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Esterilizacin: eliminacin o muerte de todos los microorganismos que contiene un objeto o sustancia, y que se encuentran
acondicionados de tal forma que no pueden contaminarse nuevamente.
Sanitizante: agente que disminuye la carga microbiana total a un nivel el cual es seguro para la salud de la poblacin. Slo es
aplicable sobre objetos inanimados.
Desinfectante: agente que elimina la carga microbiana total en superficies inanimadas tales como habitaciones.
Antisptico: agente que controla y reduce la presencia de microorganismos potencialmente patgenos sobre piel y/o mucosas
(slo pueden aplicarse externamente sobre seres vivos).
Ag e n te s a n ti b a c t e r i a n o s e s te ri l i z a n te s y/ o d e s i n fe c t a n t e s
1. Provocan prdida de la viabilidad en los microorganismos
Fsicos (calor, radiaciones)
Qumicos (xido de etileno, formaldehdo, agentes oxidantes, soluciones antispticas.)
Calor Hmedo
El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se deben principalmente a dos razones:
El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas (DNA, RNA, protenas, etc) son producidas por
reacciones que eliminan agua. Por lo tanto, reacciones inversas podran daar a la clula a causa de la produccin de
productos txicos. Adems, las estructuras secundarias y terciarias de las protenas se estabilizan mediante uniones puente de
hidrgeno intramoleculares que pueden ser reemplazadas y rotos por el agua a altas temperaturas.
El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire. Por lo que, los materiales
hmedos conducen el calor mucho ms rpidamente que los materiales secos debido a la energa liberada durante la
condensacin.
El autoclave es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios para esterilizar cultivos y soluciones que no formen
emulsiones con el agua y que no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 C. Una temperatura de 121 C (una atmsfera de
sobrepresin) con un tiempo de exposicin mayor a 15 minutos sirve para destruir organismos formadores de esporas.
Temperatura
Presin [C]
[atm] Descarga completa del Descarga de 2/3 del Descarga de 1/2 del Sin descarga del
aire aire aire aire
Ventajas
Rpido calentamiento y penetracin
Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo
No deja residuos txicos
Hay un bajo deterioro del material expuesto
Econmico
Desventajas
No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua
Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos
Calor Seco
El calor seco produce desecacin de la clula, efectos txicos por niveles elevados de electrolitos, procesos oxidativos y fu sin de
membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en contacto con
stos. El aire es mal conductor del calor, y el aire caliente penetra ms lentamente que el vapor de agua en materiales porosos. La
accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la actividad de agua del
medio es baja. Esto se debe a que las protenas se estabilizan mediante uniones puente de hidrgeno intramoleculares que son ms
difciles de romper por el calor seco.
La estufa de esterilizacin es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por calor seco. Se requiere mayor temperatura y
tiempo de exposicin que el autoclave. La temperatura vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tiempos de exposicin. A
140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin, mientras que a 160C se requieren al menos 2 horas de exposicin.
Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodn no pueden ser esterilizados a ms de 160C.
Ventajas
No es corrosivo para metales e instrumentos.
Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no voltiles.
Desventajas
Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor.
Existen otras formas de eliminar microorganismos por calor seco. La incineracin se utiliza para destruir material descartable
contaminado. La accin directa de la llama elimina a los microorganismos cuando se lleva al rojo el material de metal como ansas,
lancetas, agujas de diseccin.
Radiaciones
Su accin depende de:
Tipo de radiacin
Tiempo de exposicin
Dosis
Ionizantes
Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes
esenciales para la viabilidad de los microorganismos.
Tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles (termosensibles) como jeringas descartables, sondas,
etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos.
No se utilizan para medios de cultivo o soluciones proteicas porque producen alteraciones de los componentes.
Ultravioletas
Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos debido a que forman dmeros de pirimidinas adyacentes que inducen errores
en la duplicacin y por lo tanto la prdida de la viabilidad de las clulas.
Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.
Alcoholes
Iodo
Organo Mercuriales
Colorantes
Aldehdos
Compuestos Fenlicos
Acidos y Alcalis
Antispticos
Alcoholes
Lesionan la membrana celular de los microorganismos y desnaturalizan protenas celulares. Desorganizan la estructura fosfolipdica.
No destruyen esporas y tienen una accin germicida lenta. Los alcoholes de cadena corta tienen un efecto nocivo mayor que lo s de
cadena larga.
Se utilizan en concentraciones del 50 al 70%. Los ms utilizados son el etanol e isoproplico.
Iodo
Es un agente oxidante que modifica grupos funcionales de protenas y cidos nucleicos. Inactiva protenas y enzimas por oxidacin de los
grupos -SH a S-S, pudiendo atacar tambin grupos amino, indoles, etc.
Se utiliza como desinfectante de la piel (tintura de iodo: yodo molecular 2% y yoduro de sodio 2% en alcohol), aunque es irritante.
Es efectivo contra esporas en una concentracin de 1600 ppm de iodo libre.
Organo Mercuriales
Estos tipos de compuestos se combinan con los grupos -SH de las protenas, inactivando enzimas. Dentro de los mercuriales orgnicos
se encuentran el metafen y el mertiolate.
Perxido de Hidrgeno
Es un antisptico dbil, con capacidad oxidante y formadora de radicales libres.
Actualmente, el perxido de hidrgeno gaseoso se est utilizando como desinfectante de superficies o descontaminante de gabinetes
biolgicos debido a que no posee las propiedades txicas y cancerigenas del xido de etileno y formaldehdo.
Colorantes
Interfieren en la sntesis de cidos nucleicos y protenas (acridina) o interfieren en la sntesis de la pared celular (derivados del
trifenilmetano). La acridina se inserta entre dos bases sucesivas del DNA separndolas fsicamente. Esto provoca errores en la
duplicacin del DNA. Los derivados del trifenilmetano (violeta de genciana, verde de malaquita y verde brillante) bloquean la conversin
del cido UDP-acetilmurmico en UDP-acetilmuramil-pptido.
Violeta de Genciana
D e s i n fe c ta n te s y/ o Es te ri l i z a n te s
Cloro
El cloro, los hipocloritos y las cloraminas son desinfectantes que actan sobre protenas y cidos nucleicos de los microorganismos.
Oxidan grupos -SH, y atacan grupos aminos, indoles y al hidroxifenol de la tirosina.
El producto clorado ms utilizado en desinfeccin es el hipoclorito de sodio (agua lavandina), que es activo sobre todas las bacterias,
incluyendo esporas, y adems es efectivo en un amplio rango de temperaturas.
La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se debe al cido hipocloroso (HClO) y al Cl 2 que se forman cuando el hipoclorito es
diluido en agua. La actividad germicida del ion hipocloroso es muy reducida debido a que por su carga no puede penetrar fcilmente en la
clula a travs de la membrana citoplamtica. En cambio, el cido hipocloroso es neutro y penetra fcilmente en la clula, mientras que el
Cl2 ingresa como gas.
El hipoclorito de sodio se comercializa en soluciones concentradas (50-100 g/l de Cloro activo), a pH alcalino y en envases oscuros que
favorecen su estabilidad, pero es inactivo como desinfectante. A causa de sto, es que deben utilizarse soluciones diluidas en agua
corriente (que tiene un pH ligeramente cido), con el objeto de obtener cido hipocloroso. Generalmente, se utilizan soluciones con una
concentracin del 0.1-0.5% de Cloro activo.
Su actividad est influida por la presencia de materia orgnica, pues puede haber en el medio sustancias capaces de reaccionar con los
compuestos clorados que disminuyan la concentracin efectiva de stos.
Aldehdos
Son agentes alquilantes que actan sobre protenas, lo que provoca modificacin irreversible de enzimas e inhibicin de la actividad
enzimtica (Adicin nucleoflica de grupos -NH2 y -SH). Se utilizan como desinfectantes y esterilizantes. Destruyen esporas.
El glutaraldehdo es el nico esterilizante efectivo en fro. El formaldehdo como gas se utiliza para descontaminar edificios, ambientes,
etc. El formaldehdo gaseoso se obtiene por calentamiento del paraformaldehdo (OH (CH2O)n-H), lo que produce las despolimerizacin
de este compuesto y la liberacin de formaldehdo.
El formaldehdo tiene la desventaja de ser muy irritante y perder actividad en ambientes refrigerados.
Compuestos Fenlicos
Son desinfectantes que provocan lesiones en la membrana citoplasmtica porque desordenan la disposicin de las protenas y
fosfolpidos. Esto causa filtracin de compuestos celulares, inactivacin de enzimas y lisis.
El fenol no es usado a menudo como desinfectante por su olor desagradable, por ser muy irritante y por el residuo que queda luego de
tratar las superficies.
Los derivados del fenol ms utilizados son el hexaclorofeno (compuesto difenlico) y los cresoles (alquil fenoles). Estos son muy efectivos
a bajas concentraciones contra formas vegetativas de bacterias. No son efectivos contra esporas.
Oxido de Etileno
Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos,
hidroxilos, etc.
Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica. Sirve para esterilizar material termosensibles como el
descartable y plstico, equipos electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, etc. Es muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo,
y adems cancerigeno.
Controles fisico-qumicos
Controles de Esterilizacin Monitorean el proceso de esterilizacin
Controles biolgicos
Controles de Esterilizacin
Son controles que se realizan sobre el mtodo de esterilizacin. Monitorean o controlan si el proceso de esterilizacin funciona correctament
Controles Biolgicos
Utiliza indicadores biolgicos como controles del proceso de esterilizacin. Estos indicadores son preparaciones estandarizadas de
microorganismos relativamente resistentes al mtodo de esterilizacin que se emplea. Los indicadores se procesan en forma conjunta con e
material a esterilizar y el nmero de microorganismos presentes en el indicador es mayor que el que se encuentra en el material.
Una vez concluido el proceso de esterilizacin los indicadores son inoculados en medios de cultivo adecuados e incubados durante
determinado perodo de tiempo. Si el proceso de esterilizacin fue correctamente empleado y funciona bien no debe observarse desarrollo d
indicador incubado.
Controles fisicoqumicos
Termocuplas: son mtodos directos que registran la temperatura a la que se desarrolla la esterilizacin.
Sustancias de punto de fusin conocido: se utilizan en autoclaves generalmente, son sustancias con un punto de fusin similar a
de la temperatura de esterilizacin del proceso. Estas sustancias estn mezcladas con un colorante y al fundir indican si se alcanz
la temperatura ptima de esterilizacin y el tiempo que se mantuvo.
Controles de Esterilidad
Permite controlar en forma probabilstica si el material qued completamente esterilizado pues se testea un porcentaje representativo de to
el material.
Transferencia Directa a Medios de Cultivo
Se transfiere una parte de la muestra a medios de cultivos apropiados que permitan el crecimiento de cualquier contaminante.
Tioglicolato para anaerobios y aerobios (37C)
Tripticasa-Soja para aerobios (25C)
Las muestras representativas se incuban en estos medios durante un perodo de 14 das, al cabo del cual no se debe observar ningn tipo
crecimiento.
Puede ocurrir que la muestra no se encuentre estril pero que no se produzca crecimiento durante la incubacin por algn motivo inherente
medio o a la muestra, por ejemplo presencia de algn inhibidor, etc.
Test de Promocin del Crecimiento
Es un testigo del control de esterilidad. Son testigos que se utilizan para los medios de crecimiento del control ya que estos medios tienen
capacidad de promover el crecimiento. Para estos testigos se utilizan microorganismos con exigencias nutricionales. Los medios deben ser
inoculados con un bajo nmero de microorganismos, se incuban durante 7 das, al cabo de los que se debe observar un abundante
crecimiento.
Test de Bacteriostasis
Es un control que se realiza para determinar si la muestra supuestamente estril no posee propiedades bacteriostticas. De esta forma se
previenen falsos negativos pues no se produce crecimiento habiendo en la muestra microorganismos viables. Para este test se toman los
medios de cultivo con microorganismos de ensayo y se siembran en las muestras a testear. Se incuban durante 7 das. Si se produce
crecimiento esto indica que el material no contena inhibidores.
Cuando el log del nmero de sobrevivientes es menor a cero se habla de probabilidad de sobrevivencia. Por lo tanto cuando el valor
la probabilidad sea -1 significa que hay 0.1 microorganismos viables por unidad, o correctamente expresado una unidad contaminada p
cada 10 unidades idnticas procesadas.
Un producto se considera estril cuando la probabilidad de encontrar unidades contaminadas es menor o igual a 10 -6, esto es u
unidad contaminada cada milln de unidades idnticas procesadas.
A mayor nmero de microorganismos y/o resistencia de la poblacin se necesitar mayor tiempo de esterilizacin, o lo que es lo mismo may
tiempo para alcanzar la probabilidad de sobrevivencia.
Durante el proceso de esterilizacin por calor debe tenerse en cuenta que el tiempo de esterilizacin comienza cuando se ha alcanzado
temperatura ptima en el interior del aparato (autoclave o estufa) y que generalmente el contenido de un autoclave puede requerir tiemp
ms largos para alcanzar la temperatura de esterilizacin.
La esterilizacin, destruccin de todas las formas de vida microscpicas, incluidos virus y esporas.
La esterilizacin, operacin de mercado abierto que lleva a cabo el banco central de una nacin
para neutralizar las posibles consecuencias adversas de las operaciones de divisas.
Mtodos qumicos[editar]
Los mtodos qumicos de esterilizacin son aquellos que involucran el empleo de sustancias letales para los
microorganismos, tales como el xido de etileno y el perxido de hidrgeno. El uso de este mtodo es muy limitado
para la Industria Alimentaria pero muy utilizado en otras industrias como la farmacutica.
Mtodos fsicos[editar]
Los mtodos fsicos son aquellos que no involucran el empleo de sustancias letales para los microorganismos, sino
procedimientos fsicos como la radiacin ionizante, el calor o la filtracin de soluciones con membranas que impiden
el paso de microorganismos, incluyendo virus. El mtodo ms usado en esta categora es el calor que mata
microorganismos por la desnaturalizacin de las enzimas; el cambio resultante en la forma tridimensional de las
protenas las inactiva. La resistencia al calor vara entre los diferentes microorganismos; esta diferencia puede ser
expresada como el punto trmico de muerte (PTM) el cual se define como la temperatura ms baja a la cual todos
los microorganismos en una suspensin lquida sern eliminados en 10 minutos.
Otro factor que debe ser considerado en una esterilizacin es el tiempo requerido. Este puede expresarse como el
tiempo de muerte trmica (TMT), el cual es el tiempo mnimo para que toda bacteria en un cultivo lquido en
particular sea exterminada a una temperatura determinada.
Ambos PTM y TMT son guas tiles que indican la severidad del tratamiento requerido para matar a una poblacin
de bacterias dada. El tiempo de reduccin decimal (TRD, o valor D) es el tercer concepto relacionado con la
resistencia bacteriana al calor. TRD es el tiempo, en minutos, en el cual el 90 % de una poblacin bacteriana a cierta
temperatura ser eliminada los tratamientos, trmicos en resumen,son mtodos para conservar los alimentos.
Mtodos trmicos[editar]
Los mtodos trmicos suelen englobar todos los procedimientos que tienen entre sus fines la destruccin de los
microorganismos por el calor. Los mtodos son tanto la pasteurizacin como la esterilizacin, cuya finalidad principal
es la destruccin microbiana, como al escaldado y a la coccin, procesos en los que tambin se consigue una cierta
reduccin de la flora microbiana, pero que sus objetivos principales son la variacin de las propiedades fsicas.
121 360
140 180
150 150
160 120
170 60
180 30
Calor hmedo[editar]
Las condiciones de temperatura y presin de un proceso de esterilizacin por vapor de agua en un autoclave van de
121 C a 134 C y 275-350 kPa. Para el tratamiento de residuos hospitalarios se emplean tiempos de operacin entre
20 y 30 minutos. El mtodo de esterilizacin por autoclave utiliza pruebas microbiolgicas, las cuales se ingresan
dentro del ciclo de operacin y posteriormente por medio de una incubadora se busca detectar si hay crecimiento
de microorganismos. Uno de los microorganismos utilizados en estas pruebas es el Bacillus stearothermophilus.
Calor seco[editar]
Los agentes transmisibles (como esporas, bacterias y virus) pueden eliminarse a travs de la
esterilizacin, diferente de la desinfeccin, que nicamente elimina los organismos capaces de causar
enfermedades.
En un horno de aire seco, son necesarias dos horas a 160 C para eliminar las esporas de la bacteria
Clostridium Botulinium (relacionada con la comida enlatada). Mediante calor saturado, se pueden eliminar
las mismas esporas en solo cinco minutos a 121 C, lo que demuestra que el calor hmedo es ms eficaz
que el calor seco.
Para ser eficaces contra bacterias y virus formadores de esporas, los autoclaves deben:
Hacer que el vapor entre en contacto directo con el material que se desea esterilizar (as, la carga de los
objetos es muy importante).
Crear el vaco para desplazar todo el aire presente originariamente en el autoclave y sustituirlo por vapor.
Implementar un programa de control bien diseado para la evaluacin del vapor y la refrigeracin, de
modo que la carga no se deteriore.
La eficiencia del proceso de esterilizacin depende de dos factores principales. Uno de ellos es el tiempo
de muerte trmica, es decir, el tiempo que debe exponerse a los microbios a una temperatura dada para
acabar con ellos. El segundo factor es el punto de muerte trmica, la temperatura a la que perecen todos
los microbios de una muestra.
El vapor y la presin garantizan que se transmite suficiente calor a los organismos para acabar con ellos.
Se utiliza una serie de pulsos de presin negativa para aspirar todas las posibles bolsas de aire, mientras
que la penetracin del vapor se maximiza mediante la aplicacin de una sucesin de pulsos positivos.
El rendimiento del proceso puede confirmarse mediante la supervisin de los cambios de color en la cinta
indicadora que suele aplicarse sobre los paquetes o los productos que se introducen en el autoclave.
Tambin pueden utilizarse indicadores biolgicos, como Attests, que contiene esporas de Bacillus
Sterothermophilus, que se encuentran entre los organismos ms resistentes que debe destruir un
autoclave. Despus de una tanda en el autoclave, el cristal interno de la ampolla del Attest se rompe, con
lo que las esporas penetran en un medio lquido diferencial. Si el autoclave ha destruido todas las esporas,
el lquido permanece de color azul. De lo contrario, las esporas se metabolizarn y provocarn un cambio
al color amarillo despus de dos das de incubacin a 56 C.
El sistema de control debe, por tanto, aportar flexibilidad en la forma de conseguir el control preciso y
repetido del entorno de esterilizacin e incluir las funciones siguientes:
Preciso control de lazo con programacin de perfiles de puntos de consigna.
Sistema de gestin de recetas para facilitar la configuracin.
Control secuencial para estrategias de control complejas.
Recogida segura de datos on-line del sistema de esterilizacin para analizarlos.
Pantalla local de operario con grficos ntidos y acceso controlado a parmetros.