26/11/2017 Doping Prevention: Mtodos analticos

Todas las muestras son solo analizadas por los laboratorios acreditados de WADA (solamente hay 33 laboratorios
por todo el mundo). Los laboratorios acreditados de WADA obligatoriamente tienen que utilizar el Cdigo Mundial
Antidopaje, un Estndar Internacional para los Laboratorios. Constituye un Estndar Internacional obligatorio del
nivel 2 desarrollado como parte del Programa Mundial Antidopaje. El equipamiento es estipulado como sigue:

Cromatografa de gases (GC) con espectrometra de masa (MS) y espectrometra de masa tndem (MS/MS)

para detectar estimulantes, narcticos, diurticos, esteroides, beta-bloqueantes, etc.

Se utiliza una cromatografa de gases para separar compuestos voltiles. Los compuestos separados se dirigen a
la fuente de iones (en lnea) de un espectrmetro de masa (detector), que consiste en un filamento metlico con
alto voltaje. Se ionizan los compuestos y el cociente de su masa-carga es proporcional a los iones intactos
detectados (MS). Usando un espectrmetro de masa tndem los compuestos se pueden hacer fragmentos, dando
patrones previsibles. Estos patrones pueden ser usados para incrementar la identificacin de compuestos (ion-
precursor) usando MS/MS.

Cromatografa lquida (LC) con deteccin UV/VIS o espectrometra de masa (MS) y espectrometra de masa
tndem (MS/MS)

para detectar glucocorticoides, estimulantes, narcticos, diurticos, etc.

La cromatografa lquida separa cromatogrficamente compuestos solubles antes de que se analicen en el

detector. Esto es debido a su absorbancia (detector de UV/VIS) o al cociente de su masa-carga (espectrmetro de
masa). El mtodo se diferencia del GC/MS en que la fase mvil es lquida, generalmente una combinacin de agua
y de solventes orgnicos, en vez del gas.

Cromatografa de gases con combustin y espectrometra de masa de relacin isotpica (GC/C/IRMS)

para distinguir los esteroides endgenos y exgenos.

La espectrometra de masa de relacin isotpica (IRMS) es una especializacin de la espectrometra de masa, en

la cual los mtodos espectromtricos de masa se utilizan para medir la abundancia relativa de istopos en una
muestra dada. El espectrmetro de relacin isotpica permite una medida exacta de las mezclas de istopos
estables. Es mucho ms exacto que un espectrmetro convencional porque las medidas se repiten muchas veces.
Las entradas duales del instrumento permiten una repeticin fiable de medidas, suministrando una corriente
continua de la referencia y de la muestra de gases que son cambiados secuencialmente por una vlvula de
cambio. Un tipo del colector de IRMS tambin ofrece un arsenal de tazas de Faraday (conductoras, recipientes
del metal que neutralizan los iones mientras que ellos mismos se cargan golpendose), el multicolector permite la
deteccin simultnea de istopos mltiples. Las muestras se deben introducir en la fase de gas alcanzada a travs
de la combustin, de las alimentaciones de cromatografa gaseosa o de la interceptacin qumica. Comparando los
cocientes isotpicos detectados de un estndar medido se obtiene una determinacin exacta de la identificacin
isotpica de la muestra. Por ejemplo, los cocientes del istopo de carbono se miden con respecto al estndar
internacional para el CO2, siendo el fsil belemnite (encontrado en la formacin de PeeDee, una piedra caliza
formada en el perodo Cretcico en Carolina del Sur, los EEUU) con un cociente 13C: 12C de 0.0112372. Debido a
que la diferencia entre la referencia y las muestras es a menudo muy pequea, los cocientes del istopo de
carbono se expresan como partes por mil con respecto al estndar.

Concentracin isoelctrica, Immunoblotting y deteccin de quimioluminescencia

para el anlisis de la eritropoyetina (EPO).

La concentracin isoelctrica (IEF) discurre en un gradiente de pH y se puede utilizar solamente para las
sustancias anfteras tales como pptidos y protenas. Las molculas se mueven hacia el nodo o el ctodo hasta
que alcanzan una posicin en el gradiente de pH donde sus cargas netas son cero. Este valor de pH se define
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como el punto isoelctrico (pI) de la sustancia. Siendo este valor cero, el campo elctrico no tiene ninguna
influencia. El Blotting es la transferencia de molculas grandes a la superficie de una membrana de inmovilizacin.
Este mtodo incrementa las posibilidades de la deteccin para las fracciones electroforticas separadas porque las
molculas absorbentes en la superficie de la membrana estn disponibles libremente para los ligandos
macromoleculares, por ejemplo antgenos y anticuerpos. La unin especfica de anticuerpos se utiliza para explorar
las zonas individuales de la protena y la seal se aumenta mediante la quimioluminescencia, por ejemplo,
uniendo a la biotina-streptavidina peroxidasa un marcador colorimtrico. Para detectar las bandas, la membrana
se expone a una cmara CCD apropiada en un armario absolutamente oscuro durante un cierto periodo de tiempo.

Analizador hematolgico y citmetro

para los parmetros hematolgicos y para detectar la transfusin de sangre.

El citmetro de flujo es una tcnica para contar, examinar y clasificar las partculas microscpicas suspendidas en
una corriente lquido. Permite el anlisis multiparamtrico simultneo de las caractersticas fsicas y/o qumicas de
las clulas que atraviesan un aparato ptico y/o electrnico de deteccin. Los citmetros de flujo modernos pueden
analizar varios miles de partculas cada segundo en tiempo real y pueden separar y aislar activamente las
partculas con caractersticas especficas. Un citmetro del flujo es similar a un microscopio, salvo que en vez de
producir una imagen de la clula, la citrometra de flujo ofrece una cuantificacin automatizada de procesamiento
de alto-rendimiento (para una gran cantidad de clulas) segn un sistema de parmetros.

Anlisis inmunoluminomtrico

para distinguir la hormona de crecimiento recombinante y la de la pituitaria (hGH).

Se utiliza un exceso de dos anticuerpos monoclonales antgeno-especficos que reconozcan el antgeno (hGH) en
diversos dominios. El primer anticuerpo se inmoviliza en la superficie interna de un tubo. En el primer ensayo la
capa de anticuerpo reconoce el hGH recombinante preferencialmente mientras que en el segundo anlisis la capa
de anticuerpo reconoce preferencialmente la hGH de la pituitaria. El anticuerpo secundario se marca con
luminescencia y se utiliza en comn para ambos ensayos. La luminiscencia es detectada usando un luminmetro
automtico.

Mtodo de anlisis fluromtrico

para detectar hormonas peptdicas.

La espectroscopa de fluorescencia, tambin llamada fluorometra o espectrofluorimetra, es un tipo de

espectroscopa electromagntica que analiza la fluorescencia de una muestra. Los electrones de una molcula son
excitados por un haz de luz que generalmente es luz ultravioleta. Esto causa la emisin de luz en una energa ms
baja, pero no necesariamente luz visible. Una tcnica complementaria es la espectroscopia de absorcin. Los
dispositivos que miden fluorescencia se llaman los fluormetros o fluormetros.

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