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Universidade do Sul de Santa Catarina Data:20/11/2017

Determinao de coliforme total e fecal em gua


Yuri Barreiros

Palavras-Chave: gua. Coliforme total. Coliforme fecal. Escherichia coli.

Introduo A gua potvel deve ser isenta de


microrganismos patognicos e de bactrias que
indicam contaminao fecal.
A gua um elemento indispensvel vida, faz- Conforme a portaria n 2914/ 2011 do Ministrio
se necessrio a adoo de medidas que garantam a do Sade, a gua estar apta ao consumo humano
qualidade desta, a fim de que seja prpria para o somente se estiver ausente de coliforme total e fecal
consumo humano. a cada 100 mL de gua.
Devido a grande exigncia de rgos ambientais Visando ento manter a qualidade da gua para
legislativos, as grandes indstrias e estaes de o consumo humano, neste trabalho foi determinado
tratamento tm como um dos principais parmetros a quantidade de coliformes totais e fecais presentes
de potabilidade da gua a determinao de numa amostra de gua coletada de vasos sanitrios
coliformes total e fecal. da UNISUL.
O grupo coliforme inclui espcies de bactrias A fim de realizar a quantificao de coliformes
que podem ser encontradas no trato intestinal de totais e fecais nas amostras coletadas, foi utilizada a
humanos e animais de sangue quente, assim como metodologia dos tubos mltiplos com caldo Fluoro
no solo, que podem ser diferenciadas em coliformes Cult LMX descrito primeiro por Manafi e Kneifel
totais e fecais, tambm chamados de (1989) e modificado por Ossmer (1993).
termotolerantes. As bactrias do grupo coliformes O caldo fluorocult modificado contm tampo de
so formadas por bactrias que incluem os gneros: fostato que garantem uma elevada taxa de
Klebsiella, Escherichia, Enterobacter e Citrobacter, crescimento do coliformes totais e alm disso lauril
porm o grupo mais heterogneo e incluem uma sulfato para inibir a flora gram-positiva
ampla variedade de gneros, tais como Serratia e acompanhante. Devido a adio do substrato
Hafnia (SCURACCHIO, 2010). cromognico 5-bromo-4-Cloro-3-indolyl - D-
O ndice de coliformes totais utilizado para galactopyranoside, que clivada por coliformes e o
avaliar as condies higinicas, que considera altas substrato fluorognico 4-methylumbelliferyl--D-
contagens indicam contaminao ps-sanitizao glucuronido, que altamente especfico para a
ou ps-processo, tratamentos trmicos ineficientes Escherichia coli, a deteco simultnea de
ou multiplicao durante o processamento e coliformes totais e fecais possvel. A mudana da
estocagem. A taxa de coliformes fecais cor do caldo de amarelo para azul-esverdeado
empregada como indicador de contaminao fecal e indica a presena de coliformes totais, e, alm
avalia as condies higinico-sanitrias deficientes, disso, se detectado uma fluorescncia azul sob luz
visto presumir-se que a populao deste grupo UV indica a presena de coliformes fecais.
constituda de uma alta proporo de Escherichia
coli (OLIVEIRA et al., 2013).
As bactrias do grupo coliformes apresentam
diversas caractersticas que explicam o extensivo
emprego como indicadores microbiolgicos de
qualidade de gua. A primeira refere-se elevada
quantidade eliminada diariamente por um indivduo
(de 1/3 a 1/5 do peso das fezes), culminando em
concentraes nos esgotos domsticos na ordem
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de 10 a 10 organismos/mL. Assim, eleva-se a
probabilidade da deteco dos coliformes nas
amostras de gua bruta e a possibilidade da
presena de patognicos associados a eles
(LIBNIO, 2008).
As legislaes impem regras e diversas
especificaes no que diz respeito a esse quesito, e
que se no for tratado corretamente, podem causar
diversos problemas relacionados sade como
clera e diarreia por exemplo.
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Objetivos proveta, descartando a gua restante. Retirou-se


dessa amostra diluda 5 mL e adicionou-se 1 mL em
cada tudo de ensaio da terceira fileira.
Determinar a quantidade de coliforme total e Repetiu-se o mesmo procedimento retirando 10
fecal na gua utilizando a metodologia dos mL da amostra diluda anterior e completado para
tubos mltiplos; 100 mL, adicionando 1 mL desta diluio em cada
tubo de ensaio da quarta fileira.
Verificar o resultado com o padro de Desse modo tivemos vrios volumes inoculados
potabilidade exigidos por lei. sendo distribudos cinco tubos de ensaio de 1 mL,
cinco de 0,1 mL, cinco de 0,01 mL e cinco de 0,001
mL.
Materiais e Reagentes Aps as diluies os tubos de ensaio foram
colocados na estufa bacteriolgica por 48 horas a
Nas Tabelas 1 e 2 esto apresentados os 35 37C.
materiais e reagentes utilizados na determinao de
coliformes totais e fecais. Resultados e Discusso

Tabela 1: Materiais utilizados na determinao de Os resultados foram interpretados observando a


coliformes colorao do caldo no tubo de ensaio. A cor azul-
Material Quantidade esverdeado indicaria a presena de coliformes totais
Tubos de ensaio 20 e se o tubo de ensaio apresentasse colorao
Grade para o tubo 1 fluorescente azulado quando submetido luz
Pipeta 5 mL 1 ultravioleta, indicaria a presena de coliformes
Pipeta 10 mL 1 fecais.
Proveta 100 mL 3 Atravs do mtodo simplificado de aproximao,
Bico de bunsen 1 denominado nmero mais provvel (NMP),
Autoclave 1 tambm conhecido como tubos mltiplos foi feita a
Fonte: Autor (2017). quantificao de coliformes totais e fecais, cujo
resultado expresso em NMP/100 mL. A leitura do
Tabela 2: Reagentes utilizados na determinao de mtodo consistiu em anotar a quantidade de tubos
coliformes de ensaio turvos azul-esverdeado e a quantidade de
Reagente Quantidade tubos fluorescentes azulados. A partir das
Caldo fluorocult 200 mL anotaes, os valores so comparados com a
gua deionizada 1L tabela do NMP correspondente a tcnica utilizada.
Amostra 20 mL A Tabela 3 apresenta as anotaes dos
Fonte: Autor (2017). resultados de coliformes totais e fecais. O sinal
positivo (+) indica que a colorao do lquido no
tubo de ensaio observada foi azul-esverdeado, no
Metodologia caso de coliformes totais, portanto h coliformes,
enquanto o sinal de positivo (+) dos coliformes
fecais indica que a amostra analisada apresentou
Primeiramente, organizou-se 20 tubos de ensaio fluorescncia quando submetido a radiao UV, o
no suporte em quatro filas de cinco tubos. Em sinal negativo (-) indicou que no houve nenhuma
seguida, adicionou-se 10 mL do caldo fluorocult mudana de cor no sendo possvel detectar a
(meio de cultura) em cada tubo. presena de coliformes fecais.
Aps preparar os tubos, fez-se a sua
esterilizao, como tambm de 1 litro de gua Tabela 3: Boletim dos resultados
deionizada e pipetas.
Diluio da Coliformes Coliformes
Ao terminar a esterilizao foi adicionado 1 mL
amostra totais 48 h fecais 48 h
da amostra a ser analisada em cada um dos cinco
+ +
tubos da primeira fileira, sempre flambando o frasco
+ +
do tubo antes e depois da inoculao.
1 mL + +
Em seguida, comeou o processo de diluio da
amostra, onde foi diludo 10 mL da amostra para + +
100 mL em uma proveta, descartando o restante da + -
amostra. Com o auxlio de uma pipeta foi adicionado
1 mL da amostra diluda em cada um dos cinco + +
tubos de ensaio da segunda fileira. + +
0,1 mL
Pipetou-se 10 ml da amostra diluda + -
anteriormente e completou-se para 100 mL em uma + -

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+ - Conforme observado nos resultados, h a


presena de coliformes totais e fecais na amostra
+ + analisado, e, segundo a legislao vigente que trata
+ - dos padres de potabilidade, a amostra analisada
0,01 mL + - est fora dos padres pois a gua para consumo
+ - humano deve ser ausente de coliformes totais e
+ - fecais.
Alm disso a tcnica mostrou-se eficiente na
+ - deteco de coliformes, apresentando vantagens
como, rapidez na obteno dos resultados e
+ -
praticidade na execuo.
0,001 mL + -
Desta forma conclumos que este parmetro
+ -
indispensvel para uma gua com qualidade, pois
+ -
gua com presea de coliformes podem transmitir
Fonte: Autor (2017). doenas pelo uso ou ingesto da gua, tais como
febre tifide, disenteria bacilar e clera.
Para calcular a quantidade de coliformes totais
selecionou-se a 2, 3 e 4 diluio que apresentou
combinao de 5-5-5. O NMP para esta combinao
Referncia Bibliogrfica
2400, conforme a tabela do nmero mais
provvel, ento multiplicou-se esse valor por 100 ____________________
pois foi utilizado os tubos de ensaio de 0,1 a 0,001 BETTEGA, J. M. P. R.; MACHADO, M. R.; PRESIBELLA, M.;
mL. BANISKI, G.; BARBOSA, C. A. Mtodo analticos no controle
microbiolgico da gua para consumo humano. Cinc.
agrotec., Lavras, v. 30, n. 5, p. 950-954, set./out., 2006.
Coliformes totais = 2400x100
Coliformes totais = 240000 NMP/100mL BRASIL. Ministrio da Sade. Portaria n 2914, de 12 de
dezembro de 2011. Dispe sobre os procedimentos de
controle e de vigilncia da qualidade da gua para consumo
O clculo para o coliformes fecais foi feito humano e seu padro de potabilidade.
pegando a 1, 2 e 3 diluio, apresentando uma
combinao de 4-2-1 onde o NPM para a LIBNIO, M. Fundamentos de qualidade e tratamento de
combinao 26, ento multiplicou-se esse valor gua. 2 ed. So Paulo: Editora tomo, 2008.
por 10 pois foi utilizado os tubos de ensaio de 1 a
MANAFI, M.; KNEIFEL, W. Ein kombiniertes chromogen-
0,01 mL.
Fluorogen-Medium zum simultanen Nachweis der
Coliformengruppe und von e. coli in Wasse. Zbl. Hygiene und
Coliformes fecais = 26x100
Umweltmedizin, v. 189, p. 225-234, 1989.
Coliformes fecais = 2600 NMP/100 mL
OLIVEIRA, E. S.; MARQUES, L. J. P.; SANTOS, E. R. S.;
Temos ento que para a amostra de gua GALDINO, R. M. N. Pesquisa de coliformes totais e
analisada a quantidade de coliformes totais em termotolerantes em guas minerais envasadas,
NMP/100 mL 240000 e para coliformes fecais comercializadas na cidade do Recife PE. Artigo publicado
XIII Jornada de Ensino, Pesquisa e Extenso JEPEX. Recife,
2600. 2013.
Segundo a portaria n 2914/2011 do Ministrio
da Sade que trata dos padres de potabilidade da OSSMER, R. Simultaneous detection of total coliforms and E.
gua para consumo humano, a gua em anlise coli fluorocult LMX broth. Food Microbioly, n 93, p. 202, 1993.
est fora dos padres, pois de acordo com a RATTI, B. A.; BRUSTOLIN, C. F.; SIQUEIRA, T. A.; TORQUATO,
portaria a gua para o consumo humano deve ser A. S. Pesquisa de coliformes totais e fecais em amostras de
ausente de coliformes totais e fecais. Caso haja gua coletadas no bairro zona sete, na cidade de Maring
consumo, pode haver srios problemas na sade. PR. Artigo publicado no VII Encontro Internacional de Produo
Cientfica EPCC. Paran, 2011.

SCURACCHIO, P. A. Qualidade da gua utilizada para


Concluses consumo em escolas no municpio de So Carlos SP.
Dissertao de Mestrado. Universidade Estadual Paulista Jlio
de Mesquita Filho. Araquara, 2010.
Este experimento bacteriolgico teve por
finalidade verificar a qualidade sanitria da gua.
Um dos requisitos essenciais da gua destinada
ao consumo humano a ausncia de bactrias
altamente prejudiciais ao organismo. O grupo
coliforme pesquisado na gua de abastecimento
pblico pelo fato de ser um parasita normal do
intestino, estando presente nos esgotos e em guas
poludas.

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