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Biologia Molecular

Volume 3 - Mdulos 3 e 4 Gonalo A. de Souza Filho


Jacyara M. B. Macedo

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Gonalo A. de Souza Filho
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S729b
Souza, Gonalo A. de.
Biologia molecular. v. 3. - Gonalo A. de Souza. Rio de
Janeiro : Fundao CECIERJ, 2008.
158p.; 19 x 26,5 cm.
ISBN: 85-89200-77-9
1. Informao gentica. 2. Processamento de protenas. 3.
Genomas. I. Macedo, Jacyara M.B. II. Ttulo.

CDD: 572.8
2008/2
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Biologia Molecular Volume 3

SUMRIO Mdulo 3

Aula 24 - Regulao da expresso gnica em eucariotos I 7


Gonalo A. de Souza Filho

Aula 25 - Regulao da transcrio em eucariotos 25


Gonalo A. de Souza Filho

Aula 26 - Fluxo da informao gentica traduo I 41


Jacyara M. B. Macedo

Aula 27 - Fluxo da informao gentica traduo II 59


Jacyara M. B. Macedo

Aula 28 - Fluxo da informao gentica traduo III 79


Jacyara M. B. Macedo

Mdulo 4

Aula 29 - Processamento e endereamento de protenas 101


Jacyara M. B. Macedo

Aula 30 - Complexidade dos genomas I 115


Gonalo A. de Souza Filho

Aula 31 - Complexidade dos genomas II 133


Gonalo A. de Souza Filho

Gabarito 145
24
AULA
Regulao da expresso
gnica em eucariotos I
objetivos

Ao final desta aula, voc dever ser capaz de:


Entender as diferenas na regulao da
expresso gnica entre procariotos e
eucariotos.
Estudar as diferenas etapas nas quais a
expresso gnica de eucariotos pode ser
regulada.

Pr-requisitos
Para acompanhar mais facilmente esta aula, importante que voc tenha assimilado
as informaes sobre Regulao da expresso gnica em procariotos, Aula 23.
Adicionalmente, reveja os conceitos sobre Fluxo da informao gnica transcrio e
processamento do RNA, apresentados nas Aulas 20, 21 e 22.
Biologia Molecular | Regulao da expresso gnica em eucariotos I

INTRODUO Na Aula 23, voc teve a oportunidade de estudar os mecanismos que regulam
a expresso gnica em procariotos. Nela, voc viu que muito til clula
procaritica a capacidade de responder ao ambiente, atravs da ativao da
transcrio de determinados genes e/ou a inativao da transcrio de outros.
Tais mecanismos permitem clula adaptar-se aos diferentes ambientes e,
simultaneamente, otimizar seu gasto de energia e nutrientes, mantendo
desligados aqueles genes cujos produtos sejam desnecessrios.
Os mecanismos que voc estudou na Aula 23 esto envolvidos na resposta
de organismos unicelulares (procariotos) ao ambiente. Nesta aula, voc ter a
oportunidade de estudar os mecanismos envolvidos na regulao da expresso
gnica em eucariotos. Muitos eucariotos so organismos multicelulares,
cujos diversos tipos celulares esto organizados em tecidos e rgos. Fica
evidente, portanto, que se trata de um sistema mais sofisticado de regulao
da expresso gnica.

REGULAO DA EXPRESSO GNICA EM ORGANISMOS


MULTICELULARES

Um organismo eucarioto multicelular apresenta diferentes tipos de


clulas. Assim, se compararmos clulas do fgado, pele, neurnios, msculos
e outros tecidos de um mesmo animal, perceberemos que elas so muito
distintas, tanto nos aspectos morfolgicos quanto funcionais. Adicionalmente,
a constituio de cada tipo celular especfica (Figura 24.1).

ide
mit

Figura 24.1: Esquema ilustra-


tivo do dramtico efeito da
expresso gnica diferencial
durante o desenvolvimento
c em animais superiores. Uma
m clula, zigoto, d origem a
uma vasta gama de fenti-
pos celulares diferentes no
organismo adulto. As clulas
de msculo e de neurnio
so apenas exemplos dentre
os muitos tipos celulares que
exibem fentipos altamente
divergentes em animais.

8 CEDERJ
MDULO 3
24
Sabemos que as clulas somticas de um indivduo possuem o
mesmo conjunto de genes, pois todas se originaram a partir do mesmo

AULA
zigoto, atravs de uma sucesso de divises mitticas equacionais. Assim,
se o gentipo o mesmo em todas essas clulas, como podemos explicar
a grande diversidade de fentipos observada?
A resposta geral que podemos apresentar para tal questo
que nem todos os genes presentes no ncleo se expressam ao mesmo
tempo. De fato, estima-se que, em organismos eucariotos superiores,
apenas 10% dos genes se expressam em todas as clulas durante todo
o tempo. Os demais genes so ativados em determinados tecidos ou em
momentos especficos. Existe, portanto, uma regulao da expresso
gnica, que define os genes que sero ativados em um determinado tecido.
Adicionalmente, muitos genes so ativados apenas em certos momentos
ou perodos do desenvolvimento.
Um timo exemplo para compreendermos a complexidade da
regulao da expresso gnica em eucariotos superiores o processo de
diferenciao celular. Alm de os diferentes tipos celulares apresentarem
morfologias altamente divergentes, alguns so altamente especializados,
com funes metablicas especficas. Como exemplos, podemos
citar as hemcias, altamente especializadas em sintetizar e estocar
hemoglobina, e os neurnios, capazes de produzir neurotransmissores.
Que mecanismos definem os genes que estaro ativos em um dado tipo
celular e inativos em outros?

CASCATAS DE REGULAO DA EXPRESSO GNICA

A partir da fecundao, o processo de desenvolvimento


embrionrio segue passos claramente definidos de multiplicao e
diferenciao celular. De tal modo, aps poucas divises mitticas,
os conjuntos celulares comeam a se diferenciar para formar tecidos e
rgos distintos que, ao final, resultaro em um organismo completo
e funcional. Tal processo denominado morfognese, e envolve um
intrincado sistema de regulao gnica, cujos componentes permanecem
pouco esclarecidos.
Diversos estudos tm revelado que os processos de diferenciao
celular envolvem a participao de genes reguladores chave, que
controlam a expresso de genes especficos para a formao de cada

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Biologia Molecular | Regulao da expresso gnica em eucariotos I

rgo ou tecido. Dentre os genes ativados, por sua vez, existem alguns que
tambm possuem a funo de regular novos genes, e assim sucessivamente.
Voc pode concluir, com isso, que existe uma cascata de regulao da
expresso gnica, na qual um determinado gene pode ativar a expresso
de vrios outros, dentre os quais novos genes que passaro a regular os
futuros passos do processo. A morfognese, portanto, trata-se de um
processo coordenado de regulao seqencial da expresso gnica.
As informaes anteriores demonstram que os vrios caminhos
de diferenciao celular, desenvolvidos a partir do zigoto, seguem um
circuito pr-programado de expresso gnica, no qual um evento inicial
(fecundao) ativou um conjunto de genes. Dentre os genes ativados,
alguns tm funo reguladora, atuando tanto na ativao de um segundo
conjunto de genes quanto na inativao de genes do primeiro conjunto.
Desse segundo conjunto de genes, alguns so tambm reguladores,
ativando a expresso de um terceiro conjunto de genes, e assim por
diante. A ordem seqencial da expresso desses genes , portanto,
geneticamente pr-programada.
Outros exemplos de processos que utilizam cascatas de expresso
gnica so os mecanismos regulados por hormnios. Nesses casos, a
presena de um dado hormnio ativa a expresso seqencial de genes
especficos (cascatas especficas de resposta).

Observe que os mecanismos de expresso seqencial de genes no


ocorrem somente durante o desenvolvimento embrionrio. Cascatas de
expresso gnica continuam ativas em cada indivduo durante toda a
sua vida. Por exemplo, determinados conjuntos de genes permanecem
inativos em ns durante toda a nossa infncia, mas so ativados a partir
da puberdade. Tal evento estava geneticamente pr-programado, e
uma interessante demonstrao de que as cascatas de expresso gnica
so mecanismos essenciais em eucariotos.

CLASSIFICAO DOS GENES QUANTO SUA REGULAO

Determinados genes so continuamente expressos na maioria


das clulas. Tais genes so responsveis pela manuteno das funes
essenciais de qualquer clula, tais como transcrio, traduo, replicao
etc. A expresso destes genes denominada expresso constitutiva e os
genes so denominados genes constitutivos.

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Os demais genes so, portanto, regulados. Apesar de muitos genes
comporem circuitos de expresso geneticamente pr-programados

AULA
(cascatas de regulao), diversos outros so ativados ou reprimidos em
resposta a estmulos ambientais, tais como frio, calor, estresse, ferimentos
etc. Por terem sua expresso passvel de induo pelo ambiente, so
denominados genes induzveis.
Os genes que se expressam apenas em determinados tecidos so
chamados genes tecido-especficos e esto sob regulao tecido-especfica.
Aqueles genes que se expressam apenas durante determinados perodos
so controlados atravs de regulao temporal.

ETAPAS NAS QUAIS A EXPRESSO GNICA PODE SER


REGULADA

Agora que voc j teve a oportunidade de ver que a expresso


gnica em eucariotos regulada de diferentes maneiras para atender
a objetivos especficos, importante saber como a clula define quais
genes devem ser ativados em um dado tecido, enquanto outros devem
permanecer desligados.
Antes, porm, importante NCLEO
Cromatina
relembrar um conceito sobre expresso
gnica que foi visto na Aula 23. A o do DNA
metilases
expresso de um gene s se verifica se
gene disponvel
o polipeptdio por ele codificado for para transcrio
produzido e estiver funcional. Portanto,
para que um gene presente no ncleo
transcrito primrio
se expresse, devem ocorrer as seguintes (pr-RNAm)
etapas: transcrio, processamento do
A
transcrito, transporte para o citoplasma,
RNAm
traduo, endereamento e ativao do
polipeptdio formado (Figura 24.2).
CITOPLASMA
Figura 24.2: Esquema ilustrando as vrias etapas RNAm
envolvidas na expresso gnica em eucariotos.
A cromatina deve ser descompactada para que
os genes sejam transcritos. Em seguida, o pr-
RNAm deve ser processado para a produo
do RNAm que, aps ser transportado para o polipeptdio
citoplasma, ser interpretado para a traduo.
O polipeptdio formado durante a traduo , caes
ento, submetido a modificaes (clivagens e eamento
modificaes qumicas) e endereado ao com-
partimento celular, onde compor a protena protena ativa
com atividade biolgica.

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Biologia Molecular | Regulao da expresso gnica em eucariotos I

Esses diversos passos, essenciais para a expresso de cada gene, podem


ser individualmente regulados. Em outras palavras, se algum destes passos
sofrer interferncia, a quantidade ou a funcionalidade do produto final do
gene em questo sero tambm afetadas.
Para desenvolver a regulao gnica, a clula pode interferir em
qualquer um dos passos j descritos (Figura 24.3). Cada gene pode ser
regulado de maneira diferente quanto etapa do processo a ser ativada
ou reprimida. Determinados genes sofrem regulao em vrias etapas
de sua expresso. A seguir, estudaremos os mecanismos que podem ser
utilizados pela clula para regular cada uma destas etapas.

DNA

Citop

protena ativa inativa protena degradada

Figura 24.3: Esquema ilustrativo das diversas etapas nas quais a expresso de um
gene de eucarioto pode ser regulada.

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MDULO 3
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REGULAO DA TRANSCRIO

AULA
Este o principal nvel em que a expresso dos genes pode ser
regulada. Para a clula, regular a expresso gnica atravs do controle
da transcrio mais econmico, pois, se o gene no for transcrito,
nenhum dos passos posteriores ocorrer. Devido a sua importncia, a
regulao transcricional da expresso gnica ser abordada em maior
profundidade na prxima aula (Aula 25). A seguir, veremos apenas os
aspectos gerais dos principais mecanismos.
A regulao da transcrio pode ocorrer atravs de dois processos
distintos: Remodelamento da cromatina e Ligao de protenas
reguladoras, descritos a seguir.

Regulao da transcrio por Remodelamento da Cromatina

Na Aula 8 (Mdulo 1), voc teve a oportunidade de aprender


que o DNA de eucariotos est associado a protenas chamadas histonas,
formando estruturas denominadas nucleossomos. A interao entre
protenas histonas e outras protenas (no-histnicas), permite que
vrios nucleossomos se associem, formando estruturas maiores. Assim,
regies do DNA de eucariotos que contenham grande quantidade de
nucleossomos associados sero mais condensadas que as demais regies.
Em determinadas fases do desenvolvimento celular, interessante que
o DNA se encontre altamente condensado, por exemplo, durante a
diviso celular.
Regies condensadas do genoma so, normalmente, trans-
cricionalmente inativas. Portanto, para que ocorra a transcrio dos
genes presentes, necessrio que o DNA esteja descompactado (Figura
24.4). O nvel de condensao das diferentes regies dos cromossomos
pode ser controlado e, dessa forma, podem ser definidas as regies
que estaro disponveis para a transcrio em determinado tecido, ou
estgio de desenvolvimento do organismo. Portanto, a clula controla a
disponibilidade de tais regies atravs de mecanismos de remodelamento
da cromatina.

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Biologia Molecular | Regulao da expresso gnica em eucariotos I

gene transcrito
Figura 24.4: Esquema ilustrando a correlao entre o nvel de compactao da cro-
matina e a ocorrncia de transcrio. A regio do genoma esquematizada contm
segmentos em diferentes nveis de condensao. Em regies altamente compactadas
no se verifica transcrio. A transcrio observada em regies onde o DNA no
est compactado (DNA descondensado).

Embora os mecanismos atravs dos quais a clula controla os nveis


de condensao do cromossomo ainda permaneam pouco elucidados,
diversos trabalhos tm demonstrado a ocorrncia de modificaes na
estrutura do DNA e das protenas histonas capazes de provocar tal
controle. Tais modificaes correspondem adio, ou remoo, de
radicais molcula de DNA ou s protenas histonas a ele associadas.
Dentre essas modificaes, destacam-se os processos de metilao do
DNA e metilao, acetilao e fosforilao das protenas histonas.
Voc ter a oportunidade de estudar mais detalhadamente os
mecanismos de remodelamento da cromatina na prxima aula (Aula 25).

Regulao da Transcrio por protenas reguladoras

Como voc viu nas Aulas 20 e 21, o processo de transcrio em


eucariotos realizado por trs RNA polimerases distintas (I, II e III).
Dentre elas, a RNA polimerase II a responsvel pela produo dos
RNA mensageiros que, por sua vez, sero traduzidos para a produo

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de protenas. Na Aula 21, foi abordado que a RNA polimerase II se
acopla s regies promotoras dos genes (caixa TATA e caixa CAAT,

AULA
Figura 21.1) com o auxlio de vrios fatores de transcrio. A partir de
ento, tem incio a fase de elongao da transcrio.
Nesta aula, j vimos que em cada tecido ou condio do organismo
eucarioto um conjunto especfico de genes ser transcrito, enquanto
os demais genes permanecero inativos. Se as seqncias conservadas,
Caixa TATA e Caixa CAAT, esto presentes nos promotores de,
praticamente, todos os genes, como o complexo da transcrio define
os genes que devem ser transcritos num dado tecido?
A resposta para tal questo se baseia no fato de que o complexo
da RNA polimerase II (incluindo os fatores de transcrio) no capaz de
reconhecer e se acoplar ao promotor de um dado gene sem a ajuda
de outros componentes acessrios. Tais componentes acessrios so as
protenas reguladoras.
Elas so molculas capazes de reconhecer seqncias especficas
de um dado promotor e se ligar a ele. A partir de ento, tais protenas
realizam interaes com o complexo da RNA polimerase, viabilizando
o acoplamento dos fatores de transcrio s seqncias conservadas
previamente discutidas (caixa TATA e caixa CAAT). Assim, apenas
os genes cujos promotores esto associados a protenas reguladoras so
reconhecidos e transcritos.
As seqncias reconhecidas por esse tipo de protena so especficas
para cada promotor, e so chamadas stios de ligao. Cada promotor
contm stios especficos para a ligao de protenas reguladoras
diferentes. Conseqentemente, podemos concluir que existem muitas
protenas reguladoras diferentes em um organismo.
O processo de regulao se verifica pelo fato de que um dado gene
s ser transcrito nas clulas em que a protena reguladora, capaz de
reconhecer seu promotor, estiver presente. Nos demais tecidos, o gene
permanecer desligado.
O mecanismo de controle da transcrio via protenas reguladoras
o principal sistema de regulao da expresso gnica em eucariotos. Na
Aula 25, esse assunto ser discutido mais detalhadamente, e abordaremos
as diferentes protenas reguladoras, seus mecanismos de interao com
os promotores e com o complexo da transcrio.

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Biologia Molecular | Regulao da expresso gnica em eucariotos I

REGULAO PS-TRANSCRICIONAL

Conforme voc estudou na Aula 21, o processo da transcrio


resulta na produo de um transcrito primrio denominado pr-RNAm.
Em seguida, tal molcula sofre vrias modificaes para formar o RNAm
que, aps ser exportado para o citoplasma, ser interpretado para a
traduo. Estes passos so essenciais para que o gene se expresse e,
portanto, qualquer mecanismo que interfira nesse processo, inibindo ou
induzindo, estar regulando a expresso do gene. Quando a expresso
de um dado gene regulada atravs de mecanismos que interfiram em
etapas posteriores transcrio, o processo denominado regulao
ps-transcricional.
Os mecanismos de regulao ps-transcricional ainda so pouco
esclarecidos. Porm, o grande nmero de pesquisas desenvolvidas sobre
este assunto, nos ltimos anos, tem revelado a existncia de diferentes
mecanismos de regulao ps-transcricional. Dentre eles, podemos
destacar trs mecanismos principais: regulao do processo de edio
do RNAm, regulao do sistema de retirada dos ntrons e emenda
dos xons (emenda alternativa dos xons) e regulao da estabilidade
do RNAm. Cada um desses mecanismos de regulao ps-transcricional
ser discutido individualmente a seguir.

Regulao do processo de emenda alternativa de xons

A retirada de ntrons e emenda dos xons compem um passo


crucial do processamento do RNA em eucariotos, conforme voc
aprendeu na Aula 22. Tal processo permite a eliminao das seqncias
correspondentes aos ntrons do transcrito primrio (pr-RNAm) e
a subseqente reunio (emenda) dos xons.
Muitos genes de eucariotos apresentam um elevado nmero
de ntrons. Teoricamente, todos eles devem ser retirados durante o
processamento do pr-RNAm. Assim, no decorrer do processo, os
diversos xons devero ser emendados. Imagine o que aconteceria se,
em uma dada condio, um dos xons fosse eliminado juntamente com os
ntrons. Certamente, o RNAm formado seria menor que o convencional
e, por conseqncia, a protena formada no conteria a regio codificada
por tal xon. Na realidade, as clulas utilizam tal processo como uma
importante forma de regulao da expresso gnica. Tal mecanismo

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denominado emenda alternativa de xons e consiste em selecionar os
xons que sero emendados para compor o RNAm final. Dessa forma, um

AULA
mesmo pr-RNAm pode dar origem a duas ou mais formas alternativas
de RNAm, em funo dos xons utilizados na montagem de cada uma.
Conseqentemente, cada um desses RNAm variantes dar origem a uma
diferente forma da protena, na qual domnios estaro presentes, ou ausentes,
em funo dos xons que compem os respectivos RNAms (Figura 24.5).

transcrito xon 1 xon 2 xon 3 xon 4


primrio
Pr-RNAm

RNAms

protenas

Isoforma 1 Isoforma 2
TECIDO 1 TECIDO 2
Figura 24.5: Esquema ilustrando o mecanismo de emenda alternativa de xons.
A partir de um mesmo transcrito primrio (pr-RNAm) dois diferentes RNAms podem
ser formados. Como resultado, o processo de traduo desses RNAms gerar iso-
formas distintas da protenas codificada, onde a isoforma 2 no contm a regio
codificada pelo xon 3.

Alguns mecanismos de emenda alternativa parecem ser


constitutivos, com os RNAms variantes coexistindo em propores
constantes na mesma clula. Outros mecanismos so regulados em
resposta a estmulos ambientais ou de desenvolvimento. O controle
dos xons que sero utilizados na montagem do RNAm em um dado
tecido, ou condio, realizado atravs de protenas que interagem com
os complexos EMENDOSSOMAS (lembra-se da Aula 22?). Portanto, se em um EMENDOSSOMAS
determinado tecido ou condio tais protenas estiverem presentes, So os complexos
compostos por diversas
um dado conjunto de xons pode ser selecionado. Porm, se em protenas e pequenos
RNAs nucleares
outro tecido ou condio tais protenas estiverem ausentes, ou forem responsveis pelo
substitudas por outras, um novo conjunto de xons pode ser emendado, processo de retirada
de ntrons e emenda
dando origem forma alternativa do mRNA (Figura 24.5). dos xons. Em alguns
livros, tais estruturas
Podemos notar que, atravs dos mecanismos de emenda so denominadas
spliceossomos.
alternativa de xons, um mesmo gene pode dar origem a diferentes
protenas. Por exemplo, consideremos uma protena na qual uma
determinada regio seja responsvel por sua atividade enzimtica.

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Biologia Molecular | Regulao da expresso gnica em eucariotos I

Se o xon que codifica para tal regio for eliminado durante os processos
de emenda, a protena final no conter tal regio e, conseqentemente, a
atividade enzimtica ser abolida. Similarmente, determinadas protenas
so endereadas para organelas especficas aps a sua traduo. Se o
xon que codifica para o domnio de endereamento celular da protena
estiver ausente, a protena passar a ocupar outro compartimento celular
ou ficar no citosol.
Portanto, a emenda alternativa de pr-RNAms um poderoso e verstil
mecanismo regulatrio, que pode efetuar o controle da expresso gnica e
a diversificao funcional de protenas. Dessa forma, a expresso de um
gene pode resultar em diferentes isoformas da protena, com distintas
estruturas e funes.

Regulao do processo de edio do RNAm

No ltimo tpico da Aula 21, voc viu que, durante o proces-


samento, determinados transcritos podem receber a insero, deleo
ou modificao de nucleotdeos em sua seqncia. Tal processo
denominado edio do RNA. Tambm naquele captulo, voc estudou
o exemplo do RNAm para apolipoprotena-B que, no fgado, codifica
uma protena que contm 4.563 aminocidos. Em contrapartida, no
intestino, a mesma protena contm somente 2.153 aminocidos, como
resultado de um processo de edio do RNAm que resulta na traduo
de uma protena mais curta. Este um excelente exemplo de regulao
ps-transcricional realizada via edio de RNAm, pois permite que um
mesmo gene codifique para protenas diferentes, em funo do tecido
onde se expressa. A regulao do processo, portanto, depender da
presena ou ausncia das enzimas responsveis pela edio daquele
transcrito, em cada tecido.
Embora o exemplo do RNAm para apolipoprotena-B seja
bastante ilustrativo, importante observar que a edio do RNA tem
sido verificada para muitos outros RNAms, alm de RNAts e RNArs,
de diversas espcies.

Regulao da estabilidade do RNAm

O processo de transcrio de um dado gene resulta no acmulo do


RNAm correspondente no citoplasma da clula. Assim, essas molculas
estaro disponveis para a traduo. Entretanto, RNAms possuem vida

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24
til, ou seja, aps certo tempo, tais molculas precisam ser eliminadas.
Isto bastante aceitvel, pois se os RNAms ficassem disponveis no

AULA
citoplasma por tempo indefinido, sua traduo continuaria ocorrendo
tambm indefinidamente, mesmo que a transcrio do gene j no
mais ocorresse. Isso seria um problema para a clula que necessita de
determinadas protenas apenas em momentos especficos. Adicionalmente,
se os RNAms no fossem degradados, tais molculas se acumulariam no
citoplasma e, com a continuao do processo de transcrio dos milhares
de genes durante a vida da clula, a quantidade de RNAm no citoplasma
atingiria nveis altssimos, inviabilizando o funcionamento celular.
Cada molcula de RNAm permanece no citoplasma celular
durante um determinado perodo. Em seguida, degradada por enzimas.
Inicialmente, acreditava-se que todos os RNAms possuam tempos
similares de permanncia no citoplasma. Entretanto, diversas pesquisas
tm demonstrado que os transcritos produzidos por determinados
genes tm um perodo de durao no citoplasma muito maior que os
demais. Este perodo de durao no citoplasma tambm denominado
estabilidade do RNAm. Diante de tal informao, podemos concluir
que, entre dois genes diferentes, que possuam taxas de transcrio
semelhantes, aquele cujos RNAms apresentem maior estabilidade, gerar
maior acmulo dos transcritos no citoplasma celular. A traduo de
tais transcritos resultar em maior produo da protena codificada.
Portanto, o controle da estabilidade do RNAm de um dado gene pode
ser um importante mecanismo de regulao de sua expresso.
De fato, genes distintos apresentam diferentes estabilidades para
seus RNAms. Adicionalmente, os transcritos produzidos por um mesmo
gene podem apresentar diferentes estabilidades, em funo do tecido
onde so produzidos. Como a clula faz para que RNAms diferentes
apresentem estabilidades distintas?
Conforme voc viu na Aula 22, praticamente todos os RNAms
recebem uma estrutura denominada capacete, em sua extremidade 5,
e uma cauda poli-A, na extremidade 3. Acredita-se que ambas estejam
envolvidas na estabilidade do RNAm. Atualmente, vrias pesquisas tm
confirmado tal hiptese. Ao chegarem no citoplasma, as molculas de
RNAm passam a estar expostas ao das enzimas de degradao. O
principal processo de degradao do RNAm, descrito em leveduras
e eucariotos superiores, iniciado pela remoo da cauda poli-A e

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Biologia Molecular | Regulao da expresso gnica em eucariotos I

denominado desadenilao. As enzimas responsveis pelos processos


de desadenilao so chamadas desadenilases. Em seguida ao processo
de desadenilao, ocorre a remoo do capacete, presente na
extremidade 5 do RNAm, realizada por um conjunto de protenas e
fatores. Aps a retirada das estruturas de proteo (capacete e cauda
poli-A), o transcrito rapidamente degradado por enzimas denominadas
exonucleases (Figura 24.6).

Figura 24.6: Esquema ilustrando o mecanismo de degradao de RNAm dependente


de desadenilao. Quando o processamento do RNAm concludo, ele contm uma
estrutura capacete (5) e uma cauda Poli-A (3) que o protegem de degradao
exonucleoltica. O primeiro passo no processo de degradao a reduo da cauda
Poli-A realizada por enzimas denominadas desadenilases. Aps a degradao da
cauda Poli-A, a estrutura capacete 5 rapidamente removida e o resto do RNAm
rapidamente atacado por exonuclease.

A regulao dos processos de degradao do RNAm tem sido


amplamente estudada e, embora no esteja completamente esclarecida,
j permite a elaborao de modelos que expliquem os processos. De
maneira geral, os modelos sugerem a existncia de protenas capazes de
se associar s extremidades capacete e cauda Poli-A dos RNAms,
inibindo ou promovendo a ao das enzimas de degradao. Existem
diversas classes de tais protenas, capazes de se associar preferencialmente
a determinados RNAms. Assim, se as protenas associadas aos transcritos
de um dado gene forem estabilizadoras, o processo de degradao ser
inibido, resultando em maior estabilidade do mRNA. Entretanto, se
as protenas associadas forem desestabilizadoras, a degradao ser
induzida, resultando em menor vida-mdia daqueles transcritos.
Tal modelo explica como os transcritos de um dado gene apresentam
estabilidade mdia maior, ou menor, que os demais.

20 C E D E R J
MDULO 3
24
REGULAO DO PROCESSO DE TRADUO

AULA
A partir do momento em que um RNAm se encontra no
citoplasma, seu processo de traduo tambm pode ser regulado. Os
vrios mecanismos de regulao traducional no so completamente
elucidados, mas existem muitos exemplos documentados (particular-
mente durante o desenvolvimento embrionrio) de molculas de RNAm
que so rotineiramente encontradas no citoplasma, mas so traduzidas
apenas sob determinadas circunstncias. Um bom exemplo de tal
processo, pode ser verificado em espcies animais nas quais grande
quantidade de RNAm estocada em vulos. Porm, o processo de
traduo s desencadeado a partir da fertilizao.
Dentre os mecanismos de controle de traduo, a regulao
pela presena de regies codificadoras adicionais tem sido bem
caracterizada. O processo de traduo de um polipeptdeo, a partir de
um RNAm, tem incio no cdon de iniciao da traduo, localizado
na regio prxima extremidade 5 (capacete). Isso ocorre porque a
maquinaria responsvel pela traduo percorre a fita de RNAm
a partir da extremidade capacete (5) em direo extremidade 3, em
busca do cdon de iniciao da traduo. Entretanto, certas classes
de RNAm contm regies codificadoras de pequenos peptdeos, antes da
regio que codifica para o polipeptdeo principal. Em vrios casos, tem
sido estabelecido que tais regies afetam a expresso gnica no mbito
traducional, prejudicando a traduo do polipeptdeo principal.

REGULAO DOS PROCESSOS DE MODIFICAO PS-


TRADUCIONAL

Aps a traduo, muitos polipeptdeos precisam passar por um


processamento que lhes confira a estrutura necessria ao desempenho
de sua funo biolgica. Tal processamento consiste em alteraes pro-
movidas nas propriedades da protena, atravs da clivagem proteoltica
ou da adio de grupos modificadores (radicais fosfato, acares etc.) a
um ou mais aminocidos. Tal conjunto de alteraes recebe o nome de
modificaes ps-traducionais.
Em muitas protenas de eucariotos, a presena ou ausncia de tais
modificaes pode definir o estado de atividade da protena, sua loca-
lizao celular, taxa de degradao e a interao com outras protenas.

CEDERJ 21
Biologia Molecular | Regulao da expresso gnica em eucariotos I

Assim, os mecanismos de modificao ps-traducional desempenham


um importante papel biolgico. A regulao desses processos realizada
atravs da atividade de enzimas modificadoras que atuam sobre
substratos especficos. Como resultado, o controle da ocorrncia de tais
modificaes na protena codificada por um dado gene pode modular
sua atividade e, conseqentemente, representar uma forma de regulao
da expresso gnica.

CONTROLE DA ESTABILIDADE DA PROTENA

O tempo decorrido entre o final do processo de traduo e o


momento da degradao de um polipeptdio define a longevidade
desta molcula no citoplasma. Portanto, a induo ou a represso do
processo de degradao dos polipeptdios codificados por um dado gene
representam uma forma de controle da expresso gnica, afetando a
estabilidade de tais molculas. Cabe ressaltar que o processo seletivo,
pois observada grande heterogeneidade entre as taxas de degradao
das diferentes protenas de uma clula.
Muitos aspectos do desenvolvimento de eucariotos dependem
de mecanismos regulados de degradao de protenas. Dentre eles, um
importante papel desempenhado pelas vias de degradao ubiquitina-
proteassomo. Nesse mecanismo, as protenas a serem degradadas so
marcadas atravs da ligao covalente da ubiquitina, realizada por
enzimas especficas. Em seguida, os complexos ubiquitina/protena so
submetidos degradao pelo proteassomo 26S, uma estrutura composta
por diversas enzimas que possuem funo proteoltica (capacidade de
degradar protenas).

REGULAO DOS MECANISMOS DE ENDEREAMENTO


DAS PROTENAS

A clula eucaritica dividida em vrios compartimentos. Cada


organela, por exemplo, contm protenas especficas, cuja funo
caracterstica daquele compartimento celular. Assim, fica claro que muitas
protenas, aps sua traduo, precisam ser corretamente endereadas
para o compartimento celular onde desempenharo seu papel biolgico.
Voc estudar, em aulas futuras, os mecanismos responsveis pelo
endereamento de protenas. Entretanto, com as informaes que voc
j detm, possvel perceber que o controle dos mecanismos responsveis
pelo endereamento de uma protena representa uma forma de regulao
da expresso gnica.
22 C E D E R J
MDULO 3
24
!
Nesta aula, voc teve a oportunidade de estudar os diversos mecanismos

AULA
que podem regular a expresso de um gene. Entretanto, importante
ressaltar que nem todos os mecanismos so utilizados pela clula para
controlar a expresso de um dado gene. Em outras palavras, cada um
dos milhares de genes de um organismo pode ser regulado de uma
maneira distinta. Embora a grande maioria dos genes sofra regulao
transcricional, nem todos so regulados ps-transcricionalmente ou
ps-traducionalmente. Similarmente, a opo de qual dos mecanismos
de regulao ser ativado tambm especfica para cada gene. Por
exemplo, apenas alguns genes sofrem regulao por emenda alternativa
de xons, enquanto outros podem ser regulados quanto estabilidade
do RNAm, ou quanto ao endereamento do protena etc.

RESUMO

Nesta aula, voc teve a oportunidade de aprender que a regulao da expresso


gnica em eucariotos apresenta mecanismos mais sofisticados que o observado
para clulas procariotas. Vimos que o fato de diferentes clulas de um organismo
multicelular apresentarem diferentes fentipos, apesar de conterem os mesmos
genes, pode ser explicado pela expresso diferencial de genes. Vimos tambm
que determinados genes so expressos constitutivamente enquanto outros sofrem
regulao temporal e/ou tecido-especfica. Em seguida, foram apresentados os
diferentes mecanismos que podem regular a expresso de um gene: regulao
transcricional (por metilao e por protenas reguladoras), regulao ps-
transcricional (processamento do transcrito, transporte do RNAm para o citoplasma
e a estabilidade do RNAm), regulao traducional e regulao ps-traducional
(controle do endereamento da protena e do seu endereamento).

EXERCCIOS

1. Se todas as clulas somticas de um indivduo eucarioto multicelular possuem


os mesmos genes, como podemos explicar as diferenas fenotpicas observadas
entre os diversos tipos celulares?

2. O que so cascatas de regulao da expresso gnica?

3. Como os genes podem ser classificados quanto sua regulao?

4. Quais as etapas em que a expresso de um gene de eucarioto pode ser


regulada?

CEDERJ 23
Biologia Molecular | Regulao da expresso gnica em eucariotos I

5. Qual o mais importante mecanismo de regulao da expresso gnica em


eucariotos?

6. Quais os mecanismos de regulao ps-transcricional?

7. Quais os mecanismos de regulao ps-traducional?

AUTO-AVALIAO

Se voc compreendeu o contedo desta aula no deve ter encontrado dificuldades


para fazer os exerccios. Lembre-se de que a viso geral acerca da importnciada
regulao gnica e os nveis em que a regulao pode ocorrer mais importante que
os detalhes de funcionamento de cada mecanismo especfico. Portanto, certifique-
se de que voc assimilou os conceitos gerais de regulao em eucariotos e os nveis
nos quais a regulao pode ocorrer, pois tais informaes sero importantes para
a compreenso da prxima aula.

24 C E D E R J
25
AULA
Regulao da transcrio
em eucariotos
objetivos

Ao final desta aula, voc dever ser capaz de:


Entender os mecanismos envolvidos na
regulao transcricional da expresso gnica.
Estudar mecanismos envolvidos no controle
dos processos de remodelamento da
cromatina.
Estudar os mecanismos envolvidos na ao
das protenas reguladoras para o controle da
expresso gnica.

Pr-requisitos
Regulao da expresso gnica em eucariotos, Aula 24.
"Fluxo da informao gnica transcrio" e "Processamento do RNA",
apresentados nas Aulas 20, 21 e 22.
Controle da expresso gnica em procariotos, Aula 23.
Estrutura dos cromossomos de eucariotos, Aula 8.
Biologia Molecular | Regulao da transcrio em eucariotos

INTRODUO Na Aula 24, voc teve a oportunidade de estudar os mecanismos que regulam a
expresso gnica em eucariotos. Naquela aula, foram abordadas as diversas etapas
da expresso gnica de eucariotos passves de regulao. Dentre tais etapas, a
principal forma de regulao o controle da transcrio, que pode ser realizado
atravs de dois mecanismos distintos: remodelamento da cromatina e ligao
de protenas reguladoras.
Nesta aula, teremos a oportunidade de abordar, com maior detalhamento, os
processos que regulam a transcrio em eucariotos, estudando os mecanismos
que controlam a disponibilizao de regies genmicas para a transcrio
(remodelamento da cromatina) e as protenas que regulam a ativao de cada
gene (protenas reguladoras).

CONTROLE DA TRANSCRIO POR REMODELAMENTO DA


CROMATINA

Voc j aprendeu na Aula 8 (Mdulo 1) que os cromossomos metaf-


sicos encontram-se muito mais condensados que os cromossomos
encontrados na fase da intrfase. Viu tambm que a cromatina pode ser
encontrada em diferentes nveis de condensao, segundo um mecanismo
geral de empacotamento. As unidades bsicas desse mecanismo so os
nucleossomos, compostos por protenas histonas. Estes nucleossomos
so dispostos a cada 160 nucleotdeos ao longo da molcula de DNA,
envolvendo 145-147 pares de bases em torno de sua estrutura. Como
resultado, a cromatina assume uma disposio em forma de colar de
contas (Figura 25.1). Cada nucleossomo composto por oito molculas de
protenas histonas (Figura 25.2).

30nm

10nm
Figura 25.1: Esquema ilustrativo
de uma regio da cromatina,
apresentado os nucleossomos
dispostos seqencialmente ao Centro do nucleossomo
longo da molcula de DNA, composto por 8 prote-
gerando uma estrutura em DNA
nas histonas
forma de colar de contas.
Nucleossomo

26 C E D E R J
MDULO 3
2 molculas de cada protena

25
Histona: H2A, H2B, H3 e H4

AULA
DNA

Figura 25.2: Esquema ilustrativo de


um nucleossomo. O centro do nucles-
H1 somo composto por oito molculas
de protenas histonas. Externamente,
encontra-se a histona H1.

11nm

As protenas histonas dos nucleossomos, juntamente com protenas


cromossomais no histonas, so capazes de realizar interaes que resultam
em nveis mais intensos de empacotamento, conforme resumido na Figura
25.3. Dessa forma, a clula utiliza as histonas para comprimir o DNA
em uma estrutura compacta denominada
2nm
cromatina, cuja funo organizar e empacotar
o genoma dentro do ncleo celular.
Na Aula 24, discuti-mos que as
diversas regies do genoma apresentam nveis 11nm

de compactao distintos. Adicionalmente,


determinadas regies se apresentam
compactadas em determinados tecidos, ou
fase do desenvolvimento, e descompactadas 30nm

em outros. Paralelamente, determinadas


regies permanecem sempre compactadas
em qualquer tecido ou condio.
300nm

Figura 25.3: Esquema ilustrativo dos


diferentes nveis de compactao da cro-
matina. Na ausncia de compactao, a
espessura da molcula linear de DNA
de aproximadamente 2 M. No cromos- 700nm
somo metafsico, entretanto, a espessura
da cromatina pode chegar a 1400 M, o
que representa uma condensao de 700
vezes em relao ao DNA linear.

1400nm

CEDERJ 27
Biologia Molecular | Regulao da transcrio em eucariotos

Durante a diviso celular, entretanto, todos os cromossomos se apresentam


altamente condensados. O nvel de condensao de uma regio cromossmica
est inversamente relacionado com o nvel de transcrio de seus genes.
Em outras palavras, regies compactadas do genoma so, normalmente,
transcricionalmente inativas.
Com base nas informaes apresentadas, voc pode concluir que o
controle do nvel de condensao da cromatina representa uma forma de
regulao da transcrio, pois define as regies disponveis para serem transcritas.
Sendo assim, como a clula regula os nveis de compactao de tais regies?
A resposta para a questo anterior foi parcialmente abordada
na Aula 24. Vimos que os mecanismos associados a tal controle esto
relacionados presena ou ausncia de radicais na estrutura do DNA
ou das protenas histonas. A ocorrncia destas modificaes permite que
regies genmicas idnticas apresentem diferentes estados de atividade,
em funo dos tecidos ou fase de desenvolvimento em que a clula se
encontre. Portanto, a atividade transcricional de um gene pode ser
determinada pela presena ou ausncia de tais marcas, ou radicais, na
regio do genoma que o contm.

Um interessante exemplo do papel do remodelamento da cromatina


na regulao da expresso gnica observado nas fases iniciais do
desenvolvimento embrionrio. Imediatamente aps a fecundao,
os cromossomos do zigoto recm-formado encontram-se altamente
condensados. Nessa condio, portanto, os nveis de expresso
gnica so muito baixos. A partir da, tem incio um processo de
descompactao seqencial do genoma, realizado por enzimas que
promovem a adio ou remoo de radicais (metil, acetil e fosfato).
Conseqentemente, passa a ocorrer a ativao transcricional de tais
regies. Vrias pesquisas sugerem que o processo de descompactao
do DNA segue padres tecido-especficos, atravs de enzimas especficas
para cada tecido. Como resultado, algumas regies do genoma estaro
disponveis para a transcrio apenas em determinados tecidos, nos
quais se encontram descompactadas.

Metilao do DNA

No caso do DNA, o principal mecanismo de adio de radicais


denominado metilao. Este processo consiste na adio de
radicais metil a determinadas bases nitrogenadas citosinas, ao longo da
molcula de DNA. A metilao do DNA, conforme discutido na Aula
24, tem sido intensamente estudada nas ltimas dcadas e, atualmente,
sabe-se que regies altamente metiladas (regies hipermetiladas) no so
passveis de transcrio. A regulao dos nveis de metilao do DNA

28 C E D E R J
MDULO 3
25
ao longo do genoma controlada pela ao coordenada de metilases
(DNA metiltransferases) (responsveis pela adio dos radicais metil)

AULA
e as desmetilases (responsveis pela remoo dos mesmos). O processo
de metilao ocorre imediatamente aps a sntese do DNA e atinge
considervel parcela das citosinas do genoma. Estima-se que entre 5 e
7% de todas as citosinas de eucariotos sejam metiladas.
Voc j estudou, na Aula 24, que determinadas regies do genoma
apresentam diferentes nveis de metilao do DNA, em funo do tecido
ou fase do desenvolvimento em que se encontram. Tais diferenas
decorrem da ao de desmetilases tecido-especficas sobre o genoma
que, no incio do desenvolvimento embrionrio, encontra-se altamente
metilado. A ao diferencial de desmetilases tecido-especficas ao longo
do desenvolvimento do organismo, portanto, determina os nveis de
metilao presentes nas clulas do organismo adulto.

METILAO, ACETILAO E FOSFORILAO DAS


HISTONAS

Diferentemente dos conhecimentos acerca da metilao do DNA,


os processos de MODIFICAES EPIGENTICAS que atuam sobre as protenas MODIFICAES
histonas e os mecanismos por eles regulados so pouco esclarecidos EPIGENTICAS

atualmente. Porm, pesquisas recentes tm revelado que a presena So modificaes


ocorridas aps o
de tais modificaes nas histonas so cruciais determinao do nvel processo de criao
de qualquer material
de compactao da cromatina. Os trs principais mecanismos de modificaes
(gnese). No caso de
epigenticas em histonas so metilao, acetilao e fosforilao. DNA e protenas,
este termo utilizado
As protenas histonas centrais do nucleossomo (duas cpias de para definir as
cada uma das protenas H2A, H2B, H3 e H4) possuem longas caudas alteraes sofridas
pelas molculas aps
amino-terminais que se estendem para fora da estrutura, conforme a sua produo que,
no caso do DNA,
esquematizado na Figura 25.4. Tais caudas so o principal alvo para
ocorre durante a
a gama de modificaes qumicas j citadas, que resultam na alterao replicao, e no caso
das protenas, ocorre
das cadeias laterais de aminocidos especficos. Essas modificaes nas atravs da traduo.
protenas histonas afetam o acesso de protenas reguladoras e complexos Assim, mecanismos
que adicionem, ou
proticos cromatina e, dessa forma, influenciam a expresso gnica. retirem, radicais a estas
molculas, resultam
O papel de tais modificaes nos nveis de compactao da cromatina
em modificaes
est associado ao fato de que a presena dos radicais modificadores epigenticas.

afeta a capacidade de interao entre nucleossomos adjacentes, conforme


ilustrado na Figura 25.5. Quanto mais intensa for tal associao entre
os nucleossomos, maior a tendncia compactao da cromatina.
Na Figura 25.6 so apresentadas as principais modificaes caracterizadas
em protenas histonas: acetilao, fosforilao e metilao.

CEDERJ 29
Biologia Molecular | Regulao da transcrio em eucariotos

cauda H4 cauda
cauda H2B cauda
H2A
H3

cauda
H2A

cauda cauda
H2B H4
cauda H3
Figura 25.4: Esquema ilustrando a presena de caudas amino-terminais das pro-
tenas histonas que se projetam para fora dos nuclessomos.

caudas de protenas histonas

Interao entre
nucleossomos
adjacentes

Figura 25.5: Esquema ilustrando a associao entre nucleossomos adjacentes, pro-


movida pela interao entre as caudas das protenas histonas.

Lisina Serina

Figura 25.6: Esquema das


principais modificaes veri-
ficadas nas caudas amino-ter-
minais das protenas histonas
de nucleossomos: acetilao,
fosforilao e metilao.

Fosforilao
Metilao

Acetilao

30 C E D E R J
MDULO 3
25
Dentre os processos de modificao de histonas, os mecanismos
de acetilao e desacetilao so os mais bem caracterizados. A adio

AULA
ou retirada de radicais acetil em aminocidos lisina conservados na
cauda de protenas histonas tem sido amplamente correlacionada com a
atividade transcricional. Histonas acetiladas so comumente associadas
cromatina transcricionalmente ativa, e histonas desacetiladas cromatina
inativa para a transcrio. Os processos de acetilao e desacetilao
so desempenhados por enzimas denominadas acetiltransferases e
desacetilases, respectivamente.
Acredita-se que a neutralizao da carga bsica da cauda das histonas,
promovida pela acetilao, resulte em trs alteraes funcionais: a) reduo
da afinidade da histona pelo DNA; b) alterao nas interaes entre histonas
de nucleossomos adjacentes c) alterao nas interaes entre as histonas e
protenas reguladoras. Segundo tal hiptese, acredita-se que tais alteraes
confiram cromatina um ambiente permissivo para a transcrio.
importante ressaltar que, alm de seu papel na regulao
transcricional, a acetilao de histonas tambm est envolvida nos
processos de replicao, montagem dos nucleossomos, empacotamento
dos cromossomos e a interao entre os nucleossomos e protenas
no histnicas.
Em contraste ao considervel volume de informaes disponveis
acerca dos processos de acetilao e desacetilao, os conhecimentos
sobre os mecanismos e enzimas envolvidos com as demais modificaes
nas histonas so relativamente escassos. Importantes progressos,
entretanto, tm sido obtidos na tentativa de entender o papel dos
mecanismos de fosforilao de histonas em processos como a
transcrio, reparo do DNA e condensao dos cromossomos. Por
exemplo, a fosforilao do aminocido serina 10 da histona H3
tem demonstrado correlao com a ativao gnica em clulas de
mamferos. Embora os mecanismos atravs dos quais a fosforilao
das histonas contribui com a ativao transcricional no estejam bem
elucidados, a adio de grupos fosfatos, negativamente carregados
s caudas das histonas neutralizam sua carga bsica e, portanto,
acredita-se que reduzam sua afinidade pelo DNA. Adicionalmente,
tem sido demonstrado que a fosforilao de aminocidos promove o
incremento da atividade de processos de acetilao subseqentes.

CEDERJ 31
Biologia Molecular | Regulao da transcrio em eucariotos

A metilao de histonas foi descrita pela primeira vez em 1964.


Porm, apenas 35 anos depois a sua correlao com a regulao da
transcrio foi demonstrada. Embora os mecanismos sejam pouco
elucidados, algumas pesquisas tm demonstrado que as histonas H3 e
H4 so preferencialmente metiladas em aminocidos lisinas, presentes em
locais especficos de cada protena. O processo realizado por enzimas
metiltransferases especficas.
importante destacar que os processos de modificao das pro-
tenas histonas e do DNA atuam de maneira coordenada para o controle
da transcrio, bem como dos nveis de condensao da cromatina. Os
conhecimentos acerca do assunto so bastante superficiais, mas a sua
relevncia para tais controles tem sido reforada gradualmente por novas
descobertas cientficas. A presena, ou ausncia, de tais modificaes (no
DNA e nas protenas histonas) pode afetar a expresso de um dado gene
por duas maneiras distintas; a) alteram a compactao do DNA e a sua
disponibilidade para transcrio; b) alteram os nveis de interao entre
a regio do genoma e protenas reguladoras especficas.

Regulao da transcrio por protenas reguladoras

Na Aula 24, voc teve a oportunidade de aprender que cada gene


possui uma regio reguladora, tambm chamada regio promotora.
Trata-se de uma seqncia localizada na poro 5 adjacente ao gene.
Nela, esto presentes as seqncias conservadas caixa TATA e
caixa CAAT, que esto envolvidas no acoplamento do complexo da
transcrio. Alm dessas seqncias, conservadas nos promotores de
praticamente todos os genes, existem outras regies que influenciam na
regulao de cada gene. Tais regies contm seqncias especficas para
cada promotor, que influenciam o nvel de transcrio dos genes. Tais
regies so denominadas intensificadores.
Os intensificadores correspondem a stios de ligao de protenas
reguladoras. Conforme discutido na Aula 24, protenas reguladoras
so molculas capazes de reconhecer seqncias especficas de um
dado promotor e se ligar a ele. Em seguida, realizam interaes com o
complexo da RNA polimerase, viabilizando o acoplamento dos fatores
de transcrio s seqncias conservadas previamente discutidas (caixa
TATA e caixa CAAT).

32 C E D E R J
MDULO 3
25
Uma dada regio promotora pode conter vrios intensificadores
distintos. Portanto, vrias protenas reguladoras diferentes podem

AULA
controlar a expresso de um gene. A Figura 25.7 ilustra um exemplo da
regio reguladora de um gene X. Nela, podemos destacar as regies do
DNA que afetam a expresso do gene (seqncias consenso TATA e as
seqncias intensificadoras) e as protenas que se associam a tais regies:
complexo da transcrio (Fatores de transcrio+ RNA polimerase II) e
as protenas reguladoras que se ligam aos intensificadores.

Fatores de RNA polimerase II


Protenas reguladoras transio
gene X

TATA

Intensificadores
Transcrito

Figura 25.7: Esquema ilustrativo da regio reguladora da transcrio de um gene X.


Esto representadas as regies do DNA que afetam a expresso do gene (seqncias
consenso TATA e seqncias intensificadoras) e as protenas que se associam a tais
regies: complexo da transcrio (fatores de transcrio+ RNA polimerase II) e as
protenas reguladoras que se ligam aos intensificadores.

A molcula de DNA uma estrutura muito delgada. Diversas


pesquisas tm demonstrado que a ligao de vrias protenas a uma regio
reguladora e a interao entre tais protenas promovem o dobramento
da molcula de DNA, viabilizando a associao entre protenas que se
ligam a stios separados. Na Figura 25.8 voc pode ver um esquema
ilustrando tal dobramento.

Intensificadores

Protenas
reguladoras
especficas

Complexo de iniciao

TATA

Figura 25.8: Ilustrao do dobramento da molcula de DNA decorrente da interao


entre protenas reguladoras, ligadas aos intensificadores, com os elementos compo-
nentes do complexo de iniciao, acoplados regio Caixa TATA.

CEDERJ 33
Biologia Molecular | Regulao da transcrio em eucariotos

ATUAO DAS PROTENAS REGULADORAS

A ligao de protenas reguladoras pode exercer dois papis


contrastantes sobre a transcrio de um gene. Muitas dessas protenas
ativam o processo de transcrio, pois facilitam o acesso do complexo da
transcrio ao promotor. Nesses casos, tais protenas so denominadas
ativadores (ou protenas ativadoras) da transcrio. Entretanto,
determinadas protenas reguladoras atuam prejudicando a transcrio
de gene, atenuando ou inviabilizando o acesso do complexo da RNA
polimerase. Tais protenas so denominadas repressores (ou protenas
repressoras) da transcrio.
Protenas ativadoras da transcrio so protenas modulares
DOMNIO FUNCIONAL compostas por dois DOMNIOS FUNCIONAIS distintos. O primeiro domnio
de uma protena corresponde regio capaz de reconhecer e se ligar a uma seqncia
corresponde
regio da molcula especfica de DNA (stio de ligao), sendo denominado domnio de
responsvel pela ligao ao DNA. O outro domnio corresponde regio que estabelece
atividade biolgica
a ela associada. Por interao protena-protena com o complexo da transcrio, denominado
exemplo, o domnio
funcional de uma domnio de ativao. A Figura 25.9 ilustra a ao de tais domnios.
enzima a poro da
protena responsvel
pelo reconhecimento Domnio de Complexo da
e modificao ativao Transcrio
do substrato.
Determinadas
protenas possuem
mais de um domnio
funcional localizado,
portanto, em regies
diferentes da cadeia
polipeptdica.

Domnio TATA
de ligao
ao DNA

Figura 25.9: Ilustrao da ao dos domnios componentes de uma protena


reguladora da transcrio. O domnio de ligao ao DNA responsvel pelo
reconhecimento e ligao a seqncias especficas presentes no DNA (intensificadores).
O domnio de ativao responsvel pela interao com o complexo da transcrio.

Protenas repressoras podem desempenhar seu papel atravs de


dois processos diferentes. Alguns repressores atuam de maneira ativa
para reprimir a transcrio. A Figura 25.10.a apresenta um exemplo
de represso ativa, onde a protena repressora possui, alm do domnio
de ligao ao DNA, um domnio de represso. Nesses casos, a protena
interage com fatores do complexo da transcrio para realizar a represso

34 C E D E R J
MDULO 3
25
transcricional. Em outros casos, a represso da transcrio pode ser
realizada de forma passiva, quando a ligao do repressor ao seu stio no

AULA
DNA prejudica, ou bloqueia, o acesso de protenas ativadoras, conforme
ilustrado na Figura 25.10.b.
Complexo de
Domnio de transcrio
represso

Domnio de
ligao ao
DNA

TATA

Protena ativadora

Protena repressora bloqueia o


acesso da protena ativadora

Protena repressora

TATA

Figura 25.10: Esquema ilustrativo dos mecanismos de atuao de protenas repres-


soras da transcrio. (a) Represso ativa da transcrio. Nesse caso, a protena
possui um domnio de represso que interage com o complexo da transcrio
prejudicando o incio da transcrio; (b) represso passiva da transcrio. Nesse
caso, a ligao da protena repressora ao seu stio no DNA dificulta, ou bloqueia,
o acesso da protena ativadora.

DOMNIOS DE LIGAO AO DNA PODEM SER


CLASSIFICADOS EM DIVERSOS TIPOS ESTRUTURAIS

As regies reguladoras dos numerosos genes de um organismo eucarioto


possuem diferentes intensificadores. Conforme discutimos anteriormente,
cada intensificador possui seqncia especfica sendo, portanto, reconhecido
por uma protena reguladora tambm especfica. Assim, podemos concluir
que existe um grande nmero de protenas reguladoras diferentes, capazes
de reconhecer cada um dos intensificadores.
O reconhecimento e ligao de uma protena ao seu stio de
ligao no DNA dependem de compatibilidade conformacional entre
as estruturas, alm da interao entre cargas dos tomos presentes nas

CEDERJ 35
Biologia Molecular | Regulao da transcrio em eucariotos

molculas. O estudo e a comparao das seqncias e das estruturas de


milhares de protenas reguladoras, identificadas em diversas espcies, tm
revelado a existncia de classes de protenas reguladoras que apresentam
estruturas similares em seu domnio de ligao ao DNA. A seqncia de
aminocidos do domnio de ligao varia entre protenas de uma mesma
classe estrutural, resultando no reconhecimento de stios de ligao
diferentes. A maioria das protenas reguladoras reconhece seqncias
de DNA que variam entre 10 e 18 pares de bases.
Os domnios de ligao ao DNA possuem balano geral de
cargas positivo, o que facilita sua interao com a molcula de DNA,
cujo balano de cargas negativo. A disposio do domnio de ligao
na estrutura da protena varia entre as diferentes classes estruturais.
A seguir, abordaremos alguns exemplos de classes estruturais de protenas
reguladoras da transcrio.

Protenas tipo dedos de zinco

Esta classe de protenas recebe tal nome em funo da estrutura


apresentada na Figura 25.11, na qual um pequeno grupo de aminocidos
conservados liga-se a um on zinco, formado um domnio relativamente
independente dentro da protena, denominado dedo de zinco. A regio
carboxi-terminal de cada dedo forma uma -hlice que se liga ao DNA.
A regio amino-terminal forma duas estruturas -pregueadas. Protenas
desta classe so tipicamente compostas por vrias estruturas do tipo
dedo de zinco dispostas em srie. O nmero de dedos de zinco varia
entre as diversas protenas desta classe, podendo ocorrer apenas dois em
determinadas protenas ou at nove em outras.

Figura 25.11: Ilustrao da


estrutura denominada dedo de HOOC
zinco. (a) Um pequeno grupo Cys
de aminocidos conservados Zn
liga-se a um tomo de zinco,
formando um domnio den- Cys
tro da protena em formato
de dedo; (b) os aminocidos
que compem este domnio H2N
formam uma estrutura em
-hlice e duas estruturas -
pregueadas.

36 C E D E R J
MDULO 3
25
Dados de CRISTALOGRAFIA DE RAIOS X, obtidos da interao entre uma
CRISTALOGRAFIA
protena contendo trs dedos de zinco e o seu stio no DNA, sugeriram de raios X uma

AULA
das abordagens
a estrutura ilustrada esquematicamente na Figura 25.12.
utilizadas para o
estudo estruturais
em molculas. Para
COOH tanto, o material
Dedo 3 em estudo necessita
5'
ser previamente
3'
cristalizado para, em
seguida, ter o arranjo
tridimensional de seus
Dedo 2 tomos determinado
via difrao de raios X,
emitidos atravs
do cristal.

Dedo 1
3'
NH2
5'

Figura 25.12: Esquema ilustrativo da interao entre uma protena reguladora do


tipo dedo de zinco e o seu stio de ligao ao DNA.

Protenas tipo zper de leucina

Protenas reguladoras do tipo zper de leucina participam de


um sistema sofisticado de regulao da expresso gnica. O zper
de leucina corresponde a uma regio da protena composta rica em
aminocidos leucina, dispostos a cada sete aminocidos e voltados para
o mesmo lado da protena. O nmero e a disposio dos aminocidos
leucina confere protena a capacidade de formar dmeros com outras
protenas que apresentem regies com caractersticas similares. A Figura
25.13.a apresenta um esquema da interao entre duas protenas distintas
que, atravs de zperes de leucina, formam dmeros. Entretanto, cabe
ressaltar que, freqentemente, protenas idnticas se unem para formar
dmeros (homodmeros) enquanto a formao de dmeros entre protenas
diferentes (heterodmeros) menos freqente.
Protenas zper de leucina s reconhecem o seu stio de ligao no
DNA quando se encontram na forma de dmeros. A interao com o DNA
ocorre atravs do domnio positivamente carregado da protena (domnio
bsico), conforme ilustrado na Figura 25.13.b. Diferenas presentes na
seqncia de aminocidos do domnio bsico definem os stios de ligao
das diferentes protenas desta classe.

CEDERJ 37
Biologia Molecular | Regulao da transcrio em eucariotos

Zper de leucinas

Domnio Domnio
Bsico Bsico

Leucinas Domnio zper


de Leucinas

Domnio de
ligao ao DNA

Figura 25.13: Ilustrao da estrutura de protenas reguladoras do tipo zper de


leucina e de sua ligao ao DNA. (a) Esquema da interao entre duas molculas
de protena para formao de um dmero (heterodmero). A interao ocorre
atravs do pareamento propiciado pelos domnios de leucinas; (b) interao entre
um dmero de protenas reguladoras do tipo zper de leucina e o seu stio de
ligao ao DNA.

Protenas tipo hlice-volta-hlice

Protenas desta classe se caracterizam por possurem duas -hlices


separadas por uma curta seqncia de aminocidos que promove uma
volta, ou dobra, na molcula. Na Figura 25.14.a, voc pode ver um
esquema ilustrativo de tal estrutura. Dentre as duas hlices, a que se
localiza mais prximo extremidade carboxi-terminal a responsvel
pela ligao ao DNA, conforme ilustrado pela Figura 25.14.b.
(a) volta (b)

NH2
Hlice de
reconhecimento
COOH

Figura 25.14: Ilustrao da estrutura de protenas reguladoras do tipo hlice-volta-


hlice e de sua ligao ao DNA. (a) A estrutura composta por duas -hlices
separadas por uma curta seqncia de aminocidos que promove uma volta, ou
dobra, na molcula; (b) interao entre uma protena reguladora do tipo hlice-
volta-hlice e o seu stio de ligao ao DNA.

38 C E D E R J
MDULO 3
25
Protenas reguladoras e conformao da cromatina

AULA
Embora tenhamos abordado separadamente os processos de
regulao da transcrio por remodelamento da cromatina e o realizado
atravs de protenas reguladoras, importante destacar que ambos os
processos ocorrem simultaneamente. Muitas vezes a ativao de um
dado gene necessita da atuao acoplada de protenas reguladoras e dos
processos que promovem o remodelamento da cromatina.
Determinadas protenas reguladoras promovem a desorganizao
dos nucleossomos ou afetam seu posicionamento no DNA. Em outros
casos, protenas reguladoras promovem o acesso de enzimas modificadoras
como transacetilases, desmetilases etc., que alteram covalentemente a
estrutura das histonas e, conseqentemente, as estrutura da cromatina.
Portanto, a regulao da expresso gnica ocorre de maneira coordenada,
utilizando diferentes componentes de mecanismos especficos e de
mecanismos gerais de controle da expresso gnica.

RESUMO

Nesta aula, voc teve a oportunidade de estudar mais detalhadamente os


mecanismos de regulao da transcrio em eucariotos. Tal regulao ocorre
atravs de dois mecanismos principais: remodelamento da cromatina e atuao de
protenas reguladoras. Os mecanismos de remodelamento da cromatina se baseiam
em processos de modificao (adio de radicais) molcula do DNA ou s protenas
histonas. Dentre as modificaes na molcula do DNA, a metilao o processo mais
comum. A enzima responsvel pela adio do radical metil s citosinas do DNA
denominada DNA metil transferase.

No caso das histonas, as principais modificaes observadas so acetilao,


fosforilao e metilao. A regulao da transcrio promovida por protenas
reguladoras o principal processo de controle da expresso de genes especficos
de um organismo. Tais protenas possuem estrutura modular e apresentam dois

CEDERJ 39
Biologia Molecular | Regulao da transcrio em eucariotos

domnios principais: domnio de ligao ao DNA e domnio de interao com o


complexo da RNA polimerase. Protenas reguladoras possuem a capacidade de
reconhecer stios especficos, em determinadas regies reguladoras, e influenciar a
transcrio dos genes. Os diversos domnios de ligao ao DNA podem ser agrupados
em classes estruturais distintas, dentre as quais as mais amplamente estudadas so
zper de leucina, dedos de zinco e hlice-volta-hlice.
As protenas reguladoras atuam coordenadamente com os processos responsveis pelo
remodelamento da cromatina. Dessa forma, as regies reguladoras de muitos genes
devem ser simultaneamente reconhecidas por protenas reguladoras especficas e por
enzimas capazes de promover modificaes no DNA e nas protenas histonas.

EXERCCIOS

1. Como o remodelamento da cromatina pode influenciar a transcrio de um


gene presente em uma dada regio do genoma?

2. Qual o principal mecanismo de modificao da estrutura do DNA que influencia


o nvel de compactao da cromatina, e qual a sua correlao com a atividade
transcricional?

3. Quais os principais mecanismos de modificao das protenas histonas e como


eles podem influenciar a atividade transcricional?

4. Quais os papis que protenas reguladoras podem exercer sobre a transcrio


de um gene?

5. Quais so os principais domnios das protenas reguladoras e qual o papel de


cada um deles?

AUTO-AVALIAO

Se voc compreendeu o contedo desta aula, no deve ter encontrado


dificuldades para responder aos exerccios. Esta aula enfocou detalhadamente o
principal mecanismo de regulao da expresso gnica, o controle da transcrio.
Entretanto, lembre-se de que tais informaes fazem parte de um conjunto mais
amplo de mecanismos, apresentado na Aula 24.

40 C E D E R J
26
AULA
Fluxo da informao
gentica traduo I
objetivos

Nesta aula, voc ter oportunidade de:


Acompanhar o experimento que indicou a
relao entre um gene e uma enzima.
Compreender o conceito de gene e saber aplic-lo.
Acompanhar alguns dos experimentos que
resultaram na descoberta do cdigo gentico.
Conhecer o cdigo gentico e suas
peculiaridades, alm de saber utiliz-lo.

Pr-requisitos
Voc acompanhar esta aula mais facilmente se no
tiver dvidas em relao s aulas sobre RNA (Aula
5) e aos conceitos de protena vistos nas aulas de
Bioqumica. Tambm sero necessrios os conceitos
bsicos de mutao (Aula 16).
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo I

INTRODUO Chegamos, enfim, ao ltimo mdulo da nossa disciplina. At agora voc


estudou a importncia do DNA como molcula de hereditariedade e sua
capacidade de se acomodar em uma clula ou em um compartimento celular,
apesar de seu enorme tamanho. Voc tambm teve a oportunidade de estudar
o complexo processo que envolve a replicao do DNA, permitindo, assim, que
a informao gentica seja transmitida da clula-me para as clulas-filhas.
Embora existam inmeros sistemas encarregados pelo reparo dos possveis
danos sofridos pela molcula de DNA, voc viu como mutao, recombinao e
transposio podem contribuir para a variabilidade existente entre os indivduos
de uma populao.
Toda a informao contida no genoma dos mais diferentes organismos
utilizada para produzir molculas que desempenham as mais diversas funes
celulares. So essas molculas que determinam o fentipo de uma clula ou
indivduo. Voc j comeou a estudar o fluxo da informao gentica nas aulas
do Mdulo 3, nas quais foram abordadas as particularidades da transcrio.
Nessa primeira aula do Mdulo 4, comearemos pela descrio do experimento
que confirmou a relao entre o gene e uma enzima, para que voc possa,
ento, comear a estudar as particularidades da traduo, um processo que
se caracteriza pelo seu alto grau de complexidade. Tenha certeza de que ao
final das prximas quatro aulas esse processo complexo passar a ser visto com
outros olhos por voc.

EXPERIMENTO DE BEADLE E TATUM (1940) DEFINIO


MOLECULAR DE GENE

At a dcada de 1940, no se sabia exatamente o que eram


os genes e tampouco o que eles faziam. A pergunta era: Qual o
significado da herana biolgica? Sabia-se que a herana biolgica
era uma potencialidade, ou seja, a capacidade de se desenvolver de
maneira especfica. Outra pergunta ento surgia: Como essas regies
dos cromossomos eram capazes de armazenar tantas e to complexas
informaes? Mais ainda: Quais os mecanismos envolvidos na
manifestao dessas informaes?
Pois saiba que o conceito de gene mudou muito ao longo dos
ltimos anos. Tradicionalmente, o gene era definido como uma regio
do cromossomo que determinava ou afetava uma nica caracterstica
ou fentipo. J em 1908, um mdico ingls, Archibald Garrod, props
um novo conceito para as doenas humanas, que so os erros inatos

42 C E D E R J
MDULO 3
26
do metabolismo. Essas doenas se caracterizam por bloqueio de uma
ESPOROS
via metablica em um ponto especfico. Repare a Figura 26.1, na qual

AULA
Clulas reprodutivas
est representada a via metablica de sntese do composto fictcio F. encontradas
especialmente em
O composto precursor A sofre a ao da enzima 1, sendo convertido fungos. Nestes, os
esporos assexuais so
em B, que pela ao da enzima 2 convertido em C, e assim por diante,
clulas somticas que
at formar F. Neste exemplo, a enzima 5, que catalisa a converso de E em se comportam como
gametas ou como
F, est ausente ou inativa, de forma que F no formado e E se acumula clulas iniciais de novos
indivduos haplides
no organismo. Sem saber de sua importncia para o desenvolvimento da
(indivduos com
Gentica Molecular, Garrod foi o primeiro a postular a existncia metade do conjunto de
cromossomos). No
da relao entre o gene e a qumica do corpo ao reconhecer que essas s em fungos como
doenas, caracterizadas por um erro metablico, eram herdadas. tambm em plantas,
existem os esporos
sexuais, que so
clulas diplides.

AUXOTRFICOS
Denomina-se
auxotrfico uma
linhagem ou um
mutante incapaz de
sintetizar uma ou mais
Figura 26.1: Bloqueio de uma via metablica fictcia. Neste exemplo, o composto A
substncias especficas.
precursor do composto F sintetizado em uma via metablica da qual participam
cinco enzimas. A ausncia ou a inativao da enzima 5 impede a formao do Para seu crescimento
composto F e determina o acmulo do composto E. necessrio meio
completo (fonte de
carbono e todos os
A primeira definio molecular de gene, entretanto, s foi proposta, fatores nutricionais) ou
em 1940, por George Beadle e Edward Tatum. Esses dois pesquisadores meio mnimo simples
(fonte de carbono e sais
observaram que mutantes selecionados do fungo Neurospora crassa inorgnicos) acrescido
de requerimento
(fungo laranja-rosado que se desenvolve normalmente em po) eram
nutricional especfico.
afetados em pontos diferentes da via biossinttica de arginina, ou seja,
Os auxotrficos diferem
eram deficientes em enzimas especficas dessa via metablica. Vamos dos prototrficos, que
entender o que eles fizeram acompanhando uma srie de experimentos so linhagens capazes
de crescer em meio
apresentados, de forma resumida, nas Figuras 26.2, 26.3 e 26.4. mnimo simples por
sintetizarem substncias
Inicialmente, aps experimentos clssicos de Gentica envolvendo especficas, a partir
exposio de ESPOROS de Neurospora crassa a raios X e diversos dos componentes deste
meio.
cruzamentos, foi feita a seleo de mutantes AUXOTRFICOS para a arginina,
ou seja, mutantes com capacidade de crescimento apenas em MEIO MNIMO MEIO MNIMO
Meio de cultura
acrescido de arginina. Acompanhe como isso foi feito na Figura 26.2. contendo compostos
O tratamento com raios X foi feito no sentido de induzir mutaes simples, fonte de
carbono e sais
(Figura 26.2.a). Nesta etapa, de se esperar que diferentes mutaes, que inorgnicos (incluindo
fonte de nitrognio),
podem bloquear uma ou vrias vias metablicas, ocorram nas diferentes a partir dos quais os
clulas. Os esporos irradiados foram, ento, cultivados em meio completo compostos necessrios
ao crescimento so
(Figura 26.2.b), permitindo, assim, o crescimento de todas as clulas, mutantes sintetizados.

CEDERJ 43
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo I

ou no, no sentido de se certificar da viabilidade celular. As clulas viveis


foram transferidas para meio mnimo (Figura 26.2.c), de forma que aquelas
que apresentavam bloqueio na via biossinttica de qualquer composto
essencial ao crescimento foram impedidas de crescer. Em um experimento
dessa natureza, o nmero de clulas com essa caracterstica corresponde,
em mdia, a 1-2% das clulas irradiadas, e so ditas mutantes auxotrficos.
importante ressaltar que apenas com esse experimento no
seria possvel saber qual o nutriente requerido para crescimento desses
mutantes. Portanto, na etapa seguinte, as clulas viveis correspondentes
aos tubos sem crescimento (tubos 2, 4, 5 e 8) foram, ento, transferidas
para meio mnimo, acrescido de aminocidos (Figura 26.2.d).
O crescimento celular foi observado nos quatro tubos, comprovando que
estes mutantes eram auxotrficos para aminocidos em geral. A seleo
dos mutantes auxotrficos para arginina foi feita com o cultivo das clulas
viveis correspondentes aos tubos 2, 4 5 e 8 em um novo meio de cultura
constitudo de meio mnimo, acrescido de arginina (Figura 26.2.e). As
clulas selecionadas foram aquelas que apresentaram crescimento neste
meio de cultura, ou seja, as correspondentes aos tubos 4, 5 e 8.
Figura 26.2: Isolamento
Esporos do fungo
de mutantes auxotr-
Neurospora crassa Raios X
ficos para arginina.
(a) Exposio de esporos (a)
de Neurospora crassa
a raios X. (b) Cultivo
dos esporos irradiados 1
em meio completo. (c) (b)
Transferncia das clu-
las crescidas para meio
mnimo. (d) Cultivo das completo
clulas correspondentes (c) m aminocidos)
aos tubos sem cresci-
mento em meio mnimo,
acrescido de aminoci-
dos. (e) Cultivo das clu- mnimo
(d)
las correspondentes aos
tubos sem crescimento
na etapa (c) em meio mnimo acrescido
mnimo, acrescido de minocidos
arginina. No esquema,
as clulas dos tubos 2,
4, 5 e 8 so auxotrficas
para aminocidos em
(e)
geral. Apenas as clulas
dos tubos 4, 5 e 8 so
auxotrficas para argini- mnimo acrescido
na, uma vez que cresce- inina
ram em meio completo,
no cresceram em meio
mnimo, mas cresceram
em meio mnimo acres-
cido de todos os amino-
cidos, e em meio mnimo
adicionado de arginina. om crescimento

44 C E D E R J
MDULO 3
26
O experimento de Beadle e Tatum um exemplo de aplicao de

AULA
agentes mutagnicos na rea da cincia bsica. Nesse caso especfico,
a possibilidade de se utilizar raios X para a gerao de mutantes
foi fundamental, acelerando o processo de obteno de mutantes
auxotrficos que contriburam para a proposio da hiptese um
geneuma enzima.

Com base em uma via hipottica da biossntese de arginina (Figura


26.3), na qual um precursor simples convertido em ornitina, que, por
sua vez, converte-se em citrulina, que, ento, convertida em arginina; na
etapa seguinte, foi avaliada a capacidade desses mutantes de crescerem em
meio mnimo e em vrios meios adicionados de diferentes suplementos,
no sentido de se determinar o local de bloqueio metablico especfico.

Enzima 1 Enzima 2 Outras enzimas

Figura 26.3: Via hipottica de biossntese de arginina. A sntese de arginina se


iniciaria com a converso de uma molcula precursora em ornitina, que seria con-
vertida em citrulina, que, ento, pela ao de uma ou mais enzimas se converteria
em arginina.

Para voc entender como o experimento foi realizado, leia o texto


e acompanhe a Figura 26.4, na qual est representada a seleo de trs
mutantes de Neurospora dependentes de arginina, cada qual com perda
de uma enzima particular necessria para a sntese deste aminocido.

Meio Meio Meio


Meio mnimo + mnimo + mnimo +
mnimo Ornitina Citrulina Arginina RESULTADO CONCLUSO

Crescimento do mutante A mutao deve ina-


Mutante arg1 em presena de tivar uma enzima que
"arg1" qualquer um dos pre- atua no incio da via
cursores metablica

Mutante Crescimento do mutante A mutao deve inativar


arg2 em presena de uma enzima que atua
"arg2" citrulina ou arginina, entre ornitina e citrulina
mas no em presena na via metablica
de ornitina

Mutante Crescimento do mutante A mutao deve ina-


arg3 em presena ape- tivar uma enzima que
"arg3" nas de arginina atua na formao de
arginina ao final da via
metablica

Figura 26.4: Localizao do bloqueio metablico associado a cada um dos mutantes.


Trs mutantes previamente selecionados foram cultivados em quatro meios de cultura
distintos: meio mnimo e meio mnimo acrescido de ornitina, citrulina ou arginina.

CEDERJ 45
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo I

Cada mutante selecionado na etapa anterior como auxotrfico


para arginina foi cultivado em tubos contendo meio mnimo, acrescido
de um composto que participa da biossntese de arginina. Assim, em um
dos tubos contendo meio mnimo foi adicionada ornitina, no segundo
foi adicionada citrulina e no terceiro foi feita a adio de arginina.
Confira os resultados observados nos cultivos de cada mutante e as
concluses que podem ser tiradas dessa srie de experimentos.
Os trs mutantes selecionados no deveriam apresentar crescimento
em meio mnimo e todos deveriam crescer em meio adicionado de
arginina. Concorda? De fato isso ocorreu! Vamos, agora, acompanhar
o comportamento do mutante arg1, cujo crescimento foi observado em
presena dos trs suplementos analisados, ornitina, citrulina e arginina.
Arginina o aminocido necessrio para o crescimento deste mutante
e no relevante para a nossa anlise. Entretanto, o crescimento em
presena de citrulina indicou que arg1 contm a enzima capaz de
converter este composto em arginina. Certo? Com o crescimento em
ornitina podemos tambm descartar a possibilidade de um bloqueio
na etapa de converso de ornitina em citrulina. Podemos concluir que
a incapacidade deste mutante de crescer em meio mnimo se deve a
um bloqueio na via biossinttica anterior ornitina. Podemos inferir,
portanto, que a via metablica est bloqueada em relao converso
do precursor em ornitina. Ficou mais claro?
Vamos pensar juntos sobre o que ocorreu com os outros dois
mutantes. Com relao ao mutante arg2, observou-se crescimento
apenas nos tubos contendo citrulina e arginina. A ausncia de crescimento no
tubo contendo ornitina indica que este mutante tem a via biossinttica
de arginina bloqueada na etapa de converso de ornitina em citrulina. J
para o mutante arg3 s se observou crescimento quando a arginina foi
adicionada, indicando que pelo menos a etapa de converso de citrulina
em arginina est comprometida.
Dessa forma, Beadle e Tatum conseguiram, ento, provar que a
perda de uma funo enzimtica era o resultado de mutao em um nico
gene. Foi proposta, ento, a hiptese um geneuma enzima, ou seja, que
um gene determina a sntese de uma enzima especfica.
Esta hiptese foi imediatamente aceita e eventualmente modificada,
pois, em seguida, observou-se que muitos genes especificam a sntese
de protenas, sendo que apenas algumas tm atividade cataltica.

46 C E D E R J
MDULO 3
26
Nos anos que se seguiram, este conceito foi ainda mais ampliado, j que
algumas protenas so formadas por duas ou mais subunidades que, por

AULA
sua vez, podem ser codificadas por diversos genes. Passou-se, ento, a
aceitar a relao entre gene e polipeptdeo. Hoje em dia, sabe-se que dois
grupos de genes especificam os tRNAs e os rRNAs, o que levou maior
ampliao do conceito de gene. O conceito atualmente aceito o de que
um gene especifica a sntese de uma molcula funcional.
A grande maioria dos genes contm informao para a sntese
de protenas e voc estudou, nas aulas do Mdulo 3, que a transcrio
uma etapa fundamental para a expresso gnica. Essa primeira etapa
pode ser entendida como um mecanismo de proteo da molcula da
hereditariedade, uma vez que poderia ser desastroso exp-la inteiramente
cada vez que um polipeptdeo precisasse ser sintetizado. Como na clula,
continuamente, ocorre degradao de protenas e os aminocidos
resultantes so utilizados na sntese de novas molculas proticas, voc pode
reconhecer a importncia da transcrio como uma etapa intermediria
para a sntese de protenas. Assim, com parte do mistrio envolvendo a
sntese de protenas esclarecida, o processo, tal qual como ele , parece
bastante bvio. No toa que dizemos que a natureza sbia!

Lembre-se de que a transcrio a nica etapa para a sntese de rRNAs e


tRNAs, por processos catalisados por RNA polimerases distintas daquela
responsvel pela sntese de mRNA.

Hoje em dia, sabemos que apenas o gene a ser expresso utilizado


como molde, no processo conhecido por transcrio, para a sntese de
uma molcula de RNA, que, ento, carrega a informao para a sntese
de polipeptdeos, o que ocorre em uma etapa denominada traduo. J
comentamos sobre o fluxo da informao gentica no incio da Aula 5.
Releia essa aula e reveja principalmente a Figura 5.1, na qual esto
representados os principais processos celulares envolvendo perpetuao
do material gentico e fluxo da informao gentica.

POR QUE ESTE PROCESSO SE CHAMA TRADUO?

Aps a elucidao da estrutura do DNA, a proposio do


mecanismo de replicao e descoberta da relao direta entre um gene
e uma protena, uma pergunta ainda pairava no ar: Como o DNA
codifica a informao gentica para a sntese de protenas?

CEDERJ 47
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo I

Primeiramente importante lembrar que a molcula de DNA


constituda de quatro nucleotdeos diferentes. Alm disso, na etapa de
transcrio, a informao contida no DNA transcrita em um formato
diferente, ou seja, em RNA, constitudo tambm pela combinao de
quatro nucleotdeos. Lembre-se de que para a sntese de RNA, o fator
determinante justamente a complementaridade das bases, ou seja, para
cada A, C, G e T no molde de DNA, so incorporados U, G, C e A na
molcula de RNA que est sendo sintetizada.
O processo celular envolvido na sntese de protenas chamado
traduo porque o alfabeto de quatro letras dos cidos nuclicos
literalmente traduzido em um alfabeto inteiramente diferente. Lembre-se
de que os polipeptdeos so sintetizados a partir da combinao dos vinte
aminocidos-padro. Em outras palavras, o que ocorre a converso da
informao escrita na linguagem de um cido nuclico em linguagem
de uma protena, tal qual a converso de um texto escrito, por exemplo,
do portugus para o chins, idiomas que utilizam, inclusive, caracteres
diferentes. Esta converso s possvel devido existncia de um
cdigo gentico que, como voc ver em detalhes nesta aula, relaciona
a seqncia de bases constituintes da molcula de DNA (ou mRNA) com
a seqncia dos aminocidos que formam a protena. Repare na Figura
26.5 as caractersticas estruturais das principais molculas envolvidas
no fluxo da informao gentica.

DNA RNA Protena

Polmero de Polmero de
desoxirribonucleotdeos ribonucleotdeos Polmero de
(dupla-fita) (fita nica) aminocidos

Figura 26.5: DNA, RNA e protenas. Representao das estruturas das trs principais
molculas envolvidas no fluxo da informao gentica.

48 C E D E R J
MDULO 3
26
A DESCOBERTA DO CDIGO GENTICO

AULA
Todos os esforos feitos no sentido de se descobrir o cdigo gentico
tiveram incio com a busca de resposta para uma primeira pergunta: Que
tipo de combinao dos nucleotdeos poderia codificar um aminocido?
As molculas de DNA so constitudas de quatro nucleotdeos,
representados pelas bases A, C, T e G, que codificam os vinte aminocidos
que participam da sntese protica. Deve haver, ento, uma combinao
desses quatro nucleotdeos, de forma a especificar a seqncia de
aminocidos no polipeptdeo formado. Certo?
Vamos entender o que se pensava antes de se ter conhecimento
da relao entre os nucleotdeos presentes nos cidos nuclicos e os
aminocidos que compem as protenas. Leia o texto acompanhando a
Figura 26.6. A existncia de quatro bases permite quatro combinaes,
que podem ser expressas como 4n, onde
n = nmero de bases combinadas (1, 2, 3 ou 4).
A primeira combinao, 41 (quatro bases combinadas, uma
a uma), indica que cada base codifica um aminocido, havendo a
possibilidade de se codificar apenas quatro aminocidos (41 = 4).
J a segunda combinao, 42 (quatro bases combinadas, duas a duas),
explica a codificao de 16 aminocidos (42 = 16), ainda um nmero
inferior a 20. A terceira combinao, 43 (quatro bases combinadas, trs
a trs), permitiria a codificao de 64 aminocidos (43 = 64), nmero
superior ao nmero real de aminocidos incorporados durante a sntese de
protenas. Parecia, portanto, razovel que, pelo menos, trs nucleotdeos
fossem necessrios para codificar cada um dos vinte aminocidos.

mRNA

U
le
fi

Figura 26.6: Possibilidades de combinao das bases para formao do cdon. Cdons formados por combinao
de uma ou duas bases resultam em nmero insuficiente para codificar os vinte aminocidos-padro. A combinao
das quatro bases, trs a trs, parece razovel, uma vez que permite a formao de 64 cdons, nmero mais do
que suficiente para codificar os vinte aminocidos-padro.

CEDERJ 49
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo I

Estudos genticos indicaram que o cdigo gentico era de fato


composto por trincas de nucleotdeos, conhecidas como cdons, que
correspondiam aos aminocidos. Por exemplo, observou-se que adio ou
deleo de um ou dois nucleotdeos causavam mutao frameshift,
ou seja, mudana no quadro de leitura. Lembra da Aula 16? Volte a ela
se tiver dvidas neste assunto. No entanto, adio ou deleo de trs ou
mltiplos de trs nucleotdeos mantinham o quadro de leitura.
Foi, ento, a partir de uma srie de experimentos, usando moldes
sintticos de mRNA, que o cdigo gentico foi desvendado.
A primeira descoberta foi descrita, no incio da dcada de 1960,
por Marshall Nirenberg e Heinrich Matthaei. O experimento desses dois
pesquisadores consistiu na incubao de um polinucleotdeo de uracila
(poli-U) com extrato celular da bactria E. coli, GTP, ATP e uma mistura dos
vinte aminocidos em 20 tubos diferentes, sendo que, em cada um
dos tubos, havia um aminocido diferente marcado radioativamente. O
que eles estavam buscando com esse experimento?
Vamos pensar juntos! A molcula de RNA formada apenas por
nucleotdeo de uracila (poli-U) contm apenas um tipo de cdon UUU.
Portanto, se havia uma correspondncia nica entre uma trinca de
nucleotdeos e um aminocido, era de se esperar que a molcula poli-U
servisse de molde para a sntese de um polipeptdeo formado por apenas
um tipo de aminocido. Certo? Mas qual aminocido?
A presena de apenas um aminocido, marcado radioativamente,
em cada um dos tubos foi fundamental para a interpretao dos resultados
desse experimento. Se tudo o que se supunha era verdade, em apenas
um tubo poderia se observar a formao de um polipeptdeo marcado
radioativamente, ou seja, o tubo contendo o aminocido radioativo
codificado pela trinca UUU. E foi exatamente isso que eles observaram.
O polipeptdeo marcado radioativamente foi observado em apenas um
tubo, aquele que continha fenilalanina radioativa. Os pesquisadores,
ento, concluram que o cdon UUU codifica fenilalanina.
O uso de estratgia semelhante revelou que um polinucleotdeo
de citosina (poli-C) codificava um polipeptdeo de prolina, ou seja, que
o cdon CCC codifica prolina, e que um polinucleotdeo de adenina
(poli-A) codificava um polipeptdeo de lisina, indicando que o cdon
AAA codifica lisina.

50 C E D E R J
MDULO 3
26
Inmeros mRNAs sintticos foram utilizados em diversos
experimentos, permitindo, assim, a identificao das composies de

AULA
bases nas trincas que codificam quase todos os aminocidos.
Uma limitao dessa estratgia era o tipo de mRNA utilizado como
molde para a sntese dos polipeptdeos. Nesta srie de experimentos,
os mRNAs foram sintetizados em reaes utilizando a enzima
polinucleotdeo fosforilase, que catalisa a formao de polmeros de
RNA a partir de ADP, CDP, GDP e UDP. Esta enzima no requer molde
e os polmeros formados apresentam uma composio de bases de acordo
com as concentraes relativas dos nucleosdeos 5-difosfatos que servem
como substratos, o que dificulta a definio da seqncia da molcula
de RNA sintetizada.
Outras estratgias foram empregadas para se desvendar todos os
mistrios do cdigo gentico. Por exemplo, os experimentos realizados
por Nirenberg e Philip Leder, em 1964, envolvendo a associao
de ribossomos, mRNAs e aminoacil-tRNAs foram de fundamental
importncia. Neste caso, foi possvel determinar que tipo de aminoacil-
tRNA se liga a cada uma das quase 50 das 64 possveis trincas. Observou-
se, tambm, que alguns cdons no so reconhecidos por nenhum dos
aminoacil-tRNAs, enquanto alguns aminoacil-tRNAs podem reconhecer
mais de um cdon.
O desenvolvimento de mtodos qumicos para a sntese de
polirribonucleotdeos, por H. Gobind Khorana, foi decisivo para a
elucidao do cdigo gentico, uma vez que permitiu a sntese de
molculas com seqncias repetidas e definidas de duas a quatro bases.
Os polipeptdeos, formados a partir destes mRNAs, apresentavam
padres definidos de um ou poucos aminocidos. Estes padres foram
analisados juntamente com todos os dados obtidos at ento e, em 1966,
foi estabelecido o significado de todos os 64 possveis cdons.

O CDIGO GENTICO

O cdigo gentico pode ser visto como a correspondncia


entre a informao armazenada nas linguagens de cido nuclico e de
protena. Mais especificamente a correspondncia entre cdons, trincas
de nucleotdeos no mRNA (lidas na direo 5 para 3) e aminocidos
na protena (lidos na direo N-terminal para C-terminal).

CEDERJ 51
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo I

Na Figura 26.7, voc pode observar as 64 trincas de nucleotdeos e


o que elas especificam. esquerda esto representadas as quatro bases que
podem estar presentes na primeira posio do cdon. No topo da figura
esto representadas as bases que ocupam a segunda posio. Finalmente,
direita esto representadas as bases da terceira posio. Confuso? Nem
tanto. Vamos entender como a gente l esse cdigo!
Segunda base
U C A G

U
) C
U
Primeira base (prxima extremidade 5'

Terceira base (prxima extremidade 3'


A
G

U
C C
A
G

U
C
A
A
) G

U
C
G
A
G
* AUG tambm serve como cdon de iniciao na sntese de protena.

Figura 26.7: O cdigo gentico. Os cdons so escritos na direo 5 3. Em destaque,


esto representados os cdons de terminao da sntese protica (stop codons) e os
aminocidos codificados por apenas um cdon, metionina (AUG) e triptofano (UGG).
AUG tambm serve como cdon de iniciao na sntese de protena.

Vamos procurar na Figura 26.7 o aminocido codificado pela


trinca ACA. A primeira letra do cdon A; portanto, procure esta letra
esquerda da figura. Achou? Todas as trincas que se iniciam com a
letra A esto posicionadas na terceira linha. Concorda? O cdon que
estamos procurando tem C como segunda letra. Logo, devemos procurar
na parte superior da figura qual a coluna que corresponde a esta letra na
segunda posio. Confirme que, na segunda coluna, encontram-se todas
as trincas que tm C como segunda letra. Certo? Ento o cdon que
procuramos se encontra na terceira linha e na segunda coluna. Agora resta
localizar nesta clula o cdon ACA, que o terceiro de cima para baixo. O
que voc encontrou? Espero que voc tenha achado o cdon certo. Apenas
para confirmar, o cdon ACA codifica o aminocido treonina. No to
difcil assim, ? Talvez voc precise treinar um pouco. Nos exerccios, voc
ter a oportunidade de checar se entendeu tudo bem direitinho.

52 C E D E R J
MDULO 3
26
Na Figura 26.8, voc encontra uma outra forma de representao
do cdigo gentico, na qual esto listados todos os aminocidos em uma

AULA
linha e os cdons que os especificam se encontram acima deles. Esta
forma de representao mais indicada caso voc queira saber qual(is)
o(s) cdon(s) que codifica(m) um aminocido especfico. Voc ir us-la
tambm nos exerccios.
Voc deve ter percebido que o cdigo gentico apresenta algumas
peculiaridades. hora de vermos o que ele tem de diferente.

Cdon

Aminocido
Figura 26.8: Representao do cdigo gentico com nfase nos aminocidos. Nas
linhas da parte inferior da figura esto representados os smbolos de uma ou de
trs letras dos aminocidos, e acima deles encontram-se os cdons que os especifi-
cam. Esta forma mais indicada quando se quer saber que cdon(s) determina(m)
um aminocido especfico.

CARACTERSTICAS DO CDIGO GENTICO

Algumas caractersticas importantes do cdigo gentico


precisam ser destacadas e sero discutidas aqui.

Os cdons so constitudos de uma trinca de nucleotdeos


e, por conveno, so sempre escritos na direo 5 3. Por
exemplo, quando nos referimos ao cdon CUA estamos, de
fato, mencionando o cdon 5 CUA 3, que codifica leucina.
Repare, na Figura 26.7, que, se esse cdon tivesse sua direo
invertida, ou seja, 3 CUA 5, ele estaria representando o cdon
AUC, que codifica um aminocido diferente (isoleucina).

O cdigo gentico degenerado. Existem 64 combinaes


possveis de trs nucleotdeos, ainda que apenas vinte
aminocidos participem da sntese de protenas. Esta
discrepncia pode ser explicada porque existe certa redundncia
na traduo. Em outras palavras, alguns aminocidos so
especificados por mais de um cdon, com apenas metionina e
triptofano sendo codificados por cdons nicos.

CEDERJ 53
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo I

Um cdon AUG codifica, normalmente, o incio da


traduo, sendo denominado cdon de iniciao. Esse o
cdon que especifica o aminocido metionina. Outros cdons
de iniciao tambm podem ser encontrados, como por exemplo
GUG. Procure o cdon AUG na Figura 26.7.

Trs cdons (UAA, UAG e UGA) no especificam nenhum


aminocido, mas atuam como cdons de parada ou terminao
da etapa de traduo. O significado dos cdons de terminao
determinado diretamente por fatores proticos. Localize esses
cdons na Figura 26.7.

O cdigo gentico usado em todos os organismos.


Entretanto, o cdigo gentico padro comum, mas
no universal. Apesar de os cdons serem praticamente
idnticos em quase todos os seres vivos, existem diferenas
no cdigo gentico de mitocndrias e cloroplastos. Confira
no Quadro 26.1. O cdon UGA, por exemplo, no cdigo
padro, corresponde a um cdon de trmino de traduo.
Entretanto, no cdigo mitocondrial, UGA codifica triptofano.
J AUA, que normalmente codifica isoleucina, na mitocndria
codifica metionina.

Os cdons no se sobrepem. Na Figura 26.9, voc pode


observar o efeito que teria a sobreposio dos cdons, o que
ainda no foi observado.

Quadro 26.1: Cdons que no fazem parte do cdigo gentico padro.

Cdons Cdigo padro Cdigo mitocondrial


UGA Stop Trp
UGG Trp Trp
AUA Ile Met
AUG Met Met
AGA Arg
g Stop
AGG A
Arg S
Stop

54 C E D E R J
MDULO 3
26
Cdons no-sobrepostos

AULA
Cdons sobrepostos

Figura 26.9: No-sobreposio versus sobreposio de cdons.

No existe qualquer tipo de pontuao entre os cdons, ou


seja, estabelecida a primeira trinca (trs bases), cada trinca
seguinte codifica um aminocido diferente at que se atinja
o(s) cdon(s) de terminao da sntese protica. Em outras
palavras, estabelecido o incio da traduo, no existe base
ociosa que no faa parte de um cdon. O cdon iniciador, a
primeira trinca, estabelece o quadro (ou fase) de leitura. Essa
caracterstica, que ficar mais bem entendida no item seguinte,
voc pode visualizar na Figura 26.10.

Em uma dada seqncia, possvel estabelecer trs quadros


(ou fases) de leitura. Por tudo que j estudamos at agora,
fcil voc entender o porqu, no? Observe a Figura 26.10.
Uma mesma seqncia de nucleotdeos de um RNA pode
ser traduzida em qualquer um dos trs quadros de leitura,
dependendo de onde o processo de descodificao se inicia.
Esses quadros de leitura se estabelecem de acordo com o
cdon iniciador. Por exemplo, o quadro de leitura 1 se inicia
na primeira base da seqncia, tendo como cdon iniciador
o CUC. O quadro de leitura 2 tem incio na segunda base,
com o cdon iniciador UCA. J o quadro de leitura 3 comea
com a terceira base, que forma o cdon iniciador CAG. Cada
quadro de leitura apresenta uma seqncia distinta de cdons
e, obviamente, codificar uma protena diferente. Em geral,
apenas uma das trs possveis fases de leitura em um mRNA
codifica uma protena especfica.

CEDERJ 55
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo I

5' 3'
CUC AGC GUU ACC AU
Quadro de leitura 1
Leu Ser Val Thr

5' 3'
C UCA GCG UUA CCA U
Quadro de leitura 2
Ser Ala Leu Pro

5' 3'
CU CAG CGU UAC CAC
Quadro de leitura 3
Gln Arg Tyr His

Figura 26.10: Os trs possveis quadros (ou fases) de leitura para uma seqncia de
RNA. Cada um dos quadros de leitura codifica uma protena diferente.

O termo quadro ou a fase de leitura aberta Open Reading Frame


(ORF) muito empregado na rea da genmica. ORF designa uma
regio do genoma que apresenta cinqenta ou mais cdons desde
um cdon de iniciao at um cdon de terminao, podendo estar
representando um gene.

RESUMO

Nesta aula, voc teve a oportunidade de acompanhar o experimento clssico


de Beadle e Tatum, no qual foi possvel confirmar a relao entre um gene e
uma enzima. Esta foi uma grande conquista na rea da Gentica, uma vez que
comprovou que a herana no apenas uma potencialidade, mas algo que se
manifesta atravs das molculas funcionais codificadas pelos diferentes genes.
A descoberta do cdigo gentico tambm foi um marco na histria da Cincia
Biolgica, vindo a estabelecer a relao direta entre a seqncia de nucleotdeos
em um DNA (ou mRNA) e a seqncia de aminocidos no polipeptdeo por ele
codificado. O cdigo gentico apresenta diversas caractersticas, destacando-se
o fato de o cdon ser constitudo de uma trinca de nucleotdeos, de existir um
cdon que determina o incio da traduo, e que estabelece o quadro de leitura,
e trs cdons que determinam o trmino da sntese protica. Podemos tambm
dizer que o cdigo gentico degenerado e comum e no universal como se
pensava incialmente. A disposio dos cdons em uma molcula de RNA no
apresenta sobreposio e nem pontuao, ou seja, a partir do cdon de incio, a
cada trs nucleotdeos se tem um novo cdon. Portanto, para um mesmo RNA,
dependendo da posio do cdon inicial, possvel se estabelecer trs quadros
(ou fases) de leitura.

56 C E D E R J
MDULO 3
26
EXERCCIOS

AULA
1. O conceito de gene teve de ser mudado medida que novos conhecimentos
foram adquiridos. Qual o conceito inicial? Que descobertas determinaram a
mudana do conceito inicial? Qual o conceito aceito atualmente?

2. Como a utilizao de raios X contribuiu para a proposio, por Beadle e Tatum,


da hiptese um geneuma enzima?

3. Cite os aminocidos codificados pelos seguintes cdons: CGG, UAC, GGA, ACU,
UCA, GCG, UUA e AAU.

4. Cite o(s) cdon(s) que codifica(m) os seguintes aminocidos: arginina, histidina,


metionina, prolina, triptofano e valina.

5. Quantos pares de bases no DNA devem ser deletados em um processo mutacional


para que sejam eliminados trs aminocidos da cadeia polipeptdica sem causar
alterao do restante da seqncia protica? Explique.

AUTO-AVALIAO

Voc j deve estar percebendo que, apesar de dividirmos as disciplinas em


tpicos, ao final todos os temas so necessrios para o entendimento global. No
exerccio 1, por exemplo, voc teve de resgatar um pouco do que aprendeu nas
Aulas 1 e 2. J o exerccio 2 exigiu seus conhecimentos sobre Mutao (Aula 16).
Os exerccios 3 e 4 fizeram com que voc brincasse um pouco com o cdigo
gentico, permitindo que voc se familiarizasse com a relao cdonaminocido.
Por fim, para responder ao exerccio 5, muito certamente voc teve de voltar
parte que discute as caractersticas do cdigo gentico. Caso tenha tido dificuldade
para resolver os exerccios, releia a aula e recorra aos tutores, que estaro sempre
nos plos dispostos a ajudar.

FIQUE ATENTO!

Na prxima aula, discutiremos as caractersticas do processo de traduo, as


molculas envolvidas e uma etapa importante conhecida como ativao dos
aminocidos. At l!

CEDERJ 57
27
AULA
Fluxo da informao
gentica traduo II
objetivos

Nesta aula, ter oportunidade de:


Reconhecer as particularidades do processo
de traduo.
Listar os principais elementos da maquinaria
envolvida na sntese de protenas e suas
peculiaridades.
Saber descrever a etapa de ativao dos
aminocidos.

Pr-requisitos
Esta aula ser mais facilmente assimilada se voc no
tiver dvidas em relao s aulas sobre RNA (Aula 5) e
transcrio (aulas do Mdulo 3). claro que ter
entendido a Aula 26, sobre a parte introdutria
da traduo, tambm de suma importncia.
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo II

INTRODUO Na Aula 26, foram discutidos alguns experimentos que culminaram na proposio
da relao um geneuma enzima e na descoberta do cdigo gentico. Nesta
aula, voc estudar as peculiaridades da sntese protica e as molculas que
participam desse processo. Voc estudar, ainda, uma primeira etapa, anterior
traduo propriamente dita, que envolve a ativao de aminocidos. Como
discutiremos mais adiante, a participao dos aminocidos na sntese protica
depende essencialmente desse primeiro ciclo de reaes.
Vamos comear!

PECULIARIDADES DA SNTESE DE PROTENA

Antes de comearmos, importante que voc saiba que a sntese


de protena no est limitada ao citoplasma. Ela ocorre tambm nas
mitocndrias e nos cloroplastos, que possuem material gentico prprio e
funcionam de forma independente em relao transcrio e traduo
de seus genes. Para voc fixar melhor essa informao, busque a Figura 27.1,
na qual voc encontrar, como exemplo, um esquema de uma clula
vegetal, que voc j deve ter estudado em Biologia Celular, com destaque
para os locais onde ocorre traduo. Nesta aula, entretanto, focaremos
apenas a sntese de protena que ocorre no citoplasma.

Figura 27.1: Locais de sntese de protenas em uma clula vegetal. Esquema de


uma clula vegetal indicando os locais onde ocorre sntese protica, citoplasma,
mitocndria e cloroplasto.

60 C E D E R J
MDULO 3
27
A sntese de protenas engloba a traduo propriamente dita,
ou seja, a sntese de um polipeptdeo, e outras etapas que garantem

AULA
a funcionalidade da molcula sintetizada. A traduo ocorre em trs
estgios: iniciao, alongamento e terminao, que sero estudados na
Aula 28. As outras duas etapas, fundamentais para a sntese correta de
uma protena, so a ativao dos aminocidos, assunto desta aula, e o
processamento ps-traducional dos polipeptdeos recm-sintetizados,
um dos temas da Aula 29. Uma vez terminada a sntese, as protenas
devem, ainda, ser transportadas para os locais em que desempenharo
suas funes. Este processo conhecido por endereamento de protenas
e ser discutido na Aula 29.
Pensamos, primeiramente, em iniciar esta aula apresentando os
principais aspectos que tornam a sntese protica um processo peculiar, de
forma que eles recebessem o merecido destaque. Entretanto, entendemos
que voc assimilaria melhor cada uma dessas caractersticas ao longo
desta aula e da Aula 28. Portanto, fique atento ao texto, em particular
aos boxes, com informaes relacionadas:
complexidade do processo;
ao local onde ocorre a traduo;
molcula que serve de molde para a biossntese de protena;
direo da leitura do mRNA e da sntese do polipeptdeo;
importncia dos tRNAs como adaptadores desse processo;
velocidade da sntese de protena;
ao gasto de energia para sintetizar uma protena;
regulao da sntese protica.

MAQUINARIA DA SNTESE PROTICA

Podemos dizer que a traduo um processo muito mais complexo


que a transcrio e a replicao, pois no se baseia no pareamento comum de
bases nitrogenadas. A traduo necessita da participao coordenada
de mais de 300 macromolculas, e muitas delas esto organizadas na
estrutura tridimensional complexa do ribossomo. Essas macromolculas
incluem, alm do mRNA, diferentes molculas de tRNA, rRNA e
inmeras protenas.
Para voc ter uma idia da complexidade desse processo, em clulas
eucariticas, a sntese de uma protena conta com a participao de mais

CEDERJ 61
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo II

de setenta protenas ribossomais diferentes; vinte ou mais enzimas para


ativar os aminocidos; uma dzia ou mais de enzimas auxiliares e outros
fatores proticos especficos para iniciao, alongamento e terminao da
traduo e cerca de cem ou mais enzimas adicionais para o processamento
final dos mais diferentes tipos de protenas. Alm das protenas, so
necessrios um mRNA e quarenta ou mais tipos de tRNA e rRNA.

Na bactria E. coli,
i o total dos diferentes tipos de molculas de protenas
e RNAs envolvidos na sntese protica similar ao que se observa nas
clulas eucariticas. Os organismos procariticos e eucariticos contm
milhares de cpias de cada protena e tipo de RNA por clula, o que
equivale a aproximadamente 20.000 ribossomos, 100.000 fatores
proticos e enzimas e 20.000 tRNAs. Para uma bactria, as molculas
envolvidas na sntese de protena podem representar mais de 35% do
peso seco da clula.

Apesar da grande variedade de molculas que participam desse


processo, os principais elementos necessrios traduo, que sero
estudados nesta aula, so: a molcula de mRNA, que contm a informao
gentica, os ribossomos, os tRNAs e os aminocidos. Confira na Figura
27.2. Muito do que se conhece a respeito dessas molculas j foi abordado
em aulas da nossa disciplina (Aula 5) ou de Bioqumica. No iremos repetir
o contedo anteriormente estudado, pois nosso objetivo aqui destacar
apenas os aspectos importantes para o processo de traduo.

Ribossomo

Molculas de tRNA
3'

Mistura de aminocidos
no citoplasma
aa1 aa3

Figura 27.2: Principais elementos necessrios traduo. Mensagem sob a forma de


mRNA, ribossomo, molculas de tRNA e mistura de aminocidos no citoplasma.

62 C E D E R J
MDULO 3
27
mRNA MOLCULA CARREADORA DA INFORMAO
GENTICA

AULA
J comentamos anteriormente que o mRNA a molcula que
leva a informao gentica armazenada sob a forma de DNA para o
ribossomo, no qual ser utilizada como molde para a sntese protica.
Em clulas procariticas, que no apresentam ncleo, a transcrio
e a traduo ocorrem simultaneamente, ou seja, a traduo inicia antes
mesmo que o transcrito, a molcula de mRNA, esteja completamente
sintetizado. J em clulas eucariticas, para a grande maioria das
molculas, a transcrio acontece no ncleo, e o transcrito primrio
(pr-mRNA) processado. O mRNA formado , ento, exportado para o
citoplasma, onde se encontram os ribossomos. Confira na Figura 27.3.

a) Clula procaritica

Figura 27.3: Fluxo da


informao gentica em
procarioto e eucarioto.
b) Clula eucaritica

Em caso de dvidas, volte s aulas do Mdulo 3, que tratam justamente da


sntese de RNA pelo processo conhecido como transcrio. Lembra?

A molcula de mRNA responsvel por levar a mensagem gentica


armazenada no DNA para o ribossomo, onde funcionar como molde para a
sntese de protenas atravs de suas trincas de nucleotdeos que especificam
a ordem dos aminocidos na cadeia polipeptdica.

CEDERJ 63
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo II

Os mRNAs de procariotos e eucariotos apresentam caractersticas


marcantes que conferem estabilidade, favorecem o transporte do ncleo
para o citoplasma, no caso de organismo eucaritico, e/ou so de suma
importncia para o processo de traduo. Veja na Figura 27.4 as regies
em destaque para os mRNAs procariticos e eucariticos.

a)

b)

Figura 27.4: mRNAs de eucariotos e procariotos. (a) mRNA eucaritico. (b) mRNA
procaritico.

Vamos relembrar primeiramente os detalhes do mRNA eucaritico


(Figura 27.4.a), que contm informao para a sntese de uma nica
cadeia polipeptdica! Alm da regio codificadora, determinada por um
cdon de iniciao de traduo, em geral AUG, e um ou mais cdons
de terminao, UAA, UAG ou UGA, o mRNA contm duas regies no
traduzidas, uma localizada na extremidade 5 5UTR (UnTranslated
Region) e outra localizada na extremidade 3 3UTR. O mRNA
transportado para o citoplasma apresenta um nucleotdeo modificado
(7-metil guanosina) na extremidade 5, gerando a extremidade 5cap,
e uma seqncia de nucleotdeos na extremidade 3, conhecida como
cauda poli-A. Voc se lembra desses detalhes? justamente na regio
envolvendo a extremidade 5cap no mRNA de eucarioto que se localiza
o stio de reconhecimento do ribossomo RBS (Ribosome Recognition
Site) que, como seu prprio nome diz, o local onde o ribossomo se
liga ao mRNA para iniciar a traduo. Voc ver em detalhes como essa
ligao ocorre na Aula 28.

64 C E D E R J
MDULO 3
27
O mRNA de procarioto (Figura 27.4.b) contm muitas vezes
informao para a sntese de vrias protenas. Esses mRNAs no apresentam

AULA
nenhuma extremidade especfica para o reconhecimento do ribossomo. Em
contrapartida, exibem uma regio altamente conservada, chamada seqncia
de Shine-Dalgarno em homenagem ao pesquisador que a identificou, que
reconhecida pelo ribossomo, dando incio traduo.
Na Figura 27.5.a, voc pode observar as seqncias de Shine-
Dalgarno, presentes nos mRNAs de diferentes genes, que servem como
sinal de iniciao de sntese de protenas em bactria. Repare que,
apesar de diferirem entre si, todas apresentam de trs a nove resduos
de nucleotdeos, quase todos purnicos, e tm suas partes centrais
posicionadas oito a treze pares de bases acima do cdon de iniciao,
ou seja, do lado da extremidade 5. Como voc ver em detalhes na Aula
28, esta regio complementar, ou seja, pareia com uma regio rica
em pirimidina, prxima extremidade 3 do rRNA 16S, que compe
a subunidade menor do ribossomo e cuja seqncia da extremidade
3 est representada na Figura 27.5.b. Note tambm, em destaque na
Figura 27.5.a, que o primeiro AUG aps a seqncia de Shine-Dalgarno
o cdon de incio de traduo.
mRNA de diferentes genes

Figura 27.5: Stios de reconhecimento de ribossomo em organismos procariticos.


(a) Diferentes regies do mRNA, reconhecidas como seqncias de Shine-Dalgarno,
que sinalizam a iniciao da sntese de protena em bactria. Repare que alguns
genes so de origem viral, mas so expressos utilizando a maquinaria da clula hos-
pedeira. (b) Seqncia da extremidade 3 do rRNA 16S, componente da subunidade
menor do ribossomo, que complementar seqncia de Shine-Dalgarno.

CEDERJ 65
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo II

tRNA E AMINOCIDOS

Os cdons no so reconhecidos diretamente pelos aminocidos


que eles especificam. Esta etapa depende de molculas adaptadoras, os
tRNAs, que reconhecem e se ligam tanto ao cdon quanto ao aminocido.
Vamos entender como isso possvel!
Voc j estudou, na Aula 5, que, por pareamento de bases entre
seqncias complementares intracadeias, as molculas de tRNA formam
estruturas secundrias e se assemelham folha de trevo. Essa estrutura
sofre dobramento posterior para formar a estrutura tridimensional em
forma de L compacta. Lembra? Reveja essas estruturas na Figura 27.6.
Duas regies de nucleotdeos no emparelhados localizados em terminais
opostos da molcula em forma de L so fundamentais para a funo
do tRNA na sntese de protenas. Uma dessas regies um segmento
curto em fita simples no terminal 3 da molcula e est do lado em
que o aminocido correspondente ao cdon se liga. A outra regio, o
anticdon, complementar seqncia especfica do cdon na molcula
de mRNA. Nesse caso, o pareamento entre cdon e anticdon ocorre
devido ao alinhamento antiparalelo dos dois RNAs, como pode ser
visto na Figura 27.7. Como a relao entre um cdon e um aminocido
determinada pelo tRNA ligado a ele, podemos, ento, dizer que os
tRNAs so molculas adaptadoras que fazem a correspondncia entre
os aminocidos e os cdons no mRNA.

Os aminocidos livres no participam da traduo. Em lugar disso, os


aminocidos so levados para o ribossomo ligados a tRNAs, que so os
adaptadores desse processo. Nesse caso, os precursores ativados so os
aminoacil-tRNAs, nos quais o grupo carboxila de um aminocido ligado
ao terminal 3OH do tRNA, em uma reao catalisada por aminoacil-
tRNA sintetases. Esta etapa chamada ativao de aminocido, e ser
estudada ainda nesta aula.

66 C E D E R J
MDULO 3
27
AULA
Figura 27.6: Estrutura do tRNA. (a)
Estrutura secundria destacando
as regies mais importantes. (b)
Estrutura tridimensional em forma
de L, indicando o posicionamento
do brao do aminocido e do brao
do anticdon.
D- nucleotdeo de dihidroxi-uracila.

C
e

Anticdon

(b)

Brao D
(resduo
10-25)

Brao
do anti-
cdon

3'

Figura 27.7: Pareamento cdon-antic-


don. O tRNA foi representado por sua
estrutura secundria. Note as posies
das extremidades 5 e 3 das duas
molculas de RNA, tRNA e mRNA, o que
confirma o alinhamento antiparalelo e o
pareamento entre bases que compem o
cdon e o anticdon.

mRNA 5' 3'

cdon

CEDERJ 67
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo II

Os tRNAs so especficos para cada aminocido, existindo


pelo menos um tipo de tRNA correspondente a cada um dos vinte
tipos de aminocidos, conhecidos como aminocidos-padro, que
so incorporados nas protenas. Para que a traduo ocorra de forma
precisa, os tRNAs tm de apresentar duas caractersticas importantes.
Primeiramente, devem ser distinguveis uns dos outros pelas molculas
que reconhecem tipos especficos de tRNAs. Alm disso, devem ser
reconhecidos pelas molculas que interagem com todos os tRNAs.

Voc j estudou alguns aspectos dos tRNAs na Aula 5. Volte a ela se


achar necessrio!

Alguns tRNAs correspondem a um nico tipo de aminocido,


SER
TRNA sendo conhecidos como tRNAs cognatos. Por exemplo, o TRNAS designa ER

A notao simplificada o tRNA que corresponde ao aminocido serina.


de um aminoacil-tRNA
tRNAsmbolo de trs letras do Outros aminocidos tm diversos tRNAs cognatos, que so
aminocido
. Por exemplo,
tRNASer representa o
chamados tRNAs isoaceptores. Os anticdons destes tRNAs contm, na
seril-tRNA, o tRNA AVal extremidade 5, o nucleotdeo inosinato, representado por I, constitudo
representa o valil-
tRNA, e assim por pela base rara hipoxantina (veja sua estrutura na Figura 5.7 da Aula 5).
diante.
O inosinato capaz de formar pontes de hidrognio com trs nucleotdeos
diferentes (U, C e A), embora essas interaes sejam mais fracas do que
as pontes de hidrognio entre os pares de Watson e Crick (Figura 27.8).
Por isso, esta posio, que pode ser confirmada na Figura 27.6.a,
chamada oscilante (wobble). Assim, as duas primeiras bases dos cdons
CGA, CGU e CGC formam pares de Watson-Crick fortes com as bases
correspondentes no anticdon do tRNA, enquanto a terceira base, A,
U ou C, interage com o inosinato (wobble), permitindo que um nico
tRNA reconhea mais do que um nico cdon.

Anticdon (tRNA)

Cdon (mRNA)

Figura 27.8: Possveis pareamentos quando o anticdon do tRNA possui inosinato.


O mesmo tRNA capaz de parear com trs cdons distintos, devido presena do
inosinato na posio oscilante.

68 C E D E R J
MDULO 3
27
Apesar de a terceira base contribuir para a especificidade, o fato
de sua interao com o anticdon ser fraca permite a rpida dissociao

AULA
do tRNA de seu cdon durante a traduo. Provavelmente, se as trs
pontes de hidrognio formadas entre as bases do cdon e do anticdon
fossem fortes, os tRNAs se dissociariam muito lentamente, o que poderia
comprometer a velocidade do processo. Portanto, podemos concluir que
as interaes cdon/anticdon devem atender no apenas acurcia
como tambm velocidade da sntese de protena.

RIBOSSOMO

Como j foi dito em vrios momentos da nossa disciplina, os


ribossomos constituem o local de sntese protica. Os detalhes estruturais
dos ribossomos foram discutidos na Aula 5, mas vale a pena relembrar
que eles so constitudos de diferentes tipos de rRNAs e inmeras
protenas, chamadas protenas ribossomais. Todos os ribossomos,
procariticos e eucariticos, so formados por duas subunidades, menor
e maior, lembra?
Tambm vimos que os rRNAs apresentam estruturas tridi-
mensionais especficas determinadas por pareamento intracadeia das bases
nitrogenadas. Possivelmente, os rRNAs servem como uma armao qual
as protenas ribossomais esto ligadas. Cada uma dessas protenas deve
desempenhar um papel importante na sntese de polipeptdeos, ou como
uma enzima, ou como um componente estrutural do processo global.
importante ressaltar que, apesar do alto grau de complexidade,
as protenas so sintetizadas a uma velocidade surpreendente.
Isso ocorre devido formao, tanto em clulas procariticas quanto
em eucariticas, de grupos de dez a cem ribossomos ligados a uma nica
molcula de mRNA, denominados polirribossomos, ou simplesmente
polissomos, que podem ser vistos com auxlio de microscpio eletrnico.
Observe na Figura 27.9.a que a fita que conecta os ribossomos
a molcula de mRNA que est sendo, simultaneamente, traduzida
pelo conjunto de ribossomos, garantindo o uso eficiente do mRNA.
Os ribossomos individuais nesses polissomos esto separados de tal
forma que a densidade mxima no mRNA de aproximadamente um
ribossomo por cada oitenta nucleotdeos. Os polissomos se originam
porque, uma vez que um ribossomo ativo tenha liberado o stio de
iniciao, um segundo ribossomo pode se ligar ao mesmo stio. Esse
processo ser discutido mais extensivamente na Aula 28.

CEDERJ 69
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo II

a) Alm disso, em organismos


procariticos, a transcrio e a traduo
ocorrem simultaneamente, o que tambm
pode ser visualizado por microscopia
eletrnica, como na Figura 27.9.b. Na
Figura 27.9.c, voc encontra um diagrama
explicativo da Figura 27.9.b.
0,25 m
Na bactria E. coli, a sntese completa
b)
de uma cadeia polipeptdica de
100 resduos a 37C ocorre em,
aproximadamente, 5 segundos. Em
mdia, os ribossomos eucariticos
e procariticos podem adicionar,
respectivamente, 2 e 20 aminocidos
por segundo. uma velocidade muit o
c) alta se considerarmos a complexidade
Direo da 0,25 m
do processo, no?
transcrio
RNA e

Uma caracterstica importante


dos ribossomos o fato de suas duas
subunidades apresentarem formas
irregulares e se encaixarem, formando

mRNA uma fenda atravs da qual o mRNA passa


Polipeptdeo

Figura 27.9: Polissomos. (a) A estrutura do polissomo


quando o ribossomo se move ao longo do
formada por uma molcula de mRNA ligada a mesmo durante o processo de traduo,
vrios ribossomos, que simultaneamente participam
da traduo. (b) Nas clulas procariticas, a traduo e a partir do qual a cadeia polipeptdica
se inicia antes mesmo de terminada a transcrio. (c)
Diagrama explicativo da parte b. crescente emerge. As duas subunidades
ribossomais permanecem separadas,
juntando-se molcula de mRNA, nas proximidades do terminal 5,
apenas para dar incio sntese de uma protena. A subunidade menor
combina os tRNAs aos cdons do mRNA, enquanto a subunidade
maior catalisa a formao das ligaes peptdicas. Durante a etapa
de alongamento da traduo, os ribossomos se movem ao longo do
mRNA, um cdon por vez. Ao final do processo, as duas subunidades
do ribossomo se separam e ficam livres para iniciar uma nova sntese
protica. Voc estudar detalhadamente todo esse processo na Aula
28. Aguarde!

70 C E D E R J
MDULO 3
27
Alm do stio de ligao do mRNA, os ribossomos tm trs outros
stios importantes: o stio aminoacil ou A (Aminoacyl), no qual o aminoacil-

AULA
tRNA se liga trazendo o aminocido a ser incorporado cadeia; o stio
peptidil ou P (Peptidyl), em que se encontra o peptidil-tRNA, ou seja, o
tRNA ligado cadeia polipeptdica nascente; e o stio de sada ou E (Exit),
onde o tRNA no carregado, ou livre, posiciona-se antes de ser liberado
durante a sntese. No mais do que dois desses stios contm tRNAs em
um dado momento. Na Figura 27.10, voc encontra um esquema do
ribossomo com destaque para os stios A, E e P. Na Aula 28, voltaremos
a citar esses stios quando estudarmos as etapas de traduo.

(a)

Sti

Figura 27.10: Stios A, P e E no ribossomo. (a) Representao esquemtica do


ribossomo, com destaque para as subunidades maior e menor, stio de ligao do
mRNA e os stios A, P e E. (b) Modelo tridimensional do ribossomo com destaque
para os stios A, P e E.

ATIVAO DE AMINOCIDO

A ativao dos aminocidos uma etapa fundamental, pois, como


citado anteriormente, os aminocidos livres no citoplasma no participam
da sntese de protenas do ribossomo. Os precursores ativados so os
PHE-TRNA SINTETASE
aminoacil-tRNAs, nos quais o grupo carboxila de um aminocido est
A notao simplificada
ligado covalentemente ao terminal 3OH do seu tRNA cognato. de uma aminoacil-
tRNA sintetase
Durante esta etapa, que ocorre no citosol e no nos ribossomos, Smbolo de trs
cada um dos vinte aminocidos-padro se liga ao tRNA especfico letras do aminocido-
tRNA sintetase. Assim,
custa de energia sob a forma de ATP. Essas reaes so catalisadas Phe-tRNA sintetase
a fenilalanil-tRNA
por um grupo de enzimas ativadoras dependentes de Mg2+ chamadas,
sintetase, Leu-tRNA
genericamente, aminoacil-tRNA sintetases. Por exemplo, a fenilalanil- sintetase a leucil-
tRNA sintetase, e
tRNA sintetase, cuja notao simplificada Phe-tRNA sintetase, a assim por diante.
enzima que catalisa a reao de formao do tRNAPhe.

CEDERJ 71
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo II

importante que voc saiba que para cada aminocido e seus


tRNAs correspondentes existe uma enzima aminoacil-tRNA sintetase, ou
seja, quando existem dois ou mais tRNAs para um mesmo aminocido,
geralmente uma nica enzima catalisa a reao de todos eles.
A importncia da ativao se deve ao fato de que a sntese
correta de uma protena requer duas etapas igualmente importantes de
reconhecimento de molculas. Primeiramente, deve ser feita a escolha
do aminocido correto para a ligao covalente a um tRNA. Em
seguida, deve ser feita a seleo do tRNA carregado de um aminocido
especificado pelo cdon presente no mRNA.
Chegou a hora de voc entender como ocorre a ativao dos aminocidos,
o que ser mais fcil se voc ler o texto acompanhando os esquemas mais
detalhados representados nas Figuras 27.11, 27.12 e um esquema mais
simplificado de todo o processo representado na Figura 27.13.
A ativao ocorre em duas reaes seqenciais catalisadas por uma
mesma enzima. O processo, que energeticamente desfavorvel, torna-se
possvel apenas mediante a hidrlise de uma molcula de ATP. Isso ocorre
AMINOACIL-AMP em uma primeira etapa, na qual a aminoacil-tRNA sintetase reconhece
Aminoacil-AMP um seu aminocido correspondente e seu segundo substrato, um ATP.
termo genrico. De
uma forma geral, o Forma-se, ento, uma ligao entre o grupo carboxila do aminocido e
sufixo ina, presente
nos nomes da maioria
o fosfato do AMP, originando o AMINOACIL-AMP, com liberao de fosfato
dos aminocidos, inorgnico (PPi), como voc pode conferir na Figura 27.11.
substitudo por ill para
denominar o composto
formado. Por exemplo,
o composto formado
pela ligao do
fenilalanina com
o ATP chamado
fenilalanil-AMP. O
correspondente da
metionina o metionil-
AMP, o da leucina
o leucil-AMP, e
assim por diante. A
mesma regra se aplica
aos termos genricos
aminoacil-tRNA
e aminoacil tRNA
sintetase.

Figura 27.11: Ativao de ami-


nocido 1a etapa. Ligao entre
um aminocido e o ATP, com
formao de um aminoacil-AMP.
Reao catalisada por aminoacil-
tRNA sintetases.

72 C E D E R J
MDULO 3
27
A segunda etapa produz uma ligao rica em energia entre o aminocido
e a ribose do nucleotdeo posicionado na extremidade 3 do tRNA, de forma

AULA
que, quando este aminocido adicionado cadeia polipeptdica crescente,
esta energia liberada para a formao da ligao peptdica. Confira, tambm,
na Figura 27.6.a, que a seqncia de nucleotdeos prxima a essa extremidade
altamente conservada, Pu (A ou G), C, C e A. Portanto, a reao ser sempre
com um nucleotdeo derivado da . Na Figura 27.12, voc pode observar
que duas classes de enzimas aminoacil-tRNA sintetases podem catalisar a
reao a partir do aminoacil-AMP. As enzimas pertencentes s classes I e
II catalisam a ligao do aminocido, respectivamente, ao carbono 2 e ao
carbono 3 da ribose. O produto da reao catalisada por enzimas da classe
I sofre ainda transesterificao, sendo convertido ao composto resultante da
ao de enzimas da classe II.

5'-aminoacil adenilato
(aminoacil-AMP)

Figura 27.12: Ativao de aminocido 2a etapa. Transferncia do grupo aminoacil, presente em um amino-
acil-AMP, para o tRNA especfico. Reao catalisada por aminoacil-tRNA sintetases, com formao de produtos
diferentes de acordo com a classe da enzima.

CEDERJ 73
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo II

Nos dois esquemas detalhados, voc pde visualizar as frmulas


estruturais dos compostos que participam do processo de ativao de
um aminocido. Na Figura 27.11, por exemplo, voc encontrou os
detalhes do ATP e do aminocido, que reagem entre si para formar o
aminoacil-AMP na primeira etapa de ativao. J na Figura 27.12 voc
pde observar os detalhes do que ocorre pela ao das classes I e II da
enzima aminoacil-tRNA sintetases sobre o aminoacil-AMP.
A reao global catalisada por estas enzimas :
Mg2+

Aminocido + tRNA + ATP Aminoacil-tRNA + AMP

O esquema simplificado apresentado na Figura 27.13 tem por


objetivo facilitar o aprendizado do processo geral. Note que as duas etapas
so catalisadas por uma mesma enzima. Portanto, a ao das duas classes
de aminoacil-tRNA sintetases, na primeira etapa, resulta em formao de
aminoacil-AMP. A partir desse composto, dois grupos de aminoacil-tRNA
sintetases, classes I e II, catalisam a reao de ligao do aminocido,
respectivamente, ao C3 e ao C2 do nucleotdeo A da extermidade 3 do
tRNA

Figura 27.13: Ativao de


nocido processo global
Na representao do tRNA
C e A so, respectivamente
smbolos de duas citosinas e
adenina, sempre presente
extremidade 3'.

74 C E D E R J
MDULO 3
27
Na Figura 27.14, voc encontra um outro esquema, com destaque
para a participao direta da enzima, sua ligao com os substratos e

AULA
a formao do aminoacil-tRNA. Repare que, ao final do processo, a
enzima est livre para reiniciar um novo ciclo de reaes.
Aminocido

cido
do

co

Figura 27.14: Ativao de aminocido participao da aminoacil-tRNA sintetase.


Destaque para a enzima aminoacil-tRNA sintetase, seus stios de ligao com o ATP,
o aminocido e o tRNA.

ATIVIDADE DE REVISO DAS AMINOACIL-tRNA


SINTETASES

A taxa de erro durante a sntese protica de aproximadamente


1 erro/104 aminocidos incorporados, um valor no to baixo quanto o
observado na replicao do DNA. No parece mesmo necessrio uma taxa
to baixa, uma vez que um erro na protena pode ser apagado pela sua
destruio, no sendo transmitido para as geraes futuras. Concorda?
O que se sabe que este grau de fidelidade suficiente para assegurar que
a maioria das protenas no contenha erro e que a grande quantidade de
energia despendida na sntese protica raramente seja desperdiada.
O que se sabe tambm que a capacidade desse grupo de enzimas
de se ligar a um aminocido errado mais baixa do que seria na verdade
o limitado pela energia de ligao disponvel derivada de interaes
entre a enzima e o substrato. Isso se deve ao fato de algumas aminoacil-
tRNA sintetases apresentarem uma funo revisora. Por exemplo, todo
aminoacil-AMP produzido pela Ile-tRNA sintetase (isoleucil-tRNA
sintetase) checado em um segundo stio ativo da mesma enzima, de
forma que os compostos formados incorretamente na primeira etapa do
processo sejam hidrolisados. Alm disso, grande parte das aminoacil-
tRNA sintetases pode hidrolisar a ligao entre aminocido e tRNA, o
que acelerado em presena de um aminoacil-tRNA incorreto.

CEDERJ 75
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo II

A atividade revisora fundamental para o reconhecimento


correto de um aminocido que apresenta similaridade estrutural com
outro(s). Volte s aulas de Bioqumica para rever as estruturas dos
aminocidos. Voc ver que, geralmente, vrios deles so estruturalmente
relacionados. Portanto, parece bvio que as aminoacil-tRNA sintetases
que ativam aminocidos estruturalmente distintos de qualquer outro
no exibam atividade de reviso. Nesses casos, acredita-se que o stio
ativo de aminoacilao possa discriminar entre o seu substrato e um
aminocido incorreto.
Como cada enzima desse grupo tem o potencial para discriminar
entre dois substratos diferentes, muitas vezes a interao entre aminoacil-
tRNA sintetases e tRNAs chamada segundo cdigo gentico, para ressaltar
seu papel crtico na manuteno da acurcia da sntese protica.

RESUMO

A sntese protica um processo bastante complexo que envolve a ativao dos


aminocidos, a traduo propriamente dita, que ocorre em trs estgios, e o
processamento ps-traducional dos polipeptdeos recm-sintetizados. A sntese
de protenas, representa um alto custo energtico, mas entretanto, a velocidade
de sntese de protena surpreendentemente alta.
Os ribossomos encontrados no citoplasma representam o principal local de sntese
de cadeias polipeptdicas em uma clula. Nesse processo, o mRNA desempenha o
papel de molde, uma vez que carrega a informao armazenada no DNA. Em sua
estrutura, encontram-se os cdons, que especificam os aminocidos na protena,
e regies importantes para que o processo se inicie. J os tRNAs tm a funo de
transportar os aminocidos para o local de sntese. Suas duas principais caractersticas
so: a extremidade 3, na qual um aminocido especfico se liga, e o anticdon,
complementar ao cdon, no mRNA, que codifica o aminocido ligado.
A ligao dos aminocidos aos seus tRNAs cognatos ocorre no citoplasma, sendo
catalisada por enzimas denominadas aminoacil-tRNA sintetases. Esse processo ocorre
em duas etapas: formao de aminoacil-AMP e ligao do aminocido ao tRNA.
Algumas enzimas desse grupo exibem atividade de reviso, ou seja, o aminoacil-
AMP checado, o que contribui para que a taxa de incorporao de aminocidos
errados seja baixa o suficiente para garantir que grande parte das protenas no
apresente erro e que o elevado gasto de energia no seja desperdiado.

76 C E D E R J
MDULO 3
27
EXERCCIOS

AULA
1. Quais as etapas envolvidas no processo de sntese de protenas?

2. Leia com bastante ateno as sentenas a seguir e assinale as verdadeiras (V) e


as falsas (F). No caso de consider-las falsas, reescreva-as corretamente ou explique
o porqu.

a) ( ) A seqncia de aminocidos em uma cadeia polipeptdica determinada


pela seqncia de cdons no mRNA em um processo chamado transcrio.

b) ( ) Uma parte da molcula de tRNA contm um anticdon de duas bases que


complementar ao cdon apropriado no mRNA.

c) ( ) Cada ribossomo constitudo de duas subunidades, sendo que cada uma


delas contm mRNA e muitas protenas diferentes.

d) ( ) Os ribossomos contm um stio de ligao do mRNA e trs stios de ligao


para tRNA.

3. Cite duas diferenas entre os mRNA procariticos e eucariticos importantes


para a sntese de protenas.

4. Qual a importncia dos tRNAs para a sntese de protenas?

5. Descreva resumidamente a etapa de ativao dos aminocidos.

AUTO-AVALIAO

Os exerccios desta aula tm por objetivo ajudar na sedimentao dos principais


pontos abordados. Se voc no estiver acumulando dvidas em nossa disciplina,
certamente no ter encontrado dificuldades para responder s questes. Lembre-
se de que haver sempre um tutor disponvel no plo para ajud-lo!

FIQUE ATENTO!

Esperamos que, ao final desta aula, voc se sinta bastante familiarizado com
todas as molculas que sero mencionadas na Aula 28, na qual abordaremos os
mecanismos pelos quais a cadeia polipeptdica sintetizada.

CEDERJ 77
28
AULA
Fluxo da informao
gentica traduo III
objetivos

Nesta aula, voc ter a oportunidade de:


Descrever cada uma das etapas da traduo:
iniciao, alongamento e terminao.
Relatar alguns mecanismos envolvidos
no controle da expresso gnica ao nvel
traducional e alguns antibiticos que
interferem na traduo.

Pr-requisito
Para o bom acompanhamento desta aula
fundamental que voc tenha entendido
muito bem as Aulas 26 e 27.
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo III

INTRODUO Na Aula 26, voc estudou o cdigo gentico que correlaciona os cdons no
mRNA e os aminocidos na protena. J na Aula 27 voc teve a oportunidade
de conhecer os principais aspectos gerais da sntese protica e o processo de
ativao dos aminocidos precursores. Nesta aula, voc ver em detalhes como
ocorre a traduo propriamente dita, um processo que ocorre nos ribossomos
e conta com a participao de inmeras molculas, sendo que as principais j
foram apresentadas a voc nas aulas anteriores. Como a sntese de biomolculas
polimricas, em geral, a traduo consiste em trs estgios: iniciao, alongamento
e terminao. Estudaremos detalhadamente cada um deles.
Aps o aprendizado da sntese de cadeias polipeptdicas, discutiremos tambm
os principais processos envolvidos no controle da expresso gnica ao nvel
de traduo.
As trs etapas que constituem a traduo propriamente dita so iniciao,
alongamento e terminao. Vamos, ento, entender cada uma delas!

INICIAO

Primeiramente, importante que voc saiba que a traduo de


toda protena se inicia com a incorporao de metionina, modificada ou
no. Para isso, necessria a formao de um complexo, denominado
complexo de iniciao de traduo. Esta etapa ocorre de maneira distinta
entre os organismos procariticos e eucariticos. Entretanto, em linhas
gerais, o mRNA, contendo informao para o polipeptdeo a ser
sintetizado, se liga subunidade menor do ribossomo. Em seguida, ocorre
a ligao entre o aminoacil-tRNA iniciador e a subunidade ribossomal
maior para formar o complexo de iniciao. Este tRNA iniciador ocupa
o stio P no ribossomo (j falamos dele na Aula 27, voc se lembra?) e seu
pareamento, atravs do anticdon, com o cdon AUG do mRNA sinaliza
o comeo da sntese da cadeia polipeptdica. Esta etapa inicial requer
a hidrlise do GTP e promovida por protenas citoslicas especficas
chamadas fatores de iniciao IF (Initiation Factor).
Voc deve estar se perguntando quem este tRNA iniciador, no?
Pois saiba que, embora exista apenas um cdon para metionina
(AUG), existem dois tRNAs para metionina em todos os organismos.
Um deles exclusivamente usado quando AUG representa o cdon de
iniciao da sntese protica. O outro usado quando a metionina
adicionada em uma posio interna de um polipeptdeo. Vamos conhecer
um pouco mais sobre esses tRNAs!

80 C E D E R J
MDULO 3
28
Aminoacil-tRNA iniciador

AULA
Em bactria, as duas classes distintas de tRNA especfico para
metionina so designadas tRNAMet e tRNAfMet. O aminocido iniciador
no terminal amino N-formil-metionina (fMet). Observe sua frmula
estrutural na Figura 28.1.

Figura 28.1: Metionina e N-formil-metionina. Frmulas estruturais da metionina


(a), incorporada internamente na cadeia polipeptdica, e da N-formil-metionina
(b), que d incio cadeia polipeptdica.

A entrada do aminocido iniciador no ribossomo se d como


N-formil-metionil-tRNAfMet (fMet-tRNAfMet), que formado em duas
reaes sucessivas. A primeira envolve a ligao da metionina com
o tRNAfMet pela ao da metionil-tRNA sintetase, tal qual ocorre na
ativao de todos os aminocidos. Interessante que a mesma Met-tRNA
sintetase que aminoacila tRNAMet catalisa a reao com o tRNAfMet. Essa
etapa est representada na Figura 28.2.a.
Em seguida, como pode ser observado na Figura 28.2.b, um grupo
formil transferido para o grupo amino da metionina em uma reao
catalisada pela enzima transformilase, ou formil-transferase, tendo como
doador de formil o 10N-formil-tetraidrofolato.

CEDERJ 81
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo III

(a)
Met + tRNAfMet Met-tRNAfMet

(b)

Met-tRNAfMet fMet-tRNAfMet

10
N-formil-THF THF

Figura 28.2: Formao de N-formil-metionil-tRNAMet (fMet-tRNAfMet). Ligao da


metionina ao tRNAfMet (a) e, ento, adio do grupamento formil ao grupo amino
da metionina (b). THF tetraidrofolato.

Essa reao assegura que o aminoacil-tRNA iniciador no


participar das reaes de alongamento. A transformilase mais seletiva
que a Met-tRNA sintetase, no sendo capaz de formilar nem metionina
livre, nem metionina ligada ao tRNAMet. Esta enzima especfica
para resduos de metionina ligados ao tRNAfMet, provavelmente por
reconhecimento de alguma caracterstica estrutural nica desse RNA.
Tambm importante ressaltar que o bloqueio do grupo amino
(NH2) da metionina pelo N-formil serve para impedir sua entrada em
posies internas da cadeia, alm de permitir que fMet-tRNAfMet se ligue
ao stio de iniciao especfico no ribossomo, que, alis, no aceita Met-
tRNAMet ou qualquer outro aminoacil-tRNA.
Ao contrrio do que ocorre em bactrias, em eucariotos todos os
polipeptdeos sintetizados pelos ribossomos citoslicos comeam com
um resduo de metionina em lugar de N-formil-metionina. Entretanto,
tambm um tRNA iniciador, tRNAiMet, que se difere do tRNA usado
para carregar metionina nas posies internas da cadeia polipeptdica,
participa dessa etapa. A mesma Met-tRNA sintetase catalisa a reao de
ligao de metionina aos dois tRNAs, tRNAMet e tRNAiMet.
A discriminao funcional entre os dois tRNAs isoaceptores
realizada pelos fatores de iniciao e de alongamento. Os fatores de
iniciao reconhecem tRNAiMet enquanto os fatores de alongamento
reconhecem tRNAMet.

82 C E D E R J
MDULO 3
28
De forma distinta dos polipeptdeos sintetizados pelos ribos-
somos, os sintetizados nas mitocndrias e nos cloropolastos comeam

AULA
com N-formil-metionina.

Identificao do cdon iniciador

Uma exigncia da sntese protica selecionar o cdon de


iniciao apropriado, geralmente AUG, para a traduo. Isto
realizado ao nvel do ribossomo pela ligao da unidade ribossomal
menor ao mRNA. O reconhecimento do cdon de iniciao realizado
de maneiras diferentes em procariotos e eucariotos. Esta diferena no
mecanismo de iniciao responsvel pelo fato de que cada mRNA
eucaritico, geralmente, codifica s uma protena, enquanto os mRNAs
procariticos codificam mais de uma.
Em procariotos, o cdon AUG iniciador pode ocorrer em qualquer
ponto dentro do mRNA e pode existir mais de um stio de iniciao
dentro do mesmo mRNA. Nesses organismos, o cdon iniciador AUG
direcionado para a posio correta na subunidade 30S por um sinal de
iniciao chamado seqncia Shine-Dalgarno, no mRNA. Lembre que
esta seqncia pareia com uma regio complementar, rica em pirimidina,
prxima ao terminal 3 do RNA 16S da subunidade 30S (volte Aula 27
se julgar necessrio). O pareamento de bases entre o mRNA e o rRNA fixa
o mRNA, de forma que o AUG corretamente posicionado para iniciar
a traduo. O AUG especfico, no qual se liga o fMet-tRNAfMet, , portanto,
distinguido dos cdons de metionina internos por sua proximidade
seqncia Shine-Dalgarno no mRNA. Observe a Figura 28.3, na qual
est representada a identificao do cdon iniciador em procariotos.

3
HO
Terminal 3' do AG
rRNA 16S U
A AC
UU C C C C
U
fMet Thr Met Ile
5 mRNA
U U C A C A C AGGAA A C A G C U A U GA C C A U G AU U
3
Seqncia de
Shine-Dalgarno UAC
Anticdon do
fMet-tRNAfMet

Figura 28.3: Identificao do cdon iniciador em procariotos. A seqncia de Shine-


Dalgarno direciona o cdon iniciador AUG para sua posio na subunidade menor
do ribossomo.

CEDERJ 83
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo III

A importncia da seqncia Shine-Dalgarno corroborada pelo


fato de que mutaes nesta regio que prejudicam o pareamento de base
entre mRNA e rRNA diminuem tambm a eficincia de traduo. Em
contrapartida, aquelas que favorecem o pareamento de base fazem com
que o mRNA seja mais eficientemente traduzido.
Diferentemente do que ocorre nos organismos procariticos, em
eucariotos, a seqncia AUG mais prxima do terminal 5do mRNA
geralmente serve como cdon de incio para a nica protena codificada
por cada mRNA. Nesses organismos, a subunidade ribossomal menor se
liga ao terminal 5 do mRNA e se move ao longo da fita at encontrar
uma seqncia AUG, que reconhecida pelo pareamento de bases
com o anticdon do Met-tRNAiMet. Em organismos superiores, mas
no em levedura, o reconhecimento do AUG iniciador facilitado por
uma seqncia de bases flanqueadoras, conhecida como contexto de
iniciao. A seqncia consenso, ou seja, que normalmente encontrada,
PurNNAUGG, onde Pur qualquer purina (A ou G), N qualquer
base e AUG, em negrito, o cdon de iniciao. Sabe-se que a seqncia
preferida GCCGCCPurCCAUGG, mas ainda no se sabe como ela
reconhecida. No entanto, sabemos que, quando o contexto de iniciao
do primeiro AUG (cdon de iniciao) muito diferente dessa seqncia,
a subunidade menor, 40S, pode passar por ele e iniciar a traduo no
prximo AUG, localizado abaixo do cdon de iniciao. Voc j pode
imaginar o prejuzo para a clula se isso ocorre, no?

Formao do complexo de iniciao em organismos


procariticos

A formao do complexo de iniciao ocorre em trs etapas.


Vamos comear discutindo os detalhes do que ocorre em procariotos,
nos quais a subunidade ribossomal 30S forma um complexo com os trs
fatores de iniciao, IF-1, IF-2 e IF-3. Comece observando a funo de
cada um deles no Quadro 28.1. Em seguida, leia os pargrafos seguintes
acompanhando o esquema representado na Figura 28.4.

Quadro 28.1: Fatores de iniciao em bactria.

Fator Funo
Aumenta a taxa de dissociao das duas subunidades ribossomais,
IF-1
provavelmente contribuindo com a ligao do IF-3.
IF-2 Facilita a ligao do fMet-tRNAfMet subunidade ribossomal 30S.
Liga-se subunidade ribossomal 30S.
IF-3 Impede a associao prematura das subunidades 30S e 50S.
Aumenta a especificidade do stio P ao fMet-tRNAfMet..

84 C E D E R J
MDULO 3
28
AULA

Figura 28.4: Formao do complexo de iniciao da traduo em procariotos.


A explicao do esquema encontra-se no texto.

Inicialmente, ocorre a ligao da subunidade 30S com o fator de


iniciao IF-3, o que impede a combinao prematura das subunidades
30S e 50S. A dissociao das subunidades ribossomais tambm
favorecida pela ligao de IF-1 poro da subunidade ribossomal
menor correspondente ao stio A. Por fim ocorre a ligao do mRNA

CEDERJ 85
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo III

subunidade 30S, com o posicionamento do cdon de iniciao em


um local especfico da subunidade menor. Lembra da importncia da
seqncia de Shine-Dalgarno?
As duas subunidades ribossomais, 30S e 50S, contribuem para a
caracterstica dos stios de ligao do aminoacil-tRNA. Entretanto, no
estgio inicial de formao do complexo de iniciao da traduo, o
AUG iniciador se posiciona na subunidade 30S na parte correspondente
ao stio P, que o nico stio ao qual fMet-tRNAfMet pode se ligar.
importante lembrar que fMet-tRNAfMet uma exceo, pois, como
voc ver mais adiante nesta aula, durante o estgio de alongamento
subseqente, todos os outros aminoacil-tRNAs que chegam, incluindo
Met-tRNAMet, que se liga aos AUGs internos da fase de leitura do mRNA,
ligam-se ao stio A.
Em seguida, o complexo constitudo pela subunidade 30S, por IF-3 e
pelo mRNA forma um complexo ainda maior com IF-2 ligado ao GTP
e fMet-tRNAfMet. Finalmente, antes da liberao de IF-3, esse complexo
grande se combina com a subunidade ribossomal 50S, o que estimula a
hidrlise de GTP a GDP e Pi pelo IF-2. Essa reao irreversvel fornece
energia para o rearranjo conformacional das duas subunidades e libera
IF-1 e IF-3 para participao em outras reaes de iniciao.
Em bactria, o resultado dessa etapa um ribossomo 70S funcional
chamado complexo de iniciao, contendo o mRNA e o iniciador fMet-
tRNAfMet. A correta ligao do fMet-tRNAfMet ao stio P no complexo de
iniciao 70S completo assegurada por dois pontos de reconhecimento
e ligao: interao entre cdon do mRNA e anticdon do tRNA,
envolvendo o AUG iniciador fixado no stio P, e interaes entre o stio
P e o fMet-tRNAfMet.
Resumindo, a iniciao resulta na formao de um complexo
fMet-tRNAfMetmRNAribossomo em que fMet-tRNAfMet ocupa o stio
P do ribossomo, enquanto o stio A est posicionado para receber o
aminoacil-tRNA carregando o aminocido seguinte da cadeia.

Formao do complexo de iniciao em organismos


eucariticos

Como em organismos procariticos, o incio da traduo em


eucariotos se d com as duas subunidades ribossomais separadas, o que
mantido por um fator antiassociao, e termina com a hidrlise de GTP e

86 C E D E R J
MDULO 3
28
associao da subunidade maior. Entretanto, a etapa inicial de formao
do complexo de iniciao diferente em eucariotos provavelmente devido

AULA
s caractersticas do mRNA. Estudaremos essa etapa em detalhes mais
adiante. Uma outra diferena entre procariotos e eucariotos a existncia
de um nmero maior de fatores de iniciao eucariticos. Alguns desses
fatores e suas funes esto listados no Quadro 28.2.

Quadro 28.2: Fatores de iniciao em eucariotos.

Fator* Funo
eIF-2 Facilita a ligao do Met-tRNAiMet subunidade ribossomal 40S.
Primeiros fatores que se ligam subunidade 40S, facilitando as
eIF-2B, eIF-3
etapas subseqentes.
A atividade RNA helicase remove a estrutura secundria no mRNA,
eIF-4A permitindo a ligao da subunidade 40S. Faz parte do complexo
eIF-4F.

Liga-se ao mRNA facilitando o movimento da subunidade 40S ao


eIF-4B
longo do mRNA para localizar o primeiro AUG.

eIF-4E Liga-se ao 5' cap do mRNA. parte integrante do complexo eIF-4F.

Liga-se ao eIF-4E e protena de ligao cauda poli-A. Faz parte


eIF-4G
do complexo eIF-4F.

Promove a dissociao de outros fatores de iniciao e da sub-


eIF-5 unidade 40S como um incio para a associao da subunidade
60S para formar o complexo de iniciao 80S.

Facilita a dissociao do ribossomo 80S inativo nas subunidades


eIF-6
40S e 60S.

* O prefixo "e" identifica esses fatores como eucariticos.

Para um melhor entendimento do processo de formao do


complexo de iniciao em eucarioto, leia o texto a seguir acompanhando
a Figura 28.5.

CEDERJ 87
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo III

e
S)
e

Complexo de iniciao de traduo constitudo


pelo ribossomo 80S, com Met-tRNAiMet posicio-
nado no stio P pareando com AUG no mRNA.
Figura 28.5: Formao do complexo de iniciao da traduo em eucariotos. A explicao do esquema encon-
tra-se no texto.

88 C E D E R J
MDULO 3
28
O processo se inicia com o complexo eIF-4F, formado pelas
protenas eIF-4E, eIF-4G e eIF-4A, ligando-se extremidade 5 cap do

AULA
mRNA e promovendo o desenovelamento de estruturas secundrias, uma
vez que eIF-4A exibe atividade de RNA helicase. A ligao de eIF-4B
contribui ainda mais para o desenovelamento.
Paralelamente, o fator eIF-3, necessrio para manter a subunidade
40S dissociada, promove sua ligao, atravs da regio correspondente ao
stio P, com o complexo ternrio constitudo do primeiro Met-tRNAiMet
e eIF-2 ligado ao GTP. O complexo maior formado pela associao da
subunidade 40S e eIF-2GTPMet-tRNAiMet se liga, ento, ao terminal
5 do mRNA com o auxlio de vrios fatores. Um deles, eIF-4E, tambm
chamado protena de ligao ou CBP (Cap Binding Protein) e que faz parte
do complexo e IF-4F, liga-se especificamente ao terminal 5 cap do mRNA,
mas no est representado na figura. O mRNA , ento, explorado para
localizao do primeiro AUG que sinaliza o incio da fase de leitura. Lembre
que, em eucarioto, o mRNA no tem as seqncias complementares para
se ligar ao rRNA 16S, tal qual a seqncia de Shine-Dalgarno, mas sim
o contexto de iniciao.
Em resumo, nessas duas primeiras etapas, a ligao do mRNA
subunidade menor e a explorao do primeiro cdon posiciona a
subunidade 40S do ribossomo no AUG iniciador na seqncia apropriada
de nucleotdeos flanqueadores.
Na ltima etapa, com a hidrlise de GTP a GDP e Pi pela ao de
GTPase (eIF-5), ocorre a montagem do complexo de iniciao completo,
constitudo do ribossomo 80S ligado ao Met-tRNAiMet e ao mRNA, que
se encontra pronto para dar incio etapa de alongamento de cadeia.
Os vrios fatores de iniciao adicionais no mencionados no texto
e nem representados na figura so necessrios para a etapa de explorao
do mRNA e para a montagem do ribossomo 80S.

ALONGAMENTO

Ao final do processo de iniciao, o ribossomo comea a traduo


da fase de leitura associada ao cdon de iniciao. A traduo dos
cdons seqenciais no mRNA realizada pela repetio seqencial de
trs reaes para cada aminocido. Dos trs estgios do alongamento,
que so similares tanto em procariotos como em eucariotos, apenas
dois requerem protenas no ribossomais conhecidas como fatores de

CEDERJ 89
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo III

alongamento Elongation Factor (EF). A formao da ligao peptdica


no requer nenhum fator e a nica reao da sntese protica catalisada
pelo prprio ribossomo.

Direo da leitura do mRNA e da sntese do polpeptdeo


Traando um paralelo com a replicao e a transcrio que ocorrem
em uma direo determinada, ou seja, de 5 (terminal fosfato livre) para
3 (terminal hidroxila livre) um polipeptdeo sempre sintetizado na
direo do amino terminal (NH2) para o carboxi terminal (COOH). Isto
ocorre pela adio seqencial de aminocidos ao terminal carboxila da
cadeia polipeptdica crescente. A seqncia de aminoocidos, por sua
vez, especificada pela seqncia de cdons no mRNA, que sempre
lido na direo 5 3.

Em linhas gerais, a extenso da cadeia polipeptdica devida a


sucessivas ligaes covalentes de unidades de aminocidos, cada uma
levada ao ribossomo e corretamente posicionada por seu tRNA, que
pareia com seu cdon correspondente no mRNA. O alongamento
da cadeia se inicia com a ligao de um aminoacil-tRNA ao stio A
do ribossomo. Uma ligao peptdica, ento, se forma entre o grupo
amino do aminoacil-tRNA a ser incorporado e o grupo carboxil da
formil-metionina carregada pelo tRNA iniciador. Ocorre translocao
do ribossomo ao longo do mRNA, de forma a mover o dipeptidil-tRNA
resultante do stio A para o stio P e promover a liberao do tRNA ini-
ciador. Um novo aminoacil-tRNA se liga ao stio A vazio para comear
um outro ciclo de extenso de cadeia, que prossegue como j descrito. A
ligao de cada aminoacil-tRNA que chega ao ribossomo, o movimento
do peptidil-tRNA do stio A para o stio P e o movimento associado do
mRNA, em relao ao ribossomo, para o cdon seguinte so promovidos
pela hidrlise de duas molculas de GTP para cada resduo adicionado
cadeia polipeptdica crescente. Voc pode imaginar o alto custo energtico
que esse processo representa para a clula, no?

Sintetizar uma seqncia definida de aminocidos requer um alto gasto


energtico para a clula. Para voc ter uma idia, a sntese de um
polipeptdeo que apresenta um total de n resduos requer a hidrlise
de, no mnimo, 4n fosfatos ricos em energia, tais como ATP ou GTP, o
que corresponde utilizao de at 90% da energia qumica gasta por
uma clula para todas as reaes biossintticas.

90 C E D E R J
MDULO 3
28
Chegou a hora de discutirmos o processo com a participao
dos fatores de alongamento. Discutiremos o processo que ocorre

AULA
em procarioto e comentaremos as devidas diferenas em relao
aos eucariotos. Para isso, leia o texto acompanhando as Figuras
28.6, 28.7 e 28.8, que correspondem, respectivamente, ligao
do prximo aminoacil-tRNA ao stio A, formao da ligao
peptdica e translocao.
No primeiro estgio do ciclo de alongamento, representado
na Figura 28.6, o prximo aminoacil-tRNA especificado pelo cdon
imediatamente adjacente ao cdon iniciador liga-se primeiramente ao
complexo formado por EF-Tu (EF-1, em
eucarioto) e GTP. Esse complexo ternrio
se liga ao ribossomo e, com a hidrlise
de GTP a GDP e Pi, o aminoacil-tRNA
se liga ao stio A, atravs da interao
entre cdon (mRNA) e anticdon
(tRNA), e EF-TuGDP liberado do
ribossomo 70S. O complexo EF-TuGTP
regenerado com a participao do fator
de alongamento EF-Ts. Primeiramente, o
fator EF-Ts desloca o GDP do complexo
EF-TuGDP, formando EF-TuEF-Ts.
Em seguida, uma nova molcula de
GTP desloca o fator EF-Ts, havendo a
formao de EF-TuGTP, pronto para se
ligar a um novo aminoacil-tRNA.
Aminoacil-tRNAs podem se ligar ao
stio A sem a mediao de EF-Tu, mas a uma
taxa muito baixa para suportar o crescimento
celular. Devido ao grande nmero de cpias
da protena EF-Tu em E. coli, as molculas
de aminoacil-tRNAs da clula so quase que
inteiramente seqestradas por EF-Tu. Alm
disso, fator EF-Tu no se liga nem ao fMet-
tRNAfMett formilado nem ao no-formilado,
por isso o tRNA iniciador nunca l cdons Figura 28.6: Alongamento da cadeia polipeptdica
ligao do segundo aminoacil-tRNA. A explicao
AUG ou GUG internos. do esquema se encontra no texto.

CEDERJ 91
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo III

Por tudo que j foi mencionado, importante enfatizar que o


tRNA posicionado no stio A deve ter o anticdon correto para parear
com o cdon do mRNA tambm posicionado no stio A. A ligao do
tRNA causa uma mudana conformacional da subunidade ribossomal
menor, que favorece a interao entre o rRNA 16S com as duas primeiras
bases do complexo formado pelo cdon e o anticdon, assegurando que
somente o tRNA possa se ligar. Caso a conformao do ribossomo no
seja estabilizada pela interao do tRNA no stio A, ocorre liberao do
aminoacil-tRNA antes da formao da ligao peptdica, o que mediado
pelo fator EF-Tu.
Os dois complexos EF-TuGTP e EF-TuGDP levam alguns segundos
para se dissociar. Esse tempo fundamental para que seja feita a reviso nas
interaes entre cdon e anticdon, de tal maneira
que um aminoacil-tRNA incorreto normalmente
se dissocia do stio A durante este perodo. Esse
mecanismo de reviso apenas confirma se o
pareamento entre cdon e anticdon est correto,
no sendo capaz de identificar aminocidos
incorretos ligados aos tRNAs posicionados no
stio A. Podemos dizer, ento, que o fator EF-Tu
contribui para a taxa e a fidelidade do processo
global de sntese.
No segundo estgio, representado na
Figura 28.7, forma-se uma ligao peptdica
entre os aminocidos ligados por seus tRNAs
aos stios A e P do ribossomo. O que ocorre, de
fato, a transferncia do grupo N-formil-metionil
do seu tRNA, localizado no stio P, para o grupo
amino do segundo aminocido da cadeia, que
se apresenta ligado ao tRNA posicionado no
stio A. Essa reao tem como produto um
dipeptidil-tRNA, no stio A, e o tRNAfMet livre
ou no carregado, no stio P. Uma das funes
da ligao do aminocido correto ao seu tRNA
ativar o aminocido, tornando a formao da
Figura 28.7: Alongamento da cadeia polipeptdica ligao peptdica, durante a sntese de protenas,
formao da ligao peptdica. A explicao do
esquema se encontra no texto. no ribossomo, energeticamente favorvel.

92 C E D E R J
MDULO 3
28
At pouco tempo atrs, acreditava-se que esta reao fosse catalisada
por uma enzima componente do ribossomo, ao qual se denominou peptidil

AULA
transferase. Entretanto, existem fortes evidncias de que, de fato, a reao seja
catalisada pelo rRNA 23S, que compe a subunidade ribossomal maior. Este
seria mais um dos casos de molculas de RNA exibindo atividade cataltica.
O estgio final do alongamento, representado na Figura 28.8,
consiste na translocao, que simplesmente o movimento do ribossomo
de um cdon em direo extremidade 3 do mRNA. Isso resulta em
mudana de posio do anticdon do dipeptidil-tRNA, ainda ligado ao
segundo cdon do mRNA, do stio A para o stio P e do tRNAfMet livre do
stio P para o stio E, ocorrendo, ento, liberao do tRNAfMet livre para
o citosol. Nesse momento, o terceiro cdon do mRNA est posicionado
no stio A e o segundo cdon est localizado no stio P.

tidil-tRNA

oacil-tRNA

Figura 28.8: Alongamento da cadeia poli-


peptdica translocao. A explicao do
esquema se encontra no texto.

Direo do
movimento do
ribossomo

CEDERJ 93
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo III

O movimento do ribossomo ao longo do mRNA requer o fator


de alongamento EF-G, denominado translocase, e a energia proveniente
da hidrlise de GTP a GDP e Pi, sendo favorecido pela mudana de
conformao do ribossomo inteiro. Repare, ainda, na Figura 28.9, a
similaridade entre o complexo EF-TutRNA e o fator EF-G, sugerindo
uma possvel ligao do EF-G ao stio A deslocando o peptidil-tRNA.

Complexo aminoacil- EF-G


tRNAEF-TuGTP
Figura 28.9: Estruturas tridimensionais do complexo EF-TtRNAGTP e do fator EF-G.

Aps esse primeiro ciclo de eventos associados extenso de cadeia,


o ribossomo est pronto para iniciar um novo ciclo para incorporao do
terceiro aminocido. Essa etapa, como as subseqentes que envolvero
a ligao do quarto, quinto, sexto at o ltimo aminocido da cadeia
polipeptdica, ocorre tal qual descrito anteriormente e representado nas
Figuras 28.6, 28.7
7 e 28.8. A diferena que, a partir do segundo ciclo, o stio
P ser sempre ocupado por um peptidil-tRNA e o stio A receber sempre o
aminoacil-tRNA trazendo o aminocido a ser incorporado na cadeia.
O ciclo de eventos de alongamento em eucariotos difere muito
pouco do que se observa em procariotos e que voc acabou de estudar.
Uma dessas diferenas so os fatores eucariticos, EF-1, EF-1 e
EF-2, que tm funes anlogas s dos fatores procariticos EF-Tu,
EF-Ts e Ef-G, respectivamente. Alm disso, pelo fato de os ribossomos
eucariticos no apresentarem stio E, os tRNAs no carregados so
liberados diretamente do stio P.

TERMINAO

A etapa de alongamento um processo cclico que se repete at


que o ribossomo adiciona o ltimo aminocido codificado pelo mRNA.
A terminao da cadeia polipeptdica sinalizada por um cdon de
terminao, UAA, UAG ou UGA, localizado imediatamente aps o cdon
que codifica o ltimo aminocido. A cadeia polipeptdica , ento, liberada
do ribossomo, com o auxlio de protenas chamadas fatores de liberao
Release Factor (RF). Vamos conhecer como isso acontece nas bactrias,
lendo o texto e buscando o esquema representado na Figura 28.10.

94 C E D E R J
MDULO 3
28
Quando um cdon de
terminao ocupa o stio A, trs fatores

AULA
de terminao procariticos, RF1,
RF2 e RF3, promovem trs eventos de liberao
ao stio A
distintos: a hidrlise da ligao do
polipeptidil-tRNA; liberao, do stio
P, do polipeptdeo livre e do ltimo
tRNA no carregado; dissociao do
ribossomo 70S em suas subunidades
30S e 50S, que podem, ento, dar incio
a uma nova sntese.
Apesar de no se conhecer a
verdadeira funo de RF3, possivelmente
esse fator est associado dissociao
do ribossomo. J os fatores RF1 e RF2
reconhecem cdons de terminao
distintos, UAG/UAA e UGA/UAA,
respectivamente. Quando um desses
fatores proticos se liga ao cdon de
terminao, a atividade de peptidil
transferase induz a transferncia do
polipeptdeo recm-sintetizado para
uma molcula de gua, em lugar
de um novo aminocido. Curiosamente,
em eucariotos, um nico fator de
terminao, denominado eRF, reconhece
os trs cdons de terminao.

REGULAO DA TRADUO E
Figura 28.10: Terminao da cadeia poli-
AO DE ANTIBITICOS peptdica. A explicao do esquema se
encontra no texto.
A sntese de milhares de protenas
diferentes em cada clula regulada
de tal forma que somente o nmero
necessrio de molculas de cada
uma delas produzido em qualquer
circunstncia metablica. Vale ressaltar
que, para manter a mistura apropriada
e a concentrao de protenas em

CEDERJ 95
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo III

uma clula, os processos de endereamento e degradao, que sero


estudados na Aula 29, devem ocorrer de forma coordenada com a sntese.
Qualquer descontrole em um desses trs processos pode resultar em
comprometimento das funes vitais da clula.
Com relao regulao da sntese protica, voc j estudou, nas
aulas do Mdulo 3, que o principal mecanismo de controle de expresso
gnica ao nvel transcricional, ou seja, ocorre na transcrio. Entretanto,
esse controle tambm pode ocorrer ao nvel ps-transcricional.
A estabilidade dos mRNAs, por exemplo, bastante varivel,
com a regio 3 no traduzida exercendo um papel importante
na estabilidade dessas molculas. Ocorre que o equilbrio entre a
degradao e a sntese de mRNA o fator determinante para a
quantidade de mRNAs individuais nas clulas, que, por sua vez,
determina a taxa de sntese das protenas.
A regulao da traduo geralmente feita no estgio inicial. Uma
das formas de controle est associada estrutura terciria do mRNA,
que pode prevenir sua ligao subunidade ribossomal. A presena de
protenas que podem se ligar ao mRNA, bloqueando a iniciao, tambm
importante para o controle da traduo. Como exemplo podemos
citar protenas que se ligam seqncia de Shine-Dalgarno, em mRNAs
RNA ANTI-SENSO
procariticos, e a presena de um RNA ANTI-SENSO capaz de impedir a
O RNA anti-senso
apresenta seqncias formao do complexo de iniciao.
complementares Alguns fatores podem interferir diretamente no processo de
regio de um mRNA
que contm um cdon traduo, destacando-se vrios antibiticos e toxinas comumente
de iniciao, podendo
parear com essa regio encontrados na natureza. Os antibiticos, na sua grande maioria, so
e impedir o incio
inibidores de sntese protica em bactrias. As pequenas diferenas
da traduo. Esse
mecanismo de controle observadas entre a sntese de protenas em eucarioto e procarioto so
ao nvel da traduo
comum em bactrias suficientes para que a maioria dos antibiticos no exera qualquer efeito
e envolve o bloqueio
do reconhecimento do
em clulas eucariticas.
cdon de iniciao e da O bloqueio da traduo por alguns antibiticos observado
ligao da subunidade
ribossomal 30S em diferentes estgios desse processo. A estreptomicina, por exemplo,
seqncia de Shine-
Dalgarno. liga-se subunidade menor do ribossomo bacteriano, impedindo a
formao do complexo de iniciao. As tetraciclinas inibem a sntese
protica por se ligarem reversivelmente subunidade 30S do ribossomo
de bactrias sensveis, impedindo, assim, a ligao do aminoacil-tRNA.
J o cloranfenicol, pertencente a um grupo de antibiticos que se
ligam subunidade 50S do ribossomo bacteriano, impede a ao da

96 C E D E R J
MDULO 3
28
peptidil-transferase, enquanto a eritromicina bloqueia a translocao. A
puromicina, por sua vez, apresenta estrutura similar ao tirosinil-tRNA

AULA
(Figura 28.11) e, por isso, incorpora-se na cadeia polipeptdica crescente
causando uma terminao prematura.

(a)

(b)

Figura 28.11: Estruturas comparativas do antibitico puromicina (a) e a poro da


extremidade 3 do tirosinil-tRNA (b).

CEDERJ 97
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo III

RESUMO

A primeira etapa da traduo consiste em formao do complexo de iniciao.


Esse processo ocorre de forma diferente nos organismos procariticos e
eucariticos, provavelmente devido s diferenas entre os mRNAs. Entretanto,
tanto em procarioto quanto em eucarioto, o mRNA se liga subunidade
ribossomal menor e ao aminoacil-tRNA iniciador e, em seguida, ocorre a ligao
da subunidade ribossomal maior. Inmeros fatores proticos, conhecidos como
fatores de iniciao, participam dessa etapa.
A etapa de alongamento se caracteriza por trs eventos: ligao de um aminoacil-
tRNA ao stio A, formao da ligao peptdica entre o aminocido ligado a este
aminoacil-tRNA e o peptdeo presente no peptidil-tRNA localizado no stio P e
translocao, que posiciona o stio A no prximo cdon para dar incio a um novo
ciclo de eventos.
A etapa de terminao conta com a participao de fatores proticos que, ao
reconhecerem um cdon de terminao no stio A, promovem a hidrlise da ligao
do peptidil-tRNA, a liberao do polipeptdeo recm-sintetizado e a dissociao
das duas subunidades ribossomais.
O estgio inicial da traduo o principal alvo de controle desse processo.
Diferentes estruturas tridimensionais que podem ser assumidas pelo mRNA e
a presena de protenas ou de RNAs anti-senso que se ligam ao mRNA podem
impedir a formao do complexo de iniciao de traduo.
O princpio de ao de diversos antibiticos justamente impedir a traduo
nas bactrias resistentes, o que pode ser feito atravs do bloqueio de vrias
etapas do processo.

EXERCCIOS

1. Descreva resumidamente a diferena entre o processo de formao do complexo


de iniciao em procariotos e eucariotos.

2. Marque V (verdadeiro) ou F (falso). Durante a etapa de iniciao da traduo:

a) ( ) metionil-tRNA aparece no stio A do complexo de iniciao 80S.

b) ( ) eIF-3 e a subunidade ribossomal 40S participam da formao do complexo


de iniciao.

98 C E D E R J
MDULO 3
28
c) ( ) o mesmo metionil-tRNA usado nas etapas de iniciao e de alongamento
de cadeia.

AULA
d) ( ) um complexo constitudo de mRNA, subunidade ribossomal 60S e certos
fatores de iniciao formado.

3. Qual dos itens a seguir no necessrio para a sntese de protenas em


eucariotos?

a) mRNA

b) Ribossomos

c) GTP

d) 20 aminocidos diferentes sob a forma de aminoacil-tRNAs

e) fMet-tRNAiMet

4. Marque V ( verdadeiro) ou F (falso). Durante a etapa de alongamento de cadeia


em eucarioto:

a) ( ) o aminoacil-tRNA que chega ao ribossomo se liga ao stio P.

b) ( ) uma nova ligao peptdica formada pelo stio de peptidil transferase na


subunidade ribossomal maior em uma reao GTP-dependente.

c) ( ) o peptdeo, ainda ligado molcula de tRNA, translocado para um stio


diferente no ribossomo.

d) ( ) estreptomicina pode causar liberao prematura do peptdeo incompleto.

5. Por que o antibitico puromicina interfere na sntese de protena?

AUTO-AVALIAO

Faa as questes de mltipla escolha lendo e relendo cuidadosamente as


alternativas. Dessa forma, voc poder usufruir muito mais desse tipo de exerccio.
Em relao s outras questes, voc deve retornar aula para rever os pontos que
porventura ainda no foram bem entendidos. E no se esquea sempre haver
um tutor disponvel no plo para ajud-lo!

CEDERJ 99
Biologia Molecular | Fluxo da informao gentica traduo III

FIQUE ATENTO!

Na Aula 29, voc estudar como os polipeptdeos recm-sintetizados so


processados para gerar uma molcula funcional e como ocorre seu endereamento
para o local onde dever desempenhar sua funo na clula.

100 C E D E R J
Processamento

29
AULA
e endereamento
de protenas
objetivos

Nesta aula, voc a oportunidade de:


Reconhecer a importncia do processamento
de protenas.
Descrever algumas das modificaes
ps-traducionais.
Reconhecer a importncia dos processos
envolvidos no endereamento de protenas.
Descrever o endereamento de protenas
para o retculo endoplasmtico.

Pr-requisitos
Esta aula ser mais facilmente assimilada
se voc no tiver dvidas em relao s Aulas 26,
27 e 28. Provavelmente voc tambm ter
de rever alguns conceitos de Biologia Celular.
Biologia Molecular | Processamento e endereamento de protenas

INTRODUO Para obter sua forma biologicamente ativa, o polipeptdeo deve se dobrar em sua
conformao tridimensional prpria, o que chamado enovelamento. O novo
polipeptdeo pode sofrer ainda processamento enzimtico. Um fato interessante
que muitas vezes esta etapa se inicia durante a sntese do polipeptdeo e s
termina durante o transporte da protena para o seu local de ao. Alm disso,
esse processamento ocorre de acordo com o destino final dessas protenas,
que pode ser o interior ou o exterior da clula, no qual elas desempenharo
suas funes. Por isso, muitas vezes, ao falarmos do processamento de uma
protena, j estaremos abordando o seu endereamento. Se estivermos tratando
de endereamento, por vezes teremos de comentar as modificaes que um
polipeptdeo sofre durante o caminho para o seu destino final na clula.
Vamos entender como tudo isso ocorre!

QUAL A IMPORTNCIA DO PROCESSAMENTO


DE PROTENAS?

Voc j estudou que apenas os vinte aminocidos so especificados


pelo cdigo gentico, certo? Entretanto, a anlise qumica de inmeras
protenas funcionais revela centenas de aminocidos diferentes, sendo todos
variantes estruturais dos vinte aminocidos-padro. Como isso possvel?
Essa diversidade estrutural resultado de modificaes ps-
traducionais das cadeias polipeptdicas sintetizadas durante o processo
de traduo, que, como voc sabe, ocorre nos ribossomos. No s as
cadeias laterais dos aminocidos se apresentam modificadas, como
tambm, inmeras vezes, partes das cadeias polipeptdicas so removidas
durante o processamento das protenas. Em linhas gerais, essa etapa
se destina remoo de um ou mais aminocidos do terminal amino,
adio de grupamentos, tais como acetil, fosfato, metil e carboxil, a
certos resduos de aminocidos, sua clivagem proteoltica ou ligao
de oligossacardeos ou grupos prostticos. Voc deve se lembrar desses
termos, pois eles j foram estudados nas aulas de Bioqumica!
Ser que o tipo de processamento o mesmo para todas as
protenas? Parece lgico que no seja, concorda? importante que
voc saiba que as modificaes ps-traducionais so determinadas por
informaes presentes na prpria estrutura da protena. Nesse caso,
a seqncia de aminocidos e a conformao do polipeptdeo determinam
se a protena ser modificada enzimaticamente e/ou o local intra ou

102 C E D E R J
MDULO 4
29
extracelular para onde ela ser endereada. Essas alteraes podem
resultar, portanto, no apenas em converso na forma funcional da

AULA
protena, mas como tambm em seu direcionamento ao compartimento
celular, no qual a protena desempenhar sua funo, em sua secreo
da clula, ou em mudanas na atividade ou na estabilidade protica.

Algumas protenas assumem sua conformao funcional espontaneamente.


No entanto, muitas vezes o enovelamento de protenas conta com a
participao de protenas especficas, conhecidas como chaperonas
moleculares. As chaperonas constituintes da famlia Hsp70 tm como
funo impedir a formao de estruturas indesejadas de um polipeptdeo
recm-sintetizado. Esse grupo de protenas tambm est envolvido na
insero dos polipeptdeos em membranas e no seu transporte atravs
delas. Em contrapartida, outro grupo de protenas, as chaperoninas,
participa mais diretamente do dobramento dos polipeptdeos.

QUANDO O PROCESSAMENTO SE INICIA?

Voc pode estar pensando que as modificaes s ocorrem nos


polipeptdeos j sintetizados. O que se sabe, de fato, que o processamento
freqentemente se inicia durante a traduo, terminando algum tempo
aps o polipeptdeo ter sido liberado dos ribossomos.
Em eucariotos, as protenas sintetizadas nos polissomos livres
podem ter dois destinos: permanecer no citosol ou ser endereadas ao
ncleo, ao cloroplasto ou mitocndria. Aquelas que permanecem no
citosol esto prontas para funcionar to logo sejam liberadas do ribossomo.
J aquelas que devem ser transportadas para um outro local, geralmente,
sofrem modificaes substanciais durante o processo de transporte.
Muitas protenas, no entanto, so sintetizadas em polissomos
ligados membrana em lugar de polissomos livres. Em bactria, os
polissomos esto associados membrana plasmtica interna. J em
eucariotos os polissomos so encontrados em associao com o retculo
endoplasmtico, e as protenas sintetizadas permanecem neste local ou
se destinam ao complexo de Golgi, aos grnulos secretores, membrana
plasmtica ou aos lisossomos. Se tiver dvida em alguns desses termos,
volte s aulas de Biologia Celular! Em geral, as protenas sintetizadas em
ribossomos ligados membrana sofrem modificaes mais extensas antes
de atingirem seu destino final e se tornarem totalmente funcionais.
Voltaremos a esse tema quando discutirmos um mecanismo
envolvido no endereamento de protenas.

C E D E R J 103
Biologia Molecular | Processamento e endereamento de protenas

EXEMPLOS DE MODIFICAES PS-TRADUCIONAIS

Voc j viu que as modificaes ps-traducionais, que podem


ser de vrios tipos, envolvem diferentes pores do polipeptdeo a ser
processado. Tanto os terminais amino e carboxi quanto os grupamentos
laterais de inmeros aminocidos podem sofrer reaes de adio de
grupamentos especficos. Alm disso, a remoo proteoltica de alguns
resduos de aminocidos se faz necessria para que a protena adquira
sua conformao funcional. No processamento, pode ocorrer ainda a
adio de grupamentos prostticos e formao de pontes dissulfeto intra
ou intercadeia entre os resduos de cistena. Apenas para ilustrarmos essas
modificaes, discutiremos as clivagens proteolticas e algumas reaes
para adio de grupamentos especficos.

Clivagem proteoltica

Provavelmente todas as protenas maduras sofreram clivagem


proteoltica. Vamos conferir um exemplo bem simples, que est
representado na Figura 29.1! Voc j viu na Aula 28 que, em procariotos,
a sntese de polipeptdeos sempre se inicia com a N-formil-metionina.
Entretanto, ao trmino da traduo, o grupamento formil sempre
retirado por uma desformilase. Ser que todas as protenas de procariotos
apresentam um resduo de metionina no terminal amino? Sabemos que
isso no verdade, pois, para alguns polipeptdeos, no apenas o
grupamento formil, mas tambm o resduo inicial de N-formil-metionina,
sofre remoo proteoltica, pela ao de uma amino peptidase, ao trmino
da traduo. Algumas vezes dois ou mais resduos de aminocidos so
retirados pela amino peptidase.

104 C E D E R J
MDULO 4
29
AULA
formil

(b)

Figura 29.1: Retirada do grupamento formil (a) e da N-formil metionina (b) dos
polipeptdeos recm-sintetizados em bactrias. Apenas a poro inicial do polipep-
tdeo est representada. R2 e R3 representam, respectivamente, as cadeias laterais
do segundo e do terceiro aminocidos incorporados na cadeia polipeptdica. J aa1,
aa2 e aa3 representam os aminocidos 1, 2 e 3, respectivamente.

Muitas protenas envolvidas em uma infinidade de processos


biolgicos so sintetizadas como precursores inativos que so ativados
em condies prprias por protelise. Como exemplos podemos citar as
enzimas digestivas tripsinognio e quimiotripsinognio, produzidas pelo
pncreas, que sofrem clivagens de ligaes peptdicas especficas para
gerar as formas ativas, tripsina e quimiotripsina, respectivamente.

Todas as protenas inativas que so ativadas por remoo de polipeptdeos so


chamadas pr-protenas. J as enzimas sintetizadas sob sua forma inativa so
mais comumente chamadas zimognios; como, por exemplo, o tripsinognio,
citado no texto, que a forma inativa da tripsina.

C E D E R J 105
Biologia Molecular | Processamento e endereamento de protenas

Algumas protenas so sintetizadas como segmentos de polipro-


tenas, que contm seqncias de duas ou mais protenas. Nesse caso,
a clivagem da poliprotena necessria para a gerao das protenas
funcionais, como o caso dos hormnios polipeptdeos e das protenas
sintetizadas por muitos vrus.
Alguns polipeptdeos recm-sintetizados, tais como a pr-pr-
insulina e o pr-pr-colgeno, esto sujeitos a trs sries de clivagens
proteolticas: deleo do resduo de metionina iniciadora; remoo de
seus peptdeos sinais e exciso de seus pr-peptdeos. Vamos entender
o processamento da pr-pr-insulina lendo o texto e acompanhando o
esquema representado na Figura 29.2.
Muitos hormnios proticos so sintetizados sob a forma de
pr-protena. Por exemplo, o mRNA de insulina traduzido em uma
nica cadeia polipeptdica, reconhecida como pr-pr-insulina (110
aminocidos), com 86 resduos
Cadeia C Peptdeo sinal
ajuda no trans- correspondentes pr-insulina e 24
da cadeia
eptdica resduos correspondendo ao peptdeo
s da mem-
a. sinal. Como voc deve saber, a
N insulina produzida no pncreas e
neste local que a seqncia amino
terminal removida ainda durante
a traduo, direcionando a pr-
te pela
qncia insulina ao complexo de Golgi. As
a pr-
uma duas pontes dissulfeto ligando os
tvel,
e pontes terminais da molcula se formam
durante esse processo. Em seguida, a
cadeia C da pr-insulina removida
para produzir a forma circulante de

Ca
insulina, que apresenta 51 resduos
em dois peptdeos ligados por duas
pontes dissulfeto.

ada
olcula

Figura 29.2: Processamento da pr-pr-insulina


aA
para formao da molcula de insulina. A pr-
pr-insulina composta pelo peptdeo sinal (24
aminocidos) e as cadeias B, C e A, que apresen-
tam 30, 35 e 21 aminocidos, respectivamente.
eia B Os grupamentos SH representados no esquema
esto presentes nas cadeias laterais dos resduos
Insulina de cistena existentes no polipeptdeo.

106 C E D E R J
MDULO 4
29
Modificao covalente

AULA
As protenas esto sujeitas a modificaes qumicas dos
grupamentos funcionais das cadeias laterais e dos grupamentos amino
e carboxi-terminais. Mais de 150 tipos de modificaes de cadeia lateral
envolvendo todos os resduos de aminocidos, exceto alanina (Ala),
glicina (Gly), isoleucina (Ile), leucina (Leu), metionina (Met) e valina
(Val), so conhecidos, incluindo reaes de ACETILAO, GLICOSILAO, ACETILAO,
GLICOSILAO,
HIDROXILAO, METILAO, NUCLEOTIDILAO e FOSFORILAO.
HIDROXILAO,
Algumas dessas modificaes esto associadas a mecanismos de METILAO,
NUCLEOTIDILAO
controle da atividade. Como, por exemplo, a fosforilao de inmeras
E FOSFORILAO
protenas envolvidas no controle do ciclo celular. Outras modificaes nas
Reaes que
cadeias laterais favorecem a ligao covalente de co-fatores a enzimas, envolvem a adio de
grupamentos acetil,
possivelmente para aumentar sua eficincia cataltica. glicosil (derivado
A glicosilao uma modificao visvel de protenas que passam de glicdios),
hidroxila, metil,
atravs do complexo de Golgi. Muitas das protenas de superfcie nucleotidil (derivado
de nucleotdeos)
celular e de excreo produzidas nesse local so glicosiladas. Devido e fosfato,
respectivamente.
diversidade de reaes de glicosilao que ocorrem no complexo de
Golgi e ao fato de essa organela ser o local principal do transporte
de protena, parece provvel que os teores de carboidratos ligados a
protenas sejam responsveis por direcion-las aos seus destinos finais.
A ligao de carboidratos complexos, que ocorrem em uma variedade
quase infinita, altera as propriedades estruturais das protenas e forma
marcadores de reconhecimento em vrios tipos de interaes clula-
clula e de direcionamento. Saiba ainda que as protenas glicosiladas ou
glicoprotenas, como so comumente chamadas, freqentemente esto
ligadas aos seus oligossacardeos atravs de resduos de asparagina.
Alm disso, a glicosilao de grande importncia para a formao da
protena funcional, o que corroborado pelo fato de vrios antibiticos
interferirem em uma ou mais etapas deste processo.

ENDEREAMENTO DE PROTENAS

As vias envolvidas na classificao e transporte das protenas


para o seu local celular prprio so freqentemente chamadas vias de
endereamento de protenas. No entanto, como a clula sabe para onde
a protena ser endereada? J parou para pensar nisso? Pois saiba que em
todos os sistemas de endereamento em eucariotos, com exceo daqueles

C E D E R J 107
Biologia Molecular | Processamento e endereamento de protenas

que envolvem protenas citoslicas e nucleares, o elemento de sinalizao


mais importante uma seqncia pequena de aminocidos no terminal
amino de um polipeptdeo recm-sintetizado chamada seqncia sinal
(ou lder) ou peptdeo sinal. Essa seqncia, que direciona o polipeptdeo
ao seu sistema de transporte apropriado e, portanto, ao seu local especfico
na clula, geralmente removida durante o processo de transporte ou
quando o polipeptdeo atinge seu destino final.
Vamos conhecer um pouco mais sobre essas seqncias sinais!

SEQNCIAS SINALIZADORAS

As seqncias sinalizadoras, em eucariotos, localizadas perto do ou


mesmo no terminal amino, variam em tamanho, apresentando entre 13 e 36
resduos de aminocidos, e so geralmente caracterizadas pela ocorrncia
de 10 a 15 resduos hidrofbicos. A presena desse tipo de resduo reflete
o fato de o transporte de protenas constituir um problema com relao
ao movimento das protenas atravs de membranas lipdicas. Portanto,
os resduos hidrofbicos tanto direcionam a protena ao compartimento
apropriado como iniciam sua penetrao nas membranas. Uma outra
caracterstica interessante que, geralmente, um ou mais aminocidos
carregados positivamente precedem a seqncia hidrofbica. Uma srie
de aminocidos com cadeias laterais pequenas, tais como a alanina,
normalmente antecede o stio de clivagem. Observe a Figura 29.3.

Stio de
clivagem
Pr-pr-insulina
humana Met Ala Leu Trp Met Arg Leu Leu Pro Leu Leu Ala Leu Leu Ala Leu Trp Gly Pro Asp Pro Ala Ala Ala Phe Val --

Hormnio de
crescimento
bovino Met Met Ala Ala Gly Pro Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Ala Leu Leu Cys Leu Pro Trp Thr Gln Val Val Gly Ala Phe --

Figura 29.3: Seqncias sinais de protena eucariticas. Repare nos resduos


hidrofbicos precedidos por um ou mais resduos de aminocidos carregados posi-
tivamente. Precedendo o stio de clivagem encontram-se aminocidos com cadeia
lateral pequena.

108 C E D E R J
MDULO 4
29
As regras de identificao de seqncias sinais pelos compartimentos
celulares individuais no so conhecidas. O que se sabe que a natureza

AULA
do reconhecimento altamente conservada entre as espcies, uma vez que
as seqncias sinais geralmente direcionam protenas ao compartimento
apropriado, mesmo em espcies diferentes. A especificidade do sinal
tambm independente da protena a ser transportada, j que protenas
citoplasmticas, por exemplo, podem ser direcionadas a locais na
membrana pela adio de seqncias sinais especficas.

Em bactrias, o endereamento de protenas s membranas interna


e externa, ao espao periplsmico entre essas membranas e ao meio
extracelular tambm usa seqncias sinais no terminal amino, de
forma anloga ao que se observa em eucariotos no endereamento
de protenas ao retculo endoplasmtico, mitocndria e cloroplastos.
A maioria das protenas no-citoplasmticas de bactria direcionada
atravs ou para dentro da membrana plasmtica enquanto est sendo
sintetizada no ribossomo, por um processo conhecido como transporte
co-traducional, ou seja, que ocorre durante a traduo.

ENDEREAMENTO DE PROTENAS PARA O RETCULO


ENDOPLASMTICO

Em uma clula eucaritica tpica, o retculo endoplasmtico a


maior organela ligada membrana, sendo que sua maior parte contm
ribossomos, constituindo o retculo endoplasmtico rugoso (RER). Voc
se lembra das aulas de Biologia Celular? Os ribossomos do RER so o
stio de sntese de dois tipos de protenas: as de membrana e as excretadas,
sendo que para estas ltimas representam o ponto de partida para as
vias de secreo de protenas. Na membrana e no lmen do retculo
endoplasmtico, encontra-se um conjunto caracterstico de protenas
que atua no processamento de protenas secretadas e de membrana.
Aps um perodo curto no RER, protenas a serem secretadas so
transportadas por um processo de brotamento de vescula e fuso para
o complexo de Golgi, e de l para a superfcie celular, grnulos excretores
ou lisossomas. Esse processo pode ser mais bem entendido se voc ler o
texto acompanhando a Figura 29.4.

C E D E R J 109
Biologia Molecular | Processamento e endereamento de protenas

Seqncia
sinal Ribossomo 5' cap

GUA

Figura 29.4: Endereamento de protenas eucariticas para o retculo endoplasmtico.


A explicao do esquema se encontra no texto.

Na figura, a etapa 1 representa o incio da traduo, e a etapa 2


representa um estgio mais avanado no qual j se encontra formado
o peptdeo sinal. O direcionamento inicial de polipeptdeos nascentes
membrana do retculo endoplasmtico resultado do reconhecimento
co-traducional, ou seja, que ocorre simultaneamente ao processo de
traduo, da seqncia sinal por um complexo ribonucleoprotico.
Esse complexo, chamado partcula de reconhecimento sinal Signal
Recognition Particle (SRP) , constitudo de seis protenas diferentes
e uma molcula de RNA, de 300 resduos, designada RNA 7S. Essa
estrutura reconhece e se liga seqncia sinal quando a cadeia nascente
total atinge aproximadamente 90 resduos de aminocidos, o que s
possvel porque a seqncia sinal est no amino-terminal (etapa 3). Ao se
ligar, a SRP promove a interrupo da traduo da cadeia nascente, ao
mesmo tempo que direciona o ribossomo com o polipeptdeo incompleto
a um receptor especfico de SRP, que uma protena de membrana do
retculo endoplasmtico (etapa 4). Aps a ligao do polipeptdeo
nascente, juntamente com o ribossomo, ao receptor de SRP no retculo
endoplasmtico, o SRP se dissocia do ribossomo (etapa 5), a sntese de
protena reiniciada e a translocao do polipeptdeo nascente atravs da

110 C E D E R J
MDULO 4
29
membrana se inicia (etapa 6). A etapa de ancoramento envolve o consumo
de GTP, sendo que a hidrlise dessa molcula provavelmente essencial

AULA
liberao subseqente do SRP. Esse processo de translocao promove a
formao do peptdeo no lmen do retculo endoplasmtico. Logo aps a
passagem do peptdeo sinal pela membrana ou aps o trmino da sntese
da protena, a seqncia sinal clivada do polipeptdeo recm-sintetizado
pela ao de uma peptidase sinal ligada membrana (etapa 7), o ribossomo
se dissocia do retculo endoplasmtico (etapa 8) e, no lmen, as protenas
recm-sintetizadas so modificadas de diferentes maneiras.

O peptdeo sinal reconhecido pelo SRP, que liga o polipeptdeo nascente,


juntamente com o ribossomo, a um receptor na membrana do RER, em
eucarioto, e membrana plasmtica, em bactria, conduzindo o peptdeo
sinal e seu polipeptdeo nascente atravs dela.

Outros processos poderiam ser estudados, tais como os envolvidos


no endereamento de protenas que atuam nas mitocndrias, nos
cloroplastos ou no ncleo. Entretanto, o importante desta aula voc
saber da existncia e da importncia de tais processos, de forma que voc
possa buscar essas informaes quando elas se fizerem necessrias.
Para finalizar, busque a Figura 29.5, na qual est representado um
esquema do metabolismo de protenas em eucariotos. A seqncia de
nucleotdeos no DNA que codifica a seqncia de aminocidos de uma
protena primeiramente transcrita, havendo formao de uma molcula
de pr-mRNA. Este devidamente processado, convertendo-se em uma
molcula de mRNA maduro contendo a informao necessria para
a sntese da protena. Essa molcula de mRNA , ento, transportada
ao citosol, local onde participa do processo de traduo nos
ribossomos. O polipeptdeo recm-sintetizado pode sofrer modificaes
ps-traducionais antes ou aps seu enovelamento e endereado a um
local especfico na clula. Aps desempenhar sua funo biolgica, a
protena degradada regenerando aminocidos para participao na
sntese de novas molculas proticas.

C E D E R J 111
Biologia Molecular | Processamento e endereamento de protenas

DNA
Transcrio

Pr-mRNA
Processamento

mRNA
Traduo

Protena
Processamento
Montagem/modificaes
ps-traducionais
Endereamento
Funo biolgica

Degradao

Figura 29.5: Metabolismo de protenas. A explicao do esquema se encontra no texto.

RESUMO

Os polipeptdeos liberados pelos ribossomos so processados e endereados ao


local onde desempenharo suas funes. O processamento envolve a adio
de grupamentos s cadeias laterais de diversos resduos de aminocidos, a
clivagem proteoltica ou a ligao de acares ou grupos prostticos. Essa
etapa fundamental para a converso na forma funcional da protena e seu
direcionamento ao compartimento celular, no qual desempenhar sua funo,
ou ainda para mudanas associadas a sua atividade e estabilidade.
Seqncias especficas perto do ou mesmo no terminal amino, conhecidas como
seqncias sinal ou lder, direcionam o polipeptdeo a um sistema de transporte
e, portanto, ao seu local especfico na clula. No endereamento de protenas
para o retculo endoplasmtico, por exemplo, o reconhecimento do peptdeo sinal
pela SRP ocorre durante a traduo. Isso resulta em uma interrupo na sntese
do polipeptdeo e a ligao do complexo formado a um receptor de membrana.
A SRP , ento, liberada, e a sntese do polipeptdeo reiniciada. Com o trmino
da sntese, uma peptidase sinal cliva a seqncia sinal, o polipeptdeo recm-
sintetizado liberado no lmen do retculo endoplasmtico e as subunidades
ribossomais so liberadas no citosol, prontas para reiniciar a sntese de uma nova
molcula de protena.

112 C E D E R J
MDULO 4
29
EXERCCIOS

AULA
1. Sabemos que a sntese das protenas bacterianas se inicia com o resduo de
aminocido N-formil metionina. Ser que todas as protenas funcionais apresentam
como resduo amino terminal a metionina? Escreva um pequeno texto comentando
essa afirmativa com suas palavras.

2. Para a formao da insulina madura so necessrias todas as etapas listadas a


seguir, exceto uma. Diga qual e justifique.

(a) Remoo de um peptdeo sinal.

(b) Remoo de um peptdeo de uma regio interna da cadeia.

(c) Dobramento da estrutura resultando na conformao funcional.

(d) Formao de ponte dissulfeto.

(e) Formao de -carboxiglutamato a partir de resduos de glutamato.

3. Como uma clula sabe para onde enderear uma protena?

4. Como voc explica a existncia dos resduos hidrofbicos nas seqncias sinais?

AUTO-AVALIAO

Ao final desta aula, voc deve se sentir capaz de reconhecer a importncia do


processamento e do endereamento dos polipeptdeos recm-sintetizados na formao
de uma protena funcional e o seu direcionamento para o local onde desempenhar
sua funo. Os exerccios tm por objetivo avaliar o quanto voc aprendeu do tema
em questo. Assim, caso encontre dificuldades para resolv-los, releia a aula e recorra
aos tutores, que estaro sempre nos plos dispostos a ajud-lo.

FIQUE ATENTO!

O tema das prximas duas aulas complexidade genmica. At l!

C E D E R J 113
30
AULA
Complexidade
dos genomas I
objetivos

Ao final desta aula, voc dever ser capaz de:


Diferenciar os conceitos relativos
complexidade e ao tamanho dos genomas.
Estabelecer comparaes entre variaes no
tamanho do genoma haplide das diversas
espcies e sua correlao com a complexidade
morfolgica.
Conceituar e enumerar os diferentes padres
de repetio das seqncias que compem o
genoma de eucariotos.
Adquirir conhecimentos gerais sobre o genoma
de mitocndrias e cloroplastos.

Pr-requisitos
DNA aspectos funcionais e estruturais, Aula 4.
Estrutura dos cromossomos de vrus e procariotos, Aula 6.
Estrutura dos cromossomos de eucariotos, Aula 8.
Fluxo da informao gnica transcrio e processamento do RNA, Aulas 20, 21 e 22.
Biologia Molecular | Complexidade dos genomas I

INTRODUO O conhecimento dos genomas tem ganhado crescente importncia no cenrio


cientfico. Atravs destes estudos, tem sido possvel entender inmeros processos
biolgicos, a relao filogentica entre as espcies, alm da identificao de
genes que controlam caractersticas de interesse.
Voc j teve a oportunidade de estudar, nas aulas anteriores, que cada espcie
se caracteriza por possuir um conjunto especfico de genes. Estes genes se
encontram no DNA que, por sua vez, componente dos cromossomos. Nesta
aula, discutiremos de maneira mais aprofundada a organizao geral dos
genomas das diferentes espcies, as caractersticas dos diferentes tipos de
seqncia e a importncia destes aspectos para o tamanho de cada genoma
e sua complexidade.

DEFININDO GENOMA

O genoma de uma espcie freqentemente definido como o


conjunto de genes que a caracteriza. Porm, em nossos cromossomos,
existem diversas regies que no codificam nada, no so transcritas e,
portanto, no correspondem a genes. Assim, uma definio mais
apropriada seria a de que o genoma o conjunto de todo o material
gentico contido nas clulas de uma espcie.
Na aula sobre estrutura dos cromossomos de vrus e procariotos (Aula 6
Mdulo 1), voc teve a oportunidade de aprender que o genoma de bactrias
formado por uma grande molcula de DNA, fita dupla e circular. Muitas
bactrias apresentam molculas adicionais de DNA circular, denominadas
plasmdeos. Considerando nossa definio anterior, o genoma dessas bactrias
composto pelo DNA cromossomal e pelo DNA plasmidial.
No caso dos genomas virais, voc tambm teve a oportunidade
de aprender, na Aula 6, que o material gentico de vrus pode ser DNA
ou RNA. Esse material gentico, ou genoma, pode ainda se apresentar
na forma de fita simples ou fita dupla. Enquanto permanece dentro do
capsdio viral, o material gentico permanece na forma linear.
Em eucariotos, entretanto, diversas diferenas devem ser
consideradas. O material gentico se encontra dividido em vrios
cromossomos lineares, cujo nmero e tamanho variam de espcie para
espcie. A maioria dos eucariotos possui mais de uma cpia de cada
cromossomo. Esse nmero de cpias pode variar entre as espcies,
e definido como ploidia, representada pela letra n (conforme voc
aprendeu na Aula 7 da disciplina Gentica Bsica). Quando apenas
uma cpia de cada cromossomo est presente, a espcie (ou clula)

116 C E D E R J
MDULO 4
30
denominada haplide (n). Quanto duas ou mais cpias esto
presentes, pode tratar-se de uma espcie diplide (2n) (duas cpias de

AULA
cada cromossomo), triplide (3n) (trs cpias de cada cromossomo),
tetraplide (4n) (quatro cpias de cada cromossomo), e assim
sucessivamente. As clulas somticas da espcie humana, por exemplo,
so diplides, havendo duas cpias de cada cromossomo por clula.
Os gametas de humanos, entretanto, possuem apenas uma cpia de cada
cromossomo, representando clulas haplides (n).
No decorrer desta aula, o termo genoma ser utilizado para definir
apenas um conjunto de cromossomos. Em outras palavras, estaremos sempre
nos reportando ao genoma haplide (uma cpia de cada cromossomo). Por
exemplo, no caso da espcie humana, o genoma haplide corresponde ao
conjunto de 24 cromossomos (22 cromossomos autossmicos + X + Y).

O CONTEDO DE DNA E A COMPLEXIDADE


DOS ORGANISMOS

A quantidade total de DNA do genoma haplide caracterstica


de cada espcie e conhecido como Valor-C. Tal valor varia amplamente
entre as diversas espcies, entre valores inferiores a 600 mil pares de bases,
em micoplasmas, e valores superiores a 670 bilhes de pares de MICOPLASMAS
bases, em determinadas espcies de amebas. Organismos
procariotos muito
A anlise do tamanho do genoma de milhares de espcies simples que
tem revelado um dado interessante. Em procariotos, o tamanho dos apresentam como uma
de suas principais
genomas (quantidade de DNA) est diretamente correlacionado com a caractersticas
a ausncia de
complexidade funcional das espcies. Assim, espcies de micoplasma, membrana plasmtica.
que apresentam os menores genomas dentre procariotos, possuem Determinadas doenas
humanas, como a
pouco mais de 500 mil pb em seu genoma, para codificar 480 protenas. pneumonia, podem
A bactria Nostoc punctiforme, entretanto, possui um genoma de ser causadas por
micoplasmas.
aproximadamente 10 milhes de pares de bases, capazes de codificar
cerca de 5.000 protenas. Essa bactria (cianobactria) apresenta grande
complexidade funcional dentre os procariotos, possuindo, inclusive,
as capacidades de realizar fotossntese e de fixar nitrognio.
A correlao entre tamanho do genoma e complexidade funcional
algo bastante lgico. Se considerarmos que organismos funcionalmente
mais complexos necessitam de um maior nmero de genes que coordenem
tais funes, seus genomas teriam de apresentar maior quantidade de
DNA para abrigar tais genes.

C E D E R J 117
Biologia Molecular | Complexidade dos genomas I

Entretanto, a correlao entre complexidade dos organismos e


contedo total de DNA do genoma s vlida em procariotos. A anlise
dos genomas de eucariotos tem fornecido grandes surpresas. Embora tais
genomas apresentem, em sua grande maioria, tamanhos bem superiores
aos observados em procariotos, no possvel estabelecer correlao entre
o contedo de DNA e a complexidade funcional dos organismos.
No Grfico 30.1, so apresentadas as faixas de tamanhos
estimados para os genomas de espcies dos diversos filos. Os tamanhos
de genomas dos organismos eucariotos variam desde 12 milhes de
nucleotdeos, em fungos, at 670 bilhes de nucleotdeos, em amebas
(filo Protista). Isso representa uma variao de aproximadamente 55 mil
vezes. Dentre a grande amplitude no tamanho dos genomas, voc pode
observar, na figura, que os genomas de todas as espcies de mamferos
tm tamanhos situados entre 2 e 4 bilhes de nucleotdeos. Esse valor
aproximadamente 200 vezes menor que o genoma de uma espcie de
ameba (670 bilhes), e 50 vezes menor que o genoma de determinadas
espcies de anfbios. Alm disso, dentro de um mesmo filo, podemos
verificar grande amplitude de tamanho dos genomas entre as diversas
espcies. Determinadas espcies de anfbios, por exemplo, tm genomas
100 vezes maiores que outros anfbios. Em plantas, tal discrepncia
ainda maior, com algumas espcies apresentando genomas mil vezes
maiores que o de outras.

Grfico 30.1: O conte-


do de DNA do genoma
haplide relacionado
como a complexidade mor-
folgica em procariotos,
mas varia amplamente
entre eucariotos. A gama
de tamanhos de geno-
mas das espcies que
compem cada filo
representada por barras
horizontais.

118 C E D E R J
MDULO 4
30
As observaes anteriores geram alguns questionamentos:
1- Que motivos justificariam o fato de uma ameba possuir um

AULA
genoma 200 vezes maior que o genoma humano?
2- Dentro de um mesmo filo, como uma espcie de anfbio poderia
ter o genoma 100 vezes maior que o de outro anfbio?
Antes de comearmos a discutir as questes anteriores, precisamos
estabelecer certos conceitos gerais. Devemos considerar o fato de que
determinados organismos so mais complexos que outros. Por exemplo,
um organismo mamfero morfolgica e funcionalmente mais complexo
que um fungo. Portanto, ele dever possuir um maior nmero de genes em
seu genoma, capazes de coordenar tais caractersticas. Assim, podemos
estabelecer que um organismo que possua um maior nmero de genes
distintos em seu genoma, ter um genoma mais complexo. Portanto,
a complexidade do genoma est relacionada com a quantidade de
genes diferentes presentes, enquanto o tamanho do genoma se refere
ao contedo de DNA, em pares de bases (Valor-C). Voc pode concluir,
ento, que uma determinada espcie de pssaros possui um genoma mais
complexo (nmero de genes distintos) que o de uma espcie de molusco,
embora os tamanhos de seus genomas possam ser similares.

Lembre-se, a complexidade do genoma est relacionada com o nmero


de genes diferentes presentes, enquanto o tamanho do genoma se
refere ao contedo de DNA, em pares de bases (Valor-C).

COMPLEXIDADE DE SEQNCIAS DO GENOMA

A grande variao no tamanho do genoma de eucariotos permite


observarmos que, embora determinadas espcies apresentem nveis
equivalentes de complexidade (morfolgica e funcional), muitas vezes
seus genomas diferem muito quanto ao tamanho (contedo de DNA). Tal
observao permite que formulemos trs perguntas: 1) Genomas maiores
possuem um maior nmero de diferentes genes? 2) Genomas maiores contm
maior nmero de cpias dos mesmos genes observados nos genomas menores?
3) Existem outros tipos de seqncia, que no sejam genes, responsveis pelas
diferenas de tamanho entre genomas?
Pare responder s questes anteriores, devemos considerar que, se
o nmero de diferentes genes for maior nos genomas maiores, poderemos
esperar que a quantidade de seqncias nicas de DNA do genoma

C E D E R J 119
Biologia Molecular | Complexidade dos genomas I

tambm aumente. Porm, se o aumento do tamanho do genoma resulta


de maior nmero de cpias dos mesmos genes, o nmero de seqncias
nicas no genoma no aumentar.

ENSAIOS DE CINTICA DE REASSOCIAO


E COMPLEXIDADE DE SEQNCIAS

A complexidade de seqncias de um genoma refere-se


quantidade de seqncias nicas (seqncias diferentes) nele presentes.
Assim, quanto maior o nmero de genes distintos de um genoma, maior
a quantidade de seqncias nicas.
Uma importante ferramenta para o estudo da complexidade
dos genomas a utilizao de ensaios de cintica de reassociao. Para
entendermos tais estudos, vamos relembrar algumas caractersticas do
DNA, vistas na Aula 4. Cada molcula de DNA composta por duas fitas
de nucleotdeos complementares e antiparalelas. As fitas complementares
so unidas por pontes de hidrognio que, embora confiram considervel
estabilidade molcula, podem ser desfeitas.
Dentre os componentes que podem desfazer as pontes de
hidrognio entre as fitas de DNA, esto o calor e o pH elevado.
Ao processo de separao das fitas d-se o nome de desnaturao do
DNA. Tal processo reversvel, ou seja, caso o agente desnaturante
seja removido, as duas fitas complementares voltam a estabelecer as
pontes de hidrognio, promovendo a renaturao da molcula de DNA.
Voc deve sempre considerar que a renaturao s possvel entre fitas
complementares de DNA.
As caractersticas de desnaturao e renaturao das molculas
de DNA so essenciais aos trabalhos de cintica de reassociao. O
processo, ilustrado na Figura 30.1, baseia-se na fragmentao do genoma
em milhares de pequenos fragmentos e, em seguida, na exposio da
soluo ao calor. Como resultado, as pontes de hidrognio entre as fitas
sero desfeitas. Em seguida, o tubo deixado resfriar temperatura
ambiente. Com a queda da temperatura, as fitas complementares tendem
a se reassociar, recompondo as pontes de hidrognio e, conseqentemente,
renaturando as molculas de DNA.

120 C E D E R J
MDULO 4
30
A proporo de molculas desnaturadas
(fita simples) e renaturadas (fita dupla) dentro de

AULA
uma soluo pode ser monitorada, pois, quando
expostas a um feixe de luz ultravioleta, molculas
desnaturadas apresentam nveis de absoro da
luz diferentes dos observados para molculas
renaturadas. Assim, aps a desnaturao trmica
de uma amostra de DNA, possvel monitorar
a velocidade de reassociao (renaturao) das
molculas. Tal ensaio denominado cintica de
reassociao.
Devemos considerar o fato de que,
depois de dissociadas, duas fitas de DNA
complementares tero de se reencontrar
para que a reassociao ocorra. Se todos os
fragmentos de DNA utilizados forem diferentes,
a probabilidade de reassociao ser a mesma
para todos eles. Imagine, porm, se dentro da
amostra houvesse vrias cpias de um mesmo
fragmento. Durante a fase de reassociao, a
probabilidade de cada fita de DNA encontrar
uma fita complementar seria muito maior, pois
haveria vrias cpias delas. Conseqentemente,
a formao de molculas renaturadas seria
muito mais rpida.
Figura 30.1: Processo de
Dentro de um genoma pode haver regies repetidas, ou seja, vrias desnaturao trmica
de fragmentos de DNA,
cpias de uma dada seqncia podem ser encontradas. Nesses casos,
seguida de renaturao.
ao realizarmos um ensaio de cintica de reassociao, tais regies
tendero a se reassociar muito mais rapidamente que as demais.
Agora que j discutimos os trabalhos de cintica de reassociao,
podemos retomar a discusso acerca da complexidade dos genomas.
Lembre-se de que, anteriormente, uma de nossas dvidas acerca
das diferenas entre os tamanhos dos genomas seria a presena de
repeties de seqncias.

C E D E R J 121
Biologia Molecular | Complexidade dos genomas I

Quando o DNA de um genoma de eucarioto analisado atravs de


cintica de reassociao, observa-se que a velocidade de reassociao das
molculas no ocorre de maneira homognea. Uma parcela das molculas
se reassocia muito rapidamente (componente rpido), uma segunda parcela
apresenta velocidade moderada de reassociao (componente moderado),
e a terceira parcela apresenta reassociao lenta (componente lento),
conforme apresentado no Grfico 30.2. Quando estas velocidades de
reassociao so comparadas com uma amostra de DNA composta
apenas por seqncias no repetidas, observa-se que a velocidade
compatvel apenas com o componente lento da reao.

Frao de molculas reassociadas

100

75
Componente
p
lento
50
Componente
p
intermedirio
o
25

Componente
p
rpido
p

Progresso da reao de reassociao

Grfico 30.2: A cintica de reassociao apresentada sob a forma de um grfico.


Em genomas de eucariotos, so identificados trs componentes, com velocidades de
reassociao distintas. A frao de molculas correspondentes a cada componente
pode ser estimada.

As observaes anteriores permitiram estimar que a parcela de


fragmentos do genoma que se reassocia lentamente composta
por seqncias no repetidas. A frao de velocidade intermediria
de reassociao composta por sequncias moderadamente repetidas.
O componente rpido composto por seqncias altamente repetidas
ao longo do genoma. No decorrer desta aula, vamos nos referir a tais
fraes como DNA no-repetitivo, DNA moderadamente repetitivo e
DNA altamente repetitivo, respectivamente.
Os trabalhos de cintica de reassociao demonstraram que cada
espcie de eucariotos apresenta propores especficas de DNA repetitivo
e no-repetitivo.

122 C E D E R J
MDULO 4
30
A GRANDE MAIORIA DOS GENES EST PRESENTE NO DNA
NO-REPETITIVO

AULA
A anlise detalhada das diferentes fraes de DNA tem revelado
que a maioria dos genes ocorre na frao de DNA no-repetitivo. Em
outras palavras, a maioria dos genes de eucariotos ocorre apenas uma
vez no genoma haplide. Alguns genes so repetidos, porm em pequeno
nmero de cpias. Raros genes possuem dezenas de cpias ao longo do
genoma. Enfim, a concluso geral destas anlises que a maioria dos
genes compe o DNA no-repetitivo que, portanto, a frao do genoma
responsvel pela complexidade funcional do organismo.

O DNA REPETITIVO E O TAMANHO DOS GENOMAS

A proporo do genoma ocupada por DNA repetitivo e DNA


no-repetitivo varia amplamente entre as espcies. O Grfico 30.3
resume as propores de DNA no-repetitivo, moderadamente repetitivo
e altamente repetitivo em algumas espcies. Procariotos contm apenas
DNA no-repetitivo. Para eucariotos inferiores, a maior parte do DNA
no-repetitivo, restando menos de 20% do DNA dentro da frao
moderadamente repetitiva. Em eucariotos superiores, entretanto, as
propores se invertem. Em animais, mais de 50% do genoma composto
por DNA repetitivo e, em plantas, a quantidade de DNA repetitivo pode
ultrapassar 80% de todo o genoma, em determinadas espcies.

Grfico 30.3: A proporo dos dife- Tamanho do genoma em pb


rentes componentes de seqncia
varia nos diferentes genomas de 10
eucariotos. O conte
repetitivo aumenta co
dos genomas.

E. coli C. elegans D. metanogaster M. musculus X. laevis N. tabacum

C E D E R J 123
Biologia Molecular | Complexidade dos genomas I

Ao compararmos estas informaes com a amplitude de tamanho


do genoma nas diferentes espcies, podemos ento entender o fato de
que a correlao entre tamanho do genoma e complexidade s vlida para
organismos procariotos. Nessas espcies, os genomas so compostos por DNA
no-repetitivo, que contm os genes. Em eucariotos, a presena de
DNA repetitivo, que no contm genes, pode resultar no aumento do
tamanho do genoma, sem que ocorra um aumento no nmero de genes
(complexidade). Isso explica o fato de existirem espcies com nveis de
complexidade similares e tamanhos de genomas completamente distintos.
A diferena de contedo de DNA deve-se presena de maior quantidade de
DNA repetitivo em uma delas. Ou seja, em eucariotos superiores, o tamanho
do genoma fortemente afetado pelo contedo de DNA repetitivo.

Assim, o fato de uma determinada espcie de anfbio possuir um


genoma 50 vezes maior que o genoma humano pode ser explicado pela
presena de grande quantidade de DNA repetitivo no genoma daquela
espcie. Um outro exemplo que ilustra esta observao o fato de que o
genoma de mosca domstica (Musca domestica) seis vezes maior que o
genoma de mosca das frutas (Drosophila melanogaster). Considerando
a grande proximidade gentica entre estas espcies, fica evidente que
a complexidade de seus genomas prxima. Assim, o que difere os
tamanhos dos genomas a presena de grande quantidade de DNA
repetitivo em mosca domstica.
Na Tabela 30.1 esto listadas vrias espcies de organismos,
com os tamanhos de seus genomas e o nmero de genes presentes.
Por exemplo, observe que o milho possui um genoma 5 vezes maior
que o genoma humano, mas o nmero de genes semelhante. Tais
informaes, mais uma vez, evidenciam a falta de correlao entre o
tamanho do genoma (contedo de DNA) e o nmero de genes. Enfim, a
complexidade funcional ser dependente dos genes presentes e no do
tamanho do genoma do organismo.

124 C E D E R J
MDULO 4
30
Tabela 30.1: O nmero de genes no est correlacionado com o tamanho
do genoma.

AULA
Espcies Tamanho do genoma Nmero de
genes
Humano 3,3 bilhes de pares de bases 35.000

Mosca-das-frutas 120 milhes de pares de bases 13.601


(Drosophila melanogaster)
r

Levedura 12 milhes de pares de bases 6.275


(Saccharomyces cerevisiae)

Nematide (verme) 97 milhes de pares de bases 19.000


(Caenorhabditis elegans)

Milho 15 bilhes de pares de bases 30.000


(Zea maize)

E. coli 4,1 milhes de pares de bases 4.800

Arabidopsis 125 milhes de pares de bases 25.000


(
(Arabidopsisthaliana)

O PAPEL DO DNA REPETITIVO NO GENOMA


DE EUCARIOTOS

Ao considerarmos que os genes se encontram principalmente


localizados na frao de DNA no-repetitivo, qual seria o papel das
fraes moderadamente repetitiva e altamente repetitiva do genoma?
A resposta para tal questo ainda permanece obscura. Sabemos
que o DNA moderadamente repetitivo contm alguns genes (genes
que ocorrem em vrias cpias no genoma). Alm disso, voc teve a
oportunidade de aprender, na Aula 19, que os elementos de transposio
so seqncias capazes de produzir muitas cpias de si mesmas, que vo
se inserir aleatoriamente ao longo do genoma. Diversas pesquisas tm
demonstrado que grande parte do DNA repetitivo ao longo dos genomas
resultou da presena de cpias de elementos de transposio. Existem
diversas outras seqncias moderadamente repetidas ao longo do genoma
cujas caractersticas e funes so pobremente elucidadas.
O papel do DNA altamente repetitivo ainda menos esclarecido.
Sabemos, entretanto, que determinadas regies essenciais de nossos
cromossomos so compostas por seqncias altamente repetidas. Dentre
tais regies, destacamos o centrmero e os telmeros dos cromossomos.

C E D E R J 125
Biologia Molecular | Complexidade dos genomas I

Essas regies, embora no contenham genes, possuem importante funo


estrutural. Alm de tais seqncias, muitas outras de funo desconhecida,
de diferentes tamanhos, tambm ocorrem em elevado nmero de cpias
ao longo do genoma.
importante destacar que, embora haja muitas regies compostas
exclusivamente por DNA repetitivo ou no-repetitivo, freqente
encontrarmos pores dos cromossomos nos quais os dois tipos de
seqncias se intercalam ao longo da molcula de DNA. A distino entre
tais seqncias dependeria de sabermos se existem outras cpias delas ao
longo do genoma (DNA repetitivo) ou no (DNA no-repetitivo).

NEM TODO O DNA NO-REPETITIVO COMPOSTO


POR GENES

O fato de sabermos que a grande maioria dos genes corresponde


a seqncias nicas no genoma pode causar a falsa idia de que todo
o DNA no-repetitivo constitudo exclusivamente por genes. Porm,
isso no verdade. Existem muitas seqncias nicas do genoma que
no so regies codificadoras. Dentre essas regies, podemos destacar
as seqncias intergnicas, ou seja, regies de DNA no-repetitivo que
ocupam o espao compreendido entre dois genes adjacentes, ao longo
de uma molcula de DNA.

O TAMANHO MDIO DOS GENES VARIA ENTRE


AS ESPCIES

Um dos fatores que contribuem para as diferenas entre os tamanhos


dos genomas das diversas espcies o tamanho mdio dos genes. Por
exemplo, em leveduras, o tamanho dos genes normalmente no ultrapassa
10 kilobases, enquanto em mamferos, determinados genes chegam a
possuir mais de 100 kilobases de extenso. As diferenas no tamanho
mdio dos genes resultam, principalmente, da presena de ntrons. Conforme
voc teve a oportunidade de aprender, na Aula 22, a maioria dos genes
de eucariotos superiores possuem a seqncia interrompida por ntrons.
Aproximadamente 94% dos genes de mamferos possuem, no mnimo,
um ntron. Em eucariotos inferiores, como Saccharomyces cerevisiae,
entretanto, aproximadamente 95% dos genes no possuem ntrons.

126 C E D E R J
MDULO 4
30
Em procariotos, por sua vez, no se verificam ntrons nos genes. Deter-
minados genes de mamferos chegam a possuir mais de 60 ntrons. Como

AULA
conseqncia, a extenso de tais genes sempre grande. Voc no deve se
esquecer de que, aps a transcrio, tais ntrons so retirados do transcrito
durante o processamento e, portanto, no estaro representados nas
protenas codificadas.
A partir do exposto anteriormente, voc pode concluir que uma
poro considervel do DNA no-repetitivo do genoma de eucariotos
superiores composta pelos ntrons.

A bactria E. colii possui aproximadamente 4.800 genes em um genoma


de 4.000kb. O genoma humano possui aproximadamente 35.000 genes.
Assim, seria de se esperar que o genoma humano fosse 10 vezes maior.
Entretanto, o genoma humano 1.200 vezes maior. Com o que voc aprendeu
nesta aula, podemos explicar tal discrepncia com os seguintes argumentos:
a) O genoma de procariotos no apresenta DNA repetitivo, enquanto
eucariotos possuem grande quantidade de DNA repetitivo. b) Os genes
de humanos so, em mdia, 10 vezes maiores que os de bactria. c)
Os genes humanos apresentam vrios ntrons, enquanto os genes de
procariotos no possuem ntrons.

GENOMAS DE ORGANELAS

Embora a grande maioria dos genes de eucariotos esteja localizada


nos cromossomos nucleares, desde o incio do sculo XX, diversas
evidncias tm sugerido a existncia de genes no citoplasma. Como
voc teve a oportunidade de aprender na disciplina Gentica Bsica, o
fenmeno de herana materna resulta da presena de genes no citoplasma
do vulo. A herana materna , portanto, uma das formas de herana
no-mendeliana.
Tal tipo de herana resulta do fato de existir material gentico
dentro de mitocndrias e cloroplastos. Em outras palavras, tais
organelas possuem DNA, contendo genes que, portanto, so herdados
independentemente do genoma nuclear. Dessa forma, os genes presentes
no genoma de tais organelas encontram-se confinados, sujeitos a formas
de expresso e regulao especficos.
Os genomas de mitocndrias e cloroplastos so pequenos, circulares
e possuem um nmero de genes relativamente restrito. Usualmente,
existem vrias cpias do genoma em cada organela. Considerando-se
que existem diversas organelas em cada clula, podemos concluir que
existem mltiplas cpias de genomas de organela por clula.

C E D E R J 127
Biologia Molecular | Complexidade dos genomas I

Os genes presentes codificam todos os RNAs ribossmicos e


transportadores, porm, apenas algumas das protenas necessrias pela
organela so codificadas. As demais protenas necessrias so codificadas
por genes presentes no ncleo e, aps serem sintetizadas, so endereadas
para a organela. A organela, portanto, possui seus prprios ribossomos
e RNAs transportadores, alm das enzimas envolvidas na transcrio e
traduo. Como conseqncia, cloroplastos e mitocndrias possuem o
aparato necessrio para a expresso de seus prprios genes. A seguir, vamos
discutir separadamente os genomas de cada uma dessas organelas.
Genomas de cloroplastos so relativamente extensos, com
aproximadamente 140kb em plantas superiores, e mais de 200kb em
eucariotos inferiores. Em plantas superiores, o nmero de cpias do genoma
por organela varia entre 20 e 40. Adicionalmente, existem entre 20 e 40
organelas por clula em tais plantas. O genoma de cloroplastos codifica para
4 RNAs ribossmicos, 30 RNAs transportadores e 50 protenas.
O genoma mitocondrial varia amplamente em tamanho entre as
espcies. Em mamferos, seu tamanho de aproximadamente 16,5kb.
Em leveduras, tal genoma possui aproximadamente 84kb, enquanto em
plantas superiores, o tamanho do genoma de mitocndrias pode atingir
570kb. O nmero de mitocndrias por clula varia entre as espcies.
Em S. cerevisiae, existem aproximadamente 22 mitocndrias por clula,
com quatro cpias do genoma por organela. O nmero de protenas
codificadas pelo genoma mitocondrial pequeno. Em humanos, o
DNA mitocondrial contm 22 genes para RNAs transportadores,
2 genes para RNA ribossmico e 13 genes que codificam protenas.
As demais protenas que compem a organela so codificadas por genes
nucleares. Na Figura 30.2.a, apresentado um esquema ilustrativo de uma
mitocndria, contendo vrias cpias de DNA circular. Na Figura 30.2.b, est
esquematizado o genoma mitocondrial de mamferos, com os principais
genes indicados.

128 C E D E R J
MDULO 4
30
DNA mitocondrial

(a)

AULA
de
pias
do material gentico. (b) Representao
esquemtica do genoma mitocondrial de
Indica a direo do gene mamferos.

CO Citocromo Oxidase

ND NADH desidrogenase

C E D E R J 129
Biologia Molecular | Complexidade dos genomas I

RESUMO

Nesta aula, voc teve a oportunidade de aprender os conceitos e caractersticas


inerentes organizao geral dos genomas dos organismos. Para tanto, foram
abordadas as diferenas gerais entre os genomas de bactrias, vrus e eucariotos.
Atravs da anlise dos tamanhos dos genomas de espcies dos diversos filos, foi
evidenciada a existncia de correlao entre contedo de DNA e a complexidade
funcional dos organismos. Porm, vimos que tal correlao s mantida em
procariotos. Em eucariotos, tal correlao no foi verificada, havendo organismos
com nveis de complexidade similares e tamanhos de genomas completamente
distintos. Em seguida, foi abordada a ocorrncia de seqncias repetidas ao longo
dos genomas. Para isso, vimos os princpios inerentes principal tcnica utilizada
para o estudo de complexidade de seqncias, a cintica de reassociao. Em
seguida, discutimos que grande parte do genoma de eucariotos superiores
composta por DNA repetitivo, enquanto em procariotos tais seqncias inexistem.
Vimos, tambm, que a grande maioria dos genes so seqncias nicas no genoma
de eucariotos, constituindo, portanto, o DNA no-repetitivo. Dentre o DNA no-
repetitivo, existem seqncias que no codificam protenas, sendo representadas,
principalmente, pelas regies intergnicas e pelos ntrons dos genes.
Ao final, tivemos a oportunidade de discutir a existncia de material gentico em
mitocndrias e cloroplastos. As caractersticas gerais inerentes aos genomas de
tais organelas foram tambm abordadas.

EXERCCIOS

1. Por que a palavra genoma no pode ser definida como o conjunto de genes
que caracteriza uma espcie?

2. Quais as diferenas entre os termos tamanho do genoma e complexidade


do genoma?

3. Qual a correlao entre contedo de DNA do genoma haplide e complexidade


funcional das espcies nos diferentes filos?

4. Como os ensaios de cintica de reassociao permitem estimar a presena de


DNA repetitivo em uma amostra de DNA?

130 C E D E R J
MDULO 4
30
5. Qual a diferena entre os genomas de eucariotos superiores, eucariotos inferiores
e procariotos quanto presena de DNA repetitivo?

AULA
6. Todo o DNA no-repetitivo composto por genes?

7. Quais as principais caractersticas dos genomas de cloroplastos e mitocndrias?

AUTO-AVALIAO

Se voc compreendeu o contedo da aula de hoje, no deve ter encontrado dificuldades


para responder aos exerccios. Lembre-se de que a viso geral acerca da organizao dos
genomas, os conceitos de tamanho de genoma (contedo de DNA) e sua correlao com a
complexidade dos organismos so aspectos essenciais, pois tais informaes sero importantes
para a compreenso da prxima aula.

C E D E R J 131
31
AULA
Complexidade
dos genomas II
objetivos

Ao final desta aula, voc dever ser capaz de:


Explicar os fatores envolvidos com a
complexidade dos genomas de eucariotos.
Descrever as principais caractersticas
inerentes ao genoma humano.
Entender importncia da presena de
elementos de transposio para o contedo de
DNA do genoma de eucariotos.
Entender a importncia da emenda alternativa
de xons para a complexidade funcional dos
organismos eucariotos.
Absorver os conceitos sobre projetos de
seqenciamento e anlise de genomas.

Pr-requisitos
Estrutura dos cromossomos de vrus e procariotos (Aula 6 Mdulo 1).
Regulao da expresso gnica (Aula 24).
Elementos de transposio em eucariotos (Aula 19).
Complexidade dos genomas (Aula 30).
Biologia Molecular | Complexidade dos genomas II

INTRODUO Na Aula 30, voc teve a oportunidade de estudar os aspectos gerais que
caracterizam a organizao geral dos genomas e sua complexidade. Nela, foram
abordados os conceitos relativos ao tamanho dos genomas (contedo de DNA)
e complexidade dos mesmos. Vimos tambm que os genomas das diferentes
espcies podem diferir amplamente quanto presena de DNA repetitivo.
Ao final, discutimos as caractersticas dos materiais genticos presentes em
mitocndrias e cloroplastos.
Apesar do grande volume de pesquisas relativas caracterizao dos
genomas, realizadas previamente, um forte impulso dos conhecimentos foi
gerado a partir do seqenciamento do genoma humano, anunciado em 2000.
A disponibilidade de informaes acerca dos 3,3 bilhes de nucleotdeos que
compem o genoma humano tem permitido a elucidao de diversas perguntas
relativas organizao do genoma, nmero e tamanho dos genes, proporo
de DNA repetitivo, dentre muitas outras.
Nesta Aula, nos dedicaremos ao estudo mais detalhado da complexidade dos
genomas, com nfase em eucariotos, tomando como base as informaes
geradas pelo seqenciamento do genoma humano.

A ORIGEM DA COMPLEXIDADE

Na Aula 30, discutimos o fato de que organismos que apresentam


maior complexidade funcional devem possuir um maior nmero de genes,
capazes de coordenar tais funes. Tal afirmao facilmente reafirmada
ao compararmos os genomas de organismos que apresentem nveis de
complexidade funcional contrastantes, tais como humanos e bactrias.
O genoma da bactria E. coli, por exemplo, possui aproximadamente
4.000 genes, enquanto o genoma humano apresenta cerca de 35.000
genes, 10 vezes mais.
Quando comparamos o nmero de genes dos genomas de
organismos filogeneticamente muito distantes, tais como bactrias e
humanos, torna-se fcil entender a correlao entre nmero de genes
e complexidade funcional. Entretanto, quando a comparao realizada
entre organismos evolutivamente prximos, esta anlise torna-se difcil.
O nmero de genes muito prximo entre espcies que apresentam
complexidades funcionais consideravelmente distintas. Por exemplo,
podemos analisar os primatas sagi-pigmeu (Cebuella pygmaea)
e chimpanz (Pan troglodytes). Na Figura 31.1, voc pode observar que,

134 C E D E R J
MDULO 4
31
embora ambos sejam primatas, o primeiro possui poucos centmetros de
tamanho, enquanto um chimpanz pode chegar a pesar 90 kg e medir

AULA
1,3 metro. A anlise preliminar de seus genomas, entretanto, no revela
diferenas considerveis quanto ao nmero de genes. Assim, uma outra
perspectiva deve ser considerada para explicar tal fato.

Chimpanz (Pan troglodytes) Sagi-pigmeu


g (Cebuella
pygmaea)
Tamanho: 1,3 metros
Peso: 90 kg Tamanho: 15 centmetros
Tamanho do Genoma: 3,8 Peso: 100 kg
bilhes de pb Tamanho do Genoma: 3,5
bilhes de pb
Figura 31.1: Exemplos de espcies geneticamente prximas que apresentam grandes
diferenas morfolgicas.

Nas Aulas 24 e 25 voc teve a oportunidade de conhecer os


diversos mecanismos de regulao da expresso gnica em eucariotos.
Em tais aulas, discutimos que, embora todas as clulas somticas de
um organismo eucarioto possuam os mesmos genes, estes podem ser
diferencialmente regulados nos diferentes tecidos, condies ambientais e
fases do desenvolvimento. A expresso de conjuntos especficos de genes,
durante o desenvolvimento embrionrio, responsvel pela morfognese
de cada indivduo. Tal processo controlado por genes reguladores.
Uma hiptese para explicar a grande diversidade morfolgica observada
entre indivduos que apresentem nmero de genes parecidos, como no
exemplo citado anteriormente, seria a presena e a ativao diferencial
de genes reguladores. Assim, a presena de uns poucos genes reguladores
(que controlam a formao dos rgos e tecidos) em uma espcie, pode
conferir grandes diferenas morfolgicas e funcionais em relao a uma
outra espcie que no os possua. Este mesmo raciocnio tem sido utilizado
para explicar as diferenas observadas entre humanos e chimpanzs, que
apresentam nmeros de genes praticamente idnticos.

C E D E R J 135
Biologia Molecular | Complexidade dos genomas II

COMPLEXIDADE FUNCIONAL E EMENDA DIFERENCIAL


DE GENES

Um dos aspectos que tem intrigado os pesquisadores o baixo


nmero de genes, revelado durante o projeto de seqenciamento
do genoma humano. As previses anteriores estimavam que seriam
necessrios entre 60 e 120 mil genes diferentes para atender a
todas as funes j caracterizadas em seres humanos. Entretanto, o
nmero encontrado de aproximadamente 35.000 genes. Assim, que
mecanismos o genoma utilizaria para atender ao grande nmero de
funes requeridas?
Dentre as hipteses que visam a responder questo anterior,
uma se baseia no sistema de regulao da expresso gnica. Conforme
voc aprendeu nas Aulas 24 e 25, a expresso diferencial de genes pode
resultar em fentipos distintos. Em outras palavras, um mesmo conjunto de
genes pode ser diferencialmente ativado para cada tecido ou condio,
de modo a resultar em caractersticas funcionais distintas.
Uma outra hiptese para responder a tal questo a existncia de
mecanismos de emenda diferencial de xons. Conforme voc aprendeu
na Aula 30, a grande maioria dos genes humanos possui, no mnimo,
um ntron. Dessa forma, existem muitos genes compostos por vrios
xons, cujos transcritos necessitam ser emendados durante a fase de
processamento do RNA (lembra-se da Aula 22?). O mecanismo
de emenda alternativa de xons, que voc teve a oportunidade de aprender
na Aula 24, corresponde a um sistema de regulao da expresso gnica
que permite a formao de diferentes transcritos a partir de um mesmo
gene. Na Figura 31.2, apresentado um esquema ilustrativo no qual um
mesmo gene pode produzir protenas endereadas a locais distintos da
clula, em funo da emenda alternativa de xons. Estima-se que 40%
dos genes de humanos estejam sujeitos regulao por mecanismos de
emenda alternativa de xons. Portanto, esta se torna uma interessante
explicao para a discrepncia observada entre o baixo nmero de
genes presentes e o elevado nmero de diferentes protenas codificadas.
A resposta pode ser a existncia de vrios produtos (polipeptdeos)
codificados a partir de cada gene.

136 C E D E R J
MDULO 4
xons 5 codifica para o sinal de

31
endereamento para secreo

AULA
xons
1 2 3 4 5 6 7

Protena endereada Protena endereada


secreo membrana plasmtica

Figura 31.2: Esquema ilustrativo da gerao de protenas distintas a partir da


emenda alternativa dos xons codificados por um gene. O gene apresentado
composto por 7 xons, dentre os quais o xon 5 que codifica para um sinal de
endereamento da protena para secreo , enquanto os xons 6 e 7 codificam
para o sinal que enderea a protena para a membrana plasmtica. Neste exemplo,
a emenda alternativa de xons resulta em protenas endereadas a locais distintos
(membrana e secreo).

ELEMENTOS DE TRANSPOSIO E CONTEDO DE DNA


REPETITIVO DNA genmico

Conforme abordado na
Aula 30, as espcies de eucariotos otransposon
superiores diferem amplamente
quanto ao contedo de DNA
repetitivo. A presena de tal
DNA a principal responsvel
pelas diferenas observadas no
contedo de DNA do genoma de
o reversa
espcies de eucariotos superiores.
Uma considervel parcela do
DNA
DNA repetitivo das espcies
representada pelos elementos
de transposio. Na Figura
Figura 31.3: Aumento
31.3, voc pode observar uma no tamanho do genoma,
promovido pela ativa-
ilustrao de como a ativao o de um elemento
de transposio. Neste
de um elemento de transposio exemplo, trata-se de um
(do tipo retrotransposon) pode retrotransposon, cujas
cpias se inserem alea-
resultar no aumento do tamanho toriamente no genoma,
promovendo aumento
do genoma. no seu tamanho.

C E D E R J 137
Biologia Molecular | Complexidade dos genomas II

A concluso do seqenciamento do genoma humano revelou


um dado interessante: aproximadamente metade de nosso genoma
composta por seqncias remanescentes de elementos de transposio.
ARABIDOPSIS De maneira similar, a comparao entre os genomas das plantas ARABIDOPSIS
((ARABIDOPIS e arroz tem revelado que, embora possuam nmeros de genes similares, o
THALIANA)
contedo de DNA de seus genomas bastante discrepante, pois o genoma
Espcie de planta
herbcea que cresce de arroz aproximadamente quatro vezes maior que o outro. A anlise
em clima temperado.
Devido ao fato destes genomas revelou, conforme esperado, uma quantidade muito
de estas plantas
apresentarem estrutura
maior de DNA repetitivo no genoma de arroz. O estudo da presena de
muito simples e elementos de transposio nesses genomas demonstrou a existncia
ciclo de vida curto
(aproximadamente de uma grande quantidade de transposons no genoma de arroz, enquanto
60 dias), elas so
utilizadas como em arabidopsis o nmero de tais seqncias foi bastante reduzido. Juntas,
modelo de estudos as informaes anteriores permitiram aos pesquisadores concluir que a
para cientistas.
participao dos elementos de transposio no contedo de DNA do
genoma de eucariotos bem superior ao que se supunha previamente.

DENSIDADE DOS GENES AO LONGO DOS CROMOSSOMOS


DE EUCARIOTOS

A afirmao de que os genes de uma espcie encontram-se


distribudos ao longo de seus cromossomos pode gerar a falsa idia de que
tal distribuio homognea. Entretanto, a idia mais apropriada que os
genomas de eucariotos superiores consistem em osis de genes separados
por desertos vazios. Em outras palavras, os genes esto concentrados
em determinadas regies dos cromossomos, separadas umas das outras
por vastas regies de seqncias que no codificam protenas. Voc deve
se lembrar sempre de que a grande maioria de nosso genoma composta
por seqncias que no contm genes.
A anlise do genoma humano revelou que 75% do nosso genoma
composto por regies que no contm genes, 24% do genoma
representado por ntrons e apenas 1,1% composto por xons. Portanto,
apenas 1,1 % do genoma de humanos codifica protenas, enquanto os
demais 98,9% so compostos por ntrons e regies no-codificadoras.
importante ressaltar que muitas regies, embora no codifiquem
protenas, atuam como componentes funcionais, ao desempenharem
papel nos mecanismos de regulao da expresso gnica, por exemplo,
as regies promotoras dos genes. Outras seqncias, tambm no-
codificadoras, desempenham papel estrutural nos cromossomos, tais
como os centrmeros e telmeros.
138 C E D E R J
MDULO 4
31
A densidade de genes nos cromossomos humanos tambm no
homognea. Determinados cromossomos possuem grande nmero de

AULA
genes, enquanto outros apresentam poucos genes separados por uma
grande quantidade de DNA repetitivo.

SIMILARIDADE GENMICA ENTRE INDIVDUOS DA MESMA


ESPCIE

Um interessante assunto que podemos abordar com relao ao


genoma a comparao da similaridade gentica entre indivduos de
mesma espcie. Conforme voc sabe, as diferenas fenotpicas entre as
pessoas , freqentemente, resultante das caractersticas genticas que
elas possuem. Como conseqncia, durante a histria da humanidade,
as diferenas tnicas entre os diferentes grupos conduziram ao equvoco
de tentar agrupar tais indivduos em raas. Porm, tal agrupamento foi
normalmente fundamentado em alguns poucos caracteres fenotpicos,
tais como a cor da pele, o tipo de cabelo, o formato dos olhos etc.
O estudo dos genomas revelou um resultado surpreendente.
A comparao entre os genomas de indivduos das diferentes raas,
previamente propostas, revelou que as seqncias so idnticas em
99,9% dos nucleotdeos. Quando a comparao foi realizada entre
indivduos da mesma raa, o nvel de semelhana foi o mesmo,
99,9%. Estes resultados conduzem s seguintes concluses:
1) as diferenas genticas, que observamos entre indivduos da
espcie humana, correspondem a apenas 0,1% de todo o DNA;
2) o conceito de raas na espcie humana no faz qualquer
sentido, pois dois indivduos de uma mesma raa so to similares
entre si, 99,9%, quanto dois indivduos de raas diferentes.

As diferenas entre os indivduos da espcie humana so da ordem de


0,1% dos nucleotdeos. Portanto, podemos perceber que estas poucas
diferenas so suficientes para conferir a cada pessoa caractersticas
fenotpicas exclusivas.

C E D E R J 139
Biologia Molecular | Complexidade dos genomas II

O CONHECIMENTO DAS SEQNCIAS DOS GENOMAS E DA


FUNO DE SEUS GENES

Atualmente, os pesquisadores tm dedicado grande esforo ao


seqenciamento e caracterizao dos genomas de diversas espcies de
procariotos e eucariotos. Devido ao tamanho reduzido, os genomas
de centenas de espcies de procariotos j foram seqenciados at o
momento. No caso de eucariotos superiores, entretanto, esse nmero se
restringe a poucas espcies de animais, incluindo o homem, e de plantas.
Aos trabalhos de seqenciamento do material gentico e
identificao das seqncias codificadoras presentes em uma espcie
d-se o nome de Projeto Genoma. O Projeto Genoma Humano, por
exemplo, dedicou-se ao seqenciamento dos nucleotdeos presentes
nos 24 cromossomos que caracterizam a espcie (22 cromossomos
autossmicos + X + Y). Na Figura 31.4, apresentada a seqncia de
nucleotdeos de uma pequena poro do genoma (lembre-se de que o
genoma humano possui aproximadamente 3,3 bilhes de nucleotdeos!).
Em seguida, foram desenvolvidos os trabalhos que visaram a localizar
as regies codificadoras ao longo da seqncia. Na Figura 31.5,
apresentado um esquema ilustrando as regies codificadoras encontradas
em uma seqncia de nucleotdeos. Porm, em humanos, a distncia
entre genes muito maior que o apresentado na figura. Alm disso,
a maioria das regies codificadoras de humanos interrompida por
ntrons. O prximo passo de um projeto genoma a caracterizao da
funo de cada um dos aproximadamente 35.000 genes identificados.
Esta fase a mais complexa e, embora muitos genes j tenham sido
caracterizados, a funo da maioria deles ainda permanece pouco
elucidada, ou completamente obscura. A determinao da funo de
todos os genes da espcie humana permanece um grande desafio a ser
vencido ao longo dos prximos anos.

Figura 31.4: Esquema ilustrando


a seqncia de nucleotdeos de
uma pequena poro do genoma.
Embora saiba-mos que o DNA fita-
dupla, apenas uma das fitas tem sua
seqncia apresentada.

140 C E D E R J
MDULO 4
31
2150001

AULA
2

2200001

2250001

2300001

2420 2421 2422 2426 2427

Figura 31.5: Esquema ilustrando a localizao de regies codificadoras em uma


seqncia de nucleotdeos. Cada seta representa uma regio codificadora distinta.

Paralelamente aos trabalhos de seqenciamento do DNA genmico,


diversos grupos tm-se dedicado ao estudo dos transcritos produzidos por
seus genes. Como um conjunto diferente de genes se expressa em cada
tecido ou condio, a caracterizao de tais transcritos tambm muito
trabalhosa. Porm, os tais transcritos correspondem apenas a 1,1% de
todo o genoma, pois, conforme discutido anteriormente, apenas 1,1%
do genoma humano corresponde aos xons dos genes. Ao conjunto de
transcritos produzidos por um organismo d-se o nome transcritoma.
Uma outra importante abordagem atualmente utilizada visa a
estudar as protenas apresentadas por um organismo. Assim como para os
transcritos, cada tecido ou condio apresenta um conjunto de protenas
diferente. Os trabalhos consistem em isolar e identificar cada uma dessas
protenas. Ao conjunto de protenas produzidas por um organismo d-se
o nome de proteoma.
As trs abordagens citadas anteriormente desempenham papis
complementares no estudo dos genomas e seu funcionamento, pois
permitem a identificao dos genes, a caracterizao de seus transcritos,
bem como as protenas codificadas. Atualmente, tais projetos tm sido
desenvolvidos para muitas espcies, mas a maioria delas permanece
inexplorada. No decorrer dos prximos anos, ou dcadas, teremos a
oportunidade de acompanhar o avano de tais descobertas e os impactos
sociais e econmicos da aplicao desses conhecimentos.

C E D E R J 141
Biologia Molecular | Complexidade dos genomas II

No caso da espcie humana, espera-se que o conhecimento das


funes de todos os genes permita a identificao das regies responsveis
por todas as doenas genticas, bem como os genes envolvidos com a
suscetibilidade ou resistncia a doenas infecciosas. Estes resultados
permitiro o desenvolvimento de terapias capazes de curar tais doenas.
Adicionalmente, o conhecimento dos genomas de um considervel
nmero de espcies dos diversos filos permitir a anlise comparativa
de todas estas seqncias, visando a identificar os genes presentes, ou
ausentes, em cada uma delas. Assim, espera-se determinar os genes
envolvidos com as caractersticas morfolgicas e funcionais que definem
cada espcie.

RESUMO

Nesta aula, voc teve a oportunidade de aprender alguns aspectos acerca da


organizao e complexidade dos genomas. Vimos que a maior complexidade funcional
dos genomas de eucariotos, em relao aos procariotos, resulta do maior nmero
de genes presentes. Adicionalmente, vimos que, em espcies filogeneticamente
prximas, o nmero de genes freqentemente muito parecido, apesar de grandes
diferenas morfolgicas serem observadas. Nesses casos, as diferenas no decorrem
do nmero de genes, mas da expresso diferencial dos mesmos.
As anlises do genoma humano revelaram um nmero relativamente pequeno
de genes, aproximadamente 35.000. Dentre as hipteses formuladas para
explicar a discrepncia entre o nmero de genes e o nmero de funes
requeridas, vimos que a expresso diferencial de genes pode explicar, em parte,
tal discrepncia. Uma segunda hiptese a existncia de emenda alternativa
de xons em muitas espcies.
No mbito do contedo de DNA, voc teve a oportunidade de aprender que uma
considervel poro do DNA repetitivo observado em eucariotos superiores
composta por elementos de transposio ou seqncias remanescentes destes.
A distribuio dos genes no homognea ao longo do genoma humano,
estando concentrados em determinadas regies dos cromossomos, separadas por
vastas regies no-codificadoras. Aproximadamente 75% do genoma humano
composto por regies que no contm genes, 24% composto por 1,1%

142 C E D E R J
MDULO 4
31
composto por xons. A comparao de seqncias do genoma de indivduos

AULA
distintos da espcie humana revelou que o nvel de diferenas genticas de
aproximadamente 0,1%.
O conhecimento dos genomas se encontra em fase inicial. Aps o conhecimento das
seqncias e identificao das regies codificadoras, tem incio um grande desafio,
representado pelo estudo da regulao e da funo de cada gene. Paralelamente,
tm sido desenvolvidos projetos transcritoma e proteoma para muitas espcies.

EXERCCIOS
1. Eucariotos superiores apresentam complexidade morfolgica e funcional muito
maior que a observada em procariotos. Explique a correlao entre tal diferena
e o nmero de genes presentes.

2. Indivduos de espcies filogeneticamente muito prximas possuem nmero de


genes muito similar. Como voc poderia explicar as grandes diferenas morfolgicas
freqentemente observadas?

3. O genoma humano possui um nmero de genes relativamente pequeno em


relao s funes requeridas pelo organismo. Qual o papel da emenda diferencial
de genes na complexidade funcional de humanos?

4. Qual a correlao entre a presena de elementos de transposio e a quantidade


de DNA repetitivo do genoma de eucariotos?

5. Qual a proporo do genoma humano composta por regies codificadoras?

6. Por que a anlise dos dados do genoma humano revelou que no faz sentido
agrupar os indivduos da espcie humana em diferentes raas?

7. Alm do conhecimento da seqncia de nucleotdeos de um genoma e da


localizao de seus genes, que outras informaes devem ser obtidas para o
conhecimento da complexidade funcional de uma espcie?

C E D E R J 143
Biologia Molecular | Complexidade dos genomas II

AUTO-AVALIAO

Se voc compreendeu o contedo desta aula, no deve ter encontrado dificuldades


para responder aos exerccios. Esta aula enfocou detalhadamente os principais
aspectos inerentes ao genoma de eucariotos, com nfase no genoma humano.
Entretanto, lembre-se de que tais informaes correspondem a uma pequena parte
de um conjunto imenso de descobertas realizadas atualmente. A cada dia, novas
informaes tm surgido acerca dos genomas, pois a cincia no pra.

144 C E D E R J
Biologia Molecular

Gabarito
Aula 24

1. Embora todas as clulas somticas de um organismo eucarioto apresentem a mesma


constituio gentica, nem todos os genes se expressam simultaneamente em todas
elas. Estima-se que apenas 10% dos genes se expressam em todos os tipos celulares
durante todo o tempo. Tais genes so denominados genes constitutivos. Os demais
tm sua expresso regulada e, portanto, expressam-se apenas em determinados
tecidos ou condies. Assim, em cada tipo celular, um conjunto especfico de genes
se expressa, enquanto os demais permanecem inativos. A expresso de genes
especficos em cada tipo celular resulta em caractersticas morfolgicas, funcionais
e de constituio distinta.

Comentrio: este exerccio far com que voc revise os conceitos relativos
expresso diferencial de genes e sua regulao em funo dos nveis, locais e
perodos de expresso.

2. Cascatas de regulao da expresso gnica so processos coordenados de regulao


seqencial da expresso de genes. Tal mecanismo verificado para conjuntos de
genes que compem circuitos pr-programados de expresso, em que um evento
inicial ativa um conjunto de genes, dentre os quais alguns tm funo reguladora. Em
seguida, tais genes reguladores atuam tanto na ativao de um segundo conjunto de
genes quanto na inativao de genes do primeiro conjunto. Desse segundo conjunto
de genes, alguns so tambm reguladores, ativando a expresso de um terceiro
conjunto de genes, e assim por diante. A ordem seqencial da expresso destes genes
, portanto, geneticamente pr-programada.

Comentrio: este exerccio far com que voc revise as informaes relativas a
expresso seqencial de genes e, conseqentemente, estabelea o conceito de
cascatas de expresso gnica.

3. Quanto regulao da expresso, os genes podem ser classificados em genes de


expresso constitutiva, genes de expresso tecido-especfica, genes de expresso
temporal e genes de expresso induzvel. Genes de expresso constitutiva so aqueles
cuja expresso pode ser verificada em todos os tipos celulares, o tempo todo. Genes de
expresso tecido-especfica apresentam sua expresso restrita a determinados tecidos ou
tipos celulares. Genes de expresso temporal expressam-se apenas durante determinado
perodo. Genes de expresso induzvel so aqueles cuja expresso ativada em resposta
a fatores ambientais, tais como frio, calor, ferimento, infeces etc.

146 CEDERJ
Comentrio: este exerccio visa a que voc fixe as informaes relativas ao agrupamento
dos genes quanto ao seu padro de regulao da expresso.

4. Para que ocorra a expresso de um gene de eucarioto, uma seqncia de vrias


etapas deve ser concluda: transcrio, processamento do transcrito, transporte para
o citoplasma, traduo, modificaes do polipeptdio formado e endereamento da
protena para o compartimento celular apropriado. Mecanismos celulares que afetem
a eficincia de qualquer uma dessas etapas sero, portanto, formas de regulao da
expresso gnica.

Comentrio: este exerccio far com que voc observe que a regulao da expresso
gnica de eucariotos composta de vrias etapas distintas e que, em diferentes nveis,
todas elas podem ser reguladas.

5. O principal mecanismo de regulao da expresso gnica em eucariotos o controle


da transcrio. Esta representa a forma mais econmica de regulao, pois, caso o
gene no seja transcrito, as demais etapas da expresso gnica no se verificam.
Existem dois mecanismos principais de regulao transcricional: o remodelamento da
cromatina, que define as regies do genoma que estaro disponveis para a transcrio
e a regulao atravs de protenas reguladoras, que permite o controle da expresso
de cada gene, individualmente.

Comentrio: com este exerccio voc ter a oportunidade de revisar os conceitos gerais
de regulao, de modo a observar a importncia da regulao da transcrio.

6. Aps a transcrio, o transcrito primrio (pr-RNAm) deve ser processado,


transportado para o citoplasma e utilizado para a traduo. Tais etapas envolvem
vrios processos que podem ser regulados. O processamento do transcrito envolve
vrios eventos distintos, dentre os quais podemos destacar a adio do capacete e
da cauda poliA, a retirada de ntrons e emenda dos xons e a edio do transcritos.
A ocorrncia de regulao destas etapas tem sido reportada, com nfase aos
mecanismos que permitem a emenda alternativa de xons e os sistemas de
edio do transcrito. Tais mecanismos permitem a um mesmo gene a capacidade
de codificar diferentes formas da protena. O transporte do RNAm formado para o
citoplasma tambm pode ser regulado. Ao chegar no citoplasma, cada RNAm possui
uma longevidade especfica (estabilidade). Mecanismos que aumentem ou reduzam
a suscetibilidade de um dado transcrito degradao representam tambm uma
forma de regulao ps-transcricional.

CEDERJ 147
Comentrio: Neste exerccio voc ter a oportunidade de revisar os diferentes
mecanismos que atuam sobre a molcula de RNA aps a sua sntese e, conse-
qentemente, as formas atravs das quais os mesmos podem ser regulados.

7. Aps a traduo (que tambm pode ser regulada), o polipeptdio formado precisa
ser corretamente processado para que seja endereado ao compartimento celular
apropriado e constitua uma protena biologicamente ativa. Esse processo envolve
vrios mecanismos distintos: a clivagem de regies da protena (sob a ao de proteases
especficas), o endereamento para os compartimentos e a adio de modificaes
estruturais (adio de radicais). Todas essas etapas podem ser reguladas, afetando
a produo da protena ativa e, conseqentemente, a expresso do gene que a
codifica. As protenas tambm possuem longevidade (estabilidade), perodo aps o
qual so degradadas. Mecanismos que afetam a estabilidade da protena so formas
de regulao ps-traducional da expresso gnica.

Comentrio: este exerccio permitir a voc revisar os vrios mecanismos de regulao


que podem atuar aps a sntese dos polipeptdios.

Aula 25

1. Para que um gene seja transcrito, necessrio que sua regio reguladora esteja
acessvel ao complexo da transcrio (fatores de transcrio e RNA polimerase II).
Quando uma regio do genoma se encontra altamente condensada, o acesso do
referido complexo protico inviabilizado. O remodelamento da cromatina, portanto,
capaz de definir quais regies do genoma so passveis de serem transcritas. O
remodelamento da cromatina no est relacionado apenas com os nveis mais elevados
de compactao da cromatina. A alterao dos nveis de interao entre nucleossomos
adjacentes tambm resulta em remodelamento da cromatina, influenciando a
expresso do gene.

Comentrios: para responder a tal questo, voc necessitar dominar as informaes


fornecidas sobre os nveis de compactao da cromatina e sua correlao com os
nveis de transcrio.

2. O principal mecanismo de modificao estrutural do DNA o processo de metilao.


A metilao consiste na adio de radicais metil s bases nitrogenadas citosinas
do DNA. O processo desempenhado por enzimas DNA metiltransferases. Regies do
genoma onde o DNA altamente metilado normalmente encontram-se condensadas.

148 CEDERJ
Existe forte correlao entre nvel de metilao de uma regio do genoma e o nvel
de atividade transcricional. De maneira geral, regies altamente metiladas so
transcricionalmente inativas.

Comentrios: o objetivo deste exerccio que voc correlacione os nveis de metilao


do DNA, o remodelamento da cromatina e a atividade transcricional.

3. Os trs principais mecanismos de modificao das protenas histonas so a


acetilao, fosforilao e metilao que consistem na adio de radicais acetil,
fosfato ou metil, respectivamente. Tais modificaes ocorrem em caudas amino-
terminais das histonas que se projetam para fora da estrutura do nucleossomo.
A presena, ou ausncia, de tais modificaes altera a capacidade de interao
entre nucleossomos adjacentes e, conseqentemente, afeta o nvel de compactao
da cromatina. Paralelamente, a presena, ou ausncia, de tais modificaes afeta
o acesso de protenas reguladoras a uma dada regio do genoma. A atividade
transcricional , portanto, afetada por duas vias: a primeira est relacionada com
os nveis de compactao da cromatina, que pode facilitar ou dificultar o acesso
do complexo da transcrio em funo de seu nvel de condensao; a segunda via
est relacionada com a interao com protenas reguladoras, capazes de ativar ou
reprimir o acoplamento do complexo da transcrio.

Comentrio: este exerccio far com que voc relembre os mecanismos de modificao
das protenas histonas e correlacione tais processos com a conformao da cromatina
e a ativao da transcrio.

4. A ligao de protenas reguladoras pode exercer dois papis contrastantes sobre


a transcrio de um gene. Muitas dessas protenas ativam o processo de transcrio,
pois facilitam o acesso do complexo da transcrio ao promotor. Nesses casos, tais
protenas so denominadas ativadores (ou protenas ativadoras) da transcrio.
Entretanto, determinadas protenas reguladoras atuam prejudicando a transcrio
de gene, atenuando ou inviabilizando o acesso do complexo da RNA polimerase. Tais
protenas so denominadas repressores (ou protenas repressoras) da transcrio.

Comentrio: este exerccio far com que voc estabelea o conceito de que protenas
reguladoras podem ativar ou reprimir a expresso gnica.

5. As protenas reguladoras possuem dois domnios principais denominados Domnio


de ligao ao DNA e Domnio de ativao (ou represso). O domnio de ligao ao
DNA desempenha o papel de reconhecer seqncias de DNA especficas das regies
reguladoras de determinados genes. Tais seqncias so denominadas stios de
ligao. O papel do domnio de ativao realizar a interao com protenas

CEDERJ 149
do complexo da transcrio (fatores de transcrio), facilitando (no caso de protenas
ativadoras) ou dificultando (no caso de protenas repressoras) o acoplamento do
complexo da DNA polimerase II.

Comentrio: este exerccio far com que voc revise o assunto relacionado aos
domnios que caracterizam as protenas reguladoras.

Aula 26

1. Aps a descoberta de sua natureza fsica, ou seja, de sua localizao, o gene foi
definido como uma regio especfica do cromossomo capaz de determinar ou afetar
uma nica caracterstica ou fentipo.

Esse conceito sofreu mudanas com o desenvolvimento da cincia. Primeiramente, a


proposio de Garrod, em 1908, de que os erros inatos do metabolismo eram herdados,
o que sugeria a existncia de uma relao entre o gene e a parte qumica do nosso
organismo. Anos mais tarde, em 1940, a partir de uma srie de experimentos usando
o fungo Neurospora crassa como modelo, Beadle e Tatum propuseram a relao um
geneuma enzima. Esta hiptese foi prontamente aceita, mas foi alterada para um
geneuma protena e depois para um geneum polipeptdeo. Hoje em dia o conceito
aceito o de que gene uma seqncia de nucleotdeos que determina a sntese de
molculas com funo celular especfica.

2. Sabemos que os eventos mutacionais ocorrem espontaneamente, mas a uma taxa


muito baixa, o que reduz a probabilidade de isolamento de mutantes de qualquer
organismo com caractersticas desejadas. O estudo de Beadle e Tatum dificilmente
teria sido realizado sem a exposio de esporos do fungo Neurospora a raios X.
De fato, a utilizao de agentes mutagnicos contribuiu consideravelmente para
as conquistas na rea da Gentica, uma vez que, ao aumentar a taxa de mutao,
aumenta a probabilidade de se isolar mutantes, que foram e ainda so fundamentais
para o entendimento dos processos celulares.

3. A partir da Figura 26.7 possvel se saber que aminocidos so codificados por


todos os cdons. A Figura 26.8 tambm poderia ser utilizada, mas menos indicada
para a resoluo deste exerccio.

CGG arginina (Arg ou R)

UAC tirosina (Tyr ou Y)

GGA glicina (Gly ou G)

150 CEDERJ
ACU treonina (Thr ou T)

UCA serina (Ser ou S)

GCG alanina (Ala ou A)

UUA leucina (Leu ou L)

AAU asparagina (Asn ou N)

4. A Figura 26.8 a mais indicada para se saber os cdons que codificam um aminocido
especfico. Entretanto, a Figura 26.7 tambm pode ser utilizada.

arginina AGA, AGG, CGA, CGC, CGG, CGU

histidina CAC, CAU

metionina AUG

prolina CCA, CCC, CCG, CCU

triptofano UGG

valina GUA, GUC, GUG, GUU

5. Cada aminocido codificado por uma trinca de nucleotdeos presente no mRNA,


que sintetizado a partir de um molde de DNA. Portanto, quando se pretende
introduzir qualquer alterao em uma protena, deve-se introduzir uma alterao no
gene (DNA) que a codifica. importante lembrar que o mRNA apenas o carreador
da informao gentica, armazenada sob a forma de DNA, do ncleo das clulas
eucariticas para o citoplasma, onde ocorre a sntese protica.

Se cada aminocido codificado por uma trinca de bases e se o objetivo eliminar


trs aminocidos da cadeia polipeptdica, ser necessria a deleo de trs trincas
correspondentes aos aminocidos a serem eliminados, ou seja, de nove pares de bases
do DNA. Este DNA servir de molde para a sntese de uma molcula de mRNA com
trs trincas a menos, que, ento, determinar a sntese de uma protena com menos
trs aminocidos. Qualquer nmero diferente de trs ou mltiplo de trs causar
uma mudana no quadro de leitura, podendo resultar em sntese de uma protena
menor devido ao surgimento precoce de um cdon de terminao. Em geral, nesses
casos, a protena inativa, portanto, no-funcional.

CEDERJ 151
Aula 27

1. Consideramos sntese de protenas o processo que resulta em formao de uma


molcula funcional. Isso porque muitas protenas funcionais so compostas por
mais de uma cadeia polipeptdica, alm de necessitarem de um arranjo espacial
especfico dessas cadeias. Portanto, a sntese de protenas engloba a ativao dos
aminocidos, o processo de traduo que consiste na sntese da cadeia polipeptdica
propriamente dita e ocorre em trs estgios, iniciao, alongamento e terminao
e o processamento ps-traducional.

2. a) F. A seqncia de aminocidos em uma cadeia polipeptdica determinada pela


seqncia de cdons no mRNA em um processo chamado traduo.

b) F. Uma parte da molcula de tRNA contm um anticdon de trs bases que


complementar ao cdon apropriado no mRNA.

c) V.

d) V.

3. O mRNA eucaritico codifica apenas uma protena e apresenta a extremidade 5cap,


caracterizada pela presena da 7-metil guanosina, que representa o stio de ligao
do ribossomo. J o mRNA procaritico pode codificar vrias protenas e apresenta
seqncias de Shine-Dalgarno, uma para cada uma das protenas codificadas, que
correspondem ao stio de ligao do ribossomo.

4. Os tRNAs so conhecidos como os adaptadores do processo de traduo. Isso


porque so as molculas que levam o aminocido correto para o local de sntese. Para
desempenhar esse papel, um tRNA deve ser reconhecido por uma enzima especfica,
que adiciona o aminocido ativado correto, e pelos ribossomos, para se posicionar
corretamente em relao ao mRNA, a fim de parear com o cdon que especifica o
aminocido ligado a ele.

5. A ativao dos aminocidos consiste em duas reaes catalisadas pelas aminoacil-


tRNA sintetases. A primeira envolve a ligao entre um aminocido, o AMP, com
formao de aminoacil-AMP. A segunda tem como substratos o aminoacil-AMP e o
tRNA especfico a este aminocido, resultando em 3 ou 2-aminoacil-tRNA. O esquema
resumido encontra-se na Figura 27.13.

152 CEDERJ
Aula 28

1. O incio da traduo sempre se d com as duas subunidades ribossomais separadas,


o que possvel com a participao de fatores especficos, e termina com a hidrlise
de GTP e associao da subunidade maior.

As caractersiticas marcantes dos mRNAs de procariotos e eucariotos determinam as


diferenas observadas na etapa inicial de formao do complexo de iniciao nesses
organismos. Alm disso, em eucariotos, o processo conta com a participao de um
nmero maior de fatores de iniciao.

Em procariotos, o processo se inicia com a ligao da subunidade 30S com o fator


de iniciao IF-3, o que impede a ligao precoce entre as subunidades 30S e 50S. A
dissociao das duas subunidades ribossomais , ainda, favorecida pela ligao de
IF-1 poro da subunidade 30S correspondente ao stio A. Em seguida, observa-se a
ligao do mRNA subunidade menor do ribossoma, com o posicionamento correto
do cdon de iniciao na parte da subunidade 30S correspondente ao stio P e a
formao do complexo constitudo pela subunidade 30S, por IF-3 e pelo mRNA. Esse
complexo se torna ainda maior com a ligao de IF-2 previamente ligado ao GTP e ao
fMet-tRNAfMet. Por fim, esse complexo grande se associa subunidade ribossomal 50S,
estimulando a hidrlise de GTP pelo IF2 e liberao de IF-1 e IF-3. Dessa forma, em
procarioto, o complexo de iniciao formado pelo ribossomo 70S, contendo o mRNA
e o iniciador fMet-tRNAfMet, que ocupa o stio P. O stio A est posicionado para receber
o aminoacil-tRNA carregando o segundo aminocido da cadeia polipeptdica.

J em eucariotos, o processo se inicia com a ligao do complexo eIF-4F extremidade


5 cap do mRNA, o que contribui para o desenovelamento de estruturas secundrias
dessa molcula. Outro fator, o eIF-3, mantm a subunidade 40S dissociada e promove
sua ligao, atravs da regio correspondente ao stio P, com o complexo ternrio
formado pelo Met-tRNAiMet e eIF-2 ligado ao GTP. Esse complexo maior, constitudo pela
subunidade 40S, eIF-s, GTP e Met-tRNAiMet, liga-se extremidade 5 do mRNA com o
auxlio de inmeros fatores. O mRNA , ento, explorado para localizao do primeiro
AUG, que sinaliza o incio da fase de leitura. Assim, a subunidade 40S do ribossomo se
posiciona no AUG iniciador na seqncia apropriada de nucleotdeos flanqueadores.
Por fim, com a hidrlise do GTP, ocorre a montagem do complexo de iniciao completo,
constitudo pelo ribossomo 80S ligado ao Met-tRNAiMet e ao mRNA.

CEDERJ 153
2. a) F. O metionil-tRNAiMet aparece no stio P.

b) V.

c) F. O metionil-tRNAMet usado na incorporao de metionina posicionado na parte


interna da cadeia polipeptdica.

d) F. O mRNA se associa primeiramente com a subunidade 40S.

3. E. O fMet-tRNAiMet especfico para procariotos. Todos os outros itens so necessrios


para a traduo em procariotos e eucariotos.

4. a) F. O aminoacil-tRNA carregando o aminocido a ser incorporado na cadeia


polipeptdica se liga ao stio A.

b) F. A reao de formao da ligao peptdica no requer energia oriunda da


hidrlise de GTP.

c) V.

d) F. A estreptomicina bloqueia a formao do complexo de iniciao de traduo.

5. Porque a puromicina apresenta uma estrutura similar tirosinil-tRNA, podendo


ser incorporada erroneamente durante a traduo, o que causa uma terminao
prematura.

Aula 29

1. Vimos que, aps a traduo, as protenas sofrem inmeras modificaes, incluindo


clivagens proteolticas. Todos os polipeptdeos recm-sintetizados em procariotos tm
o grupamento formil retirado por uma desformilase. Muitos deles sofrem ainda a
ao de uma amino peptidase que retira um ou poucos resduos do terminal amino.
Assim, nem todas as protenas bacterianas apresentam metionina neste terminal.

2. E. Durante o processamento da pr-pr-insulina, as seguintes etapas ocorrem, nesta


seqncia: remoo do peptdeo sinal, formao de ponte dissulfeto, remoo de um
peptdeo de uma regio interna da cadeia e dobramento da estrutura resultando na
conformao funcional. A formao de -carboxiglutamato caracterstica da sntese
de alguns fatores de coagulao.

154 CEDERJ
3. O principal elemento de sinalizao a seqncia sinal (ou lder), tambm chamada
peptdeo sinal. Essa seqncia sinalizadora responsvel pelo direcionamento do
polipeptdeo a um local especfico na clula, sendo geralmente removida durante o
processo de transporte ou quando o polipeptdeo atinge seu destino final.

4. Relembrando as aulas de Biologia Celular sobre a constituio das membranas


celulares, entendemos que a presena dos resduos hidrofbicos fundamental para
o transporte das protenas. Esses resduos podem, portanto, direcionar a protena ao
compartimento apropriado e iniciar sua penetrao nas membranas.

Aula 30

1. O genoma de uma espcie corresponde ao conjunto de todo o material gentico


presente em suas clulas. O genoma, portanto, inclui no apenas os genes, mas tambm
diversas regies no-codificadoras, que so componentes do material gentico. Assim,
a definio apropriada para genoma o conjunto de todo o material gentico que
caracteriza uma espcie.

Comentrio: este exerccio far com que voc revise a definio do termo genoma,
considerando a existncia de muitas outras seqncias de DNA, alm dos genes,
dentre o material gentico de cada organismo.

2. O tamanho do genoma de uma espcie refere-se ao contedo de DNA (Valor-C)


que ele possui. Tal valor pode ser medido em pares de bases. A complexidade de um
genoma refere-se ao nmero de genes diferentes presentes nele.

Comentrio: para responder a esta questo, voc deve ter assimilado as diferenas
entre os dois termos conforme apresentados no incio desta aula.

3. A correlao entre o contedo de DNA do genoma haplide e a complexidade


funcional dos organismos pode ser facilmente verificada em procariotos. Ao
analisarmos o contedo de DNA do genoma das espcies pertencentes a tais filos,
percebemos uma correlao direta entre complexidade funcional dos organismos e
contedo de DNA de seus genomas.

Em eucariotos, entretanto, tal correlao no verificada, pois espcies com


nveis similares de complexidade funcional podem apresentar contedos de DNA
completamente distintos em seus genomas. Paralelamente, espcies com nveis de
complexidade funcional completamente distintos podem apresentar contedos
de DNA similares em seus genomas.

CEDERJ 155
Comentrio: ao responder a esta questo, voc ter a oportunidade de revisar as
correlaes entre a complexidade funcional dos organismos e o contedo de DNA
em seus genomas, nos diferentes filos.

4. Os ensaios de cintica de reassociao baseiam-se no princpio de que, em uma


mistura de fragmentos de DNA, previamente desnaturados termicamente, a posterior
reassociao das molculas depender da probabilidade de cada fragmento fita-
simples encontrar sua fita complementar. Tal evento ocorre ao acaso. Se, entretanto,
houver vrias cpias de um dado fragmento, as chances de que suas fitas encontrem
uma fita complementar ser aumentada, elevando, com isso, a velocidade de
reassociao. Em outras palavras, quanto maior a quantidade de cpias de um dado
fragmento, maior ser sua velocidade de reassociao. Portanto, tais ensaios permitem
estimar a presena de DNA repetitivo em um genoma, pois a frao de fragmentos
que possuem vrias cpias apresentar maior velocidade de reassociao.

Comentrio: este exerccio far com que voc revise os princpios envolvidos nos
ensaios de cintica de reassociao de fragmentos de DNA, de modo a entender o
mtodo de determinao de fraes de DNA repetitivo nos diferentes genomas.

5. Uma considervel parcela do genoma de eucariotos superiores composta por


DNA repetitivo. Determinadas espcies chegam a apresentar mais de 80% de DNA
repetitivo em seu genoma. Em eucariotos inferiores, a proporo de DNA repetitivo
bem menor, no ultrapassando 20% do genoma. Organismos procariotos no
possuem DNA repetitivo.

Comentrio: para responder a esta questo, voc dever revisar as informaes


referentes presena de DNA repetitivo nos genomas dos diferentes organismos.

6. No. Embora a grande maioria dos genes de eucariotos esteja contida na frao de
DNA no-repetitivo, existem diversas seqncias de DNA no-repetitivo que no so
genes. Tais seqncias podem ser regies intergnicas, ou seja, seqncias de DNA
localizadas entre dois genes adjacentes. No genoma de procariotos, por exemplo,
todo o genoma composto por DNA no-repetitivo, mas apenas uma parcela dele
representada por genes.

Comentrio: neste exerccio, voc dever revisar as informaes acerca da frao de


DNA no-repetitivo dos genomas.

7. Mitocndrias e cloroplastos possuem genomas circulares, existindo vrias cpias


do genoma por organela. Os genes presentes codificam para os RNAs ribossmicos
e transportadores e para apenas algumas das protenas requeridas pela organela.

156 CEDERJ
As demais protenas so codificadas pelo ncleo, sendo endereadas para a organela
aps serem sintetizadas.

Genomas de mitocndrias variam amplamente de tamanho entre 16,5kb, em


mamferos, e 570kb, em plantas superiores. Genomas de cloroplastos variam entre
120 e 200kb.

Comentrio: neste exerccio, voc dever rever as informaes relativas s caractersticas


gerais dos genomas de cloroplastos e mitocndrias.

Aula 31

1. Para que um organismo apresente maior complexidade funcional e morfolgica, ele


dever possuir genes que coordenem tais caractersticas. De fato, o nmero de genes
presentes em eucariotos superiores muito maior que o observado em procariotos.
Por exemplo, o genoma humano possui aproximadamente 10 vezes mais genes que
o genoma da bactria E. coli.

Comentrio: este exerccio far com que voc revise as informaes referentes
correlao entre nmero e tamanho mdio de genes e complexidade funcional
dos organismos.

2. As diferenas morfolgicas no dependem apenas da presena ou ausncia de


genes. Muitas vezes, a regulao diferencial de um mesmo conjunto de genes pode
resultar em fentipos completamente distintos. Nesses casos, a ao de protenas
regulatrias crucial para a morfognese. Assim, a presena, ou ausncia, de uns
poucos genes reguladores pode resultar em grande variao fenotpica e, muitas
vezes, funcional entre duas espcies.

Comentrio: para responder a esta questo, voc deve revisar os conceitos relativos
expresso diferencial de genes e seu papel na morfologia dos indivduos.

3. O nmero restrito de genes no genoma humano exige a existncia de mecanismos que


elevem sua complexidade funcional. Assim, a regulao diferencial dos genes presentes
passa a ter um papel importantssimo. Dentre estes mecanismos, a emenda alternativa
de xons desempenha um papel crucial. A anlise do genoma humano tem permitido
estimar que aproximadamente 40% dos genes sejam regulados por emenda alternativa
de xons. Assim, tais genes podem gerar transcritos e, conseqentemente, protenas
diferentes em funo do tecido, condio ou estgio de desenvolvimento. Este processo
permite que diferentes funes sejam desempenhadas por cada gene, resultando na
amplificao do nmero de protenas distintas codificadas pelo genoma.

CEDERJ 157
Comentrio: este exerccio far com que voc revise as informaes referentes aos
mecanismos de emenda alternativa de xons e o seu papel na gerao de protenas
distintas a partir de um mesmo gene. Em seguida, voc deve associar tais informaes
com a complexidade funcional dos organismos.

4. Dados fornecidos pela anlise do genoma humano, bem como dos genomas de
plantas, tm revelado que grande parte do DNA repetitivo de eucariotos composta
por elementos de transposio ou seqncias remanescentes destes. Na espcie
humana, por exemplo, 50% do genoma composto por tais seqncias.

Comentrio: para responder a este exerccio, voc dever revisar os conceitos relativos
a elementos de transposio, bem como a participao destes na composio dos
genomas de eucariotos.

5. A anlise do genoma humano revelou que 75% do nosso genoma composto


por regies que no contm genes, 24% do genoma representado por ntrons e
apenas 1,1% do genoma composto por xons. Portanto, apenas 1,1 % do genoma
de humanos codifica protenas, enquanto os demais 98,9% so compostos por ntrons
e regies no-codificadoras.

Comentrio: este exerccio far com que voc fixe as informaes relativas s
propores entre regies codificadoras e no-codificadoras do genoma humano.

6. A comparao das seqncias de DNA dos genomas de indivduos da espcie humana


revelou nveis de diferenas inferiores a 0,1% dos nucleotdeos. Nveis similares foram
obtidos quando os indivduos analisados pertenciam a uma mesma raa ou quando
eram de raas diferentes. Assim, ficou evidenciado que o conceito de raa no se
aplica espcie humana, pois indivduos da mesma raa so to parecidos entre si (99,9%
de identidade de seqncia de nucleotdeos) quanto indivduos de raas distintas.

Comentrio: para desenvolver este exerccio, voc dever rever as informaes relativas
similaridade genmica entre indivduos de uma mesma espcie.

7. Aps a obteno da seqncia de nucleotdeos de um genoma e a localizao


das regies codificadoras, um importante passo a caracterizao da regulao e
da funo de cada gene. A determinao de tais informaes ser essencial para o
estudo da expresso coordenada destes genes, bem como a interao entre seus
produtos e o ambiente.

Comentrio: este exerccio far voc revisar a importncia de se conhecer as seqncias


de nucleotdeos dos genomas e a funo dos genes neles presentes.

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