PRACTICA N2 TINCION EN ENDOSPPORAS POR LA TECNICA DE

SCHAEFFER Y FULTON

I. Introduccin:
Existen diversos tipos de esporas microbianas, pero la espora bacteriana tiene
esencial importancia ya u q so organelos de gran resistencia que se producen en
el interior de la clula, por lo que reciben el nombre de endosporas.
La endospora es una estructura compuesta de dipicolinato de calcio en el centro,
dentro de su compleja cubierta que constan de siete capas que consta de mureina.
Pocos gneros de bacterias son capaces de tomar endosporas, siendo los
principales: Bacillus y Clostridium.La esporulacin de las bacterias o es debida a
condiciones desfavorables del medio, sino que se forman en cierto desarrollo de
la clula.
La funcin de las endospermas no es la reproduccin, ya que de un bacilo que
forma una espora solo surge una bacteria por su germinacin.Tanto el tamao
como la forma y posicin de a espora en la clula bacteriana son caracare
relativamente constante de cada especie, ya que poseen cierto valor para
distinguir entre si son diferentes tipos de bacterias esporuladas.La espora tambin
puede ser al tamao de la espora o incluso ms grande que esta

II. Objetivos:
Mostrar mediante tincin y observacin microscpica la presencia de esporas
en la bacteria

III. Contenido:
Las endsporas bacterianas son formas de perdurabilidad de ciertos grupos de bacterias
frente al calor, la desecacin, la radiacin y las influencias qumicas. Contienen un
genoma y toda la maquinaria metablica esencial. La termorresistencia de las
endsporas es una de sus principales caractersticas. Mientras que las bacterias o las
formas vegetativas de las bacterias esporuladoras sometidas a 80 C durante diez
minutos (pasteurizacin) mueren, las endsporas sobreviven e incluso soportan un
calentamiento superior. Para eliminarlas son necesarias tcnicas de esterilizacin.
Esta caracterstica permite un fcil mtodo de aislamiento de las bacterias esporuladas,
calentando el material donde se supone que existen esporas a 100 C durante 10
minutos mueren todas las bacterias y, seguidamente, las esporas sobrevivientes se
hacen germinar y crecer en el medio de cultivo adecuado. Son formadoras de esporas
las bacterias bacilares Gram positivas, entre ellas, las pertenecientes al gnero Bacilos
son aerbicas y las del gnero Clostridium anaerbicas.

La Estructura de la endospora:
La resistencia de una endospora se puede explicar en parte por su estructura celular
particular. La capa proteica externa que rodea la espora proporciona mucha de la
resistencia qumica y enzimtica. Debajo de la capa reside una capa muy gruesa de
peptidoglicano especializada llamada la corteza. La formacin apropiada de la corteza
es necesaria para la deshidratacin de la base de la espora, que ayuda en resistencia
contra temperaturas altas. La pared celular de germen reside debajo de la corteza. Esta
capa de peptidoglicano ser convertida en la pared de clula de la bacteria despus de
que la endospora germine. La membrana interna, debajo de la pared de clula de
germen, es una barrera importante de permeabilidad contra varios productos qumicos
potencialmente perjudiciales. El centro de la endospora, la corteza, existe en un estado
muy deshidratado y contiene la ADN de la clula, las ribosomas y las cantidades grandes
de cido dipicolinico. Este producto qumico puede abarcar hasta 10% del peso seco de
la espora y aparece desempear un papel en inactividad de la espora que mantiene. Las
protenas solubles en el cido pequeas (SASPs) tambin se encuentran solamente en
endosporas. Estas protenas atan y condensan la ADN, y estn firmemente responsable
por resistencia contra la luz UV y a los productos qumicos ADN dainos. Otras
estructuras y productos qumicos se asociaron a los endosporas incluyen tallos, toxinas
de cristal, o una capa externa adicional de la glicoprotena llamada el exosporo.

La posicin:
La posicin de la bacteria puede ser central, terminal o subterminal; y puede ser del
mismo tamao que la clula bacteriana, mayor o menor. En el gnero Bacillus, la espora
es de igual tamao que la clula bactriana, en el gnero Clostridium es de mayor tamao
y deforma el cuerpo bacteriano.
Grnulos de reserva o inclusiones citoplasmticas son acmulos de sustancias orgnicas
o inorgnicas que se originan dentro del citoplasma bajo determinadas condiciones de
crecimiento. Su presencia y cantidad depende de la especie bacteriana, del nivel de
actividad metablica y de la composicin del medio de cultivo. Los grnulos pueden ser
de glucgeno, de lpidos, de volutita, que son reservorios de energa en forma de
metafosfatos, de azufre, de protenas, etc.
Las endosporas son difciles de observar al microscopio debido a la impermeabilidad de
su pared que evita la entrada de las tinciones ordinarias. Mientras el resto de la bacteria
puede teirse, la endospora permanece descolorida.
Debido a esto surgi la tcnica conocida como Tincin de Moeller, que permite que se
muestre la endospora en color rojo, mientras que el resto de la clula permanece en
color azul. Otra tcnica de tincin para el estudio de la endospora, es la Tincin de
Schaffer-Fulton con la que vemos la endospora verde y la bacteria roja.

Induccin:
En condiciones favorables los bacilos de las especies esporuladoras se reproducen
indefinidamente en su forma vegetativa, la esporulacin no es una fase obligada del
ciclo de vida de la bacteria.La formacin de esporas se desencadena cuando faltan
nutrientes o se acumula un exceso de productos del metabolismo celular.Puede
inducirse la esporulacin colocando las clulas en agua destilada, la cual se produce a
expensas de las sustancias de reserva de la clula y, probablemente como consecuencia
de la ausencia de sustrato en el medio.
Avalando esta hiptesis, la formacin de esporas no se produce si dentro de las cinco
horas de puestas en agua destilada clulas vegetativas de Bacillus cereus, se agrega
glucosa al medio. La presencia de manganeso en el agua suele favorecer la esporulacin.

IV. Mtodo y procedimiento:

El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de ver con
el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el
medio que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el contraste es la utilizacin de
colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de clulas o
para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos,
esporas, cpsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc. Las clulas
generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas, proceso
llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms corriente, aunque
tambin puede fijarse con sustancias qumicas como formaldehido, cidos y alcoholes.
Despus de la fijacin, si se aade el colorante, no se producen ulteriores cambios
estruturales en el protoplasma. La fijacin se realiza habitualmente en clulas que han
sido fijadas sobre un portaobjetos, tratando despus ste con el agente fijador, y
siguiendo inmediatamente el proceso de tincin. La fijacin produce habitualmente el
encogimiento de las clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas aparezcan
mayores que lo que son realmente, de manera que las medidas de las clulas que han
sido fijadas o teidas no pueden realizarse con mucha precisin.
En este caso usamos el mtodo de tincin de SCHAEFFER-FULTON se procedi a colocar
con la punta del asa bacteriolgica una gota de solucin salina, luego se esterilizo el asa
en el mechero, se enfri y se tomo la muestra de un cultivo bacteriolgico utilizado con
muestra y se realizo el frotis. La placa se flameo hasta que se evaporara toda el agua y
se coloreo con verde de malaquita. Se flameo durante 5 minutos, adicionando colorante
cada vez que se secaba la muestra. Se lavo con agua hasta retirar el exceso de colorante
y se realizo la tincin con safranina durante un minuto. Posteriormente se lav con agua
y se sec con papel absorbente. Cubrir la solucin con solucin de contraste, safrina al
5% y dejar actuar al colorante durante un minuto y medio. Lavar a chorro del agua hasta
l el exceso de colorante, secar al aire o utilizando papel absorbente.
La muestra se rotul y observ al microscopio ptico con el objetivo de inmersin.
Finalmente se esquematizaron y anotaron los
resultados obtenidos.

V. Resultados:

VI. Conclusiones:
En conclusin a pesar que la bacteria es una estructura muy pequea, por medio de la
tincin con verde de malaquita, el cual requiri del calor para la penetracin; se pudo
observar la estructura interna de la clula bacteriana, particularmente las endosporas
Al igual que los clostridios, bacilos, son, bacterias gram-positivas que producen esporas
en forma de barra, pero estas bacterias se diferencian en que los bacilos requieren
oxgeno - son aerobios. Adems, a diferencia de los clostridios, bacilos prosperar en
ambientes diversos en todo el mundo, en ambientes fros y calientes e incluso cidas
extremas, y tienen una reputacin de tolerancia ambiental extrema. A diferencia de los
clostridios, slo dos de las 48 especies conocidas de bacilos afectan a los seres humanos.

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