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Discusso dos Experimentos

e Resultados Experimentais
Prticas Bioqumica: estrutura, propriedades e funes de biomolculas

Prof Dra. Daniele Ribeiro Arajo


Aluna Estgio em Docncia: Caroline Baldi
Prtica 1: Propriedades da gua, solubilidade e uso
de micropipetas
1. Discutir resultados obtidos
2. A molcula de SDS polar ou apolar?

Fonte: https://www.wolframalpha.com/input/?i=sodium+dodecyl+sulfate
3. Representar com o uso do modelo de esferas que representam os tomos a
formao de uma micela de SDS em gua (inserir legenda para os tomos).
Apresentar as possveis interaes intermoleculares que ocorrem na presena dos
sais empregados.

Fonte: Livro Princpios de Bioqumica Lehninger


Prtica 2: Aminocidos estudo da estrutura e
propriedades cido-base
1. Construir uma tabela contendo os valores de pH juntamente
com os respectivos volumes de NaOH adicionados para cada
aminocido titulado.

Fonte: https://goo.gl/images/3iCrbM
2. Lance em grfico os valores de pH (eixo y) em funo dos volumes da
soluo titulante de NaOH (eixo x). Faa isso para cada aminocido (trs
grficos separados) e depois faa um grfico contendo as trs curvas
superpostas.

Fonte: https://goo.gl/images/3iCrbM Fonte: https://goo.gl/images/aiUMeb


3. Indique nos grficos lanados individualmente os valores dos pKa
(pKa1,pKa2 e pKaR se houver) e indique o ponto isoeltrico (pI). Obtenha
os valores de pKa determinados experimentalmente (localizando os
pontos de inflexo nas curvas) e compare-os com os valores de
referncia da literatura.
Glicina: pI = (2,34 + 9,6) = 5,97
pK COOH = 2,34 2
pK NH2 = 9,6

Arginina:
pI = (9,0 + 12,5) = 10,75
pI = (pK1 + pK2) pK COOH = 2,2
2
2 pK NH2 = 9,0
pK R = 12,5

cido Glutmico:
pK COOH = 2,2 pI = (2,2 + 4,25) = 3,22
pK R = 4,25 2
Fonte: https://goo.gl/images/EuyJa5 pK NH2 = 9,67
4. Escreva as equaes de equilbrio (todas as etapas) das espcies
qumicas envolvidas nas titulaes.

Glicina:
pK COOH = 2,34
pK NH2 = 9,6

Arginina:
pK COOH = 2,2
pK NH2 = 9,0
pK R = 12,5

cido Glutmico:
pK COOH = 2,2
pK1 pKR pK3
pK R = 4,25
pK NH2 = 9,67
5. Faa uma anlise do perfil das curvas obtidas correlacionando com
os valores de pKa obtidos e as funes orgnicas presentes. Voc
acha que se fossem realizadas adies sucessivas de 0,25mL de
soluo de NaOH seria possvel calcular o valor de pKa com maior
preciso? E se fosse utilizada uma soluo 0,1 ml/L de NaOH?

6. No caso especfico de cido glutmico, os primeiros valores de pKa


so relativamente difceis de serem obtidos experimentalmente.
Explique estes fatos dizendo se as medidas citadas acima podem
melhorar a qualidade da curva e facilitar a obteno destes valores
de pKa.

7. Aps construir todas as curvas aponte qual a espcie


predominante nas solues iniciais de aminocidos utilizadas
(medida inicial do pH antes da adio de HCl). Explique suas
respostas.
8. a) Utilizando a equao de Henderson-Hasselbalch, justifique qual
seria a representao (A ou B) predominante da estrutura geral de um
aminocido em soluo aquosa com pH = 7. Considerar pK1 (-COO -) =
2 e pK2 (-NH3 +) = 10.

b)Desconsiderando a cadeia lateral, seria possvel encontrar aminocidos com a


estrutura A (representada no item acima) em pH = 14? ( ) Sim ( x ) No
9. Sabendo que o cloreto de sdio, NaCl, um slido inico que apresenta alta solubilidade em gua;
que o cido clordrico, HCl, um cido forte; e que o hidrxido de sdio, NaOH, uma base forte,
um aluno afirmou que caso fossem misturados num mesmo recipiente volumes iguais de solues,
de baixas e iguais concentraes, de cido clordrico e hidrxido de sdio, haveria apenas a formao
de gua. Alm disso, afirmou que aps a mistura os ons cloreto e sdio permaneceram solubilizados
da mesma forma que estavam na soluo de origem. Voc concorda com esse aluno? Justifique sua
resposta com o uso de reao qumica.

cido/Base Forte cido/Base Fraca

Completamente ionizados em gua Ionizam-se parcialmente em solues aquosas


Somente um sentido Ambos os sentidos
Prtica 3: Espectrofotometria e dosagem de
protenas pelo mtodo de Biureto

Fonte: https://goo.gl/images/iYPB9U

(mol-1 . L . cm -1)
Fonte: https://goo.gl/images/DMr38b (adimensional)

(cm)
A absorbncia diretamente proporcional a
concentrao da soluo de amostra.

(mol. L -1)
1. Demonstrar os clculos para a obteno do reagente Biureto e das solues-
padro de BSA

2. Plotar a absorbncia da amostra do item 1 em funo do comprimento de


onda, determinando o comprimento de onda de mxima absorbncia
3. Plotar as absorbncias das solues padro em funo da
concentrao e calcular a absortividade

= A/lc
4. Determinar a concentrao da amostra desconhecida

y = ____ . (x) + ____ X Y


Concentrao Absorbncia
0,125
0,25
0,5
0,75
1,0
1,25
1,75
X
Fonte: https://goo.gl/images/tu2Qm9
5. Descrever o princpio do mtodo de Biureto para a dosagem de
protenas, relacionando suas vantagens e desvantagens em relao a
outros mtodos para dosagem de protenas

Modificado de: https://goo.gl/images/Nh4ijK


Fonte: https://goo.gl/images/A67sDa
Limite de
Mtodos Vantagens Desvantagens
deteco
Biureto Rpido, baixo custo e baixa No muito sensvel 1 a 10mg/mL
variao da absortividade
especfica para diferentes protenas

Lowry e cols Alta sensibilidade e menor Demorado, absortividade especfica 10-1000 ug/mL
consumo de amostra altamente varivel para diferentes
protenas
Bradford Mais rpido e sensvel que o de Variao da absortividade especfica para 20-2000 ug/mL
Lowry diferentes protenas, resultados nem
sempre reprodutveis devido ao grau de
pureza do corante BG-250 (lote)
Smith ou BCA Fcil preparo, e to sensvel quanto Dependncia da temperatura de 20-2000 ug/mL
o Lowry incubao das amostras, variao da
absortividade especfica para diferentes
protenas e a variao da absorbncia
com o tempo.
UV Rpido Amostras complexas, diversas substncias 0.1-100 ug/mL
absorvem no ultra-violeta tornando os
resultados pouco confiveis.
Bons estudos!