Pesq. Vet. Bras.

35(2):129-136, fevereiro 2015

Caracterizao histolgica e imuno-histoqumica das leses

de tuberculose em bovinos e de linfadenite granulomatosa
em sunos1
Daniele Andreazza2, Gisele S. Boos2, Fabiana M. Boabaid2, Angelica T.B. Wouters3*,
Flademir Wouters3, Suyene O. Souza2, Mariana B. Menegat2 e David Driemeier2

ABSTRACT.- Andreazza D., Boos G.S., Boabaid F.M., Wouters A.T.B., Wouters F., Souza S.O.,
Menegat M.B. & Driemeier D. 2015. [Histological and immunohistochemical charac-
terization of tuberculosis lesions in cattle and of granulomatous lymphadenitis
in swine.] Caracterizao histolgica e imuno-histoqumica das leses de tuberculose
em bovinos e de linfadenite granulomatosa em sunos. Pesquisa Veterinria Brasileira
35(2):129-136. Setor de Patologia Veterinria, Faculdade de Veterinria, Universidade Fe-
deral do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonalves 9090, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil.
E-mail: angelica.wouters@dmv.ufla.br
Mycobacterium sp. induces granulomatous inflammation in different animal species. My-
cobacterium bovis and the Mycobacterium avium complex are important cattle and swine
pathogens that can also infect humans, especially those immunosuppressed. Losses in pro-
duction, commercial barriers and carcasses condemnations in slaughtering are related to
this infection, which implies in large economic losses. It was carried out a study on bovine
tuberculosis lesions and granulomatous lymphadenitis in pigs, diagnosed by the Setor de Pa-
tologia Veterinria from the Universidade Federal do Rio Grande do Sul (SPV-UFRGS), Brazil,
between January 2007 and December 2011. Data concerning breed, sex, age and clinical his-
tory were retrieved from the files and analyzed. Histological features of the lesions in lymph
nodes and lungs were evaluated in Hematoxylin-Eosin staining. Multinucleated giant cells
were predominant in bovine tuberculosis lesions and epithelioid macrophages were abun-
dant in swine. Ziehl-Neelsen and Massons trichrome techniques were used respectively to
demonstrate the alcohol-acid resistant bacillus and fibrous connective tissue in the lesions.
The immunohistochemistry technique was performed to characterize the lymphocytic infil-
trate. Anti-CD3 antibodies were utilized to immunolabeling lymphocytes T; and anti-CD79-
cy to lymphocytes B. Lymphocytes T were predominant in both species lesions; confirmed
statistically by paired t test, which showed significantly differ means of T and B lymphocytes,
with t=5,501 (p<0.001) for the bovines tuberculosis lesions, and t=5.826 (p<0.001), for the
cases of pigs lymphadenitis. In addition, macrophages were immunolabeled by antibody an-
ti-CD68 to bovine, and lysozyme to swine; and polyclonal anti-Mycobacterium tuberculosis
antibody were used successfully to detect Mycobacterium sp. in bovine and swine lesions,
apart from in the swine samples there was also anti-Mycobacterium avium immunolabelling.
INDEX TERMS: Mycobacterium spp., infectious diseases, cattle, swine, immunohistochemistry.

1
Recebido em 24 de julho de 2014. RESUMO.- Mycobacterium sp. induz inflamao granuloma-
Aceito para publicao em 13 de fevereiro de 2015. tosa em diferentes espcies animais. Mycobacterium bovis
2
Setor de Patologia Veterinria, Departamento de Patologia Clnica Ve- e o complexo Mycobacterium avium so importantes pat-
terinria, Faculdade de Veterinria, Universidade Federal do Rio Grande genos de bovinos e sunos e podem causar infeco em hu-
do Sul (UFRGS), Av. Bento Gonalves 9090, Porto Alegre, RS 91540-000,
manos, principalmente imunossuprimidos. Perdas na pro-
Brasil.
3
Departamento de Medicina Veterinria, Universidade Federal de La-
duo, barreiras comerciais e prejuzos por condenao de
vras (UFLA), Cx. Postal 3037, Lavras, MG 37200-000, Brasil. *Autor para carcaas em abatedouro/frigorfico esto atrelados ocor-
correspondncia: angelica.wouters@dmv.ufla.br rncia dessas infeces, com prejuzos econmicos signifi-

129
130 Daniele Andreazza et al.
cativos. Foi realizado um estudo de casos diagnosticados
como tuberculose em bovinos e linfadenite granulomatosa
em sunos no Setor de Patologia Veterinria da Universida-
de Federal do Rio Grande do Sul (SPV-UFRGS) no perodo
de janeiro de 2007 a dezembro de 2011. Dados referentes
raa, ao sexo, idade e ao histrico clnico foram compi-
lados dos livros de registro e analisados. As caractersticas
histolgicas das leses em linfonodos e pulmes foram ava-
liadas em Hematoxilina-Eosina, com predomnio de clulas
gigantes nas leses de tuberculose bovina e de macrfagos
epitelioides em sunos. As tcnicas histoqumicas de Ziehl-
-Neelsen e Tricrmico de Masson foram utilizadas para evi-
denciar, respectivamente, bacilos lcool-cido resistentes e
tecido conjuntivo fibroso nas leses. A tcnica de imuno-
-histoqumica foi utilizada em aproximadamente 30% dos
casos estudados de cada espcie, selecionados aleatoria-
mente, para a caracterizao do infiltrado linfoctico. Fo-
ram utilizados os anticorpos anti-CD3 para a marcao de
linfcitos T e anti-CD79cy para a marcao de linfcitos B.
Linfcitos T predominaram nas leses em ambas as esp-
cies, com diferena estatisticamente significativa entre as
mdias dos linfcitos T e linfcitos B. Foi usado o teste t
pareado, com t=5,501 (p<0,001) nas leses dos bovinos e
t=5,826 (p<0,001) para as leses de linfadenite dos sunos.
Adicionalmente foram marcados macrfagos com o uso
do anticorpo anti-CD68 para bovinos e anti-Lisozima para
sunos. Alm desses, o anticorpo policlonal anti-Mycobacte-
rium tuberculosis foi utilizado para a deteco de bactrias
do gnero Mycobacterium, com imunomarcao positiva
em todos os casos e, nos casos dos sunos, houve marcao
anti-Mycobacterium avium.
TERMOS DE INDEXAO: Mycobacterium spp., doenas infeccio-
sas, bovinos, sunos, imuno-histoqumica.
INTRODUO
A tuberculose uma doena infectocontagiosa, crnica,
causada por bactrias lcool-cido-resistentes (BAAR)
do gnero Mycobacterium (Cousins et al. 2004). Ocorre
mundialmente e provoca grande impacto na produo ani-
mal, principalmente em bovinos leiteiros (Radostits et al.
2007). Em sunos podem no ocorrer perdas econmicas
relacionadas a doena clnica, porm vsceras com leses
tuberculoides so descartadas e carcaas inteiras podem
ser condenadas ou requerer tratamento trmico antes de
liberadas para o consumo humano (Mors et al. 2007, Hi-
biya et al. 2008).
Mycobacterium bovis o agente da tuberculose em bo-
vinos, mas pode afetar tambm outras espcies de animais
vertebrados, domsticos e silvestres, bem como humanos
(Cousins et al. 2004, McAdam & Sharpe 2010). A tuberculo-
se uma zoonose importante, principalmente para pessoas
imunologicamente debilitadas e, especialmente, em pases
em desenvolvimento (McAdam & Sharpe 2010, Thakur et
al. 2011). Mycobacterium bovis apontado como respons-
vel por 5 a 10% dos casos de tuberculose humana (Rados-
tits et al. 2007, Schiller et al. 2011).
A infeco dos bovinos ocorre principalmente por via
aergena (Nugent 2011) com instalao do agente em vias
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areas, em macrfagos alveolares e de linfonodos relaciona-
dos (Caswell & Williams 2007, Beytut 2011, Velzquez, Cor-
ts & Pabello 2011). A tuberculose bovina caracterizada
pela formao de granulomas, conhecidos como tubrculos
(Cousins et al. 2004), caracterizados por leses circunscri-
tas, muitas vezes encapsuladas, de 0,1 a 4,0 cm de dimetro,
amarelo-plidas ou brancacentas e frequente aspecto case-
oso e/ou mineralizado, embora leses extensas possam con-
ter exsudato pastoso ou liquefeito. As leses podem ocorrer
nos pulmes e so frequentes nos linfonodos relacionados ao
sistema respiratrio, principalmente retrofarngeos, bron-
quiais e mediastnicos. Em algumas circunstncias, ocor-
rem inmeros focos disseminados a partir da liberao de
BAAR na circulao sangunea, caracterizando tuberculose
miliar (Caswell & Williams 2007). A infeco tambm pode
ocorrer por ingesto do agente em pastagens e uso de be-
bedouros e cochos coletivos contaminados por animais in-
fectados. Nesses casos as leses ocorrem mais comumen-
te em intestino e linfonodos relacionados, principalmente
mesentricos. Os sinais clnicos da doena e a distribuio
das leses dependem do modo de transmisso (Caswell &
Williams 2007, Radostits et al. 2007). As micobacterioses,
diferentes da tuberculose, so associadas a micobactrias
no tuberculosas ou atpicas, pertencentes ao Complexo
Mycobacterium avium (MAC) (Cousins et al. 2004). O MAC
composto por patgenos oportunistas (Hibiya et al. 2010),
presentes em elevado nmero de espcies animais e em
humanos (Ingen et al. 2010). Nestes, a infeco por essas
bactrias atpicas ocorre principalmente em indivduos
imunodeprimidos; M. avium subsp. avium causa de infec-
o especialmente em pacientes infectados pelo vrus da
imunodeficincia humana (HIV) (McAdam & Sharpe 2010).
Devido caracterstica zoontica, as micobacterioses tm
sido consideradas como problema veterinrio e scio-eco-
nmico (Stepanova et al. 2011).
Nos animais domsticos, as micobacterioses tm maior
importncia em sunos, nos quais so mundialmente rela-
cionadas ao MAC. Trabalhos mostram frequncia elevada
de isolamento de M. avium em tecidos de sunos abatidos
(Hibiya et al. 2010, Ingen et al. 2010). No Brasil o MAC
considerado o mais importante grupo de bactrias envol-
vido em infeces desse tipo em sunos. Num estudo para
verificao dos agentes encontrados em linfonodos sunos,
M. avium foi o mais frequente (Lara et al. 2011). Em outro
estudo foram isoladas micobactrias do MAC em 28,42%
das amostras colhidas de 394 sunos abatidos com leses
granulomatosas (Mors et al. 2007).
O trato gastrintestinal a rota preferencial para a infec-
o por MAC em sunos (Hibiya et al. 2008). Aps a ingesto,
o microrganismo invade a mucosa do sistema digestrio e
atinge linfonodos regionais, principalmente ceflicos e me-
sentricos. Nos linfonodos os bacilos so fagocitados por
macrfagos e induzem leses (Sobestiansky & Barcellos
2007). Mors et al. (2007) encontraram leses em linfono-
dos da cadeia alimentar em 95,2% das carcaas analisadas.
Essas leses se caracterizam como granulomas em linfono-
dos aumentados de volume, com ndulos pequenos at le-
ses de dimenses variveis, branco-amareladas, caseosas,
s vezes mineralizadas (Matlova et al. 2005, Thoen 2006).
 Caracterizao histolgica e imuno-histoqumica das leses de tuberculose em bovinos e de linfadenite granulomatosa em sunos 131

No entanto, pode ocorrer infeco sistmica, com leses em
rgos como fgado, pulmes e bao (Iwakiri et al. 2001,
Matlova et al. 2005, Hibiya et al. 2008, Ingen et al. 2010).
A resposta infeco por micobactrias varia muito
entre espcies animais, com variao menor entre indiv-
duos de uma mesma espcie (Cousins et al. 2004). O obje-
tivo deste trabalho diferenciar histologicamente as leses
causadas por micobactrias em bovinos e sunos e carac-
terizar seu infiltrado inflamatrio, com auxlio de tcnicas
histoqumicas e da imuno-histoqumica (IHQ).
MATERIAL E MTODOS
Foram avaliados casos diagnosticados como tuberculose em bo-
vinos e como linfadenite granulomatosa em sunos da rotina de
diagnstico (necropsias e histopatologia) do Setor de Patologia
Veterinria da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (SPV-
-UFRGS), no perodo de janeiro de 2007 a dezembro de 2011. Da-
dos referentes a raa, sexo, idade, histrico clnico e achados ma-
croscpicos foram compilados dos livros de registro. Os cortes de
linfonodo e pulmo corados com Hematoxilina-Eosina (HE) foram
avaliados e realizadas as tcnicas histoqumicas de Ziehl-Neelsen
(ZN) para a identificao de BAAR nas leses em linfonodos e/ou
pulmes e de Tricrmico de Masson (TM) para evidenciao de
tecido conjuntivo fibroso (TCF).
A tcnica de IHQ foi utilizada em 15/60 (25%) casos dos bovi-
nos e em 15/57 (26,31%) dos casos de sunos, selecionados ale-
atoriamente, para a caracterizao do infiltrado inflamatrio lin-
foctico nas leses. Para a marcao de linfcitos T foi utilizado o
anticorpo anti-CD3 e, para a marcao de linfcitos B, o anticorpo
anti-CD79cy. Para a marcao de macrfagos foi usado o anticor-
po anti-CD68 nos casos de bovinos e anti-Lisozima para os sunos.
Para a marcao de bactrias do gnero Mycobacterium foram
empregados os anticorpos anti-Mycobacterium tuberculosis e anti-
-Mycobacterium avium. As especificaes dos anticorpos primrios
usados, a recuperao antignica, a diluio e a origem dos anticor-
pos so detalhadas no Quadro 1. Utilizaram-se o mtodo estrepta-
vidina ligada peroxidase e o cromgeno DAB (Dako, code K3468)
para os anticorpos anti-CD68, anti-lisozima e anti-Mycobacterium
tuberculosis; o mesmo mtodo foi utilizado para o anticorpo anti-
-Mycobacterium avium, empregando-se, no entanto, o cromgeno
AEC (Dako, code K3464); e foi usado o mtodo da estreptavidina
ligada fosfatase alcalina e o cromgeno Permanent Red (Dako,
code K0695) para os anticorpos anti-CD3 e anti-CD79cy.
O infiltrado linfoctico foi classificado de acordo com a marca-
o para linfcitos T ou B. Foram avaliados subjetivamente cinco
campos microscpicos em cada tcnica e em cada caso, em objeti-
va de 40x e atribudos valores de 1 a 4 conforme a quantidade de
clulas com marcao positiva, sendo considerados os valores 1
(at 25% da populao linfoctica com imunomarcao positiva);
2 (25 a 50%); 3 (50 a 75%) e 4 (75 a 100%) e calculada a mdia
dos cinco campos para cada caso. Esses valores foram submetidos
anlise estatstica pelo Teste t pareado.
RESULTADOS
Sessenta casos de tuberculose em bovinos e 57 casos de
linfadenite granulomatosa em sunos diagnosticados no
perodo janeiro de 2007 a dezembro de 2011 foram ava-
liados. Quanto ao sexo dos bovinos, 45/60 eram fmeas, 12
machos e, em trs casos, o sexo no foi informado. A raa,
informada em 41/60 casos, variou entre Holandesa (35),
zebuna (2), Jersey (1) e mista (3). Com relao origem
das amostras, 32/60 casos provinham de propriedades
rurais particulares e 27 casos de abatedouro/frigorfico
e, em um caso, a origem no foi identificada. A idade dos
bovinos variou de trs a 20 anos. Dos rgos acometidos,
40/60 animais apresentaram leso apenas em linfonodo,
oito apenas em pulmo e 12 em ambos.
Os achados histolgicos nas amostras de bovinos se ca-
racterizaram por leses multifocais a coalescentes at ex-
tensas reas de necrose caseosa, compostas por material
eosinoflico homogneo, ncleos e restos nucleares (ca-
riorrexia) escassos, com graus variados de mineralizao
multifocal, ausente em alguns casos. Adjacente necrose
havia inflamao granulomatosa com macrfagos epitelioi-
des abundantes, clulas gigantes multinucleadas do tipo
Langhans e linfcitos escassos a abundantes (Fig.1A). Ha-
via proliferao discreta a acentuada de tecido conjuntivo
fibroso, evidenciado pela colorao de TM, circundando o
infiltrado inflamatrio ou, em alguns casos, entremeado
nele (Fig.2A). Bacilos lcool-cido resistentes foram de-

Quadro 1. Recuperao antignica, especificaes, diluies e origem dos anticorpos

primrios utilizados nas tcnicas de imuno-histoqumica para caracterizao de
leses causadas por Mycobacterium spp. em bovinos e sunos
Anticorpo Especificaes Recuperao Diluio Origem
primrio do anticorpo antignica (referncia comercial)
Anti-CD79cy Monoclonal camundongo, Tampo citrato, 1:30 Dako Cytomation
anti-humano, clone HM57 pH 6,0, 20 em Moa (Code M7051)
Anti-CD3 Policlonal coelho, Protease XIV 1:500 Dako Cytomation
anti-humano (Sigma) 15 em TAb (Code A0452)
Anti-CD68 Monoclonal camundongo, Proteinase K 1:100 Dako
anti-humano, (Dako, S3004) (Code M0718)
clone EBM11 10 em TA
Anti-Lisozima Policlonal coelho, Proteinase K 1:200 Dako Cytomation
EC 3.2.1.17 anti-humano (Dako, S3004)10 TA (Code A0099)
Anti- Policlonal coelho Protease XIV 1:200 GeneTex, Inc.
Mycobacterium (Sigma) 15 em TA (GTX20905)
tuberculosis
Anti- Monoclonal camundongo Tampo citrato, 1:100 QED Bioscience
Mycobacterium pH 6,0 20 a 96C Inc.
avium em Ppc
a
Mo = micro-ondas; b TA = temperatura ambiente; cPp = panela de presso.

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132 Daniele Andreazza et al.

Fig.1. Caracterizao de leses causadas por Mycobacterium spp. em bovinos e sunos. (A) Inflamao granulomatosa acentuada com
macrfagos epitelioides, abundantes clulas gigantes multinucleadas e focos de necrose caseosa em linfonodo bovino (B) Extensa
rea de necrose caseosa contendo mineralizao multifocal cercada por inflamao granulomatosa, circundadas por abundante teci-
do conjuntivo fibroso em linfonodo suno. HE, obj.10x.

Fig.2. Caracterizao de leses por Mycobacterium spp. em bovinos e sunos. Leso em linfonodo bovino (A) e suno (B) evidenciando,
em azul, extensa proliferao de tecido conjuntivo fibroso. Tricrmico de Masson, obj.10x.

Fig.3. Caracterizao de leses por Mycobacterium spp. em bovinos e sunos. Bacilos lcool-cido resistentes (setas) no citoplasma de
clula gigante em leso de linfonodo bovino com tuberculose. (A) Ziehl-Neelsen, obj.40x. (B) Imunomarcao anti-Mycobacterium
tuberculosis. Mtodo estreptavidina ligada peroxidase, cromgeno DAB, obj.40x.

monstrados pela colorao de ZN em todos os casos. Eram No uso da IHQ para evidenciao de linfcitos T e lin-
escassos, localizados no interior de clulas gigantes ou es- fcitos B em amostras de bovinos predominou a imuno-
tavam livres na rea de necrose (Fig.3A). marcao de linfcitos T, com diferena significativa entre

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 Caracterizao histolgica e imuno-histoqumica das leses de tuberculose em bovinos e de linfadenite granulomatosa em sunos 133

as mdias de linfcitos T e B. Na anlise estatstica, para
a qual foi usado o Teste t pareado, os resultados foram
t=5,501 (p<0.001) para as leses dos bovinos e t=5,826 (p
<0,001) para as leses dos sunos. Houve imunomarcao
anti-CD68 em todos os casos. No emprego do anticorpo
anti-Mycobacterium tuberculosis houve marcao citoplas-
mtica multifocal em macrfagos epitelioides e em clulas
gigantes tipo Langhans, confirmando a infeco por Myco-
bacterium sp. em todos os casos analisados (Fig.3B). Em
dois casos houve marcao intensa tambm em reas de
necrose.
As amostras de suno remetidas para exame anatomo-
patolgico eram provenientes de abatedouro/frigorfico e
constitudas por linfonodos mesentricos e mandibulares
de sunos machos e fmeas com idade de 170-175 dias (ex-
ceto um animal, com aproximadamente 150 dias).
As alteraes histolgicas dos sunos eram constitudas
por reas de necrose caseosa, multifocais a coalescentes,
ou extensas, com mineralizao multifocal acentuada, cir-
cundadas por inflamao granulomatosa de intensidade
variada contendo macrfagos epitelioides e escassa a mo-
derada quantidade de clulas gigantes do tipo Langhans,
eosinfilos e linfcitos (Fig.1B). Circundando e/ou entre-
meada inflamao havia proliferao de tecido conjunti-
vo fibroso, formando, em alguns casos, extensas reas de
fibrose (Fig.2B). A extenso das leses variava entre os
casos, com pequenos focos at extensas reas, em alguns
casos afetando todo o linfonodo. Na colorao histoqumica
de ZN foi evidenciada grande quantidade de BAAR, livres,
na periferia ou amplamente distribudos nas reas de ne-
crose (Fig.4A).
Na comparao das propores entre linfcitos T e B
nas leses de linfadenite granulomatosa em sunos pela
IHQ houve tambm predominncia de linfcitos T, estatis-
ticamente significativa pelo Teste t pareado (t = 5,826; p
<0,001). Os linfcitos T predominaram nas leses em todas
as amostras avaliadas (Fig. 5A e 5B), exceto em dois casos;
um apresentou marcao equivalente entre linfcitos T e B;
e outro menor marcao de linfcitos T em relao a linf-
citos B.
A imunomarcao com o anticorpo policlonal anti-
-Mycobacterium tuberculosis foi positiva em todas as amos-
tras (Fig. 3B e 4B). Houve marcao evidente em reas de
necrose e adjacentes, reas nas quais foram tambm de-

Fig.4. Caracterizao de leses por Mycobacterium spp. em bovinos e sunos. rea de necrose caseosa em linfonodo suno; (A) Bacilos
lcool-cido resistentes corados em magenta, Ziehl-Neelsen, obj.40x. (B) Imunomarcao anti-Mycobacterium tuberculosis, mtodo
estreptavidina ligada peroxidase, cromgeno DAB, obj.40x.

Fig.5. Caracterizao de leses por Mycobacterium spp. em bovinos e sunos. Imunomarcao de linfcitos T e B em leso de tuberculose em
linfonodo bovino. (A) Marcao positiva para linfcitos T (anti-CD3). (B) Marcao positiva para linfcitos B (anti-CD79cy), evidencian-
do maior proporo de linfcitos T nas leses. Mtodo da estreptavidina ligada fosfatase alcalina, cromgeno Permanent Red, obj.40x.

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134 Daniele Andreazza et al.
Fig.6. Demonstrao grfica do infiltrado linfoctico nas leses de
tuberculose em bovinos, de acordo com a marcao positiva
para linfcitos T e B. Foram considerados os valores 1 (at
25% da populao linfoctica com imunomarcao positiva);
2 (25-50%); 3 (50-75%) e 4 (75-100%) e calculada a mdia
dos cinco campos para cada caso, submetidos avaliao es-
tatstica (teste t pareado).
Fig.7. Demonstrao grfica do infiltrado linfoctico nas leses de
linfadenite granulomatosa em sunos, de acordo com a marca-
o positiva para linfcitos T e B. Foram considerados os valo-
res 1 (at 25% da populao linfoctica com imunomarcao
positiva); 2 (25-50%); 3 (50-75%) e 4 (75-100%) e calculada
a mdia dos 5 campos para cada caso, submetidos avaliao
estatstica (teste t pareado).
monstrados bacilos com a colorao de ZN. O uso do an-
ticorpo anti-Lisozima marcou abundantes quantidades de
macrfagos epitelioides, clulas gigantes multinucleadas
e macrfagos nos tecidos sunos, mas outras clulas infla-
matrias, como neutrfilos, tambm mostraram marcao
positiva. Os materiais dos sunos foram submetidos IHQ
anti-Mycobacterium avium, com marcao em focos de ne-
crose e, principalmente, em sua periferia.
DISCUSSO E CONCLUSES
As alteraes histolgicas induzidas por bactrias do g-
nero Mycobacterium apresentaram semelhanas entre as
leses de bovinos e sunos, no entanto, algumas diferen-
as foram significativas. Clulas gigantes multinucleadas
do tipo Langhans foram abundantes nas leses de bovinos
enquanto que, em sunos, predominaram macrfagos epi-
telioides. Em vrias amostras dos sunos com linfadenite
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havia infiltrado de eosinfilos, no observado nos bovinos.
Hibiya et al. (2008) observaram tambm maior frequncia
de eosinfilos em infeces por MAC em sunos que em ou-
tras espcies.
Foram encontradas quantidades variadas de TCF nas
leses; escasso, entremeado inflamao, at abundante,
circundando os granulomas. Segundo Caswell & Williams
(2007), as caractersticas histolgicas e a variao nas pro-
pores dos componentes celulares das leses permitem
uma noo acerca do tempo de evoluo da doena. Cassi-
dy et al. (1999) observaram, em infeco experimental de
bovinos com M. bovis, leses pulmonares compostas por
aglomerados de macrfagos intra-alveolares, neutrfilos
necrticos, clulas gigantes multinucleadas, poucos lin-
fcitos e BAAR uma semana aps inoculao e, aps duas
semanas da infeco, havia tubrculos contendo agregados
de neutrfilos circundados por macrfagos epitelioides.
descrito que necrose central aparece cerca de trs sema-
nas aps infeco; mineralizao inicia por volta de cinco
semanas; e o TCF aumenta com o tempo, tendendo a ser
mais proeminente em indivduos e espcies mais resisten-
tes (Caswell & Williams 2007). Conforme Beytut (2011),
medida que aumentam as reas de necrose caseosa em gra-
nulomas avanados, o infiltrado linfoctico diminui e fica
restrito s margens internas da cpsula fibrosa. Hibiya et al.
(2008), na avaliao de leses granulomatosas sistmicas
em rgos de sunos abatidos, sugeriram trs estgios, con-
forme os componentes das leses. Leses iniciais, caracte-
rizadas por reao exsudativa com macrfagos epitelioides,
linfcitos, eosinfilos e clulas gigantes do tipo Langhans,
do espao a reaes proliferativas com encapsulamento,
at o aparecimento de granulomas mistos, com minerali-
zao e fibrose abundantes. No presente estudo, alteraes
referentes aos trs estgios descritos foram observadas nas
amostras dos sunos.
Houve diferena significativa na quantidade de BAAR
nas leses. Em bovinos, bacilos foram escassos nas leses,
em alguns casos localizados principalmente no citoplasma
de clulas gigantes e, em outros, livres nas reas de necrose,
ou ambos. Outros estudos indicam que leses em estgios
iniciais apresentam moderado a elevado nmero de BAAR,
localizados em macrfagos e em clulas gigantes multinu-
cleadas. Em estgios mais avanados, a localizao passa a
ser mais extracelular, em meio necrose e, raramente, no
interior de macrfagos ou clulas gigantes multinucleadas
(Palmer et al. 2007, Beytut 2011). Escassez de bacilos nas
leses mais indicativa de tuberculose por M. bovis do que
micobacteriose por M. avium (Caswell & Williams 2007).
Em dois casos de bovinos do estudo foi verificada abundan-
te quantidade de BAAR livre e no citoplasma de macrfa-
gos e de clulas gigantes multinucleadas. Houve, tambm
nestes casos, forte marcao por IHQ anti-Mycobacterium
tuberculosis; em reas de necrose, clulas gigantes e em
macrfagos.
Nas amostras dos sunos havia abundantes BAAR livres,
em reas de necrose ou circundando-as. Isto pode ser ex-
plicado pelo fato de infeces por MAC serem mais comuns
em sunos e leses por micobactrias atpicas apresenta-
rem nmero mais elevado de microrganismos do que in-
 Caracterizao histolgica e imuno-histoqumica das leses de tuberculose em bovinos e de linfadenite granulomatosa em sunos
feces por bacilos tuberculosos. A marcao IHQ com an-
ticorpo anti-Mycobacterium tuberculosis foi mais evidente
nas reas de necrose, principalmente no citoplasma de ma-
crfagos necrticos. Mors et al. (2007) tiveram achados
semelhantes em testes de IHQ em leses de sunos, utili-
zando anticorpo primrio anti-Mycobacterium avium.
A deteco de bacilos lcool-cido resistentes, tanto
pela colorao de Ziehl-Neelsen quanto pela IHQ, mostrou-
-se muito til para o diagnstico das infeces induzidas
por Mycobacterium sp., principalmente em sunos, nos
quais pode ocorrer tambm linfadenite por bactrias Gram
positivas, como na infeco por Rhodococcus equi em linfo-
nodos cervicais, com leses macro e microscpicas seme-
lhantes. Komijn et al. (2007), verificaram alta prevalncia
de infeces por R. equi em linfonodos mandibulares de
sunos abatidos com leses granulomatosas, sugerindo ser
R. equi a maior causa de diagnstico falso-positivo de in-
feces por micobactrias na inspeo de sunos abatidos.
Em recente estudo realizado no Brasil, Mycobacterium sp.
(24,1%) e R. equi (13,2%) foram os microrganismos mais
frequentemente detectados em sunos com linfadenite
(Lara et al. 2011).
A marcao IHQ anti-Mycobacterium tuberculosis se
mostrou mais intensa, quantitativa e qualitativamente, em
comparao com a colorao de ZN, tanto nas amostras de
bovinos quanto nas de sunos, sendo indicada para a detec-
o de Mycobacterium sp. em leses granulomatosas, em
ambas as espcies. No entanto, a tcnica de ZN mostrou ser
eficiente na deteco de micobactrias em todos os casos e
tem como vantagem o baixo custo.
Quanto ao infiltrado linfoctico nas leses de tubercu-
lose de bovinos, linfcitos T foram predominantes. Outros
estudos de caracterizao do perfil de linfcitos T e sua
distribuio nas leses de tuberculose bovina mostra-
ram achados semelhantes (Liebana et al. 2007, Palmer et
al. 2007). Conforme Beytut (2011), linfcitos T CD3+ so
abundantes na fase inicial de granulomas, quando no h,
ainda, necrose central. medida que o granuloma aumen-
ta, os linfcitos so deslocados para a periferia e perma-
necem nas margens internas da cpsula fibrosa; em gra-
nulomas avanados, clulas T so comumente detectadas
na zona marginal. Em leses avanadas com mineralizao
central, o nmero de linfcitos T CD3+ diminui acentuada-
mente, com acmulo na zona subcapsular, na periferia do
granuloma. Linfcitos B so tambm detectados em reas
subcapsulares de granulomas avanados.
A composio do infiltrado linfoctico em leses cau-
sadas por Mycobacterium sp. em sunos foi semelhante
dos bovinos, com predomnio de linfcitos T. A imunidade
em infeces por micobactrias essencialmente mediada
por clulas e dependente de uma complexa interao en-
tre linfcitos T e macrfagos. As caractersticas estruturais
de Mycobacterium sp. so responsveis pela induo desse
tipo de resposta imune (Caswell & Williams 2007, Liebana
et al. 2007, Velzquez et al. 2011).
O perfil do infiltrado linfoctico, com predomnio de c-
lulas T, ainda no havia sido caracterizado em infeces por
Mycobacterium sp. em sunos, para o qual a IHQ foi uma fer-
ramenta importante.
135
Agradecimentos.- equipe do Ncleo de Assessoria Estatstica NAE/UF-
TRGS pela anlise estatstica, ao CNPq e CAPES, pela concesso de Bolsas
e aos colegas do Setor de Patologia Veterinria da UFRGS pela ajuda neste
trabalho.
REFERNCIAS
Beytut E. 2011. Immunohistochemical evaluation of surfactant proteins
and lymphocyte phenotypes in the lungs of cattle with natural tubercu-
losis. Res. Vet. Sci. 91:119-124.
Cassidy J.P., Bryson D.G., Pollock J.M., Evans R.T., Forster F. & Neill S.D. 1999.
Lesions in cattle exposed to Mycobacteriumbovis-inoculated calves. J.
Comp. Pathol. 121:321-337.
Caswell J.L. & Williams K.J. 2007. Respiratory system, p.523-653. In: Maxie
M.G. (Ed.), Jubb, Kennedy and Palmers Pathology of Domestic Animals.
Vol.2. 5th ed. Elsevier, Edinburgh.
Cousins D.V., Huchzermeyer H.F.K.A., Griffin J.F.T., Brckner G.K., Van Rens-
burg I.B.J. & Kriek N.P.J. 2004. Tuberculosis, p.1973-1993. In: Coetzer
J.A.W. & Tustin R.C. (Eds), Infectious Diseases of Livestock. Vol.3. 2nd ed.
Oxford University Press, Cape Town.
Hibiya K., Kasumi Y., Sugawara I. & Fujita J. 2008. Histopathological classi-
fication of systemic Mycobacterium avium complex infections in slaugh-
tered domestic pigs. Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. 31:347-366.
Hibiya K., Kazumi Y., Nishiuchi Y., Sugawara I., Miyagi K., Oda Y., Oda E. &
Fujita J. 2010. Descriptive analysis of the prevalence and the molecular
epidemiology of Mycobacterium avium complex-infected pigs that were
slaughtered on the main island of Okinawa. Comp. Immunol. Microbiol.
Infect. Dis. 33:401-421.
Ingen J.V., Wisselink H.J., Solt-Smits C.B.V., Boeree M.J. & Soolingen D.V.
2010. Isolation of mycobacteria other than Mycobacterium avium from
porcine limph nodes. Vet. Microbiol. 144:250-253.
Iwakiri A., Toshimasu M., Xu D.L., Shinjo T. & Goto Y. 2001. Lymphopro-
liferative responses in pigs infected with Mycobacterium avium. J. Vet.
Med. Sci. 63:827-829.
Komijn R.E., Wisselink H.J., Rijsman V.M.C., Stockhofe-Zurwieden N., Bak-
ker D., Zijderveld F.G., Eger T., Wagenaar J.A., Putirulan F.F. & Urlings
B.A.P. 2007. Granulomatous lesions in lymph nodes of slaughter pigs
bacteriologically negative for Mycobacterium avium subsp. avium and
positive for Rhodococcus equi. Vet. Microbiol. 120:352-357.
Lara G.H.B., Ribeiro M.G., Leite C.Q.F., Paes A.C., Guazzelli A., Silva A.V., San-
tos A.C.B. & Listoni F.J.P. 2011. Occurrence of Mycobacterium spp. and
other pathogens in lymphnodes of slaughtered swine and wild boars
(Sus scrofa). Res. Vet. Sci. 90:185-188.
Liebana E., Marsh S., Gough J., Nunez A., Vordermeier H.M., Whelan A.,
Spencer Y., Hardley R.C., Hewinson G. & Johnson L. 2007. Distribution
and activation of T-lymphocyte subsets in tuberculous bovine lymph-
node granulomas. Vet. Pathol. 44:366-372.
Matlova L., Dvorska L., Ayele W.Y., Bartos M., Amemori T. & Pavlik I. 2005.
Distribution of Mycobacterium avium Complexes isolates in tissue sam-
ples of pigs fed peat naturally contaminated with Mycobacteria as a
supplement. J. Clin. Microbiol. 43:1261-1268.
McAdam A.J. & Sharpe A.H. 2010. Doenas infecciosas, p.331-405. In: Ku-
mar V., Abbas A.K., Fausto N., Aster J.C. (Eds), Robbins and Cotran, Bases
Patolgicas das Doenas (Traduo da 8 ed., com adaptaes referen-
tes s doenas tropicais e sua epidemiologia). 8th ed. Elsevier, Rio de
Janeiro.
Mors N., Ventura L., Dutra V., Silva V.S., Junior W.B., Oliveira S.O., Kramer
B. & Neto J.S.F. 2007. Linfadenite granulomatosa em sunos: linfonodos
afetados e diagnstico patolgico da infeco causada por agentes do
Complexo Mycobacterium avium. Pesq. Vet. Bras. 27:13-17.
Nugent G. 2011. Maintenance, spillover and spillback transmission of bo-
vine tuberculosis in multi-host complexes: a New Zealand case study.
Vet. Microbiol. 151:34-42.
Palmer M.V., Waters W.R. & Thacker T.C. 2007. Lesion development and
immunohistochemical changes in granulomas from cattle experimen-
tally infected with Mycobacterium bovis. Vet. Pathol. 44:863-874.
Radostits O.M., Gay C.C., Hinchcliff K.W. & Constable P.D. 2007. Diseases
Pesq. Vet. Bras. 35(2):129-136, fevereiro 2015
136 Daniele Andreazza et al.
associated with bacteria - IV, p.1007-1017. In: Ibid. (Eds), Veterinary
Medicine. 10th ed. Saunders Elsevier, Edinburgh.
Schiller I., Raywaters W., Vordermeier H.M., Jemmi T., Welsh M., Keck N.,
Whelan A., Gormley E., Boschiroli M.L., Moyen J.L., Vela C., Cagiola M.,
Buddle B.M., Palmer M., Thacker T. & Oesch B. 2011. Bovine tuberculosis
in Europe from the perspective of an officially tuberculosis free country:
trade, surveillance and diagnostics. Vet. Microbiol. 151:153-159.
Sobestiansky J. & Barcellos D. 2007. Doenas dos Sunos. Cnone Editorial,
Goinia, p.148-153.
Stepanova H., Pavlova B., Stromerova N., Matiasovic J., Kaevska M., Pavlik
I. & Faldyna M. 2011. Cell-mediated immune response in swine infected
Pesq. Vet. Bras. 35(2):129-136, fevereiro 2015
with Mycobacterium avium subsp. avium. Vet. Immunol Immunopathol.
142:107-112.
Thakur A., Sharma M., Katoch V.C., Dhar P. & Katoch R.C. 2011. Detection of
Mycobacterium bovis and Mycobacterium tuberculosis from cattle: Pos-
sible public health relevance. Indian J. Microbiol. 5:289-291.
Thoen C.O. 2006. Tuberculosis, p.807-816. In: Straw B.E., Zimmerman J.J.,
DAllaire S. & Taylor D.J. (Eds), Diseases of Swine. 9th ed. Blackwell Pub-
lishing, Victoria.
Velzquez U.C., Corts E.A. & Pabello J.A.G. 2011. Alternative activation
modifies macrophage resistance to Mycobacterium bovis. Vet. Microbiol.
151:51-59.