (el llamado

IL2-R) consta de tres subunidades:

Cadena especfica de cada citoquina;

Dos subunidades (cadena y cadena comn C) transductoras de seal.

Esta versin trimrica de IL-2R es la que une IL-2 con mayor afinidad, pero en
realidad, el receptor para IL-2 no siempre aparece en esta forma, sino que
existe una forma monomrica (IL-2R) de baja afinidad, sin cadenas
transductoras, y por lo tanto incapaz de reenviar la seal, y una forma de
afinidad intermedia (IL-2R).

14.4.2 Transduccin de seal

Recientemente se han producido avances importantes en el desentraamiento
de la ruta que conduce desde la unin de la citoquina con el receptor de la
clula diana hasta la activacin de la transcripcin de los genes cuyos
productos son responsables de los efectos de dichas citoquinas. He aqu un
modelo general que se puede aplicar a muchos receptores de las clases I y II:

1. La citoquina provoca la dimerizacin de las dos subunidades del receptor

(cadenas y ), lo que coloca cercanas a sus respectivas colas
citoplsmicas.
2. Una serie de proten-quinasas de la familia de JAK (quinasas Jano) se
unen a las colas agrupadas de las subunidades del receptor, con lo que
se esas quinasas se activan.
3. Las JAK se autofosforilan.
4. Las JAK fosforilan a su vez determinadas tirosinas de las colas del
receptor,
5. Entonces protenas de otra familia, llamada STAT (iniciales inglesas de
transductores de seal y activadores de transcripcin) se unen a algunas
de las tirosinas fosforiladas de las colas del receptor, quedando cerca de
las JAK.
6. Las JAK fosforilan a las STAT unidas a las colas del receptor.
7. Al quedar fosforiladas, las STAT pierden su afinidad por las colas del
receptor, y en cambio tienden a formar dmeros entre s. (Las tirosinas
fosforiladas que han quedado libres en las colas del receptor sirven para
unir nuevos monmeros de STATs).
8. Los dmeros de STAT fosforilados emigran al ncleo de la clula, donde
actan ahora como activadores de la transcripcin de ciertos genes, al
unirse a secuencias especiales en la parte 5 respecto de las respectivas
porciones codificadoras.

14.5 ANTAGONISTAS DE CITOQUINAS

La actividad biolgica de las citoquinas est regulada fisiolgicamente por dos
tipos de antagonistas:

los que provocan el bloqueo del receptor al unirse a ste:

los que inhiben la accin de la citoquina al unirse a sta.

Como ejemplo de bloqueador de receptor tenemos el antagonista del

receptor de IL-1 (IL-1Ra), que bloquea la unin de IL-1 o IL-1 . Desempea
un papel en la regulacin de la intensidad de la respuesta inflamatoria. En la
actualidad se est investigando su potencial clnico en el tratamiento de
enfermedades que cursan con inflamacin crnica.

Los inhibidores de citoquinas suelen ser versiones solubles de los

respectivos receptores (y se suelen denominar anteponiendo una "s" al nombre
del receptor): la rotura enzimtica de la porcin extracelular libera un
fragmento soluble que retiene su capacidad de unirse a la citoquina. Existen
ejemplos de versiones solubles de los receptores IL-2R, IL-4R, IL-7R, IFN- R,
TNF- R, TNF- R.

El mejor caracterizado es el sIL-2R (versin soluble del receptor de la

interleuquina 2), que se libera durante la activacin crnica de los linfocitos T,
y que corresponde a los 192 aminocidos N-terminales de la subunidad .
Este sIL-2R se puede unir a la IL-2, impidiendo su interaccin con el autntico
receptor de membrana, con lo que esto supone un control sobre el exceso de
activacin de los linfocitos T. Este inhibidor se usa de hecho en clnica como un
marcador de la existencia de activacin crnica (caso, p. ej., de las
enfermedades autoinmunes, rechazo de injertos y SIDA).

Algunos virus han evolucionado (como parte de sus mecanismos de evasin

del sistema defensivo del hospedador) para producir protenas que se unen e
inactivan a las citoquinas.

Por ejemplo, los poxvirus codifican una protena soluble que se une al TNF- , y otra que se liga a la IL-1.
Con ello logran reducir el alcance e intensidad de los mecanismos inflamatorios naturales que forman parte
de la defensa del hospedador.

14.5 CONSECUENCIAS BIOLGICAS DE

LA SECRECIN DE CITOQUINAS POR
PARTE DE LOS LINFOCITOS TH1 Y TH2
En este apartado no vamos ms que a recordar y profundizar un poco ms en
algo ya tratado en el contexto del tema 13: cmo el distinto espectro de
citoquinas secretadas por las dos subpoblaciones de linfocitos TH determina
distintos efectos biolgicos, y cmo cada subpoblacin controla a la otra.

Las clulas TH1 producen IL-2, IFN- y TNF- . Son responsables de funciones
de inmunidad celular (activacin de linfocitos TC e hipersensibilidad de tipo
retardado), destinadas a responder a parsitos intracelulares (virus, protozoos,
algunas bacterias).

Las clulas TH2 producen IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13. Actan como colaboradoras
en la activacin de las clulas B, y son ms apropiadas para responder a
bacterias extracelulares y a helmintos. Tambin estn implicadas en reacciones
alrgicas (ya que la IL-4 activa la produccin de IgE y la IL-5 activa a los
eosinfilos).

En los aos recientes est cada vez ms claro que el resultado de la respuesta
inmune depende en buena medida de los niveles relativos de clulas TH1 y
TH2: en una respuesta a patgenos intracelulares existe un aumento de
citoquinas de TH1, mientras que en respuestas alrgicas y ante helmintos es
superior el nivel de las de TH2.

Un punto importante en todo esto es la existencia de una regulacin cruzada

entre TH1 y TH2:

El IFN- secretado por las TH1 inhibe la proliferacin de las TH2.

Por su lado, la IL-10 secretada por las TH2 inhibe la secrecin de IL-2 e IFN-
por parte de las TH1. Esta inhibicin en realidad no es directa: la IL-10
produce un descenso marcado de la cantidad de MHC-II de las clulas
presentadoras de antgeno, que por lo tanto ya no pueden ejercer bien su
papel de activar a las TH1. Adems, las TH2 inhiben por sus citoquinas la
produccin en macrfagos del xido ntrico (NO) y otros bactericidas, as
como la secrecin por estos macrfagos de IL-1, IL-6, IL-8 y otras
citoquinas.

Este fenmeno de regulacin negativa cruzada explica las ya antiguas

observaciones de que existe una relacin inversa entre la produccin
de anticuerpos y la hipersensibilidad de tipo retardado.

Obsrvese que los macrfagos y otras clulas presentadoras de

antgeno tambin producen citoquinas (como la IL-12, descubierta
hace relativamente poco tiempo) que regulan a su vez funciones
inmunes efectoras. La IL-12 se produce en macrfagos activados en
respuesta a infecciones bacterianas o de protozoos. Esta citoquina
provoca la proliferacin de clulas NK y TH1,que aumentan la
produccin de IFN- . Este interfern inmune ayuda en la mayor
activacin de macrfagos. De esta forma se cierra este circuito de
retrorregulacin positiva entre macrfagos y TH1, destinado a
potenciar funciones efectoras de la rama celular de la inmunidad.

Por otro lado, los macrfagos se ven inhibidos por IL-4 e IL-10
secretadas por los TH2 (de nuevo una manifestacin de la inhibicin
cruzada entre la rama especializada en la respuesta humoral y la
centrada en la respuesta celular ante parsitos intracelulares).

Otro aspecto que va quedando claro igualmente es que la

predominancia de una u otra de las dos subpoblaciones de linfocitos
TH depende a su vez del microambiente de citoquinas en que ocurriera
la activacin y maduracin inicial a partir de linfocitos en reposo: por
ejemplo, in vitro se ha visto que si un TH se activa por antgeno en
presencia de IL-4, se desarrolla hasta TH2, mientras que si el entorno
de activacin es rico en IFN- , se desarrolla hasta TH1.

EL SISTEMA COMPLEMENTO *
16.1 INTRODUCCIN *

16.1.1 Nomenclatura *

16.1.2 Definiciones y conceptos introductorios *

16.2 ACTIVACIN DEL COMPLEMENTO *

16.2.1 Activacin de la ruta clsica *

16.2.2 Activacin por la ruta alternativa *

16.2.3 Activacin por la ruta de las lectinas *

16.3 TRAS LAS C3-CONVERTASAS: LA VA LTICA Y EL COMPLEJO DE ATAQUE A LA

MEMBRANA *

16.4 REGULACIN DEL COMPLEMENTO *

16.5 RECEPTORES PARA COMPONENTES DEL COMPLEMENTO *

16.5.1 Receptores para derivados de C3 *

16.5.2 Receptores para C5a *

16.6 CONSECUENCIAS BIOLGICAS DE LA ACTIVACIN DEL COMPLEMENTO *

16.6.1 Lisis del microorganismo *

16.6.2 Opsonizacin del antgeno o de los inmunocomplejos *

16.6.3 Solubilizacin de inmunocomplejos *

16.6.4 Mejora de la respuesta inflamatoria *

16.1 INTRODUCCIN
Ya antes del fin del siglo XIX Ehrlich haba usado el trmino "complemento"
para designar la actividad del suero que poda complementar la capacidad de
los anticuerpos especficos de lisar bacterias. Pero es Jules Bordet quien
descubre (1895) este componente, caracterizado frente a los anticuerpos por
su termolabilidad. En 1907 Ferrata comienza a caracterizar algunos de sus
componentes recurriendo a mtodos de dilisis. Por motivos meramente
cronolgicos, los componentes iban recibiendo denominaciones a base de
nmeros tras la letra "C" conforme se iban descubriendo. Por esta razn, su
orden de actuacin no guarda en general relacin con su nomenclatura.

16.1.1 Nomenclatura
En la ruta clsica (incluyendo el sistema de ataque a la membrana), los
componentes son (segn su orden de actuacin):

C1q, C1r, C1s, C4, C2, C3, C5, C6, C7, C8 y C9.

Muchos de ellos son proenzimas (zimgenos) que requieren su rotura

proteoltica para convertirse en enzimas activas.

Las formas activas se distinguen de las inactivas por una barra horizontal
superior encima del componente implicado. Ej: C1r, C4b2b.

Las formas inactivas se denominan colocando una "i" delante del componente
respectivo. Ej.: la forma inactiva de C4b es iC4b.

Cuando un componente se escinde proteolticamente en dos, el fragmento de

mayor tamao se designa colocando tras la denominacin del componente
original una "b"; el fragmento de menor tamao se designa con una "a" tras el
nombre del elemento original. Ej.: la rotura del C3 genera un fragmento
grande, denominado C3b y un fragmento pequeo, el C3a.

Para nuestra "desgracia" (y de nuevo por motivos histricos), hay una

excepcin: el fragmento grande derivado de C2 se llama C2a, y el fragmento
pequeo, C2b.

En la ruta alternativa, los componentes se suelen llamar factores, y en muchos

casos su nomenclatura es a base de una letra mayscula: factor B, factor D,
factor H, factor P.

16.1.2 Definiciones y conceptos introductorios

Se define el complemento como un sistema funcional de unas 30 protenas del
suero, que interaccionan entre s de modo regulado formando una cascada
enzimtica, permitiendo una amplificacin de la respuesta humoral. La
activacin y fijacin del complemento a microorganismos constituye un
importantsimo mecanismo efector del sistema inmune, facilitando la
eliminacin del antgeno y generando una respuesta inflamatoria.

La mayora de los componentes del complemento se sintetizan en el hgado

(excepto C1q, D y P). El C1q lo sintetizan clulas epiteliales y el factor D el
adipocito.
Existen varios receptores especficos para distintos componentes activados del
complemento, y que se localizan en distintas poblaciones de leucocitos.

Las consecuencias de la activacin y fijacin del complemento incluyen:

lisis del microorganismo o clula diana

opsonizacin, con la consiguiente mejora de la fagocitosis y destruccin
los productos difusibles del complemento activado provocan un incremento
de la quimiotaxis sobre los fagocitos y funcionan como anafilotoxinas en el
control de la respuesta inflamatoria
amplificacin de la respuesta humoral especfica
eliminacin de los inmunocomplejos

Hasta hace muy poco se hablaba de dos rutas de activacin del complemento
(la clsica y la alternativa), pero recientemente se ha descubierto una tercera
va, denominada va de las lectinas.

la ruta clsica conecta con el sistema inmune adaptativo por medio de su

interaccin con inmunocomplejos.
La ruta alternativa conecta con el sistema de inmunidad natural o
inespecfica, interaccionando directamente con la superficie del
microorganismo.
La ruta de las lectinas es una especie de variante de la ruta clsica, pero
que se inicia sin necesidad de anticuerpos, y por lo tanto pertenece al
sistema de inmunidad natural.

Las tres rutas comparten las ltimas fases, consistentes en el ensamblaje,

sobre la superficie del microorganismo, del denominado complejo de ataque a
la membrana.

Los componentes de las primeras fases de las rutas clsica y alternativa son
diferentes, pero su comparacin muestra sus semejanzas estructurales y
funcionales. Tambin existen semejanzas entre las protenas C1 de la ruta
clsica y las protenas recin descubiertas de la ruta de las lectinas. Parece ser
que las molculas implicadas en cada ruta debieron evolucionar por duplicacin
gnica y ulterior diversificacin.

16.2 ACTIVACIN DEL COMPLEMENTO

En la activacin del complemento, el punto central es la formacin de una C3-
convertasa, capaz de convertir catalticamente el componente C3 en C3b y
C3a.

en la ruta clsica (y de las lectinas) la C3-convertasa es el complejo activo

C4b2a;
 en la ruta alternativa, la C3-convertasa es el complejo activo C3bBb.

Ambas producen grandes cantidades de C3b, que se unen a la superficie del

microorganismo, lo cual a sus vez constituye un "foco" para seguir produciendo
e insertando ms molculas de C3b (cascada de amplificacin).

Por otro lado, cuando a cada una de las C3-convertasas anteriores se le

adjunta una molcula de C3b, se convierte en la correspondiente C5-
convertasa, capaz de catalizar el primer paso de la cascada que conducir al
ensamblaje del complejo de ataque a la membrana.

A continuacin trataremos por separado la activacin en las tres rutas, para

ulteriormente pasar a la descripcin de la porcin comn del ensamblaje del
complejo de ataque a la membrana.

16.2.1 Activacin de la ruta clsica

1) Activacin del complejo C1

La activacin de la ruta clsica comienza por la unin del complejo C1 a

anticuerpos unidos a antgenos (inmunocomplejos).

El C1 es un complejo formado por 5 protenas y estabilizado por iones Ca2+.

Consta de una molcula de C1q, dos de C1r y otras dos de C1s.

C1q: se puede considerar formado por tres copias de una unidad

fundamental. Cada unidad tiene forma de "Y", y est a su vez constituida
por dos grupos de tres cadenas cada uno que forman entre s una triple
hlice. El extremo carboxi-terminal tiene configuracin globular, y es el sitio
de unin a la porcin Fc de la inmunoglobulina. El componente C1q completo
tiene forma de ramillete, con 18 cadenas polipeptdicas (resultado de 3
unidades a base de 2 "ramas" con 3 cadenas cada una), y con 6
Las dos unidades de C1r y las dos de C1s se disponen descansando sobre
los brazos de C1q. Los dominios catalticos de C1r se sitan hacia el centro.

Uno de los aspectos fundamentales de C1q es su capacidad de unirse a Fc de

inmunoglobulinas, siempre que stas ya estn formando parte de
inmunocomplejos. Veamos esto con ms detalle:

se puede unir a dos o ms IgG a travs de sus respectivos dominios C 2; en

esta unin simultnea colabora el hecho de que las distintas molculas de
IgG forman parte de un mismo inmunocomplejo (estn unidas a la misma
molcula de antgeno).
se puede unir a dos o ms dominios C 3 de distintas subunidades de la
misma molcula pentamrica de IgM. En esta unin interviene un cambio
conformacional previo de la IgM: la IgM pentamrica libre es plana, pero al
unirse al antgeno adopta una configuracin "en grapa" (los brazos Fab
 forman ngulos con las porciones Fc), y es entonces cuando el C1q puede
unirse a distintos monmeros del mismo pentmero de IgM.

La unin de varios dominios globulares de un mismo complejo C1 parece que

induce en ste un cambio conformacional, que supone la activacin de una
molcula de C1r por autocatlisis; a su vez, esta C1r activada activa a la otra
molcula de C1r. Las dos molculas activas de C1r ejercen la hidrlisis de las
dos C1s, con lo que stas quedan activadas: las dos C1s activas poseen
actividad de sern-esterasas.

2) Produccin de la C-3 convertasa de la ruta clsica

El siguiente paso es la rotura cataltica de C4 por la sern-proteasa de C1s

dentro del complejo activo C1q r2 s2, liberndose el fragmento pequeo C4a
(que queda en disolucin) y el fragmento C4b*. Este C4b* es un intermediario
inestable que enseguida es atacado nucleoflicamente: la mayora de las
molculas se hidroliza por agua, para dar la forma inactiva iC4b, mientras que
algunas molculas forman enlaces covalentes con grupos amino o hidroxilo de
molculas de superficie del microorganismo. De esta forma, el invasor queda
con algunas molculas de C4b unidas a su membrana.

El C4b unido covalentemente a la superficie microbiana va a servir ahora como

sitio de unin del componente C2. Se forman as complejos C4b C2 en la
membrana del patgeno, cerca de donde qued fijado el complejo C1.

El C2 de los complejos C4b2 es a su vez otro sustrato del cercano C1s, cuya
accin genera el fragmento pequeo C2b, que queda en solucin y el grande
C2a (recurdese que estamos ante la excepcin en la norma de
nomenclatura). Queda en membrana un complejo ya activado, el C4b2a, que
es la C-3 convertasa de esta ruta clsica.

3) Accin de la C-3 convertasa de la ruta clsica

La C3-convertasa C3b2a convierte catalticamente (por hidrlisis) muchas

molculas de C3 a C3a (difusibles) y C3b, que se van anclando a la membrana
del microorganismo.

Veamos con un poco de detalle cmo es la rotura del C3:

El C3 intacto posee un enlace tioster interno (adquirido por modificacin

postraduccional de la protena) entre una cistena y una glutamina cercanas
entre s. Este enlace como tal es muy estable (su vida media es de unas 600
horas).
La C3-convertasa cataliza la rutura proteoltica del C3 cerca del extremo
amino-terminal de la cadena , generando C3a y el componente inestable
C3b*.
En el C3b* el enlace tioster se vuelve muy inestable (vida media 60
microsegundos): el azufre queda con carga neta negativa (-S-), mientras
 que el carbono queda como grupo carbonilo (-C+ =O). De esta forma, este
enlace se vuelve muy susceptible a ataque nucleoflico.
Un grupo nucleoflico cercano perteneciente a una protena o azcar de la
superficie del microorganismo reacciona ahora con el grupo electroflico
carbonilo del C3b*, lo que produce la unin covalente (por -CO-O-) entre el
C3b y la superficie microbiana.

Este C3b unido a membrana acta a su vez como ncleo "focalizador" para que
continu la activacin del complemento (estamos pues ante un bucle de
retroalimentacin positiva: ver ms adelante). Esta es la forma en que se van
fijando grandes cantidades de C3b a la superficie del microrganismo.

16.2.2 Activacin por la ruta alternativa

La ruta alternativa se activa directamente sobre la superficie de muchos
microorganismos. Opera varios das antes de que entre en accin la ruta
clsica (la clsica tiene que esperar a que se hayan producido anticuerpos).

1) Activacin "al ralent" o "marcapasos"

En el suero, en una situacin normal (en ausencia de infeccin) se est

produciendo continuamente una activacin limitada que produce slo pequeas
cantidades de C3b*:

El enlace tioster interno del C3 se hidroliza espontneamente en agua, dando

una forma activada llamada C3i. Esto es lo que se conoce como activacin al
ralent (activacin tick-over).

El C3i acta ahora como sitio de unin para el factor B, generando el complejo
C3iB, sobre el que acta el factor D, que rompe el B unido para generar Ba y el
complejo C3iBb, que acta como una C-3 convertasa en fase fluida. Como tal,
escinde el C3 en C3a y C3b*.

Pero como este C3b* est en fase fluida, la mayor parte de l se hidroliza por
agua y se inactiva. Ahora bien, si por casualidad alguna molcula de C3b* se
topa con una superficie no propia (p. ej., la membrana de una bacteria), se
une covalentemente a ella e inicia el bucle de amplificacin de la ruta
alternativa (ver apartado siguiente).

Una pregunta asaltar enseguida al sagaz estudiante: por qu el mismo

C3b* no inicia ese bucle en membranas del propio hospedador? La respuesta
estriba en que, como veremos, existen protenas reguladoras que lo impiden.
Se trata de una forma ms de distinguir lo propio de lo ajeno.

2) Bucle de retroalimentacin positiva (amplificacin)

Como acabamos de decir, cuando alguna molcula de C3b* se encuentra con la
superficie de un microorganismo, se une covalentemente a ella, inicindose un
circuito de amplificacin que va a conducir a que muchas molculas de C3b se
anclen.

El C3b recin unido a la membrana microbiana sirve para que

espontneamente se una a l el factor B. El resultante complejo C3bB es a su
vez sustrato del factor D, que es otra sern-proteasa, la cual rompe el B unido,
generando el complejo activo C3bBb.

El complejo C3bBb es una C-3 convertasa (cuya actividad reside en Bb), pero
en principio se disocia rpidamente a menos que se estabilice por unin con la
properdina (factor P del hospedador), formando ya el complejo estable
C3bBbP, que es la C-3 convertasa unida a membrana de la ruta alternativa.

Dicha C-3 convertasa estable rompe numerosas molculas de C3, cuyos

respectivos fragmentos grandes C3b tienden a unirse cerca de la misma
convertasa unida a membrana.

Este bucle de retroalimentacin se activa igualmente por la C4b2a (C-3

convertasa de la ruta clsica).

3) Regulacin del bucle de amplificacin

Recojamos la pregunta que nos hicimos anteriormente: por qu el bucle

positivo que acabamos de estudiar slo se produce en las membranas de
microorganismos y no tambin en las de las clulas del hospedador? La
respuesta estriba en un sistema de regulacin negativa del complemento que
est ocurriendo en las membranas propias:

Conforme se produce en el suero el C3b*, el factor H se une a l, y los dos

juntos se anclan a las membranas celulares del individuo. Entonces acta el
factor I, que rompe al C3, desplazando al factor H, que vuelve intacto al suero,
listo para ejercer otra vez su accin.

Inmediatamente, el factor I vuelve a actuar sobre el solitario C3b unido a la

membrana propia, inactivndolo. El correspondiente iC3b vuelve a sufrir la
accin del factor I, que ahora lo escide en un fragmento pequeo que pasa a
solucin (C3c), y otro mayor unido a membrana, pero totalmente inactivo,
denominado C3dg.

16.2.3 Activacin por la ruta de las lectinas

La ruta de las lectinas, reconocida recientemente como una tercera forma de
iniciar la activacin del complemento, consiste esencialmente en una forma
distinta de activar los componentes C2 y C4 de la ruta clsica.
La ruta comienza por la accin de la protena de unin a mananos (MBP). Se
trata de un componente parecido estructuralmente al C1q: hexmeros con 18
cadenas polipeptdicas idnticas enrolladas de tres en tres. Los hexmeros de
MBP se pueden unir con dos unidades de C1r y dos de C1s, pero parece que va
acompaada de su propia sern-proteasa (denominada MASP), que muestra
casi 40% de homologa con C1r o C1s.

La MBP se une preferentemente a los extremos de manosa, fucosa y

glucosamina de polisacridos o glucoprotenas de membrana de gran variedad
de bacterias. De modo similar a lo que ocurre con el complejo C1, cuando la
MBP se engarza con esos carbohidratos, sufre un cambio conformacional que a
su vez activa a su sern-proteasa (MASP). Una vez activada, la MASP acta
secuencialmente sobre C4 y C2, para producir una C3-convertasa de la ruta
clsica.

16.3 TRAS LAS C3-CONVERTASAS: LA

VA LTICA Y EL COMPLEJO DE ATAQUE
A LA MEMBRANA
La fase final de la activacin y fijacin del complemento consiste, en esencia,
en la formacin de una C-5 convertasa, que al romper enzimticamente el C5
desencadena el ensamblaje en la superficie del microorganismo del complejo
de ataque a la membrana (MAC).

La C5-convertasa de la ruta clsica (y de la ruta de las lectinas) se forma

por unin covalente de una unidad de C3b al complejo C4b2a, para generar
C4b2a3b.
En la ruta alternativa la C5-convertasa se forma por unin covalente de una
C3b nueva a la C3b que formaba parte de la C3-convertasa: C3bBb3b.

Estas dos convertasas actan de la misma forma: catalizan la rotura de

unidades de C5 en C5a (que queda libre) y C5b, que se une a la membrana
microbiana. A partir del C5b, todas las rutas del complemento confluyen (las
fases son las mismas).

Una vez unido el C5b al microorganismo, se van aadiendo ordenada y

secuencialmente una serie de componentes del complemento de forma no
enzimtica: al C5b se une una molcula de C6, luego una de C7; es ahora
cuando el complejo resultante (C5b67) experimenta una transicin hidrfoba
que hace que el C7 se "hunda" en la membrana. Realizada esta transicin, se
puede unir el C8, y finalmente, 14 unidades del componente C9. Estos
monmeros de C9 se ensamblan entre s para dar una notable estructura (poli-
9) en forma de canal hueco que atraviesa la membrana de lado a lado, con
unos 10 nm de dimetro interno.

El conjunto C5b678poli-9 es lo que constituye el denominado complejo de

ataque a la membrana (MAC, segn sus iniciales inglesas), cuyo efecto
esencial es producir un notable desequilibrio osmtico en el microorganismo
que conduce a su lisis (en las bacterias Gram-negativas se inserta en la
membrana externa, favoreciendo la entrada de lisozima, y en las Gram-
positivas se inserta en la membrana citoplsmica, destruyendo los gradientes
electroqumicos). Obviamente, la mayor parte de este efecto reside en el canal
de poli-9, pero ya antes de que se ensamble este componente final, el
complejo C5b,6,7,8 posee alguna capacidad ltica. A microscopio electrnico es
posible visualizar el espectacular estado en que queda una clula atacada por
el complemento: su superficie est tachonada de miles de complejos MAC, por
los que entran agua y electrolitos masivamente, provocando en muchos casos
el estallido ltico final del microorganismo.

16.4 REGULACIN DEL

COMPLEMENTO
El complemento es un sistema inespecfico, que en principio podra atacar al
propio hospedador. No extraa, pues, que la evolucin haya inventado varias
estrategias de control tendentes a evitar los daos y efectos negativos al
individuo. Hay varios tipos de estrategias reguladoras:

1. Varios componentes del complemento activado son muy lbiles en

solucin, y se inactivan por degradacin rpida al alejarse unos cuantos
nanometros del lugar de interaccin con la clula diana (esto le ocurre al
C3b no cataltico de las C3-convertasas).
2. Existencia de un inhibidor de C1, llamado C1Inh, que se une e inactiva
C1r y C1s del complejo C1.
3. Pero el gran punto de control estriba en evitar la formacin de C3-
convertasas en las superficies del hospedador, por accin de las
llamadas protenas de control del complemento (CCPs), que tienen
en comn una o ms copias de un motivo llamado secuencia corta
consenso (SCR):

Protenas de control del complemento

en ruta clsica en ruta alternativa

DAF inhiben unin del inhiben unin del

CR1 C4b con C2 C3b con el factor B

CR1 cofactores que son cofactores para
promueven la
MCP (ms factor
I) la degradacin de C4b degradacin de C3b

4. Otro punto de control importante reside en evitar la llamada lisis reactiva

por insercin del CAM en membranas propias (tambin conocida
como lisis de los espectadores inocentes):

la protena S (o vitronectina) del plasma se une a C5b67 cuando difunde,

e induce en este complejo libre una transicin hidrfila; por lo tanto, este
complejo ya no podr unirse a membranas cercanas, evitndose la lisis de
los espectadores inocentes (clulas propias, que las pobres no tienen culpa
de nada).
La molcula de superficie CD59 se une al C8 del complejo C5b678 que se
hubiera anclado accidentalmente a membranas propias, y evita el
ensamblaje del poro de poli-C9 y del MAC.

16.5 RECEPTORES PARA

COMPONENTES DEL COMPLEMENTO
Los receptores celulares para componentes del complemento son los
responsables de mediatizar muchas de las propiedades biolgicas de dicho
complemento. Estn presentes en membranas de clulas sanguneas:
eritrocitos y leucocitos.

16.5.1 Receptores para derivados de C3

CR1 (=CD35): su ligando es sobre todo el componente C3b, y en menor
medida el iC3b, as como C4b. Sus principales funciones son:

Actuar como receptor opsnico en fagocitos, mediante el cual reconocen y

engullen mejor microorganismos recubiertos con C3b.
Mediante l, los eritrocitos y plaquetas captan inmunocomplejos
opsonizados, y los llevan a los fagocitos "carroeros" del sistema retculo-
endotelial.
En clulas B y clulas dendrticas foliculares permite que los
inmunocomplejos permanezcan ms tiempo en ganglios y bazo, mejorando
la interaccin entre el antgeno y el sistema inmune.
Como vimos en la tabla del apartado 16.4, el CR1 puede actuar como factor
que protege a las clulas propias del ataque del complemento.
CR2 (=CD21): se une a varios productos de degradacin derivados del C3b
(como iC3b y C3dg). Tambin puede ligarse con el virus de Epstein-Barr.

Existe en linfocitos B, en los que al unirse a l productos derivados de C3b,

hace que los inmunocomplejos, mejoren la activacin y la memoria
inmunolgica de estas clulas. Como ya vimos (tema 6) forma parte del
complejo correceptor de clulas B. La unin entrecruzada de un BCR con un
correceptor a travs de un complejo antgeno-C3dg activa 100 veces al
linfocito B respecto a la activacin sencilla solo a travs de BCR.
Posee un papel patofisiolgico, al ser el receptor celular del virus de Epstein-
Barr (EBV), que de esta manera puede entrar a los linfocitos B, a las clulas
dendrticas foliculares y a ciertas clulas epiteliales (como las de la crvix del
tero).

CR3 (=CD18/11b): es un miembro de la familia de integrinas con cadenas

de tipo 2.

Mediatiza fagocitosis de partculas opsonizadas por iC3b.

Funciona tambin como lectina, unindose a carbohidratos de la superficie
de diversos microorganismos (levaduras, Staphylococcus epidermidis,
Histoplasma capsulatum, etc.).

16.5.2 Receptores para C5a

Se ha caracterizado un receptor para el pequeo pptido difusible C5a,
presente en todas las clulas del linaje mieloide (monocitos/macrfagos, PMN
neutrfilos, eosinfilos, basfilos y mastocitos). Se trata de una protena de la
superfamilia de la rodopsina, caracterizada por sus 7 segmentos que
atraviesan la membrana, y con parecido con otros receptores que
quimioquinas que mediatizan seales quimiotcticas (como el receptor de
pptidos bacterianos formilados) y con el receptor de la IL-8 (vase tema 14).

Cuando el C5a se une a este receptor situado en la membrana de los

mastocitos, se induce en ellos la degranulacin y liberacin de mediadores
farmacolgicamente activos, como la histamina, que como veremos juegan un
papel importante en la reaccin de inflamacin.

Cuando el C5a se une al receptor de la superficie de fagocitos, permite que el

fagocito engulla complejos de Ag-IgM-complemento.

16.6 CONSECUENCIAS BIOLGICAS

DE LA ACTIVACIN DEL COMPLEMENTO
El complemento es un mediador clave en las respuestas humorales,
permitiendo su amplificacin, y supone un sistema efector esencial en la
eliminacin efectiva de los microorganismos. Sus efectos fisiolgicos
principales son:

muerte por lisis de muchos microorganismos

los pequeos pptidos C3a y C5a funcionan como anafilotoxinas,
desencadenando la respuesta inflamatoria
opsonizacin de antgenos o de inmunocomplejos, lo que facilita la
destruccin por parte de fagocitos
eliminacin de inmunocomplejos
neutralizacin de ciertos virus.

16.6.1 Lisis del microorganismo

Casi todos los virus envueltos sufren el ensamblaje del complejo de ataque a la
membrana (MAC), lo que conduce a la lisis de la envuelta y desagregacin de
la nucleocpsida (p. ej., en herpesvirus, mixovirus, paramixovirus, retrovirus).

Contra bacterias Gram-negativas el MAC suele ser bastante efectivo, pero hay
notables excepciones: los fenotipos lisos de Escherichia coli y de Salmonella,
debido a las cadenas laterales largas e hidrfilas del lipopolisacrido (LPS),
evitan el ensamblaje del MAC. Igualmente, ciertas cepas de gonococo poseen
en su membrana externa protenas que se unen no covalentemente al MAC,
evitando que ste se ensamble en la bicapa lipdica.

La efectividad del complemento como bacteriolisina (debido al MAC) queda de manifiesto en enfermedades
genticas que impiden fabricar el complejo de ataque a la membrana: los pacientes son muy sensibles a
infecciones por el meningococo (Neisseria meningitidis). Esto indica, adems, que teniendo en cuenta que
esta bacteria es intracelular, la fase clave en la que el individuo sano puede luchar contra ella es por medio
de su lisis mediante complemento, cuando el patgeno an se encuentra en la sangre o en el plasma.

Las bacterias Gram-positivas son normalmente resistentes al MAC, debido a

que su pared gruesa de peptidoglucano impide que el complejo ltico alcance la
membrana citoplsmica.

Incluso algunos microorganismos producen protenas que mimetizan las

protenas inhibidoras de la cascada del complemento, por lo que escapan a sus
efectos (un ejemplo ms de la particular "carrera de armamentos" evolutiva
entre organismos superiores y microorganismos).

En sistemas experimentales se puede evaluar la capacidad del complemento de lisar clulas de mamfero:

Para lisar un eritrocito basta un solo complejo MAC.

En cambio, para lisar clulas nucleadas se requieren muchos MAC. Ello se debe a que endocitan
rpidamente este complejo, antes de que pueda ejercer su efecto. Esto es lamentablemente cierto para
las clulas tumorales, y supone la razn por la que no es viable la terapia antitumoral a base de
complemento y anticuerpos monoclonales.
A pesar de su espectacularidad, el MAC no suele ser decisivo en la mayora de
las infeccciones, sino que lo principal es el efecto opsonizante e inflamatorio de
otros componentes del complemento activado.

16.6.2 Opsonizacin del antgeno o de los

inmunocomplejos
La unin covalente de C3b y C4b a las bacterias y a los complejos inmunes
supone la creacin de multitud de ligandos reconocibles por los
correspondientes receptores CR1 de la superficie de los fagocitos: esto
representa una formidable ayuda para la capacidad destructora intracelular de
estas clulas.

Adems de estimular la fagocitosis, la opsonizacin por componentes del

complemento puede igualmente estimular la exocitosis de grnulos, con lo que
se liberan al exterior enzimas proteolticas y la produccin de radicales libres
de oxgeno.

El componente C5a estimula a que el fagocito multiplique an ms el nmero

de sus receptores CR1, con lo que se potencia si cabe la opsonizacin y
fagocitosis.

En el caso del neumococo (Streptococcus pneumoniae), la cpsula evita que los fagocitos puedan
interaccionar con el C3b depositado en la membrana bacteriana

El importante papel fisiolgico del C3b como opsonina queda en evidencia por contraste, cuando se observa
lo que pasa en ciertas enfermedades genticas en las que el enfermo no puede fabricar componentes de la
ruta clsica, de C3 o de sus receptores: estos pacientes son muy susceptibles a infecciones por bacterias
piognicas.

16.6.3 Solubilizacin de inmunocomplejos

La unin del C3b a los inmunocomplejos los va disgregando en complejos de
menor tamao, los cuales son retirados de la circulacin por medio de
eritrocitos: los inmunocomplejos llegan al bazo y al hgado"a lomos" de estos
eritrocitos; en estos rganos, los complejos inmunes se separan de los
eritrocitos, y pasan a los macrfagos fijos especializados, que los engullen y
digieren. De esta forma, se evita que los inmunocomplejos se depositen en los
tejidos.

Algunos inmunocomplejos solubles (p.ej., los formados con toxinas

bacterianas) contienen pocas IgG, de modo que directamente no pueden ser
reconocidos por receptores FcR en la superficie de los fagocitos. Estos
inmunocomplejos desencadenan su propia eliminacin activando directamente
el complemento: se une C3b y C4b, que son reconocidos por CR1 en la
superficie de eritrocitos, que los pasan al hgado y al bazo, donde son
capturados por macrfagos.
Precisamente, cuando por alguna razn este sistema no funciona adecuadamente, los complejos Ag-Ac se
acumulan en tejidos, dando lugar a enfermedades por hipersensibilidad de tipo II. Las personas con lupus
eritematoso sistmico con deficiencias en los componentes C1, C2 y C4, forman inmunocomplejos a los que
se une poca C3b, por lo que no pueden ser eliminados, ocasionando ello reacciones hipersensibles de tipos
II y III.

16.6.4 Mejora de la respuesta inflamatoria

1) Conceptos generales

Los pequeos pptidos difusibles C3a y C5a, liberados durante la activacin del
complemento, cumplen la importante funcin de anafilotoxinas: reclutan
clulas inflamatorias al sitio de infeccin (sitio de inflamacin) y activan sus
funciones efectoras.

La inflamacin aguda ya haba sido descrita pertinentemente (en sus

manifestaciones visibles) por los romanos (siglo I), que la caracterizaban por
los llamados cuatro signos
cardinales: rubor (enrojecimiento), tumor (hinchazn), calor y dolor. Estos
signos reflejan algunos de los mecanismos fisiolgicos puestos en juego: la
vasodilatacin provoca un eritema (de ah el color rojo); el aumento de la
permeabilidad capilar supone un aflujo de fluido rico en protenas (lo que
explica la hinchazn) y con abundantes leucocitos fagocticos (que al daar a
clulas vecinas puede originar pus). El calor y dolor son manifestaciones de
sendos sistemas fisiolgicos destinados a ayudar a la destruccin del patgeno
y a la recuperacin del individuo.

Hay que aclarar que la inflamacin no slo se pone en marcha por infecciones,
sino en general cuando hay dao en tejidos. Lo que caracteriza la inflamacin
asociada a infecciones es la implicacin masiva de elementos del sistema
inmune, y la regulacin por citoquinas. Adems, la inflamacin ante infeccin
se inicia en ausencia de activacin del complemento; lo que aporta sta es una
gran potenciacin de los efectos benficos de la inflamacin.

La reaccin inflamatoria aguda incluye dos tipos de respuesta, una localizada y

otra sistmica.

En la respuesta localizada se produce la activacin de tres tipos de cascadas

enzimticas: la de coagulacin, la de quininas (cininas), y la de fibrinolisis
(que seguramente el alumno habr estudiado en la asignatura de Fisiologa
Animal). Si la respuesta es ante una infeccin, adems, veremos otros
fenmenos que vamos a estudiar enseguida.
La respuesta sistmica se suele conocer como respuesta de fase aguda. En
ella se produce la induccin de fiebre, aumenta la sntesis de ACTH y
glucocorticoides, aumenta la leucocitosis, y el hgado produce las llamadas
protenas de fase aguda.
La respuesta de inflamacin aguda restringe el dao al sitio de infeccin o al
lugar de la herida, evitando su diseminacin a otras partes del organismo.

2) La reaccin local antes del complemento: eventos moleculares y

celulares

Cuando entra el microorganismo al tejido, la primera clula defensiva que lo

detecta suele ser un macrfago tisular. Al engullir y procesar al patgeno, el
macrfago libera varias citoquinas: TNF- , IL-1 e IL-6, que son responsables,
como vamos a ver, de muchas de las reacciones localizadas y sistmicas.
Veamos sus actuaciones a nivel local:

las tres actan sobre los fibroblastos y las clulas endoteliales cercanas,
induciendo dos fenmenos: el inicio de la coagulacin (por deposicin de
matriz de fibrina), y el incremento de la permeabilidad capilar.
Inducen la aparicin de gran nmero de molculas de adhesin intercelular
en las clulas del endotelio cercano: ELAM (que va a permitir la
extravasacin de neutrfilos), ICAM (que har lo propio con los linfocitos) y
VCAM (que promueve la extravasacin de monocitos, que al entrar al tejido,
se diferencian a macrfagos).
El TNF- y la IL-1 provocan la secrecin de la quimioquina IL-8 por parte de
macrfagos y clulas endoteliales. Esta IL-8 es un potente factor
quimiotctico, que aumenta el influjo de neutrfilos.

Por otro lado, el IFN- (producido por linfocitos TH) y el TNF- del macrfago
activan a ms fagocitos (macrfagos y neutrfilos), que mejoran sus
cualidades de fagocitosis y liberan enzimas lticas. Los macrfagos activados
fabrican elementos del complemento, que pueden actuar localmente.

Al mismo tiempo, el aumento de permeabilidad capilar permite la entrada al

tejido de anticuerpos y componentes del complemento: es ahora cuando se
activa el complemento, una de cuyas consecuencias es la liberacin de los
pequeos pptidos C3a y C5a, cuya accin potencia y mejora la respuesta local
de inflamacin.

3) Accin de las anafilotoxinas derivadas de la activacin del

complemento

De los pequeos pptidos con actividad de anafilotoxinas liberados durante la

activacin del complemento, el ms potente es el C5a, seguido por el C3a
(1/20 de la de C5a). El C4a tiene poca actividad (slo 1/2500 del C5a). De
ellos, slo se ha caracterizado el receptor de C5a (ver apartado 16.5.2). Nos
referiremos conjuntamente los dos primeros (aunque no producen los dos la
misma gama de efectos). Sus efectos son:

activacin de clulas mieloides. En neutrfilos esto se refleja en la

potenciacin de sus mecanismos matadores: estallido respiratorio, que les
permitir producir grandes cantidades de radicales libres. Se producen
 prostaglandinas (PG), sobre todo por los mastocitos en presencia de IgE, y
eicosanoides como los leucotrienos (LT), con efectos diversos en la
respuesta sistmica y en la local (uno de los leucotrienos acta de factor
quimiotctico para fagocitos).
Los neutrfilos aumentan sus molculas de adhesin, lo que les permite
adherirse a las clulas endoteliales, y finalmente pasar por diapdesis al
tejido.
Quimiotaxis sobre PMN neutrfilos, monocitos/macrfagos, eosinfilos y
mastoscitos y basfilos.
Degranulacin de mastocitos tisulares: se libera el contenido, con histamina,
serotonina y otros mediadores farmacolgicamente activos, que promueven
ms contraccin de la musculatura lisa e incremento de la permeabilidad
capilar.
La potenciacin de la vasodilatacin provoca la salida de fluido al tejido, lo
cual a su vez acelera el paso del patgeno a alguno de los ganglios
regionales, con lo que iniciar la respuesta inmune adaptativa.

4) Respuesta sistmica (respuesta de fase aguda)

Las respuestas sistmicas ante una infeccin dependen principalmente de las

tres citoquinas segregadas por el macrfago en las primeras fases de la
inflamacin (IL-1, IL-6 y TNF- ):

actan sobre el hipotlamo, y junto con las prostaglandinas intervienen en

los mecanismos fisiolgicos de la fiebre y el dolor. La fiebre es una respuesta
adaptativa de aumento de la temperatura corporal mediante un aumento del
metabolismo de grasas y de protenas en el tejido adiposo, heptico y
muscular. En principio pues, la fiebre es una medida positiva para el
individuo, ya que inhibe el crecimiento de muchos patgenos y mejora la
respuesta inmune.
Provocan la liberacin de ACTH, que al actuar sobre las corteza suprarrenal
induce la produccin y secrecin de glucocorticoides, con un papel en la
proteccin frente a situaciones de peligro y estrs.

Conforme estas citoquinas se van acumulando, a las 12-24 horas, inducen la

produccin por los hepatocitos de las protenas de fase aguda:

protena C-reactiva (CRP). Esta protena aumenta unas 1000 veces desde su
nivel basal. Se une a las cubiertas de ciertas bacterias y hongos que en
principio son resistentes al complemento, permitiendo la deposicin de ste.
De esta forma el C3b ahora puede ser reconocido por el receptor CR1 de los
fagocitos, que podrn intentar la destruccin del microorganismo.
Protena de unin a mananos (MBP).
protena amiloide A srica
fibringeno.

El TNF- tambin acta sobre las clulas endoteliales y los macrfagos, que
producen citoquinas hematopoyticas (GM-CSF, M-CSF, G-CSF), que al llegar a
la mdula sea inducen un aumento de la generacin de leucocitos
(leucocitosis).

El TNF-, la IL-6 y la IL-1 estimulan la produccin de casi todas las protenas

del complemento (sobre todo las de la va alternativa), mientras que el IFN-
estimula la produccin de todos los componentes del complemento.

5) Regulacin de la inflamacin y reparacin del tejido daado

La respuesta inflamatoria est limitada en cuanto a su duracin y a su

intensidad (de otra forma, llegara a agredir al propio hospedador), y esta
regulacin permite la reparacin del tejido daado.

Uno de los factores que limitan la respuesta es el TGF- , que a su vez

promueve la acumulacin y proliferacin de fibroblastos. Los fibroblastos van
depositando una matriz extracelular de fibrina (cogulo de sangre), que evita
la diseminacin de la infeccin.

Cuando la infeccin remite, y la mayora de restos celulares y del patgeno

han sido eliminados por los fagocitos, comienza la reparacin del tejido:

crecen capilares en el cogulo de fibrina (angiognesis)

la acumulacin de fibroblastos y fibrina se manifiesta como una cicatriz.

CURSO DE INMUNOLOGA
GENERAL:
12. La respuesta inmune humoral
especfica
Enrique Iez Pareja

Departamento de Microbiologa

Universidad de Granada

Espaa

NDICE:
12.1 INTRODUCCIN *

12.2 RESPUESTA PRIMARIA Y RESPUESTA SECUNDARIA *

12.3 FASES DE LA INDUCCIN DE LA RESPUESTA HUMORAL *

12.3.1 Visin general *

12.3.2 Fase 1: activacin y proliferacin del linfocito TH *

12.3.3 Fase 2: El linfocito B reconoce especficamente al antgeno nativo *

12.3.4 Fase 3: Formacin del conjugado TH:B e intercambio de seales *

12.3.5 Fase 4: Efecto de las seales del linfocito TH sobre la clula B *

12.4 RESPUESTA HUMORAL IN VIVO *

12.4.1 Respuesta primaria: *

12.4.2 Respuesta secundaria *

12.4.3 Algunas aplicaciones *

12.5 RESPUESTA FRENTE A ANTGENOS TIMO-INDEPENDIENTES *

12.5.1 Antgenos timo-independientes de tipo 1 (TI-1) *

12.5.2 Antgenos timo-independientes de tipo 2 (TI-2) *

12.1 INTRODUCCIN
La rama humoral del sistema inmune especfico est diseada para
eliminar a patgenos extracelulares y evitar la diseminacin de los
intracelulares aprovechando que estos ltimos se transmiten de clula
a clula a travs de los fluidos extracelulares. Ello se consigue
mediante la produccin de grandes cantidades de anticuerpos
especficos frente a cada agente forneo.
 1. Los anticuerpos, por s mismos no suelen eliminar ms que a
ciertos virus o inactivar toxinas bacterianas.
2. En la mayor parte de los casos, la eliminacin efectiva del
patgeno suele deberse a la induccin de las funciones efectoras
de los anticuerpos, que dependen de la porcin constante de las
cadenas pesadas:
a. activacin del complemento por la ruta clsica, que puede
conducir a
i. lisis del patgeno
ii. quimiotaxis de fagocitos
iii. opsonizacin de fagocitos
b. Opsonizacin de fagocitos por inmunocomplejos (Ag-Ac)
c. Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC): el
anticuerpo se une a receptores para Fc en la superficie de
clulas NK y macrfagos.

Por lo tanto, en la respuesta humoral podemos distinguir dos grandes

fases: la de induccin de la produccin de anticuerpos, y la fase
efectora, en la que dichos anticuerpos, directamente, o ms a menudo
indirectamente, eliminan al patgeno. En este tema nos vamos a
centrar solamente en la primera, es decir, cmo se induce la
produccin de inmunoglobulinas circulantes ante un antgeno. Los
autnticos mecanismos efectores humorales los iremos tratando en
captulos ulteriores.

Aqu vamos a tratar principalmente de las interacciones celulares y de

las seales qumicas implicadas en el desencadenamiento de la
produccin de anticuerpos. Podemos resumir el proceso en tres
apartados interconectados:

1. el linfocito TH virgen reconoce a su pptido antignico

(procesado) enclavado en el surco de MHC-II, en la superficie
de una clula presentadora de antgeno (APC). Ello provoca la
activacin y proliferacin clonal de los linfocitos TH.
2. Por otro lado (paralelamente), la clula B reconoce al antgeno
nativo por medio de su BCR (con mIg), lo que desencadena la
endocitosis y procesamiento endosmico de dicho antgeno.
Algunos de los pptidos resultantes se "exportan" y se muestran
en el surco de molculas MHC-II del propio linfocito B.
3. El TH activado (resultante de la fase #1) interacciona ahora
mediante su TCR con el complejo {epitopo-MHC-II} del linfocito
B. En este contacto entre ambas clulas tiene lugar un
intercambio de seales qumicas que conduce a la activacin,
 proliferacin clonal y diferenciacin de las clulas B en dos
subclones hermanos: uno de clulas plasmticas secretoras de
anticuerpos, y otro de clulas B cebadas de memoria.

12.2 RESPUESTA PRIMARIA Y

RESPUESTA SECUNDARIA
Fases de la respuesta:

1. fase lag (de retardo): es el tiempo que se tarda en la seleccin

de un clon especfico de clulas B y en la produccin de clulas
plasmticas secretoras de Ac y de clulas B de memoria
2. aumento exponencial (hasta un pico mximo)
3. meseta
4. declive

En total la respuesta puede durar desde unos das a varias semanas,

dependiendo de la persistencia del antgeno.

En la respuesta primaria primero se produce IgM, y luego IgG, siendo

en ella la contribucin global de la IgM ms importante. En cambio, en
la respuesta secundaria se produce mucha mayor cantidad de IgG que
de IgM.

Las clulas B de memoria quedan en reposo (G0) durante muchos

aos (incluso persisten durante toda la vida).

La respuesta secundaria posee una serie de importantes diferencias

cualitativas y cuantitativas con respecto a la respuesta primaria:

Diferencias cuantitativas:

se inicia ms rpidamente (menor fase lag)

alcanza ms intensidad (100 o 1000 veces mayor)
dura ms tiempo, como se comprueba por la fase de meseta ms
prolongada y su declive ms lento.

Diferencias cualitativas:

ocurre cambio de clase, producindose preferentemente IgG, aunque

tambin IgA e IgE
 Tiene lugar la maduracin de afinidad por hipermutacin somtica y
seleccin "darwiniana" de los linfocitos con receptores de mayor afinidad.

12.3 FASES DE LA INDUCCIN DE LA

RESPUESTA HUMORAL
12.3.1 Visin general
Antes de entrar en detalles de cmo se activan y proliferan y
diferencian los linfocitos B hasta que producen y secretan anticuerpos,
vamos a dar una idea general del proceso, ampliando un poco el
esquema ya visto en la Introduccin:

1. Un linfocito TH virgen o de memoria entra en contacto con una

APC, que le presenta un pptido antignico enclavado en su
MHC-II; ello provoca la activacin y proliferacin clonal del
linfocito TH.
2. Por otro lado, la clula B (virgen o de memoria) reconoce al
antgeno nativo, pero interaccionando con otro epitopo diferente
al que reconoci el TH. Acto seguido internaliza este Ag y lo
procesa, presentando algunos de los pptidos resultantes en sus
molculas MHC-II.
3. El linfocito TH cebado del paso #1 reconoce por su TCR a la
combinacin especfica pptido-MHC-II en la superficie del
linfocito B del paso #2, formndose el llamado conjugado TH:B.
En dicho conjugado, el linfocito coadyuvante suministra dos tipos
de seales qumicas al linfocito B:

el TH expresa en su membrana la molcula CD40L (=CD154)

secreta citoquinas.

4. Estas seales son transducidas ("reemitidas") al interior del

linfocito B, lo que provoca cambios en el patrn de expresin
gnica. Las protenas producidas por estos genes inducidos
provocan la proliferacin clonal del linfocito, y finalmente la
diferenciacin hasta clulas plasmticas secretoras de
anticuerpos y clulas B de memoria. (La clula B que no reciba
estas seales del TH quedar anrgica).
En este apretado resumen se pueden ya apreciar algunas de las
caractersticas clave del proceso:

La clula B puede funcionar como clula presentadora de antgeno (APC)

para la TH.
El linfocito TH y el linfocito B, por medio de sus respectivos receptores
especficos, reconocen determinantes (epitopos) diferentes del mismo
antgeno o complejo antignico original. (Cada linfocito B reconoce una
parte de una protena, o la porcin lipdica o hidrocarbonatada de un
conjugado con protena).
La inmunoglobulina de membrana (mIg) del linfocito B cumple dos papeles:
como parte del complejo BCR (junto con Ig /Ig ) transmite seales al
interior celular, y como receptor especfico implicado en la endocitosis, para
llevar al Ag nativo a la ruta endoctica para su degradacin y procesamiento.

12.3.2 Fase 1: activacin y proliferacin del linfocito

TH
El antgeno nativo puede viajar por s solo a un rgano linfoide
secundario, o bien puede ser transportado (y eventualmente
procesado) por una clula presentadora profesional (APC):

clulas de Langerhans de la piel captan el antgeno, viajan por los vasos

linfticos como clulas "a vela", y al llegar al ganglio se convierten en clulas
dendrticas interdigitantes.
clulas dendrticas intersticiales de los tejidos
macrfagos/monocitos.

En el rgano linfoide secundario la APC presenta algn epitopo a un

linfocito TH en reposo, interaccionando ambas clulas de la forma
estudiada en el tema anterior:

seal #1: unin del TCR al epitopo enclavado en MHC-II de la APC

seal #2 (coestimulatoria): unin del CD28 del TH a la B7 de la APC.
Adems, la APC secreta citoquinas como la IL-1 y la IL-6.

Todo ello provoca la activacin y proliferacin de TH, por el mecanismo

autocrino dependiente de la IL-2 que el propio linfocito secreta. De
esta forma se producen grandes cantidades de clulas TH, lo cual va a
permitir que algunas de ellas tengan posibilidades de interaccionar
luego con clulas B que presenten el mismo epitopo enclavado en el
mismo tipo de MHC-II.
12.3.3 Fase 2: El linfocito B reconoce especficamente
al antgeno nativo
NOTA: la clula B es una magnfica presentadora de antgeno, que a diferencia del macrfago posee la
capacidad de internalizar y procesar solamente el antgeno especfico para el cual est preparada por su
mIg. De hecho es capaz de procesar antgeno a concentraciones de 100 a 10.000 veces menores de las
requeridas por el macrfago.

Como sabemos, la clula B en reposo posee molculas de mIgM y mIgD asociadas con cadenas Ig e Ig ,
constituyendo el complejo receptor especfico BCR.

Aunque la clula B no es una clula fagoctica, puede internalizar

antgenos tan grandes como del tamao de ciertos virus. Ello se
produce por endocitosis mediada por receptor (siendo el receptor el
BCR). El antgeno entra a la ruta endoctica, donde se degrada hasta
pptidos, algunos de los cuales pueden ser colocados en el surco de
sus molculas MHC-II. (Mientras tanto, la clula B est renovando
continuamente sus receptores BCR, lo que le permite seguir captando
especficamente ms molculas o partculas antignicas).

Pero al mismo tiempo, el hecho de que se est produciendo unin del

antgeno con BCR (con entrecruzamiento de dos complejos BCR por
una misma molcula antignica) supone el inicio de una ruta de
transduccin intracelular de seal: las colas citoplsmicas de las
cadenas Ig /Ig inician una cascada de fosforilaciones y
desfosforilaciones, donde estn implicadas varias proten-tirosnquinas
(PTK) como Lyn, Fyn y Blk. Al cabo de unos 30 segundos se han
fosforilado muchas protenas celulares (por rutas en buena parte an
desconocidas), que finalmente conducen a la activacin de la
fosfolipasa C (PLC). A partir de aqu se activan las rutas ya estudiadas
del inositol-trifosfato (IP3) y del diacilglicerol (DAG); la primera
conduce a la calcineurina/calmodulina, y la segunda a la activacin de
la protenquinasa C (PKC). Ambas colaboran en la activacin de una
serie de genes tempranos que codifican factores de transcripcin
(como el AP1, c-Myc, etc). En la fase siguiente, los productos de estos
genes van a tener un papel destacado.

12.3.4 Fase 3: Formacin del conjugado TH:B e

intercambio de seales
La clula TH cebada especfica reconoce ahora, por medio de su TCR,
la configuracin peculiar del pptido especfico enclavado en el MHC-
II, en la superficie del linfocito B; es decir, el linfocito B est actuando
como clula presentadora para el TH.
Tras este contacto inicial se forma el conjugado TH:B en el que ambas
clulas dejan entre s un estrecho espacio intercelular. En esta fase se
producen importantes cambios en el linfocito TH:

reorganiza el aparato de Golgi y el centro organizador microtubular, de

modo que aparecen microtbulos del citoesqueleto orientados hacia el lado
que mira a la clula B. Ambas caractersticas tienen que ver con el hecho de
que se van a secretar citoquinas en esa direccin.
Las molculas de membrana de la clula T se concentran en la zona de
contacto intercelular:

TCR+CD3+CD4 van a participar en contactos con MHC-II+pptido de

B

LFA-1 har contacto con ICAM-1 de B

CD28 se ligar con la B7 del linfocito B (pero esto no es

imprescindible si el linfocito TH est ya "armado").

Esta reorientacin implicar una mayor avidez en la unin entra ambas

clulas, permitiendo que este contacto dure ms tiempo, lo cual facilitar las
seales que necesita el linfocito B: CD40L y citoquinas, como veremos a
continuacin.

12.3.5 Fase 4: Efecto de las seales del linfocito

TH sobre la clula B
Los dos tipos de seales del linfocito TH (CD40L y citoquinas) van a
provocar que el linfocito B sufra una serie de notables cambios.
Algunas de estas molculas qumicas provocan que el linfocito B salga
de reposo y entre a ciclo celular (seales de competencia); otras
molculas hacen que el linfocito B progrese a lo largo del ciclo celular
(seales de progresin) y/o que se diferencie.

Las molculas CD40L que el linfocito TH expresa en su superficie se

unen a las de CD40 del linfocito B (que ya estaban preformadas). Esto
provoca una seal para que el linfocito B sintetice y ensamble en
membrana receptores para diversas citoquinas (lo cual ocurre a las 12
horas del contacto inicial del Ag con la mIg). Entonces, el linfocito B,
que hasta este momento estaba en reposo (G0), puede entrar por fin
en el ciclo celular (G1). Estamos pues, ante una seal
decompetencia, que participa en la activacin del linfocito B.
Las citoquinas secretadas direccionalmente por el linfocito TH se
concentran en bolsas distribuidas en la zona de estrecho contacto
intercelular. Cada citoquina va a unirse a su receptor correspondiente
situado en la superficie de la clula B, provocando una serie de
respuestas en dicha clula:

La IL-4 (junto con la IL-1 secretada por macrfagos) actan como seales
de competencia (favorecen la transicin G0 G1).
Posteriormente, la misma IL-4 sirve ya como seal de progresin (que
favorece el avance del ciclo celular: G1 S M), con lo que empieza
la proliferacin clonal. Otras citoquinas que colaboran en la proliferacin
son la IL-2 y la IL-5 (esta ltima en ratn, pero no en humanos).
La diferenciacin requiere IL-6, as como de nuevo IL-4, IL-5, IL-10 e IFN-
. En esta diferenciacin se producen dos subclones: uno de clulas
plasmticas secretoras de anticuerpos, y otro de clulas B de memoria.

Esta respuesta de los linfocitos B frente a antgenos timo-

dependientes se caracteriza por:

tener memoria inmunolgica,

poseer maduracin de la afinidad conforme pasa el tiempo,
experimentar cambio de isotipo.

Respecto de este ltimo punto, se sabe que diferentes citoquinas o

combinaciones de citoquinas tienden a inducir preferencialmente
ciertos cambios de isotipo. Veamos algunos ejemplos en el ratn:

la IL-4 tiende a provocar cambio a IgG1, y luego a IgE;

el factor de crecimiento tumoral beta (TGF- ) provoca cambio a IgG2b y a
IgA;
El interfern gamma (IFN- ) induce cambio a las subclases IgG2a e IgG3.

Parece ser que la base de esta induccin de cambios de clase estriba

en que las correspondientes citoquinas inducen de alguna forma un
cambio en la estructura de la cromatina de las regiones S
(de switch, cambio de clase) situadas en el lado 5 de cada gen
CH concreto, promoviendo la recombinacin especfica que ya
estudiamos en el tema 7 (Gentica de los anticuerpos).

12.4 RESPUESTA HUMORAL IN VIVO

La respuesta humoral se desencadena en distintos rganos
dependiendo de la va de entrada del antgeno:

si el antgeno entra por la sangre, va a parar al bazo;

si entra por tejidos, es captado por algn ganglio linftico regional;
si se introduce por los epitelios internos, suele ir a parar a tejido linfoide
asociado a mucosas (MALT).

En este apartado vamos a describir cmo se sucede la respuesta

humoral en una de estas localizaciones: el ganglio. Recordemos que el
ganglio est diseado para atrapar y retener antgenos que llegan por
alguno de los vasos linfticos aferentes. El antgeno puede llegar solo,
en forma soluble, o bien transportado por clulas "a vela" (que como
se recordar es la forma que adoptan las clulas de Langerhans de la
piel al pasar a la circulacin linftica), o por clulas dendrticas
intersticiales de los tejidos, o por macrfagos.

Por su lado, los linfocitos pueden acceder al ganglio por dos rutas
distintas: por los linfticos aferentes, o desde la sangre, por
extravasacin pasando a travs de las vnulas de endotelio alto (HEV)
postcapilares.

12.4.1 Respuesta primaria:

Interacciones iniciales: tienen lugar en la paracorteza.

Las clulas dendrticas interdigitantes, con sus largos procesos de

membrana, interaccionan simultneamente cada una con unos 200 linfocitos
TH, presentndoles pptidos procesados en el surco del MHC-II, con lo que
se provoca una gran activacin y proliferacin clonal de esos linfocitos.
Por su parte, los linfocitos B en reposo internalizan antgeno especfico, y lo
procesan.
Las clulas TH activadas interaccionan con las clulas B, induciendo en stas
las primeras fases de la activacin.
Algunas de estas clulas B de la paracorteza siguen su activacin,
proliferacin y diferenciacin hasta clulas plasmticas secretoras de IgM e
IgG, con lo que se suministra una primera descarga de anticuerpos
circulantes. Luego migran a la mdula sea.
Pero otras clulas B se quedan a mitad de su activacin, y emigran a la
corteza, a los folculos primarios, donde van a seguir una ruta especial que
da origen a los centros germinales de los folculos secundarios.

Eventos en el folculo secundario:

El folculo secundario suministra un microambiente especial en el que
las interacciones entre clulas B y clulas dendrticas foliculares van a
conducir a la generacin de grandes cantidades de clulas B y clulas
plasmticas con anticuerpos de alta afinidad (por maduracin de
afinidad tras hipermutacin somtica). Veamos los acontecimientos:

Cuando la clula B "a medio activar"(procedente de la paracorteza) entra en

el folculo primario comienza a dividirse activamente: estas clulas B en
rpida proliferacin se denominan centroblastos, y son ellas las que dan
lugar al centro germinal del folculo, que ahora se llama folculo secundario.
Los centroblastos se caracterizan por su rpida divisin (una vez cada 6
horas) y porque carecen de inmunoglobulinas de membrana (mIg).
La zona basal oscura del centro germinal est llena de centroblastos,
todos ellos descendientes de un solo linfocito B (o unos pocos). Es decir, se
estn produciendo grandes cantidades de centroblastos todos descendientes
de una clula B, por lo tanto todos tienen la misma especificidad antignica
que el linfocito B "fundador" que originalmente internaliz el Ag que ha dado
origen a la respuesta. Es en esta fase de centroblastos donde ocurre
la hipermutacin somtica de las porciones variables de los genes
reordenados de cadenas pesadas y ligeras. (Vase tema 7).
Al cabo de unos 4 das los centroblastos dan origen a los centrocitos,
clulas ms pequeas que no se dividen, y que vuelven a tener mIg en sus
membranas Estos centrocitos ocupan la zona basal clara del centro
germinal. Debido a la previa hipermutacin somtica, cada centrocito,
aunque miembro del mismo clon, tendr una variante aleatoria distinta de la
inmunoglobulina original. Lgicamente, dentro de esta poblacin habr
centrocitos con mIg dotada de mayor afinidad hacia el Ag original y
centrocitos con mIg de menor afinidad.
Es ahora cuando tiene lugar el proceso de seleccin darwiniana de esa
poblacin de centrocitos: aquellos que tengan mIg de mayor afinidad sern
seleccionados para sobrevivir en base a su capacidad de interaccionar con
mayor afinidad con el antgeno nativo dispuesto en la superficie de las
clulas dendrticas foliculares:

Parece que las dendrticas foliculares retienen antgeno nativo (solo o

formando parte de inmunocomplejos) en las "perlas"
(engrosamientos) de sus largos procesos de membrana. Ello lo hacen
a travs de sus molculas CD23 (repasar en el captulo 2 los rasgos
de estas notables clulas). Ello permite que varios centrocitos
interaccionen simultneamente con una misma clula dendrtica.

En principio ("por defecto", dira un informtico) los centrocitos estn

programados para morir por apoptosis al cabo de unos pocos das, a
menos que sean rescatados por el hecho de que su mIg interaccione
con el antgeno retenido en la superficie de las clulas dendrticas
foliculares.
Los centrocitos con receptores (mIg) de baja afinidad tienen que
competir en desventaja con sus "hermanos" de mayor afinidad e
incluso con anticuerpos libres de alta afinidad: estos centrocitos con
mIg de baja afinidad pueden encontrarse con el hecho de que los
determinantes del antgeno estn ya ocupados por receptores de
centrocitos de alta afinidad o por anticuerpos.

De hecho, conforme pasa el tiempo, la situacin es cada vez peor

para estos centrocitos: en una respuesta primaria, el nivel de Ac
circulantes al principio es bajo, pero conforme pasan los das sube
esta concentracin, de modo que cada vez hay ms anticuerpos que
se pueden unir al antgeno desplegado en las membranas de las
clulas dendrticas. Esto significa que el "listn" para que un centrocito
se una al antgeno se pone cada vez "ms alto": slo lo lograrn los
que en la "lotera" de la hipermutacin somtica hayan resultado
"agraciados" con mIg de mayor afinidad.

El resultado es que todo centrocito que al cabo de unos das no se

haya unido por su mIg al Ag en la superfice de la clula dendrtica
folicular, al no recibir la seal "rescatadora", muere por apoptosis, y
sus restos son destruidos por los macrfagos de cuerpos tingibles.
Este es el destino de la inmensa mayora de los centrocitos (90%).
Cul es la seal que rescata a los afortunados de la apoptosis y cuya carencia precipita a la mayora a la
muerte pogramada?

Los centrocitos que tienen mIg de alta afinidad que logran unirse a la clula
dendrtica, reciben una seal que induce en ellos la expresin del gen bcl-2,
y es esto lo que les salva de la apoptosis. Parece que en este rescate
tambin interviene la unin del CD23 de la clula dendrtica folicular con el
CD21 del complejo correceptor del centrocito).
Los centrocitos con mIg de baja afinidad, al no unirse con la clula
dendrtica, siguen su programacin a la muerte, ya que al no inducirse el
gen bcl-2 no producen la seal que interrumpa dicha programacin letal.
Tras la seleccin darwiniana, los centrocitos Bcl-2+ se diferencian en la zona
apical clara en dos suclones celulares: clulas B de memoria y
plasmablastos.
Los plasmablastos abandonan el centro germinal y pasan a mdula,
donde terminan su diferenciacin hasta clulas plasmticas secretoras de
anticuerpos. Las clulas plasmticas carecen de inmunoglobulinas de
membrana, y son clulas a trmino, que mueren a las dos semanas. (El
hecho de que tengan una vida limitada es un factor que contribuye a que la
respuesta inmune est autolimitada). Secretan grandes cantidades de
anticuerpos que tienen la misma especificidad que el centrocito
correspondiente del que proceden. Los anticuerpos salen por los linfticos
eferentes y entran luego en circulacin sangunea, de donde son distribuidos
 a todo el organismo. Se cree igualmente que la diferenciacin a clulas
plasmticas rquiere la interaccin del CD23 de la clula dendrtica folicular
con el correceptor de la clula B (formado po CD19, CD21 y CD81).
Las clulas B de memoria son clulas en reposo (G0), pero no son iguales
que las B vrgenes: expresan ms isotipos en sus membranas (mIgM, mIgG,
mIgA, mIgE), que adems son de mayor afinidad que la mIg original; esto
implica que ante una segunda entrada del Ag se van a activar a menores
dosis, y la respuesta secundaria ser ms rpida. Algunas de ellas se
quedan en el folculo, formando parte del manto que rodea al centro
germinal; otras abandonan el ganglio por el nico linftico eferente, y
recirculan. Poseen una gran esperanza de vida (incluso ms de 40 aos),
aunque se desconoce la base de esta notable longevidad. (Existen indicios
de que la diferenciacin a clulas de memoria tambin necesita nuevos
contactos entre el CD40 del linfocito B y el CD40L de la clula TH).

12.4.2 Respuesta secundaria

La respuesta secundaria tiene lugar in vivo de una forma parecida a lo
que acabamos de ver, pero existen algunas diferencias que pasamos a
comentar:

Cuando entra el antgeno por 2 vez (o ulterior) parte de las molculas

pueden unirse a anticuerpos persistentes procedentes de la respuesta
primaria, de modo que se forman complejos Ag-Ac.
Cuando los inmunocomplejos entran a ganglio, se unen a las clulas
dendrticas foliculares. Estas clulas "empaquetan" parte de los complejos
Ag-Ac en vesculas membranosas denominadas iccosomas, que se van
desprendiendo por gemacin a partir de los engrosamientos ("perlas") de los
largos procesos de membrana.
Las clulas B de memoria generadas durante la respuesta primaria que
tengan mIg de alta afinidad compiten eficazmente con los anticuerpos
circulantes para unirse con el Ag que forma parte de los inmunocomplejos
de los iccosomas: se unen a estos iccosomas, los engullen enteros, procesan
el antgeno y se lo presentan (en surco de MHC-II) a linfocitos
TH especficos. Se forma el conjugado TH:B, con lo que la clula B se activa y
prolifera (como centroblastos) en el centro germinal, hasta que al 4 o 5
da se diferencia a clulas plasmticas secretoras de anticuerpos.
Al igual que en la respuesta primaria, la proliferacin de centroblastos va
acompaada de hipermutacin somtica seguida de seleccin darwiniana
sobre los centrocitos resultantes en base a su capacidad de unin al
antgeno atrapado en las clulas dendrticas.

Como se puede ver, el centro germinal durante la respuesta

secundaria difiere en dos aspectos importantes del de la respuesta
primaria:
 1. La previa disponibilidad de anticuerpo circulante incrementa la
eficacia de las clulas dendrticas foliculares para atrapar
antgeno, lo cual supone una amplificacin de la seal a las
clulas B.
2. El anticuerpo preexistente compite con los centrocitos para
unirse con el antgeno en la superficie de las clulas dendrticas.
Ello asegura que en la respuesta secundaria slo van a contribuir
a la produccin de anticuerpos clulas plasmticas procedentes
de clulas B dotadas de receptores de mayor afinidad que los de
la respuesta primaria. Conforme avanza la respuesta, aumenta
la concentracin de anticuerpos al tiempo que disminuye la de
antgeno, por lo que se seleccionan centrocitos con afinidades
cada vez ms altas, capaces de funcionar con concentraciones de
antgeno cada vez ms bajas.

12.4.3 Algunas aplicaciones

En las vacunaciones se suele recurrir a la administracin de varias
dosis del antgeno inmunizante. Con ello se logra no slo una mejor
respuesta secundaria por el hecho de aumentar las clulas B de
memoria, sino que se provoca que las clulas B de memoria se
diferencien a plasmticas secretoras de anticuerpos de alta afinidad.

Si esta estrategia se aplica en inmunizaciones experimentales de

animales de laboratorio, de ellos se pueden extraer antisueros de gran
avidez, que se usan en ensayos in vitro para pruebas que requieren
gran sensibilidad.

12.5 RESPUESTA FRENTE A

ANTGENOS TIMO-INDEPENDIENTES
Antgenos timo-independientes (TI o Tind) son aquellos que inducen
respuesta humoral en ausencia de contactos con linfocitos TH.

Suelen ser molculas polimricas con epitopos repetitivos.

La mayora son no proteicos (lipopolisacrido, polisacridos), y por lo tanto
no pueden ser procesados y expuestos en el surco de MHC.
Suelen ser resistentes a la degradacin. En los ganglios quedan retenidos en
las membranas de macrfagos de los senos subcapsulares.
12.5.1 Antgenos timo-independientes de tipo 1 (TI-1)
Provocan respuesta humoral en ratones scid carentes de timo. Esto significa
que son totalmente independientes de ninguna funcin de linfocitos T H. A
altas concentraciones se comportan como activadores policlonales de
linfocitos B (mitgenos de B), debido a que interaccionan con molculas de
la clula B diferentes de la mIg, eludiendo las dos seales tradicionales
(contactos entre molculas de membrana de T y B, y citoquinas de TH).
Inducen la secrecin de IgM, pero sin provocar maduracin de afinidad, ni
memoria, ni cambio de clase.
A bajas concentraciones provocan una respuesta especfica rpida, anterior
a la respuesta timo-dependiente.
El ejemplo tpico de antgeno TI-1 es el lipopolisacrido (LPS) de bacterias
Gram-negativas.

12.5.2 Antgenos timo-independientes de tipo 2 (TI-2)

Son macromolculas altamente repetitivas (como las de la cpsula del
neumococo, flagelos bacterianos, etc.). Al ser multivalentes provocan un
gran entrecruzamiento de muchos receptores BCR del linfocito B, que junto
con citoquinas de un TH cercano (pero sin contactos directos) provocan la
activacin monoclonal de un tipo de linfocitos llamados clulas B CD5+.
Juegan un papel importante contra bacterias capsuladas (Haemophilus,
Streptococcus pneunomiae) que suelen ser difciles de ingerir por los
fagocitos de forma directa.

CURSO DE INMUNOLOGA
GENERAL:
13. Inmunidad celular
Enrique Iez Pareja

Departamento de Microbiologa

Universidad de Granada

Espaa

NDICE:
13.1 INTRODUCCIN *
13.2 INMUNIDAD MEDIATIZADA POR CLULAS FAGOCTICAS *

13.2.1 Quimiotaxis *

13.2.2 Unin del microorganismo al fagocito *

13.2.3 Desencadenamiento de la captacin *

13.2.4 Fagocitosis y mecanismos matadores *

13.2.4.1 Mecanismos dependientes de oxgeno *

13.2.4.2 Mecanismos independientes de oxgeno *

13.2.5 Activacin de los macrfagos *

13.3 PAPEL DE LAS CLULAS T COADYUVANTES (TH) *

13.4 CITOTOXICIDAD MEDIADA POR CLULAS *

13.4.1 Citotoxicidad directa especfica (mediatizada por linfocitos CTL) *

13.4.1.1 Activacin y diferenciacin de los linfocitos T citotxicos *

13.4.1.2 Fase efectora: Ataque y destruccin de la clula diana *

13.4.2 Citotoxicidad directa inespecfica mediada por clulas NK *

13.4.3 Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) *

13.5 RESPUESTA DE HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO RETARDADO *

13.5.1 Fases de la hipersensibilidad de tipo retardado *

13.5.1.1 Sensibilizacin *

13.5.1.2 Fase efectora *

13.5.2 Interaccin entre citoquinas y clulas en la DTH *

13.5.3 Efectos de la hipersensibilidad retardada *

13.1 INTRODUCCIN
Actualmente se tiende a considerar como "inmunidad mediada por
clulas" cualquier respuesta contra microorganismos o tumores en la
que los anticuerpos jueguen un papel subordinado o secundario. Pero
a estas alturas ya sabemos que en Inmunologa es difcil "poner
puertas al campo":

En la respuesta inmune humoral especfica hay que activar clulas al

principio de dicha respuesta.
En muchas respuestas celulares los anticuerpos juegan papeles esenciales
como "puentes" entre clulas (lo veremos con la citotoxicidad celular
dependiente de anticuerpos, ADCC).
Adems, cualquier respuesta celular va acompaada en paralelo de
produccin de anticuerpos, que a su vez pueden modificar las respuestas
celulares de varias maneras: p. ej., la formacin de complejos Ag-Ac
provoca la activacin del complemento, en la que se liberan pptidos que
funcionan como factores quimiotcticos que inducen la acumulacin de
mayor nmero de clulas inmunes y el aumento de la respuesta
inflamatoria.

Por otro lado, no hay que suponer que todas las respuestas celulares
dependen de linfocitos T: de hecho las primeras lneas defensivas
contra microorganismos son inespecficas, y descansan en la
identificacin de componentes microbianos comunes por parte de
clulas del sistema de inmunidad natural (macrfagos, granulocitos
neutrfilos, etc.).

Una de las posibles clasificaciones de la inmunidad mediada por

clulas sera la siguiente:

1. Reacciones dependientes de fagocitos del sistema natural:

fagocitosis
produccin de citoquinas

2. El papel central de las clulas TH en la determinacin del tipo de

mecanismo efector puesto en marcha.
3. La citototoxicidad directa que conduce a la lisis de la clula diana
enferma es realizada por varios tipos celulares:

dentro del sistema especfico: linfocitos T citotxicos (matadores), que se

denominan linfocitos T citolticos (CTL) en su fase efectora;
dentro del sistema natural: clulas agresoras naturales (NK) y macrfagos.
Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC)
 Clulas T CD4+ que median reacciones de hipersensibilidad de tipo
retardado, que en su estado efector se denominan TDTH.

13.2 INMUNIDAD MEDIATIZADA POR

CLULAS FAGOCTICAS
El alumno encontrar provechoso repasar las caractersticas de las
clulas mieloides fagocticas, tratadas en el tema 2. Aqu
profundizaremos en estas clulas, sobre todo en lo que atae a los
mecanismos de destruccin intracelular del patgeno una vez que lo
han engullido.

La actuacin de estas clulas la podemos dividir a efectos

pedaggicos, en varias fases:

1. Quimiotaxis
2. unin del microorganismo al fagocito
3. desencadenamiento de la captacin del microorganismo
4. fagocitosis y mecanismos matadores.

13.2.1 Quimiotaxis
La atraccin de los fagocitos del sistema de inmunidad natural hacia el
foco de infeccin se puede deber a varios factores:

por sustancias de origen directamente microbiano. Tal es el caso de cortos

pptidos derivados de los extremos amino-terminales de protenas
bacterianas (p. ej., el formil-Met-Leu-Phe es quimiotctico para los
leucocitos, que llevan receptores capaces de reconocerlo).
Ciertos componentes microbianos (como la endotoxina de bacterias Gram-
negativas) activan la ruta alternativa del complemento, que libera los
pptidos C3a y C5a, que son muy quimiotcticos sobre fagocitos.

13.2.2 Unin del microorganismo al fagocito

Esta fase es importante, ya que de su xito depende la ocurrencia de
la internalizacin ulterior y el desencadenamiento de los mecanismos
matadores. La unin inespecfica entre bacteria y fagocito se realiza
por interaccin entre molculas de superficie del microorganismo y
receptores del leucocito:
 molcula receptor del
bacteriana fagocito
lectinas Oligosacridos de
superficie
oligosacridos de Lectinas
superficie
-glucanos CR3 y LFA-1
lpido A CR3 y LFA-1
(endotoxina)

Podemos hacer una tabla parecida, pero en la columna de la bacteria

ahora vamos a considerar molculas del hospedador que recubren al
microorganismo (opsonizacin), y que a su vez sirven para que sean
reconocidas por receptores de leucocitos:

comp. opsonizantes Receptor del fagocito

del hospedador
unidos a la bacteria
C3b CR1 (*)
inmunoglobulinas FcR (*)
MBP C1qR

(*) Los receptores CR1 y FcR estn entrelazados entre s por medio del citoesqueleto, lo que explica en
parte su accin sinrgica

Los receptores inespecficos de tipo lectina disminuyen en el macrfago activado (en presencia de IFN-),
mientras que aumentan los CR1 y FcR. Ello permite a las clulas Th indicar a los macrfagos que entran al
tejido que fabriquen ms molculas capaces de citoadherencia.

13.2.3 Desencadenamiento de la captacin

La captacin del microorganismo se ve facilitada si est recubierto por
el componente C3b del complemento y/o por anticuerpos: esta
opsonizacin permite potenciar poderosamente el mecanismo
amebiano del fagocito.

13.2.4 Fagocitosis y mecanismos matadores

En el captulo 2 ya nos referimos a la fagocitosis, por lo que no
volveremos a insistir aqu en ella, sino que nos centraremos en lo que
ocurre cuando el microorganismo, englobado en el fagosoma, recibe
la descarga de los grnulos (lisosomas) del fagocito. El contenido
preformado de estos grnulos, junto con sustancias producidas de
novo, constituyen una batera de mecanismos encaminados a la
muerte del patgeno. Estos mecanismos se pueden clasificar en dos
grandes tipos: dependientes e independientes de oxgeno.

13.2.4.1 Mecanismos dependientes de oxgeno

Los podemos estudiar a su vez bajo dos categoras: los que se basan
en intermediarios reactivos de oxgeno, y los intermediarios reactivos
de nitrgeno.

1. Intermediarios reactivos de oxgeno (ROI). La unin de

partculas a los receptores de la membrana del fagosoma del
macrfago provoca el denominado estallido respiratorio (por
activacin de la ruta de la hexosa monofosfato), que produce
mucho NADH.
a. Antes de que el lisosoma se fusione con el fagosoma, en
ste tiene lugar una reduccin de oxgeno molecular (O2)
catalizada por la NADH-oxidasa de la membrana del
fagosoma; el anin superxido resultante (O-2) es txico
por s mismo, pero a su vez da lugar a otros radicales
txicos de vida corta, como el perxido de hidrgeno
(H2O2), el radical hidroxilo (OH) y el oxgeno singlete (O12).
El macrfago se protege de los ROI que puedan salir del
fagosoma por medio de una cadena de reacciones redox en
que participa glutation.
b. Una vez que el lisosoma se fusiona con el fagosoma, aqul
libera la mieloperoxidasa, que acta sobre los perxidos en
presencia de haluros (I- y Cl-), para producir compuestos
halogenados (hipohaluros) muy txicos y de vida larga:
cido hipocloroso (ClOH), e hipoiodoso (IOH).
2. Intermediarios reactivos de nitrgeno (NRI)
a. La enzima NOS (xido ntrico-sintetasa) combina el oxgeno
molecular con el nitrgeno guanidino de la L-arginina, para
generar xido ntrico (NO), que es txico para bacterias y
clulas tumorales.

Los macrfagos de ratn (pero no los humanos) necesitan

para activar esta ruta a un nivel ptimo dos seales:
interfern gamma (IFN- ) para activar la enzima NOS, y
factor de necrosis tumoral (TNF) (ver el apartado 13.2.5).
13.2.4.2 Mecanismos independientes de oxgeno

Estos mecanismos dependen de protenas antimicrobianas

preformadas y acumuladas en los grnulos:

1. Protenas catinicas, con actividades de tipo antibitico:

a. defensinas (en macrfagos de conejo y en PMN neutrfilos
humanos). Son pptidos catinicos , de unos 30
aminocidos, ricos en cys y arg. Forman canales
permeables a los iones en las bicapas lipdicas de los
microrganismos. Actan antes de que tenga lugar la
acidificacin del fagolisosoma.
b. Catepsina G
c. Azurozidina
2. Lisozima, que acta rompiendo el peptidoglucano de bacterias
(sobre todo de Gram-negativas).
3. Lactoferrina (producida por neutrfilos): secuestra hierro,
indispensable para las bacterias.

13.2.5 Activacin de los macrfagos

Los macrfagos en reposo pueden matar, desde luego, pero sus
capacidades microbicidas pueden mejorar por medio de su activacin.
Esta activacin puede provocarse por:

1. productos microbianos que causan

a. activacin directa de monocitos y macrfagos
b. activacin indirecta: los macrfagos sin activar y las clulas
NK liberan citoquinas que a su vez activan a los
macrfagos.
2. Ulterior activacin por citoquinas producidas por linfocitos TH,
sobre todo por IFN- . Provocan atraccin quimiotctica de
fagocitos y/o activacin de los mecanismos dependientes e
independientes de oxgeno.

En aos recientes se est viendo que la activacin del macrfago es

algo ms complejo de lo que se crea. La idea clave que ha surgido es
que el macrfago despliega unas u otras de sus funciones efectoras
dependiendo de la combinacin particular de estmulos qumicos que
reciba, a saber, citoquinas y molculas inflamatorias.

La activacin de los macrfagos de ratn se puede lograr mediante el

IFN- secretado por el TH, o por la endotoxina (lpido A) de las
bacterias gram-negativas. Pero a su vez, los macrfagos activados
secretan TNF- , que al actuar sobre macrfagos ya activados
provocan una mayor potenciacin de sus capacidades al activarse la
ruta dependiente del xido ntrico.

En humanos, el macrfago, en presencia de IFN-gamma, activa la 1-

alfa hidroxilasa, que convierte el 15-hidroxicolecalciferol circulante en
1,25-dihidroxicolecalciferol (calcitriol o vitamina D3). A su vez, este
calcitriol activa ms al macrfago al tiempo que inhibe los linfocitos
Th1. Esta respuesta en humanos puede ser parte de la razn de que
cuando falla la eliminacin del parsito haya un cambio desde TH1 a
TH2, con lo que se hace crnica la respuesta celular. La produccin de
calcitriol en el caso de tuberculosis o sarcoidiosis puede llegar a
circulacin perifrica, originando una afeccin de hipercalcemia.

Llegados a este punto, quiz sea bueno llamar la atencin sobre las
diferentes fases de la respuesta inmune en las que participan los
macrfagos:

1. En la defensa inicial frente al patgeno: el macrfago sin activar

tiene su capacidad fagoctica basal. Al mismo tiempo secreta
citoquinas que ayudan a otras clulas (p. ej., recordar la IL-1
que participa en la activacin de linfocitos B).
2. En la presentacin del antgeno: acta como clula presentadora
para linfocitos TH, que a su vez se activan secretando citoquinas.
3. En la fase efectora el macrfago se activa por citoquinas (como
el IFN- secretado por linfocitos TH), lo cual va a potenciar sus
actividades antimicrobianas, antitumorales y de secrecin de
citoquinas.

Las citoquinas secretadas por macrfagos en respuesta a

componentes microbianos cumplen importantes papeles: la IL-12 y el
TNF- , en sinergia con otros mediadores, mejoran la actividad
antimicrobiana inespecfica:

el TNF- mejora la capacidad microbicida de PMN neutrfilos y de los propios

macrfagos;
el TNF- junto con la IL-12 provocan que las clulas NK liberen IFN-, el cual
aumenta la actividad de los macrfagos;
el TNF- induce cambios en las superficies de clulas endoteliales y de
fagocitos, que pueden interaccionar de modo que los fagocitos se extravasan
para acceder al lugar de la inflamacin, donde se localiza el foco de
infeccin.
13.3 PAPEL DE LAS CLULAS T
COADYUVANTES (TH)
Las clulas TH desempean papeles esenciales en la inmunidad
celular:

1. determinan la especificidad de la respuesta inmune (qu

antgenos y qu epitopos son reconocidos);
2. intervienen en la seleccin de los mecanismos efectores
destinados a eliminar al patgeno;
3. ayudan a la proliferacin de las clulas efectoras adecuadas;
4. mejoran las funciones de fagocitos y otras clulas efectoras.

El primero de estos papeles citados ya ha sido abordado en otro

captulo: la interaccin del conjunto de receptores TCR-CD3-CD4 con
los epitopos en el MHC-II de clulas presentadoras condiciona la
especificidad de la respuesta.

Pero el sistema inmune ha de efectuar una segunda decisin esencial:

qu mecanismos efectores se ponen en marcha, que sean los
adecuados para la naturaleza de cada infeccin en particular. Dentro
de la inmunidad mediada por clulas, existen varios mecanismos:

1. citotoxicidad directa especfica, por medio de linfocitos T

citotxicos CD8+ (CTL);
2. degranulacin de eosinfilos y mastocitos una vez que han
contactado con la clula a eliminar a travs de anticuerpos, que
sirven de "puentes" moleculares (ADCC);
3. activacin de macrfagos y reaccin de hipersensibilidad de tipo
retardado.

Entonces, cmo se determina el tipo de accin para cada tipo de

situacin? La respuesta estriba en buena parte en el patrn local de
citoquinas producidas al inicio de la respuesta inmune, desencadenado
ante cada tipo de patgeno, as como en la concentracin local de
metabolitos esteroideos y de vitamina D3 en el tejido linfoide: estos
factores determinan que predomine uno de dos subtipos de clulas TH,
lo que finalmente condicionar el desencadenamiento de uno u otro
de los mecanismos efectores.
As pues, los linfocitos TH presentan dos subpoblaciones, denominadas
TH1 y TH2. Dichas subpoblaciones se desarrollan a travs de una ruta
que se bifurca:

THvrgenes estimulacin estimulacin memoria

inicial crnica largo

plazo
THP TH0 TH1 THM

TH2

Cada uno de estos tipos de linfocitos TH secreta un patrn

caracterstico de citoquinas:

THP TH0 TH1 TH2 THM

... IFN- IFN- ... ...

IL-2 IL-2 IL-2 ... IL-2

... IL-4 IL-4 ...

... IL-5 ... IL-5 .

.. IL-6 .

. IL-10 . IL-10

. .. IL-3 IL-3

... ... TNF- TNF-

... ... GM- GM-
CSF CSF

(En la tabla se han resaltado en cursiva sobre color amarillo las citoquinas caractersticas
de TH1 y TH2, que no son comunes a ambas subpoblaciones).
Veamos pues, en qu se diferencian funcionalmente los lincitos de
ambas subpoblaciones:

Las clulas TH1 tienden a activar los macrfagos, y responden bien a

Las clulas TH2 tienden a incrementar la produccin de mastocitos y
eosinfilos, y mejoran la produccin de ciertos isotipos de inmunoglobulinas,
incluyendo la IgE. Las clulas TH2 responden bien a antgenos presentados
por linfocitos B.

Una vez establecidos, cada uno de estos patrones de respuesta es

capaz de inhibir o suprimir al otro, debido a la accin de ciertas
citoquinas de cada tipo de clula TH:

Esta diferenciacin de TH1 y TH2 se descubri en el ratn, pero existen

cada vez ms pruebas de que igualmente existe en la especie
humana. A los TH1 se les suele llamar linfocitos T "inflamatorios", y a
los TH2, "coadyuvantes".
Un ejemplo clnico de este papel particular de los dos tipos de clulas T H lo tenemos en las dos clases
extremas de lepra:

en la lepra tuberculoide se inducen sobre todo linfocitos TH1, por lo que hay
una buena activacin de macrfagos, lo cual redunda en que se detectan
pocas bacterias intracelulares.
En cambio, en la lepra lepromatosa se induce la subpoblacin TH2, que
colabora eficazmente en la respuesta especfica humoral; pero los
anticuerpos evidentemente no pueden acceder al interior celular, por lo que
existen abundantes bacilos en el interior de los macrfagos; stos, al no
poder ser activados eficazmente, no pueden eliminar al parsito. Hay gran
destruccin de tejidos.

13.4 CITOTOXICIDAD MEDIADA POR

CLULAS
En este apartado vamos a tratar aquellos mecanismos efectores que
dependen de la accin de clulas del sistema inmune capaces de
matar/lisar clulas enfermas (clulas diana), a las que se unen de
modo directo o indirecto:

1. Citotoxicidad directa especfica: es la llevada a cabo por los

linfocitos citotxicos (TC), que estn restringidos por el haplotipo
 propio MHC-I, y que poseen CD8+como molculas correceptoras.
(aunque algunas son CD4+ y estn restringididas por MHC-II)
2. Citotoxicidad directa inespecfica: las clulas agresoras naturales
(NK) reconocen determinantes inespecficos de clulas tumorales
o infectadas con ciertos virus.
3. Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos: es un
mecanismo indirecto por el que clulas matadoras como NK,
eosinfilos, etc., interaccionan con el antgeno por medio de
puentes de anticuerpos previamente unidos a receptores para Fc
de la clula.

13.4.1 Citotoxicidad directa especfica (mediatizada

por linfocitos CTL)
El papel ms importante de este mecanismo es el de eliminar clulas
propias infectadas por virus. Como veremos, los linfocitos TC en
reposo, al activarse apropiadamente, terminan diferencindose a los
llamados linfocitos T citolticos (CTL), que son los efectores de la
inmunidad celular especfica.

El 90% de estos linfocitos son CD8+, y estn restringidos por el MHC-I

propio. Son capaces de reconocer a la mayora de clulas nucleadas.
Pero existe un 10% de linfocitos TC que fenotpicamente son CD4+ y
estn restringidos por MHC-II.

La actuacin de estas clulas la podemos considerar en dos fases:

1. Activacin y diferenciacin de los precursores TC hasta CTL

2. Fase efectora: destruccin de la clula diana, a su vez
diferenciable en:

adhesin y formacin del conjugado entre el CTL y la clula diana

golpe letal
disociacin del CTL
destruccin de la clula diana.

13.4.1.1 Activacin y diferenciacin de los linfocitos T citotxicos

Los linfocitos Tc vrgenes parece que se activan solamente en los

rganos linfoides secundarios, nicos entornos en los que reciben las
seales necesarias. Requieren en realidad 3 seales:
 1. La seal especfica suministrada por la interaccin entre su
complejo TCR-CD3-CD8 con el MHC-I de una clula presentadora
profesional infectada (p. ej., una clula dendrtica interdigitante)
2. La seal coestimulatoria suministrada por la misma clula
(unin entre B7 y CD28).
3. La interleucina IL-2.

Parece ser que el Tc expresa tras la interaccin inicial una pequea

cantidad de IL-2, pero en el caso de estos Tc vrgenes no suele ser
suficiente para activarlos. La aportacin clave de IL-2 procede de
clulas Th1 cercanas. De hecho, se piensa que tanto el Th como el Tc
vrgenes se activan simultneamente al unirse a la misma clula
presentadora (no olvidemos que las APCs exhiben MHC-I y MHC-II).

En cambio, las clulas Tc de memoria tienen menos

requerimientos para su activacin. De hecho, como ya sabemos, al
tener molculas de adhesin celular diferentes a los correspondientes
Tc vrgenes, pueden encontrarse el antgeno (epitopo peptdico en
contexto MHC-I) en tejidos extralinfoides.

1. No requieren obligatoriamente la seal coestimulatoria.

2. No requieren obligatoriamente la ayuda de Th, ya que al unirse
de modo especfico a una clula propia infectada que le
suministre el pptido adecuado, provoca que el Tc produzca no
slo receptores de IL-2, sino niveles adecuados de IL-2 capaces
de auto-activarlas.

De esta manera, se provoca la proliferacin y diferenciacin del

linfocito en reposo (virgen o de memoria) hasta que se convierte en
linfocito T citoltico (CTL). Este CTL se caracteriza por poseer algo ms
de citoplasma que el TC, y sobre todo por poseer grnulos densos a
los electrones, rodeados de unidad de membrana (llamados a veces
granulosomas) y un aparato de Golgi.

13.4.1.2 Fase efectora: Ataque y destruccin de la clula diana

1) Formacin del conjugado

Tras el reconocimiento especfico, se produce una interaccin de gran

avidez entre molculas de LFA-1 del CTL y molculas de ICAM-1 de la
clula diana. Esta unin dura unos 5-10 minutos, durante los cuales
las seales de la unin intercelular se transducen al interior del CTL
por medio de cascadas de proten-quinasas y proten-fosfatasas, que
conducen a la activacin de una serie de funciones del CTL. Se dice
entonces que el linfocito queda programado para la lisis.

2) Golpe letal

El citoesqueleto del CTL se reorganiza, de modo que tanto el aparato

de Golgi como los granulosomas se sitan en el polo celular que
queda en contacto con la clula diana. Entonces, los grnulos se
fusionan con la membrana citoplsmica, producindose la exocitosis
de su contenido al estrecho espacio intercelular ("beso de la muerte").

3) Disociacin del CTL

Antes de que se produzca la lisis de la clula diana, el CTL se separa,

probablemente ayudado por el hecho de que la LFA-1 vuelve al estado
de baja afinidad.

4) Destruccin de la clula diana

Parece ser que la destruccin de la clula diana puede ocurrir por

varios mecanismos, predominando uno u otro en funcin de la
naturaleza de la superficie de la clula diana, y del grado de
activacin que haya alcanzado el linfocito CTL.

Monmeros de perforina contenida en los granulosomas llegan a la membrana de la clula

diana, y en presencia de Ca++ se polimerizan para formar cilindros huecos de poliperforina (con
unas 20 unidades), que atraviesan la bicapa lipdica. De este modo se forma un canal (con un
dimetro de 5-20 nm) que es permeable a iones, y que puede provocar la lisis osmtica de la
clula diana (aunque su papel principal es servir como canal para dejar pasar a otros
componentes de los grnulos).
Pero no siempre el efecto de la poliperforina es la lisis. En otros casos
parece que el papel de los canales es el de permitir la entrada de otras
sustancias del granulosoma que inducen la apoptosis de la clula diana. De
hecho se ha visto que pueden entrar fragmentinas (granzimas) que inducen
la fragmentacin de los cromosomas en mltiplos de nuclesoma.

Veamos algunas ideas actuales sobre el mecanismo de apoptosis

desencadenado por los linfocitos Tc.

Antes que nada, hay que aclarar el papel de la granzima B. Como

ya sabemos, se trata de una fragmentina, que induce fragmentacin
del ADN en mltiplos de nucleosomas. Ahora bien, este efecto es
indirecto: las fragmentinas no son DNAasas, sino proteasas. La
Granzima B tiene una actividad parecida a la llamada enzima
convertidora de interleucina 1- (ICE).
La ICE es una proteasa endgena con un papel central en la ruta endgena de la apoptosis. Dicha ruta se
puede activar por una serie de estmulos externos (carencia de factores de crecimiento, ciertos virus, dao
al ADN), que transforman la ICE inactiva a forma activa. Una vez activada, la ICE rompe proteolticamente
un sustrato an desconocido, que induce las ADNasas, que fragmentarn el ADN.

Pues bien, se piensa que la granzima B secretada por el CTL (y que

entra a la clula diana a travs de los canales de perforina) activa a la
ICE o bien la sustituye para desencadenar el mecanismo de esta ruta
apoptsica endgena.

Pero este no es el nico mecanismo inductor de apoptosis por parte

de los CTLs (de hecho, algunos clones de CTLs carecen de perforina y
de granzimas, y sin embargo inducen muerte celular de la clula
diana). Podemos encontrar otro mecanismo dependiente de la
interaccin entre el llamado ligando Fas del CTL y el receptor
Fas de la clula diana.

El receptor Fas (tambin llamado APO-1) es una protena de membrana que

pertenece a la llamada familia TNF de receptores de citoquinas.
Por su lado, el ligando de Fas del CTL es una protena de membrana que
exhibe homologas de secuencia con TNF, y se une al Fas.

La unin entre el ligando de Fas con el Fas de la clula infectada o

enferma induce en sta una seal que dispara la ruta endgena de
apoptosis, con la consiguiente activacin de la ICE y subsiguiente
fragmentacin del ADN.

Las vesculas del CTL pueden contener TNF-a y TNF-b

(=linfotoxina), que junto con el IFN-g producido por TC o por otras
clulas, desencadena efectos citotxicos que tardan ms tiempo (>3-
4 horas) que los anteriores. Se desconoce el mecanismo, pero parece
que igualmente inducen apoptosis.

Cmo se protege el CTL de sus propios mecanismos matadores? Por

lo pronto, el condroitn sulfato (proteoglucano) del CTL se puede unir
a la perforina, inactivndola. Pero puede que haya otros mecanismos:
por ejemplo, la hiptesis de Peters dice que la perforina sale del
granulosoma dentro de pequeas vesculas igualmente membranosas;
la membrana de estas sub-vesculas contendran complejos TCR-CD3-
CD8, que encaminaran a las pequeas vesculas hacia la clula diana,
pero no al CTL.

13.4.2 Citotoxicidad directa inespecfica mediada por

clulas NK
Recordemos que las clulas NK son un tipo de linfocitos granulares
grandes (de hecho NK es casi sinnimo de LGL), que suponen un 5%
de las clulas linfoides en sangre, y que carecen de los marcadores de
linfocitos T y B. Se consideran como linfocitos "inespecficos",
pertenecientes al sistema de inmunidad natural.

El mecanismo citotxico de las clulas NK es parecido al de los

linfocitos citolticos (CTL), pero a diferencia de ellos, carecen de
especificidad y de memoria, y no estn restringidos por el MHC
clsico.

Poseen un papel importante en los primeros das de una infeccin

virsica, al eliminar clulas en las que el virus se est multiplicando.
Constituyen pues un mecanismo efector celular temprano, antes de
que lleguen los linfocitos TC, y especialmente preparado frente a
ciertos virus que usan la estrategia de inducir un descenso del nivel
de MHC-I

Recientemente se ha propuesto un modelo de dos receptores para

explicar cmo reconocen estas clulas inespecficas a las clulas
infectadas por virus o tumorales. Se piensa que las NK reciben
seales de dos receptores de modo que distinguen entre clulas sanas
y enfermas.

Segn este modelo, el receptor NKR-P1 se une a oligosacridos de

glucoprotenas de superficie de la clula enferma, procedentes de
glucosilaciones anmalas. En principio, esta seal le indica a la NK
que debe prepararse para matar a la clula con la que ha contactado,
pero para ello debe de ocurrir simultneamente una ausencia de
seal procedente de otro receptor, el Ly-49.

El receptor Ly-49 de la clula NK se une a ciertos alelos de molculas

MHC-I. Cuando una clula NK se encuentra ante una clula normal,
aunque reciba la seal de NKR-P1, no la mata, ya que la interaccin
entre Ly-49 y las MHC-I enva una seal a la NK para que detenga su
mecanismo matador. En cambio, muchas clulas enfermas (por virus
o tumorales) presentan un bajo nivel de MHC-I, por lo que el
mecanismo dependiente de NKR-P1 no se ve frenado.

La actividad matadora de NK se activa por IFN-a e IFN-b (liberado por

muchas clulas enfermas al inicio de la infeccin), y por IL-12
(producido por macrfagos). A su vez, la IL-12 y el TNF-a (tambin
del macrfago) provocan que la NK secrete grandes cantidades de
IFN-g , con lo que se mantienen a raya ciertos patgenos
intracelulares hasta que se activen las clulas T. Como se ve, un
nuevo rasgo que parece indicarnos de nuevo el carcter de lnea
defensiva temprana que intepretan estas clulas. De hecho, rara vez
las clulas NK eliminan efectivamente el virus, pero lo mantienen a
raya hasta que llegan las clulas TC.

13.4.3 Citotoxicidad celular dependiente de

anticuerpos (ADCC)
Existen varios tipos de clulas potencialmente citotxicas que poseen
receptores para Fc de anticuerpos, y que pueden por lo tanto
participar en la destruccin de clulas diana (enfermas) o de
helmintos recubiertos en ambos casos por anticuerpos. Los
acontecimientos suelen tener lugar en las siguientes fases:

1. formacin de inmunocomplejos (es decir, la clula enferma o el

helminto se recubre de anticuerpos);
2. una clula agresora adecuada (p. ej., la NK) interacciona con la
clula enferma o el parsito a travs de los anticuerpos, que se
engarzan con el receptor para Fc de la clula agresora;
3. finalmente, dicha clula agresora libera por exocitosis el
contenido de sus grnulos, y/o secreta productos txicos, que
tienden a matar a la clula enferma o parsito.

De este modo, clulas que son propiamente del sistema inmune

natural, y por lo tanto son inespecficas, pueden llegar a destruir
especficamente mediante el puente de anticuerpos. De hecho, actan
como clulas efectoras finales del sistema humoral especfico (es
decir, pueden llegar a ser los "brazos armados" o "verdugos" en una
respuesta que se inici con la secrecin de anticuerpos).

Las clulas NK, monocitos y PMN neutrfilos poseen el receptor Fcg RIII
(=CD16), de baja afinidad, que reconoce las subclases IgG1 e IgG3.
Los eosinfilos posen Fc R-I y Fc R-II, estando especializados en destruir helmintos
(p. ej., las esquistosmulas, que son las larvas de Schistosoma).
13.5 RESPUESTA DE
HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO
RETARDADO
La hipersensibilidad de tipo retardado (DTH) es una reaccin
inflamatoria localizada que se induce por citoquinas secretadas por
ciertas subpoblaciones de linfocitos TH (concretamente, de TH1)
activados previamente por contacto con ciertos tipos de antgenos, y
que se caracteriza por el reclutamiento al foco infeccioso de grandes
cantidades de clulas inflamatorias, sobre todo de macrfagos.
Se llama retardada porque, al contrario que la inmediata, tarda 2 o 3 das en manifestarse.

La palabra hipersensibilidad alude en principio a efectos negativos sobre el propio hospedador, pero en
muchos casos el efecto consiste en pequeos daos tisulares, siendo en general la respuesta beneficiosa,
puesto que va encaminada a destruir a ciertos patgenos intracelulares.

13.5.1 Fases de la hipersensibilidad de tipo retardado

En la respuesta hipersensible de tipo retardado podemos distinguir
una fase inicial de sensibilizacin en la que se produce el contacto
inicial con el estmulo antignico, y que no presenta sntomas, y una
fase efectora, dependiente de un contacto secundario con el antgeno,
en la que se manifiestan tales sntomas y que es la tendente a
eliminar al patgeno.

13.5.1.1 Sensibilizacin

La fase de sensibilizacin dura de una a dos semanas, tiempo durante

el cual los linfocitos TH se activan y expanden clonalmente tras el
reconocimiento del antgeno presentado por clulas presentadoras
(APCs). Dichas clulas presentadoras pueden ser:

clulas de Langerhans de la piel, que transportan el antgeno desde la

epidermis hasta los ganglios linfticos regionales, donde lo muestran a los
linfocitos TH;
macrfagos;
(en humanos y otras especies) clulas del endotelio vascular.

Al final de esta fase se tiene pues una poblacin expandida de

linfocitos T CD4+ de memoria, que recirculan constantemente.

13.5.1.2 Fase efectora

Esta fase ocurre en tejido extralinfoide, y es la reaccin de
hipersensibilidad en sentido estricto, detectndose sus sntomas a las
24 horas del contacto secundario con el antgeno que provoc la
sensibilizacin inicial, pero alcanza su apogeo a las 48-72 horas. En
esta fase sale fibringeno al tejido, y se convierte en fibrina, que
junto con la acumulacin de linfocitos T y de macrfagos hace que el
tejido se hinche y se vuelva duro (esto es la base de los sntomas de
induracin y edema) La podemos subdividir en tres etapas:
desencadenamiento, inflamacin y resolucin.

En el desencadenamiento el linfocito T activado (que ahora

denominaremos como TDTH), ante el contacto secundario con el antgeno
presentado por una APC, secreta ciertas citoquinas, cuyas acciones dan paso
a la reaccin de inflamacin.
La inflamacin se produce cuando las citoquinas secretadas reclutan y
activan a macrfagos y otras clulas inflamatorias hacia el sitio de infeccin,
ponindose en marcha una compleja serie de interacciones entre clulas
inespecficas del sistema inmunitario y citoquinas, con amplificacin de la
respuesta. Todo ello va encaminado a destruir al agente patgeno
intracelular.
La resolucin se produce porque los macrfagos activados aumentan su
capacidad de eliminacin del patgeno. Estos macrfagos son la principal
clula efectora de la hipersensibilidad retardada, pudiendo representar el
90% de la poblacin celular infiltrada.

Como se ve, esta respuesta tiene un claro valor adaptativo en la

eliminacin de ciertos parsitos intracelulares, pero cuando el
estmulo es demasiado persistente, la DTH se vuelve destructiva para
el hospedador. Este aspecto inmunopatolgico se manifiesta en la
llamada reaccin granulomatosa: los macrfagos, con los parsitos
sin eliminar en su interior, se adhieren unos a otros, adquiriendo
morfologas epitelioides; posteriormente estas clulas epitelioides se
pueden fusionar entre s, generando clulas gigantes multinucleadas,
que pueden llegar a desplazar al tejido normal, con lo que se
forman ndulos o tubrculos, que pueden conducir a necrosis del
tejido.

13.5.2 Interaccin entre citoquinas y clulas en la

DTH
En este epgrafe vamos a ampliar el aspecto molecular y celular de la
respuesta de hipersensibilidad retardada, resaltando cmo las
distintas citoquinas actan sobre distintos tipos celulares,
responsables de diversos aspectos de esta respuesta.
 La IL-2 del linfocito TDTH funciona de modo autocrino, permitiendo la
expansin clonal, con lo que aumenta el nmero de estas clulas, que
siguen produciendo ms citoquinas. Conforme avanza la respuesta, la IL-2
tambin ejerce un efecto paracrino, estimulando a otros clones de linfocitos
TDTH.
La IL-3 y el GM-CSF inducen hematopoyesis del linaje granulocito-
monoctico en la mdula sea. Obviamente ello acarrea que mayores
cantidades de PMN y macrfagos puedan pasar al foco de infeccin.
El IFN-g el TNF-b de las clulas T, as como el TNF-a y la IL-1 de los
macrfagos actan sobre las clulas endotelilales vasculares cercanas al foco
de infeccin, con los siguientes efectos:

aumento de la expresin de molculas de adhesin (ICAM, ELAM,

VCAM);

cambios de forma, tendentes a que las clulas endoteliales se separen

entre s, dejando paso para la extravasacin de leucocitos;

las clulas endoteliales estimuladas secretan IL-8 y otros factores

quimiotcticos que atraen a monocitos circulantes (quimiocinas).

Las consecuencias son que los PMN neutrfilos (primeros leucocitos en

llegar) y los monocitos circulantes se adhieren a las clulas
endoteliales de las vnulas postcapilares, pasan por diapdesis y
entran al tejido infectado. La entrada de los monocitos lleva consigo
su diferenciacin a macrfagos.

Los macrfagos son atrados y activados en el foco de infeccin debido a la

accin de IFN-g y del factor quimiotctico y activador de los monocitos
(MCAF). Otro factor secretado por TDTH, llamado MIF (inhibidor de la
migracin de macrfagos) evita que el macrfago "pase de largo" el foco
infectivo, afinando su quimiotaxis.
Por lo tanto, los macrfagos van llegando en grandes cantidades al foco
infeccioso, y se van activando (sobre todo por el interfern inmune),
experimentando importantes cambios:

aumentan su tamao

aumentan sus niveles de enzimas lticos en sus grnulos

aumentan su capacidad fagoctica (por opsonizacin con IgG2a -en el

ratn-)

incrementan su efectividad matadora de microorganismos

intracelulares
funcionan mejor como clulas presentadoras de antgeno, debido a
que es mayor el nmero de molculas MHC de clase II en su
membrana, porque secretan mayor cantidad de IL-1 y porque
expresan ms molculas de adhesin como la B7 (coestimulatoria),
ICAM-1 y LFA-3.

El que los macrfagos acten mejor ahora como APC supone que activan a
ms linfocitos TDTH, con lo cual se cierra el ciclo, pero amplificado.

Este tipo de respuesta que se retroalimenta positivamente puede llegar a convertirse en un "arma de doble
filo", ya que puede degenerar en una respuesta negativa para el hospedador, una vez que se traspasa un
umbral. Sin embargo, su valor positivo se ponde de manifiesto en experimentos con ratones transgnicos
noqueados (K.O.) que tienen inactivado el gen del IFN- : son incapaces de matar a Mycobacterium bovis,
una bacteria contra la que los ratones normales se defienden perfectamente.

13.5.3 Efectos de la hipersensibilidad retardada

El efecto positivo de la DTH es que tiende a eliminar ciertos patgenos intracelulares y
antgenos de contacto:

bacterias intracelulares como Mycobacterium tuberculosis, M. leprae, Listeria

monocitogenes, Brucella abortus.
Hongos intracelulares como Candida, Pneumocystis carinii, Histoplasma,
Cryptococcus.
Protozoos como Leishmania.
Larvas de helmintos, como las de Schistosoma.
Virus.

La DTH desempea un papel importante en la defensa contra estos

agentes, ya que el macrfago activado destruye mejor al patgeno, y
el contenido de sus grnulos, vertido a exterior, destruye clulas
propias infectadas (en este ltimo papel es importante la accin del
TNF-b ). Obviamente, se produce cierto dao tisular, pero ste suele
estar autolimitado y puede ser reparado ulteriormente.
El papel positivo de la DTH se puede comprobar "por contraste" considerando aquellas enfermedades en
las que precisamente este mecanismo est alterado: por ejemplo, en el SIDA, en el que existen bajos
niveles de linfocitos T CD4+: ello acarrea que se pierda la facultad de montar una respuesta de
hipersensibilidad retardada, por lo que los individuos afectados estn sometidos a frecuentes y
amenazadoras infecciones por Candida, Pneumocystis, Cryptococcus, o por bacterias patgenas e incluso
oportunistas que no suelen causar tanta mortalidad en la poblacin sana. De hecho, una de las maneras de
seguir el curso del SIDA es evaluar peridicamente en laboratorio la capacidad de respuesta DTH con
clulas de los pacientes.

Sin embargo, en ciertos casos la propia respuesta defensiva degenera

en patolgica: tal ocurre en la tuberculosis, en la que se pueden llegar
a formar ndulos (tubrculos) en muchos tejidos (tpicamente en los
 pulmones), que pueden terminar necrosndose (cavernas caseosas en
pulmn).
En una situacin de infeccin crnica por parsito intracelular (como en la tuberculosis) las citoquinas producidas
en la DTH estimulan la proliferacin de fibroblastos y la produccin de colgeno, potencindose los efectos por la
accin de PDGF (factor de crecimiento derivado de plaquetas) y de TGF- del macrfago activado. Posteriormente
emigran y proliferan clulas endoteliales (angiognesis, es decir, formacin de nuevos vasos sanguneos). Se
produce pues la sustitucin del tejido normal por tejido fibroso (cicatrizacin) y formacin de granuloma