Traduccin de la pgina 4 a 6 (Artculo 5)

Los puntos finales de toxicidad evaluados incluyeron: tratamiento 1a: supervivencia,

peso y biomasa de H. azteca 10-d; tratamiento 1b: supervivencia, peso y biomasa de
H. azteca 28-d (es decir, peso total de organismos supervivientes en cada rplica);
tratamiento 2a: supervivencia de C. dilutus 20-d, AFDW, y biomasa iniciada con larvas
de <1 h de edad; tratamiento 2b: C. dilutus 48 d emergencia del adulto comenz con
larvas <1 h de edad; tratamiento 3a: supervivencia de C. dilutus 13-d, AFDW, biomasa
iniciada con larvas de 7 das de edad; tratamiento 3b: emergencia del adulto C. dilutus
48 d comenzada con larvas de 7 das de edad; y tratamiento 4: la supervivencia, el
peso y la biomasa de L. siliquoidea 28-d comenzaron con juveniles de post-
transformacin de aproximadamente 6 semanas. Los tratamientos 1 y 2 se realizaron
siguiendo los mtodos tradicionales de prueba de toxicidad crnica de sedimentos
para H. azteca o C. dilutus [1,2]. Los tratamientos 3a y 3b representan modificaciones
al mtodo crnico de prueba de toxicidad de sedimentos de C. dilutus que ha sido
utilizado por el laboratorio CERCL durante varios aos debido a la dificultad de
supervivencia del control en pruebas llevadas a cabo por el laboratorio CERC y otros
laboratorios en exposiciones iniciadas con <24-h-old C. dilutus. El tratamiento 4
representa mtodos adaptados de ASTM International [1] y USEPA [2] para pruebas
de toxicidad de sedimentos con invertebrados y adaptados de ASTM [7] para pruebas
de toxicidad de mejilln solo en agua.

Hyalella azteca se aliment con una cantidad ramificada de levadura Cerophyll Trout
Chow (YCT) suspensin (1,8 mg de slidos) una vez al da: semana 1, 1,0 ml / d;
semana 2, 1.5mL / d; semana 3, 2.0mL / d; y la semana 4, 3.0 mL / d. Chironomus
dilutus se aliment con una cantidad de rampa de una suspensin de comida de
pescado flor Tetramin (Tetra, 6.0 mg / mL de slidos secos): da de prueba 0 hoy 3,
1.0 mL dos veces al da; da de prueba 4 hasta el final de las exposiciones, 1.5 mL al
da. Se ha encontrado que una dieta de alimentos en rampa mejora el crecimiento de
H. azteca y C. dilutus y la reproduccin de H. azteca en pruebas de toxicidad en
sedimentos o agua (D.R. Mount y C.G. Ingersoll, datos no publicados). Lampsilis
siliquoidea se aliment con 2 ml de una mezcla de algas dos veces al da (concentrado
de Nannochloropsis y dieta ShellFish, Reed Mariculture, densidad de algas ~ volumen
de clulas 510nL / ml [7,9-11,17]; datos suplementarios, tabla S1). Se suministr
alimento a los organismos de prueba despus del ciclo del sistema de suministro de
agua para permitir ms tiempo para que los organismos de prueba consuman los
alimentos.

Al final de las pruebas de toxicidad de sedimentos, se aislaron organismos de prueba

de cada vaso de exposicin enjuagando el sedimento a travs de un tamiz US # 50
(abertura de 0,3 mm) y luego enjuagando los organismos de prueba y el sedimento
restante del tamiz en una bandeja de vidrio. Live H. azteca y C. dilutus en cada rplica
se contaron. La supervivencia de H.azteca en cada rplica se conserv en formalina
de azcar al 8% para las mediciones de longitud posteriores [18]. Las longitudes de H.
azteca al final de la prueba se midieron desde la base de la primera antena hasta la
punta del tercer uropodo a lo largo de la curva de la superficie dorsal utilizando un
sistema de digitalizacin con software de micrmetro de video (Image Caliper,
Resolution Technology) conectado a una computadora y un microscopio. C.dilutus
sobreviviente en cada repeticin se colocaron en un recipiente de aluminio prepesado
para la medicin de AFDW (despus de incinerar a ~ 550 C durante 2 h). La L.
siliquoidea en cada vaso de exposicin replicado se recuper y se transfiri a un vaso
de exposicin de vidrio de 50 ml que contena aproximadamente 20 ml de agua para
determinar la supervivencia (movimiento del pie en un perodo de observacin de 5
minutos) utilizando un microscopio de diseccin. La supervivencia de L. siliquoidea en
cada rplica se conserv en formalina al 8% para la posterior medicin del peso seco.
La biomasa de H. azteca superviviente de cada rplica se estim como la suma de los
pesos de los anfpodos individuales calculados a partir de la relacin emprica
[16,17,26]

() = ([0.177 ()] 0.02292)3

Se determin el peso seco de L. siliquoidea superviviente en cada rplica despus de

que los mejillones se secaron durante 24 ha 60 C. El peso seco se midi al 0.001mg
ms cercano con una microbalanza (Modelo MX5, Mettler Toledo).

Anlisis de datos

La concentracin de efecto observado ms baja (LOEC) para todos los puntos finales
se determin con el software TOXSTAT (Ver 3.5; Western EcoSystems Technology)
mediante anlisis de varianza de una va (ANOVA) con comparacin de medias hecha
con una prueba de Dunnett de una cola (o Bonferroni t -prueba cuando el nmero de
rplicas no fue el mismo para todas las concentraciones [27]). Si los datos no se
distribuyeron normalmente o no tuvieron varianzas iguales, se utiliz la prueba de un
rango de muchos de Steel o la prueba de suma de rangos de Wilcoxon con el ajuste
de Bonferroni para las determinaciones de la LOEC. El nivel de significacin
estadstica se estableci en alfa = 0.05. Las concentraciones de efecto del 20%
(EC20) se estimaron cuando corresponda por anlisis de distribucin de probabilidad
normal para datos de supervivencia y por anlisis de regresin no lineal (modelo de
ecuacin logstica) para peso seco, biomasa y datos de emergencia mediante el
Programa de anlisis de relacin de toxicidad (Ver 1.21 [28] ]). Las concentraciones de
exposicin se transformaron de forma logartmica y la respuesta de cada repeticin se
us para los clculos de EC20.

Los puntos de referencia de toxicidad de los sedimentos, que se derivaron de

concentraciones de efectos probables (PEC) basadas empricamente para metales,
HAP o PCB, se utilizaron para evaluar las relaciones entre la qumica de los
sedimentos y la toxicidad. Los PEC son pautas de calidad de sedimentos basadas en
los efectos establecidos como concentraciones de sustancias qumicas individuales
sobre las cuales se espera que ocurran efectos adversos en los sedimentos con
frecuencia en los sedimentos recolectados en el campo [29]. Se calcularon los
cocientes medios basados en PEC para proporcionar una medida global de la
contaminacin qumica y para apoyar una evaluacin de los efectos combinados de
mltiples contaminantes en los sedimentos [21]. Se calcularon los cocientes PEC
individuales (PECQ) para cada uno de 5 metales (concentraciones SEM de Cd, Cu,
Pb, Ni y Zn) y 13 PAH (acenaftaleno, acenaftileno, antraceno, benzo [a] antraceno,
benzo [a] pireno, crisene, dibenzo [a, h] antraceno, fl uoranteno, fl uoreno, 2-
metilnaftaleno, naftaleno, fenantreno y pireno) en cada muestra de sedimento al dividir
la concentracin de peso seco del producto qumico por el PEC para ese producto
qumico [29]. La contribucin de los metales o los HAP por igual en la evaluacin de la
qumica y la toxicidad de los sedimentos, se calcul un PECQ promedio para los
metales o para los HAP totales para cada muestra [21].

Los ESBTU basados en mecanismos tambin se estimaron para 34 HAP padres y

alquilados de los 16 HAP padres medidos [20]. Para ajustar los HAP alquilados no
cuantificados por anlisis para solo 16 PAH parentales, se aplic un factor de
incertidumbre del 50% al ESBTU que se calcul a partir de los datos sobre las 16
concentraciones de HAP padres [20]. El enfoque ESBTU se desarroll para explicar
el la disponibilidad biolgica de compuestos orgnicos no inicos en diferentes
sedimentos e incorpora selectivas concentraciones de efectos biolgicos en porewater
(es decir, valores crnicos finales [20]).

RESULTADOS Y DISCUSIONES

Prueba de toxicidad de Amphipod Hyalella azteca

La supervivencia del control medio al final de las exposiciones a 10-d y 28-d realizadas
con H. azteca fue => 95% en sedimentos del lago West Bearskin y en arena (Datos
complementarios, Tabla S4). El peso seco medio de control al final de las exposiciones
a 28 das fue de 0,62 mg / individuo en sedimentos del lago West Bearskin (un
aumento proporcional de 31x) y fue de 0,38 mg / individuo en arena (un aumento
proporcional de 19x). Por lo tanto, la supervivencia promedio del control de H. azteca
en las exposiciones 10 das y 28 das cumpli con los criterios de aceptabilidad de la
prueba para la supervivencia (80%) y el peso (un aumento en el peso durante las
exposiciones [1,2]; Datos complementarios, Tabla S4 ) Sin embargo, el peso seco de
H. azteca en el control de arena tendi a ser menor que el control de peso seco en el
control de sedimentos del lago West Bearskin (ASTM International [1] y USEPA [2] no
proporcionan criterios de aceptabilidad de prueba absolutos). control de azteca que
termina con el peso seco en [1,2]). Estudios posteriores han determinado que las
dietas alternativas de diatomeas en rampa (Thalassiosira weiss fl ogii) y Tetramin en
rampa o de YCT y Tetramin en rampa dan como resultado un mejor rendimiento de H.
azteca en el control de arena en relacin con los controles de sedimentos (Mount D.,
datos no publicados).

Las diluciones del sedimento del Gran Calumet con arena (bajo TOC) fueron txicas
para H. azteca en exposiciones de 10 y 28 das, lo que result en una mortalidad casi
completa en cada dilucin (Tabla 2; Datos complementarios, Tabla S4). Las diluciones
del sedimento del ro Gran Calumet con las del sedimento de lago West Bearskin (alto
TOC) tambin fueron txicas para H. azteca. La supervivencia de H. azteca en las
exposiciones a los 10 y 28 das se redujo significativamente slo en la dilucin del 50%
del sedimento del ro Grand Calumet con el sedimento del lago West Bearskin; sin
embargo, la magnitud de la respuesta fue mayor en exposiciones de 28 das (Figura
1A). Se observaron respuestas de dosis ms consistentes y EC20 inferiores en las
diluciones de sedimentos del lago West Bearskin para el peso o la biomasa en las
exposiciones de 28 das que en las exposiciones de 10 das con H. azteca (p. Ej.,
Biomasa EC20 de 40% de sedimento del Gran Calumet River para Exposicin 10d y
biomasa EC20 de 13% de sedimento del Gran Calumet para la exposicin a 28 das,
Tabla 2 y Figura 1B).
 SUPERVIVENCIA (% de control)

exposicin

exposicin

Diluciones del GCR con sedimento de WB (%)

BIOMASA (% de control)

Diluciones del GCR con sedimento de WB (%)

Figura 1. L supervivencia media (A) y la biomasa (B) en relacin con el

control del anfpodo (Hyalella azteca) expuestos al sedimento de la
rama del este del ro Grand Calumet (GCR) diluido con sedimento del
lago West Bearskin (WB) en exposiciones de 10 y 28 das. Las barras
de error representan desviaciones estndar.
 Tabla 2. Concentraciones de efecto de observacin ms baja (LOEC) y concentraciones de efecto de
20% (EC20) en exposiciones realizadas con sedimento del East Branch Grand Calumet River (GCR)
diluido con sedimento de control West Bearskin (WB) o diluido con arena en exposiciones con
anfpodos (Hyalella azteca), mosquitos (Chironomus dilutus) y mejillones (Lampsilis siliquoidea)

a No aplicable o no determinado
b 95% intervalo de confianza (CI) en parntesis

Prueba de toxicidad de Midge C. dilutus

La supervivencia de control promedio de larvas fue => 96% y el control promedio

AFDW fue => 1.68 mg / individuo al final de las exposiciones de 13 das iniciadas con
C. dilutus de 7 das de edad (Datos complementarios, Tabla S5). La emergencia media
de control de C. dilutus adulto en las exposiciones iniciadas con larvas de 7 das fue
=> 88%. El surgimiento de C. dilutus adulto se determin a travs del da de prueba 41
en exposiciones a arena y durante el da de prueba 48 en exposiciones del lago West
Bearskin. Por lo tanto, la supervivencia del control medio, el peso y la emergencia de
C. dilutus en exposiciones iniciadas con larvas de 7 das cumplieron o excedieron los
criterios de aceptabilidad de la prueba para la supervivencia (70%), peso (0,48 mg /
individuo) y emergencia (50%) [1,2].

La supervivencia media del control fue del 71% en sedimentos del lago West Bearskin
y del 92% en arena al final de las exposiciones de 20 das iniciadas con larvas de C.
dilutus <1 h de edad (datos complementarios, tabla S5). El control medio fue AFDW =>
2.49 mg / individuo al final de las exposiciones de 20 das iniciadas con larvas de <1 h
de edad. La emergencia media de control de C. dilutus adulto fue del 48% en
sedimentos del lago West Bearskin del 82% en arena en las exposiciones iniciadas
con larvas de <1 h de edad. El surgimiento de C. dilutus adulto se determin a travs
del da de prueba 41 en exposiciones a arena y durante el da de prueba 48 en
exposiciones del lago West Bearskin. Por lo tanto, la supervivencia del control medio y
el peso de C. dilutus en exposiciones iniciadas con larvas <1 h de edad cumplieron los
criterios de aceptabilidad de la prueba para la supervivencia y el peso [1,2] (Datos
complementarios, Tabla S5). Sin embargo, en el sedimento de control del lago West
Bearskin, la variabilidad replicada fue alta para la supervivencia (100%, 100%, 67%,
17%). La variabilidad replicada para la emergencia en el sedimento de control del lago
West Bearskin tambin fue alta (100%, 66%, 17%, 8%), con una emergencia media
del 48% (ligeramente por debajo del criterio de aceptabilidad de prueba del 50%
recomendado por ASTM International [1] o la USEPA [2]).

Las diluciones del sedimento del Gran Calumet con arena (bajo TOC) fueron txicas
para C. dilutus en exposiciones de 20 das iniciadas con larvas de <1 h de edad o en
exposiciones de 13 das iniciadas con larvas de 7 das de edad (Tabla 2; Datos
complementarios, Tabla S5). La dilucin de arena ms baja de 6,25% del sedimento
del Gran Calumet result en un 100% de mortalidad en exposiciones iniciadas con
larvas de <1 h de edad y una supervivencia significativamente menor, AFDW, biomasa
y porcentaje de emergencia en exposiciones iniciadas con larvas de 7 das (EC20s
<6.25% del sedimento del Gran Calumet para las dos etapas de la vida; Tabla 2).

Las diluciones del sedimento del Gran Calumet con sedimento Lago West Bearskin
(alto TOC) tambin fueron txicas para C. dilutus en exposiciones iniciadas con
cualquiera de las etapas de la vida (Tabla 2, Tabla de Datos Suplementarios S5),
aunque menos txicas en las diluciones de sedimentos del Lago West Bearskin que en
diluciones de arena. En las exposiciones iniciadas con larvas de <1 h, => 12.5%
dilucin de sedimentos del Ro Grand Calumet con sedimento del lago West Bearskin
redujo significativamente la supervivencia y la biomasa (EC20 <<6.25% dilucin de
sedimento del ro Gran Calumet con sedimento del lago West Bearskin). En las
exposiciones iniciadas con larvas de 7 das, => 25% de dilucin de sedimentos del ro
Gran Calumet con sedimentos del lago West Bearskin redujo significativamente AFDW
y biomasa, y las diluciones de sedimentos del 50% del ro Calumet con sedimentos del
lago West Bearskin Lake redujeron significativamente el porcentaje de emergencia
(EC20 para biomasa de sedimento del Gran Calumet al 9.4% y EC20 para la
emergencia del 29% de sedimento del Gran Calumet). El tiempo medio de emergencia
de C. dilutus no se retras consistentemente con la exposicin a las diluciones del
sedimento del ro Grand Calumet con sedimento del lago West Bearskin o con arena
(datos no mostrados).

En exposiciones a diluciones de sedimentos de West Bearskin Lake, la supervivencia

de C. dilutus fue un punto final ms sensible en las exposiciones de 20 das iniciadas
con larvas de <1 h de edad (Figura 2A) que la supervivencia o biomasa en las
exposiciones de 13 das iniciadas con larvas de 7 das de edad (Figura 2B). Como se
mencion, sin embargo, la variabilidad del control replicado fue alta en el sedimento de
control West Bearskin Lake en exposiciones iniciadas con larvas de <1 h de edad
(Figura 2A; Datos complementarios, Tabla S5). En las exposiciones a West Bearskin
Lake, las diluciones de sedimentos comenzaron con 7 d-old larvae, la magnitud de la
respuesta fue similar para la biomasa larval y el porcentaje de emergencia de adultos
(Figura 2B). Por lo tanto, el porcentaje de emergencia no proporcion informacin
adicional sobre la toxicidad de las diluciones de sedimentos ms all de los efectos
sobre la biomasa de larvas observadas en el da de prueba 13 de la exposicin.

En exposiciones a diluciones de sedimentos del lago West Bearskin, la supervivencia

de C. dilutus fue un punto final ms sensible en las exposiciones de 20 das iniciadas
con larvas de <1 h de edad (Figura 2A) que la supervivencia o biomasa en las
exposiciones de 13 das iniciadas con larvas de 7 das de edad (Figura 2B). Como se
mencion, sin embargo, la variabilidad del control replicado fue alta en el sedimento de
control del lago West Bearskin en exposiciones iniciadas con larvas de <1 h de edad
(Figura 2A; Datos complementarios, Tabla S5). En las exposiciones al lago West
Bearskin, las diluciones de sedimentos comenzaron con a los 7 das de edad, la
magnitud de la respuesta fue similar para la biomasa larval y el porcentaje de
emergencia de adultos (Figura 2B). Por lo tanto, el porcentaje de emergencia no
proporcion informacin adicional sobre la toxicidad de las diluciones de sedimentos
ms all de los efectos sobre la biomasa de larvas observadas en el da de prueba 13
de la exposicin.

Supervivencia
Biomasa
Emergencia
1 hora de edad del mosquito (% del
control)

Diluciones del GCR con sedimento de WB (%)

7 das de edad del mosquito (% del control)

Diluciones del GCR con sedimento de WB (%)

Figura 2. Supervivencia media, biomasa y emergencia relativa al control

del mosquito (Chironomus dilutus) expuesto al sedimento del East Grand
Grand Calumet River (GCR) diluido con sedimento de West Bearskin
(WB) a partir de larvas de <1 h de edad (A) o con larvas de 7 das de
edad (B). Las barras de error representan desviaciones estndar
Prueba de toxicidad de Mussel Lampsilis siliquoidea

La supervivencia media del control fue del 93% en sedimentos del lago West Bearskin
y fue del 100% en arena al final de las exposiciones de 28 das realizadas con L.
siliquoidea. El peso seco medio de control fue de 0,62 mg / individuo en el sedimento
del lago West Bearskin (un aumento proporcional de 3,1x) y fue de 0,34 mg / individuo
en la arena (un aumento proporcional de 1,7x). La supervivencia del control medio de
L. siliquoidea cumpli con el criterio de aceptabilidad de la prueba de 80% de
supervivencia para los mejillones en exposiciones solo al agua (Datos
complementarios, Tabla S6) [7]. La variabilidad tendi a ser relativamente alta para el
tamao inicial de L. siliquoidea (p. Ej., Longitud inicial de 1,67 mm / individuo,
desviacin estndar 0,32 mm / individuo) y fue relativamente alta en algunos de los
tratamientos al final de las exposiciones (p. % De dilucin de sedimentos del ro Grand
Calumet con sedimento del lago West Bearskin; datos suplementarios, [contina]