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Artculo

Anti-envejecimiento y potencial antioxidante de

Paullinia cupana var. sorbilis: Los hallazgos en
Caenorhabditis elegans Indicar una nueva utilizacin de semillas
tostadas de guaran

Herbenya Peixoto 1 CARN DE IDENTIDAD , Mariana Roxo 1, Teresa Rhrig 2, Elke Richling 2, Xiaojuan Wang 1 CARN DE IDENTIDAD

y Michael Wink 1, * CARN DE IDENTIDAD

1
Instituto de Farmacia y Biotecnologa Molecular de la Universidad de Heidelberg, INF 364, D-69120 Heidelberg, Alemania; hspeixoto1@gmail.com
(HP); marianaroxocorreia@gmail.com (MR); wxjsz@hotmail.com (XW)
2 Departamento de Qumica y Toxicologa de Alimentos, Nutricin Molecular de la Universidad de Kaiserslautern,

Erwin Schrdinger-Strasse 52, D-67663 Kaiserslautern, Alemania; roehrig@chemie.uni-kl.de (TR); richling@chemie.uni-kl.de (ER)

* Correspondencia: wink@uni-heidelberg.de; Tel .: + 49-6221-544880 Editores Acadmicos:

Jo un O Rocha y Gerhard Litscher

Recibido: 30 Julio 2017. Aceptado: 12 Agosto 2017. Publicado: 15 Agosto 2017

Fondo abstracto: Las semillas tostadas de guaran amaznica ( Paullinia cupana var. sorbilis;
Sapindaceae) son populares en Amrica del Sur debido a su actividad estimulante sobre el sistema nervioso central (SNC). Rich en alcaloides de
purina, cafena marcadamente, las semillas se utilizan ampliamente en la industria de bebidas brasilea para la preparacin de bebidas no
alcohlicas y como aditivos en bebidas energticas. mtodos: Para investigar el putativo anti-envejecimiento y la actividad antioxidante de
guaran, se utiliz el modelo de organismo Caenorhabditis elegans. Los anlisis qumicos se realizaron utilizando cromatografa lquida de alto
rendimiento (HPLC) y espectrometra de electrospray de ionizacin de masas (ESI-MS / MS). resultados: Cuando se ensay en el sistema
modelo Caenorhabditis elegans, el extracto acuoso de semillas de guaran tostados mayor resistencia contra el estrs oxidativo, la vida til
extendida y atenuada marcadores de envejecimiento tales como disminucin de la funcin muscular y la agregacin polyQ40. conclusiones: En
el presente estudio, hemos demostrado que los extractos de guaran pueden trabajar como un poderoso antioxidante in vivo; Por otra parte, los
extractos de guaran exhiben propiedades anti-envejecimiento. Nuestros resultados sugieren que las actividades biolgicas de guaran van ms
all de la estimulacin del SNC informado ampliamente.

palabras clave: C. elegans; esperanza de vida; estrs oxidativo; anti-envejecimiento; Paullinia cupana; guaran

1. Introduccin

Las plantas que producen alcaloides de purina como la cafena, teofilina y teobromina son ampliamente utilizados debido a su actividad

estimulante sobre el sistema nervioso central (SNC). Entre las plantas ms populares que podemos enumerar caf ( Coffea arabica), t ( Camellia

sinensis), compaero ( Ilex paraguariensis) y cacao ( Theobroma cacao)

que se consumen principalmente como bebidas e infusiones. Tambin se encuentran incluidos en los dulces, panadera y postres de todo el
mundo. Los efectos estimulantes de alcaloides de purina estn relacionados con su capacidad para inhibir las fosfodiesterasas de cAMP y la
promocin de los receptores de adenosina, entre otros, un aumento en el estado de alerta mental, el rendimiento fsico y la reduccin de la fatiga [ 1 ,
2 ]. Debido a sus propiedades farmacolgicas, aislados alcaloides purina son ingredientes activos de varias preparaciones mdicas, as como
nutracuticos y bebidas energticas de gran popularidad entre las personas que buscan productos naturales para lograr los objetivos de salud y
bienestar. Sin embargo, el consumo indiscriminado no est exento de efectos adversos [ 3 ].

guaran [ Paullinia cupana var. sorbilis ( Mart) Kunth.; Sapindaceae], ampliamente utilizado en la industria de bebidas de Brasil, se
informa que tiene la mayor concentracin de cafena (ms de 6% en las semillas)

medicamentos 2017, 4, 61; doi: 10.3390 / medicines4030061 www.mdpi.com/journal/medicines

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observado en la naturaleza hasta el momento. Las semillas son famosos en Brasil por sus efectos estimulantes. Popularmente, polvo de semilla de tostado

se utiliza en preparaciones para mejorar la memoria y para atenuar el estrs mental y fsica [ 4 ].

El guaran es nativa de la selva Amazonia y fue domesticado por los indgenas de la etnia Sater mi Fauces mi Hace aproximadamente
500 aos. En la naturaleza, que crece como una woody vine que puede alcanzar los 10 m de longitud, pero cuando casero crece como un
arbusto alcanzando aproximadamente de dos a tres metros de altura. Se produce un fruto de color rojo caracterstico que cuando est maduro
parcialmente abre, exhibiendo hasta tres semillas negras cubiertos en su mitad inferior con un arilo blanca espesa, semejante a un ojo [ 5 ].

Espinola et al. [ 6 ] Evaluado los efectos de guaran en el rendimiento fsico y cognitivo de ratas. El efecto anti-fatiga se demostr en
un ensayo de natacin forzada; sorprendentemente, el grupo tratado con cafena pura o ginseng no mostr una diferencia significativa con el
control sin tratar. Adicionalmente, los autores demostraron que el guaran es fcilmente capaz de revertir el efecto amnsico de la
escopolamina. Otobone et al. [ 7 ] Probado los efectos del extracto de semilla de guaran en ratones sometidos a un ensayo de laberinto de
agua de Morris y reportado latencia significativamente menor para escapar entre los animales tratados en comparacin con los no tratados.
Otobone et al. [ 8 ] Demostraron el efecto antidepresivo de guaran en ratas y Rangel et al. [ 9 ] Proporcionado evidencia de efectos
ansiolticos. Adems de los efectos sobre el SNC, el guaran puede atenuar los marcadores del sndrome metablico, como los niveles de
circunferencia de la cintura y de colesterol; este efecto se demostr entre las personas mayores autorreferidas como bebedores de guaran.
Los autores informaron, adems, una asociacin significativa entre niveles ms bajos de productos de protena oxidativo avanzada y el
consumo de guaran [ 10 ]. Ruchel et al. [ 11 ] Inform de la capacidad de guaran para reducir el colesterol total y el LDL-colesterol a los
niveles basales en ratas con hipercolesterolemia y puesto de manifiesto la asociacin entre la ingesta alta guaran y la reduccin del
proceso inflamatorio en las ratas con hipercolesterolemia.

Otras actividades frecuentemente acreditados a guarana incluyen analgsico, afrodisaco, astringente, anorxico, anti-inflamatorio,
anti-plaquetas, cardiotnico, bronchorelaxant, gastrostimulant, inmunoestimulante, termognico y propiedades diurticas [ 12 ]. Carvalho et
al. [ 13 ] Inform de la actividad antiproliferativa de guaran un extracto crudo en clulas HL-60.

Teniendo en cuenta la alta cantidad de cafena en el guaran, suena razonable dar crdito a sus efectos biolgicos a los alcaloides de purina.

Sin embargo, el guaran tambin contiene cantidades significantes de compuestos fenlicos, especialmente los taninos, como la catequina,

epicatequina y sus polmeros y proantocianidinas, que tambin podran contribuir a sus propiedades que van ms all del efecto estimulante del SNC

[ 14 - diecisis ].

En el presente estudio, hemos investigado un extracto de agua y un extracto de alcaloides de las semillas tostadas de guaran ( P.
cupana var. sorbilis) con respecto a sus propiedades antioxidantes y anti-envejecimiento putativos. Para determinar la actividad antioxidante,
el extracto de guaran se analiz in vitro por el mtodo de DPPH, un ensayo de antioxidante estndar. La actividad antioxidante in vivo se
investig utilizando el nematodo C. elegans que es un sistema de gran alcance en este contexto [ 17 - 19 ]. Adems, se evalu un efecto
protector potencial del extracto de guaran contra el estrs oxidativo inducido, su influencia en la acumulacin celular de especies reactivas
de oxgeno (ROS) y en la expresin de importantes genes de respuesta al estrs como HSP-16.2 y SOD-3, que est regulado por el factor de
transcripcin DAF-16 / FOXO. Para explorar el potencial actividad anti-envejecimiento, se investig la influencia del extracto de guaran en la
vida til de C. elegans, relacionada con la edad disminucin de la funcin muscular y la formacin de placas polyQ40, que son considerados
como marcadores de envejecimiento sensibles y relevantes.

2. Material y Mtodos

2.1. Material vegetal y Extraccin

extracto de guaran (GE) se prepar a partir del polvo de semillas tostadas comprados a un comerciante local en Manaus-AM
(Brasil). El polvo se pes y se extrajo exhaustivamente con agua destilada (5 1 L) a temperatura ambiente durante un perodo de
extraccin global de 5 d. El uso de un evaporador rotatorio, el extracto se redujo a aproximadamente 14 del volumen inicial a baja presin,
40 C, y posteriormente congeladas a - 80 C. El extracto congelada se liofiliz produciendo un ne fi polvo secado. Se obtuvo el extracto
alcaloide (ALKE) a travs de la extraccin de diclorometano alcalina estndar.
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2.2. Caracterizacin qumica del extracto

2.2.1. Caracterizacin de alcaloides

El contenido de alcaloides (cafena, teobromina y teofilina) de GE se determin por alto rendimiento de cromatografa lquida-ultravioleta
espectroscopia / visible (HPLC-UV / VIS) usando un sistema de la serie de HPLC Agilent 1200 (Agilent, Santa Clara, CA, EE.UU.), provisto de
una columna Synergi 4 m Polar-RP 80 , 250 4.6 mm (Phenomenex, Torrance, CA, EE.UU.). cido Disolvente Systema-frmico al 0,1%,
disolvente B-acetonitrilo. El gradiente de pro fi le fue: 2-12% de B durante 5 min, 12-30% de B durante 15 min, 30-90% de B durante 3 min,
isocrtico 90% de B durante 8 min, 90-2% durante 1 min, isocrtico 2 % de B durante 3 min. La velocidad de flujo fue de 0,8 mL / min y la
temperatura de la columna se mantuvo a 40 C, el volumen de inyeccin fue de 20 L. La concentracin de la muestra fue de 1 mg / ml diluido
en agua. La longitud de onda de deteccin UV era 270 nm. Las mediciones se llevaron a cabo por duplicado. Se utiliz el mtodo de
calibracin de adicin estndar para determinar la concentracin de los compuestos analizados. alcaloides puros de referencia estaban
disponibles y se utilizan para la coincidencia de pico.

2.2.2. Caracterizacin de catequinas (ESI-MS / MS)

Las catequinas y procianidinas en el extracto de guaran Se identificaron con un sistema de HPLC Agilent 1100 (Santa Clara, CA,
EE.UU.) equipado con un desgasificador, bomba cuaternaria, automuestreador, compartimento de la columna, y VW-detector acoplado a un
API PE Sciex 2000 masa triple cudruple espectrmetro (Sciex, Framingham, MA, EE.UU.). Las condiciones de HPLC fueron adaptados en
parte a partir de (Bonoli, et al., 2003). Condiciones de HPLC: columna Luna 5 m C18 100 , 250 4.6 mm (Phenomenex, Torrance, CA,
EE.UU.); temperatura de la columna: 20 DO; sistema de disolvente: AH 2 O / metanol / cido frmico: 74,7 / 25 / 0,3 ( v / v / v),

cido frmico / B-acetonitrilo: 99,7 / 0,3 ( v / v); gradiente pro fi le: isocrtico 0% de B durante 8 min, 100% de B durante 24 min, isocrtico 100% de B

durante 6 min, 0% de B durante 4 min, isocrtico 0% de B durante 6 min; velocidad de flujo: 0,5 ml / min; volumen de inyeccin: 20 L; concentracin de la

muestra: 1 mg / ml en H 2 O. ESI-MS / MS condiciones: modo de iones positivos; voltaje de pulverizacin de iones: 5500 V; temperatura 450 DO; potencial

desagrupacin: 61 V; potencial de enfoque: 370 V; potencial de entrada: 12 V; colisin potencial entrada de la clula: 14 V [ 20 ].

2.2.3. Contenido total de fenol

El mtodo de Folin-Ciocalteu fue adaptado al formato de microplaca de 96 pocillos. Brevemente, 100 se aadi L de Folin-Ciocalteu
reactivo (Merck, Darmstadt, Alemania) a 20 L de muestra; 5 min ms tarde, 80 se aadieron L de carbonato de sodio (solucin 7,5%). La
reaccin corri en la oscuridad a temperatura ambiente durante 2 h. La absorbancia se midi a 750 nm utilizando un lector de microplacas
(Tecan Group Ltd., Mnnedorf, Suiza). Todas las mediciones se realizaron por triplicado y al menos tres veces. El contenido total de fenol
se expresa como equivalentes de cido glico (GAE / mg de muestra).

2.3. Actividad antioxidante in vitro (DPPH Assay)

Un mtodo descrito por Blois [ 21 ] Fue adaptado a un formato de microplaca de 96 pocillos. Brevemente, 100 L de 200 MDPPH
(2,2-difenil-1-picrilhidracilo; Sigma-Aldrich GmbH, Steinheim, Alemania) se aadi a 100 L de la muestra. La reaccin corri en la
oscuridad a temperatura ambiente (25 C) durante 30 min y la absorbancia se midi a 517 nm utilizando un lector de microplacas. La
actividad de eliminacin se calcul segn la siguiente ecuacin:

DPPH efecto de barrido (%) = [(A0 - A1) / A0] 100

donde A0 significa la absorbancia de la reaccin de control y A1 es la absorbancia en presencia de AE. Todas las mediciones se realizaron
por triplicado. la CE 50 valor se estim por regresin no lineal sigmoide y se presenta en g / mL.
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2.4. Caenorhabditis Elegans: Cepas y Cultura

Las cepas de N2 (en peso), CF1038 [daf-16 (mu86) I], GR1307 [daf-16 (mgDf50) -I], CF1553 {muls84 [pAD76 (SOD-3 :: GFP)]},
TJ375 (gpIs1 [ HSP-16-2 :: GFP]), BA17 [(fem-1 (HC17) IV] y AM141 [rmIs133 (UNC-54p :: Q40 :: YFP)] fueron adquiridos de la Centro de
Gentica Caenorhabditis (CGC, Universidad de Minnesota, Minneapolis, MN, EE.UU.). Worms se cultivaron en medio slido de
crecimiento de nematodos (NGM) placas, alimentado de vida Escherichia coli OP50 y se mantuvo a 20 C en una temperatura controlada
incubadora [ 22 ]. Antes de los ensayos, se aislaron los huevos para obtener cultivos sincronizados de edad y se mantuvieron en tampn M9
para incubar como se describe por Strange et al. [ 23 ]. Para todos los ensayos, despus de 24 h en 20 C las larvas (L1 etapa) se transfiri
a S-medio lquido inoculado con la vida E coli OP50 (OD 600 = 1,0) y se trat de acuerdo con el grupo correspondiente.

2.5. Actividad antioxidante en Vivo

2.5.1. Ensayo de supervivencia bajo estrs oxidativo

Edad gusanos sincronizados (cepas N2, CF1038 y GR1307), cultivadas en S-medio en la etapa de larvas L1, se clasificaron en
grupos de 75 gusanos y tratados con GE o ALKE durante 48 h, excepto el control. A continuacin, los grupos se expusieron a 80 M de la
juglone pro-oxidante (5-hidroxi-1,4-naftoquinona; Sigma-Aldrich GmbH, Steinheim, Alemania) y el nmero de gusanos muertos y vivos se
cont durante 24 h despus del tratamiento juglone. Los gusanos fueron considerados muertos cuando no respondieron a un toque suave
con un platinumwire. El ensayo se llev a cabo por triplicado y los resultados se presentan como media SEM, comparado por anlisis
unidireccional de la varianza (ANOVA) seguido de Bonferroni (post-hoc).

2.5.2. La acumulacin intracelular de ROS

Edad sincronizados gusanos N2 (etapa L1, cultivadas en S-medio) se clasificaron en grupos y se trataron con GE o ALKE durante
48 h, excepto el grupo de control. Despus, los gusanos se lavaron con tampn M9 y se incubaron con 1 ml 50 solucin M CM-H2DCFDA
(1 h a 20 C) (6-carboxi-2 ', 7 '- dichlorodihydro diacetato de fluorescena; Fluka Chemie GmbH, Buchs, Suiza), se lav de nuevo con M9 y se
monta en un portaobjetos de vidrio, y se aadi una gota de azida de sodio 10 mM (AppliChem GmbH, Darmstadt, Alemania) para
paralizar los nematodos. Las imgenes en vivo fueron capturados de al menos 30 gusanos por grupo, utilizando un microscopio de
fluorescencia (Keyence Deutschland GmbH, Neu-Isenburg, Alemania; nm Ex 480/20; Em 510/38 nm). La fluorescencia relativa de todo el
cuerpo se determin densitomtricamente usando el software ImageJ versin 1.48 (Institutos Nacionales de Salud, Bethesda, MD,
EE.UU.). Los resultados se presentan como media intensidad de fluorescencia (media SEM) y se compararon mediante ANOVA de una
va seguido de Bonferroni (post-hoc). El ensayo se repiti tres veces.

2.6. La expresin de genes de respuesta al estrs

2.6.1. Quanti fi cacin de hsp-16.2 :: expresin de GFP

gusanos sincronizados Edad (TJ375, etapa L4, crecido en S-medio) que llevan un reportero GFP fusionado con HSP-16.2 se
clasificaron en grupos y se trat con GE o ALKE durante 48 h, excepto el grupo de control. Posteriormente, 20 M juglone se aadi al
medio y 24 h ms tarde se sometieron a fluorescencia microcopy como se describe antes de los gusanos.

2.6.2. Quanti fi cacin de SOD-3 :: expresin de GFP

Edad gusanos sincronizados (CF1553, etapa L1, crecido en S medios de comunicacin) que llevan un reportero GFP fusionado con csped- 3, fueron

tratados con GE o ALKE durante 48 h, excepto el grupo de control, y se sometieron a microscopa de fluorescencia como se describi anteriormente.
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2.7. Los marcadores de envejecimiento

2.7.1. Ensayo de longevidad

Edad gusanos sincronizadas (BA17, cultivadas en S-medio, en el da 1 de la edad adulta) fueron ordenados y se trataron con GE,
excepto el grupo de control. gusanos vivos se transfirieron cada segundo da a un medio fresco y se contaron durante la transferencia. Los
gusanos que exhiben progenie o extruidos gnadas eclosionados internamente se anot como censurado gusanos y excluidos del ensayo.
gusanos muertos, aquellos que no responden a un toque suave con la platinumwire, se marcaron y se retiran del ensayo. Los resultados se
presentan como porcentaje de supervivencia y la significacin estadstica se determin por Log-rank (Mantel-Cox) pruebas seguido de
Gehan-Breslow-Wilcoxon Test.

2.7.2. Farngea de bombeo de rgimen

Edad gusanos sincronizados (N2, da 1 de la edad adulta, que se cultiva en S-medio) se clasificaron y se coloca en placas de agar
NGM sembr con E coli OP50. El csped bacteriano se complement con GE en los grupos tratados. Los adultos fueron trasladados a
diario para separarlos de su progenie; despus de da 5 de la edad adulta, la transferencia se llev a cabo un da antes de los anlisis de la
actividad de bombeo, que fueron tomadas el da 5, 8 y 10 de la edad adulta. A marcar el ritmo de bombeo, se observ cada gusano
durante 1 minuto cuando se arrastra en el csped bacteriano usando un estereoscopio. Cada grupo tena un mnimo de 10 gusanos. Los
resultados se presentan como bombas / min (media SEM) y se compararon mediante ANOVA de dos vas seguido de Bonferroni
(post-hoc).

2.7.3. Cuanti fi cacin de PolyQ40 :: YFP Agregados

gusanos Edad sincronizados (transgnicos AM141 cepa), cultivadas a 20 C en S-medio inoculado con la vida E coli OP50, en la fase
L1, se separaron en grupos y se trataron durante 48 h con GE, excepto el grupo de control. A continuacin, los gusanos se montaron en un
portaobjetos de vidrio con una gota de azida de sodio 10 mM para la parlisis y se sometieron a microscopa de fluorescencia ( nm Ex
480/20; Em 510/38 nm). Los resultados se presentan como nmero de agregados PolyQ40 :: YFP (media SEM) y se compararon mediante
ANOVA de una va seguido de Bonferroni (post-hoc).

2.8. Ensayo de Toxicidad: Tamao C. Elegans cra

Edad gusanos sincronizados (N2, etapa L4, crecido en S-medio) se clasifica y se colocaron individualmente sobre placas de agar
NGM sembr con E coli OP50. El csped bacteriano se complement con GE o ALKE en los grupos de tratamiento. Desde el da 1 de la
edad adulta, los gusanos se transfirieron a placas de NGM fresco suplementado de acuerdo con sus grupos y los huevos en el antiguo
NGM placas fueron anotados. El procedimiento se repiti durante 5 das. El tamao medio de camada fue comparada por ANOVA de dos
vas seguido de Bonferroni (post-hoc).

3. Resultados y discusin

3.1. Caracterizacin qumica del extracto de guaran

El uso de HPLC-UV / Vis, tres compuestos fueron identificados en los extractos de guaran alcaloides, a saber, la cafena, la
teobromina y la teofilina. El catin fi cuanti mostr una alta concentracin de cafena (102.8 mg / g), seguido por la teofilina (2,3 mg / g) y
teobromina (1,0 mg / g). anlisis ESI-MS / MS detecta la presencia de catequina y epicatequina (Tabla 1 ). Nuestros resultados estn de
acuerdo con la composicin qumica publicada de guaran [ 14 , 15 , 24 ] Y poner de relieve la alta concentracin de cafena que una
caracterstica distintiva de la especie.
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Tabla 1. Determinacin de extracto de guaran (GE) contenido qumico. La alta concentracin de cafena es un sello distintivo de esta especie.

Compuesto Concentracin (mg / g)

Cafena 102,8
teofilina 2.3
Thebromine 1.0
catequina +
epicatequina +

+ Detectados por el anlisis ESI-MS / MS, pero no cuantificada.

El mtodo de Folin-Ciocalteu demuestra un alto contenido fenlico (1250 GAE / g de muestra) para el extracto de semilla de asado.
contenido fenlico total se correlaciona con la actividad antioxidante observado in vitro e in vivo.

3.2. Antioxidante in vitro La actividad de guaran

Se evalu el extracto de guaran en cuanto a su actividad antioxidante in vitro a travs de ensayo de DPPH (tabla 2 ) Y exhibi una
actividad moderada en comparacin con los antioxidantes de la dieta estndar, tales como la vitamina C y el galato de epigalocatequina
(EGCG). El extracto alcaloide (ALKE) sin embargo, no mostr actividad antioxidante (Tabla 2 ).

Tabla 2. En la actividad antioxidante in vitro de GE en comparacin con el extracto alcaloide de guaran (ALK) y antioxidantes naturales

estndar.

Muestra DPPH *

GE 40
EGCG 1.03
Vitamina C 2.12
ALK -

* EC 50 valores expresados en muestra g / ml; - no detecta actividad antioxidante.

3.3. Actividad antioxidante in vivo de guaran

Los efectos antioxidantes de GE Se investigaron in vivo en C. elegans. Worms fueron tratados con una dosis letal de la juglone pro-oxidante
txico y se analizaron 24 h ms tarde en cuanto a la puntuacin de individuos muertos y vivos. Worms pre-tratados con GE mostraron una
significativamente mayor tasa de supervivencia en comparacin con el control no tratado. A la concentracin ms alta probada de 300 g / ml GE,
la tasa de supervivencia fue de hasta 71%, mientras que en los gusanos de control no tratados fue de 37% (ajustada pag- valor <0,0001) (Figura 1 UN).
El extracto alcaloide se ensay tambin, pero no se observ ninguna diferencia significativa entre ALKE tratada y gusanos no tratados (Figura 1 SEGUNDO).

Para evaluar la influencia de GE en el nivel basal de acumulacin de ROS in vivo, N2 (tipo salvaje) gusanos fueron expuestos a la

sonda molecular H2DCFDA; la sonda es sensible a la oxidacin por H 2 O 2

producido durante el metabolismo aerbico celular. Una vez oxidada, se convierte en DCF, que es un compuesto fluorescente altamente fl.
Los anlisis de la Emisin de fl orescence indic una diferencia significantes entre GE tratada y gusanos no tratadas; una disminucin de
hasta el 30% se observ en los gusanos tratados con 300 g / ml GE comparacin con el grupo control no tratado (ajustado pag- valor
<0,0001) (Figura 1 DO). El resultado se suma a la capacidad demostrada de GE para proteger contra gusanos juglone inducida por el
estrs oxidativo, que apoya el papel de GE como antioxidante in vivo. Curiosamente, el ALKE extracto que era inactivo en el ensayo de
supervivencia fue capaz de disminuir la acumulacin de ROS en alrededor de 30% en los gusanos tratados con 300 g / ml en comparacin
con el grupo control no tratado (ajustado pag- valor <0,0001) (Figura 1 RE).
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( UN) ( SEGUNDO)

Figura 1. Efecto de GE y ALKE en la resistencia al estrs de los gusanos de tipo salvaje. ( UN) La tasa de supervivencia de N2 (wt) gusanos
Figura 1. Efecto de GE y ALKE en la resistencia al estrs de los gusanos de tipo salvaje. ( UN) La tasa de supervivencia de N2 (wt) gusanos bajo
bajo estrs oxidativo juglone inducida. La tasa de supervivencia de los gusanos N2 fue significativamente mayor en los grupos tratados con 200
estrs oxidativo juglone inducida. La tasa de supervivencia de los gusanos N2 fue significativamente mayor en los grupos tratados con 200 y 300 g /
y 300 g / ml de GE; no se observ diferencia significativa entre los gusanos tratados con ALKE y gusanos no tratados. ( SEGUNDO) especies
ml de GE; no se observ diferencia significativa entre los gusanos tratados con ALKE y gusanos no tratados. ( SEGUNDO) especies reactivas de
reactivas de oxgeno intracelulares (ROS) acumulacin en N2 gusanos (WT) tras el tratamiento con GE. la acumulacin de ROS se redujo
oxgeno intracelulares (ROS) acumulacin en N2 gusanos (WT) tras el tratamiento con GE. la acumulacin de ROS se redujo significativamente por
significativamente por el tratamiento GE y ALKE en comparacin con el control no tratado. Los resultados se presentan como media SEM de
el tratamiento GE y ALKE en comparacin con el control no tratado. Los resultados se presentan como media SEM de tres experimentos
tres experimentos independientes. * pag <0,05, ** pag <0,01 *** pag <0,0001 en comparacin con el control no tratado por anlisis unidireccional
independientes. * p < 0,05, ** p < 0,01 *** p < 0,0001 en comparacin con el control no tratado por anlisis unidireccional de la varianza (ANOVA)
de la varianza (ANOVA) seguido por el mtodo de Bonferroni (post- hoc).
seguido por el mtodo de Bonferroni (post-hoc).

Para evaluar si el efecto antioxidante de GE se basa en su capacidad de eliminar los radicales o si se trata de un mecanismo
Para evaluar si el efecto antioxidante de GE se basa en su capacidad de eliminar los radicales o si se trata de un mecanismo
molecular de la resistencia al estrs, se realiz el ensayo de supervivencia usando gusanos mutantes que carecen de la daf-16 gen
molecular de la resistencia al estrs, se realiz el ensayo de supervivencia usando gusanos mutantes que carecen de la daf-16 gen
(CF1038 ([daf-16 (mu86) I]), GR1307 ([daf-16 (mgDf50)])). Mediante este enfoque, la incapacidad del extracto para contrarrestar el efecto
(CF1038 ([daf-16 (mu86) I]), GR1307 ([daf-16 (mgDf50)])). Mediante este enfoque, la incapacidad del extracto para contrarrestar el
txico de juglone se pudo demostrar (Figura 2 A), en contraste con el resultado con N2) gusanos WT (. El extracto alcaloide se ensay
efecto txico de juglone se pudo demostrar (Figura 2A), en contraste con el resultado con N2 gusanos (WT). El extracto alcaloide se
tambin; pero, no se observ diferencia significativa entre ALKE tratada y gusanos no tratados (Figura 2 SEGUNDO). Por lo tanto, se
ensay tambin; pero, no se observ diferencia significativa entre ALKE tratada y gusanos no tratados (Figuras 2B). Por lo tanto, se
supone que la actividad antioxidante de GE es un resultado de su capacidad para modular las vas moleculares de la resistencia al estrs,
supone que la actividad antioxidante de GE es un resultado de su capacidad para modular las vas moleculares de la resistencia al
particularmente que implican el factor de transcripcin DAF-16.
estrs, particularmente que implican el factor de transcripcin DAF-16.

DAF-16 es la C. elegans homlogo del factor de transcripcin de mamferos FOXO, que regula la expresin de varios genes implicados
DAF-16 es la C. elegans homlogo del factor de transcripcin de mamferos FOXO, que regula la expresin de varios genes
en la resistencia al estrs y la longevidad. Adems, las protenas FOXO de mamferos se han asociado con el envejecimiento y el
implicados en la resistencia al estrs y la longevidad. Adems, las protenas FOXO de mamferos se han asociado con el envejecimiento y
envejecimiento fenotipos enfermedades relacionadas, tales como la enfermedad, el cncer de Alzheimer y la diabetes tipo II [ 25 ].
el envejecimiento fenotipos enfermedades relacionadas, tales como [25] la enfermedad de Alzheimer, el cncer y la diabetes tipo II.
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( UN) ( SEGUNDO)

Figura 2. Efecto de GE ( UN) o ALKE ( SEGUNDO) tratamiento sobre la tasa de supervivencia de las cepas mutantes CF1038 y
Figura 2. Efecto de GE ( UN) o ALKE ( SEGUNDO) tratamiento sobre la tasa de supervivencia de las cepas mutantes CF1038 y GR1307 bajo
GR1307 bajo estrs oxidativo juglone inducida. Los DAF-16 gusanos mutantes (GR1307 [daf- 16 (mgDf50) I] y CF1038 [daf-16 (mu86)
estrs oxidativo juglone inducida. Los DAF-16 gusanos mutantes (GR1307 [daf-16 (mgDf50) I] y CF1038 [daf-16 (mu86) I]) no respondieron a
I]) no respondieron al tratamiento GE o ALKE. Cada barra representa la media SEM de tres experimentos independientes. Los
tratamiento GE o ALKE. Cada barra representa la media SEM de tres experimentos independientes. Los grupos de tratamiento se
grupos de tratamiento se comparan con el control no tratado por ANOVA de una va seguido por el mtodo de (post-hoc) de
comparan con el control no tratado por ANOVA de una va seguido por el mtodo de (post-hoc) de Bonferroni.
Bonferroni.

3.4. La cuantificacin de la expresin de genes de respuesta al estrs despus del tratamiento guaran
3.4. Cuanti fi cacin de la expresin de genes de respuesta al estrs despus del tratamiento guaran

Un enfoque adecuado para evaluar la eficacia de los antioxidantes en vivo es evaluar el patrn de expresin de genes de respuesta al
Un enfoque adecuado para evaluar la e fi cacia de antioxidantes in vivo es evaluar el patrn de expresin de genes de respuesta al
estrs como HSP -16,2 y csped -3; en este contexto, C. elegans es un modelo de organismo apropiado como varias cepas mutantes relevantes
estrs como HSP- 16.2 y csped- 3; en este contexto, C. elegans es un modelo de organismo apropiado como varias cepas mutantes relevantes
con una fusin del gen informador GFP estn disponibles.
con una fusin del gen informador GFP estn disponibles.
Para evaluar la influencia de GE en HSP -16,2 expresin, gusanos TJ375 que expresa el gen diana
Para evaluar la influencia de GE en HSP- 16,2 expresin, gusanos TJ375 que expresan el gen diana fusionados
fusionado con un reportero GFP, pre-tratados con GE o ALKE, fueron sometidos a estrs oxidativo leve inducida por 20? M juglone. Los
con un reportero GFP, pre-tratados con GE o ALKE, fueron sometidas a estrs oxidativo leve inducida por 20 juglone M. Los anlisis de la
anlisis de la fluorescencia emitida revel una diferencia significativa entre los grupos: GE gusanos exhibidos hasta la intensidad de
Emisin de fluorescencia revel una diferencia significativa entre los grupos: GE tratada gusanos exhibidos hasta fl 23% menor de fluorescencia
fluorescencia 23% menor en comparacin con los gusanos de control no tratados (ajustado tratada pag -valor <0,0001) (Figura 3A). No se
de intensidad en comparacin con los gusanos de control no tratados (ajustado pag- valor <0,0001) (Figura 3 UN). No se observ efecto
observ efecto significativo entre los gusanos tratados con extracto de ALKE (Figura 3B). HSP expresin -16,2 es frecuentemente referido
significativo entre los gusanos tratados con ALKE extraer (Figura 3 SEGUNDO). HSP- 16,2 expresin es frecuentemente referido como un sensor
como un sensor de tensin debido al hecho de que slo tiene lugar cuando el organismo se enfrenta a condiciones de estrs, tales como
de tensin debido al hecho de que slo tiene lugar cuando el organismo se enfrenta a condiciones de estrs, tales como calentamiento o
calentamiento o oxidantes [26].
oxidantes [ 26 ].

La expresin de SOD-3, un gen que codifica para la enzima antioxidante mitocondrial superxido dismutasa 3, se investig
La expresin de SOD-3, un gen que codifica para la mitocondrial enzima antioxidante superxido dismutasa 3, se investig utilizando
utilizando la cepa mutante CF1553 (muIs84 ([(pAD76) SOD-3p :: GFP + rol- 6]). Los resultados mostraron la intensidad de fluorescencia
la cepa mutante CF1553 (muIs84 ([(pAD76) SOD-3p :: GFP + rol-6]). Los resultados mostraron significativamente mayor de fluorescencia
significativamente mayor entre los mutantes tratados con 300 g / ml de GE en comparacin con el grupo control no tratado (ajustado pag -valor
de intensidad entre los mutantes tratados con 300 g / ml de GE en comparacin con el grupo control no tratado (ajustado pag- value =
= 0,0033) (Figura 3C). Se obtuvieron resultados similares a partir de gusanos tratados con el extracto alcaloide (Figura 3D). A la
0,0033) (Figura 3 DO). Se obtuvieron resultados similares fromworms tratados con el extracto alcaloide (Figura 3 RE). En la ms alta
concentracin ms alta probada de 300 mg / mL AlkE, la expresin de GFP fue hasta 40% mayor en comparacin con el control sin
ensayada
tratar (ajustado pag -valor <0,0001).
medicamentos 2017, 4, 61 9 de 14

concentracin de 300 g / mL AlkE, la expresin de GFP fue hasta 40% mayor en comparacin con el control sin tratar (ajustado pag- valor
medicamentos 2017, 4, 61 9 de 14
<0,0001).

( UN) ( SEGUNDO)

Figura 3. Efecto del tratamiento con GE o ALKE sobre la expresin de genes relacionados con la resistencia al estrs. ( UN) protena de
Figura 3. Efecto del tratamiento con GE o ALKE sobre la expresin de genes relacionados con la resistencia al estrs. ( UN) protena de
choque trmico 16.2 (HSP-16.2) expresin en la cepa mutante TJ375 [hsp-16.2 :: GFP (GPLSI)] bajo estrs oxidativo juglone inducida. los HSP
choque trmico 16.2 (HSP-16.2) expresin en la cepa mutante TJ375 [hsp-16.2 :: GFP (GPLSI)] bajo estrs oxidativo juglone inducida. los HSP-
-16.2 niveles de expresin se redujo significativamente por el tratamiento GE en comparacin con el control no tratado. No se observ efecto
16.2 niveles de expresin fueron significativamente disminuido por tratamiento GE en comparacin con el control no tratado. No se observ
significativo entre los gusanos tratados con el extracto alcaloide, ALKE. ( SEGUNDO) Superxido dismutasa 3 expresin (SOD-3) en la cepa
efecto significativo entre los gusanos tratados con el extracto alcaloide, ALKE. ( SEGUNDO) Superxido dismutasa 3 expresin (SOD-3) en la
mutante CF1553 despus del tratamiento con GE y ALKE. Worms [(pAD76) SOD-3p :: GFP + rol-6] se trat con 300 g / ml de GE mostraron
cepa mutante CF1553 despus del tratamiento con GE y ALKE. Worms [(pAD76) SOD-3p :: GFP + rol-6] tratados con 300 g / ml de GE
mayores niveles de SOD 3-expresin en comparacin con el control. Se observaron resultados similares entre los gusanos tratados con el
mostraron mayores niveles de SOD 3-expresin en comparacin con el control. Se observaron resultados similares entre los gusanos
extracto
tratados alcaloide, ALKE.alcaloide,
con el extracto Los resultados se presentan
ALKE. Los resultadoscomo media SEM
se presentan comode tres experimentos
media SEM de tresindependientes. * pag <0,05, **
experimentos independientes. * ppag <0,01,
< 0,05, ** p
*** pag***
< 0,01, <0,0001 en comparacin
p < 0,0001 con el
en comparacin concontrol no tratado
el control por ANOVA
no tratado de una
por ANOVA va seguido
de una por el
va seguido pormtodo de Bonferroni
el mtodo (post-hoc).
de (post-hoc) de Bonferroni.

La capacidad demostrada de GE para contrarrestar la toxicidad juglone (regular a la baja HSP -16,2) y para
La capacidad demostrada de GE para contrarrestar la toxicidad juglone (regular a la baja HSP- 16.2) y para
hasta de regular csped -3 refuerza la hiptesis de que el extracto promueve eficazmente la actividad antioxidante in vivo. tratamiento
hasta de regular csped- 3 refuerza la hiptesis de que el extracto promueve eficazmente la actividad antioxidante in vivo. tratamiento
ALKE tambin promovi un aumento en la expresin de SOD-3 :: GFP, pero no influy en el patrn de expresin de HSP -16,2 ::
ALKE tambin promovi un aumento en la expresin de SOD-3 :: GFP, pero no lo hizo influir en el patrn de expresin de HSP- 16.2 :: GFP.
GFP. Aunque es similar, el efecto promovido por GE parece ms interesante respecto de la actividad antioxidante del extracto de
Aunque es similar, el efecto promovido por GE parece ms interesante respecto de la actividad antioxidante del extracto de alcaloides.
alcaloides.

3.5. efectos anti-envejecimiento

3.5. efectos anti-envejecimiento

La capacidad putativa de guaran para ampliar la vida til fue explorado en C. elegans de manera similar a otros extractos ricos en polifenoles
La capacidad putativa de guaran para ampliar la vida til fue explorado en C. elegans de manera similar a otros extractos ricos en
como el t verde y el t de rooibos [18,27]. Para el ensayo, los mutantes feminizadas BA17 (fem-1 (HC17), que son poco frtiles cuando se cultivan a 25
polifenoles como el t rooibos y t verde [ 18 , 27 ]. Para el ensayo, los mutantes feminizadas BA17 (fem-1 (HC17), que son poco frtiles cuando se
C, fueron seleccionados. Una extensin significativa de la esperanza de vida en un 14% se obtuvo en los gusanos tratados con 300 mg / ml GE en
cultiv a 25 C, fueron seleccionados. Una extensin significativa de la vida til en un 14% se obtuvo en los gusanos tratados con 300 g / ml de GE
comparacin a los gusanos de control no tratados ( pag -valor pag <0,0001) (Figura 4).
en comparacin con gusanos de control no tratados ( pag- valor p < 0,0001) (Figura 4 ).
medicamentos 4, 61 4, 61
2017, 2017,
medicamentos 10 de
10 14
de 14

medicamentos 2017, 4, 61 10 de 14

Figura 4. Influencia del tratamiento GE en la longevidad de los gusanos BA17 mutantes. GE 300 g / ml aument la vida til
Figura 4. Influencia del tratamiento GE en la longevidad de los gusanos BA17 mutante. GE 300 g / ml aument la vida til significativamente en
significativamente en comparacin
Figura 4. Influencia con GE
del tratamiento el grupo control. Los
en la longevidad resultados
de los gusanos se presentan
BA17 mutante. como
GE 300porcentaje de supervivencia
g / ml aument y la significacin
la vida til significativamente en
comparacin con el grupo control. Los resultados se presentan como porcentaje de supervivencia y la significacin estadstica se determin
estadstica se determin
comparacin por Log-rank
con el grupo (Mantel-Cox)
control. Los resultados sepruebas seguido
presentan de Gehan-Breslow-Wilcoxon
como porcentaje Test. **** pestadstica
de supervivencia y la significacin < 0,0001.se determin
mediante pruebas de rangos logartmicos (Mantel-Cox) seguido de Gehan-Breslow-Wilcoxon Test. **** pag <0,0001.
mediante pruebas de rangos logartmicos (Mantel-Cox) seguido de Gehan-Breslow-Wilcoxon Test. **** pag <0,0001.

La La
restriccin calrica
restriccin (CR)
calrica es es
(CR) conocido como
conocido un un
como promotor potente
promotor [ 28 ]. Con
de la vida til potente el Con
[28]. fin deelinvestigar si los gusanos
fin de investigar tratados
si los gusanos con
tratados
La restriccin calrica (CR) es conocido como un promotor de la vida til potente [28]. Con el fin de investigar si los gusanos tratados
GEcon
fueron
con sometidos
GE GE
fueron a restriccin
sometidos
fueron sometidos calricacalrica
a arestriccin
restriccin durante
calrica el curso
durante
durante eleldel experimento,
curso
curso deldel se se
midi
experimento,
experimento, selamidi
midi velocidad
la de
de la
la bomba
la velocidad
velocidad delalafaringe
de la de
bomba bomba faringe (lo
queque(lo que
de la(lofaringe
disminuira en en
disminuira caso
disminuira en de de
caso CR).
caso de La La
CR).
CR).actividad de de
Laactividad
actividad bombeo
de sesese
bombeo
bombeo obtuvo en
obtuvo
obtuvo GE
en en
GEGEtratadosy ynono
tratados
tratados tratados
ytratados
no gusanos
tratados gusanos
gusanos N2N2
N2 (en (en(en
peso)
peso) enen
enpeso)
el da el
5, da 5, de
elyda
8 10 8 y8la10
5, dede
y 10 la la
edad adulta.
edadedad LosLos
adulta. resultados
adulta. Los obtenidos
resultados
resultados indican
obtenidos
obtenidos unun
indican
indican efecto
unefectopositivo
efectopositivo
positivode de
GEGE
GE aaloloalargo
largo dede
lo largo todos
todos
de loslos
todos perodos
perodos
los dede
observacin.
de observacin.
perodos LaLaactividad
La actividad
observacin. de dede
actividad
bombeo
bombeo deldel
bombeo del
grupo grupo
grupo tratado
tratado
tratadoGEGEGEfue
fue fue
60% 60%
60% ms
ms alto
alto
ms enen
alto elelda
en elda 1010
10
da enen
en comparacin
comparacin con
comparacin elel
grupo
concon control
grupo no tratado
control
el grupo controlno no ( pag( -valor
tratado
tratado pag-
( pag< pag<<0,0001)
valor
-valor < pag <0,0001)
(Figura 5).
(Figura 5).
p < 0,0001) (Figura 5 ).

Figura Figura
5. velocidad de bombeo
5. velocidad farngea
de bombeo en en
farngea loslos
gusanos
gusanoswt
wtN2
N2despus deltratamiento
despus del tratamiento GE.
GE. El tratamiento
El tratamiento con300
con GE GEg 300 g / ml significativamente
/ ml atenu
atenu significativamente
el descenso asociado a la edad
el descenso en la
asociado funcin
a la muscular
edad en la funcinde la faringe.
muscular de laLos datos
faringe. sedatos
Los presentan comocomo
se presentan media SEM.
media ** p**<pag
SEM. 0,01, *** p***
<0,01,
< 0,0001
pag

relacionado
Figura 5.con
<0,0001 el control
velocidad de por
relacionados conun ANOVA
el control
bombeo porde
farngea undos
en losvas.
ANOVA de dos wt
gusanos vas.
N2 despus del tratamiento GE. El tratamiento con GE 300 g / ml atenu

significativamente el descenso asociado a la edad en la funcin muscular de la faringe. Los datos se presentan como media SEM. ** pag <0,01, *** pag
No se observ deterioro de la actividad de bombeo de la faringe entre GE tratado gusanos; en cambio, la velocidad de bombeo fue
No<0,0001 relacionados
se observ conde
deterioro el control por un de
la actividad ANOVA de dos
bombeo devas.
la faringe entre GE tratado gusanos; en cambio, la velocidad de bombeo fue
significativamente mayor en comparacin con el marcado entre el control no tratado. Suponemos que el efecto extensin de vida de GE no
significativamente mayor en comparacin con que anot entre el control no tratado. Suponemos que el efecto extensin de vida de GE no
se debe a la influencia CR. Por otra parte, la atenuacin de la disminucin de la funcin muscular relacionada con la edad, evalu en C.
se debe aNo CRseinfluencia.
observ deterioro de la actividad
Por otra parte, de bombeo
la atenuacin de la faringedeentre
de la disminucin GE tratado
la funcin gusanos;
muscular en cambio,
relacionada con lala edad,
velocidad de en
evalu bombeo
C. fue
elegans por la actividad de la faringe, es indicativo de la propiedad anti-envejecimiento de los extractos de guaran [29,30]. C. elegans
significativamente
elegans mayorlaenfaringe,
comparacin con el de
marcado entre elanti-envejecimiento
control no tratado. deSuponemos que el guaran
efecto extensin de vida de GE no
por la actividad
estructura muscularde esdeterioro
faringe sufre un indicativo la propiedad
progresivo y disminucin los extractos
de la funcin con la edad, de maneradesimilar a la [ 29 , 30 ]. C. elegans estructura
se debe a la influencia CR. Por otra parte, la atenuacin de la disminucin de la funcin muscular relacionada
muscular faringe sufre deterioro progresivo y disminucin de la funcin con la edad, de manera similar a la sarcopenia, con la edad, evalu enalC.
que acompaa
elegans por humano;
envejecimiento la actividad de la parece
el dao faringe,ser
es indicativo de la propiedad
al menos parcialmente, el anti-envejecimiento
resultado de los extractos de guaran [29,30]. C. elegans
estructura muscular faringe sufre un deterioro progresivo y disminucin de la funcin con la edad, de manera similar a la
medicamentos 2017, 4, 61 11 de 14

medicamentos 2017, 4, 61 11 de 14

de una tensin de por vida promovido por el aumento de la generacin de ROS debido a la alta demanda de ATP de esos msculos [ 31 ].
sarcopenia que acompaa el envejecimiento humano; el dao parece ser al menos parcialmente el resultado de un esfuerzo de toda la vida promovido por el
medicamentos 2017, 4, 61 11 de 14
aumento de la generacin de ROS debido a la alta demanda de ATP de esos msculos [31].
Los estudios genticos con C. elegans mostr una asociacin positiva entre retrasar el envejecimiento y la neuroproteccin [ 32 ];
Los estudios
sarcopenia genticos
que acompaa con C. elegans
el envejecimiento mostr
humano; una asociacin
el dao parece positiva
ser al menos entre el
parcialmente retrasar el de
resultado envejecimiento y la neuroproteccin
un esfuerzo de toda la vida promovido por el
correspondientemente, el nmero de agregados polyQ40, obtuvo usando el AM141 cepa mutante ([rmIs133 (unc-54p :: Q40 :: YFP)]), fue
[32]; correspondientemente,
aumento el nmero
de la generacin de ROS debido a de agregados
la alta polyQ40,
demanda de obtuvo
ATP de esos usando
msculos el AM141 cepa mutante ([rmIs133 (unc-54p :: Q40 ::
[31].
significativamente menor entre GE tratada gusanos comparacin con el grupo control no tratado. Cuando se ensay a una concentracin
YFP)]), Los
fue significativamente
estudios genticosmenor
con C.entre GE tratada
elegans gusanos
mostr comparacin
una asociacin conentre
positiva el grupo control
retrasar no tratado. Cuando
el envejecimiento se ensay a una
y la neuroproteccin
de 300concentracin
g / ml GE, de
el nmero
300 mg /de
ml agregados fue de
30% menor que en elmenor
grupoque
de control correspondiente (ajustado pag- valor <0,0001)
[32]; correspondientemente, GE,
el el nmero
nmero agregados
de agregados fue 30%
polyQ40, obtuvo usando enAM141
el el grupo de control
cepa mutante correspondiente
([rmIs133 (unc-54p :: Q40pag
(ajustado :: -valor
(Figura<6 ); los datos apoyan la propiedad anti-envejecimiento de guaran.
YFP)]), fue significativamente menor entre GE tratada gusanos comparacin con el grupo control no tratado. Cuando se ensay a una
0,0001) (Figura 6);
concentracin delos
300datos
mg /apoyan
ml GE,laelpropiedad
nmero deanti-envejecimiento
agregados fue 30%de guaran.
menor que en el grupo de control correspondiente (ajustado pag -valor
<
0,0001) (Figura 6); los datos apoyan la propiedad anti-envejecimiento de guaran.

La Figura 6. acumulacin agregado PolyQ40 :: YFP en gusanos mutantes AM141 despus del tratamiento GE. Worms tratados con GE exhibieron
La Figura 6. acumulacin agregado PolyQ40 :: YFP en gusanos mutantes AM141 despus del tratamiento GE. Worms tratados con GE exhibieron

nmeros significativamente ms bajos de polyQ40 :: agregados GFP en comparacin con el grupo control. Los datos se presentan como media
signi fi cativamente nmeros ms bajos de polyQ40 :: agregados GFP en comparacin con el grupo control. Los datos se presentan como media SEM.
SEM. * pag <0,05, ** pag <0,01 y *** pag <0,0001 relacionados con el control por un ANOVA de una va seguido de Bonferroni (post-hoc).
La Figura 6. acumulacin agregado PolyQ40 :: YFP en gusanos mutantes AM141 despus del tratamiento GE. Worms tratados con GE exhibieron
* p < 0,05, ** p < 0,01 y *** p < 0,0001 relacionado con el control por un ANOVA de una va seguido de Bonferroni (post-hoc).
nmeros significativamente ms bajos de polyQ40 :: agregados GFP en comparacin con el grupo control. Los datos se presentan como media

SEM. * pag <0,05, ** pag <0,01 y *** pag <0,0001 relacionados con el control por un ANOVA de una va seguido de Bonferroni (post-hoc).
Bridi et al. [33] demostraron el efecto vida til de prolongacin de cafena en C. elegans. Sin embargo, el efecto mencionado fue
acompaada por ]elDemostrado
Bridi et al. [ 33 desarrollo larval tarda vida
el efecto y tasa dede
til fertilidad. Sutphinde
prolongacin et cafena
al. [34] inform de la capacidad
en C. elegans. de la cafena
Sin embargo, para mencionado
el efecto atenuar los fue
marcadores asociados con la edad, incluyendo la formacin de placas polyQ40 y destac que la capacidad de la cafena para ampliar la
C. elegans.
acompaada Bridi
por elet desarrollo
al. [33] demostraron el efecto
larval tarda vida
y tasa detil de prolongacin
fertilidad. Sutphin de cafena
et al. [ 34 ]en
Inform de la Sin embargo,
capacidad deellaefecto mencionado
cafena fue los
para atenuar
vida til es dependiente de la temperatura; la sustancia acortado significativamente la vida til de los gusanos de tipo salvaje cultivado a
acompaada por el desarrollo
marcadores asociados con la edad,larval tarda y la
incluyendo tasa de fertilidad.
formacin SutphinpolyQ40
de placas et al. [34]y inform
puso dederelieve
la capacidad
que lade la cafenade
capacidad para atenuar los
la cafena para
25 C. extracto
marcadores de guaran
asociados con tiene un alto
la edad, contenido
incluyendo de cafenade
la formacin y tambin exhibi una
placas polyQ40 vida til
y destac que efecto y la atenuacin
la capacidad de los para
de la cafena marcadores
ampliar de
la
ampliar la vida til es dependiente de la temperatura; la cativamente sustancia signi fi acorta la vida til de los gusanos de tipo salvaje
envejecimiento en nuestrodeestudio
vida til es dependiente prolongando;
la temperatura; sin embargo,
la sustancia ningn
acortado deterioro significativo
significativamente la vida de
tilladetasa
los de fertilidad
gusanos de durante todocultivado
tipo salvaje el periodo
a
cultivado a 25 extracto de C. Guarana tiene un alto contenido de cafena y tambin exhibi una vida til efecto y la atenuacin de los
frtil
25 seC.observ
extracto(Figura 7). tiene un alto contenido de cafena y tambin exhibi una vida til efecto y la atenuacin de los marcadores de
de guaran
marcadores de envejecimiento en nuestro estudio prolongando; sin embargo, no se observ deterioro signi fi cante en la tasa de fertilidad
envejecimiento en nuestro estudio prolongando; sin embargo, ningn deterioro significativo de la tasa de fertilidad durante todo el periodo
durante todo el perodo frtil (Figura 7 ).
frtil se observ (Figura 7).

La Figura 7. tamao de la camada de gusanos N2 (en peso) despus del tratamiento GE. El tratamiento con GE 300 g / ml no tuvo ningn efecto sobre la

se
actividad de la puesta de huevos. Los resultados se expresan como la media SEM de tres experimentos independientes. Los grupos de tratamiento

comparan con el control no tratado por ANOVA de dos vas.

La Figura 7. tamao de la camada de gusanos N2 (en peso) despus del tratamiento GE. El tratamiento con GE 300 g / ml no tuvo ningn efecto sobre la
La Figura 7. tamao de la camada de gusanos N2 (en peso) despus del tratamiento GE. El tratamiento con GE 300 g / ml no tuvo ningn efecto sobre la actividad
actividad de la puesta de huevos. Los resultados se expresan como la media SEM de tres experimentos independientes. Los grupos de tratamiento se
de puesta de huevos. Los resultados se expresan como media SEM de tres experimentos independientes. Los grupos de tratamiento se comparan con el control no
comparan con el control no tratado por ANOVA de dos vas.
tratado por ANOVA de dos vas.
medicamentos 2017, 4, 61 12 de 14

La cafena podra contribuir a las propiedades antioxidantes y longevidad de promocin de guaran, pero no se espera que sea el
compuesto activo nico en el que el extracto. Los alcaloides de purina pueden jugar un papel sinrgico en la actividad antioxidante de
guaran junto con los componentes fenlicos antioxidantes conocidos, incluyendo taninos (catequina, epicatequina y sus polmeros) y
proantocianidinas.

4. Conclusiones

En resumen, el presente trabajo ha mostrado una actividad antioxidante y anti-envejecimiento sustancial de guaran en C. elegans e
indica una nueva utilizacin para la fruta que ya es bien conocido debido a sus efectos estimulantes. El extracto acuoso de guaran
aparentemente puede mejorar la resistencia al estrs a travs de una va, que es dependiente de la actividad del factor de transcripcin
DAF-16 / FOXO. Adems, el extracto puede extender la vida til y atenuar los marcadores de envejecimiento, tales como la disminucin
relacionada con la edad de la funcin muscular, evaluado a travs de la actividad de la faringe y la formacin de agregados polyQ40. Sin
embargo, se necesitan ms estudios para comprender los mecanismos subyacentes e identificar los posibles beneficios de la salud del
consumo de guaran fi en todo el proceso de envejecimiento humano.

Expresiones de gratitud: HP agradece al Consejo Nacional de Tecnolgico y Scientific Desarrollo (CNPq) para la beca de doctorado.

Contribuciones de autor: HP y MR escribi el documento, diseado y realizado los experimentos, se analizaron los datos; TR y ER a cabo la
caracterizacin qumica del extracto; XW escribi el documento y se analiz datos; MW concebido y diseado el proyecto.

Los conflictos de inters: Los autores declaran no tener conflictos de intereses.

referencias

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