Mtodos de estudios con otolitos:

principios y aplicaciones

Mtodos de estudos com otlitos:

princpios e aplicaes

Editores

Alejandra Vanina Volpedo

Andr Martins Vaz-dos-Santos

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Alejandra Vanina Volpedo ; Andr Martins Vaz-dos-Santos .
Mtodos de estudios con otolitos: principios y aplicaciones/ Mtodos de estudos com otlitos: princpios e
aplicaes
1a ed. edicin bilingue.
Ciudad Autnoma de Buenos Aires , 2015.

ISBN 978-987-33-8884-2

CAFP-BA-PIESCI

2
 Indice

MTODOS DE ESTUDIOS CON OTOLITOS: PRINCIPIOS Y APLICACIONES................ 13

PREFACIO ................................................................................................................................. 15
AGRADECIMIENTOS .............................................................................................................. 17
AUTORES .................................................................................................................................. 19
1. GENERALIDADES DE LOS OTOLITOS ............................................................................ 21
1.1 Riqueza y diversidad ctica en ambientes acuticos .............................................................. 21
1.2 rganos de los sentidos de los peces .................................................................................... 22
1.3 El odo interno de los peces y la ubicacin de los otolitos .................................................... 23
1.4 Aplicaciones de los otolitos................................................................................................... 25
2. MORFOLOGA DE OTOLITOS ........................................................................................... 29
2.1 Introduccin .......................................................................................................................... 30
2.2 La forma de los otolitos: Cmo y qu analizar? .................................................................. 33
2.3 Obtencion de las muestras de otolitos ................................................................................... 34
2.4 Anlisis morfolgico de los otolitos...................................................................................... 35
2.5 Anlisis estadstico de los datos morfolgicos ...................................................................... 36
2.6 El otolito sagitta .................................................................................................................... 41
2.7 El otolito asteriscus ............................................................................................................... 41
2.8 El otolito lapillus ................................................................................................................... 42
2.9 Bases del anlisis morfomtrico de los otolitos .................................................................... 43
2.10 Anlisis manual de otolitos ................................................................................................. 43
2.10.1 rea y Permetro..............................................................................................................43
2.10.2 Retangularidad.................................................................................................................45
2.10.3 Circularidad......................................................................................................................45
2.10.4 Factor de forma................................................................................................................45
2.10.5 Elipcidad..........................................................................................................................45
2.10.6 Otros ndices de forma.....................................................................................................46
2.11. Ecomorfologa .................................................................................................................... 46
Agradecimientos ......................................................................................................................... 47
ANEXO 1. Clasificacin de los otolitos sagittae ........................................................................ 48
Forma del otolito ......................................................................................................................... 48
Regin anterior del otolito........................................................................................................... 49
Regin posterior del otolito ......................................................................................................... 49
Borde del otolito .......................................................................................................................... 50
Posicin del sulcus acusticus ...................................................................................................... 51
Orientacin del sulcus acusticus ................................................................................................. 51

3
Forma del sulcus acusticus.......................................................................................................... 52
Abertura del sulcus acusticus ...................................................................................................... 53
Forma del colliculum................................................................................................................... 54
Ostium ......................................................................................................................................... 54
Cauda .......................................................................................................................................... 55
Rostrum ....................................................................................................................................... 56
Antirostrum ................................................................................................................................. 56
Perfil del otolito........................................................................................................................... 56
Orientacin del rostrum y del antirostrum .................................................................................. 57
3. MORFOMETRA DE OTOLITOS ........................................................................................ 59
3.1. Introduccin ......................................................................................................................... 60
3.2 Biometras ............................................................................................................................. 60
3.2.1 Biometras lineales.............................................................................................................60
3.2.2 rea, permetro y peso.......................................................................................................64
3.2.3 Relacin entre magnitudes.................................................................................................65
3.2.4 ndices biomtricos y de forma..........................................................................................69
3.3 Anlisis de la forma............................................................................................................... 70
3.3.1 Forma y tamao..................................................................................................................70
3.3.2 Obtencin del contorno......................................................................................................71
3.3.2.1 Calidad de la imagen ....................................................................................................... 71
3.3.2.2 Extraccin del contorno .................................................................................................. 73
3.3.2.3 Coordenadas polares ....................................................................................................... 74
3.3.2.4 Coordenadas cartesianas ................................................................................................. 75
3.3.2.5 Reflexin parcial ............................................................................................................. 75
3.3.3 Extraccin de caracteres o anlisis del contorno................................................................76
3.3.3.1 Descriptores de Fourier ................................................................................................... 77
3.3.3.2 Wavelets .......................................................................................................................... 79
3.3.4 Anlisis de puntos homlogos............................................................................................81
3.5 Eliminacin del efecto talla en el anlisis de contorno ......................................................... 83
3.6 Aplicaciones de la morfometra de otolitos........................................................................... 84
3.6.1 Variaciones inter-especficas: identificacin de especies y sus aplicaciones.....................85
3.6.2 Variaciones intra-especficas: la identificacin de stocks pesqueros.................................87
3.6.3 Ecomorfologia y morfologa funcional..............................................................................87
3.6.4 Ecologa de comunidades y biodiversidad.........................................................................89
3.6.5 Momento actual y perspectivas de futuro: el anlisis en 3 dimensiones ya est aqu........90
Agradecimientos ......................................................................................................................... 91

4
4. OTOLITOS EN ESTUDIOS DE EDAD Y CRECIMIENTO EN PECES ............................. 93
4.1 Introduccin .......................................................................................................................... 93
4.2 El modelo de crecimiento ...................................................................................................... 96
4.3 Esclerocronologa .................................................................................................................. 98
4.4 Preparacin de los otolitos y obtencin de datos para el anlisis de crecimiento ................. 99
4.4.1 Muestras de otolitos...........................................................................................................99
4.4.2 Representatividad de los otolitos para el estudio del crecimiento....................................100
4.4.3 Preparacin de los otolitos...............................................................................................101
4.4.4 Lectura de anillos en los otolitos......................................................................................103
4.5 Anlisis del crecimiento ...................................................................................................... 106
4.5.1 Comparacin entre las lecturas de los anillos..................................................................106
4.5.1.1 Consistencia entre el nmero de anillos ........................................................................ 106
4.5.1.2 Anlisis de coincidencia del tipo de borde .................................................................... 108
4.5.1.3 Anlisis de los radios de los anillos............................................................................... 109
4.5.2 Representatividad de las lecturas de otolitos....................................................................110
4.5.3 Validacin........................................................................................................................112
4.5.3.1 Incremento marginal ..................................................................................................... 112
4.5.3.2 Porcentaje del tipo de borde .......................................................................................... 114
4.5.3.3 Otras tcnicas de validacin .......................................................................................... 114
4.6 Estimacin de los parmetros de crecimiento y la estructura etaria .................................... 116
4.7 Retroclculo ........................................................................................................................ 119
4.8 Conclusiones ....................................................................................................................... 120
Agradecimientos ....................................................................................................................... 121
5. MICROQUMICA DEL OTOLITO: CONCEPTOS, MTODOS Y APLICACIONES ..... 123
5.1 Introduccin ........................................................................................................................ 123
5.2Qu factores influencian la composicin qumica de los otolitos?..................................... 124
5.3 Mtodos para determinar la composicin qumica de los otolitos ...................................... 126
5.3.1 Espectrometra de absorcin atmica (AAS)...................................................................127
5.3.2 Espectrometra de emisin atmica por plasma acoplado inductivamente (ICP-OES)...128
5.3.3 Anlisis de activacin neutrnica (NAA)........................................................................129
5.3.4 Microsonda electrnica (EPMA).....................................................................................130
5.3.5 Emisin de rayos X inducida por micro partculas (Micro-PIXE)...................................131
5.3.6 Espectrometra de masas por plasma acoplado inductivamente (ICP-MS)......................131
5.3.7 Espectrometra de masas por plasma acoplado inductivamente con ablacin laser (LA-
ICP-MS)....................................................................................................................................132

5
5.4 Cmo analizar los resultados estadsticamente para la discriminacin de reas de ca,
desove y stocks pesqueros, utilizando la microqumica de los otolitos? ................................... 133
5.5 Anlisis de los datos de la composicin qumica de los otolitos......................................... 133
5.5.1 Tratamientos de datos con distribucin normal y homocedastica: estadstica paramtrica.
133
5.5.2 Tratamientos de datos que no ajustan a la distribucin normal y homocedastica: estadstica
no paramtrica...........................................................................................................................135
5.6 Aplicacin de la composicin qumica de los otolitos en el anlisis de patrones de migracin
del bagre Genidens barbus usando LA-ICP-MS ....................................................................... 136
5.7 Conclusiones ....................................................................................................................... 137
6. LOS OTOLITOS COMO INDICADORES DEL CICLO DE VIDA, DE PATRONES DE
POBLACIONALES, Y DEL USO Y CARACTERSTICAS AMBIENTALES DE LOS
ECOSISTEMAS ....................................................................................................................... 139
6.1 Introduccin ........................................................................................................................ 139
6.2 Qu determina la composicin qumica de los otolitos? ................................................... 140
6.2.1 Ambiente..........................................................................................................................140
6.2.2 Biodisponibilidad, absorcin y transporte de iones..........................................................141
6.2.3 Procesos en la formacin de los cristales.........................................................................141
6.3 Aplicaciones en estudios bioecolgicos .............................................................................. 142
6.3.1 Migracin y uso del hbitat..............................................................................................142
6.3.2 Identificacin de stocks pesqueros...................................................................................152
6.4 Otolitos como indicadores de caractersticas ambientales .................................................. 159
6.4.1 Reconstruccin de salinidades.........................................................................................159
6.4.1.1 Movimientos ................................................................................................................. 160
6.4.1.2 Ontogenia ...................................................................................................................... 161
6.4.1.3 Interacciones entre la temperatura y la salinidad .......................................................... 161
6.4.2 Reconstruccin de temperaturas.......................................................................................161
6.4.3 Evaluacin de la hipoxia del agua....................................................................................164
6.5 Conclusiones ....................................................................................................................... 166
Agradecimientos ....................................................................................................................... 166
7. MTODOS CUANTITATIVOS APLICADOS AL ESTUDIO DE OTOLITOS ................ 167
7.1 Introduccin ........................................................................................................................ 167
7.2 Programas de computacin ................................................................................................. 169
7.3 Algunos mtodos cuantitativos ........................................................................................... 169
7.3.1 Obteniendo el n muestral de otolitos............................................................................169
7.3.2 Identificacin de datos discrepantes.................................................................................172

6
7.3.3 Pruebas de frecuencias.....................................................................................................174
7.3.4 Comparacin de coeficientes con un valor referencial.....................................................176
7.3.5 Ajuste de modelos con el mtodo iterativo no lineal de mnimos cuadrados...................177
7.3.6 Anlisis de residuos..........................................................................................................178
7.3.7 Comparacin de modelos: anlisis de covarianza............................................................180
7.3.8 Utilizando tcnicas paramtricas versus no paramtricas................................................182
7.4 Conclusiones ....................................................................................................................... 185
Agradecimientos ....................................................................................................................... 185
8. BASES QUMICAS PARA EL ESTUDIO DE LOS CUERPOS DE AGUA ..................... 187
8.1 Propiedades del agua y de los cuerpos de agua ................................................................... 187
El agua es la fuente y el sustento de la vida, contribuye a regular el clima del mundo y con su
fuerza formidable modela la Tierra. El agua posee propiedades nicas que la hacen esencial para
la vida (Fernndez Cirelli 2000): .............................................................................................. 187
8.2 Calidad, cantidad y qumica ................................................................................................ 188
8.3 Disolucin de gases en agua................................................................................................ 189
8.4 Equilibrio entre dos fases .................................................................................................... 191
8.5 Composicin de las aguas naturales: iones mayoritarios, minoritarios y trazas ................. 193
8.6 Procesos geoqumicos: el patrn bsico de Gibbs............................................................... 194
8.7 Proceso cido-base en aguas naturales ................................................................................ 196
8.7.1 Equilibrios cido-base: el sistema dixido de carbono-carbonato...................................196
8.7.2 Equilibrio entre el carbonato de calcio y el agua.............................................................197
8.7.3 Equilibrio entre el carbonato de calcio y el gas carbnico atmosfrico con el agua........200
8.7.4 Alcalinidad, basicidad, acidez y dureza...........................................................................201
8.8 Muestreo, anlisis, interpretacin y confiabilidad de los datos qumicos ........................... 203
8.8.1 Colecta de muestras..........................................................................................................203
8.8.2 Calidad de las mediciones qumicas.................................................................................204
8.8.3 Balance inico..................................................................................................................205
8.8.4 ndices de saturacin........................................................................................................205
8.9 Conclusiones ....................................................................................................................... 208
9. ESTUDIO DEL SITIO DE PUESTA, DISPERSIN DE LAS LARVAS Y EL
RECLUTAMIENTO DE CONGRIO EUROPEO COSTERO (Conger conger), UTILIZANDO
EL ANLISIS ESTRUCTURAL Y QUMICA DE LOS OTOLITOS: UN ESTUDIO DE
CASO. ....................................................................................................................................... 209
9.1 Estado de la tcnica acerca de la especie ............................................................................ 209
9.2 Ciclo de vida del congrio europeo resultante del estudio microestructural y de la
microqumica de otolitos de larvas............................................................................................ 212

7
MTODOS DE ESTUDOS COM OTLITOS: PRINCPIOS E APLICAES ................... 225
PREFACIO ............................................................................................................................... 227
1. PANORAMA SOBRE OS OTLITOS ............................................................................... 229
1.1 Riqueza e diversidade ictica em ambientes aquticos ........................................................ 229
1.2 rgos dos sentidos dos peixes ........................................................................................... 230
1.3 O ouvido interno dos peixes e a posio dos otlitos.......................................................... 231
1.4 Usos e aplicaes dos otlitos ............................................................................................. 233
2. MORFOLOGIA DE OTLITOS ......................................................................................... 237
2.1 Introduo ........................................................................................................................... 238
2.2 A forma dos otlitos: como e o que analisar ....................................................................... 241
2.3 Obteno de amostras de otlitos ........................................................................................ 242
2.4 Anlise morfolgica dos otlitos......................................................................................... 244
2.5 Anlise estatstica de dados morfolgicos........................................................................... 245
2.6 O otlito sagitta................................................................................................................... 250
2.7 O otlito asteriscus ............................................................................................................. 250
2.8 O otlito lapillus ................................................................................................................. 251
2.9 Bases da anlise morfomtrica de otlitos .......................................................................... 252
2.10 Anlise manual de otlitos ................................................................................................ 252
2.10.1 rea e Permetro............................................................................................................252
2.10.2 Retangularidade..............................................................................................................254
2.10.3 Circularidade..................................................................................................................254
2.10.4 Fator de forma................................................................................................................254
2.10.5 Elipsidade.......................................................................................................................254
2.10.6 Outros ndices de forma.................................................................................................255
2.11. Ecomorfologia .................................................................................................................. 255
Agradecimentos......................................................................................................................... 256
ANEXO 1. Classificao dos otlitos sagittae ......................................................................... 257
Formato do otlito ..................................................................................................................... 257
Regio anterior do otlito .......................................................................................................... 258
Regio posterior do otlito ........................................................................................................ 258
Borda do otlito......................................................................................................................... 259
Posio do sulcus acusticus....................................................................................................... 260
Orientao do sulcus acusticus ................................................................................................. 260
Formato do sulcus acusticus ..................................................................................................... 261
Abertura do sulcus acusticus ..................................................................................................... 262
Formato do colliculum .............................................................................................................. 263

8
Ostium ....................................................................................................................................... 263
Cauda ........................................................................................................................................ 264
Rostrum ..................................................................................................................................... 265
Antirostrum ............................................................................................................................... 265
Perfil do otlito ......................................................................................................................... 265
Orientao do rostrum e do antirostrum ................................................................................... 266
3. MORFOMETRIA DE OTLITOS ...................................................................................... 269
3.1 Introduo ........................................................................................................................... 269
3.2 Medidas ............................................................................................................................... 270
3.2.1 Medidas lineares...............................................................................................................270
3.2.2 rea, permetro e peso.....................................................................................................274
3.2.3 Relaes entre medidas....................................................................................................275
3.2.4 ndices biomtricos e de forma........................................................................................279
3.3 Anlise da forma ................................................................................................................. 280
3.3.1 Forma e tamanho..............................................................................................................280
3.3.2 Obteno do contorno......................................................................................................281
3.3.2.1 Qualidade da imagem .................................................................................................... 281
3.3.2.2 Extrao do contorno .................................................................................................... 283
3.3.2.3 Coordenadas polares ..................................................................................................... 284
3.3.2.4 Coordenadas cartesianas ............................................................................................... 285
3.3.2.5 Reflexo parcial............................................................................................................. 285
3.3.3 Extrao de caracteres ou anlise do contorno.................................................................286
3.3.3.1 Descritores de Fourier ................................................................................................... 286
3.3.3.2 Ondaletas (Wavelets) ..................................................................................................... 289
3.3.4 Anlise de marcos anatmicos.........................................................................................291
3.5 Eliminao do efeito do tamnho nas anlises do contorno.................................................. 294
3.6 Aplicaes da morfometria de otlitos................................................................................ 295
3.6.1 Variaes interespecficas: identificao de espcies e suas aplicaes..........................295
3.6.2 Variaes intraespecficas: a identificao de estoques pesqueiros.................................297
3.6.3 Ecomorfologia e morfologia funcional............................................................................297
3.6.4 Ecologia de comunidades e biodiversidade......................................................................299
3.6.5 Momento atual e perspectivas futuras: a anlise em 3 dimenses j est aqui!...............300
Agradecimentos......................................................................................................................... 301
4. OTLITOS EM ESTUDOS DE IDADE E CRESCIMENTO EM PEIXES........................ 303
4.1 Introduo ........................................................................................................................... 303
4.2 O modelo de crescimento .................................................................................................... 306

9
4.3 Esclerocronologia ................................................................................................................ 307
4.4 Preparao de otlitos e obteno de dados para anlise do crescimento ........................... 309
4.4.1 Amostras de otlitos.........................................................................................................309
4.4.2 Representatividade dos otlitos para o estudo do crescimento........................................310
4.4.3 Preparao de otlitos......................................................................................................311
4.4.4 Leitura de anis em otlitos.............................................................................................313
4.5 Anlise do crescimento ....................................................................................................... 316
4.5.1 Comparao entre leituras de anis..................................................................................316
4.5.1.1 Consistncia entre o nmero de anis ........................................................................... 316
4.5.1.2 Anlise de coincidncia do tipo de borda ...................................................................... 318
4.5.1.3 Anlise dos raios dos anis............................................................................................ 319
4.5.2 Representatividade das leituras de otlitos......................................................................320
4.5.3 Validao..........................................................................................................................322
4.5.3.1 Incremento marginal ..................................................................................................... 322
4.5.3.2 Porcentagem do tipo de borda ....................................................................................... 324
4.5.3.3 Outras tcnicas de validao ......................................................................................... 324
4.6 Estimativa dos parmetros de crescimento e estrutura etria .............................................. 326
4.7 Retroclculo ........................................................................................................................ 329
4.8 Concluses .......................................................................................................................... 329
Agradecimentos......................................................................................................................... 331
5. MICROQUMICA DE OTLITOS: CONCEITOS, MTODOS E APLICAES........... 333
5.1 Introduo ........................................................................................................................... 333
5.2 Quais fatores influenciam a composio qumica dos otlitos? .......................................... 334
5.3 Mtodos para determinar a composio qumica de otlitos .............................................. 336
5.3.1 Espectrometria de absoro atmica (AAS)....................................................................337
5.3.2 Espectrometria de emisso atmica por plasma acoplado indutivamente (ICP-OES).....338
5.3.3 Anlise de ativao neutrnica (NAA)............................................................................339
5.3.4 Microssonda eletrnica (EPMA)......................................................................................340
5.3.5 Emisso de raios X induzida por micro partculas (Micro-PIXE)...................................341
5.3.6 Espectrometria de massas por plasma acoplado indutivamente (ICP-MS)......................341
5.3.7 Espectrometria de massas por plasma acoplado indutivamente com ablao a laser (LA-
ICPMS).....................................................................................................................................342
5.4 Como analisar os resultados estatisiticamente para a discriminao de reas de criao,
desova e estoques pesqueiros utilizando a microqumica de otlitos? ...................................... 343
5.5 Anlises de dados de composio qumica de otlitos........................................................ 343

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5.5.1 Tratamento de dados com distribuio normal e homocedasticidade: estatstica
paramtrica................................................................................................................................343
5.5.2 Tratamentos de dados que no se ajustam distribuio normal e a homocedasticidade:
estatstica no paramtrica........................................................................................................345
5.6 Aplicao da composio qumica dos otlitos na anlise dos padres de migrao do bagre
Genidens barbus a travs de LA-ICP-MS................................................................................. 346
5.7 Concluses .......................................................................................................................... 347
6. OTLITOS COMO INDICADORES DO CICLO DE VIDA, DE PADRES
POPULACIONAIS, DE CARACTERSTICAS AMBIENTAIS E DE USO DOS
ECOSSISTEMAS ..................................................................................................................... 349
6.1 Introduo ........................................................................................................................... 349
6.2 O que determina a composio qumica dos otlitos? ........................................................ 350
6.2.1 Meio ambiente..................................................................................................................350
6.2.2 Biodisponibilidade, absoro e transporte de ons...........................................................351
6.2.3 Processos na formao dos cristais..................................................................................351
6.3 Aplicaes em estudos bioecolgicos ................................................................................. 352
6.3.1 Migrao e uso de hbitat.................................................................................................352
6.3.2 Identificao de estoques pesqueiros...............................................................................362
6.4 Otlitos como indciadores de caractersticas ambientais .................................................... 369
6.4.1 Reconstruo de salinidades.............................................................................................369
6.4.1.1 Movimentos................................................................................................................... 370
6.4.1.2 Ontogenia ...................................................................................................................... 371
6.4.1.3 Interaes entre temperatura e salinidade ..................................................................... 371
6.4.2 Reconstruo de temperaturas..........................................................................................371
6.4.3 Avaliao da hipxia da gua...........................................................................................374
6.5 Concluses .......................................................................................................................... 376
Agradecimentos......................................................................................................................... 376
7. MTODOS QUANTITATIVOS APLICADOS AO ESTUDO DE OTLITOS................. 377
7.1 Introduo ........................................................................................................................... 377
7.2 Programas de computador ................................................................................................... 379
7.3 Alguns mtodos quantitativos ............................................................................................. 379
7.3.1 Obtendo o n amostral de otlitos..................................................................................379
7.3.2 Identificando dados discrepantes.....................................................................................382
7.3.3 Testes de frequncias.......................................................................................................384
7.3.4 Comparao de coeficientes com um valor referencial....................................................386
7.3.5 Ajustando modelos com o mtodo no linear iterativo de mnimos quadrados...............387

11
7.3.6 Anlise de resduos...........................................................................................................388
7.3.7 Comparando modelos: anlise de covarincia.................................................................390
7.3.8 Utilizando tcnicas paramtricas versus no paramtricas..............................................392
7.4 Concluses .......................................................................................................................... 395
Agradecimentos......................................................................................................................... 395
8. BASES QUMICAS PARA O ESTUDO DE CORPOS DGUA ...................................... 397
8.1 Propiedades da gua e dos corpos dgua ........................................................................... 397
8.2 Qualidade, quantidade e qumica ........................................................................................ 398
8.3 Dissoluo de gases na gua ............................................................................................... 399
8.4 Equilibrio entre duas fases .................................................................................................. 400
8.5 Composio das guas naturais: ons majoritrios, minoritrios e elementos trao ........... 402
8.6 Processos geoqumicps: o padro de Gibbs ........................................................................ 404
8.7 Equilbrio cido-base emm guas naturais .......................................................................... 405
8.7.1 Equilbrios cido-base: o sistema dixido de carbono-carbonato....................................406
8.7.2 Equilbrio entre o carbonato de clcio e a gua................................................................406
8.7.3 Equilbrio entre o carbonato de clcio e o dixido de carbono atmosfrico com a gua 409
8.7.4 Alcalinidade, basicidade, acidez e dureza........................................................................410
8.8 Amostragem, anliss, enterpretao e confiabilidade de dados qumicos........................... 412
8.8.1 Amostragem.....................................................................................................................412
8.8.2 Qualidade das medies qumicas....................................................................................413
8.8.3 Balano inico..................................................................................................................414
8.8.4 ndices de saturao.........................................................................................................414
8.9 Concluses .......................................................................................................................... 418
9. ESTUDO DO LOCAL DE POSTURA, DISPERSO LARVAL E RECRUTAMENTO
COSTEIRO DO CONGRO EUROPEU (Conger conger) COM RECURSO ANLISE
ESTRUTURAL E QUMICA DOS OTLITOS ..................................................................... 419
9.1 Estado da arte sobre a espcie ............................................................................................. 419
9.2 Ciclo de vida do congro europeu resultante do estudo microestrutural e microquimico de
otlitos de larvas ....................................................................................................................... 422
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ...................................................................................... 435

12
 MTODOS DE ESTUDIOS CON OTOLITOS:

PRINCIPIOS Y APLICACIONES

13


14
 PREFACIO

El sentido de elaborar este libro surgi de la necesidad de brindarles a los alumnos

universitarios de grado y posgrado, interesados en la aplicacin de los otolitos en las ciencias
ambientales e agrarias, una herramienta de consulta til y gil que sea su primera aproximacin
al estudio de estas estructuras.
Este libro es el resultado del esfuerzo de los coordinadores (Dra Alejandra Volpedo por
Argentina y el Dr. Henry Spach por Brasil) y de los profesores participantes del Proyecto
CAFP-BA 043/13 rea de Produccin Animal: Pesqueras, del Programa Centros Asociados
para el Fortalecimiento de Posgrados Brasil-Argentina (CAFP-BA); quienes a travs de los
cursos dictados en ambos pases han detectado la necesidad de contar en la regin con una obra
que pudiera reunir los conceptos y metodologas ms importantes en el estudio de los otolitos.
Esta obra bilinge, rene los diferentes aspectos del estudio de los otolitos los cuales estn
estructurados en captulos. Dichos captulos estn desarrollados por destacados especialistas a
nivel regional e internacional.
El Capitulo 1 presenta los aspectos generales de los otolitos en el marco de los estudios
internacionales y de la regin, sealando la importancia de contextualizarlos con relacin a la
riqueza y biologa de los peces.
El Capitulo 2 revisa los aspectos ms importantes relacionados con la morfologa de los tres
pares de otolitos, as como la obtencin de los mismos, el anlisis morfolgico y morfomtrico
asociado y la aplicacin de los ndices ms comunes utilizados. Por otro lado presenta un anexo
detallado de la morfologa de los otolitos que le permitir al lector poder realizar descripciones
de detalladas de los otolitos de diferentes especies, utilizando la nomenclatura adecuada.
El Captulo 3, presenta diferentes aspectos de la morfometra de los otolitos (biometras, anlisis
de la forma y del contorno) y sus aplicaciones, que le permitirn al lector una aproximacin
exhaustiva a esta temtica.
El Capitulo 4 presenta los conceptos fundamentales y las diferentes metodologas analticas para
el estudio de la edad y del crecimiento utilizando otolitos. Este captulo incluye la preparacin
de los datos para el anlisis, los anlisis estadsticos bsicos para ser aplicados, as como la
interpretacin de los resultados, lo que le brinda al lector un marco referencial amplio por donde
comenzar el estudio de la edad y el crecimiento en peces.
El Capitulo 5 est relacionado al estudio de la microqumica del otolito y sus aplicaciones. En
este captulo se presentan los principales factores que influencian la microqumica del otolito,
las ventajas y alcances de las diferentes metodologas analticas y el anlisis e interpretacin de
los resultados de la composicin qumica de los otolitos. Adems se presenta con fines
ilustrativos un ejemplo de la aplicacin de la microqumica en una especie androma.
En el Capitulo 6 se detalla una aplicacin directa del estudio de la microqumica del otolito en el

15
estudio de la historia de vida y desplazamientos de los peces. Adems se presentan diferentes
conceptos relacionados con la microqumica como reflejo del ambiente que frecuenta el pez.
En el Capitulo 7 se analizan los conceptos de estadstica fundamentales para el anlisis e
interpretacin de los datos, as como su desarrollo, los supuestos y recomendaciones para su
aplicacin. Este captulo permite que el lector disponga de la informacin de base para el
anlisis de datos cuantitativos aplicada a otolitos.
El Capitulo 8 presenta las bases conceptuales qumicas necesarias para poder interpretar
resultados asociados tanto a la composicin qumica del otolito como a la qumica del agua. En
el mismo se detalla las propiedades del agua, los equilibrios y los procesos de composicin de
aguas naturales, as como metodologas asociadas a la colecta de muestras de agua y a la
interpretacin de los resultados.
El Capitulo 9, es un estudio de caso donde se analiza el sitio de puesta, la dispersin de larvas y
el reclutamiento del congrio europeo costero (Conger conger), utilizando el anlisis estructural
y qumica de los otolitos. Este captulo muestra en un caso real la aplicacin de manera integral
de los otolitos como instrumento de estudio.
La realizacin de este libro fue posible gracias al apoyo de Programa Centros Asociados para el
Fortalecimiento de Posgrados Brasil-Argentina (CAFP-BA), a la Secretara de Polticas
Universitarias (SPU) del Ministerio de Educacin y a CAPES, as como a la Facultad de
Ciencias Veterinarias de la Universidad de Buenos Aires, al Instituto de Investigaciones en
Produccin Animal (INPA-UBA-CONICET), al Centro de Estudios del Mar y Departamento de
Biodiversidad de la Universidad Federal de Paran (UFPR).

16
 AGRADECIMIENTOS

Al Programa Centros Asociados para el Fortalecimiento de Posgrados Brasil-Argentina

(CAFP-BA), a la Secretara de Polticas Universitarias (SPU) del Ministerio de Educacin de
Argentina y al Programa de Coordenao de aperfeioamento de pessoal de nivel superior
(CAPES) de Brasil, as como a la Facultad de Ciencias Veterinarias (FVET-UBA), a la
Universidad de Buenos Aires (UBA), al Instituto de Investigaciones en Produccin Animal
(INPA-UBA-CONICET), al Centro de Estudios do Mar y al Departamento de Biodiversidade
(Sector Palotina) de la Universidad Federal de Paran (UFPR) por el apoyo para la realizacin
de todas las actividades del proyecto en especial la publicacin de este libro.
A la Asociacin de Universidades del Grupo Montevideo (AUGM), y en particular al Comit
Acadmico Aguas y a la Secretaria General por contribuir al fortalecimiento de los vnculos
entre la Universidad de Buenos Aires y al Universidad Federal de Paran, sobre los cuales pudo
sustentarse el desarrollo del Proyecto CAFP-BA 43/13 y la realizacin de este libro.
Al Coordinador Brasileo del Proyecto Dr. Henry Louis Spach y a la Mg. Barbara Carvalho
quienes brindaron su apoyo en la elaboracin de esta obra, y en especial a todos los autores
(Dra. Carmen Lcia Del Bianco Rossi-Wongtschowski, Dr. Antoni Lombarte, Dr.Victor Tuset,
Dr. Esteban Avigliano, Dr. Cristiano Queiroz de Albuquerque, Dra. Alicia Fernndez Cirelli y
Dr. Alberto Teodorico Correia) quienes aceptaron participar de este desafo y que en todo
momento colaboraron a fin de que este trabajo rena las propiedades necesarias para ser una
obra de consulta necesaria para los estudiantes. Particularmente a C. Alburquerque, E.
Avigliano y Cristiane Gallego Augusto quienes adems colaboraron con la traduccin bilinge
de dos captulos.
A todas las personas que directa o indirectamente ayudaron con la realizacin de esta obra.

17
18
 AUTORES
ALEJANDRA VANINA VOLPEDO
Instituto de Investigaciones en Produccin
Animal INPA, Facultad de Ciencias
Veterinarias, Universidad de Buenos Aires
UBA / Consejo Nacional de
Investigaciones Cientficas y Tcnicas
CONICET
Av. Chorroarn 280
C1427CWO Buenos Aires ARGENTINA
E-mail: avolpedo@fvet.uba.ar
ANDR MARTINS VAZ-DOS-SANTOS
Universidade Federal do Paran UFPR,
Departamento de Biodiversidade,
Laboratrio de Esclerocronologia
LABESC
Rua Pioneiro 2153
85950-000 Palotina, PR BRASIL
E-mail: andrevaz@gmail.com
CARMEN LCIA DEL BIANCO ROSSI-
WONGTSCHOWSKI
Instituto Oceanogrfico da Universidade de
So Paulo IOUSP, Laboratrio de
Ictiofauna e Crescimento LABIC
Praa do Oceanogrfico, 191 Sala 103A
05508-120 So Paulo, SP BRASIL
E-mail: cwongski@usp.br
ANTONI LOMBARTE CARRERA
Instituto de Ciencias del Mar ICM,
Departamento de Recursos Marins
Renovables
Passeig Martim de la Barceloneta, 37-49
B-78
E-08003 Barcelona ESPAA
E-mail: toni@icm.csic.es
VICTOR MANUEL TUSET ANDUJAR
Instituto de Ciencias del Mar ICM,
Departamento de Recursos Marinos
Renovables
Passeig Martim de la Barceloneta, 37-49
B-78
E-08003 Barcelona ESPAA
E-mail: vtuset@icm.csic.es
19
ESTEBAN AVIGLIANO
Instituto de Investigaciones en Produccin
Animal INPA, Facultad de Ciencias
Veterinarias, Universidad de Buenos Aires
UBA / Consejo Nacional de
Investigaciones Cientficas y Tcnicas
CONICET
Av. Chorroarn 280
C1427CWO Buenos Aires ARGENTINA
E-mail: estebanavigliano@yahoo.com.ar
CRISTIANO QUEIROZ DE ALBUQUERQUE
Universidade Federal Rural do Semi-rido
UFERSA, Departamento de Cincias
Animais
BR 110 Km 47
59625-900 Mossor, RN BRASIL
E-mail: doccqa@yahoo.com.br
ALICIA FERNNDEZ CIRELLI
Instituto de Investigaciones en Produccin
Animal INPA, Facultad de Ciencias
Veterinarias, Universidad de Buenos Aires
UBA / Consejo Nacional de
Investigaciones Cientficas y Tcnicas
CONICET
Av. Chorroarn 280
C1427CWO Buenos Aires ARGENTINA
E-mail: afcirelli@fvet.uba.ar
ALBERTO TEODORICO CORREIA
Centro Interdisciplinar de Investigao
Marinha e Ambiental CIIMAR,
Universidade do Porto - UP
Rua dos Bragas 289
4050-123 Porto PORTUGAL
E-mail: atcorreia.ciimar@gmail.com
20
1. GENERALIDADES DE LOS OTOLITOS

Alejandra Vanina Volpedo y Andr Martins Vaz-dos-Santos

Sumario
1.1 Riqueza y diversidad ctica en ambientes acuticos..............................................................21
1.2 rganos de los sentidos de los peces....................................................................................22
1.3 El odo interno de los peces y la ubicacin de los otolitos....................................................23
1.4 Aplicaciones de los otolitos...................................................................................................25

1.1 Riqueza y diversidad ctica en ambientes acuticos

El grupo popularmente conocido como "peces" incluye, aproximadamente 30.000 especies

vivientes, las cuales son un conjunto de vertebrados distribuidos en clases Myxini (peces bruja)
(0,25%), Petromyzontida (Cephalaspidomorphi) (lampreas) (0,14%), Chondrichthyes (tiburones,
rayas y quimeras) (3,47%), Actinopterygii (peces seos) (96,12%) y Sarcopterygii (peces
pulmonados) (0,03%) (Nelson 2006, ITIS 2015). Los aspectos sistemticos del grupo y la riqueza
de especies es un tema en constante cambio, debido a la dinmica de la ciencia en el
descubrimiento de nuevas especies, en la descripcin de otros, la identificacin de especies
crpticas, entre otros elementos. Los catlogos online como FishBase (Froese y Pauly 2015) y el
Catalog of Fishes (Eschmeyer y Fricke 2015) sientan las bases sobre el status quo del estudio
sobre las especies y su sistemtica, respectivamente.
En trminos biolgicos, existen varios libros de texto de los que es posible estudiar las
caractersticas anatmicas, fisiolgicas, morfolgicas y funcionales, conductuales, ecolgicas y
evolutivas de estos grandes grupos de peces (Moyle y Cech 2004, Zavala-Camin 2004, Pough et
al. 2008, Helfman et al. 2009). Los Peces constituyen el grupo que presenta el mayor nmero de
especies de vertebrados y que coloniz ampliamente los ms diversos ambientes acuticos del
planeta. El agua del planeta ocupa una superficie de 510.000 103 Km2, con un volumen de
1.385,984 103 Km3, de los cuales 97,5% est en los ocanos y 2,5% es agua dulce (Tundisi y
Tundisi 2008). La heterogeneidad de estos ambientes acuticos y sus propiedades es
extremadamente variada y, excepto en las aguas subterrneas, glaciares y los casquetes polares,
en todas encontramos peces.
Un enfoque aplicado a la fauna ictcola y la ocupacin de hbitat fue hecho por Lowe-McConnell
(1999) y Moyle y Cech (2004). Lowe-McConnell (1999) examin varios casos alrededor del
mundo en la estructura de comunidades cticas y sus ambientes, estudiando por ejemplo cuerpos
de agua de Zaire, Nger y el lago Chad en frica, el sistema de Amaznico, los arrecifes de coral,

21
los peces de sugerencia, los peces epipelgicos ocenicos, entre otros. Se puede agregar a esta
lista los peces estuarinos, polares y de aguas profundas estudiados por Moyle y Cech (2004). Es
notable comprobar la versatilidad de los peces y sus adaptaciones a ambientes y diferentes modos
de vida. El xito de esta colonizacin de una amplia gama de hbitat por los peces se debe en
parte a su sistema sensorial, especializado en la percepcin de los estmulos en un medio cuyas
caractersticas son muy diferentes a las del aire: el agua es nico en sus propiedades
(Schmiegelow 2004, Zavala-Camin 2004, Tundisi y Tundisi 2008, Fernndez Cirelli cf.
Captulo 8). De esta manera, es fundamental entender que los peces son maquinas sensoriales
extremadamente eficientes, cuyos otolitos son una pequea pieza de este complejo engranaje.

1.2 rganos de los sentidos de los peces

En trminos sensoriales, los peces tienen mecanismos para: fotorecepcin, quimiorecepcin

percepcin electromagntica y mecanorecepcin (Helfman et al. 2009) (Figura 1.1).

Visin
Odo
interno

Olfato
(receptor qumico)

Paladar
(receptor qumico)
Lnea lateral

Figura 1.1 Aspectos generales de los rganos de los sentidos el los peces seos (ilustracin del pez

modificada de Menezes y Figueiredo 1980).

La fotorecepcin (visin) est garantizada a travs de los ojos de los peces, en general, tienen el
mismo componente de todos los vertebrados (Zavala-Camin 2004). Segn este autor, los ojos
captan las imgenes y las traducen; adems, los peces pueden ver colores y, en algunas especies,
luz ultravioleta e infrarroja. Sin embargo, debe recordarse que el entorno visual en el agua puede
ser muy variable en funcin de la luminosidad, la presencia de partculas y otros elementos. De
esta manera, la visin no siempre es el sentido ms til para los peces.
La quimiorecepcin involucra al olfato y el paladar de los peces. El olfato depende de la

22
disolucin de sustancias qumicos en el agua y su contacto con la roseta olfativa, un epitelio
sensorial situado en el interior de las fosas nasales (Moyle y Cech 2004). El paladar, a su vez, est
relacionado con la percepcin de los alimentos y las clulas sensoriales se encuentran en la boca,
barbillas y labios, principalmente (Helfman et al. 2009). La percepcin qumica es muy
importante en peces y est relaciona con las diferentes funciones biolgicas, como el
reconocimiento de pares, la identificacin de reas en las especies con filopatria natal, para evitar
los predadores, etc.
El electromagnetismo en los peces es la capacidad de percibir campos magnticos y elctricos, y
en segundo caso, emitir dichos campos magnticos y elctricos y utilizarlos para la comunicacin,
el ataque y la defensa (Helfman et al. 2009). Depende de clulas especializadas en el tegumento.
El biomagnetismo es an un tema extremadamente controversial no slo en peces, en los
vertebrados en general. Sin embargo, existe consenso entre los autores que la trucha
(Onchorhynchus spp.), y el salmn (Salmo trutta), la anguila (Anguilla japonica) y el atn
(Thunnus albacares) utilizan campos magnticos para la orientacin espacial (Zavala-Camin
2004, Helfman et al. 2009). En el caso de la electricidad, esto ha sido mejor estudiado,
especialmente en elasmobranquios, que presentan ampollas de Lorenzini y una secuencia
relativamente bien establecida para el uso de sus rganos sensoriales (Hickman et al. 2004).
La mecanorecepcin en los peces est relacionada con los rganos que perciben sonidos, el
equilibrio y la presin (Zavala-Camin 2004). El sistema de la lnea lateral, constituido por clulas
pilosas organizadas en neuromastos, permite la deteccin de vibraciones con diferentes orgenes y
respuestas. A su vez, la audicin y el equilibrio son funciones del aparato vestibular de los peces,
con sus clulas pilosas localizadas en el odo interno (Moyle y Cech 2004), y las que se
mencionan a continuacin.

1.3 El odo interno de los peces y la ubicacin de los otolitos

En trminos estructurales, evolutivos y de anatoma comparada, la evolucin del aparato

vestibular de los peces est detalladamente descripta en Romer y Parsons (1985), Hildebrand y
Goslow (2006) y Kardong (2011), resumidos a continuacin.
El aparato vestibular (o laberinto membranoso) de los peces telesteos es un rgano de equilibrio
y se origina filogenticamente del sistema lateral. Est suspendido en la cpsula tica por tejido
conectivo. La cpsula tica posee endolinfa y externamente est rodeada por perilinfa. Ambos
fluidos tienen una consistencia similar a la linfa. El aparato vestibular contiene los canales
semicirculares (o ductos endolinfticos) y poseen tres ampollas o cmaras ticas1 que se
denominan sacculus (ventral), lagena (un divertculo do sculo) y utriculus (dorsal), orientados
en tres planos espaciales. En cada ampolla hay un par de otolitos (sagitta, asteriscus y lapillus)
1
En Myxini hay solo una cmara tica y en Petromyzontida hay dos cmaras.

23
(Figura 1.2).

Canales semicirculares

Utriculus

Lapillus

Lapillus Lagena
Lagena Asteriscus
Sacculus Sagitta
Asteriscus
Sagitta Sacculus

Cerebro

Figura 1.2 - Vista lateral del odo interno de un pez telesteo y vista superior de su ubicacin en
la cabeza (modificada de Secor et al. en Stevenson y Campana 1992).

En el laberinto auditivo se encuentran los receptores del equilibrio. En las cmaras hay clulas
receptoras en pilares, que se agrupan en reas llamadas mculas, en cuya cumbre estn ubicados
los otolitos. En el caso de los elasmobranquios, ellos no tienen otolitos pero poseen otoconias que
son grnulos (cristales) de carbonato de calcio. Los movimientos de la cabeza del pez hacen
variar la posicin de los otolitos, que presionan a las mculas, informndole al animal sobre la
posicin en la que se encuentra. El equilibrio del pez depende del ngulo de incidencia y la
intensidad de la luz. El pez se orienta segn la resultante de la descomposicin de las fuerzas de
gravedad y la direccin de la luz (von Holst 1950).
Los otolitos de los telesteos son complejos cuerpos policristalinos compuestos principalmente
por carbonato de calcio precipitado en forma de aragonita y pequeas cantidades de otros
minerales, inmersos dentro de una matrz orgnica (Campana 1999). Los tres pares de otolitos
estn relacionados con funciones de equilibrio y audicin (Popper y Fay 1993, Popper y Lu
2000). El agregado de calcio es un proceso extracelular que se encontrara regulado
hormonalmente e influenciado por variaciones en la temperatura ambiental (Morales-Nin 1986).
La tasa de acumulacin de calcio es ms rpida a temperaturas menores (Casselman 1990).

24
1.4 Aplicaciones de los otolitos

Los otolitos son aplicados en diferentes tipos de estudios asociados a mltiples disciplinas:
ecologa trfica, paleontologa, arqueologa, ecomorfologa, filogenia y biologa pesquera. La
evolucin de los estudios con otolitos puede comprobarse especialmente a travs de los libros de
resmenes y volmenes especiales derivados de la realizacin del International Otolith
Symposium, cuya primera edicin fue en Hilton Head (Estados Unidos) en 19932, luego en 19983
en Bergen (Noruega), en 20044 en Townsville (Australia), en 20095 en Monterey (Estados
Unidos) y 20146en Mallorca (Espaa) (Morales-Nin y Geffen 2015, Vaz-dos-Santos en prensa).
En ecologa trfica, debido a que la forma y estructura de los otolitos son especficas para cada
especie (Koken 1884, Chaine y Duvergier 1931, Schmitd 1969, Torno 1976, Hecht 1987, Balds
et al. 1997, Volpedo y Echeverra 2000, Campana 2004, Tuset et al. 2008, Furlani et al. 2007,
Baremore y Bethea 2010), por los que se los utiliza para identificar especies en estmagos y heces
de ictifagos (Pierce y Boyle 1991, Bustos et al. 2012, 2014). Esta asociacin especfica entre la
morfologa de los otolitos y la especie a la que pertenecen, permite determinar con exactitud los
componentes de las dietas de animales predadores de peces. Generalmente para este tipo de
estudios se utiliza la sagitta porque posee un mayor tamao que el resto de los otolitos (Pierce et
al. 1991), lo que permite una mejor observacin de su morfologa y adems no sufren el proceso
de reabsorcin del calcio (Casselman 1990).
En paleontologa, los primeros estudios morfolgicos de la cara interna de la sagitta fueron
realizados por Koken (1884) y Chaine y Duvergier (1931). Posteriormente, otros autores
utilizaron estas estructuras para determinar especies fsiles (Bassoli 1906). En las ltimas dcadas
se utiliz a los otolitos en el estudio de la paleofauna y sus comunidades (Nolf 1985, 1995, 2013,
Elder et al. 1996, Andrus et al. 2002a, Reichenbacher et al. 2007, 2014, Aguilera 2010).
En arqueologa por ejemplo la aplicacin de los otolitos se desarrolla para identificar especies
desde hace ms de un siglo. Por ejemplo, en 1891, Rio Grande do Sul, Brasil se determinaron
especies fsiles con dichas estructuras (Ihering 1891 apud Fitch 1972). En la ltima dcada se
han fortalecido estudios arqueolgicos utilizando otolitos en Sudamrica (Scartascini et al. 2008,
2015, Scartascini y Volpedo 2013) as como revisiones de sus mtodos y aplicaciones en
arqueologa (Castello 1986, Campana 1999, 2005, Van Neer et al. 2002, Disspain et al., 2015).
En filogenia los trabajos ms representativos utilizando otolitos son los de Gaemers (1984), Nolf
(1985), Sasaki (1989), LAbee-Lund y Jensen (1993), Monteiro et al. (2005) e Reichenbacher et
al. (2007). En la dcada del 1990 se desarrollaron estudios asociados al monitoreo ambiental

2
Secor, D.H., Dean, J.M., Campana, S.E., Miller, A., 1995. Recent developments in fish otolith research. The Belle W.
Baruch Institute for Marine Biology and Coastal Research by the University of South Carolina Press, Columbia.
3
Fisheries Research 46 (2000).
4
Marine and Freshwater Research 56 (5) (2005).
5
Environmental Biology of Fishes 89 (3) (2010).
6
ICES Journal of Marine Science 72 (7) (2015).

25
utilizando otolitos (Papalopoulou et al. 1980, Kalish 1990, Gauldie 1990, Radtke y Shafer 1992,
Burke et al. 1993).
En ecomorfologa los trabajos se desarrollaron en la ltimas dcadas encontrndose relaciones
entre la forma y tamao de los otolitos con el ambiente y el comportamiento de los peces (e.g.
Gauldie 1988, Lombarte 1992, Popper y Platt 1993, Aguirre y Lombarte 1999, Lychakov y
Rebane 2000, Ramcharitar et al. 2001, 2004, Aguirre 2003, Tuset et al. 2003b, Volpedo y
Echeverra 2003, Cruz y Lombarte 2004, Lychakov et al. 2006, Lombarte y Cruz 2007, Volpedo
y Fuchs 2010, Volpedo et al. 2010, Jaramillo et al. 2014).
Pero la disciplina de ciencias pesqueras es la donde la aplicacin de los otolitos es ms utilizadas.
En este sentido el primer aspecto estudiado fue la edad y el crecimiento de los peces a travs de
los anillos de crecimiento tanto estacionales, anuales como diarios. Inicialmente estos estudios
utilizaron escamas (Creaser 1926, Fry 1943, Carlander 1950). Despus, con otolitos, esto fue
estudiado por diferentes autores (Pannella 1971, Yaez Arancibia y Leyton de Yaez 1977,
Chilton y Beamish 1982, Bori 1986, Casselman 1990, Sadovy y Severin 1992, Stevenson y
Campana 1992).
Otro punto clave para el manejo pesquero es la determinacin de stocks.Es un concepto
complexo, con diferentes definiciones y constituido por varios elementos (cf. Vaz-dos-Santos et
al. 2007a). Seguramente la mejor definicin de stock es que se trata de un grupo homogneo
biolgicamente para el manejo (Begg y Waldman 1999, Vaz-dos-Santos et al. 2007a). En este
contexto, el crecimiento, la morfometra y la microqumica del otolito han sido aplicadas por
diferentes autores, con suceso (Cadrin et al. 2014).
A nivel mundial los estudios de la microqumica del otolito ha sido ampliamente utilizada para el
estudio de la biologa ambiental de peces ye identificacin de stocks pesqueros (Kerr y Campana
2014). Sin embargo, la gran mayora de los trabajos se concentran en especies de peces
comerciales del hemisferio norte, principalmente USA, Canad, oeste y noroeste de Europa,
Japn y China, siendo esta metodologa subdesarrollada en los pases del hemisferio sur, con la
excepcin de Australia. El estudio de la microqumica de los otolitos se ha extendido y
profundizado en la ltima dcada en Latinoamrica, aplicndose a especies marinas o andromas
de la costa del Ocano Atlntico y del Pacfico (Volpedo y Fernandez Cirelli 2006, Volpedo et al.
2007, Albuquerque et al. 2010, 2012, Mai et al. 2014, Avigliano et al. 2016) y son limitados los
trabajos en peces dulceacucolas (Collins et al. 2013, Pouilly et al. 2014, Avigliano et al. 2015a,b,
Garcez et al. 2015, Hegg et al. 2015).
Cabe destacarse que el material de estudio de la mayora de estos trabajos en sus diferentes temas
esta resguardado en colecciones de referencia de las diferentes reas y que las mismas en su
mayora se han plasmado en catlogos como por ejemplo: Smale et al. (1995) para peces de
Sudfrica, Harkonen (1986) para peces del Atlntico Norte, Hecht (1987) e Williams y
McEldowney (1990) para peces de la Antrtida, Harvey et al. (2000) para peces del Pacifico

26
Nororiental, para los peces de la costa portuguesa (Assis 2000, 2004), para los peces del
Mediterrneo y del Atlntico Norte (Tuset el al. 2008), para las especies estuarinas y
dulceacucolas de Amrica del Norte (Campana 2004), para especies de peces templados de
Australia (Furlani et al. 2007). Por otro lado tambin se han desarrollado catlogos digitales de
otolitos como el creado por Baremore y Bethea (2010) del Golfo de Mxico, y la base AFORO
que incluye un sistema automtico de identificacin de especies basadas en descripciones
matemticas de contornos de otolitos (Lombarte et al. 2006).
En Sudamrica los catlogos de otolitos de peces estn limitados a peces de Argentina (Volpedo y
Echeverra 2000), de Brasil (Braga y Goiten 1985, Bastos 1990, Corra y Vianna 1992/93, Lemos
et al. 1992/93, Abilha y Corra 1992/93, Monteiro et al. 2005, Rondon et al. 2014, Rossi-
Wongtschowski et al. 2014) y de la costa peruana (Godos 2001). En el caso de peces fsiles,
Aguilera (2010) present un catlogo de otolitos y otras estructuras de peces del Caribe de
Venezuela.
Otra rama del uso de otolitos, no incluidos en este trabajo, es el de la biomedicina, que ha
estudiado la potencialidad de los otolitos como biominerales, para la regeneracin sea y dental
(Valido et al. 2010, Oliveira et al. 2011, Costa et al. 2012, Bastos et al. 2013, Xavier-Filho et al.
2013).
La diversidad de aplicaciones de los otolitos y todas sus potencialidades han propiciado la
necesidad de instrumentar metodologas estandarizadas que permitan desarrollar trabajos de
calidad que contribuyan al conocimiento y manejo sustentable de los recursos pesqueros. Esta
obra en sus diferentes captulos presenta los aspectos ms relevantes del estudio de los otolitos a
fin de propiciar su estudio en todos los pases de lengua espaola y portuguesa.

27
28
2. MORFOLOGA DE OTOLITOS

Carmen Lcia Del Bianco Rossi-Wongtschowski

Sumario
2.1 Introduccin..........................................................................................................................30
2.2 La forma de los otolitos: Cmo y qu analizar?..................................................................33
2.3 Obtencion de las muestras de otolitos...................................................................................34
2.4 Anlisis morfolgico de los otolitos......................................................................................35
2.5 Anlisis estadstico de los datos morfolgicos......................................................................36
2.6 El otolito sagitta....................................................................................................................41
2.7 El otolito asteriscus...............................................................................................................41
2.8 El otolito lapillus...................................................................................................................42
2.9 Bases del anlisis morfomtrico de los otolitos....................................................................43
2.10 Anlisis manual de otolitos.................................................................................................43
2.10.1 rea y Permetro..............................................................................................................43
2.10.2 Retangularidad.................................................................................................................45
2.10.3 Circularidad......................................................................................................................45
2.10.4 Factor de forma................................................................................................................45
2.10.5 Elipcidad..........................................................................................................................45
2.10.6 Otros ndices de forma.....................................................................................................46
2.11. Ecomorfologa....................................................................................................................46
Agradecimientos.........................................................................................................................47
ANEXO 1. Clasificacin de los otolitos sagittae........................................................................48
Forma del otolito.........................................................................................................................48
Regin anterior del otolito...........................................................................................................49
Regin posterior del otolito.........................................................................................................49
Borde del otolito..........................................................................................................................50
Posicin del sulcus acusticus......................................................................................................51
Orientacin del sulcus acusticus.................................................................................................51
Forma del sulcus acusticus..........................................................................................................52
Abertura del sulcus acusticus......................................................................................................53
Forma del colliculum...................................................................................................................54
Ostium.........................................................................................................................................54
Cauda..........................................................................................................................................55

29
Rostrum.......................................................................................................................................56
Antirostrum.................................................................................................................................56
Perfil del otolito...........................................................................................................................56
Orientacin del rostrum y del antirostrum..................................................................................57

2.1 Introduccin

El odo interno es muy importante para los peces, presentando un mecanismo que registra el
movimiento y el posicionamiento de la cabeza en relacin con la gravedad y siendo tambin un
rgano de captacin auditiva (Manley y Clarck 2004, Popper et al. 2005). El odo interno de los
telesteos est situado en la parte ventral del cerebro, a los lados de la cabeza, estando formado el
laberinto membranoso por tres canales semicirculares y tres cmaras denominados scculo
(sacculus), utrculu (utriculus) y lagena (lagena) (Popper y Lu 2000). En cada una de estas
cmaras hay unas estructuras duras llamadas otolitos cuya denominacin es lapilli, asterisci y
sagittae, respectivamente. Cada especie de telesteo presenta caractersticas especficas en cuanto
a su forma y al tamao de sus otolitos (Secor et al. 1992, Assis 2000).
Los otolitos son concreciones formadas por la precipitacin de las sustancias presentes en el
lquido endolinftico, no son huesos, porque, a diferencia de stos, no presentan osteocitos y
osteoclastos7 y estn formadas por carbonato de calcio en lugar de fosfato de calcio (Assis 2000,
Wright et al. 2002a, Green et al. 2009). Los otolitos estn compuestos de cristales de carbonato
de calcio suspendidos en una matriz proteica y, siendo de diferentes tipos los cristales de cada
otolito: el carbonato de calcio se deposita normalmente en sagitta, en el lapillus en forma de
aragonita, mientras que en asteriscus ocurre en forma vaterita. La vaterita se encuentra tambin
en numerosos otolitos sagittae anormales o cristalizados (Gauldie et al. 1997).
La funcin especfica de cada otolito no est aclarada todava completamente, pero el sculo se
considera para ser el receptor de los sonidos en muchos telesteos (Popper y Fay 1999, Popper y
Lu 2000). Los utrculus usualmente estn asociados a la funcin de equilibrio mientras que
tambin sirven para la audicin en muchas especies (Denton et al. 1979, Blaxter et al. 1981,
Popper et al. 2003). La funcin de la lagena no est totalmente definida aunque algunos autores
piensan que tiene funcin auditiva (Lu et al. 2003, Meyer et al. 2004). Cada rgano otoltico
contiene un epitelio sensorial con muchas clulas ciliadas mecano-receptoras existiendo una
relacin entre los movimientos de este epitelio y los otolitos, que estimulan estas clulas dando
informacin a los peces sobre su posicin en relacin con el ambiente que los rodea (Popper y Lu
2000, Popper et al. 2003, Ladich y Popper 2004).

7
Clulas del tejido seo.

30
El mecanismo auditivo de los peces ha sido minuciosamente investigado y parece que se da a
travs de la interaccin de los movimientos de los otolitos y la vejiga natatoria o vejiga gaseosa
que se utiliza como una caja de resonancia (Hawkins 1993, Popper y Platt 1993).
En cuanto a los estudios existentes acerca de la morfologa de otolitos y, a pesar de haber sido
reconocida la importancia de los tres pares de otolitos, hay una enorme desproporcin entre los
trabajos que se ocupan de cada uno de ellos, ya sea en el nmero o en calidad, lo que genera un
limitado conocimiento de las caractersticas del asteriscus y del lapillus. Adems, el hecho de
estos dos pares de otolitos no se encuentran comnmente en estratos geolgicos hace que los
paleoictiologos no se han dedicado a su estudio (Assis 2000, 2004). Por lo que por su tamao y
facilidad de extraccin, las sagittae son las ms utilizadas.
Los otolitos son muy importantes para estudios ictiolgicos, etnobiolgicos, estratigrficas,
arqueolgicas, paleontolgicas, zoogeogrficos, ecolgico y biolgico-caladeros (Assis 2000,
Campana 2005, Morales-Nin y Panfili 2002 a, Miller et al. 2010). Debido a que son resistentes a
la accin qumica y mecnica del estmago y los intestinos, se encuentran en las heces fecales,
intestinos y estmagos de animales predadores (ictifagos) revelando relaciones predador-presa, y
permitiendo el examen de la estructura trfica de los ecosistemas (Pascoe 1986, Corra y Viana
1992/93, Pansard 2009, Rossi-Wongtschowski et al. 2014). Por su durabilidad y resistencia a la
intemperie permanecen en estratos fsiles (Voguel 1987, Corra y Viana 1992/93, Oliveira 2010,
Schwarshans, 2012, 2013, 2014). Por su alta especificidad, los otolitos se utilizan como caracteres
taxonmicos consistentes en la identificacin de especies de peces (R 1986, Corra y Viana
1992/93, Lemos y Corra 1992/93, Volpedo y Echeverra 1997, 2000, Assis 2000, 2004,
Campana 2004, Tuset et al. 2008). Por presentar una deposicin peridica de anillos (La Mesa et
al. 2010) ellos tienen gran importancia en estudios sobre edad y crecimiento de las poblaciones de
peces.
Considerando: (i) la homogeneidad relativa en cada especie y la considerable variacin entre
especies diferentes, aunque prximos filogenticamente (posiblemente por ser parte de un rgano
sensorial extremadamente conservador y estrechamente vinculado con el sistema nervioso); (ii)
ser formados en una etapa muy temprana de desarrollo de los peces; (iii) sufrir un proceso de
crecimiento micro estructural influenciado por variaciones ambientales, los otolitos contienem
informacin que puede ser analizado a travs de su morfologa y caractersticas fsico-qumicas
de los elementos en ellos presentes.
Los otolitos presentan una forma bien definida, caracterstica del grupo taxonmico a que el pez
pertenece, y las diferencias morfolgicas entre especies distintas son mucho ms pronunciadas
cuanto ms distantes ellos estn desde el punto de vista filogentico (Assis 2004). Varias
publicaciones incluyen la historia sobre la evolucin de los conocimientos relacionados con el
estudio de los otolitos de los peces, pudindose incluir dentro de las ms completas a Hecht
(1987), Assis (2004) y Tuset et al. (2008).

31
Desde finales de los aos 1970, numerosos trabajos fueron publicados conteniendo dibujos
detallados o fotografas de estas estructuras. A estos trabajos se agregaron recientemente
catlogos haciendo posible la identificacin de la especie a la que pertenecen. As, Schmidt
(1968) public un catlogo de otolitos de peces en el Atlntico oriental; Morrow (1977, 1979) de
peces de la costa del Atlntico Norte; Nolf (1985) de especies con amplia distribucin y tambin
otolitos de fsiles; Hrknen (1986) de peces de Mar del Norte; Hecht (1987) y Smale et al.
(1995) de especies de frica del Sur: Williams y McEldowney (1990) de especies de la regin
antrtica australiana; Rivaton y Bourret (1999) del Indo Pacfico; Naveda (2001) de la costa de
Per; Volpedo y Echeverra (2000) de Argentina; Assis (2000, 2004) de las zonas costeras,
estuarios y ros de Portugal; Campana (2004), de especies de Amrica del Norte, Furlani et al.
(2007) de peces australianos, y Rossi-Wongtschowski et al. (2014) de peces en el sur sureste de
Brasil. Nolf (2013) ha publicado recientemente, un compendio que muestra la diversidad de los
otolitos encontrados en sitios arqueolgicos.
A estas obras, que tratan especficamente de la forma de los otolitos, muchos otros autores,
reconociendo la importancia de la morfologa de estas estructuras, incluirn en sus estudios
imgenes y descripciones detalladas del mismo. Entre ellos pueden mencionarse: Rodrguez-Roda
(1980), Gauldie (1988), Messieh et al. (1989), Lombarte y Castelln (1991), Lombarte (1992),
Popper y Platt (1993), Campana y Casselman (1993), Lombarte y Morales-Nin (1995), Nielsen
(1995), Aguirre y Lombarte (1999), Lychakov y Rebane (2000), Volpedo y Echeverra (2000,
2003), Ramcharitar et al. (2001, 2004), Morales-Nin y Panfili (2002), Tuset et al. (2003a, 2003b,
2006), Assis (2003, 2004, 2005), Aguirre (2003), Cruz y Lombarte (2004), Lychakov et al.
(2006), Lombarte y Cruz (2007), Cardinale et al. (2004). El estudio ms innovador de la
morfologa de estas estructuras es el desarrollo de un sistema de escner para obtener imgenes en
3D (Lombarte et al. 2006).
Durante el 5th International Otolith Symposium8, realizado en 2014, en Palma de Mallorca
(Espaa), fueron presentados numerosos trabajos que permitirn la evaluacin de una multitud de
aplicaciones de los otolitos en los siguientes campos: taxonoma, filogenia, diversidad,
comparacin de historias de vida y budgets de energa en diferentes poblaciones, cronologa de
eventos ambientales directos (metabolismo) o indirectos (disponibilidad de alimento), dispersin
y mortalidad de larvas, fallas en el reclutamiento, patrones de retencin larval, tiempo de
exposicin de peces a contaminantes, procesos antropognicos (causando cambios en la
abundancia y diversidad de los componentes del ecosistema) , bioindicadores de cambios
ambientales, evaluacin del efecto de las reas protegidas y manejo de las pesqueras,
discriminacin de zonas de cra de peces, diversidad en la colonizacin de ambientes,
introduccin e invasin de nuevas especies, identificacin de la dieta de otros animales,
metamorfosis, proporcin de distintas poblaciones, geolocalizacin (retrospectiva de
8
mirar IOS2014 Book of Abstracts.pdf

32
desplazamientos, principalmente de peces estuarinos), historia, arqueologa, fisiologa,
contaminacin (por selenio, mercurio y otros elementos), relaciones entre las caractersticas de
otolitos y nicho trfico, ecomorfologa, efectos del cambio en la dieta (acuicultura), panmixia,
migraciones transocenicas, marcas de asentamiento y de reas de cra, reconstruccin de la
historia de migracin de juveniles, segregacin, parasitismo, comprensin del estado de las
pesqueras (series temporales), posicin trfica, diferenciacin entre formas de especies que viven
en aguas poco profundas o profundas, estructura de la poblacin, estimacin de mortalidad
(natural tag) y conectividad entre las poblaciones. Finalmente, cabe citar la importancia de estas
estructuras para la evaluacin del cambio climtico causado por la acidificacin de los ocanos,
como se muestra en el estudio de Checkley et al. (2009) publicado en la revista Science y muchos
otros presentados en este simposio.

2.2 La forma de los otolitos: Cmo y qu analizar?

Segn Assis (2000), "mientras que la variabilidad intraespecfica a nivel de los otolitos se
relaciona esencialmente con pequeos detalles de la organizacin (por ejemplo, el recorte de los
mrgenes o la topografa superficial) y con los ndices biomtricos, de especie a especie, de
gnero a gnero y ms a familia existen diferencias ms o menos pronunciadas de tamao,
forma, orientacin y constitucin general, que permiten una identificacin de especies y, en
algunos casos, hasta el nivel de la poblacin. En este sentido, los otolitos de algunas especies, en
particular la morfologa de su perfil y algunos aspectos de su estructura y composicin qumica,
han revelado ser importantes auxiliares en la delimitacin de las poblaciones de peces del
ocano. Adems, tambin se puede mencionar la existencia de referencias a la presencia de
dimorfismo sexual ms o menos pronunciado en algunas especies de las familias de peces, como
el Ciclidae y Ophidiidae.
Por ejemplo en la Figura 2.1 se presentan las variaciones en formas de los otolitos de varias
especies.

33
Figura 2.1 Variacin de las formas de los otolitos. (A) Bregmaceros atlanticus. (B) Micropogonias
furnieri. (C) Stellifer brasiliensis. (D) Gadella imberbis. (E) Cynoscion virescens. (F) Merluccius hubbsi.
(G) Urophycis brasiliensis. (H) Menticirrhus littoralis. (I) Serranus atrobranchus. (J) Malacocephalus
occidentalis. (L) Oligoplites saliens. (Foto: Cesar Santificetur y Alexandre Arackawa. Fuente: LABIC-IOUSP9).

2.3 Obtencion de las muestras de otolitos

Un hecho de suma importancia es la correcta identificacin taxonmica de los ejemplares de

peces colectados que debe ser realizada sobre la base de claves de identificacin actualizadas.
Entre ellas podemos mencionar a Eschmeyer y su Catalog of Fishes10 (Eschmeyer y Fricke 2015).
Las muestras de peces pueden obtenerse de campaas de muestreo dirigidas a su captura, en
establecimientos comerciales por medio de pescadores, as como a travs de contactos con
personas y grupos de trabajo de otras instituciones. En cualquier caso es importante, siempre que
sea posible, cubrir todo el rango de tamaos de la especie estudiada, hecho que permitir el
anlisis de la variabilidad intraespecfica de las caractersticas morfolgicas de otolitos, as como

9
Laboratrio de Ictiofauna e Crescimento Instituto Oceanogrfico da Universidade de So Paulo.
10
http://research.calacademy.org/research/ichthyology/ catalog/fishcatmain.asp

34
la aplicacin de anlisis estadstico de los datos obtenidos. Submuestras pueden organizarse
cuando las muestras sean muy grandes y deben ser realizadas de modo estratificado, conteniendo
un mismo nmero de ejemplares para cada clase de longitud, preferentemente 10 peces.
De cada pez de la muestra/submuestra es necesario registrar la longitud total, la longitud estndar
y peso total. Debe evitarse especmenes que presenten deformaciones. El sexo de cada ejemplar
debe estar identificado porque pueden ocurrir variaciones en la forma de los otolitos de hembras y
machos (Wilson et al. 1991, Cardinale et al. 2004).
La extraccin de los otolitos depende de la habilidad del investigador/acadmico, as como el
tamao de los peces y por lo tanto de sus otolitos. Varias son las tcnicas utilizadas, pudindose
consultar, entre otros, los manuales de Holden y Raitt (1975), Secor et al. (1991) y Panfili et al.
(2002). A modo de ejemplo presentamos la extraccin de los otolitos de la brtola Urophycis
brasiliensis (Figura 2.2). Despus de la extraccin, los otolitos se deben lavar en agua o etanol
(70%) para eliminar las membranas que rodean y, una vez completamente limpios, deben ser
secados y almacenados individualmente en sobres de papel o frascos debidamente etiquetados.

2.4 Anlisis morfolgico de los otolitos

Este anlisis se realiza en la lupa o microscopio con luz incidente y se deben seguir los siguientes
pasos:
- verificacin de la semeja entre el otolito derecha e izquierda del par, y eleccin de cual se
utilizar;
- separacin de al menos 10 otolitos por clase de longitud de los peces. Cuando este nmero de
estructuras no est disponible debe utilizar el mayor nmero de otolitos disponibles de cada clase;
- eleccin de las caractersticas de anlisis (diferentes autores utilizan diferentes caractersticas).
Procurando estandarizar las mismas, para poder realizar comparaciones sugerimos utilizar 15
caractersticas basados en Tuset et al. (2008) y Assis (2004) que se presentan en el Anexo 1;
- anlisis de otolitos segn las caractersticas elegidas;
- estimacin de los porcentajes de cada caracterstica elegida;
- elaboracin de las descripciones de las caractersticas analizadas;
- organizacin de claves de identificacin para cada especie, a partir de las caractersticas
analizadas;
- fotografa o dibujo de los otolitos de al menos un ejemplar de cada tamao. En esta etapa el uso
del grafito es opcional.

A modo de ejemplo, presentamos resultados de los estudios realizados con Malacocephalus laevis
(Figura 2.3).

35
Figura 2.2 Extraccin de los otolitos sagittae de la brtola Urophycis brasiliensis. (A)
Biometra de la longitud total (440 mm). (B) y (C) Vista ventral del oprculo. (D) Vista ventral de
la base del crneo. (E) Vista ventral de la caj craneana cerrada. (F) Extraccin de los otolitos
sagittae despus del corte de la caja craneana; flechas indicando la localizacin de los otolitos en
las cmaras del odo interno. (Fotos: Alexandre Arackawa. Fuente: LABIC-IOUSP).

2.5 Anlisis estadstico de los datos morfolgicos

Los datos morfolgicos de otolitos deben disponerse en tablas de frecuencias, conteniendo el

nmero de individuos por tipo de caracterstica y por clase de longitud (Tabla 2.1).
Posteriormente se debe calcular el porcentaje de individuos que presentan una misma variable
morfolgica, por clase de longitud (Figura 2.4).

36
Una prueba de Chi-cuadrado se aplica a aquellas caractersticas que se producen en ms de una
clasificacin, siendo analizadas las diferencias dentro y entre las clases de longitud total y para el
total muestreado. Este test se utiliza para verificar si la distribucin de estas caractersticas es
homognea dentro de cada clase de longitud y si hay variacin ontogentica (cf. Capitulo 7).

Figura 2.3 Ilustraciones (arriba) y fotografias (abajo) de otolitos de M. laevis com uma longitud
total de: A. 294 mm (REV.AF.1002.2), B. 345 mm (REV.AF.1142.1) e C. 424 mm
(REV.AF.1129.1). Cara interna A1, B1 e C1; Cara externa A2, B2 e C2; e Vista ventral A3, B3 e

37
C3. (IIlustradora: Jssicca Falchi Caadorr, Fotografa: Cessar Santificetur. Fuente:
F OUSP).
LABIC-IO

Figurra 2.4 Grffico de sectoores represenntando la varriacin ontoggentica del borde dorsaal de los
otolittos sagitta dee Urophycis mystacea. No
N fueron ob
btenidas mueestras para laas clases de longitud
total de 580-599 e 600-619 mm.
m (Fuente: LABIC-IOUSP).

38
 Tabla 2.1 Ejemplo para el clculo do 2 para el borde dorsal del otolito sagittae de Urophycis mystacea (Fuente: LABIC-IOUSP)..

Frecuencia absoluta de indivduos (RA) Frecuencia esperada Clculo de 2 de cada categoria

Grado de P valor
Clases de FL Lobada Lobada a Lobada Sinuosa Sinuosa Lobada a Lobada Sinuosa Lobada a Lobada Sinuosa 2 Liberdad (< 0,05)
Lisa Total Lobada Sinuosa Lisa Lobada Sinuosa Lisa
(mm) sinuosa a lisa a lisa sinuosa a lisa a lisa sinuosa a lisa a lisa
180-199 0 0 2 0 0 0 2 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 8,33 0,33 0,33 0,33 10,00 5 0,08
200-219 1 0 2 0 0 0 3 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 4,50 0,50 0,50 0,50 7,00 5 0,22
220-239 0 0 3 0 0 0 3 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 12,50 0,50 0,50 0,50 15,00 5 0,01
240-259 0 0 1 0 0 0 1 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 4,17 0,17 0,17 0,17 5,00 5 0,42
260-279 0 0 0 0 1 0 1 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 4,17 5,00 5 0,42
280-299 0 0 0 0 5 0 5 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 20,83 25,00 5 0,00
300-319 0 0 0 1 1 0 2 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 1,33 1,33 1,33 5,00 5 0,42
320-339 0 2 0 0 3 5 10 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 0,07 1,67 1,67 1,67 1,07 7,80 5 0,17
340-359 0 1 0 2 3 4 10 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 0,27 1,67 0,07 0,07 1,07 4,80 5 0,44
360-379 0 0 0 1 1 8 10 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 0,27 0,27 0,27 5,80 5 0,33
380-399 0 0 0 0 2 8 10 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 0,07 8,40 5 0,14
400-419 0 3 0 0 1 6 10 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,07 1,67 1,67 1,67 0,27 8,00 5 0,16
420-439 0 1 0 0 0 5 6 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 0,00 1,00 1,00 1,00 1,00 5,00 5 0,42
440-459 0 0 0 0 0 6 6 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 6,00 5 0,31
460-479 0 0 0 2 0 2 4 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 2,67 2,67 0,67 8,00 5 0,16
489-499 0 0 0 1 1 7 9 1,50 1,50 1,50 1,50 1,50 1,50 1,50 1,50 1,50 0,17 0,17 0,17 5,00 5 0,42
500-519 0 0 0 0 0 2 2 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 2,00 5 0,85
520-539 0 0 0 0 0 4 4 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 4,00 5 0,55
540-559 0 0 0 0 0 1 1 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 1,00 5 0,96
560-579 0 0 0 0 0 2 2 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 2,00 5 0,85
620-639 0 0 0 0 0 1 1 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 1,00 5 0,96
Total 1 7 8 7 18 61 102 17,00 17,00 17,00 17,00 17,00 17,00 15,06 5,88 4,76 5,88 5,88 0,06 37,53 5 0,00
Porcentages 0,98 6,86 7,84 6,86 17,65 59,80 100,00 16,67 16,67 16,67 16,67 16,67 16,67 14,76 5,77 4,67 5,77 5,77 0,06 140,80 105 0,01
2
heterogeneidade 103,27 100 0,39

39
En la actualidad, los anlisis de la forma de los otolitos se realizan fcilmente utilizando
tcnicas de imagen (Figura 2.5) con equipos que permiten fotografiar, escanear y analizar las
estructuras en detalle y con gran precisin.

Figura 2.5 Equipamientos utilizados para captacin de imgenes ampliadas de otolitos. (A)
Discovery V.8 Estereomicroscopio, Carl Zeiss. (B) Discovery V.12 Estereomicroscopio, Carl
Zeiss. (Fotografa: Cesar Santificetur. Fuente: LABIC-IOUSP).

40
2.6 El otolito sagitta

Los otolitos sagittae son los ms utilizados debido a: (i) mayor tamao y facilidad de extraccin
en la mayora de las especies; (ii) adems son frecuentes en el registro fsil y en el contenido
estomacal de los depredadores; (iii) presentan una morfologa que vara considerablemente entre
especies, y (iv) tienen gran nmero de caractersticas fcilmente identificables y, por lo que son
muy tiles en estudios de edad y crecimiento.

2.7 El otolito asteriscus

Los asterisci son generalmente los otolitos ms frgiles y, por ello, son los ms difcil de extraer
y limpiar sin que se rompan. Adems, presentan reducidas dimensiones y pocas caractersticas
morfolgicas definidas, por lo que han sido poco utilizados en la identificacin de peces. Son
pocos los estudios morfolgicos detallados que permiten la identificacin de sus caracteres
como los de Assis (2000, 2004).
Sin embargo, en los peces Pleuronectiformes (lenguados), los asterisci a pesar de ser de
pequeo tamao, son muy duros y en los Ostariophysi (con excepcin de los Siluriformes) estos
otolitos son los ms desarrollados y voluminosos (Mollo 1981, Assis 2000, 2004). As que en
los estudios sobre el Ostariophysi, los asterisci son los otolitos ms utilizados, porque las
sagittae son pequeas y muy difciles de extraer.
Assis (2000) llama la atencin sobre el hecho de que: "en trminos estructurales es posible
encontrar una marcada similitud entre los asterisci y las sagittae de la mayora de los peces,
que sugiere la posibilidad de utilizar una terminologa similar para los dos pares de otolitos,
pero "el hecho de que se trata de distintas partes anatmicas, entre las cuales existen marcadas
diferencias en la orientacin y la topografa de las partes y estructuras que las constituyen, la
semejanza en la forma y posicin relativa entre sagittae y asterisci son apenas circunstanciales,
no existiendo ninguna homologa entre las estructuras de los dos pares de otolitos. En
consecuencia, una total coincidencia de nombres, incluso entre las estructuras con aspecto y
posicin relativamente similar en los dos pares de otolitos, no sera correcta y puede suscitar a
confusin en trabajos que estudien simultneamente los dos pares de otolitos."
Este autor, como una manera de sealar la semejanza estructural entre sagittae y asterisci, sin
crear demasiada disrupcin en la terminologa empleada por diversos autores, opt por
atribuir a algunas partes y estructuras de los asterisci, terminologa correspondiente a las
sagittae, las cuales podran, de comprenderse la semejanza, ser designadas de forma idntica.
Sin embargo, una vez designadas las correspondientes estructuras de los diferentes otolitos,
distinguirlas conservando como referente a las de las sagittae y aadiendo a los otolitos
nombre asterisci en caso genitivo singular".

41
2.8 El otolito lapillus

Los lapilli son generalmente muy pequeos y morfolgicamente es posible distinguir dos tipos:
el tipo clupeiforme y el tipo no clupeiforme. El primer tipo presente en los peces
Clupeiformes11, presenta forma tetradrica en cuanto al segundo tipo, este est en la mayora de
los peces y es redondeado y voluminoso (Assis 2000, 2005).
Entre los tres pares de otolitos, los lapilli son los ms regulares y homogneas en todos los
peces y, en consecuencia, presentan el menor nmero de caractersticas utilizables para la
identificacin de especies. La gran mayora de los trabajos sobre lapilli estn relacionados con
los Ostariophysi, en particular con los Siluriformes (Assis 2000, 2005, Martnez y Monasterio
de Gonzo 1988, 1991, Volpedo y Fuchs 2010).
La cara ventral de los lapilli es aquella que permite la visualizacin de un mayor nmero de
caractersticas, es la ms adecuada para la observacin y descripcin de estas estructuras. Las
caractersticas morfolgicas ms relevantes para el anlisis se describen en Mollo (1981),
Volpedo y Echeverra (2000) y Assis (2000, 2005).
Por ejemplo, presentamos los tres pares de otolitos de la especie Urophycis brasiliensis en la
Figura 2.6.

Figura 2.6 Ejemplo de los tres otolitos izquierdos de Urophycis brasiliensis. (A) Sagittae. (B)
Asteriscus. (C) Lapillus (Fotografa: Cesar Santificetur. Fuente: LABIC-IOUSP).

11
Pequeos pelgicos como las sardinas, anchoas y anchotas.

42
2.9 Bases del anlisis morfomtrico de los otolitos

Este anlisis debe llevarse a cabo en la lupa y/o microscopio, que en este caso debe estar
equipado con ocular micromtrico. En la actualidad hay varios equipos pticos que permiten
llevar a cabo estas mediciones directamente. Este anlisis comprende las siguientes etapas:
- Medicin de la longitud total del otolito (OL): es la distancia ms grande a lo largo del eje
longitudinal de los otolitos;
- medicin del ancho de los otolitos (OH): es la mayor distancia, perpendicular del otolito
dorso-ventral;
- medicin del espesor de los otolitos (OT): es la distancia mxima entre dos tangentes paralelas
a los puntos internos y externos de los otolitos;
- peso de otolitos (OW);
- clculo de ndices biomtricos de la forma: rea, permetro, circularidad, retangularidad,
elipsidad.

2.10 Anlisis manual de otolitos

2.10.1 rea y Permetro

Antiguamente, antes del desarrollo de los actuales dispositivos de anlisis de imagen, el clculo
de rea de otolitos (OA) era realizado a travs de la imagen obtenida en cmara clara,
proyectada sobre papel milimetrado. Se registraba el aumento de la lupa. La sumatoria de los
valores de "cuadraditos", divididos por el valor del aumento utilizado, permita una estimacin
aproximada del rea del otolito.

Qi + Qt
OA =
2
Donde:
OA = rea del otolito;
Qi = cuadrados enteros (color claro);
Qt = cuadrados totales (color claro + color oscuro).

43
As como con el rea, el permetro (OP) se calculaba como el valor del contorno de los otolitos,
a menudo se utilizaba un hilo, que luego se extenda por el permetro hasta para conseguir la
medida.
En la actualidad, los equipos de procesadores de imgenes usados disponen de software que
hacen estos clculos directamente, independientemente del formato de los otolitos. A
continuacin presentamos un ejemplo de este clculo:

OA( x) = g ( xi , yi )
if

Donde:
AO(x) = rea del otolito;
g = rea del cuadrado;
x = eje x;
y = eje y;
, 1
, 0 X

4 2

Donde la suma de los pixeles del borde del otolito en diferentes direcciones da el valor del
permetro:
OP = permetro del otolito;
a= tamao del pixel;
N0, N90, N45 y N135= suma de pixeles para los ngulos 0, 90 , 45 e 135, respectivamente.

44
2.10.2 Retangularidad

OA
Re =
OL OH
Donde:
Re = retangularidad;
OA = rea del otolito;
OL = longitud total del otolito;
OH= ancho mximo del otolito.

2.10.3 Circularidad

OP 2
Ci =
OA
Donde:
Ci = circularidad;
OP = permetro del otolito;
OA= rea del otolito.

2.10.4 Factor de forma

4 OA
Ff =
OP2
Donde:
Ff = factor de forma;
AO = rea del otolito;
OP = permetro del otolito.

2.10.5 Elipcidad

OL OH
El =
OL + OH
Donde:
El = elipcidad;
OL = longitud total del otolito;
OA = ancho mximo del otolito.

45
2.10.6 Otros ndices de forma

En la literatura sobre morfometra de otolitos, hay an otros ndices de forma (cf. Captulo 3).
Entre ellos, destacamos el texto retirado de Lombarte y Tuset12: En las ltimas dcadas, se han
desarrollado una familia de ndices de forma que determinan la similitud del otolito con una
forma geomtrica (Russ 1990, Rosin 2003). Los ms empelados con los otolitos han sido la
rectangularidad (en esto caso, el rea del otolito/rea del rectngulo mnimo que comprende
todo el otolito), la convexidad A (rea del otolito/rea del polgono mnimo que comprende
todo el otolito) y la convexidad L= OP/ permetro del polgono mnimo que comprende el
otolito.

2.11. Ecomorfologa

Estudios recientes han demostrado la importancia de la forma de los otolitos en la evaluacin de

la estructura funcional de las comunidades de peces. Volpedo y Echeverra (2003), Langerhans
et al. (2004), Monteiro et al. (2005), Clabaut et al. (2007), Volpedo et al. (2008) y Lombarte et
al. (2010) desarrollaron anlisis para poner a prueba el significado y el valor de las relaciones
entre la forma de los otolitos y las caractersticas ecolgicas de los peces. Al mismo tiempo
estos anlisis se utilizaron para medir la variabilidad de la diversidad biolgica en el tiempo y en
el espacio (Neige 2003, McClain et al. 2004, Lombarte et al. 2012). La distribucin espacial de
las formas de los peces (y sus otolitos) permite evaluar la complejidad estructural de las
comunidades y tambin los cambios resultantes de disturbios naturales y antrpicos (Lombarte
et al. 2012). Estos estudios usan conceptos de morfologa geomtrica basada en el anlisis de
puntos homlogos (cf. Captulo 3), los cuales describen la forma de un pez a travs de la
posicin de caracteres morfolgicos (Rohlf y Marcus 2003).
La ecomorfologa o morfologa ecolgica se basa en la premisa de que la ecologa de un
organismo est relacionada con su forma, es decir, existe una fuerte interaccin entre los
factores endgenos y del entorno en que vive, permitiendo el estudio de la diversidad en varios
niveles: (i) entre los individuos de la misma especie; (ii) entre las distintas especies; (iii) entre
los gremios y (iv) entre las comunidades. Las diferencias morfolgicas presentes (en el cuerpo
del pez o en otolitos) indican estrategias adaptativas diferentes, debido a la forma de un
organismo (o de su otolito) estar fuertemente relacionada con su taxonoma, debido a la
influencia de los factores filogenticos.
Recientemente Recasens et al. (2006), Lombarte et al. (2012), Farr et al. (2013) desarrollaron
ndices morfo-geomtricos (Ecomorphological Diversity Index - EDI, Morphological Richness -
MR) para peces, incluyendo la caracterizacin general de la forma del cuerpo, cabeza, ojos, boca
12
Originalmente parte del Captulo 3 Morfometra de otolitos.

46
y la posicin y longitud de las aletas, que proporcionan una visin de la estructura de los
ensambles, los procesos ecolgicos y evolutivos de la estructura.
Adems del anlisis morfo-funcional de los peces, nuevos ndices morfolgicos, basados en
anlisis de contorno de los otolitos sagitta han permitido la evaluacin de la diversidad de peces
y ensambles en diferentes escalas temporales. Por su funcin en la audicin y en la natacin de
los peces, los otolitos conservan elementos qumicos del agua, cuya absorcin est influenciada
por factores ambientales, filogenticas y funcionales (Nolf 1985), reflejando esto en los mismos.
El anlisis del contorno de los otolitos ha sido ampliamente utilizado para la identificacin de
ecotipos como una herramienta para la discriminacin y el manejo de stocks pesqueros; como
por ejemplo, en China (Agera y Brophy 2011), en Australia (Fergusson et al. 2011) y en el
Mar Mediterrneo Occidental (Radhakrishnan et al. 2012). Capoccioni et al. (2011) estimaron
los efectos ontogenticos y ambientales sobre la variabilidad morfolgica de otolitos de anguilas
en Italia. Tuset et al. (2014) usaron los otolitos sagitta y el dimetro del ojo para caracterizar
dos especies de peces de profundidad del gnero Aphanopus spp. Vignon (2012) analiz la
interaccin entre el crecimiento del otolito de Lutjanus kasmira y las variables ambientales en la
Polinesia Francesa.
Durante un taller realizado en el marco del 5th International Otolith Symposium13, fueron
presentados varios estudios que estn siendo desarrollados utilizando el anlisis de la
morfologa geomtrica de otolitos, usando diferentes tcnicas, entre ellas: anlisis del contorno,
anlisis de Fourier, puntos homlogos, wavelets, simulacin de Monte Carlo, clasificacin
automtica e ndices de forma. Debido a la gran complejidad de estos anlisis, recomendase
consulta a los originales.

Agradecimientos

A todos los investigadores del LABIC que han estado trabajando arduamente en las diversas
reas relacionadas con el estudio de los otolitos y, especialmente, a aquellos que contribuyeron
en la preparacin de este captulo: Cesar Santificetur, Valeria Conversani, Carolina Siliprandi,
Marina Brenha-Nunes y Alexandre Arackawa.

13
mirar IOS2014 Book of Abstracts.pdf.

47
ANEXO 1. Clasificacin de los otolitos sagittae

Con el permiso de los autores y procurando utilizar una clasificacin que permita comparar los distintos
estudios, presentamos a continuacin 15 caractersticas que permiten describir la morfologa de las
sagittae (basado en Tuset et al. 2008 y Assis 2004).

Forma del otolito

Las lneas que marcan la silueta de los otolitos, sin considerar pequeos detalles y muescas en los bordes
y relieves del rostro, definen el formato general de los otolitos. Los otolitos tienen una forma muy variada
y pueden clasificarse en veinticuatro tipos diferentes, como se muestra en la Figura 2.7. Sin embargo,
algunos otolitos no pueden ser asignados a un solo tipo de forma, teniendo formas intermedias. En este
caso, se debe indicar que los otolitos presentan caractersticas de ambos tipos de forma.

1 2 3 4

5 6 7 8

9 10 11 12

13 14 15 16

17 18 19 20

21 22 23 24

Figura 2.7 Clasificacin de la forma de los otolitos. Adaptado de Tuset et al. (2008). 1: reloj
de arena, 2: lobado, 3: piriforme, 4: alto, 5: cuneiforme, 6: irregular, 7: cuadrado, 8: triangular,
9: discoidal, 10: elptico, 11: oval, 12: semicircular, 13: romboidal, 14: pentagonal, 15:
hexagonal, 16: fusiforme, 17: sagital, 18: lanceolado, 19: rectangular, 20: forma de bala, 21:
trapezoidal, 22: forma de lanza, 23: reniforme, 24: oblongo.

48
Regin anterior del otolito

La parte anterior de los otolitos es la porcin que va desde el centro de los otolitos hacia
adelante. La Figura 2.8 ilustra los tipos de regin anterior en la que pueden clasificarse los
otolitos:
- irregular: la regin anterior no tiene una forma definida;
- lanceolada: la regin anterior es simtrica y presenta una punta larga, similar a una lanza;
- oblicua: la regin anterior presenta una marcada asimetra, con el pice desviado claramente
hacia la regin dorsal o a la regin ventral;
- redonda: la regin anterior es regular y curva;
- puntiaguda: la regin anterior posee una punta marcada que forma un ngulo agudo;
- punta doble: es similar que en el caso de la regin puntiaguda, pero tiene dos ngulos agudos;
- aplanada: la regin anterior es plana;
- angulosa: la regin anterior presenta un ngulo agudo y corto formando un ngulo recto a
obtuso;
-enmarcada: en la regin anterior los otolitos presentan rostrum y antirostrum bien definidos y
una excisura marcada entre ellos;
- partida: la regin anterior es prolongada y gradualmente termina en una punta plana.

Regin posterior del otolito

La regin posterior es la porcin que va desde el centro del otolito hacia el borde posterior y su
clasificacin es igual a la de la regin anterior, pudiendo presentar pseudorostrum,
pseudoantirostrum y excisura caudalis, estructuras que como en la regin anterior, ayudan a la
clasificacin.

49
 1 2 3 4

5 6 7 8

9 10 11

Figura 2.8 Clasificacin de la regin anterior y posterior de los otolitos. Adaptado de Tuset et
al. (2008). 1: puntiagudo, 2: angular, 3: enmarcada, 4: partida, 5: punta doble, 6: redonda, 7:
aplanada, 8: oblicua, 9 y 10: lanceolada, 11: irregular.

Borde del otolito

El nmero de los bordes vara segn la especie, y es posible distinguir dos o ms, se clasifican
de acuerdo a su forma, como se muestra en la Figura 2.9.

1 2 3

4 5

6 7

Figura 2.9 Clasificacin de los bordes de los otolitos. Adaptado de Tuset et al. (2008). 1: liso,
2: irregular, 3: lobado, 4: dentado, 5: sinuoso, 6: serrado, 7: crenulado.

- liso: borde sin cualquier estructura visible;

- irregular: borde mostrando diferentes formas visibles, espaciados irregularmente;

50
- lobado: borde formado por estructuras ms o menos regulares que formar lbulos;
- dentado: borde compuesto por proyecciones ms anchas en la porcin marginal, similar a
dientes;
- sinuoso: borda formada por estruturas mais ou menos regulares;
- estriado: borde con "dientes" similares a los de una sierra;
- crenulado: borde formando ondas, ms o menos visibles.

Posicin del sulcus acusticus

El sulcus acusticus es una estructura con profundidad variable, generalmente bien marcada, que
divide los otolitos longitudinalmente en dos partes (regin ventral y regin dorsal). En relacin
con la posicin del sulcus acusticus en los otolitos puede clasificarse de tres maneras, como se
muestra en la Figura 2.10.

1 2 3

Figura 2.10 Clasificacin de la posicin del sulcus acusticus. Adaptado de Tuset et al. (2008).
1: inframedial, 2: medial, 3: supramedial.

- inframedial: el sulcus acusticus est prximo al borde ventral del otolito;

- medial: el sulcus acusticus est equidistante del borde ventral y del borde dorsal del otolito;
- supramedial: el sulcus acusticus est prximo al borde dorsal del otolito.

Orientacin del sulcus acusticus

La tendencia o la direccin general que presenta el sulcus acusticus se llama direccin de sulcus
acusticus y puede presentar en tres formas (Figura 2.11).

51
Figura 2.11 Clasificacin de las orientaciones del sulcus acusticus. A. horizontal (Decapterus
punctatus); B. descendente (Selene vomer) y C. ascendente (Menticirrhus americanus) (Ilustradora:
Silvia de Almeida Gonsales. Fuente: LABIC-IOUSP).

- horizontal: ostium y cauda en la misma lnea;

- descendente: la cauda est ms bajo que el ostium;
- ascendente: la cauda est ms alta que el ostium.

Forma del sulcus acusticus

La forma del sulcus acusticus, puede presentar 4 diferentes patrones, los cuales tiene en cuenta
el formato del ostium y de la cauda y la presencia o no de una constriccin dorsoventral en el
sulcus acusticus (constrictione sulci). Estas clasificaciones se ilustran en la Figura 2.12.

Figura 2.12 Clasificacin de la morfologa del sulcus acusticus. A. archeossulcoide

(Urophycis mystacea); B. pseudo-archeosulcoide (Pellona harroweri); C. homossulcoide
(Malacocephalus laevisi) e D. heterossulcoide (Ctenosciaena gracilicirrhus) (Ilustradores: A. e C.

Jssica Falchi Caador; B. e D. Silvia de Almeida Gonsales. Fuente: LABIC-IOUSP).

52
- archeossulcoide: sulcus no presenta uma divisin marcada entre el ostium y la cauda, ya que la
constrictione sulci es inexistente;
- pseudo-archeossulcoide: sulcus posee una constrictione sulci poco evidente, pero el ostium y
la cauda son claramente distinguibles;
- homosulcoide: sulcus com el ostium y la cauda evidentes, semejantes y simtricos;
- heterosulcoide: sulcus com el ostium y la cauda evidentes, pero com diferentes formatos.

Abertura del sulcus acusticus

El sulcus acusticus se clasifica de acuerdo con el tipo de abertura que presenta (Figura 2.13).

Figura 2.13 Clasificacin de la abertura del sulcus acusticus. Adaptado de Tuset et al. (2008).
1: ostial, 2: caudal, 3: pseudo-ostiocaudal, 4: mesial, 5: pseudo-ostial, 6: para-ostial, 7:
ostiocaudal.

- ostial: abertura del sulcus acusticus amplia em la region anteriori del otlito y em la region
posterior cerrada. Cuando el colliculum pasa del borde del otolito el sulcus se considera abierto;
- caudal: abertura en la regin posterior del otolito y la regin anterior cerrada;
- pseudo-ostiocaudal: los dos extremos estn muy cerca a los bordes de la regin anterior y
posterior de los otolitos, no existen aberturas o bien existen unos estrechos canales, llamados
canalis ostii y canalis postcaudalis;
- mesial: No hay ninguna abertura y los lmites del sulcus acusticus estn cerca del borde del
otolito;
- pseudo-ostial: No hay ninguna abertura, sin embargo los lmites del sulcus acusticus en la
regin anterior se confunden con el borde del otolito;
- para-ostial: a abertura se reduce a un pequeo canal en la parte anterior del otolito;
- ostiocaudal: presentan ambas aberturas, tanto en la parte anterior como en la regin posterior
de los otolitos.

53
Forma del colliculum

El colliculum es un depsito de carbonato de calcio con espesor variable, que est en la base del
sulcus acusticus. La Figura 2.14 ilustra el tipo de colliculum posibles.

Figura 2.14 Caracterizacin de la forma del colliculum. A. Urophycis brasiliensis; B.

Malacocephalus occidentalis; C. Scomber japonicus. (Ilustradores: A. e B. Jssica Falchi Caador; C. Silvia de
Almeida Gonsales. Fuente: LABIC-IOUSP).

- unimrfico: colliculum plano e indivisible;

- homomrfico: colliculum com dos collicula separados, pero similares;
- heteromrfico: colliculum com dos collicula de forma y/o dimensiones diferentes.

Ostium

El ostium es la regin del sulcus acusticus limitado por collum en su porcin posterior. Pueden
clasificarse en nueve tipos diferentes (Figura 2.15).

1 2 3

4 5 6

7 8 9

Figura 2.15 Caracterizacin del ostium. Adaptado de Tuset et al. (2008). 1: doblado-cncavo,
2: doblado, 3: tubular, 4: lateral, 5: discoidal, 6: en forma de embudo, 7: rectangular, 8: oval-
circular, 9: elptica.

54
- doblado-cncavo: uno de los bordes del ostium es recto o tiene una curva regular, mientras que
el otro es cncavo o presenta un pliegue visible;
- doblado: similar al anterior, pero en uno de los bordes hay un pliegue no cncava;
- tubular: las dos bordes de la abertura son paralelas;
- lateral: los bordes se abren cerca del collum en un ngulo cerca de 90 grados;
- discoidal: similar a un disco;
- en forma de embudo: similar a un embudo;
- rectngular: forma similar a un rectngulo;
- oval- circular: forma redonda, similar a un huevo;
- elptica: tiene una forma similar a una elipse.

Cauda

La cauda es una estructura situada despus de collum, en la regin posterior del sulcus
acusticus. Esta estructura es clasificada en diez tipos (Figura 2.16):

1 2 3

4 5 6

7 8 9 10

Figura 2.16 Clasificacin de la cauda. Adaptado de Tuset et al. (2008). 1: tubular, 2: elptica,
3. oval-circular, 4: recta, 5: curva, 6: sinuosa, 7: levemente curva, 8: moderadamente curva, 9:
fuertemente curva, 10: doblada.

- tubular: los bordes de la cauda son paralelos y pueden ser rectos o curvos. Este tipo de cauda
puede subdividirse en:

55
- recta: no hay ninguna curva;
- sinuosa: hay curvas sinuosas;
- curva: dividido en cuatro tipos:
- levemente curvada: la cauda es posee una curva con ngulo de 30;
- moderadamente curvada: la cauda es posee una curva entre 30 y 60;
- fuertemente curvada: la cauda es posee una curva entre 60 y 100;
- doblada: la cauda es curvada ms de 100;
- elptica: la cauda es larga y elptica;
- oval-circular: la cauda es de forma circular, similar a un huevo.

Rostrum

El rostrum es una protuberancia, generalmente aguda que se prolonga de la parte anterior del
borde ventral. Cuando se presenta en la regin posterior es llamado pseudorostrum. El rostrum,
cuando presente, se puede clasificar como: poco desarrollado, desarrollado y muy desarrollado.

Antirostrum

Es una protuberancia redondeada angulosa o cnico, generalmente ms pequea que el rostrum,

situada como prolongacin del borde dorsal de los otolitos. El rostrum y el antirostrum estn
separados por una escotadura llamada excisura. Si esta misma estructura se encuentra en la
regin posterior del otolito se llama pseudoantirostrum y su clasificacin es igual a la del
rostrum.

Perfil del otolito

La clasificacin del perfil del otolito se efecta a travs de la relacin entre la cara interna y
externa, pudiendo tener cuatro formas, como se muestra en la Figura 2.17.

56
Figura 2.17 Clasificacin del perfil del otolito. A: plano (Merluccius hubbsi); B biconvexo
(Ctenosciaena gracilicirrhus); C: plano-convexo (Stellifer brasiliensis); D: cncavo-convexo
(Selene setapinnis) (Ilustradores: A. Jssica Falchi Caador; B. C. e D. Silvia de Almeida Gonsales. Fuente: LABIC-IOUSP).

- plano: cuando las dos caras son planas;

- biconvexo: cuando las dos caras son convexas;
- plano-convexo: cuando una cara es convexa y la otra es plana;
- cncavo-convexo: donde una cara es cncavo y la otra cara es convexa.

Orientacin del rostrum y del antirostrum

Segn la relacin de la direccin entre rostrum y el antirostrum cuando se examina el perfil

dorsal de los otolitos, se pueden clasificar como (Figura 2.18):

57
Figura 2.18 Clasificacin de la orientacin del rostrum e antirostrum. A. concordante
(Engraulis anchoita); e B. discordante (Sardinella brasiliensis) (Ilustrador: Alexandre Yoshihiro Gomes
Arackawa Fuente: LABIC-IOUSP).

- concordantes: cuando el rostrum y el antirostrum estn orientados en la misma direccin;

- discordantes: cuando el rostrum y el antirostrum estn orientados en direcciones diferentes.

58
3. MORFOMETRA DE OTOLITOS

Antoni Lombarte y Vctor Tuset

Sumario
3.1. Introduccin.........................................................................................................................60
3.2 Biometras.............................................................................................................................60
3.2.1 Biometras lineales.............................................................................................................60
3.2.2 rea, permetro y peso.......................................................................................................64
3.2.3 Relacin entre magnitudes.................................................................................................65
3.2.4 ndices biomtricos y de forma..........................................................................................69
3.3 Anlisis de la forma...............................................................................................................70
3.3.1 Forma y tamao..................................................................................................................70
3.3.2 Obtencin del contorno......................................................................................................71
3.3.2.1 Calidad de la imagen.......................................................................................................71
3.3.2.2 Extraccin del contorno..................................................................................................73
3.3.2.3 Coordenadas polares.......................................................................................................74
3.3.2.4 Coordenadas cartesianas.................................................................................................75
3.3.2.5 Reflexin parcial.............................................................................................................75
3.3.3 Extraccin de caracteres o anlisis del contorno................................................................76
3.3.3.1 Descriptores de Fourier...................................................................................................77
3.3.3.2 Wavelets..........................................................................................................................79
3.3.4 Anlisis de puntos homlogos............................................................................................81
3.5 Eliminacin del efecto talla en el anlisis de contorno.........................................................83
3.6 Aplicaciones de la morfometra de otolitos...........................................................................84
3.6.1 Variaciones inter-especficas: identificacin de especies y sus aplicaciones.....................85
3.6.2 Variaciones intra-especficas: la identificacin de stocks pesqueros.................................87
3.6.3 Ecomorfologia y morfologa funcional..............................................................................87
3.6.4 Ecologa de comunidades y biodiversidad.........................................................................89
3.6.5 Momento actual y perspectivas de futuro: el anlisis en 3 dimensiones ya est aqu........90
Agradecimientos.........................................................................................................................91

59
3.1. Introduccin

El uso de morfometras en organismos y estructuras biolgicas, como son los otolitos, est
asociado al desarrollo tecnolgico en la adquisicin, procesamiento y anlisis de imgenes
digitales, as como en la mejora de la velocidad y capacidad de los procesadores informticos.
De tal modo, que la complejidad en las medidas y en los anlisis matemticos ha aumentado
proporcionalmente con dicho avance. La biometra o otolimetra14 se emplea en la
cuantificacin de la variabilidad y similitud de los otolitos, y permite la descripcin,
estandarizacin e integracin de datos morfolgicos con otros de carcter fisiolgico, molecular
y ecolgico. Dicho campo de la ciencia es ampliamente utilizado en la identificacin de stocks
(Bird et al. 1986) y especies (Lombarte y Castelln 1991), en la determinacin del sexo y la
edad de peces telesteos (Cardinale et al. 2004), en el establecimiento de relaciones
filogenticas (Gaemers 1984), en estudios paleontolgicos (Nolf 1985), en el esclarecimiento de
redes trficas (Frost y Lowry 1981), en el anlisis de la variabilidad inducida por factores
adaptativos o ecomorfologa (Gauldie 1988) y en la caracterizacin de la diversidad de
comunidades (Tuset et al. 2015a).

3.2 Biometras

3.2.1 Biometras lineales

Histricamente, los primeros trabajos biomtricos en otolitos se basaron en medidas lineales.

stas se llevan a cabo sobre una proyeccin ortogonal del otolito sin tener en cuenta la
curvatura, la cual puede ser muy pronunciada en algunos grupos de Telesteos como en los
lutjnidos (Figura 3.1A). A partir de dicha proyeccin ortogonal se determinan los dos ejes
mayores: la longitud mxima y a la altura o ancho mximo perpendicular. Debido al sesgo que
pueden producirse por una proyeccin ortogonal incorrecta es importante utilizar siempre la
misma cara del otolito, siendo norma general el empleo de la cara interna o medial, la cual se
caracteriza por la presencia del sulcus acusticus (Figura 3.1A).

14
Trmino creado por Gaertner (1982).

60
Figura 3.1 - Otolito sagitta de Lutjanus argentimaculatus. (A) Vision dorsal donde se muestra la
curvatura del otolito. (B) Proyeccin ortogonal de la cara interna. A = cara anterior, D =
posicin dorsal, I = cara interna.

Si estas medidas se toman a partir de la tangente de los puntos ms extremos hablamos de

dimetro de Feret, y son las ms utilizadas (Figura 3.2). Estas medidas se pueden obtener con un
calibre de precisin o mediante sistemas digitales muy sencillos, previo calibrado de la imagen.
En todos los casos, es muy importante estandarizar la posicin del otolito previamente a la toma
de las medidas. Otras medidas lineales se basan en las caractersticas anatmicas de las distintas
partes del otolito, y en especial del sulcus acusticus, como por ejemplo: la longitud del rostrum,
definida como la distancia entre el extremo anterior del otolito y la proyeccin del extremo ms
interno de la excisura ostii, la longitud y anchura del surco, la longitud de la cauda (parte
posterior del surco) y longitud del ostium (parte anterior del surco) (Lombarte y Lleonart 1993,
Volpedo y Echeverra 2000, 2003) (Figura 3.2B,C). Dado que estas medidas estn asociadas a
caracteres morfo-funcionales de los otolitos son utilizadas normalmente en estudios de ndole
ecomorfolgico (ver apartado 3.4.3). En especies con otolitos muy gruesos, como los
pertenecientes a las especies de corvinas (Sciaenidae), Gadiformes o Ophidiiformes (Gaemers
1984, Nolf 1985), se suele medir adicionalmente el grosor o espesor mximo, es decir, la
mxima distancia entre la cara lateral externa (extremo distal) y la cara lateral interna (extremo
medial) del otolito (Figura 3.2D).
Existe una nueva generacin de medidas lineales a partir de puntos homlogos que definen las
caractersticas ms importantes del otolito (Reichenbacher et al. 2007, Reichenbacher y
Reichard 2014): la longitud de la lnea situada en el punto ms prominente del rostrum (Figura
3.3: l-l); la longitud de la lnea situada en el punto ms prominente del antirostrum (Figura 3.3:

61
d-d); la longitud de la lnea horizontal situada en el punto ms entrante de la excisura ostii
(Figura 3.3: m-m); la longitud de la lnea vertical situada en el punto ms alto del margen
dorsal (Figura 3.3: h-h); la longitud entre la interseccin del punto ms interno de la excisura
ostii y el margen dorsal (Figura 3.3: m-a); la longitud entre la interseccin del punto ms interno
de la excisura ostii y el margen ventral (Figura 3.3: m-r). Ests medidas se pueden
complementar con otras medidas lineales secundarias y con los ngulos generados entre ellas.

62
Figura 3.2 - Medidas biomtricas ms comumente utilizadas. (A) Representacin del contorno
externo y del sulcus acusticus del otolito sagitta de Lutjanus argentimaculatus por su cara
interna. (B) Medidas del otolito, OL = longitud del otolito, OH = altura del otolito, RL =
longitud del rostrum, OP = permetro del otolito, OA = rea del otolito. (C) Medidas del sulcus
acusticus, SsL = longitud del sulcus, SH = altura del sulcus, L ostium = longitud del ostium, L
cauda = longitud de la cauda, SP = permetro del sulcus, SA = rea del sulcus, A ostium = rea
del ostium, A cauda = rea de la cauda. (D) Vista dorsal del contorno del otolito sagitta del
escianido Otolithes ruber, GO = grosor del otolito. A = posicin anterior, D = posicin dorsal,
I = cara interna.

Figura 3.3 - Medidas lneales propuestas por Reichenbacher et al. (2007) en el otolito sagitta de
Lutjanus argentimaculatus basadas en puntos homlogos del contorno del otolito. A = posicin
anterior, D = posicin dorsal.

63
3.2.2 rea, permetro y peso

Aunque a partir de dibujos con cmara clara se haba obtenido la posibilidad de medir el rea de
los otolitos, no es realmente hasta la revolucin digital - finales de la dcada de 1980 - cuando
se empieza a realizar medidas del rea y permetro (Gauldie 1988, Lombarte 1992). stas
requieren un calibrado previo, en la que se establece el nmero de pixeles que contiene una
unidad de medida unidimensional, que corresponde a la escala en milmetros dada la dimensin
de los otolitos. Esto implica que las imgenes que se fotografen deben contener una referencia
o escala. Tal y como ya fue comentado, la imagen tambin tiene que ser posicionarse de forma
ortogonal y estandarizada.
Una vez es obtenida la imagen, las principales medidas que se tomar de la misma son: el rea
total del otolito (desde su cara interna o medial), el rea del sulcus acusticus, el rea de la cauda
y el rea del ostium (Figura 3.2B,C). La obtencin de datos del sulcus acusticus puede ser
compleja, y requiere habitualmente trabajar con dibujos obtenidos con la cmara clara o sobre la
imagen digitalizada, ya que es muy difcil obtener el perfil ntido del mismo con una fotografa
y separarlo a travs de sistemas de anlisis de imagen del resto de la superficie del otolito. Otro
de los problemas que existen es la alteracin del contorno del sulcus producido por variaciones
en el ngulo de incidencia de la luz cuando se captura una imagen (Figura 3.4). Los permetros
se pueden obtener de forma automtica mediante diversos programas de anlisis de imagen,
siempre y cuando las imgenes estn bien contrastadas con el fondo. Tal como ocurre con la
medida de las reas, si se quiere obtener el permetro del surco es necesario dibujarlo
previamente.

64
Figura 3.4 - Aspecto diferenciado del sulcus acusticus segn la direccin de incidencia de la luz
(flecha blanca) en un otolito sagitta de Trachurus mediterraneus. (A) Con luz incidente en el eje
antero-posterior del otolito, el sulcus es poco percetible. (B) Con luz incidente en eje dorso-
ventral la forma del sulcus est ms definida.

Finalmente, el peso se obtiene con el otolito completamente limpio y seco mediante una balanza
analtica, con una precisin de microgramos. El peso se ha revelado como una buena variable
para determinar la edad (Boehlert 1985, Cardinale et al. 2004). Dada la influencia de factores
ambientales en el crecimiento del otolito (Mosegaard et al. 1988), tambin se ha empleado
como parmetro fundamental para la determinacin de stocks y poblaciones (Stransky et al.
2008, Tuset et al. 2006). Adems, constituye una excelente variable para mejorar la
clasificacin e identificacin de especies (Sadighzadeh et al. 2012a, Tuset et al. 2013).

3.2.3 Relacin entre magnitudes

El crecimiento se puede definir como el aumento de las magnitudes somticas de un individuo

respecto al tiempo o edad. La variacin de la forma de los individuos con la edad se puede
expresar a travs de las variaciones existentes entre las distintas magnitudes somticas de un

65
organimo y se conoce como crecimiento relativo. La frmula general que expresa la relacin
entre dos magnitudes se expresa mediante una ecuacin potencial (Huxley y Teisser 1936):

y= axb
Dnde:
a y b = parmetros de la ecuacin;
x = variable independiente;
y = variable independiente.

Pero, esta ecuacin es solo una relacin formal entre dos variables biomtricas. Por ejemplo, si
se comparar el dimetro de una esfera con su volumen, se estara confrontando una medida
unidimensional (o longitud) con un volumen (o medida tridimensional). Siguiendo el ejemplo
de la esfera, el parmetro b expresara la relacin entre ambas magnitudes dimetro y volumen,
la cual equivaldra a 3. Si se quisiera expresar la relacin entre una magnitud de una dimensin
y otra de dos dimensiones, el parmetro b equivaldra a 2, y en el caso de la relacin entre dos
magnitudes unidimensionales el valor de b tendera a 1. Si esta relacin es constante a lo largo
del tiempo, es decir la forma no cambia, la relacin es isomtrica, tomando b el valor de 1, 2 o 3
dependiendo de las dimensiones de las magnitudes estudiadas. Sin embargo, en muchos casos la
forma de un organismo o de un rgano puede cambiar a lo largo de su ciclo vital15, en tal caso la
relacin es de tipo alomtrico. Si la relacin entre una magnitud estudiada y otra de referencia
(variable independiente, por ejemplo, longitud del pez) se hace menor a lo largo del
crecimiento, se denomina alometra negativa, y el valor b ser significativamente menor al de
isometra. Al contrario, si la magnitud estudiada aumenta respecto a la magnitud de referencia
se producir alometra positiva. En este caso el valor b es significativamente mayor al de
isometra. La alometra puede ser verificada de modo sencillo con la prueba estadstica de la t de
Student (cf. Captulo 7).
En consequencia, la existencia de variaciones de tamao absoluto a lo largo del crecimiento (en
el caso de los otolitos, su tamao aumenta a medida que crece el pez) conlleva, si se producen
alometras, variaciones en la forma (Figura 3.5). En estos casos, las variaciones individuales de
tamao y las variaciones alomtricas pueden producir efectos no deseados en los anlisis
multivariantes, enmascarando diferencias entre los grupos de estudio (especies, poblaciones,
stocks o sexos). Por ello, es conveniente usar mtodos que eliminen ambos efectos, tamao y
alometra, como paso previo a un anlisis multivariante de los datos biomtricos.

15
A este proceso se denomina cambios ontognicos.

66
Figura 3.5 - Crecimiento del otolito sagitta de Lampanyctus crocodrilus. (A) Crecimiento
absoluto. La barra blanca corresponde a 1 mm. (B) Crecimiento relativo de la altura del otolito
en relacin a su longitud. El coeficiente b = 0,826, significativamente inferior a 1, indica un
crecimiento alomtrico negativo de modo que en los ejemplares mayores la altura relativa del
otolito disminuye en relacin a su longitud, modificando su forma general.

Este problema se ha solucionado tradicionalmente dividiendo las biometras por la variable

independiente. Sin embargo, con esta operacin la variacin alomtrica a lo largo del tamao se
sigue manteniendo. Otros mtodos parten del supuesto que el primer componente de un anlisis
de componentes principales representa el tamao (Jolicoeur y Mosimann 1960), de modo que
eliminando el primer componente se elimina el efecto tamao. No obstante, el primer
componente puede conservar tambin factores relacionados con la forma, y tampoco hay certeza
absoluta que los otros componentes no estn influenciados por la talla (Mosimann y James
1979). Una tercera familia de mtodos (Lombarte y Lleonart 1993, Lleonart et al. 2000)
consisten en transformar los parmetros iniciales a parmetros normalizados a una talla
determinada teniendo en cuenta la variacin alomtrica grupal para ello se realizan los
siguientes pasos:
- se calcula el crecimiento relativo la variable dependiente y con relacin a la variable
independiente x (Figura 3.6A);
- se transforma cada punto x-y en un nuevo punto normalizado teniendo en cuenta la funcin
potencial a travs de la frmula y= y (x0/x)b en el que x0 es el punto de normalizacin, por

67
ejemplo una talla normalizada para todo el grupo (Figura 3.6B);

- los datos finales corresponden a individuos de la misma talla normalizada. Esta normalizacin
se debe repetir para cada biometra y grupo estudiado (Figura 3.6C).

En la Figura 3.7 se observa como los otolitos de cada especie de Merluccius presentan una
menor dispersin despus de la normalizacin propuesta por Lleonart et al. (2000) en la que se
eliminado los efectos de la talla y de la alometria.
En la literatura existen otros procedimientos diferentes, pero enmarcados en la misma filosofa
que el anterior, basados en pendientes (b) comunes o particulares, as como en la utilizacin de
los residuos de dichas relaciones (Begg et al. 2005, Stransky y MacLellan 2005).

A
rea del otolito (mm2)

Longitud total del pez (mm)

B
rea del otolito (mm2)

Longitud total del pez (mm)

C
rea del otolito (mm2)

Longitud total del pez (mm)

Figura 3.6 - Eliminacin del efecto talla y alometria en medidas biomtricas. (A) Se calcula el
crecimiento relativo para cada medida y (rea del otolito) con relacin a una variable
independiente x (longitud del pez) siguiendo una ecuacin potencial. (B) Se transforma cada
punto en un nuevo punto normalizado siguiendo la variacin alomtrica. (C) Los datos

68
transformados pasan a corresponder a individuos de una misma talla de referencia (en ejemplo
250 mm).

eje 2 (1,9%)

eje 1 (96,5%)

Aguas templadas Aguas fras

B
eje 2 (10,7%)

eje 1 (79,5%)

Aguas templadas Aguas fras

Figura 3.7 - Anlisis biomtrico de otolitos sagittae de seis especies de merluzas (Merluccius
spp.). (A) Con medidas no normalizadas al tamao y a la alometra, toda la variabilidad se
concentra en el eje 1 (96,5% de la variabilidad total) que representa el tamao absoluto del
otolito; en este anlisis no se aprecian diferencias entre especies. (B) Con medidas normalizadas
al tamao y a la alometra se observan una mayor cohesin en la distribucin de puntos para
cada especie, diferencindolas en funcin del tamao relativo en relacin al tamao del pez.

3.2.4 ndices biomtricos y de forma

Los ndices son valores obtenidos a partir de la relacin entre variables, y se desarrollaron con el
fin de caracterizar mejor las particularidades de la morfologa de los otolitos. El ndice ms
sencillo es el aspect ratio (Templeman y Squire 1979) que establece la relacin entre la altura
en relacin a la longitud del otolito (Figura 3.2B). Si el otolito es tan largo como alto el aspect
ratio tiende a 1, si es ms largo que alto es inferior a 1, y si es ms alto que largo es superior a 1.

69
Otros ndices fciles de interpretar son:
- la longitud relativa del otolito L = (OL/FL) 100, siendo OL la longitud del otolito y FL la
longitud del pez (Volpedo y Echeverra 2003);

- el ndice IORS = (OA/FL2) 1000, siendo OA el rea del otolito normalizada a una talla estndar
FL0 (Lombarte y Cruz 2007);
- el ndice R = (RL/OL) 100, siendo RL la longitud del rostrum (Volpedo y Echeverra 2003).

Otros autores (Messieh 1972, Yefanov y Khorevin 1979) han desarrollado otros ndices ms
complejos basados en distancias y ngulos entre puntos determinados de los otolitos que fueron
utilizados para diferenciar stocks, pero no son empleados hoy en da. Otros ndices pueden ser
verificados en el Captulo 2, incluyo nuestro apartado insertado all sobre el tema (apartado
2.10.6).
Tambin existen otro grupo de ndices derivados del anlisis de Fourier del contorno (Tuset et
al. 2006). Esta familia de ndices si bien se aproximan a la forma global del otolito, es poco
sensible a caractersticas locales del contorno que pueden ser fundamentales en la
caracterizacin del otolito. Por otro lado, a diferencia de los ndices ms sencillos, son difciles
de interpretar y los resultados difieren poco de los obtenidos directamente de las biometras
normalizadas de las que derivan dichos ndices. En cualquier caso, no son recomendables para
estudios finos, ms cuando existen procedimientos hoy en da mejores.

3.3 Anlisis de la forma

3.3.1 Forma y tamao

Cuando se hace referencia a la forma y el tamao de un objeto es importante definir

previamente ambos trminos. Tamao es la relacin absoluta o relativa de dos magnitudes,
mientras que forma es la configuracin de un objeto. Tradicionalmente, el tamao se expresa
con unidades de medidas, sin embargo qu unidades definen la forma? Su expresin
matemtica es mucho ms compleja y se basa en la geometra, conforme definicin de
Thompson, en 1917. Los primeros intentos de definir la forma de los otolitos (Gaertner 1982) se
basaron en el empleo de las biometras y sus ndices derivados, sin embargo, stos no describen
la forma de un otolito, y en todo caso solo expresan la similitud con una forma geomtrica ideal.
Por otro lado los ndices generan ambigedades, de tal modo que a un mismo ndice (aspect
ratio, compactividad, etc.) le puede corresponder distintas formas (Figura 3.8).

70
 A

Figura 3.8 - Ambigedad de las medidas biomtricas clsicas en la definicin de la forma del
otolito. (A) 3 formas distintas con la misma longitud y altura de otolito. (B) 2 formas distintas
con idntica longitud, altura, rea y permetro.

En la dcada de 1980, y con la generalizacin de imgenes digitalizadas, y la susbstitucin de

imgenes dibujadas, se empezaron a desarrollar mtodos de anlisis de forma basados en la
descomposicin del contorno, fundamentalmente harmnicos de Fourier (Kuhl y Giardina
1982). Su desarrollo metodolgico se fundamenta en una simplificacin de una imagen de 2
dimensiones a una imagen unidimensional que sea ms fcil de analizar matemticamente. Dos
dcadas despus se empez a difundir una segunda familia de anlisis basados en la
comparacin de puntos homlogos (landmarks) (Bookstein 1991). Ambas familias han
demostrado una alta eficiencia para reproducir matemticamente una forma y, actualmente, se
emplean de forma extendida en el estudio de los otolitos con mayor xito que la biometra
multivariante.

3.3.2 Obtencin del contorno

3.3.2.1 Calidad de la imagen

Antes de plantear un estudio basado en imgenes de los otolitos es necesario obtener dichas
imgenes con una elevada calidad y una posicin anatmica estandarizada que facilite los
ulteriores anlisis. El principal requerimiento es que las imgenes estn bien contrastadas. Dado
que los otolitos son de color claro, se recomienda digitalizarlos contra un fondo oscuro,
preferente negro y homogneo (Figura 3.1), lo cual facilitar la determinacin correcta del

71
contorno. El contraste de una imagen puede mejorar con una luz polarizada incidente y,
posteriormente, puede ser tratada de forma digital. Tambin se advierte homogeneizar el fondo
con negro absoluto, ajustando el patrn RGB (rojo, verde e azul, de red, green y blue) en R=0,
G=0, B=0, para evitar problemas posteriores en la delimitacin del contorno. El uso de grafito,
no es recomendable pues elimina contraste entre el objeto y el fondo. Por otro lado, se ha de
evitar que la curvatura del otolito produzca una desviacin o error en los resultados. Este
problema se puede solucionar con el uso de un fondo blando que permita posicionar
ortogonalmente el otolito (Figura 3.9). Otras cuestiones que se debe tener en consideracin es
no trabajar con otolitos rotos o con restos de epitelio (sucios) que puedan alterar el contorno,
y analizar otolitos siempre del mismo lado anatmico (Lombarte et al. 2006). Aunque pueda
parecer obvio e incensario estas matizaciones, es lamentable la publicacin de imgenes
daadas o sucias. En el caso de especies simtricas se pueden utilizar ambos otolitos, e incluso
se pude utilizar uno de ellos si falta el otro (aunque no de forma sistemtica, solo ocasional)
siempre que se conviertan mediante una inversin horizontal. Esta opcin no se recomienda con
especies con otolitos asimtricos como los peces planos (Lychavov et al. 2008).

Figura 3.9 - Error en la forma ortogonal del otolito inducido por una diferente posicin del
otolito bajo la lupa binocular. En el ejemplo se muestra el mismo otolito sagitta de Lutjanus
argentimaculatus fotografiado en tres posiciones distintas. D = posicin dorsal, V = posicin
ventral. La flecha blanca indica el ngulo de la luz incidente.

72
3.3.2.2 Extraccin del contorno

La caracterizacin del contorno se basa en dos procedimientos bsicos: la extraccin del

contorno, es decir, obtener la representacin matemtica de la forma del contorno y la
extraccin de caracteres a partir de un conjunto de descriptores numricos que caractericen el
contorno (Piera et al. 2005).
La extraccin del contorno a partir de la imagen original (Figura 3.10A) implica varios pasos: la
segmentacin, que permite la separacin el otolito (objeto) del resto de la imagen (fondo); la
binarizacin, que consiste en la determinacin de la silueta del objeto o contorno (Figura
3.10B); la extraccin, que conforma la seleccin de los puntos que marcan el lmite (contorno)
entre la silueta del objeto y el resto de la imagen (fondo) (Figura 3.10C), y; la codificacin, que
conlleva una representacin unidimensional del lmite o contorno desde un punto determinado,
el cual debe siempre ser el mismo (Messieh y McDougall 1985, Bird et al. 1986, Doering y
Ludwing 1990). En esta fase es recomendable empezar por un punto fcil de referencia situado
en un extremo de la imagen, como el rostrum. La codificacin se puede realizar siguiendo
mtodos distintos: coordenadas polares, coordenadas cartesianas (Piera et al. 2005) o mediante
la reflexin parcial del contorno (Reig-Bolao et al. 2010).

73
Figura 3.10 - Extraccin del contorno a partir de una imagen. (A) Imagen digital del otolito
sagitta izquierdo de Scomber scombrus visto por su cara interna. (B) Imagen segmentada y
binarizada separarando el objeto (blanco) y el resto de la imagen o fondo (negro). (C)
Extraccin del contorno del objeto, es decir la seleccin de los puntos que marcan el lmite entre
el objeto y el fondo.

3.3.2.3 Coordenadas polares

Es el mtodo de extraccin del contorno ms extendido, y consiste en el clculo de la distancia

entre el contorno y el centro de gravedad16 del objeto. Cada distancia se calcula a partir de
ngulos iguales (Figura 3.11A) y el resultado final es un valor para cada punto del contorno
(Castonguay et al. 1991). Este mtodo permite una fcil reconstruccin de la imagen a partir de
los datos obtenidos, aunque su principal inconveniente es que si se el contorno del otolito tiene
fuertes irregularidades (concavidades o proyecciones) se pueden generar errores en la
linearizacin, y posteriormente en la reconstruccin de la imagen (Piera et al. 2015). Una
variante es el clculo de la distancia entre el centro de gravedad y el contorno a partir de
distancias equidistantes del lmite (Lombarte y Castelln 1991). En este caso, s que se detectan
bien concavidades del otolito pero la ulterior reconstruccin de la imagen es mucho ms
compleja.

16
Media aritmtica de todos los puntos x e y.

74
 puntos muestreados [n] angulos [n]

Figura 3.11 - Codificacin de un objeto, mediante el cual se pasa de una representacin de dos
dimensiones a una representacin numrica unidimensional. Existen dos mtodos bsicos de
codificacin: (A) coordenadas cartesianas, cada punto se describe con un valor determinado de x
e y; (B) coordenadas polares, cada punto refleja la distancia entre el permetro i el centroide o
centro de gravedad de la figura (media de los puntos x e y) para ngulos equidistantes.

3.3.2.4 Coordenadas cartesianas

Cada objeto se define por la combinacin de las coordenadas x-y, usando dos nmeros reales
para cada punto (Figura 3.11B). Con este mtodo los resultados son ms precisos, producen
menos errores y solucionan el problema de las irregularidades y la reconstruccin (Piera et al.
2005).

3.3.2.5 Reflexin parcial

Esta nueva propuesta de extraccin de contorno parte de imgenes normalizadas en tamao y

orientacin (Reig-Bolao et al. 2010, Harbitz y Albert 2015). Para ello, se produce una
reorientacin del otolito en su posicin horizontal, creando una imagen especular horizontal de
la figura inicial, que se unan por el extremo horizontal ms alejado del centro de gravedad
(generalmente el rostrum), y finalmente se construye una contorno lineal entre la mitad superior
del otolito y la imagen especular de la mitad ventral (Figura 3.12).

75
 A

Figura 3.12 - Codificacin del contorno de un otolito sagitta de Diplodus cervinus mediante el
mtodo de reflexin parcial. (A) Contorno del otolito izquierdo. (B) Creacin de una imagen
especular (reflexin). (C) Seleccin del perfil dorsal de la imagen original y del perfil ventral de
la imagen especular (reflexin parcial).

3.3.3 Extraccin de caracteres o anlisis del contorno

La segunda fase del anlisis de contornos consiste en la extraccin de datos numricos que
caractericen la forma de los contornos y que permitan ser analizados mediante mtodos
estadsticos. Para ello, se han desarrollado desde las ltimas dcadas del siglo XX distintos
mtodos de anlisis que veremos sucintamente en los apartados posteriores. Los mtodos ms
generalizados se basan en los descriptores de Fourier y sus diversas variantes (EFD, FFT) e
ndices derivados, si bien recientemente se han desarrollado descriptores multiescala.

76
3.3.3.1 Descriptores de Fourier

Los descriptores, coeficientes o harmnicos de Fourier se han usado desde 1980 para describir
la forma de organismos y estructuras biolgicas (Rohlf y Ferson 1983, Rohlf y Archie 1984), y
entre ellos los otolitos (Bird et al. 1986, Doering y Ludwing 1990, Castonguay et al. 1991,
Campana y Casselman 1993, Torres et al. 2000a, Stransky 2005). Parte del proceso previo de
linearizacin de una imagen bidimensional a una unidimensional. Esta lnea de datos (distancias
o coordenadas polares) se expresa matemticamente a travs de una serie polinmica de Fourier
para los componentes x e y de un punto, como definido por Kuhl y Giardina (1982):

2nt 2nt
x(t ) = a0 + an cos + bn sin
n =1 T T

2nt 2nt
y(t ) = c0 + cn cos + d n sin
n =1 T T
Dnde:
t = tiempo peridico;
T = tiempo peridico en un espacio determinado del contorno;
a y b = parmetros del componente x del contorno;
c y d = parmetros del componente y del contorno.

A partir de los coeficientes del polinomio se realiza una reduccin de los datos empleados,
buscando los que tengan una contribucin ms significativa al anlisis global de la forma. Si
bien un descriptor por si solo nos da poca informacin de la forma del otolito, a medida que se
aaden descriptores la informacin de la forma del objeto se hace ms precisa (Figura 3.13).
As, mediante los anlisis de Fourier se puede describir la forma del otolito con muy pocos
descriptores, siendo sta su mayor ventaja. Por otro lado, las series de Fourier son uniescalares,
es decir, para cada forma solo existe una escala de datos. Es conveniente que a su vez estos
descriptores estn poco influenciados por la ontogenia, para ello se deben descartar los que
estn correlacionados con el tamao o la edad del organismo (Castonguay et al. 1991, Stransky
2005, Stransky et al. 2008, Tuset et al. 2012) dejando los descriptores que presenten
caractersticas morfolgicas propias del grupo estudiado (stock, poblacin, especie) a lo largo
del crecimiento. No obstante, tambin pueden normalizarse utilizando las tcnicas del apartado
3.3.5.

77
Figura 3.13 - Reconstruccin mediante descriptores de Fourier de un contorno de otolito sagitta
de Scomber scombrus. Se observa que al aadir descriptores la forma obtenida se acerca a la
forma original.

Una variante de los descriptores de Fourier es la Fast Fourier Transform (FFT). Este mtodo
considera las coordenadas x-y como nmeros complejos (a + ib), siendo a el componente real e
ib el componente imaginario que representan la amplitud del coseno y el seno, respectivamente
(Christopher y Waters 1974, Parisi-Baradad et al. 2005).
A partir de los descriptores de Fourier se han generado tambin diversos ndices morfomtricos
que se han aplicado en el anlisis de otolitos (Tuset et al. 2006), tales como la elipticidad o
circularidad, calculada a partir de la distancia entre la elipse o crculo generada por los ejes
mayores y la elipse generada va la transformada de Fourier.
Los mtodos basados en harmnicos de Fourier y sus derivados han demostrado ser muy
eficientes en la diferenciacin de stocks (Bird et al. 1986, Castonguay et al. 1991, Campana y
Casselman 1993, Stransky et al. 2008), sin embargo tienen algunos inconvenientes,
especialmente en la interpretacin morfolgica del resultado. El principal problema que
presentan es que no existe una correspondencia entre un coeficiente o harmnico y un carcter
morfolgico concreto. Los anlisis morfolgicos son globales y no locales, por lo que solo el
conjunto de coeficientes tienen correspondencia con la forma analizada. Iwata y Ukai (2002)
indican que este dficit puede ser compensado comparando las representaciones grficas del
contorno medio de los grupos estudiados. Por otro lado, dado que normalmente se utilizan

78
coordenadas polares de ngulos equidistantes, el anlisis es poco sensible a las concavidades
profundas, por lo cual se pierde informacin. La simplificacin de forma en pocas variables es
una de las principales ventajas de los anlisis de Fourier, pero con el aumento de la capacidad de
procesado matemtico de los ordenadores se han ido desarrollando nuevos sistemas que
permiten anlisis ms detallados de la forma, como los anlisis multiescala.

3.3.3.2 Wavelets

Las transformadas de wavelets (WT) son anlisis multiescala de puntos locales de un contorno.
Los wavelets son el resultado de expandir una seal en una familia de funciones (Mallat 1991)
que representan las dilataciones y traslaciones de una funcin wavelet madre:

1
s(x) =
s s
Dnde:
= funcin con un soporte local en un rango limitado en el eje de abscisas;
= filtro de paso inferior;
S = parmetro de escala.

Esto permite a las WT detectar singularidades de diferentes tamaos en la funcin analizada. A

efectos prcticos, esto implica que los wavelets no solo detectan singularidades (concavidades y
convexidades), sino que pueden establecer su posicin. De este modo se pueden comparar
distintos contornos punto a punto, de modo que nos solo indica su grado disimilitud, sino la
posicin donde tal disimilitud se produce (Figura 3.14). Su aplicacin en los otolitos ha
mostrado ser muy eficiente tanto en la determinacin de especies como en la identificacin de
stocks (Parisi-Baradad et al. 2005, 2010, Sadighzadeh et al. 2014). La ventaja de ser un anlisis
multiescala es que se trabaja con todos los niveles de singularidades, desde escalas bajas que
detectan pequeos cambios en el contorno, a escalas altas que son sensibles a la forma general
del otolito, e incluso se puede seleccionar una sola escala o un pequeo conjunto de escalas que
contengan la informacin morfolgica que queremos analizar (Figura 3.14). La otra ventaja de
los wavelets es su condicin de anlisis local, razn por la cual se puede analizar la forma de un
contorno parcialmente y centrarse solo en una determinada rea (Figura 3.15) que sea
caracterstica del grupo comparado (Sadighzadeh et al. 2014), o que tenga un carcter funcional
como el rostrum o la excisura ostii (Tuset et al. 2015b).

79
 A

Figura 3.14 - Extraccin de caracteres numricos del contorno a partir del anlisis multiescala
de wavelets. (A) Proceso de codificicacin del contorno mediante 512 puntos. La codificacin
debe inciarse en el mismo punto en todos los otolitos analizados (en ejemplo el rostrum). (B)
Contorno codificado mediante coordenadas polares. (C) Representacin de las 9 escalas de
wavelets. Cada escala es sensible a distintas caractersticas de la forma.

80
Figura 3.15 - Seleccin de un segmento del contorno de un otolito sagitta de Lutjanus
argentimaculatus, a partir de un wavelet de escala 5.

Otros anlisis de contorno menos empleados son los anlisis de la curvatura (en ingls curvature
scale space, CSS) y la energa de desdoblamiento (en ingls bending) que mapea la evolucin de
los puntos de inflexin de un contorno que se van suavizando al incrementar las escalas de
aproximacin (Mokhtarian y Mackworth 1992). Hasta la fecha solo se ha aplicado
experimentalmente dando resultados parecidos a otros anlisis multiescala como los wavelets
(Parisi-Baradad et al. 2005). Una ventaja del bending es su sensibilidad al grado de rugosidad
del contorno del objeto (Piera et al. 2005).

3.3.4 Anlisis de puntos homlogos

El primer intento de interpretar los cambios morfolgicos en la ontogenia y la evolucin como

cambios matemticos fue desarrollado por DArcy Thompson en 1917 en On growth and form.
En esta magna obra se establecen los principios fundacionales sobre las aplicaciones
matemticas en los estudios morfolgicos e introduce conceptos como los puntos homlogos
que sern fundamentales para desarrollar la segunda gran lnea de anlisis de la forma de los
objetos, la geometra morfolgica. Tambin introduce otro concepto como las gradillas de
deformacin (en ingls thin-plate spline), donde un objeto se deforma (warped) en otro (Adams

81
et al. 2004), lo cual es muy til para analizar los cambios entre puntos homlogos.
Sin embargo, estas ideas no se desarrollaron hasta la dcada de 1980 cuando Fred Bookstein
combina aspectos del anlisis de puntos homlogos y la biometra en los anlisis box-truss17,
definiendo una estructura a partir de distancias lineales entre puntos homlogos (Bookstein
1991). En la ltima dcada del siglo XX, el anlisis de puntos homlogos ha evolucionado con
el concepto de morfologa geomtrica, en el que se analizan las variaciones entre puntos
homlogos de forma global y no a partir de distancias lineales. El mtodo de anlisis es bastante
complejo de explicar y no es objeto de este captulo, en este sentido se recomienda una lectura
ms pormenorizada del tema en, entre otros, Mitteroecker y Gunz (2009), Webster y Sheets
(2010), Adams et al. (2013) y Monteiro (2013). An as, y de forma simplificada, mediante un
anlisis generalizado de Procrustes (GPA) se produce una superposicin de configuracin de
puntos homlogos, escalados a un tamao y orientacin comn (Rohlf y Marcus 1993). A partir
de aqu se puede analizar las distancias Procrustes propiamente dichas o llevar a cabo un
anlisis de componentes principales para la comparacin relativa de las formas estudiadas
(Rohlf 2001, Meloro et al. 2008). Con el tiempo se ha introducido tambin el concepto de
puntos equidistantes18 (semilandmarks) (Zelditch et al. 2004), equivalente a los puntos con la
misma distancia de contorno, que es muy til en estructuras con escasos puntos homlogos o
puntos equidistantes entre puntos homlogos. Si bien en el estudio de otolitos, el uso de anlisis
de puntos homlogos no se ha generalizado tanto como el anlisis de contorno, esta viene
siendo empleado desde 2005 (Monteiro et al. 2005, Ponton 2006, Lombarte et al. 2010, Vignon
y Morat 2010), en trabajos que combinan el uso de puntos homlogos y de puntos equidistantes
(Figura 3.16A) de modo que los resultados obtenidos son similares a los anlisis de contornos,
con el valor aadido de contener informacin sobre la forma del sulcus acusticus, estructura que
aporta informacin de la especie y de su funcionalidad (Gauldie 1988, Lombarte 1992, Torres et
al. 2000b, Volpedo y Echeverra 2003).

17
Estructura compuesta por ms de tres lneas conectadas transversalmente y de forma diagonal entre partes de un
objeto.
18
Puntos de un objeto no relacionados con zonas homlogas pero que se pueden representar en el mismo.

82
 A

Figura 3.16 - Morfologa geomtrica, mtodos de determinacin de puntos homlogos y puntos

equidistantes. (A) Mtodo tradicional, donde se usan pocos puntos homlogos indicados por
letras, y muchos puntos equidistantes del contorno. (B) Nueva propuesta, en el que nmero de
puntos del contorno del otolito y del sulcus acusticus estn ms compensados; lo = puntos
homlogos del otolito, los = puntos homlogos de interseccin entre otolito i sulcus, so = puntos
equidistantes del otolito, ls = puntos homlogos del sulcus, ss = puntos equidistantes del sulcus.

El principal inconveniente de este mtodo se produce por el poco peso que tienen en los anlisis
multivariantes los puntos homlogos del sulcus acusticus en relacin con los puntos
equidistantes del contorno, mucho ms numerosos. Este problema se puede solventar aplicando
la metodologa de determinacin de puntos de Reichenbacher (2007) que reduce el nmero de
puntos equidistantes del contorno (Figura 3.16B). Los resultados obtenidos en anlisis
multivariantes con un nmero de puntos equiparable entre sulcus y contorno han demostrado ser
ms sensibles a la variabilidad inter-especfica y funcional (Tuset et al. 2015a).

3.5 Eliminacin del efecto talla en el anlisis de contorno

Al igual que ocurra con las medidas biomtricas, las resultados pueden estar influenciados por
la caracterizacin de los datos, bsicamente diferencias en las tallas o edades. Para datos

83
derivados de Fourier o wavelets, hay dos tipos de ajuste: mediante pendientes o mediante
residuos. En el primer caso, se compara la pendiente (b) de la relacin entre la variable
dependiente y la talla del pez de cada uno de los grupos a comparar mediante un anlisis de
covarianza (ANCOVA, Winer et al. 1991). Dependiendo si la pendiente es similar o no, la
solucin a la eliminacin del efecto de la talla. Partiendo de la siguiente ecuacin propuesta por
Bergenius et al. (2005) tenemos varias soluciones:

Oij adj = Oij + b ( FLij MFLj )

Dnde:
Oij, adj = variable morfolgica del otolito del individuo i ajustado a la talla media del grupo j;
Oij = variable morfolgica original del individuo i del grupo j;
b = pendiente de la relacin Oij:FLij comn para todos los grupos;
FLij = medida de la talla del pez del individuo i del grupo j;
MFLj = la talla media del pez del grupo j.

S las pendientes son iguales (ANCOVA, P > 0,05), se utiliza la pendiente comn para eliminar
el efecto de la talla. S las pendientes son distintas, el ajuste se hace de forma independiente para
cada grupo.
Este mtodo es comparable al explicado anteriormente en medidas biomtricas, por lo que
ambos son igual de vlidos. En cualquier caso, el mtodo es recomendable en estudios donde las
tallas de los peces sean muy parecidas. En caso contrario, la mejor opcin es un anlisis
multivariante de las variables dependientes con la talla del pez y el posterior empleo de los
residuos de dicha relaciones (Stransky y MacLellan 2005, Jnsdtir et al. 2006).
En morfologa geomtrica el efecto de la talla tambin debe ser testado mediante la relacin
lineal entre el centroide19 y talla (Ravosa y Profant 2000). Si los resultados indicasen una
correlacin, el efecto de la talla de los valores derivados del anlisis de componentes principales
de las distancias Procrustes es eliminado mediante la opcin del mtodo de los residuos.

3.6 Aplicaciones de la morfometra de otolitos

Diversos autores han evidenciado que la forma de los otolitos tiene caracteres especficos
(Schmidt 1968, Gaemers 1984, Nolf 1985, LAbe-Lund 1988), y en muchos casos, la
morfologa de los otolitos vara sensiblemente entre poblaciones, como en arenques (Messieh
1972, Postuma 1974), salmnidos (McKern et al. 1974, Neilson et al. 1985) y lutjanidos (Smith
1992). E incluso, se ha conseguido separar stocks pesqueros de forma eficiente a travs de la

19
Es la raz cuadrada de la suma al cuadrado de las distancias del conjunto de puntos homlogos de un objeto.

84
forma del otolito (Casselman et al. 1981, Bird et al. 1986, Castonguay et al. 1991, Campana y
Casselman 1993, Friedland y Reddin 1994, Rtz 1994, Colura y King 1995, Stransky et al
2008). La variabilidad morfolgica de los otolitos sagittae se ha relacionado con factores
intrnsecos como el sexo, la ontogenia y genticos (Lombarte et al. 2003, Cardinale et al. 2004)
y factores ambientales, especialmente temperatura, la profundidad y salinidad (Wilson 1988,
Lombarte y Lleonart 1993, Begg y Brown 2000, Cardinale et al. 2004).
No obstante, el estudio de los otolitos se debe entender sobre todo desde una vertiente funcional
como parte del odo interno de los peces telesteos. Por lo tanto, la determinacin de la relacin
entre forma y funcin y ambiente es esencial para comprender, en profundidad, las causas de la
variabilidad morfolgica de los otolitos (Platt y Popper 1981, Gauldie 1988, Lombarte y
Fortuo 1992, Lychakov y Rebane 2000, Paxton 2000, Volpedo y Echeverra 2003).

3.6.1 Variaciones inter-especficas: identificacin de especies y sus aplicaciones

La forma de los otolitos tiene un alto grado de variacin inter-especfica, que puede ser usado
para la identificacin de especies. Tradicionalmente, las diferencias entre especies se han
descrito teniendo en consideracin los caracteres anatmicos e ilustrndose en atlas de dibujos,
fotografas pticas o de barrido, como clsicos principalmente de la primer mitad del siglo XX
(Koken 1884, Frost 1925, Sanz-Echeverra 1926, Chaine y Durvergier 1931, Bauz-Rulln
1954) y ms reciente, conocidos y utilizados los de Schmidt (1968), Nolf (1985), Hrknen
(1986), Smale et al. (1995), Volpedo y Echeverra (2000), Assis (2003, 2005), Campana (2004),
Tuset et al. (2008), Lin y Chang (2012), Sadigzadeh et al. (2012b), Rossi-Wongtschowski et al.
(2014).
La resistencia del aragonito de los otolitos a la degradacin permite que la identificacin de
especies a travs de los otolitos sea imprescindible en situaciones en las que el resto del pez se
ha degradado, tal es el caso de los contenidos estomacales (Fitch y Brownell 1968, Neves et al.
2012, Otlora-Ardila et al. 2014, Rosas-Luis et al. 2014), los sedimentos fsiles (Schwarzhans
1980, Nolf 1985, Nolf y Sterbaut 1989), los restos arqueolgicos (Van Neer et al. 2002), e
incluso para establecer hiptesis filogenticas (Post y Hecht, 1977, Gaemers 1984,
Reichembacher et al. 2007). Sin embargo, como se ha comentado anteriormente, el uso de
caracteres anatmicos no matemticos, no solo requieren de un alto grado de experiencia por
parte del cientfico, si no que presentan un alto nivel de ambigedad. Para evitar la subjetividad
de los caracteres anatmicos, se empezaron a identificar especies cercanas a partir de medidas
biomtricas de otolitos en los 1980 (Gaertner 1982, Akkiran 1985, Bori 1986, LAbe-Lund
1988) o de su relacin con la talla del pez entre los 1950 y 70 (Templeman y Squire 1956, Botha
1971). Aunque el anlisis biomtrico puede dar buenos resultados, las tcnicas de anlisis de
imagen ha dado un nuevo impulso a la identificacin de especies a travs de los otolitos, bien

85
mediante el empleo de las distancias entre el contorno y el centro de gravedad (Lombarte y
Castelln 1991), el anlisis de Fourier (Stransky 2005), los wavelets y anlisis de las curvaturas
(Parisi-Baradad et al. 2005), la energa de desdoblamiento (Piera et al. 2005), los puntos
homlogos (Monteiro et al. 2005), o la reflexin parcial (Reig-Bolao et al. 2010). Estos
estudios se han aplicado esencialmente al otolito sagitta que presenta mayor variabilidad
morfolgica, pero tambin en el otolito astericus (Assis 2003) y lapillus (Assis 2005, Volpedo y
Fuchs 2010), e incluso con los tres pares de otolitos a la vez (Schulz-Mirbach et al. 2012).
La eficiencia de los mtodos de anlisis de contorno aumenta cuando se utilizan de forma
combinada, incluyendo datos biomtricos como el peso del otolito (Sadigzadeh et al. 2012a).
Todos estos mtodos son recomendables para grupos reducidos de especies cercanas
taxonmicamente, y tambin en la identificacin de criptoespecies (Tuset et al. 2010), siendo
mayor su eficacia si se dispone de un nmero elevado de ejemplares por especie. La
complejidad aumenta cuando se trata de analizar grupos faunsticos amplios, en cuyo caso se
requiere de amplios conocimientos morfolgicos y de una amplia representacin de las especies
(Nolf 1985, 2013) o bien se debe partir de una amplia base de datos (Lombarte et al. 2006). Para
ello, se han desarrollado sistemas de clasificacin que permiten identificar especies a partir de
bases de imgenes muy amplias y con pocos datos por especie. Estos sistemas se basan en
anlisis iterativos de los contornos para cada una de las escalas de detalle determinadas
mediante wavelets (Parisi-Baradad et al. 2010), favoreciendo la comparacin local de puntos
(Figura 3.17).

Figura 3.17 - Clasificacin automtica a partir de los wavelets extraidos de un contorno de

otolito sagitta de un ejemplar de Scomber scombrus comparado con otolitos de una base de
datos preexistente. Los crculos indican los puntos de mxima diferenciacin entre otolitos
comparados. FL = longitud de la furca del pez, D = distancia euclidiana.

86
3.6.2 Variaciones intra-especficas: la identificacin de stocks pesqueros

Debido a la necesidad de gestionar correctamente los recursos pesqueros (Cushing 1968), la

identificacin de stocks constituy la rama cientfica de la pesquera que sustent el desarrollo
de la otolitometra en su contexto ms prctico (Cadrin y Friedland 1999). Las variaciones intra-
especficas en los otolitos se deben a la influencia que ejerce factores ambientales o exgenos
(la profundidad, temperatura y la salinidad) en su crecimiento y forma, as como otros factores
intrnsecos (tasa de crecimiento o el sexo) (Simkiss 1974, Wilson 1985, Morales-Nin 1987,
Mosegaard et al. 1988, Secor y Dean 1989, Lombarte et al. 2003, Cardinale et al. 2004, Vignon
y Morat 2010, Vignon 2015), siendo especialmente recomendado cuando el flujo gentico es
suficiente para enmascarar la existencia de poblaciones separadas (Stransky et al. 2008,
Gholami et al. 2015). Los primeros trabajos cientficos en la identificacin de stocks se basaron
en comparativas de curvas de crecimiento, y en ndices de forma del otolito (Templeman y
Squire 1956, Yefanov y Khorevin 1979, Gaertner 1982). El mayor problema con el que se
encontraron fue compensar las diferencias en el tamao y la alometra (Templeman 1935) que
distorsionaban los resultados finales, el cual se resolvi aplicando mtodos que los eliminasen
(ver apartado 3.5). Aunque puede emplearse individuos de diversa talla o edad, se recomienda
acotar la muestra o trabajar con grupos de edad de forma independiente, especialmente en
especies pelgicas (Castonguay et al. 1991).

3.6.3 Ecomorfologia y morfologa funcional

Los tres pares de otolitos forman parte del odo interno, el cual est relacionado con el sentido
acstico y del equilibrio (Popper y Fay 1993, Popper y Lu 2000). De tal modo que, cualquier
estudio sobre otolitos debe ser interpretado dentro del marco de la funcin real en el pez, y no
exclusivamente en base a su utilidad cientfica. Sin embargo, an no se establecido claramente
como dicha variabilidad morfolgica afecta a las capacidades auditivas de los peces (Platt y
Popper 1981, Popper y Lu 2000, Popper et al. 2005).
La ecomorfologa de rganos sensoriales, entre ellos los rganos otolticos, es la ciencia que
compara los datos morfo-funcionales y ecolgicos de las especies (Karr y James 1975, Bock
1990, Motta et al. 1995, Norton et al. 1995, Weissburg 2005). Por lo tanto, su aplicacin con
otolitos permite establecer relaciones entre determinadas caractersticas de los mismos y
caractersticas ecolgico-funcionales como la alimentacin, la locomocin, el hbitat, la
profundidad y el comportamiento (Volpedo y Echeverra 2003, Lombarte y Cruz 2007,
Colmenero et al. 2010). Su aplicacin se ha centrado en especies de una misma comunidad
ctica sean mesopelgicas (Paxton 2000), de plataforma (Volpedo y Echeverra 2003) o litorales
(Lombarte y Cruz 2007), en especies cercanas filogenticamente con claras diferencias

87
ecolgicas como en merluzas (Lombarte y Fortuo 1992), en gbidos (Arellano et al. 1995), en
salmonetes (Aguirre y Lombarte 1999), guppis (Schulz-Mirbach et al. 2008), rapes (Colmenero
et al. 2010), y en variaciones ontognicas en merluzas (Lombarte y Popper 1994, 2004). Con
excepcin de algunos estudios basados en el lapillus de corvinas (Ramcharitar et al. 2004) y de
peces otofisios (Volpedo y Fuchs 2010), casi todos los estudios realizados se han centrado en el
otolito sagitta, ya que juega un papel muy importante en la funcin auditiva, mientras que las
otras estructuras otolticas estn ms relacionadas con las funciones de equilibrio (Platt y Popper
1981, Popper y Fay 1993, Popper y Lu 2000). En estos estudios se ha considerado el tamao y
grosor del otolito, la relacin entre la mcula sensorial y el otolito (conocida como S:O ratio),
las conexiones entre el otolito y la vejiga natatoria, las variaciones morfolgicas entre los 3
pares de otolitos y la forma general de este (Gauldie 1988, Lombarte 1992, Paxton 2000,
Lombarte et al. 2003, Volpedo y Echeverra 2003, Lombarte et al 2010, Schulz-Mirbach et al.
2011, Tuset et al. 2015b).
Como se ha comentado con anterioridad, la forma general del otolito se ha asociado con
caractersticas ecolgicas como la profundidad, el hbitat y el tipo de locomocin y de
alimentacin (Wilson 1985, Gauldie y Crampton 2002, Lombarte et al. 2003, Volpedo y
Echeverra 2003, Sadigzadeh et al. 2014, Tuset et al. 2015b). Las especies pelgicas como los
atunes y caballas tienen otolitos relativamente ms pequeos (Lombarte y Cruz 2007, Lombarte
et al. 2010) y con una forma alargada, un rostro prolongado y una S:O ratio mayor que las
formas bentnicas (Volpedo et al. 2008). Una excepcin se produce en procesos evolutivos de
pelagizacin a partir de formas bentnicas como en el caso de gbidos y nototnidos, donde se
han producido fenmenos paedomficos, en los que los otolitos conservan caracteres larvarios
como es su forma redondeada (Lombarte et al. 2010). Recientemente, a partir del anlisis local
de contornos de otolitos sagittae en distintos grupos de perciformes (Sadigzadeh et al. 2014,
Tuset et al. 2015b) se ha asociado la variabilidad de la zona dorso-rostral, relacionada con el
desarrollo del ostium, con la variabilidad ambiental y funcional (Sadigzadeh et al. 2014, Tuset
et al. 2015b).
Tambin se ha descubierto una correspondencia entre otolitos de tamao relativamente grande y
especies que emiten sonidos, y que implica una rica comunicacin acstica (Luczkovich et al.
1999, Holt 2002). Muchas especies con otolitos de gran tamao son especies de aguas
profundas, turbias o de hbitos nocturnos (Paxton 2000, Lychakov y Rebane 2000, Ramcharitar
et al. 2006, Lombarte y Cruz 2007, Colmenero et al. 2010). En estas especies la reduccin del
campo visual, debido a la prdida de luz ambiental, es compensada por sistemas sensoriales
alternativos como los mecanorreceptores y quimiorreceptores (Lombarte y Fortuo 1992,
Kuciel, 2013, Warrant y Locket 2004). Por el contrario, especies de colores brillantes y de
actividad diurna, por ejmplo los lbridos, tienen otolitos relativamente pequeos (Cruz y
Lombarte 2004). En ocasiones, un gran tamao relativo del otolito est acompaado de una

88
fuerte tridimensionalidad, como en caso de los escinidos (Ramcharitar et al. 2004). El
engrosamiento de la cara exterior del otolito produce un efecto de focalizacin sobre dicho
punto de la cara interior, en el cual se sita la macula sensorial (Figura 3.1). En los lenguados y
sollas (Pleuronectiformes) se ha observado una clara asimetra funcional, siendo el otolito
sagitta situado en posicin inferior de mayor tamao (Lychakov et al. 2008).
El sulcus acusticus, cuya forma y tamao est relacionada con la mcula sensorial20, es
caracterstico de cada especie (Schwarzhans 1980, Smale et al. 1995, Tuset et al. 2008) y ha
sido objeto de numerosos estudios comparativos (Popper y Coombs 1982, Lychakov y Rebane
2000, Ramcharitar et al. 2006, Schulz-Mirbach et al. 2011, 2013). Se ha observado que la
relacin entre el rea de la mcula sensorial o del sulcus acusticus y el rea del otolito (S:O
ratio) vara en funcin de las caractersticas ecolgicas y funcionales de las especies (Gauldie
1988, Lombarte 1992, Arellano et al. 1995), e incluso las poblaciones de una misma especie
(Poecilia mexicana), adaptadas a la vida caverncola se caracterizan por tener un sulcus
acusticus ms profundo que las poblaciones que viven en el exterior (Schulz-Mirbach et al.
2011).
En paralelo a los estudios ecomorfolgicos se han desarrollado otras lneas de carcter
fisiolgico y conductual (Popper y Coombs 1982, Fay y Popper 2000, Yan 2001, Tellechea et
al. 2010). La presencia de conexiones entre el odo interno y la vejiga natatoria, mediante
osculos de Weber, burbujas o conexiones directas, implica un aumento a la sensibilidad y a la
percepcin de sonidos de frecuencia superior a los 1,5 kHz (Popper et al. 2003). Estas especies
son conocidas como especialistas acsticos y son propias de grupos como los peces otophysios
y los clupeiformes (Platt y Popper 1981). Algunas de estas conexiones estn asociadas a formas
especiales de los otolitos como en gadiformes (Lombarte y Popper 2004), escinidos
(Ramcharitar et al. 2004, 2006) y sobre todo los melmfidos (Deng et al. 2013), cuyos otolitos
presentan expansiones largas y delgadas.

3.6.4 Ecologa de comunidades y biodiversidad

Las caractersticas morfolgicas observadas en los otolitos de una comunidad reflejan la

estructura ecolgica y funcional de la misma (Paxton 2000, Gauldie y Crampton 2002,
Lombarte y Cruz 2007, Volpedo et al. 2008, Tuset et al. 2015a). Dado que en muchos casos, el
conocimiento taxonmico de faunas fsiles de peces telesteos est exclusivamente basado en
dientes aislados y otolitos (Schawrzhans 1980, Nolf 1985, Reichenbacher et al. 2007), el estudio
de la variabilidad morfolgica de estas estructuras ayuda a entender las caractersticas
ecolgicas de la comunidad fsil estudiada y su evolucin en perodos largos de tiempo (Tuset
et al. 2015a).
9
rea del odo interno donde se encuentran las clulas sensoriales ciliadas mecanorreceptoras.

89
Por otro lado, las comunidades tambin se pueden caracterizar por el nmero y complejidad de
especies a travs de ndices de biodiversidad (Margalef 1982). Los ndices de diversidad han ido
aumentando su complejidad y versatilidad con la inclusin de datos taxonmicos (Webb 2000,
Clarke y Warwick 2001), funcionales (McClain et al. 2004, Petchey y Gaston 2006, Villger et
al. 2008) y morfolgicos (Zelditch et al. 2003, Recasens et al. 2006, Farr et al. 2013). En
consecuencia, a partir de las caractersticas morfolgicas de los otolitos de una comunidad
tambin se pueden elaborar ndices de diversidad de dicha comunidad (Tuset et al. 2015a).

3.6.5 Momento actual y perspectivas de futuro: el anlisis en 3 dimensiones ya est aqu

En el campo de los estudios morfomtricos, el principal reto es la mejora de la precisin de la

medida de la forma generando objetos en 3 dimensiones (Figura 3.18). Se han realizado
distintos intentos en la obtencin de imgenes tridimensionales de los otolitos usando
microtomografas de rayos x (Hamrin et al. 1999, Ramcharitar et al. 2004, Schulz-Mirbach et
al. 2011, 2013, Kver et al. 2014), microfotografas (Zitek et al. 2014) o scanner basados en
LEDS de luz blanca (Marti-Puig et al. 2015), aunque an no hay un mtodo estandarizado. El
mayor problema reside en la conformacin de un sistema que permita trabajar con otolitos
grandes y muy pequeos. Cabe esperar que con el desarrollo de dichas tcnicas el anlisis de
objetos 3D se generalice y facilite la obtencin de datos para mejorar la clasificacin de los
otolitos, la extraccin de caracteres morfolgicos significativos, especialmente del sulcus
acusticus, y la elaboracin de modelos biomecnicos que permitan estudiar cmo se realiza la
transmisin acstica.

90
Figura 3.18 - Imgenes tridimensionales de un otolito sagitta del escianido Argyrosomus
regius.

Finalmente, sigue siendo vital desarrollar grandes bases de datos morfomtricos, as como de
imgenes de otolitos que permita abordar trabajos de mbito ecofilogentico y ecomorfolgico
en una perspectiva evolutiva (Lombarte et al. 2006), as como la publicacin de atlas especficos
de reas geogrficas poco estudiadas.

Agradecimientos

Los autores estn especialmente agradecidos a los editores del volumen Alejandra V. Volpedo y
Andr M. Vaz dos Santos por su dedicacin y ayuda en la realizacin del captulo.

91
92
4. OTOLITOS EN ESTUDIOS DE EDAD Y CRECIMIENTO EN PECES

Andr Martins Vaz-dos-Santos

Sumario
4.1 Introduccin..........................................................................................................................93
4.2 El modelo de crecimiento......................................................................................................96
4.3 Esclerocronologa..................................................................................................................98
4.4 Preparacin de los otolitos y obtencin de datos para el anlisis de crecimiento.................99
4.4.1 Muestras de otolitos...........................................................................................................99
4.4.2 Representatividad de los otolitos para el estudio del crecimiento....................................100
4.4.3 Preparacin de los otolitos...............................................................................................101
4.4.4 Lectura de anillos en los otolitos......................................................................................103
4.5 Anlisis del crecimiento......................................................................................................106
4.5.1 Comparacin entre las lecturas de los anillos..................................................................106
4.5.1.1 Consistencia entre el nmero de anillos........................................................................106
4.5.1.2 Anlisis de coincidencia del tipo de borde....................................................................108
4.5.1.3 Anlisis de los radios de los anillos...............................................................................109
4.5.2 Representatividad de las lecturas de otolitos....................................................................110
4.5.3 Validacin........................................................................................................................112
4.5.3.1 Incremento marginal.....................................................................................................112
4.5.3.2 Porcentaje del tipo de borde..........................................................................................114
4.5.3.3 Otras tcnicas de validacin..........................................................................................114
4.6 Estimacin de los parmetros de crecimiento y la estructura etaria....................................116
4.7 Retroclculo........................................................................................................................119
4.8 Conclusiones.......................................................................................................................120
Agradecimientos.......................................................................................................................121

4.1 Introduccin

El crecimiento es un componente importante de la historia de vida de los peces, que crecen

continuamente. En el aspecto individual, el crecimiento es la expresin cuantitativa del
desarrollo (Fonteles Filho 1989), produciendo y provocando cambios desde la fecundacin hasta
la muerte del individuo, pasando por las etapas de huevo, larva, juvenil y adulto (Csirke 1980).
Proviene de una serie de cambios fisiolgicos desencadenados y controlados por hormonas
(Weatherley y Gill 1987, Weatherley 1990). Depende de la energa disponible del organismo

93
obtenida a travs de la alimentacin, de la reproduccin y de la mortalidad, que determinan
directamente la competicin intraespecfica, un factor que influye mucho en el crecimiento
(Saborido-Rey y Kjesbu 2005, Longhurst y Pauly 2007). En trminos fisiolgicos, el
crecimiento individual puede ser considerado a partir de la ecuacin que describe el balance de
la energa disponible (E) en un perodo determinado de tiempo (Wootton 1998):

E=G+M+F+U

Este balance es consecuencia de la energa dirigida al crecimiento somtico (corporal) y

reproductivo (gametas) (G), donde lo que se gasta a travs del calor metablico (M) y las
prdidas relacionadas con las heces (F) y la excrecin (U). Pensando en el balance energtico
individual, podemos reordenar la ecuacin anterior, obteniendo una expresin que define el
crecimiento:

G=EM(F+U)

En la perspectiva de las ciencias pesqueras, la dinmica de poblaciones fue pensada en un

modelo descripto por Russel (1931), considerando que la variacin de la biomasa (B) se da en
funcin del crecimiento (G), del reclutamiento (R) y mortalidad total (Z):

B = G + R Z

De esta manera, si pensamos en cmo cuantificar el crecimiento de un pez, lo ms fcil es a

travs de la longitud y del peso corporal, medidas que pueden tomarse fcilmente de un
individuo (Weatherley y Gill 1987). La longitud del cuerpo es una medida con mayor
independencia de la reproduccin y de la alimentacin, factores que pueden promover cambios
de peso en diferentes escalas de tiempo. Un individuo de merluza (Merluccius hubbsi) de 25 cm
de longitud pesa alrededor de 120 g y el peso de su estmago puede llegar al 10% de su peso
total. En el caso de las gnadas, principalmente los ovarios, la variacin es mayor, por ejemplo
en una burriqueta (Menticirrhus americanus) de 36 cm de longitud del cuerpo y un peso de 620
g, los ovarios pueden alcanzar el 55% del peso corporal total. Estos son algunos ejemplos de
situaciones reales, pero con valores que pueden presentar ms variaciones entre diferentes
individuos y poblaciones. Por lo tanto, la longitud del cuerpo se ha utilizado generalmente para
cuantificar el crecimiento.
El crecimiento puede ser evaluado de forma relativa o absoluta. Cuando no disponemos de una
medida de tiempo y medimos el crecimiento en funcin de otra variable, tenemos lo que se
denomina crecimiento relativo. Huxley en 1932 formaliz los conceptos del tema en su trabajo

94
On the Relative Growth (Huxley 1993), presentando el modelo potencial (y=axb), que hoy en
da se utiliza para estimar la relacin longitud-peso en peces y que tambin sirve para la
morfometra de otolitos (cf. Captulo 3). Sin embargo, si tenemos informacin sobre la
edad/tiempo, estamos hablando de crecimiento absoluto (Bagenal y Tesch 1978).
La variable tiempo abre un nuevo universo para entender el ciclo de vida de los peces, pero la
pregunta es: Cul es la importancia de convertir las longitudes en edades? Por qu no basta en
saber a qu longitudes se representan los diferentes eventos biolgicos (primera maduracin
gonadal, migraciones, etc.)? La respuesta es muy simple: considere dos peces del mismo
tamao. Si uno vive 16 aos y el otro apenas 4 aos, es seguro que la longitud no es el mejor
descriptor de su ciclo de vida. De manera similar en el caso de dimorfismo sexual: muchas
especies exhiben diferencias llamativas en las tasas de crecimiento de machos y hembras
(Martins y 2000 Haimovici, Newman et al. 2000, Yoneda et al. 2002). La edad de primera
madurez gonadal es otro aspecto a tener en cuenta: cunto tiempo le lleva al organismo llegar a
esa maduracin (un ao, tres aos, etc.)? Adems de eso, la edad permite construir la pirmide
etaria de las diferentes poblaciones, comprendiendo su estado en el momento del estudio, el uso
del espacio y el tiempo (Ricker 1975, Berkeley et al. 2004). La sardina (Sardinella brasiliensis)
es una especie que se distribuye en la plataforma continental entre los 22S y 2840' S, en el
Ocano Atlntico Suroeste, la costa de Brasil: ver cmo las diferentes edades estn distribuidas
heterogneamente en toda la zona (Figura 4.1).

Figura 4.1 Distribucin de sardina (Sardinella brasiliensis) en el Ocano Atlntico Suroeste,

muestra la diferencia en la estructura de edad en tres reas (delimitadas por barras de color
negro): los individuos jvenes se concentran ms hacia el sur y los ms viejos hacia el norte
(Fuente: LABESC-UFPR ).
21

21
Laboratrio de Esclerocronologia Universidade Federal do Paran.

95
Todava hay otras importantes aplicaciones producto del estudio de la edad y el crecimiento en
peces. En la ciencia pesquera, los clculos como los de longevidad, las tasas de mortalidad y los
modelos de evaluacin de stock (es decir, modelos que permiten evaluar diferentes situaciones
de explotacin de los recursos pesqueros) dependen de la disponibilidad de los datos de
crecimiento (Beverton y Holt 1993, Sparre y Venema 1998). Los modelos ecolgicos tambin
utilizan parmetros de crecimiento, entre otras informaciones, para cuantificar la contribucin
de las diferentes especies de peces en los diferentes compartimentos ("cajas") del modelo
(Walters y Martell 2004, Spounagle 2010, Methot y Wetzel 2013).
De este modo, la edad y el crecimiento son la clave para entender la biologa de las especies
(desarrollo individual), la dinmica de poblaciones (como el conjunto de individuos crece y su
abundancia), la estructura de la comunidad (cada poblacin crece de una cierta forma) y el
funcionamiento del ecosistema (qu grupos de edad son predados y/o blanco de pesqueras,
etc.).

4.2 El modelo de crecimiento

Comprendida la importancia del estudio del crecimiento, surge la pregunta: cmo asociar la
longitud del cuerpo con la edad? Matemticamente esto se hace a travs de modelos y,
existiendo varios modelos disponibles para peces (Moreau 1987, Gamito 1998, Haddon 2001,
Vaz-dos-Santos, en prensa). El modelo que ha sido ms ampliamente utilizado es el de von
Bertalanffy (von Bertalanffy 1938). Este modelo es un caso especial de curva exponencial y
considera la edad como la variable independiente (x) y la longitud del cuerpo en una edad como
la variable dependiente (y). Ha sido eficaz para describir el crecimiento de los vertebrados, con
una amplia aplicacin en peces. Este consta de tres constantes (a, b, c), que son los parmetros
de crecimiento.
El modelo de von Bertalanffy est dado por:

FL t = FL [1 e k ( t t 0 ) ]

Donde
FLt = longitud del cuerpo del pez en la edad t (variable y);
FL = longitud mxima terica (constante a);
k = tasa de crecimiento (constante b);
t = edad de la longitud FLt (variable x);
t0 = edad terica de la longitud cero (constante c).

96
La edad terica de longitud cero (t0) representa el comienzo de la curva, siendo un valor
negativo el que representa el tiempo entre la fertilizacin, el desarrollo temprano hasta la trama:
en la edad cero el pez ya tiene un tamao de cuerpo! La tasa de crecimiento (k) representa la
velocidad del aumento de la longitud. Cuanto mayor es la tasa, mayor es la velocidad de
crecimiento. La longitud mxima terica, como su nombre lo dice, es que la longitud basada en
las medidas de los peces ms viejos22, siendo un ajuste final de la curva de crecimiento, lo que
representa el tamao promedio de los peces. La tasa de crecimiento y la longitud mxima
terica mantienen una proporcionalidad entre s (Pauly y Munro 1984): en general, mayores
tasas de crecimiento se relacionan con menor longitud terica mxima (Figura 4.2).

50 120
45
40 100
longitud corporal (cm)

longitud corporal (cm)

35 80
30
25 60
20 Balistes capriscus (eje 1)
15 40
Engraulis anchoita (eje 1)
10 20
Lopholatilus villarii (eje 2)
5
0 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
edad (aos)

Figura 4.2 Las curvas de crecimiento de von Bertalanffy para diferentes especies, estimadas
con los parmetros obtenidos por Castro et al. (2005) para Balistes capriscus, Castello (2005)
para Engraulis anchoita e vila-da-Silva e Haimovici (2005) para Lopholatilus villarii.

El paso inicial para ajustar el modelo es la elaboracin de una tabla entre la edad (x) y la
longitud del cuerpo (y), para hacer un diagrama de dispersin y posteriormente estimar los
parmetros del modelo de von Bertalanffy (o otros modelos, cf. Moreau 1987, Haddon, 2001,
Vaz-dos-Santos, en prensa). Sin embargo, cmo estimar la longitud a esa edad?
Existen cuatro mtodos diferentes que se relacionan con la edad y talla (Fonteles Filho 1989): la
cra en cautiverio, el anlisis de la distribucin de frecuencias de longitudes, el marcado, captura
y recaptura, y la lectura de anillos en estructuras rgidas. En este texto nos concentraremos en la
lectura de anillos de estructuras rgidas, especficamente en otolitos, cuyas propiedades son muy
favorables para el estudio de edad y el crecimiento.

22
En el sentido del uso ms comn y no estadstico.

97
4.3 Esclerocronologa

La interpretacin de la edad y el crecimiento de estructuras rgidas se llama oseocronometra o

esclerocronologa. La esclerocronologa es el estudio de las variaciones fsicas y qumicas en la
formacin de estructuras rgidas de organismos en el contexto de su formacin (IFAS 2007).
Aplicada a los peces, los otolitos, las escamas, las espinas, las vrtebras y algunos huesos han
sido las estructuras ms ampliamente utilizadas, ya sea enteras, cortadas o parte de ellas
(Meunier y Panfili 2002). Se basa en el principio de que, en el transcurso de un ciclo de
crecimiento somtico del individuo, hay etapas con mayor o menor deposicin de carbonato de
calcio, materia orgnica y otros elementos constituyentes de los otolitos (Morales-Nin 2000).
Estos ciclos pueden ser diarios (Pannella 1971) o sub-diarios, lo que nos lleva al anlisis
microestructural del crecimiento o anuales, considerado como anlisis macroestrutural del
crecimiento (Brothers 1987). Tambin hay marcas que se forman estacionalmente o en eventos
como las fases lunares, que pueden implicar ambos tipos de anlisis mencionados (Wright et al.
2002a).
En el anlisis macroestrutural, las variaciones del crecimiento somtico pueden ser causadas por
diferentes eventos como la reproduccin (focalizacin de la energa para el desarrollo gonadal),
la migracin (gastos por desplazamiento), la disminucin de la disponibilidad de alimento
(condiciones de invierno), entre otros (Weatherley y Gill 1987, Busacker et al. 1990, Wootton
1998, Saborido-Rey y Kjesbu 2005). Estos eventos alteran el esfuerzo fisiolgico y la energa
dirigida al crecimiento somtico y, en consecuencia, cambian la tasa de deposicin de los
otolitos, promoviendo la formacin de zonas ms calcificadas (opacas, relacionadas con mayor
acrecin de material) y otras menos calcificadas (translcidas, resultantes de una menor
calcificacin) (Figura 4.3) (Secor et al. 1991). Tenga en cuenta que estos trminos estn
relacionados con la naturaleza fsica de la estructura y no con los aspectos de su visualizacin en
el estereomicroscopio o microscopio. Si conseguimos determinar la periodicidad de la
formacin de estas marcas y relacionarlas a fenmenos biolgicos, tenemos xito en la
asignacin de edad y, en consecuencia, en la estimacin del crecimiento. De esta manera,
visualizar bien los anillos de los otolitos es fundamental para un estudio del crecimiento.

98
 A Dorsal B
Foto: Aline Giombelli da Silva

Foto: Anglica Arruda Justino

Ventral

Figura 4.3 Otolitos sagittae enteros de Mugil curema (A) y de Haemulopsis corvinaeformis
(B) mostrando el ncleo opaco (flecha) y las sucesivas zonas translcidas y opacas. Marcas e
imperfecciones se mantuvieron en las imgenes, que muestran la realidad de la visualizacin de
los anillos (Fuente: LABESC-UFPR).

4.4 Preparacin de los otolitos y obtencin de datos para el anlisis de crecimiento

Elegir la mejor tcnica para la visualizacin de los anillos puede ser muy laborioso, pero debe
realizarse con cuidado, calma y detalle. Hay varios trabajos que muestran didcticamente los
pasos para la preparacin de otolitos (FAO 1981, Gjsaeter et al. 1984, Secor et al. 1991,
Morales-Nin 1992, Vanderkooy 2009). Particularmente en 2002, Jacques Panfili, un cientfico
francs de IFREMER23, junto con varios otolitlogos de renombre, haba editado el Manual of
Fish Schlerochronology, el cual es una recopilacin de tcnicas para la realizacin de diversos
estudios con otolitos (Panfili et al. 2002). Posteriormente, aspectos ms tcnicos y,
principalmente analticos, fueron presentados en el libro Tropical fish otoliths: information for
assessment, management and ecology (Green et al. 2009).
De estas tcnicas, se debe evaluar para la visualizacin de los anillos: si el anlisis es macro o
microestructural; si los anillos son visualizados con el otolito entero o seccionado; si hay
necesidad de pulir o no; si es necesario aplicar alguna tcnica para resaltar los anillos; o si habr
que montar los otolitos en un portaobjetos. Este paso de decisin sobre las tcnicas, implica
tiempo y material que se perder sin perjuicio de las muestras a estudiar. Tambin, se debe
observar, como ya fue mencionado en este libro, si los otolitos son simtricos o no.

4.4.1 Muestras de otolitos

La cantidad de otolitos (n) para ser analizada en un estudio de crecimiento debe incluir: (i)
representatividad ontogentica, garantizando que estn representadas la mayora de las etapas de
23
Institut Franais de Recherche pour L'exploitation de la Mer

99
la vida, y (ii) representatividad temporal a lo largo de un ciclo, idealmente dos (Panfili y
Morales-Nin 2002a). Deben considerarse otros elementos cualitativos que deben ser analizados,
como las diferencias entre machos y hembras, las variaciones geogrficas, entre otros, segn el
propsito del estudio. El anlisis microestructural tiene objetivos especficos que no son slo el
crecimiento y la edad per se (Geffen 1987, Stevenson e Campana 1992, Morales-Nin 1992,
Campana 2001), que hacen que el n muestral pueda ser pensado de modo diferenciado. El
anlisis macroestructural sin embargo, debe contemplar los siguientes requisitos:
- establecer las clases de la longitud del cuerpo, por ejemplo, con el teorema de Sturges (Vieira
2008);
- determinar la temporalidad ideal del anlisis24 en funcin de la viabilidad: cada dos semanas es
una periodicidad buena, principalmente en regiones tropicales y para especies que tienen largos
periodos de desove. Sin embargo, como esto es ocasionalmente posible, las muestras mensuales
son lo ms adecuado y, si el n todava es insuficiente, uno puede pensar en agrupar los datos en
bimestres o trimestres;
- estimar el nmero de individuos a partir de una muestra piloto o de una simulacin, calculando
el tamao muestral mnimo (Gulland 1966) o aplicando la regla de 10 (Gotelli y Ellison 2011),
consiguiendo obtener 10 otolitos por clase de longitud en el periodo de anlisis (cf. Captulo 7).

4.4.2 Representatividad de los otolitos para el estudio del crecimiento

En un primer paso es esencial conocer la posicin de los otolitos de los peces dentro de la
cpsula tica. A menudo los otolitos son depositados en colecciones y el estudio del crecimiento
se llevar a cabo a partir de material previamente colectado. Busque obtener algunos ejemplares
frescos para su diseccin. Por qu es importante este paso? Los otolitos presentan diferentes
formas (cf. Captulo 2) y tienden a crecer en proporcionalmente a la forma del cuerpo (cf.
Captulo 3), es decir, otolitos de peces comprimidos crecern ms en el eje anterior-posterior, en
peces rollizos los otolitos crecern ms tridimensionalmente, etc. De esta manera, el crecimiento
de los otolitos es diferente en sus distintas partes: comprender estos aspectos nos lleva a pensar
en ejes de lectura y tcnicas de preparacin.
Entendida la morfologa y el desarrollo de los otolitos, empricamente, cabe cuantificar el
crecimiento del otolito en funcin del crecimiento del pez (Brothers 1987). En este paso, las
medidas de otolitos en posicin natural, generalmente la longitud (OL, mayor distancia en el eje
anterior-posterior), la altura (OH, la distancia ms larga en el eje dorsal-ventral), y el peso de los
otolitos (OW) son utilizadas como variables dependientes (y) contra la longitud del cuerpo (x),

24
Los muestreos pueden ser realizados diariamente, semanalmente, etc. Sin embargo, aqu nos estamos refiriendo a la
utilizacin de los datos y materiales para componer las muestras.

100
mediante el ajuste de los modelos de regresin (cf. Captulo 3). El objetivo de este paso es
comprobar "si" y "cmo" los otolitos acompaan el crecimiento de los individuos.

4.4.3 Preparacin de los otolitos

Con los otolitos medidos, cabe definir la mejor tcnica de la visualizacin de los anillos (cf.
FAO 1981, Secor et al. 1991, Stevenson e Campana 1992, Panfili et al. 2002). En otolitos
enteros generalmente no es posible visualizar todos los anillos de crecimiento, existiendo una
tendencia a subestimar la edad, especialmente en edades tempranas y en los peces ms viejos.
Sin embargo, esta tcnica es vlida y an aplicada a varias especies. Normalmente, en funcin
de las propiedades de la luz del estereomicroscopio, reflejada (fuente de luz superior) o
transmitida (fuente de luz inferior), es comn la inmersin de los otolitos en algn lquido (agua
destilada, etanol al 70%, xileno, aceite de cosmtico para bebs, blsamo de Canad si montado
sobre el portaobjeto) solos o en combinacin con otra tcnica (quemado, coloreado) que realce
los anillos. El uso de fluido puede ser instantneo o dejarse un tiempo antes (generalmente hasta
24h antes) para aclarar la lectura. Debe tenerse cuidado de verificar si la tcnica de realce es
irreversible o no, y si causa dao al otolito. Esto debe pensarse si el otolito es raro y necesita ser
preservado o no.
Las tcnicas ms precisas de anlisis de otolitos, desde una perspectiva macroestructural,
involucran la seccin transversal o longitudinal (sagital) y pulido. Las secciones transversales
dependen de la disponibilidad de una cortadora metalogrfico de baja rotacin. Otolitos
pequeos y/o con formas redondeadas son generalmente incluidos en resina, los otolitos ms
grandes pueden ser cortados directamente (Figura 4.4).

101
 A B C

D E

Figura 4.4 (A) Cortadora metalogrfica de baja rotacin (Foto: IsoMet Low Speed Saw disponvel em

https://shop.buehler.com/). (B) Otolito sagitta de Hoplostethus occidentalis inmerso en resina (Foto: Brbara Gris).
(C) Posicionamiento del bloque con otolito en la cortadora metalogrfica (Foto: Anglica Arruda Justino). (D)
Bloque siendo cortado en la cortadora metalogrfica (Foto: Anglica Arruda Justino). (E) Corte transversal
mediano del otolito sagitta de Hoplostethus occidentalis (Foto: Aline Giombelli da Silva) (Fuente: LABESC-UFPR).

De la misma manera como en los otolitos enteros, pueden aplicarse tcnicas de realce de anillo
(quemado, coloreado):
-la quema se puede hacer con los otolitos enteros bajo la llama de un mechero Bunsen, en papel
de aluminio (Figura 4.5) o en una asadera de hornear. Para procesar varios otolitos
simultneamente en el horno, es ideal que posean un tamao similar.
- la coloracin puede realizarse antes o despus de la seccin, dependiendo de la tcnica.

102
Figurra 4.5 Ejem
mplo del quuemado de otolitos
o en lllama de mecchero Bunsen. Los otolitos se
ponenn en camas de
d papel de aluminio sobbre tela de amianto
a (Foto:: Andr Martins Vaz dos Santos. Fuente:

LABES
SC-UFPR).

En ell caso de prepparacin de otolitos paraa anlisis miccroestructuraal, generalmeente son utiliizados
otolittos enteros o secciones, pulidas
p por ambas
a caras con
c lijas mettalogrficas a base de agu
ua (12
m, 9m,
9 3 m) y con pastas de pulir (0,55 m, 0.3 m
m), de mayor a menor granna.

4.4.4 Lectura de anillos en loos otolitos

Una vez que la tcnica

t de preparacin y de visualizzacin ha siddo definida, entonces see debe
empeezar la interrpretacin dee los otolitoos. Fundameentalmente, la interpretacin de la edad
comieenza en el primordium, definido
d com
mo el punto de
d partida dee la formacin del otolito
o, que
resultta de la depoosicin de loos primeros grnulos
g de carbonato de calcio, ann en la fase huevo
h
(Wrigght et al. 20002a) (Figura 4.6). A mennudo, princip
palmente en anlisis maccroestructuraales, el
primoordio no pueede ser debiddamente visuualizado, perro existe unaa gran reginn central opaaca, el
ncleeo, que puedde ser utilizaada como unna referencia para las leccturas (Figurra 4.3). Lo que
q no
debe confundirse, al analizar los otolitos, es que el prrimordio est definido y, a partir de l,
hay
una zona
z de creciimiento del otolito
o sin inncrementos aparentes,
a o si
s los otolitoos son muy opacos
o
y loss incrementoos no son visibles. Funddamentalmen
nte, debe establecerse el punto referrencial
consiiderado com
mo el inicio de
d la formaccin de la esstructura y seguir
s este ccriterio en to
odo el
materrial analizaddo. Cuando no
n es posiblee establecer claramente el
e primordioo/ncleo, pod
demos
utilizzar otros punntos de referrencia, tales como posicin del sulccus acusticuss para definiir este
inicioo. Adems, en
e algunas esspecies, comoo en los clup
peidos, es com
mn que el nncleo sea op
paco o
transllcido, reveelando la condicin
c innicial del crecimiento de los inndividuos (R
Rossi-
Wonggtschowski et
e al. 1982).

103
 50 m

Figura 4.6 Otolito sagitta de Anchoa tricolor pulido en su cara interna para el anlisis
microestructural del crecimiento, la flecha indica el primordium (Foto: Brbara Gris. Fuente: LABESC-
UFPR).

Continuando con el anlisis de los otolitos, se debe definir el eje de lectura, en lo cual los
sucesivos anillos son contados y medidos hasta el borde. La eleccin del eje de lectura depende
de una serie de variables, debindose considerar el eje de crecimiento que mejor represente la
estructura y la visualizacin de los anillos. Por esta razn, antes de analizar la edad, es
importante evaluar la morfometra de los otolitos.
La observacin de los otolitos implica en definir lo que es un anillo de crecimiento. Varios
autores conceptualizan de forma diferente lo que es un anillo de crecimiento y, por esta razn,
es esencial aclarar en cada estudio lo que se considera como anillo. El anillo representa el ciclo
que se est evaluando. Usualmente se considera el conjunto de una zona opaca y otra
translcida, como un anillo (Morales-Nin 1992). En Cathorops spixii, cuyo otolito lapillus es el
otolito ms utilizado, la zona opaca es estrecha y la zona translucida es ms amplia (Figura 4.7).
En los otolitos sagittae ocurre generalmente lo contrario, con zonas translcidas estrechas y
zonas opacas amplias, como en Mugil curema y Haemulopsis corvinaeformis (Figura 4.3).

104
Figura 4.7 Seccin transversal del otolito lapillus de Cathorops spixii evidenciando las zonas
opacas estrechas y las zonas translcidas amplias (Foto: Anglica Arruda Justino. Fuente: LABESC-UFPR).

Considerando el patrn de las sagittae, cmo hacer la lectura? La zona translcida representa
perodos de crecimiento lento; luego, ella puede ser indicada como la formacin del anillo de
referencia. A lo largo del eje de lectura, los radios de los anillos (Rn) son medidos al inicio de la
zona translcida, siendo registrado tambin el radio del otolito (Ro). Se debe estar atento a la
unidad de medida inicial y convertirla ms tarde si es necesario, como por ejemplo cuando se
toma en la escala del micrmetro. La naturaleza del borde tambin debe indicarse si hay una
zona translcida (TR) en el borde del otolito, el pez fue capturado en una poca de menor
crecimiento, cuando se estaba formando el anillo. Si el borde es opaco (OP), la captura tuvo
lugar en un momento de rpido crecimiento. Atencin en este paso de cmo ser indicado este
anillo en la planilla de registro de datos (Figura 4.8).

Figura 4.8 Ejemplo de planilla de lectura de anillos en otolitos, mostrando los campos que
deben ser registrados.

En el ejemplo de la Figura 4.8, observe que el individuo 001 posee dos anillos completos y un
anillo en formacin en el borde, mientras que el individuo 002 tiene tres anillos completos. Esto
implica un grupo de anillos diferentes y probablemente edades diferentes, aunque sea una
diferencia en meses! En los lectores con gran experiencia, es comn usar la cuantificacin de

105
zonas translcidas y opacas estrechas y amplias (ICSEAF 1983), sin embargo, cuando se tiene
poca experiencia no se recomienda hacer esta distincin.
Cuando se hace la interpretacin de anillos, se debe recordar que el crecimiento individual
disminuye a lo largo del tiempo/edad. Aunque la tasa de crecimiento (k) del modelo de von
Bertalanffy sea la misma, cuanto ms viejo es el pez, mayor es la razn FLt/FL. Luego, la
distancia entre los anillos de crecimiento tiende a disminuir con la edad, aunque esto no siempre
puede ser observado. Adems, a pesar de la variabilidad individual, se espera que en una misma
poblacin los eventos relacionados al crecimiento se procesen de modo semejante en los
diferentes individuos.
Con toda esta informacin y ponderacin, se deben hacer al menos tres lecturas ciegas e
independientes de los otolitos (Campana 2001). La lectura ciega implica no saber la longitud de
cuerpo, ni el sexo, ni la fecha y lugar de captura, que son elementos que pueden conducir a
sesgos. Por lo tanto la precaucin que debe considerarse en el caso de que sea el mismo lector
quien realiza las lecturas: es buscar un intervalo de al menos 15 das entre cada una de las
lecturas.

4.5 Anlisis del crecimiento

Una vez que se han realizado las tres lecturas de los otolitos, se inicia una importante y
laboriosa etapa que es la asignacin de la edad y el modelado del crecimiento. El primer paso es
consolidar la informacin de las tres lecturas de otolitos realizadas y compararlas.

4.5.1 Comparacin entre las lecturas de los anillos

El producto de las lecturas de los anillos genera tres informaciones diferentes: el nmero de
anillos, el tipo de borde y la posicin de los anillos

4.5.1.1 Consistencia entre el nmero de anillos

La comparacin del nmero de anillos est consolidada y establecida en la literatura sobre

anlisis de estructuras rgidas desde que Beamish y Fournier (1981) demostraron el error
porcentual medio (EPM), calculado individualmente para cada pez (j) y dado por:

1 R NAi NA j
EPM j = NA 100%
R i =1 j

106
Donde:
R = nmero de lecturas realizadas;
NAi = nmero de anillos ledos i;
NAj = nmero medio de anillos.

En 1982, Chang propuso una modificacin de este ndice, presentando el coeficiente de

variacin (CVj):

R ( NAi NAj ) 2
i =1 R 1
CV j = 100%
NAj

Considere, p.ej., un ejemplar de una anchoa (Anchoa tricolor) para la cual fueron realizadas tres
lecturas de anillos diarios:

Lectura NAi NAj |NAi - NAj| |NAi - NAj| / NAj

1 65 7,67 0,106
2 79 72,67 6,33 0,087
3 74 1,33 0,018
Suma 0,211
1/R 1/3
Suma x 1 / R 0,070
EMP (%) 7,03

El error porcentual medio de este individuo fue de 7,03%, correspondiente a un coeficiente de

variacin del 9,76%. El clculo de la EMP y el CV se realiza para cada pez y, posteriormente, se
calcula un promedio, que puede interpretarse como sigue (Campana 2001):

Hay que tener cuidado con el trmino utilizado: una lectura precisa! Precisin es un trmino
estadstico que indica la proximidad de los valores cuando se repite la lectura, es decir: no
estamos evaluando la exactitud, si la lectura refleja la "verdad" sobre la edad de los peces.
Otra herramienta para comparar la exactitud de las lecturas es el grfico de desviacin de
edades25 (Campana et al. 1995). Desarrollado para resolver los problemas que se presentan en
otras tcnicas de comparacin de lecturas (y pruebas estadsticas pareadas y regresiones), se

25
Age bias plot.

107
basa en el ploteo de la edad atribuida a una lectura (x) con una media (y) y el intervalo de
confianza de la otra lectura (Figura 4.9). La funcin del intervalo de confianza es verificar las
desviaciones de la bisectriz, referencial de equivalencia (Campana et al. 1995).

Figura 4.9 Grfico de desvo de edad para comparacin de la precisin entre dos lecturas. (A)
Esta especie tiene gran precisin, habiendo mnimos desvos en relacin a la bisectriz. (B) En
esta otra especie hay gran inconsistencia entre las lecturas, lo que no significa que una de ellas
este equivocada, sino que el patrn fue diferente, lo que implica rever el criterio de lectura de
los anillos.

4.5.1.2 Anlisis de coincidencia del tipo de borde

La comparacin entre los tipos de borde no es algo comn en la literatura sobre anlisis de
otolitos, sin embargo debe ser considerada. No es suficiente haber contado el mismo nmero de
anillos: identificar si existe una zona translcida o no en el momento de la captura es clave para
asignar a la edad de los especmenes. Una manera de verificar esta variacin es a travs del
anlisis de la coincidencia del tipo de borde, computando las frecuencias de borde de las
diferentes lecturas. En el siguiente ejemplo de una liza (Mugil curema), hubo diferencias en
22% de las lecturas de los bordes, siendo que en 17% los bordes fueron ledos opacos en la
lectura 1 y translcidos en la 2 y en el 5%, al revs (Figura 4.10). Aplicando un test de chi-
cuadrado a estos datos (Zar 2010) se pude verificar que la variacin fue significativa al nivel del
5%, con un marcado predominio de los bordes analizados igualmente en las dos lecturas.

108
Figura 4.10 Anlisis de coincidencia del tipo de bordes para Mugil curema, con el resultado
del test de ajuste de chi-cuadrado.

4.5.1.3 Anlisis de los radios de los anillos

Cuantificar la variacin en los radios de los anillos (Rn) entre las lecturas es otro aspecto poco
discutido en estudios sobre el crecimiento de estructuras rgidas. Sin embargo, al igual que el
nmero de anillos y el tipo de borde deben ser similares entre las lecturas; si los radios de los
anillos son muy diferentes unos de otros hay inconsistencia entre las lecturas. Una manera de
comparar los radios entre las lecturas es a travs de distribuciones de frecuencia (adaptado de
Morales-Nin y Panfili 2002a). Para este mtodo, se elaboran distribuciones de frecuencias por
intervalos de clase para los radios de cada anillo.La comparacin entre las lecturas se hace de
dos en dos, a travs de la aplicacin de un test de Kolmogorov-Smirnov. Los radios del primer
anillo de merluza, Merluccius hubbsi, se compararon en las dos lecturas, no hallndose
diferencia entre ellos (P > 0,05) (Figura 4.11). Esta es una manera de identificar las
incoherencias, a pesar de no tener en cuenta las variaciones individuales. Una manera tenativa
de superar este problema sera aplicar el error porcentual medio (Beamish y Fournier 1981) y el
coeficiente de variacin (Chang 1982) para comparar los radios del mismo anillo, reemplazando
el nmero de anillos por los radios. Esto permite analizar todas las lecturas simultneamente y
las variaciones superiores al 5%. En el caso de nuestro ejemplo, la aplicacin de estos ndices a
los radios del primer anillo considerando las tres lecturas de otolitos, ha dado como resultado
EMPR1 = 4,10% y CVR1 = 1,13%, lo que indica una alta precisin.

109
Figura 4.11 Distribucin de frecuencias de los valores de los radios de anillo 1 para la
merluza, Merluccius hubbsi, con el resultado del test de Kolmogorov-Smirnov.

4.5.2 Representatividad de las lecturas de otolitos

Los pasos descriptos en la seccin 4.5.1 sirven para la comparacin entre las lecturas y la
consolidacin de un nico conjunto de informacin (nmero de anillos, el tipo de borde, radios
de los anillos, radios del otolito) que se utilizarn en etapas posteriores del estudio. Se considera
que, a partir de este momento, hay un conjunto depurado de informacin para el anlisis.
El uso de las cuentas (NA) y los radios de los anillos (Rn) como indicadores del crecimiento
implica que los anillos representan este crecimiento. De lo contrario, no hay que utilizar la
informacin y seguir con la asignacin de edad en el estudio del crecimiento.
La construccin de un diagrama de dispersin entre las medidas de los radios de los otolitos (Ro)
y la longitud del cuerpo (FL), ajustndose a una regresin entre los datos, es la primera manera
de comprobar si el eje de lectura representa el crecimiento de la especie (Figura 4.12A).
Observe que hemos utilizado un ejemplo real, una liza (Mugil curema), cuyos otolitos enteros
fueron analizados en el eje posterior y en el cual no todas las longitudes estuvieron bien
representadas en la muestra. Independientemente de esto, el ajuste fue bueno, lo que indica que
el eje de lectura crece en una proporcin mayor que la longitud (b > 1), y esto es ventajoso para
el anlisis de los anillos.
El grfico de la constancia (Vaz-dos-Santos y Rossi-Wongtschowski 2007) consta de un ploteo
individual de los valores de los radios de los anillos (Rn), por grupo de anillo, dependiendo de la
longitud total (Figura 4.12B). Permite averiguar si los radios de los anillos presentan la misma
posicin a lo largo de todas las edades, que es inherente a las propiedades de los otolitos, que
una vez formados no son reabsorbidos (Morales-Nin 2000).

110
El anlisis de la posicin de cada anillo, a travs de las medidas de sus radios (Rn) es otra
tcnica que permite comprobar si los anillos representan al crecimiento. Debe utilizarse el
grfico de caja (Figura 4.12C) para presentar la variacin de los elementos de estadstica
descriptiva. En el ejemplo con M. curema, hay escasa superposicin entre las cajas, que refuerza
la adecuacin del anlisis de otolitos. En este texto no se recomienda el uso de valores medios y
de intervalos de confianza, porque el objetivo es verificar la precisin de los datos muestrales y
no la media en s misma; con este fin se hace la prueba estadstica, se puede aplicar un anlisis
de varianza de un factor (o el teste Kruskal Wallis) (Zar 2010), seguido de un test a posteriori
para identificar si las medidas de los anillos son diferentes. En el caso de nuestro ejemplo, hubo
una variacin significativa entre las medias (ANOVA F = 1.887,46, P < 0,001), no habiendo
diferencias significativas slo entre la media de los radios de los anillos 4 y 5 (P > 0,05).

A B

anillo
anel

Figura 4.12 Ejemplo con datos de Mugil curema. (A) Diagrama de dispersin y regresin
potencial entre los radios de los otolitos (Ro) y longitud total (FL), indicando proporcionalidad
en las lecturas. (B) Grfico de constancia indicando consistencia en la posicin de los anillos
(Rn) en relacin a los diferentes longitudes totales (FL). (C) Grfico de caja indicando poca
superposicin entre las medidas de los radios de los anillos (Rn), que acompaan al crecimiento
(punto = media; barra central = mediana; caja cuartiles; barras = 1,5 x intervalo intercuartil;
asterisco = observaciones espurias).

111
4.5.3 Validacin

La validacin consiste en la determinacin de la frecuencia y poca de formacin de los anillos

de los otolitos. Debe ser realizada para cada edad por separado, es decir, por grupo de anillos.
La formacin de cada anillo se validada, entonces la edad absoluta de los peces tambin ser
validada (Campana 2001). Este concepto est directamente relacionado con la exactitud de la
lectura de otolitos, es decir, cunta de la informacin de hecho indica la edad del pez (Geffen
1992). Muchos estudios sobre edad y crecimiento presentan una validacin con todos los anillos
juntos (y por eso no los mencionaremos), sin que esto sea discutido, ponderado o explicado,
llevando a una situacin peor que la falta de validacin: la validacin poco sustentable y/o
equivocada.
El artculo de Campana (2001), con las debidas actualizaciones en su sitio web26, as como el
Manual of Fish Schlerochronology (Panfili et al. 2002), presentan y discuten diferentes tcnicas
de validacin, tanto de la edad absoluta o de la formacin de anillos, como un indicador de la
edad absoluta. En este texto nos centraremos en aquellas tcnicas que son comnmente
utilizadas debido a su viabilidad27. La validacin directa (formacin de marcas en peces con
edades conocidas) (Wright et al. 2002b) ha sido aplicada principalmente a los anillos diarios o
en la validacin del primer anillo.
Seguramente los mtodos de validacin semidirectos (Panfili y Morales-Nin 2002a) son los ms
aplicados, a pesar de sus limitaciones tcnicas, analizadas detalladamente por Campana (2001).
Estos autores subrayan la importancia de tener dos ciclos completos y analizar cada grupo de
anillos por separado para la aplicacin de estas tcnicas. Se adiciona a estas observaciones una
resolucin temporal detallada (cada dos semanas o meses) es ideal para el uso de estas tcnicas.
Se recomienda tambin un enfoque holstico a la validacin, con el uso de varias tcnicas
simultneamente.

4.5.3.1 Incremento marginal

El anlisis del incremento marginal (MI) es una tcnica que cuantifica la distancia del ltimo
anillo formado en relacin con el borde del otolito, siendo una herramienta til para los
individuos con ms de un ao de edad, jvenes (y preadultos) y con baja longevidad (Campana
2001, Panfili y Morales-Nin 2002a). En los peces viejos y longevos, debido a la proximidad de
los anillos cerca del borde, esta herramienta es poco prctica. Tiene como su supuesto bsico
que la distancia entre los anillos se reduce gradualmente a lo largo del desarrollo. El valor del

26
http://www.bio.gc.ca/otoliths/
27
Principalmente en Latinoamrica.

112
incremento marginal vara entre cero y uno, y los valores ms pequeos indican la formacin
del anillo.
La cuantificacin del incremento marginal puede ser analizada de forma absoluta (MIA) o
relativa (MIR) (Panfili y Morales-Nin 2002a), siendo utilizadas las siguientes frmulas de Mio
(1961):

Ro Rn Ro Rn
MIA = MIR =
Ro Rn Rn1
Donde:
Ro = radio del otolito;
Rn = radio del anillo ms cercano al borde;
Rn-1 = radio del penltimo anillo ms cercano al borde.

Estas frmulas permiten el clculo del incremento marginal de manera individual y

posteriormente se analizan los promedios por perodo por grupo de anillo (Figura 4.13). Las
distribuciones de frecuencias de incrementos marginales por las clases de MI, por un perodo,
tambin pueden utilizarse para evaluar el desplazamiento de moda a lo largo del ao entre los
valores altos y bajos, indicativos de la formacin del anillo (Haimovici y Reis 1984, Vieira y
Haimovici 1993).

Figura 4.13 Ejemplo generalizado del clculo del incremento marginal para los grupos de 2 y
3 anillos a lo largo de dos ciclos. Notar que el incremento del grupo 3 fue proporcionalmente
menor que el del grupo 2, como era de esperarse. Los valores de los meses de mayo-junio-julio
sugieren que este es un periodo de formacin de anillos.

113
La aplicacin de incremento marginal debe considerar: (i) otolitos seccionados permiten obtener
mayor precisin en la identificacin y medicin de los anillos en el borde (Hyndes et al. 1992);
(ii) sus fuentes de sesgo son muestras insuficientes, anlisis conjuntas de peces capturados a lo
largo de periodos extensos y en especies con perodos reproductivos largos y varias fechas de
eclosin (Lessa et al. 2006); (iii) el alimento y la temperatura pueden influir en el ancho de los
incrementos de los otolitos (Fey 2005).

4.5.3.2 Porcentaje del tipo de borde

El anlisis del porcentaje del tipo de borde en el perodo y por anillo (Figura 4.14) debe ser
realizado en conjunto con el anlisis del incremento marginal (Morales-Nin 1992, Panfili y
Morales-Nin 2002a). Este es un mtodo que se ha utilizado ampliamente (Quddus et al. 1984,
Rtz 1994, Norbis et al. 1999, Hie et al. 2009, Vaz-dos-Santos y Rossi Wongtschowski 2007,
Cardoso y Haimovici 2011, Hssy et al. 2011, Scartascini et al. 2015). Sin embargo, cabe
mencionar que las condiciones para su uso son las mismas que las observadas para el
incremento marginal, que requiere precaucin en la interpretacin de los datos de peces con los
diferentes grupos de anillos.

Figura 4.14 Ejemplo generalizado del anlisis del tipo de borde para un grupo de anillos a lo
largo de dos ciclos. Tenga en cuenta que el alto porcentaje de bordes translcidos en los meses
de mayo-junio-julio sugiere que ste es el perodo de formacin de los anillos.

4.5.3.3 Otras tcnicas de validacin

La validacin de la formacin de los anillos y la edad absoluta se puede realizar a travs de otras
tcnicas, algunas de ellas a veces son confundidas con tcnicas de corroboracin, es decir,

114
aquellas utilizadas para reforzar la precisin de la tcnica de validacin (Campana 2001). La
validacin y corroboracin son temas actuales y de vanguardia: basta comprobar que en el 5th
International Otolith Symposium, celebrado en Palma de Mallorca en el ao 2014, en Espaa, se
desarroll un taller entero dedicado al tema.
Entre las otras tcnicas de validacin, comnmente aplicadas en estudios en el hemisferio norte
estn las siguientes: (i) las que utilizan peces con edades conocidas (Morales-Nin et al. 2010,
Koenigs et al. 2015); (ii) las que utilizan marcacin y recaptura (Eveson et al. 2015, Etherton
2015); (iii) las que hacen datacin por radiocarbono (carbono 14) (Kalish 1993 depende de los
peces si han estado expuestos a pruebas nucleares); (iv) las de aplicacin de radioqumica, con
el uso de los istopos asociados a variables ambientales (Kastelle et al. 2014); (v) la de
progresin de modas de longitud (Carbonara et al. 2014), y; (vi) las de cra en cautiverio
(Freshwater 2014). La mayora de estas tcnicas ofrecen una mayor eficiencia en especies de
clima templado y aguas fras, con ciclos de vida marcados, adems dependen de muestreos ms
eficientes en trminos de resolucin espacial y temporal y, en muchos casos, implican altos
costos.
Semejante a los conceptos generales que orientan el uso y aplicacin de la progresin de modas
de longitud del pez (item v del prrafo anterior), el anlisis de la media de la longitud de cuerpo
por grupo de anillo a lo largo de un ciclo (idealmente dos) permite comprobar el tiempo en que
un nuevo anillo se forma con el aumento de la longitud (Yamaguti y Santos 1966, Vazzoler
1981, Saccardo et al. 1988).
Campana (2001) informa que, cuando no se puede validar la edad absoluta en un anlisis
macroestrutural, uno debe tratar de validar la formacin del primer anillo anual o
macroestructural (combinando, por ejemplo, tcnicas de anillos diarios), delimitando as el
marco inicial del anlisis de anillos. Ejemplos para Mugil curema (Santana et al. 2009),
Trachurus murphy (Goicochea et al. 2013) y Thunnus albacares (Shih et al. 2014) ilustran estas
situaciones.
Como herramienta en el diagnstico sobre la formacin de los anillos de otolitos, uno puede
calcular el factor de condicin medio (Le Cren 1951, Froese 2006), por perodo y por grupo de
anillo. El factor de condicin, como una medida del buen estado del individuo (Bagenal y Tesch
1978), puede ser utilizado eficientemente en estudios de dinmica poblacional, ayudando a la
diagnosis sobre el crecimiento, la alimentacin y la reproduccin. De esta manera, usted puede
utilizar el factor de condicin alomtrico (Kt) y/o relativo (Kn):

FW FW
Kt = Kt =
FLb FW '
Donde:
FW = peso total del individuo;

115
FL = longitud total del individuo;
b = constante exponencial de la relacin longitud- peso;
FW = peso total esperado, calculado a partir da relacin longitud-peso.

Se recomienda el uso del factor de condicin alomtrico por su independencia de la longitud del
cuerpo (1986). El factor de condicin relativo tiene como ventaja el valor referencial 1
(Andrade-Talmelli et al. 2001).

4.6 Estimacin de los parmetros de crecimiento y la estructura etaria

La validacin de la formacin de los anillos y la edad absoluta permite convertir a los grupos de
anillos en edades. Observe que la asignacin de la edad no es un proceso simple; depende de
cuntos anillos se forman anualmente, cuando se forman, la fecha de la captura de los peces y
cuando ocurre el reclutamiento (FAO 1981, Morales-Nin y Panfili 2002b). Elementos
adicionales en la interpretacin de los otolitos (anillos preanuales), asociados a eventos
especficos (cambio de hbitat, primera maduracin, etc.) deben se han diagnosticados; ver los
mismos en los otolitos y su significado de su estructura es fundamental.
Consideremos como ejemplo para la asignacin de la edad de la sardina, Sardinella brasiliensis:
son reportados dos anillos preanuales en jvenes antes de un ao (Rossi-Wongtschowski et al.
1982) y la formacin de dos anillos por ao, uno en noviembre, cuando comienza el periodo
reproductivo y otro en marzo, al final de la freza (Saccardo et al. 1988). De esta manera, una
sardina capturada en abril de 2015 con tres anillos y borde translcido presenta un ao de edad:
el anillo final de reproduccin est siendo formado (borde), el anillo del principio de la
reproduccin es completo (fin de 2014) y otros dos anillos en el primer ao de vida (el
individuo es un producto del fin de desove 2013-2014). Atento a esto se puede asignar la edad,
cuidadosamente y con criterio.
Finalmente se obtiene la correlacin entre la edad (x) y la longitud (y). Esta es la base para la
estimacin de los parmetros de crecimiento del modelo de von Bertalanffy y otros modelos,
que no se tratarn aqu. La estimacin de los parmetros de crecimiento puede hacerse a travs
de todos los datos de edad y longitud o con las medias de longitud por edad. La eleccin del
mejor ajuste debe tener en cuenta: el ajuste del modelo a los datos (anlisis visual del grfico),
la adecuacin biolgica de las estimaciones y criterios estadsticos, como la varianza (S2) o el
error estndar (S) de la regresin (Zar 2010) o el criterio de informacin Akaike (Quinn II y
Deriso 1999). Para estimar los parmetros del modelo, se recomienda el uso de mtodos
interactivos de minimizacin de la suma de los cuadrados residuales (Sparre y Venema 1998) o
de mxima verosimilitud (Aubone y Whler 2000).

116
En el caso de Sardinella brasiliensis, se aplic el mtodo de minimizacin de la suma de los
cuadrados residuales, para todos los datos de longitud (A) y para sus medias por edad (B),
siendo obtenidos los siguientes modelos de crecimiento (Figura 4.15):

FLt = 255,82 {1 - e [-0,3557 (edad + 1,1494)]} S = 27,895 (A)

FLt = 297,59 {1 - e [-0,2584 (edad + 1,3215)]} S = 4,249 (B)

250 250
A B
200
200
(mm)

(mm)
Ct (mm)

Ct (mm)
150
150
FL

FL
100
100
50
0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 5
idade (anos) idade (anos)
edad (aos) edad (aos)

Figura 4.15 Curvas de crecimiento del modelo de von Bertalanffy para Sardinella brasiliensis,
estimadas con todos los parmetros aleatorios. (A) Longitud total por edad. (B) Longitud total
media por edad.

En el ejemplo anterior, qu modelo elegir para representar el crecimiento de Sardinella

brasiliensis? Visualmente, la curva B se ajusta mejor a los datos, as como por el menor valor
del error estndar de la regresin (S). En trminos biolgicos, la mayor longitud del cuerpo en la
muestra fue de 242 mm y, por este atributo, el modelo A fue mejor. Sin embargo, tenga en
cuenta que en ambos modelos el valor de la edad terica de longitud cero (t0) fue un valor
absurdo y sin ningn significado biolgico, tal como se expresa en aos. Si tomamos el valor de
1,1494 y multiplicsemos por 365 das tendramos antes de la eclosin una etapa huevo con
duracin de aproximadamente 420 das!
Hay varias opciones para solucionar este problema y estas maneras involucran el criterio de
parsimonia, sentido comn y capacidad de modelar. Por ejemplo, es posible estimar slo la FL
y k del modelo de von Bertalanffy, sin el t0.
En este ejemplo, hemos elegido estimar la longitud mxima terica con la frmula de Pauly
(1983) y no variar este valor, siendo FL = FLmximo / 0,95, resultando en 254,74 mm. Esta
opcin fue debido a la pequea cantidad de los peces ms grandes y ms viejos en la muestra, a
pesar de la referencia disponible. Incluso sabiendo el tiempo de incubacin de la sardina,
aproximadamente 24 h y correspondiente a una t0 = -1/365 = -0,003 ao, hemos decidido no
fijar este valor en la estimacin, por no tener peces pequeos disponibles y los datos en esta

117
parte de la curva. A su vez, los peces de edad cero tambin se retiraron de la estimacin, por
presentar una varianza muy grande y ser individuos que no poseen an un ao, pero no poseen
tampoco la edad cero propiamente dicha. Podramos utilizar los anillos preanuales para estimar
una edad fraccionaria, pero aqu decidimos simplificar el anlisis. La nueva estimacin result
en el siguiente modelo (Figura 4.16), que presenta una mejor adecuacin biolgica y un buen
ajuste estadstico (S) (aunque no es el mejor, pero esto no es el nico criterio de eleccin) para
describir el crecimiento de S. brasiliensis de la muestra analizada. Obviamente en este caso el
valor de t0 no muestra ningn significado biolgico.

FLt = 254,74 {1 - e [-0,4135 (idade + 0,8358)]} S = 7,659

250

225
FL (mm)

200
Ct (mm)

175

150

1 2 3 4 5
idade (anos)
edad (aos)

Figura 4.16 Curva de crecimiento del modelo de von Bertalanffy para Sardinella brasiliensis,
estimada con la longitud mxima terica fijada.

Con las edades atribuidas o extrapoladas a la muestra analizada con el modelo de von
Bertalanffy inverso (del cual los otolitos fueron submuestrados), es posible construir una clave
edad-longitud (Ricker 1975). Esta tabla le permite convertir longitudes en edades y de esta
forma acceder a la estructura etaria de la muestra o de la poblacin:

Clave edad longitud de Sardinella brasiliensis.

Lmite Edad (aos)

inferior Clase Total
FL (mm) 0 1 2 3 4 5

60 100% 100%
70 88% 13% 100%
80 75% 25% 100%
90 78% 22% 100%
100 17% 83% 100%
110 56% 44% 100%

118
 120 55% 45% 100%
130 64% 36% 100%
140 33% 67% 100%
150 23% 50% 27% 100%
160 11% 57% 32% 100%
170 21% 55% 24% 100%
180 25% 46% 25% 4% 100%
190 6% 65% 29% 100%
200 35% 60% 5% 100%
210 41% 47% 12% 100%
220 26% 61% 13% 100%
230 18% 53% 29% 100%
240 100% 100%

A pesar de ser tratar de un ejemplo para este libro, a alta variabilidad biolgica observada em la
tabla es comn principalmente en especies tropicales e subtropicales y con prolongados largos
perodos de desove, caso de los r-estrategistas. Dificilmente, en estas anlisis se producem
ejemplos ideales...

4.7 Retroclculo

El retroclculo es el conjunto de tcnicas que permite reconstituir el patrn de crecimiento

individual de cada pez a partir de los anillos de los otolitos (Vigliola y Meekan 2009). Depende
de la relacin entre el radio de los otolitos (Ro) en el eje de lectura (variable independiente x) y
la longitud del cuerpo (variable dependiente y), a partir de la cual se puede estimar, con
diferentes mtodos, las longitudes corporales en la poca de formacin de los anillos. Esto es
til para: (i) generar datos de longitudes en edades mal representadas en las muestras, tales
como en peces de edades ms tempranas; (ii) aumentar la cantidad de datos para estimar el
modelo de crecimiento, mejorando el ajuste, y; (iii) verificar la consistencia de las lecturas de
anillos (por ejemplo, si un anillo genera una longitud de retroclculo negativa, hay un error!)
(Vaz-dos-Santos y Rossi Wongtschowski 2007).
Existen varios estudios sobre tcnicas de retroclculo, pero son clsicos indispensables Francis
(1990, 1995) y Campana (1990). Posteriormente a ellos, se destacan Jones (2000), Wilson et al.
(2009) y Vigliola y Meekan (2009). No desarrollaremos en este texto el retroclculo, dada la
especificidad del tema exige una profundizacin por el lector.

119
4.8 Conclusiones

El uso de otolitos es una de las herramientas ms precisas para los estudios sobre edad,
crecimiento y estructura etaria. Este rea se ha mejorado e involucra la combinacin de
mltiples tcnicas, como marcacin-recaptura, el anlisis morfomtrico, el uso del peso del
otolito como indicador de la edad, el anlisis macro y microestructural, y anlisis qumicas
(istopos, microqumica) como indicadores ambientales y de ciclo de vida. Los modelos
ecolgicos-ecosistmicos, herramientas de uso, manejo y conservacin de ambientes y
organismos acuticos, tambin requieren buenos y precisos estudios de edad y crecimiento,
adquiriendo mayor importancia ms all de su motivacin inicial en las ciencias pesqueras.
Tambin los anillos no anuales, como los anillos preanuales formados durante el primer ao de
vida, marcas relacionadas con la migracin entre ambientes o eventos especficos (el fenmeno
de El Nio, precipitaciones, intrusin de masas de agua, inanicin, etc.) se han explorado en la
asignacin de la edad. Luego, las preguntas/hiptesis que motivan el uso de otolitos en la edad y
el crecimiento se han ampliado y ganado complejidad.
Dos tendencias contrastantes se desarrollan en la actualidad en relacin con el uso de otolitos
para estudios de edad y crecimiento en diferentes pases y grupos de investigacin alrededor del
mundo. En el hemisferio norte, sobre todo, se ve un escenario positivo, en el que estos estudios
todava se estn realizando, desarrollando y mejorando (revisin constante de los protocolos y
mtodos, con innovaciones), tanto para el monitoreo pesquero como para las ciencias naturales
(biologa, ecologa, fisiologa, oceanografa, limnologa, entre otras). Por otro lado, en un
escenario preocupante, los otolitos se han utilizado en una rutina aptica e incuestionable de la
edad y crecimiento para los monitoreos pesqueros, o son utilizados para otros estudios
(morfometra, microqumica, istopos, etc.), relegando a la edad y el crecimiento a una "ciencia
menor y anticuada". Se pueden pensar algunas de las razones para tal situacin, comentadas
seguidamente.
Estudios de edad y crecimiento involucran el anlisis de grandes cantidades de otolitos, de
cientos a miles de individuos, o que depende de un gran esfuerzo (muestral, financiero,
analtico) que, fuera de una estructura y rutina institucional, es de difcil viabilidad. Adems, la
calidad de un cientfico y acadmico se mide principalmente por sus publicaciones en revistas
con alta cualificacin y factor de impacto; un laborioso estudio de edad y crecimiento que no
observe estrictamente la metodologa aqu mencionada y no desarrolle grandes hiptesis,
difcilmente ser aceptado en estas publicaciones. Luego, personalmente y profesionalmente, un
investigador tiende a optar por otro tipo de otolitologa que, con decenas de otolitos, permite
publicar en estas revistas (pero no responden a las cuestiones de edad y el crecimiento). Aadir
a estos factores el anlisis de otolitos, de edad y crecimiento, requiere desarrollo, facilidad y
familiaridad con tcnicas cuantitativas como el clculo diferencial e integral, la bioestadstica

120
(paramtrica y no paramtrica) bayesiana y de verosimilitud, el modelado y el anlisis
multivariados.
El escenario descripto anteriormente trae unas consecuencias nefastas para los estudios de la
edad y crecimiento basados en otolitos, diagnosticados por el seguimiento constante del tema en
publicaciones y eventos.
Para muchas especies de peces, existe el sndrome de parmetro eterno o sea: una vez que hay
una estimacin de los parmetros de crecimiento para la especie en un rea y lugar determinado,
ya no es interesante para el estudio. Evidentemente esta percepcin contradice los principios
bsicos de la ecologa, sobre plasticidad biolgica, denso-dependencia poblacional, efectos
ambientales y biolgicos en individuos y poblaciones. Por eso estudie y reestudie los otolitos, la
edad y el crecimiento, porque siempre habr preguntas para ser respondidas.
El uso de otolitos en otras tcnicas (descriptas en este libro), con las preguntas/hiptesis
inherentes a ellas, puede requerir que la edad de los peces sea conocida. En la ausencia de
parmetros de crecimiento actualizadas para la poblacin en cuestin, hemos observado el uso
de estimaciones para las especies "en otras zonas/localidades" o, peor an, la adopcin de los
parmetros estimados para especies congneres. Esto no se puede hacer y, en este caso, debe
utilizarse el conteo de anillos (peces designados por grupos de anillos) y las medidas de los
radios de los anillos a lo largo del eje de lectura para la realizacin del estudio; cuando
finalmente se estudia el crecimiento de especies, ser fcil convertir los resultados en edad.
Hay muchos estudios de edad y crecimiento publicados en varias revistas (inclusive en las
altamente cualificadas) que presentan una sucesin involuntaria de errores, no observando el
rigor metodolgico presentado en este captulo. Poseen resultados frgiles y discusiones
inapropiadas. Parte de esto es debido al efecto de "bola de nieve": como muchos errores se
publican, sirven de referencia bibliogrfica para otros autores, perpetundose y consolidndose
como verdad. Otro elemento que puede contribuir a esto es el reduccionismo de algunos
acadmicos: o sea que buscan en la literatura slo los parmetros de crecimiento de la especie,
sin leer en los artculos sus precisas y correctas discusiones.
Como una consideracin final, este texto presenta de forma objetiva y directa los principales
aspectos de los estudios de edad y crecimiento con los otolitos; no pretende ser una referencia
completa sobre el tema y, por lo tanto, sirve como una referencia inicial para esta rea de la
esclerocronologa.

Agradecimientos

A mis estudiantes de grado y posgrado que en estos aos colaboraron conmigo en el estudio de
los distintos aspectos de los otolitos. A MSc. Nayra Nicolau dos Santos Cruz, con quien
iniciamos el estudio de la morfologa y morfometra de otolitos en UNISANTA, en 2005, y que

121
fue la primera "enviada" a Buenos Aires, para el curso de otolitos de la Dra. Alejandra Volpedo.
A MSc. Adrielen da Silva Rondon, quien enfrent el desafo de consolidar el espacio fsico del
laboratorio de USJT en 2009. A mis manos derechas actuales, que me ayudan en la preparacin
de este captulo: Brbara Gris, Aline Giombelli da Silva y Anglica Arruda Justino.

122
5. MICROQUMICA DEL OTOLITO: CONCEPTOS, MTODOS Y APLICACIONES

Esteban Avigliano y Alejandra Vanina Volpedo

Sumario
5.1 Introduccin........................................................................................................................123
5.2Qu factores influencian la composicin qumica de los otolitos?.....................................124
5.3 Mtodos para determinar la composicin qumica de los otolitos......................................126
5.3.1 Espectrometra de absorcin atmica (AAS)...................................................................127
5.3.2 Espectrometra de emisin atmica por plasma acoplado inductivamente (ICP-OES)...128
5.3.3 Anlisis de activacin neutrnica (NAA)........................................................................129
5.3.4 Microsonda electrnica (EPMA).....................................................................................130
5.3.5 Emisin de rayos X inducida por micro partculas (Micro-PIXE)...................................131
5.3.6 Espectrometra de masas por plasma acoplado inductivamente (ICP-MS)......................131
5.3.7 Espectrometra de masas por plasma acoplado inductivamente con ablacin laser (LA-
ICP-MS)....................................................................................................................................132
5.4 Cmo analizar los resultados estadsticamente para la discriminacin de reas de ca,
desove y stocks pesqueros, utilizando la microqumica de los otolitos?...................................133
5.5 Anlisis de los datos de la composicin qumica de los otolitos.........................................133
5.5.1 Tratamientos de datos con distribucin normal y homocedastica: estadstica paramtrica133
5.5.2 Tratamientos de datos que no ajustan a la distribucin normal y homocedastica: estadstica
no paramtrica...........................................................................................................................135
5.6 Aplicacin de la composicin qumica de los otolitos en el anlisis de patrones de migracin
del bagre Genidens barbus usando LA-ICP-MS.......................................................................136
5.7 Conclusiones.......................................................................................................................137

5.1 Introduccin

Los otolitos estn compuestos principalmente de carbonato de calcio (97-99%) en una matriz
orgnica (Campana 1999). El carbonato de calcio est predominantemente en forma de
aragonita y se deposita continuamente a lo largo de la vida del pez en la mayora de los
telesteos (Campana 1999, Campana y Thorrold 2001). Sin embargo, en algunos peces como en
los dipnoos se pueden encontrar carbonato de calcio polimrfico compuesto por vaterita y
aragonita (Lepidosiren paradoxa y en Propterus sp.), en cambio Neoceratodus sp. el carbonato
de calcio polimrfico est compuesto por aragonita y calcita (Gonzalez Naya et al. 2008).
El agregado de calcio es un proceso extracelular que se encontrara regulado hormonalmente e

123
influenciado por variaciones ambientales (Morales-Nin et al. 1998). Estas estructuras son
conservativas ya que el material que los compone no se reabsorbe ni altera, siendo por lo tanto,
los otolitos qumicamente (metablicamente) inertes.
Los elementos qumicos son incorporados o bien desde el agua a la sangre del pez, por
intermedio de las branquias y o bien desde el alimento al intestino, pasan a la endolinfa y
finalmente se cristalizan en el otolito (Campana 1999, Sturrock et al. 2012). Los elementos
pueden incorporarse directamente cristalizndose sobre el otolito, por sustitucin del calcio, as
como por inclusin en los espacios intersticiales o en la matriz proteica del otolito (Campana
1999). Los detalles de la incorporacin de los elementos qumicos en el otolito fueron revisados
por Campana (1999) y Sturrock et al. (2012).

5.2Qu factores influencian la composicin qumica de los otolitos?

La composicin qumica de los otolitos en los peces est influenciada por factores endgenos e
exgenos al pez. Los factores exgenos pueden ser la composicin qumica del agua, las
condiciones ambientales (por ejemplo, temperatura, salinidad) y las fuentes de alimento (Kalish
1991, Thorrold et al. 1997, Campana 1999, Secor y Rooker 2000, Elsdon y Gillanders 2002,
Sturrock et al. 2012).
La composicin qumica del agua es regulada por procesos fsico-qumicos, y est influenciada
por los diferentes orgenes geolgicos de las rocas subyacentes, la precipitacin, el
escurrimiento, la meteorizacin, la evaporacin, los procesos microbianos, y adems de la
influencia antrpica (Kerr et al. 2007, 2014, Volpedo y Fernndez Cirelli 2013). La
composicin qumica de los otolitos ha sido una muy buena herramienta para reflejar la
variabilidad espacial en la composicin qumica del agua en distintas escalas espaciales (Secor y
Zdanowicz 1998, Gillanders y Kingsford 2000, Gillanders 2002, Dorval et al. 2005, Miller
2007, Walther y Thorrold 2008, Scartascini y Volpedo 2013, Avigliano y Volpedo 2013,
Avigliano et al. 2014) y temporales (Campana et al. 2000, Gillanders 2002, Mateo et al. 2010).
El anlisis de la microqumica del otolito puede proporcionar un perfil de la historia de vida
(Campana y Thorrold 2001) y datos de la historia ambiental de cada pez (Wells et al. 2003,
Dufour et al. 2005, Whitledge et al. 2006). En particular, los elementos traza en combinacin
con los anillos de crecimiento, son un importante archivo que registran de forma organizada en
el tiempo la informacin del ambiente frecuentado por el pez, los cambios ambientales y la
exposicin a contaminantes a lo largo de la ontogenia (Halden y Frierich 2008). Si bien el uso
de la composicin qumica de los otolitos como un marcador natural se inici en las ltimas
dcadas, las relaciones entre las concentraciones de algunos elementos presentes en el otolito y
las matrices ambientales (agua, sedimento e tems de la dieta de los peces) no son claras (Elsdon
et al. 2008), y podran deberse a diferencias interespecficas, por lo que no se pueden realizar

124
generalizaciones. Entre los elementos traza ms estudiados en los otolitos estn el estroncio (Sr)
y el bario (Ba) (Campana 1999, McCulloch et al. 2005, Elsdon y Gillanders 2005, Tabouret et
al. 2010, Avigliano et al. 2014, 2015a,b).
La variabilidad de la concentracin de Sr en los otolitos se debe principalmente a la
composicin qumica del agua y en menor medida a la temperatura (Campana 1999, Wells et al.
2003). Existe una asociacin positiva entre la concentracin de Sr en los otolitos y el agua. A su
vez, la concentracin de Sr en el agua est relacionada positivamente con la salinidad (Kraus y
Secor 2003, Avigliano y Volpedo 2013).
Por el contrario, la concentracin de Ba en el otolito est negativamente correlacionada con la
salinidad del agua (Tabouret et al. 2010). Estas particularidades hacen que el Sr y el Ba sean los
elementos ms utilizados en el estudio de desplazamientos y discriminacin de stocks pesqueros
de peces que frecuentan ambientes con diferente salinidad (Secor et al. 1995, Kraus y Secor
2004, Zlokovitz et al. 2003, Schuchert et al. 2010, Tabouret et al. 2010, Holbach et al. 2012,
Reis-Santos et al. 2012, Avigliano y Volpedo 2013, Avigliano et al. 2014, 2015c,d,f).
La relacin entre el Sr y la temperatura varia interespecficamente (Campana 1999). Sin
embargo, en lneas generales, la relacin Sr:Ca del otolito tiende a incrementarse con la
temperatura (Campana 1999). A diferencia del Sr y Ba, la incorporacin de otros elementos
como el litio (Li), manganeso (Mn), magnesio (Mg) y zinc (Zn) en los otolitos depende de
diferentes factores, como temperatura, salinidad, concentracin de estos elementos en el agua,
de la dieta e incluso de factores fisiolgicos (Martin y Thorrold 2005, Bouchard et al. 2015).
Adems, se han documentado efectos sinrgicos entre la temperatura y la salinidad en la
qumica de otolitos, que pueden afectar la interpretacin de las historias ambientales de los
peces (Elsdon y Gillanders 2002, Kerr y Campana 2014).
Otros factores pueden estar asociados directamente a los peces como la bioecologia del pez
(alimentacin, fisiologa, reproduccin), su gentica y su historia evolutiva. La contribucin de
la dieta a la composicin qumica del otolito ha sido estudia escasamente tanto en los peces
silvestres como en condiciones de laboratorio. Algunos elementos como por ejemplo, Na
(sodio), Mg, Mn, K (potasio), Ca (calcio) y Cu (cobre) serian incorporados ms por el ambiente
que por la dieta (Buckel et al. 2004, Marohn et al. 2009), mientras que el Zn estara relacionado
en mayor medida con el alimento (Ranaldi y Gagnon 2008).
Las diferencias fisiolgicas entre las especies pueden resultar en diferencias en la incorporacin
de elementos en los otolitos. Por ejemplo, diferencias ontogenticas en las tasas de crecimiento
influyen en las concentraciones de Mg, Sr y Ba en otolitos (Kalish 1989, Fowler et al. 1995,
Secor et al. 1995) sin embrago estos procesos no estn claros. La reproduccin es otro de los
procesos que puede influenciar la composicin qumica de los otolitos, provocando variaciones
en la tasa de incorporacin de algunos elementos (Fuiman y Hoff 1995).
Recientes estudios tambin sugieren que la existencia de factores internos como las diferencias

125
genticas entre poblaciones pueden ser un factor determinante de la qumica de otolitos (Martin
y Thorrold 2005, Clarke et al. 2011).

5.3 Mtodos para determinar la composicin qumica de los otolitos

En relacin a las preguntas biolgicas que queremos responder sobre los peces, el estudio de la
composicin qumica del otolito depende de: (i) si dicha estructura es analizada en su totalidad
(otolito digerido en su totalidad), (ii) o en secciones desde el ncleo al borde, (iii) o punto a
punto dependiendo del rea que se pretenda analizar.
En el caso de que el otolito sea digerido en su totalidad, el mismo debe ser limpiado con agua
MiliQ luego de su extraccin y posteriormente pesado con una balanza analtica y digerido con
cido ntrico (HNO3) de mxima pureza. La concentracin de cido depender de la masa de los
otolitos y de la metodologa de determinacin de elementos (Avigliano et al. 2015c, Bailey et
al. 2015).
En el caso de que se analicen diferentes porciones del otolito, acorde a la tcnica sugerida por
Avigliano et al. (2015c,d) es necesario incluir a los otolitos en resina cristal epoxi y seccionarlos
transversalmente por su ncleo (Figura 5.1), como si fuera para el estudio de crecimiento.
Posteriormente, se obtienen las porciones requeridas por metodos de micropulido. Las porciones
obtenidas deben ser descontaminadas con acido ntrico y agua MiliQ previo a la digestion
(Arslan y Secor 2008).
Otras metodologas como LA-ICP-MS (Espectrometra de masas por plasma acoplado
inductivamente con ablacin laser) permiten determinar la microqumica del otolito en forma
continua desde el ncleo hacia el borde o bien en regiones especficas con elevada precisin
(Albuquerque et al. 2012).
Estos tipos de metodologas de anlisis estn estrechamente asociados al tipo de tcnicas
utilizadas para la determinacin de la composicin qumica y a los protocolos respectivos de
preparacin de las muestras y a los alcances de las mismas. Los mtodos ms aplicados en la
determinacin de la composicin qumica de los otolitos en los ltimos treinta aos son: (i)
Espectrometra de absorcin atmica (AAS), (ii) Espectrometra de emisin atmica por plasma
acoplado inductivamente (ICP-OES), (iii) Anlisis de activacin neutrnica (NAA), (iv)
Microsonda electrnica (EPMA), (v) Emisin de rayos X inducida por micro partculas (Micro-
PIXE), (vi) Espectrometra de masas por plasma acoplado inductivamente (ICP-MS), y (vii)
Espectrometra de masas por plasma acoplado inductivamente con ablacin laser (LA-ICP-MS).

126
Figura 5.1 - Proceso de aislacin de porciones del otolito lapillus de Genidens barbus mediante
la metodologa de micropulido. A-B: proceso de corte. C: vista de las secciones transversales.
D: Se muestran dos porciones separadas (4 anillos incluyendo el ncleo y 4 anillos incluyendo
el borde) (Fuente: Avigliano et al. 2015c).

5.3.1 Espectrometra de absorcin atmica (AAS)

El fundamento de este anlisis se basa en el principio que los tomos libres en estado
fundamental pueden absorber la luz a una cierta longitud de onda. La absorcin es especfica,
por lo que cada elemento absorbe a longitudes de onda nicas. La AAS es una tcnica analtica
aplicable al anlisis de trazas de elementos metlicos en diferentes matrices, en este caso los
otolitos.

Figura 5.2 - Espectrmetro de Absorcin Atmica Perkin Elmer 2100 (Fuente:

http://www.icv.csic.es/node/38).

127
La fuente ms comn que proporciona la luz que absorben los tomos para las mediciones, es la
lmpara de ctodo hueco rellena con un gas inerte generalmente es argn. Se necesita calor para
gasificar la muestra, esto se logra desde una llama u horno de grafito.
El AAS por llama puede solamente analizar soluciones, por lo que los otolitos en este caso
deben estar pretratados por digestin cida, mientras que AAS con horno de grafito puede
analizar tanto una solucin de otolito digerido como una muestra slida.
Un atomizador de llama consiste en un nebulizador el cual transforma la muestra en un aerosol
que alimenta el quemador. Un atomizador electrotrmico brinda alta sensibilidad porque
atomiza el 100% de la muestra. La atomizacin ocurre en un horno cilndrico de grafito abierto
de ambos lados y con un hueco central para la introduccin de muestras. Se utilizan dos
corrientes de gas inerte con presin positiva que evitan que el aire entre en el horno y permiten
extraer los vapores generados por la combustin de la muestra. El monocromador cumple la
funcin de aislar las lneas espectrales no deseadas, de la longitud de onda seleccionada para el
anlisis. Un fotomultiplicador convierte la luz en seales elctricas. Un equipo de AAS se
muestra en la Figura 5.2.
Este mtodo fue utilizado para determinar la composicin qumica de los otolitos de diferentes
especies como Sciaenops ocellatus (Hoff y Fuiman 1995, Townsend et al. 1995) y Morone
saxatilis (Secor et al. 2001).

5.3.2 Espectrometra de emisin atmica por plasma acoplado inductivamente (ICP-OES)

Esta tcnica permite la determinacin de concentraciones de trazas de elementos en otolitos,

donde para disociar molculas en tomos libres se utiliza un plasma. Ms recientemente, otros
tipos de descargas elctricas, llamadas plasmas, han sido usadas como fuentes de atomizacin /
excitacin para OES. Estas tcnicas incluyen el plasma inductivamente acoplado y el plasma
acoplado directamente. Las fuentes de plasma ofrecen varias ventajas comparadas con los
mtodos de llama y electrotrmicos. Una de estas ventajas es que es una tcnica que permite
determinar mltiples elementos y en un amplio rango de concentraciones. Se puede generar un
plasma acoplado por induccin al dirigir la energa de un generador de frecuencia de radio hacia
un gas, comnmente argn. Otros gases de plasma utilizados son helio (He) y Nitrgeno (N). Es
importante que el gas de plasma sea puro ya que los contaminantes en el gas pueden apagar la
antorcha.

128
Figura 5.3 - Espectrmetro de emisin ptico por plasma acoplado inductivamente (ICP-OES)
Perkin Elmer 2000.

La temperatura en el plasma vara entre 6.000-10.000 K. Esta energa es suficiente para ionizar
tomos de argn y de la muestra por excitacin de choque. La intensidad de la luz emitida es
separada por un sistema ptico de prismas y cuantificada por un detector. El ICP-OES permite
analizar una gran cantidad de muestras en un perodo corto con muy buenos lmites de deteccin
para la mayora de los elementos. Este mtodo fue utilizado para determinar al composicin
qumica de los otolitos de diferentes especies (Avigliano y Volpedo 2013, Avigliano et al. 2014,
2015).

5.3.3 Anlisis de activacin neutrnica (NAA)

Esta tcnica permite analizar una pequea muestra a exponerla a un flujo de neutrones trmicos
provenientes de un reactor. Muchos de los ncleos que se generan son radiactivos y se
desintegran con emisin posterior de un fotn. Los distintos rayos son caractersticos de cada
desintegracin particular. Por tanto, analizando los rayos emitidos por la muestra ''activada'', es
posible determinar los elementos presentes (mediante la energa) y su cantidad (mediante la
intensidad de los rayos). Se usan ordenadores y analizadores multicanal para determinar
automticamente las energas (Figura 5.4).

129
Figura 5.4 - Sistema de espectroscopia de rayos gama (Fuente:

http://serc.carleton.edu/details/images/8971.html).

El mtodo de NAA es no destructivo, puesto que la muestra queda intacta tras el anlisis. Por
ello el NAA es til para anlisis de muestras nicas (por ejemplo otolitos de especies de
importancia arqueolgica). Este mtodo fue utilizado por Suzuki et al. (2005) y Gao et al.
(2010).

5.3.4 Microsonda electrnica (EPMA)

El anlisis de microsonda electrnica es una tcnica de gran precisin y sensibilidad, cuyo

principio es bombardear la muestra con un fino haz de electrones con el fin de medir la longitud
de onda e intensidad de los rayos-X caractersticos emitidos. En la Figura 5.5 se muestra un
equipo de EPMA. Esta metodologa permite realizar determinaciones en transectas o regiones
puntuales del otolito y ha sido utilizada por diversos autores en las ltimas dcadas (e.g. Secor
et al. 2007, Lin et al. 2012, Panfili et al. 2012).

Figura 5.5 - Microsonda electrnica (EPMA) Jeol modelo JXA-8230 (Fuente:

http://www.directindustry.es/prod/jeol/product-20754-695697.html)

130
5.3.5 Emisin de rayos X inducida por micro partculas (Micro-PIXE)

Esta tcnica es de caracterizacin mineral y se aplica generalmente en exploracin y explotacin

mineral. El micro-PIXE es una microsonda protnica. Se analizan los rayos X producidos al
bombardear una muestra mediante un haz de protones que puede ser focalizado a escala
micromtrica. La tcnica consiste bsicamente en un acelerador que produce un haz de
protones con una energa de 3 MeV (aunque puede ser variable) y un sistema de focalizacin
magntico que direcciona el haz de protones a travs de un tubo horizontal hasta una cmara
donde se encuentra la muestra. Esta tcnica necesita estrictas condiciones de vaco para evitar
desenfoque del haz de protones. Al igual que la metodologa de EPMA, el anlisis por micro-
PIXE permite medir en regiones especficas del otolito con elevada precisin y es utilizada para
determinar elementos traza en los otolitos desde hace algunos aos (Babaluk et al. 2002, Saquet
et al. 2002, Zhong et al. 2007, Jiang et al. 2012).

5.3.6 Espectrometra de masas por plasma acoplado inductivamente (ICP-MS)

La espectrometra de masas (MS) utiliza el movimiento de iones en campos elctricos y

magnticos para clasificarlos de acuerdo a su relacin masa-carga. De esta manera la
espectrometra de masas es una tcnica analtica por medio de la cual las sustancias qumicas se
identifican separando los iones gaseosos en campos elctricos y magnticos.

Figura 5.6 - Espectrmetro de Masas con Plasma Acoplado Agilen 7500 Series (Fuente:
http://www.agilent.com/about/newsroom/lsca/imagelibrary/images/lsca_66_icpms.jpg)

La MS brinda informacin cualitativa y cuantitativa acerca de la composicin atmica y

molecular de materiales inorgnicos y orgnicos. Los espectrmetros de masas constan de
cuatro partes bsicas; un sistema de manipuleo para introducir la muestra desconocida en el
equipamiento; una fuente de ion, en la cual se produce un haz de partculas proveniente de la

131
muestra; un analizador que separa partculas de acuerdo a la masa; y un detector, en el cual los
iones separados son recolectados y caracterizados. El espectrmetro requiere un trayecto de
colisin libre para los iones y por lo tanto funciona al vaco o en condiciones casi al vaco.. La
fuente de ion crea fragmentos de ion gaseosos de la muestra. El objetivo del analizador de
masas es separar los iones que se producen en la fuente de acuerdo a las diferentes relaciones de
masa-carga. En la Figura 5.6 se observa un espectrmetro de masas. Este mtodo fue utilizado
para determinar al composicin qumica de los otolitos de numerosas especies (Swan et al.
2003, Patterson et al. 2004, Fairclough et al. 2011).

5.3.7 Espectrometra de masas por plasma acoplado inductivamente con ablacin laser
(LA-ICP-MS)

Esta tcnica tiene los mismos principios que los utilizados en el ICP-MS, pero tiene adosado a
la misma un equipo de ablacin laser (Figura 5.7). Al igual que las metodologas de EPMA y
micro-PIXE, esta tcnica permite determinar elementos traza en forma puntual sobre secciones
de otolitos. Sin embargo, proporciona mayor sensibilidad, sobre todo para elementos como Cd
(cadmio), Cu (cobre), Pb (plomo) y Zn (zinc) (Arslan y Secor 2008). Es probablemente la
metodologa ms utilizada en estos ltimos aos (Arai et al. 2007, Albuquerque et al. 2012,
Geffen et al. 2013, Mai et al. 2014, Avigliano et al. 2015a,b).

Figura 5.7 - Espectrmetro de masas por induccin de plasma con multicolectores y sistema de
ablacin por Lser acoplado (LA-MC-ICP-MS) (Fuente:

http://www.cega.ing.uchile.cl/cega/index.php/es/noticias?start=60).

132
5.4 Cmo analizar los resultados estadsticamente para la discriminacin de reas de ca,
desove y stocks pesqueros, utilizando la microqumica de los otolitos?

El anlisis de los datos obtenidos en las determinacin es de la composicin qumica de los

otolitos son tan importantes como las determinaciones de dichos valores. La concentracin de
los elementos traza debe ser reportada en funcin del Ca. Esto est relacionado con dos factores:
(i) algunos elementos divalentes en solucin como el Sr y el Mg pueden precipitar en el otolito
sustituyendo al Ca, de igual radio atmico (Carlstrom 1963); (ii) el CaCO3 es el elemento
mayoritario en los otolitos (Campana 1999), representando los elementos traza menos de 1% de
la masa total. En este sentido, reportar los elementos traza en funcin de la concentracin de Ca
(elemento:Ca) disminuye el efecto de estos factores sobre las variables de estudio. La mayora
de los estudios informa la relacin elemento:Ca en milimol por mol (mmol/mol), siendo escasos
los estudios que utilizan la relacin miligramo por gramo (mg/g) o microgramo por gramo
(g/g).

5.5 Anlisis de los datos de la composicin qumica de los otolitos

5.5.1 Tratamientos de datos con distribucin normal y homocedastica: estadstica

paramtrica

A continuacin, se presenta un procedimiento detallado del anlisis estadstico necesario para

realizar comparaciones de diferentes elementos traza entre grupos que ajustan a la distribucin
normal y homocedastica:

- En primer lugar, es necesario comprobar que los datos dentro de cada grupo de estudio
(ejemplo sitios de muestreo), cumplan con los supuestos de normalidad y homogeneidad de la
varianza. El test adecuado para el teste de normalidad es el Test de Shapiro-Wilk. En este caso,
se plantea como hiptesis nula que la muestra proviene de una poblacin normalmente
distribuida, siendo esta rechaza con un valor p < 0,05. Las pruebas de Bartlett y Levene son las
indicadas para testear homogenidad de la varianza. En este caso, se pone a prueba la hiptesis
nula que todas las variaciones de poblacin k son iguales frente a la alternativa de que al menos
dos son diferentes. Si los datos no cumplen con los mencionados supuestos, transformaciones
como ln(x) o log10(x) (ln(x+1) o log10(x+1), si las concentraciones son inferiores a 1 pueden ser
aplicadas. Las transformaciones deben ser aplicadas por elemento y a todos los grupos (aunque
solo un grupo no cumpla con los supuestos).

- Identificar y eliminar los datos claramente atpicos (outliers) (valores que superan 1,5 veces la

133
amplitud intercuartil). En este caso, es de gran importancia la experiencia y el criterio del
investigador, ya que algunos valores que aparentan ser aberrantes podran no serlos, y estar
relacionados a ejemplares que migran o por ejemplo, a peces de tamaos extremos.

- Las relaciones elemento:Ca podran covariar con la masa del otolito. El efecto de la masa del
otolito sobre la concentracin de algunos elementos traza podra confundir diferencias
espaciales o temporales en la composicin qumica, llevando a malas conclusiones. Por
ejemplo, en el caso del pejerrey Odontesthes bonariensis, fue observada una relacin negativa
entre la masa del otolito y las relacin Sr:Ca. En este caso, el efecto de la masa fue eliminado
sustrayendo la pendiente comn derivada del anlisis de la varianza (ANCOVA) (cf. Avigliano
et al. 2014). Sin embargo, la correccin por ANCOVA debe ser aplicada nicamente cuando la
relacin entre la variable elmento:Ca y la masa del otolito posee un buen ajuste a la funcin
lineal, siendo no suficiente una relacin significativa pero con un mal ajuste. Corregir variables
que presentan relacin significativa con la masa pero con un mal ajuste a la linealidad podra
introducir un error an mayor que el que poseen los datos sin ser corregidos. En instancias
donde se observe una relacin significativa pero no lineal, diferentes alternativas pueden ser
aplicadas ara eliminar el efecto de la masa del otolito sobre las variables de estudio. Otro
ejemplo es lo observado por Campana et al. (2000), quienes hallaron una relacin curvilnea
entre las relaciones ln(Mg), Mn y Sr con la masa del otolito. En este caso, el efecto de la masa
fue suprimido substrayendo el termino [elemento:Ca]=b0+(b1/peso), donde b0 representa la
relacin Sr:Ca original y b1 el coeficiente obtenido del ANCOVA.

- Anlisis univariados (para cada elemento) como ANOVA, t test, etc., son recomendados para
evaluar diferencias entre grupos.

- Anlisis multivariados como el Anlisis Multivariado de la Varianza (MANOVA) son de

utilidad para evaluar diferencias en la firma qumica entre 3 o ms grupos de estudio. Si se
encuentran diferencias significativas, test de comparaciones de pares como el test de
comparaciones de pares T2 Hotelling o T2 Hotelling modificado por Bonferroni pueden
aplicarse con el fin de identificar los grupos que difieren entre s. En el caso de comparar la
firma qumica entre dos grupos, el test T2 Hotelling puede aplicarse directamente para evaluar
diferencias (Avigliano et al. 2015f). Este test es robusto a la violacin de los supuestos de
normalidad y homogeneidad de la varianza y puede ser til para muestras relativamente
pequeas.

134
- Anlisis de ordenamiento, como el anlisis cannico discriminante (ACD) puede utilizarse
para identificar las variables que ms contribuyen a la diferenciacin de las firmas qumicas
entre grupos. La representacin grfica de las dos primeras funciones discriminantes
proporciona informacin visual sobre la clasificacin. Por ltimo, se debe tener en cuenta la
matriz de clasificacin cruzada para evaluar si se obtuvieron o no buenos porcentajes de
individuos bien clasificados en los grupos previamente definidos. El ACD puede ser utilizado
tambin para predecir el origen de muestras conocidas mediante la utilizacin de funciones
discriminantes (Brown 2006, Hegg et al. 2015).

- Para realizar evaluaciones sobre stocks mixtos, donde no se conoce con cierta certeza el origen
de los peces (clasificacin preliminar no segura o conocida), anlisis de mxima similitud o
anlisis mixtos bayesianos proporcionan un apto poder de clasificacin en detrimento del
anlisis discriminante, que no es recomendado debido a que tiene un bajo poder de clasificacin
en estos casos. Por ejemplo, es posible predecir el rea de cra de peces adultos de un stock
mixto que fueron capturados en alta mar (lejos del rea de cra). Para ello, es necesario contar
con una muestra de referencia, por ejemplo juveniles o larvas capturadas en las diferentes reas
de cra, que ser contrastada con las muestras correspondientes al stock mixto de origen natal
desconocido. El software ms utilizado para estos casos es el HISEA desarrollado por Millar
(1990).

5.5.2 Tratamientos de datos que no ajustan a la distribucin normal y homocedastica:

estadstica no paramtrica

Cuando los datos no cumplen los supuestos de normalidad y homocedasticisdad (luego de

aplicar las transformaciones correspondientes y analizar los residuales) es necesario utilizar
estadstica no paramtrica. Los testes no paramtricos, frente a la falta de normalidad suelen
tener mayor poder discriminatorio que los paramtricos. A continuacin, se presenta un
procedimiento detallado del anlisis estadstico necesario para realizar comparaciones de
diferentes elementos traza entre grupos que no ajustan a la distribucin normal y
homocedastica:

- Identificar y eliminar los datos claramente aberrantes.

- El ANCOVA puede ser utilizado para corregir el efecto de la masa del otolito sobre las
relaciones elemento:Ca. Este test es robusto al incumplimiento del supuesto de normalidad
(Olejnik y Algina 1984).

135
- Anlisis univariados (para cada elemento) como Kruskal Wallis (anlogo no paramtrico del
ANOVA), es recomendado para evaluar diferencias entre 3 o ms grupos. En el caso de
comparar dos grupos independientes entre s, el test de Mann Whitney es el indicado. Para
muestras no independientes o pareadas (por ejemplo ncleo del otolito versus borde) el test de
Wilcoxon puede ser utilizado para evaluar diferencias entre grupos de datos.

- Anlisis multivariados no paramtricos como el Anlisis de Similitud (ANOSIM) o el

(PERMANOVA) son recomendados para evaluar diferencias en la firma qumica entre 2 o ms
grupos de estudio. Con respecto al ANOSIM, los ndices ms utilizados son el de Jaccard y de
Bray-Curtis. Para cuantificar la contribucin de cada variable en las en las diferencias
observadas entre grupos, se aplica el anlisis de porcentaje de similitudes de Bray-Curtis
(SIMPER).

- Uno de los anlisis de ordenamiento no paramtricos ms empleado es el de escalado

multidimensional (MDS). Este es un mtodo de anlisis de una matriz de proximidad
(similaridad o disimilaridad) establecida sobre un conjunto de observaciones. El MDS tiene
como objetivo modelizar las proximidades entre los individuos de tal modo que pueda
representarlos lo ms exactamente posible en un espacio de baja dimensin (generalmente 2
dimensiones). Existe una gran diversidad de medidas de similitud, sin embargo, para muestras
biolgicas una de las ms utilizadas es la distancia de Sorensen (Bray-Curtis). El MDS genera
adems los coeficientes de estrs de Kruskal que permiten medir la veracidad de la
representacin de los diagramas. Clarke (1993) sugiri que valores < 0,1 corresponden a buenas
ordenaciones y < 0,2 dan una interpretacin til de los datos.

5.6 Aplicacin de la composicin qumica de los otolitos en el anlisis de patrones de

migracin del bagre Genidens barbus usando LA-ICP-MS

Usualmente es de inters cuantificar y clasificar diferentes patrones comportamentales, de los

peces en el uso del espacio a lo largo de su vida, por ejemplo distinguir entre un
comportamiento andromo, catdromo o residente. La clasificacin pude tener un fuerte
carcter subjetivo y resultar en una diferenciacin artificial. En un intento de eliminar dicha
subjetividad y comprobar la validez de la clasificacin, se puede utilizar un anlisis
discriminante cannico, o MDS para datos que no se distribuyen normalmente.

Los patrones de Sr:Ca y Ba:Ca suelen expresarse en funcin de la distancia del ncleo en m.
En este sentido, es necesario analizar como variables las relaciones Sr:Ca y Ba:Ca medias de
cada individuo. Adicionalmente, el desvo estndar promedio de cada relacin elemento:Ca

136
debe ser tomada tambin como variable. Esto permite diferencial dos perfiles comportamentales
diferentes pero con media global similar.
Por ejemplo, en la Figura 5.8 se muestran dos perfiles de Sr:Ca del bagre andromo
sudamericano Genidens barbus obtenidos por LA-ICP-MS. La lnea oscura corresponde a un
pez de 14 aos de edad estuarino dependiente, mientras que la lnea clara corresponde a un
ejemplar de comportamiento andromo (a partir de aproximadamente el noveno ao de vida).
En este caso, las medias de las relaciones Sr:Ca son muy similares (0,83 x10-3 y 0,84 x10-3
respectivamente). Sin embargo, el desvo del ejemplar estuarino dependiente es 40 % ms bajo
que el andromo similares (0.51 x10-3 y 0.81 x10-3 respectivamente). En este caso, el desvi
junto a la media sera de utilidad para caracterizar estos dos comportamientos. Mai et al. (2014)
aplicaron esta metodologa para distinguir entre diferentes patrones de migracin de la sardina
Lycengraulis grossidens, identificando con buenos porcentajes de clasificacin perfiles de agua
dulce residentes, marino residentes, estuarino residentes y dos tipos de anadroma.
Por otro lado, diferentes algoritmos especficos pueden ser aplicados para diferenciar patrones
migratorios ms complejos. Informacin detallada sobre este tema puede obtenerse en Hedger
(2008).

9 aos

14 aos

distancia del ncleo (m)

Figura 5.8 - Ejemplo de dos comportamientos migratorios diferentes del bagre marino Genidens
barbus. La lnea oscura corresponde a la relacin Sr:Ca de un pez estuarino dependiente y la
clara a uno andromo.

5.7 Conclusiones

La aplicacin del estudio de la composicin qumica del otolito en el estudio de diferentes

aspectos biolgicos de los peces como el uso del hbitat, las rutas de desplazamiento, las zonas
de reproduccin o bien en estudios de biolgica pesquera la determinacin de stocks pesqueros
son fundamentales en el manejo de los recursos acuticos. Si bien para el estudio de la
microqumica existen diferentes mtodos de preparacin de muestras y determinacin asociada

137
a la pregunta biolgica que se quiere responder esta aplicacin ha sido exitosa en el hemisferio
norte. En el hemisferio sur en los ltimos aos se han intensificado este tipo de estudios. Sin
embargo la aplicacin de los mismos deber ser fortalecida a fin de comprender muchos
aspectos biolgicos de las nmeros especies que existen en una regin megadiversa como es
Sudamrica.

138
6. LOS OTOLITOS COMO INDICADORES DEL CICLO DE VIDA, DE PATRONES
DE POBLACIONALES, Y DEL USO Y CARACTERSTICAS AMBIENTALES DE LOS
ECOSISTEMAS

Cristiano Queiroz de Albuquerque

Sumario
6.1 Introduccin........................................................................................................................139
6.2 Qu determina la composicin qumica de los otolitos?...................................................140
6.2.1 Ambiente..........................................................................................................................140
6.2.2 Biodisponibilidad, absorcin y transporte de iones..........................................................141
6.2.3 Procesos en la formacin de los cristales.........................................................................141
6.3 Aplicaciones en estudios bioecolgicos..............................................................................142
6.3.1 Migracin y uso del hbitat..............................................................................................142
6.3.2 Identificacin de stocks pesqueros...................................................................................152
6.4 Otolitos como indicadores de caractersticas ambientales..................................................159
6.4.1 Reconstruccin de salinidades.........................................................................................159
6.4.1.1 Movimientos.................................................................................................................160
6.4.1.2 Ontogenia......................................................................................................................161
6.4.1.3 Interacciones entre la temperatura y la salinidad..........................................................161
6.4.2 Reconstruccin de temperaturas.......................................................................................161
6.4.3 Evaluacin de la hipoxia del agua....................................................................................164
6.5 Conclusiones.......................................................................................................................166
Agradecimientos.......................................................................................................................166

6.1 Introduccin

Los otolitos se han utilizado ampliamente para la determinacin de edad en peces adultos,
juveniles y larvas. Sin embargo, estas estructuras permiten la evaluacin de otras informaciones
sobre la historia de vida de los peces, que tambin hacen uso del conocimiento existente sobre la
edad y el crecimiento de estos animales.
Existen tres caractersticas que hacen que las estructuras de los otolitos tengan gran inters para
los cientficos en la actualidad. En primer lugar, ellos crecen produciendo un patrn de anillos
concntricos de crecimiento (Reibish 1899), que dependiendo de la especie y el tamao, pueden
ser observados por transparencia o en secciones histolgicas (cf. Captulo 4). Luego, es posible
determinar la edad de los peces colectados en la naturaleza. La segunda caracterstica se

139
relaciona con la presencia en los otolitos de elementos qumicos que se encuentran en
concentraciones muy bajas en comparacin con el calcio, el carbono y el oxgeno. Estos
elementos menores mantienen cierta proporcin con las condiciones fisicoqumicas del agua en
el cual desarroll el pez (Campana 1999). Diversos elementos qumicos se han detectado en
otolitos, sin embargo, nos centraremos en el estroncio (Sr), el bario (Ba), el manganeso (Mn) y
algunas relaciones isotpicas como 87Sr:86Sr e 18O:16O, que representan los elementos qumicos
ms estudiados en ecologa de peces a travs de los otolitos. La tercera caracterstica importante
es que son inertes qumicamente, es decir, una vez que se depositan los elementos qumicos,
estos no son reabsorbidos y se unen a la estructura cristalina prcticamente para siempre
(Campana 1999). Por lo tanto, si los otolitos presentan anillos de crecimiento, reciben
informacin ambiental a travs de elementos qumicos y son qumicamente inertes, es razonable
suponer que pueden contener toda la historia de vida de los peces en forma de informacin
qumica, funcionando como verdaderas cajas negras de estos animales.
El marco para el inicio de los estudios de microqumica del otolito se ha atribuido a la labor
pionera de Richard Radtke (Radtke 1985). Este autor asoci estudios de anillos diarios con
perfiles de Sr: Ca a lo largo de secciones de otolitos de peces doncella Dascyllus albisella, con
la intencin de reconstruir la historia ambiental experimentada por las larvas de esa especie.
Aunque sus resultados no hayan sido concluyentes, el estudio de Radtke plante la cuestin y
otros trabajos fueron publicados posteriormente, reforzando la idea de que es posible evaluar
migraciones, distinguir stocks y evaluar las caractersticas ambientales a travs de estudios que
analizan la composicin qumica de los otolitos (ej. Thorrold et al. 1997a, Rooker et al. 2004).
El desarrollo de nuevas tcnicas analticas llevo a cabo anlisis cada vez ms detalladas de la
composicin qumica de los otolitos. Como consecuencia, el conocimiento sobre la historia de
vida de los peces y el ambiente en que viven creci considerablemente.

6.2 Qu determina la composicin qumica de los otolitos?

Actualmente tenemos una comprensin limitada sobre los mecanismos fundamentales que
determinan la composicin de los otolitos y cmo son influenciados por el ambiente. Aun as,
algunos factores han sido mencionados como los principales determinantes de la composicin
elemental de otolitos.

6.2.1 Ambiente

Las propiedades fsico-qumicas del agua en la cual se desarrollan los peces son consideradas
uno de los principales factores en la determinacin de la absorcin de ciertos elementos por el
pez y consecuentemente su deposicin en los otolitos. Varios estudios indican que la

140
concentracin de Sr:Ca en los otolitos es relacionada a la salinidad del agua, con temperatura y
salinidad que demuestren los efectos secundarios (Secor y Rooker 2000, Martin et al. 2004,
Sturrock et al. 2012). Siendo as, aunque varios estudios sugieran que existe una correlacin
entre Sr: Ca en otolitos y la salinidad del agua, si las concentraciones de Sr:Ca en el agua no
cambiaren a lo largo del gradiente de salinidad, es probable que tambin no vayan a cambiar en
los otolitos de peces sometidos a diferentes salinidades. Este hecho tiene una importante
implicacin, dejando en claro la necesidad de estudios simultneos sobre la composicin del
agua en el estudio de otolitos de una poblacin particular de peces.
Los estudios han demostrado que distintos elementos pueden facilitar o inhibir la precipitacin
de los diferentes elementos en los otolitos (Vries et al. 2005), lo que sugiere la existencia de un
efecto de interaccin entre los elementos. Las relaciones isotpicas de oxgeno (18O:16O)
presentan una relacin directa con la temperatura y las relaciones isotpicas de oxgeno en el
agua, ms este efecto pude ser enmascarado por el efecto de la salinidad (Patterson et al. 1993,
Thorrold et al. 1997a). De manera general sabemos muy poco sobre el efecto del ambiente en la
mayora de los elementos trazas encontrados en los otolitos.

6.2.2 Biodisponibilidad, absorcin y transporte de iones

Los elementos libres en su forma inica pueden ser absorbidos directamente a travs del epitelio
branquial por el agua o con la toma de agua, a travs del epitelio intestinal (Flik y Verbost
1993). La disponibilidad de formas biodisponibles de Ca, Sr y Ba en el agua se considera el
factor ms importante para su precipitacin en los otolitos (Thorrold y Swearer 2009). Los iones
presentes en la forma orgnica que fueron ingeridos a travs de la dieta pueden ser absorbidos
por los intestinos si son correctamente degradadas durante la digestin. Tambin puede ocurrir
una separacin de elementos durante los procesos de transporte del plasma sanguneo a la
endolinfa. Debido a esta separacin, las concentraciones de ciertos elementos pueden ser muy
diferentes entre la sangre y el lquido endolinftico. La concentracin de los iones libres del
plasma sanguneo tambin est influenciada por la presencia de protenas especiales que se ligan
a los metales e impiden su transporte hacia la endolinfa (Ruttenberg et al. 2005), y cuya
concentracin depende de los estadios de maduracin, las tasas de crecimiento y la ontogenia
durante el ciclo de vida de los peces.

6.2.3 Procesos en la formacin de los cristales.

Una vez que los diferentes elementos qumicos alcanzaron el lquido endolinftico y estn en
contacto con la superficie de crecimiento de los otolitos, pueden ser incorporados en su
estructura cristalina de variadas formas (Thorrold y Swearer, 2009). Los iones pueden ser

141
incorporados, por ejemplo, mediante la sustitucin del calcio presente en la estructura cristalina
de carbonato de calcio, como suele ocurre con los elementos bivalentes positivos, que son
semejantes a los iones de Ca2+. Otras formas de incorporacin incluyen la adsorcin a la
superficie cristalina, el aprisionamiento de fracciones lquidas o slidas de endolinfa dentro de
la estructura cristalina, o la unin de los iones a las protenas, hidratos de carbono o lpidos
presentes en la matriz orgnica que tambin compone los otolitos.

La forma de incorporacin es importante porque la qumica del agua se relaciona con la

composicin qumica de los otolitos principalmente para aquellos elementos que se incorporan
mediante la sustitucin del Ca (Sr y Ba).

6.3 Aplicaciones en estudios bioecolgicos

6.3.1 Migracin y uso del hbitat

La migracin y la dispersin son movimientos de individuos o grupos de individuos que se

encuentran naturalmente a lo largo de diferentes escalas espaciales en diversas especies
animales. Estos movimientos pueden tener direccin, tiempo y destino especficos. Las tasas de
migracin y dispersin de determinada poblacin son caractersticas ecolgicas importantes que
influencian la propagacin, la colonizacin e el intercambio entre diferentes poblaciones de una
amplia gama de especies de diferentes organismos (Milner-Gulland et al. 2011). Debido a esta
importancia ecolgica, los investigadores estn siempre tratando de comprender y explicar los
mecanismos fisiolgicos y las seales ambientales que conducen a estos movimientos
poblacionales.
Migraciones a menudo son necesarias cuando los requerimientos ambientales de una
determinada especie (por ej. alimentacin, reproduccin, etc.) son ms grandes que lo que puede
proporcionar su hbitat original. Simplemente, cuando esto ocurre algunos individuos buscan
nuevas reas para completar su ciclo de vida. Si la estrategia es evolutivamente exitosa a lo
largo de generaciones, el nmero de individuos que migran tiende a aumentar en la poblacin y
la especie en cuestin ser migratoria con el paso del tiempo.
Considerando esta idea en el ambiente marino, las migraciones y la dispersin son incluso ms
crticas, ya que, en su mayor parte, las especies marinas presentan al menos una fase de
movilidad. Esta movilidad puede ser pasiva, a travs de la dispersin de formas planctnicas
debido a las corrientes marinas, o activa, en forma de migraciones verdaderas realizada por
peces, reptiles y mamferos marinos. Se estima que aproximadamente el 2,5% de las especies de
peces realicen alguna forma de migracin. Las escalas espaciales sobre las cuales estas
migraciones se extienden varan de unos cientos de metros - para las especies costeras que

142
utilizan corrientes - a miles de kilmetros - como suele ocurrir con las anguilas. Segn el origen,
destino y motivo, las migraciones de especies acuticas pueden ser clasificadas en diversas
categoras, como andromas, catdromas, etc.
La comprensin sobre la funcin ecolgica de los movimientos de una poblacin, activos o
pasivos, ha cambiado con los aos. En la dcada del 1980, muchos cientficos crean que las
poblaciones marinas eran limitadas por el reclutamiento y cuestionaban si este proceso era una
funcin de densidad de poblacin (Sinclair 1987). Acompaando este pensamiento, surgi la
nocin de que las poblaciones marinas estaban mezcladas a lo largo de grandes reas y,
consecuentemente, abiertas al repoblamiento proveniente de la dispersin y la migracin. A
principios del siglo XXI, los esfuerzos cientficos aumentaron con el fin de comprender mejor
las migraciones y la dispersin, y fueron surgiendo informaciones que comprobaron el
autoreclutamiento y el regreso de los adultos a sus lugares de nacimiento (Thorrold et al. 2001,
Green et al. 2012). Luego, las unidades poblacionales pasaron a ser vistas como unidades de
hecho, con capacidad de autoperpetuacin, pero el foco cambi hacia poder identificar el grado
de conectividad entre metapoblaciones, es decir, el grado de movimiento activo y pasivo entre
unidades poblacionales. Este enfoque permanece y estudios sobre conectividad entre
poblaciones marinas se desarrollan hasta el momento.
A pesar de la clara importancia ecolgica y el inters cientfico en la evaluacin de movimientos
de dispersin y migracin de organismos marinos, los patrones de movimiento son bastante
desconocidos para la mayora de las especies, en particular para los peces. La explicacin para
esto es de carcter fundamentalmente prctico. Por ejemplo, es imposible seguir larvas de peces
en tiempo real a travs de su dispersin. Incluso si existieran equipos microscpicos para
telemetra, la mortalidad larvaria es muy alta, inviabilizando experimentos debido al nmero de
muestras necesario. Los juveniles y adultos, por el contrario, pueden migrar para reas muy
grandes, lo que dificulta su seguimiento a travs de las tecnologas tradicionales. Uno de los
principales avances para la determinacin de patrones de movimiento de poblacin es la
evaluacin de la huella geoqumicas en las estructuras calcificadas, como la qumica de los
otolitos.
Sabemos que las aguas marinas y/o dulces de diferentes localidades tienden a tener diferencias
fsicas y qumicas que varan dependiendo de la salinidad, temperatura, composicin geolgica
de las cuencas hidrogrficas y otras caractersticas que pueden influir en la composicin de los
otolitos. En general, las relaciones isotpicas del Sr:Ca tienden a aumentar con el aumento de la
salinidad, y ocurre el contrario para las relaciones Ba:Ca. Los otolitos guardan esas
informaciones ambientales en la forma de la composicin qumica y temporalmente
organizadas. A esa composicin qumica pueden acceder los cientficos a travs de equipos
especficos (cf. Captulo 5) y el cuanto ms diferentes son las propiedades fisicoqumicas del
agua, es ms diferente debe ser la constitucin qumica del otolito de los distintos ambientes.

143
Por ejemplo, en el sur de Brasil (Figura 6.1), pueden encontrarse sistemas acuticos costeros de
diferentes caractersticas. En la Figura 6.1 se observa una laguna costera de agua dulce (Lagoa
Mirim, y el estuario de Lagoa dos Patos y la regin costera adyacente). Estas tres reas
presentan propiedades salinas distintas, que se reflejaron en los otolitos de corvinas
(Micropogonias furnieri) colectados en estas reas (Albuquerque et al. 2010).

Lagoa dos Patos

Canal de So
Gonalo

Lagoa Estuario
Mirim
Rio Grande
Ocano
Atlntico
Sur

Chuy

Figura 6.1 Regin sur de Brasil, Atlntico Suroeste, indicando tres sistemas costeros distintos
utilizados por Micropogonias furnieri (Fuente: Albuquerque et al. 2010).

En otolitos de ejemplares de M. furnieri de aguas con distintas salinidad se observ en sus

otolitos diferentes concentraciones de Sr y Ba en el borde de los otolitos, indicador de
deposicin reciente (Albuquerque et al. 2010) (Figura 6.2). Tenga en cuenta que las
concentraciones de Sr tienden a aumentar en las aguas ms saladas mientras que las
concentraciones de Ba tienden a aumentar de las aguas dulces.

144
 Estuario

Agua dulce Ocano

Figura 6.2 Concentraciones de Sr e Ba medidas en otolitos de corvinas (Micropogonias

furnieri) coletadas en agua dulce, estuarina y marina en la regin de Lagoa dos Patos, Sur de
Brasil (Fuente: Albuquerque et al. 2010).

Con este ejemplo se muestra que las concentraciones de algunos elementos de los otolitos varan
segn las caractersticas ambientales del entorno en el que desarrollan los peces. Sin embargo
para algunos ambientes, las concentraciones de Sr y Ba en otolitos estn relacionadas con la
salinidad de manera positiva y negativa, respectivamente. Ahora aumentamos la complejidad de
este razonamiento un poco, recordando que otolitos crecen de manera organizada
temporalmente y son qumicamente inertes. Luego, es probable que un determinado pez que
pas cierto tiempo en agua dulce y se desplazo luego a agua salada presenta en sus otolitos
variaciones qumicas de Sr y Ba que representen estos cambios de hbitat. Por lo tanto, si
seccionamos esos otolitos y analizamos un perfil perpendicular a los anillos de crecimiento
desde el ncleo hasta su borde, deberamos obtener un perfil de datos qumicos representativo
de la historia de las masas de agua frecuentadas por el pez a lo largo de su vida. Por ejemplo, en
la Figura 6.3 se muestra el perfil de las concentraciones de Sr en una seccin transversal de dos
otolitos sagittae de corvinas: una colectada en agua dulce (izquierda) y la otra en agua salada
(derecha). Tenga en cuenta que las concentraciones de Sr son mucho ms altas en los otolitos de
la corvina de agua salada.

145
 Agua dulce Agua salada

Borde Borde

Figura 6.3 Perfil de las concentraciones de Sr en otolitos de corvina (Micropogonias furnieri)

colectados en agua dulce y salada en sur de Brasil. Las concentraciones se determinaron por
ablacin lser y espectrmetro de masas con acoplado inductivamente a plasma (LA-ICP-MS)
(Fuente: Albuquerque et al. (2010).

Todava en la Figura 6.3, se puede ver que las corvinas colectadas en agua dulce presentan
concentraciones ms altas en la regin del ncleo de los otolitos, indicando un posible origen
estuarino, ya que los estuarios tienden a presentar una relacin Sr: Ca ms altas que en agua
dulce. As que si ocurren migraciones entre ambientes con diferentes caractersticas fsico-
qumicas, estas migraciones deben estar qumicamente impresas en los otolitos de peces, siendo
posible situar esta migracin en un contexto temporal. Para el caso de la corvina de agua dulce,
por ejemplo, una migracin que ocurre al inicio de la vida.
Sin embargo, no todas las fluctuaciones en las concentraciones de elementos qumicos en los
otolitos son el resultado de los movimientos realizados por peces entre diferentes hbitats.
Particularmente, en el inicio en la vida, los peces tienen un sistema de osmorregulacin poco
desarrollado que puede ser bastante permeable a ciertos elementos qumicos, siendo comn
encontrar altas concentraciones de ciertos elementos en el ncleo de los otolitos (Ruttenberg et
al. 2005). Las explicaciones alternativas para las variaciones en las concentraciones de
elementos en otolitos de peces jvenes tambin incluyen la influencia de la composicin de los
huevos y el saco vitelino, la influencia de las tasas de crecimiento y las diferencias en la
estructura cristalina (Thorrold y Sweaer 2009). Esta ltima puede deberse a la presencia en los
otolitos de regiones predominantemente compuestas por calcita que a su vez tiene una mayor
afinidad con algunos elementos (por ejemplo, Mn) en comparacin con aragonita (que es la
estructura cristalina ms comn en otolitos sagittae). Cualquier fluctuacin qumica en los
otolitos que no es derivada de los cambios de hbitat, produce una importante fuente de error,
dificultando la interpretacin de los resultados y potencialmente enmascara la seal qumica
producida por cambios reales en el hbitat. La Figura 6.4 muestra el anlisis de otolitos de
Anguilla japonica del Japn (Aoyama 2009). Esta es una especie considerada catdroma, o sea
nace en los ocanos, migra al agua dulce y luego regresar al ocano a desovar. La Figura 6.4

146
muestra los otolitos de tres individuos que presentan distintos patrones de uso de hbitat. Todas
nacieron en el ocano, sin embargo la primera permaneci en el ocano, el segundo emigr a
reas estuarinas y la tercera para aguas dulce. Tenga en cuenta que la relacin Sr:Ca es mucho
mayor en el ncleo de todas, incluso para la que proveniente del ocano, lo que sugiere que esta
fluctuacin inicial de Sr es ontogeneticamente inducida y no como resultado de cambios de
hbitat. Como una conclusin, pero tambin de gran importancia, pues resulta que no todas
anguilas japonesas son especies catdromas, es decir, son especies catdromas facultativas.

Anguila marina

Anguila estuarina

Anguila deaguadulce

Distanciadelncleo(m)

Figura 6.4 Mapas de las relaciones Sr:Ca en otolitos de Anguilla japonica coletadas en Japn
(izquierda) y perfiles Sr:Ca del ncleo al borde de cada otolito (Fuente: Aoyama 2009).

Antes de la consolidacin de los otolitos como marcadores naturales de los peces, la evaluacin
de movimientos podra ser observada por tcnicas como el marcaje y recaptura y telemetra
(Britton et al. 2007, Koster y Crook 2008). Ambas tcnicas no permiten trabajar con individuos
de pequeo tamao, como las larvas y los juveniles, lo que dificulta la comprensin de los
patrones individuales de la migracin, es esencial asignar a una dada especie dentro de una de
las categoras de migracin (por ejemplo anadroma, catadroma, diadroma, etc.). De esta
manera, mediante la Figura 6.4 se puede comprender que la anguila japonesa es catdroma, y
esto sera muy difcil de probar hace 20 aos. En aquel momento si intent caracterizar las

147
tendencias generales de la migracin entre las distintas especies. Hoy, con el advenimiento del
anlisis qumico de los otolitos, ha cambiado el enfoque para estudiar las tendencias migratorias
y la evaluacin individual dentro de la misma poblacin. Como resultado de estudios en
poblaciones especficas, hemos observado que, aunque una determinada especie determinada
sea considerada migratoria, sus poblaciones son compuestas por grupos de individuos que
migran y grupos residentes. Por lo tanto, la aplicacin de nuevas tcnicas analticas ha permitido
evaluar a las especies actualmente consideradas migratorias. Las especies de peces cuyos
individuos muestras circuitos migratorios diferenciados donde algunos migran y otros son
residentes se llaman migradoras parciales (Chapman et al. 2011). En la actualidad sabemos las
especies migradoras parciales representan una estrategia alternativa de vida ms comn de lo
que pensbamos en el pasado.
Las migraciones parciales pueden ocurrir en los principales grupos de vertebrados, en algunos
grupos de invertebrados y se dan en los principales ecosistemas del planeta. En los peces, las
migraciones parciales han sido estudiadas principalmente en el salmn, el bacalao y las anguila
(Bohlin et al. 2001, Hendry et al. 2004, Daverat et al. 2006). Se cree que las migraciones
parciales pueden influir en la dinmica de las poblaciones, as como su persistencia en el
tiempo, ya que pueden conferir supervivencias diferenciales resultantes de diferencias en el
riesgo de depredacin y de la disponibilidad de alimentos entre diferentes hbitats. Adems de
estos dos factores, estudios recientes indican que las migraciones parciales tambin producen
mejores tasas de crecimiento para los individuos, lo que ayuda a reducir el riesgo de
depredacin (Chapman et al. 2011).
Estudios recientes en Brasil indican que los juveniles de la lisa (Mugil liza) frecuentan la regin
costera adyacente a Lagoa dos Patos y que algunos individuos fueron encontradas en
sangradouros (cuerpos agua dulce de origen continental que se comunican con el mar a travs
de arroyos). Los otolitos de estos juveniles se analizaron y presentaron patrones qumicos de
Sr:Ca tpicos (Oliveira 2015 - Figura 6.5), indicando que los juveniles colectados en
sangradouros son de origen marino (Figuras 6.5A,B), representado por la relacin Sr:Ca ms
altas en sus ncleos. Los individuos exclusivamente marinos presentaron relaciones constantes
de Sr:Ca a lo largo de todo el perfil del borde de los otolitos, pasando por el ncleo, lo que
indica que emigr a sangradouros (Figuras 6.5C,D). Puesto que slo parte de los individuos
emigraron, se caracteriza a esta poblacin como migradora parcial. Un hecho interesante que
result de este anlisis fue la comprensin de que individuos entrando en los sangradouros
tambin pueden salir, porque se encontraron algunos ejemplares en rea marina con la huella
qumica del sangradouros en sus otolitos. En otras palabras, el sangradouros posiblemente
no constituye un sumidero para los juveniles que entran en ellos.

148
 A B
relacin 86Sr:43Ca

C D

Distancia borde-borde (mm)

Figura 6.5 Perfiles de la relacin Sr:Ca en otolitos de lizas (Mugil liza) juveniles colectadas en
sangradouros de agua dulce (a y b) y regin marina costera (c y d) del sur de Rio Grande do
Sul, sur de Brasil. El resaltado en gris representa el rea del perfil correspondiente al ncleo de
los otolitos (Fuente: Oliveira 2015).

La anchoa (Lycengraulis grossidens) tambin entra en esta categora de migracin (Mai et al.
2014). En la Figura 6.6 se puede observar perfiles de Sr:Ca y Ba:Ca en otolitos de anchoa
colectadas a lo largo de la costa de Brasil y Uruguay. En las grficas es posible comprobar los
diferentes patrones de elementos entre el ncleo y el borde de los otolitos, indicando diferentes
patrones migratorios con diadroma y residencia. Observe las fluctuaciones de Sr y Ba en la
figura del individuo didromo y note la tendencia inversa de las concentraciones entre los dos
elementos en comparacin con el individuo marino residente. Segn con el anlisis del perfil de
los elementos, este individuo didromo creci inicialmente en agua dulce (bajas concentraciones
de Sr y altas concentraciones de Ba), migrando a aguas marinas (altas concentraciones de Sr y
Ba bajo) y regres al agua dulce. La Figura 6.6 muestra que la ocurrencia de individuos
didromos crece en direccin al sur de Brasil, donde es mayor el aporte de agua dulce a la
plataforma continental.

149
 Marino residente Didromo

Residente en agua dulce Residente en agua dulce

BRASIL Estuario de Mampituba

Playa del Pau Lagoa dos Patos

Amarelo

Baha de Todos
os Santos Lagoa Mirim

Ro Estuario
URUGUAY
Uruguay del Ribeira Playa del Casino
Estuario del Plata

ARGENTINA
Residente en agua dulce
Didromos A
Didromos B
Marino/estuarino residente

Figura 6.6 Evaluacin de las poblaciones de anchoa (Lycengraulis grossidens) entre las costas
de Brasil y norte de Argentina a travs del anlisis de Sr: Ca y Ba: Ca en otolitos. Las figuras
representan patrones diferentes de migracin para la especie y el mapa indica la prevalencia de
la ocurrencia a lo largo de la costa (Fuente: Mai et al. 2014).

Es importante recordar que no siempre se distinguen patrones de fluctuacin claros entre los
elementos del perfil del ncleo-borde de los otolitos. Las fluctuaciones del Ba tienden a ser ms
variables que las de Sr y no siempre estn asociadas con las migraciones a lo largo de gradientes
de salinidad. En este momento surge la clara necesidad de conocer tambin las propiedades
qumicas del agua donde viven las poblaciones que se pretenden estudiar. Entre las
caractersticas ms importantes se destaca la concentracin relativa de Sr:Ca, Ba:Ca (u otros

150
elementos que se desean evaluar) a lo largo del gradiente de salinidad, que recibe el nombre de
curva de mezcla de un elemento dado. Para la mayora de los ambientes el Sr presenta una curva
de mezcla creciente (Figura 6.7), donde la mayor variacin se produce por debajo de la
salinidad de 20 UPS28 (Zimmerman 2005, Albuquerque et al. 2012). Esto tiene una implicancia
importante para el estudio de la migracin. Si las relaciones Sr:Ca en el agua varan poco por
encima de 20 UPS, esto quiere decir que peces viviendo en esas salinidades presentarn seales
qumicas muy similares. Esta caracterstica presentada por los gradientes de salinidad reduce
nuestra capacidad de discernir el movimiento de peces entre reas de mayor salinidad, como
entre localidades costeras e islas ocenicas, por ejemplo.
Por otro lado, movimientos de migracin entre ambientes de agua dulce y estuarios (o marinos)
tienden a percibirse fcilmente, dadas las fuertes variaciones que a menudo se producen en las
relaciones elemento:Ca en bajas salinidades, o a lo largo de gradientes de salinidad. Para ayudar
a entender esta cuestin, imaginemos que un sistema hdrico particular cubre ambientes de agua
prcticamente dulce, con salinidad de 1 UPS, a aguas marinas con salinidad de 34 UPS. Si
pensamos de la salinidad como el contenido de sal en gramos, presente en el agua podemos
preguntarnos qu ocurre entre las salinidades 1 y 2? La respuesta es que la cantidad de sal dobla.
La cantidad de sales tambin se duplica entre las salinidades de 2 y 4, entre 4 y 8, entre 8 y 16 y
entre 16 y 32 UPS. As que est claro que entre salinidad y 1 de 20 la cantidad de sales (x)
aumento a la cuarta potencia (x4), mientras que el aumento de sales entre las salinidades de 20 y
30 lleg a la segunda potencia (x<2). La misma idea puede aplicarse a las curvas de mezcla para
diferentes elementos, pero recordando que algunos elementos (como el Ba) pueden exhibir
tendencias inversas, es decir, decrecientes con el aumento de la salinidad. La Figura 6.7 presenta
el anlisis de curvas de mezcla en dos diferentes regiones del continente americano. En este
caso, ambos sitios mostraron similares curvas de mezcla, con grandes variaciones en las
relaciones Sr:Ca observadas entre las salinidades ms bajas Zimmerman 2005, Albuquerque et
al. 2012). Los estudios presentan curvas de mezcla para gradientes de salinidad, sin embargo,
son an bastante escasos.
Es importante reforzar que no necesariamente el cambio de salinidad es el que promueve los
cambios en la precipitacin del Sr, Ba u otros elementos en los otolitos. La variacin de la
relacin elemento:Ca en el agua es la principal responsable de la fluctuacin de estos elementos
en los otolitos (Elsdon et al. 2008). Si esta razn permanece constante entre diferentes
salinidades, es probable que cambios de hbitat entre estas salinidades no dieran lugar a
cambios en la composicin de los otolitos, o sea que el elemento en cuestin pierde valor como
marcador natural de la migracin de peces.

28
Unidad Prctica de Salinidad.

151
 Salinidad (UPS)

Figura 6.7 Curvas de mezcla de curvas de relaciones molares Sr:Ca en relacin al gradiente de
salinidad (A) estuario de Lagoa dos Patos, RS Brasil (Albuquerque et al. 2012) y (B) Baha de
Resurreccin, en Alaska, USA (Zimmerman 2005). Tenga en cuenta que ambos ambientes
presentan cambios de las relaciones molares Sr:Ca y es mayor cuando se compara entre las
salinidades ms bajas.

6.3.2 Identificacin de stocks pesqueros

La identificacin o discriminacin de los stocks pesqueros representa un tema central para la

ciencia pesquera en todo el mundo. Los stocks pesqueros son definidos de varias formas y en
este libro, el concepto se refiere a una unidad poblacional de peces que presentan caractersticas
comunes de reproduccin, migracin y crecimiento, es decir, homogeneidad a los efectos del
manejo. Imaginemos una situacin hipottica pero frecuente en que se explota comercialmente
un recurso de la pesca. Son determinadas medidas de gestin para este recurso pesquero, siendo
definidos el tamao mnimo de captura y el periodo de veda para la especie. Sin embargo, se
descubre ms tarde que eran en realidad dos stocks pesqueros, con caractersticas propias de
crecimiento y reproduccin. Por lo tanto las medidas de manejo no son ms efectivas para los
dos stocks, que precisan ser tratados como unidades distintas y sus caractersticas biolgicas
requieren la adopcin de medidas de manejo especficas para cada grupo. En tanto es de clara
importancia su identificacin, o la discriminacin de stocks. Sin embargo, cmo hacerlo?
A lo largo de la historia de las ciencias pesqueras diversas herramientas se han propuesto y se
vienen utilizando para discriminar stocks. Dentro de las herramientas ms comunes se destaca el
marcado y recaptura, la telemetra, la evaluacin de la morfologa corporal, la evaluacin de la
morfologa de los otolitos, la evaluacin de los caracteres mersticos, la evaluacin de la fauna
de parsitos, la gentica, entre otros (Cadrin et al. 2014). Una de las ms recientes es
precisamente el anlisis qumico de otolitos, foco de este captulo.
El potencial de la evaluacin de la composicin qumica de los otolitos para la discriminacin
de los stocks se basa en dos propiedades de otolitos que ya fueron mencionadas en este captulo,

152
pero merecen un nuevo comentario. En primer lugar, a diferencia de los huesos, los otolitos son
qumicamente inertes, es decir, el material depositado en su estructura no es reabsorbido o
remodelado (Campana 1999). En segundo lugar, su composicin, a pesar de sufrir regulacin
fisiolgica refleja las caractersticas fsico-qumicas del ambiente (Thorrold et al. 1997a). El
principio es el mismo utilizado en la seccin anterior, que trata sobre la evaluacin de la
migracin y el uso del hbitat a travs de la qumica de los otolitos. De esta manera, los otolitos
de los peces de una misma especie que experimentan situaciones ambientales distintas deben
presentar diferente composicin qumica (Campana et al. 2000). Para que dos stocks (de la
misma especie) que habitan un rea determinada sean diferentes, ellos precisan haber tenido
diferentes situaciones ambientales a lo largo de su vida, de lo contrario constituira un solo
stocks. Por ejemplo, imaginemos que tienen rutas de migracin distintas aunque presentan un
destino comn. Si las rutas de migracin son diferentes es probable que las condiciones
ambientales experimentadas por ambos grupos tambin sean distintas, lo que acaba produciendo
pequeas (o a veces grandes) diferencias en la qumica de los otolitos. Con el uso de equipos
analticos cada vez ms sensibles (cf. Captulo 5), estas diferencias pueden ser medidas
permitiendo la discriminacin entre los grupos de peces.
De manera similar al estudio de la migracin, se pueden analizar varios elementos. Cuanto ms
elementos con capacidad de discriminacin, mayor ser la confianza en los resultados. Dentro
de estos elementos se destacan las relaciones isotpicas de Sr, Ba, Ca, Zn, entre otros (Swan et
al. 2003, Volpedo y Fernndez Cirelli 2006, Avigliano et al. 2015 a,b,c,d,e,f). Con el propsito
de la evaluacin, se pueden adoptar dos enfoques distintos. En el primero, ms simple, slo se
pretende determinar si hay ms de un stocks presente en un rea determinada. En el segundo y
ms complejo, determinar cules son las principales reas de cra que contribuyen a un stock
mixto de adultos. Llamamos stock mixto al grupo de individuos bajo explotacin pesquera que
corresponde a ms de un stock. Es importante saber que son las reas de cra para la aplicacin
de medidas de manejo.
A partir del primer abordaje, donde se busca determinar slo si hay ms de un stock presente en
un rea determinada, sabemos que tenemos que analizar los diferentes elementos de un grupo de
otolitos de peces colectados en un rea determinada. Estos datos deben analizarse usando una
tcnica de escalamiento multidimensional o anlisis de cluster multivariado, que permite la
separacin de los diferentes grupos de individuos dentro de un grupo nico de datos. Una
particularidad muy importante para la discriminacin de stocks basada en el anlisis qumico de
los otolitos es que existen dos resultados posibles y que deben ser interpretados con cuidado. El
primer resultado posible (y generalmente ms deseado) es obtener diferencias significativas en
la composicin qumica de otolitos de dos grupos de peces de la misma especie. Para este
resultado, la interpretacin es simple y directa y la conclusin es que se trata de dos stocks
diferentes. El segundo resultado posible es la similitud entre las composiciones qumicas. En

153
este segundo caso la interpretacin es ms complicada y la conclusin ms obvia es que se trata
de un mismo stock. Sin embargo, esta interpretacin obvia no es necesariamente correcta. El
hecho de que dos grupos de otolitos presenten composiciones qumicas similares no garantiza
que los dos grupos constituyen un mismo stock. Explicar, diversas variables ambientales
(temperatura, salinidad, las tasas de crecimiento, proporciones de istopos de los elementos en
el agua, etc.) ejercen diferentes influencias sobre la incorporacin de elementos de otolitos
(Elsdon et al. 2008). Luego, puede haber ms de una combinacin de factores ambientales
capaces de producir el mismo resultado de la composicin qumica en otolitos. Por ejemplo,
imaginemos dos poblaciones reproductivamente independientes de una misma especie de pece,
la primera en una laguna salada aislada del ocano y la segunda en una zona marina costera. Si
la comparacin de la composicin qumica de los otolitos de los peces muestreados en las dos
poblaciones resulta similar, no se puede decir que provengan del mismo stock! Cuando la
situacin de similitud qumica de los otolitos se produce en peces que viven en un rea en
particular, esto significa que tenemos un indicio de que se trate del mismo stock, pero no
garantiza que en realidad sea slo un stock, y por lo tanto, se deben emplear otras herramientas
analticas para garantizar con confianza esta conclusin. Hasta aqu hablamos de la primera
aproximacin, que slo pretende examinar la existencia de diferentes poblaciones en un rea en
particular.
El segundo enfoque proporciona tambin la caracterizacin de las reas de cra o nurseries, o
reas de crecimiento inicial, que contribuyen al referido stock de adulto. Si sabemos quines son
los adultos y qu reas utilizan de cra, podemos tomar medidas ms eficaces para la proteccin
de los recursos (Cadrin et al. 2014). Sin embargo, para determinar la contribucin de las reas
de cra a las reas de adultos, el nivel de complejidad analtica aumenta un poco. Para el
desarrollo de este tipo de trabajo es necesario colectar muestras en las diferentes reas en aos
diferentes. Para explicar la caracterizacin qumica en este caso se debe pasar por dos etapas,
que presentan tres premisas bsicas (Campana et al. 2000, Kerr y Campana 2014). La primer
premisa, busca caracterizar qumicamente los otolitos de los grupos de peces juveniles
encontrados en las en diferentes zonas de cra. Este paso tambin cuenta con la primera premisa
de que un estudio de este tipo se llevar a cabo con xito. Segn esta premisa, todas las reas de
cra que contribuyen a la poblacin adulta deben ser muestreados. Sin embargo, todas las reas
de cra de la muestra pueden identificarse si poseen un marcador (o conjunto) de marcadores
que las diferencias. Esto conduce a la segunda premisa: para identificar las poblaciones a travs
de la qumica de los otolitos, deben existir marcadores qumicos que permiten su separacin. En
definitiva, debemos muestrear todos los contribuyentes y necesitamos que existan caractersticas
qumicas diferentes entre ellos. Esta primera etapa se trata slo de los individuos juveniles.
Ahora, para la segunda etapa, tenemos que muestrear a los adultos en el rea del stock mixto,
analizar el ncleo de sus otolitos y determinar el origen de cada animal sobre la base de la

154
similitud qumica entre el ncleo de sus otolitos y los otolitos de los peces juveniles
caracterizados previamente.
A continuacin, la tercera premisa importante, que se supone que no hay ninguna fuerte
variabilidad interanual en las caractersticas de los marcadores qumicos usados. Un stock
pesquero se compone tpicamente de peces de diferentes edades, que utilizan un rea de cra en
diferentes aos (Hart y Reynolds 2002), con la excepcin de especies anuales. Si un
determinado marcador, digamos la relacin isotpica Ba:Ca, es mucho ms variable entre los
diferentes aos, el stock estar compuesto por peces con otolitos con diferentes composiciones
de las relaciones Ba:Ca en sus ncleos (ya que tienen diferentes edades), generndose grupos de
otolitos con distintas huellas qumicas de un mismo stocks. Este problema inviabiliza la
clasificacin de los diferentes stocks en sus diferentes reas de cra.
Varios estudios se han realizado con xito, especialmente despus de la publicacin del artculo
titulado Otolith elementar fingerprints as biological tracers of fish stocks29 en 2000, de autora
de Steven Campana y colaboradores. El artculo presenta el resultado del anlisis de 2.500
otolitos de bacalao (Gadus morhua), indicando la existencia de mezcla de stocks en el Golfo de
San Lorenzo, al sur de Quebec, Canad. Este autor tambin fue el primero en introducir las tres
premisas bsicas mencionadas para la determinacin del inventario a travs de la qumica de los
otolitos: (i) que existan los marcadores (elementos) dentro de cada grupo analizado; (ii) que
todos los posibles grupos que contribuyen para el stock mixto sean muestreados; y (iii) que los
marcadores caractersticos permanezcan estables entre los periodos de caracterizacin y de
mezcla.
En la Amrica del Sur, algunos estudios fueron realizados como un intento de diferenciar stocks
pesqueros de algunas especies de peces. Por ejemplo, las corvinas (Micropogonias furnieri)
fueron muestreadas entre So Paulo (Brasil) y Baha Blanca (Argentina) (Figura 6.8),
incluyendo una laguna costera de agua dulce en el Rio Grande do Sul, Brasil (Albuquerque
2008).

29
Huella digital elemental en otolitos como marcadores de stocks de peces.

155
 Brasil

Uruguay

Argentina

Oceno Atlntico Sur

Figura 6.8 Mapa incluyendo el sur de Brasil, Uruguay y Argentina, donde se colectaron
otolitos de corvina (Micropogonias furnieri) para anlisis qumicos y para la identificacin de
stocks. BB = Bahia Blanca (El Rincn); SB = Bahia Samborombn; UR = Uruguai; RG = Rio
Grande; ML = Lagoa Mirim; SP = So Paulo (Fuente: Albuquerque 2008).

Los otolitos fueron analizados qumicamente siendo cuantificadas las relaciones Sr:Ca, Ba:Ca,
Mg:Ca y Mn:Ca en los bordes de los otolitos. Como puede verse en la Figura 6.9, el
escalamiento multidimensional (MDS) incluyendo los 4 elementos indic una marcada
diferenciacin entre las corvinas que viven en agua dulce y salada (Figura 6.9A). Cuando
solamente los otolitos provenientes de corvinas muestreadas en zonas costeras fueron
muestreados, fue clara la formacin de dos grupos razonablemente distintos (Figura 6.9B). El
primer grupo estaba formado por peces de Argentina y Uruguay y el segundo por los peces de la
regin costera del sudeste y sur de Brasil. Aunque la divisin es interesante, es bueno recordar
que los peces no reconocen fronteras polticas! Este patrn era coincidente con las masas de
agua presentes en cada regin. En la costa de Brasil, predomina la Corriente de Brasil, de aguas
clidas y oligotrficas. En las regiones costeras de la Argentina y Uruguay predomina la
influencia de la Corriente de Malvinas, fra y rica en nutrientes. Estas diferencias en las masas
de agua fueron ciertamente frecuentes en la huella qumica generada en los otolitos analizados.

156
 Agua dulce

Oceno

Uruguay

Argentina El Rincn

Argentina Mar del Plata

Brasil - RS

Brasil So Paulo

Figura 6.9 Escalonamiento multidimensional con datos de las relaciones isotpicas de Sr:Ca,
Ba:Ca, Mn:Ca y Mg:Ca en el borde del otolito de corvina (Micropogonias furnieri) colectadas
entre Brasil, Uruguai y Argentina. En el grfico superior (A) los otolitos fueron agrupados entre
el rea marina y el agua dulce. En el grfico inferior (B) apenas el material de agua salada fue
utilizado, siendo agrupados por lugar de muestreo (Fuente: Albuquerque 2008).

Es importante sealar que aunque el MDS ha indicado la presencia de un grupo homogneo

entre el sureste y sur de Brasil, este resultado no implica la existencia de un solo stock en la
regin. Recientes estudios con marcadores genticos indicaron la existencia de tres poblaciones
en la costa brasilea (Vasconcellos et al. 2015), uno en la regin norte de Brasil, otro en el
sureste (Costa de Ro de Janeiro, latitud 23S) y otro en el sur (latitud 32S). Es decir, para este
caso especfico, el anlisis qumico de otolitos solo no fue suficiente para detectar la diferencia
entre los stocks del sureste y del sur de Brasil.
Otro ejemplo interesante fue desarrollado en Argentina, donde se colectaron corvinas
(Micropogonias furnieri) y pescadillas comn (Cynoscion guatucupa) para el anlisis qumico
de los otolitos con el objetivo de discriminar stocks de las dos especies en tres importantes reas
de pesca del pas (Volpedo y Fernndez Cirelli 2006). En este estudio, los otolitos fueron
digeridos y analizados para cuantificar las relaciones Cd:Ca, Cu:Ca, Mg:Ca, Mn:Ca, Sr:Ca y
Zn:Ca. Los resultados (Figura 6.10) indican la existencia de dos grupos bien definidos para

157
ambas especies, siendo uno del norte y otro al sur de Baha Blanca (38oS), regin conocida por
presentar el Frente El Rincn caracterstica oceanogrfica formada por la confluencia entre
aguas continentales y marinas en la regin.

Figura 6.10 Escalamiento multidimensional para otlitos de (A) corvina (Micropogonias

furnieri) y (B) pescadilla comn (Cynoscion guatucupa) colectadas en las regiones costeras del
Partido de La Costa (), Mar del Plata (o) y Baha San Bls (). Para este anlisis fueron
utilizadas las relaciones isotpicas Cd:Ca, Cu:Ca, Mg:Ca, Mn:Ca, Sr:Ca e Zn:Ca (Fuente: Volpedo y
Fernndez Cirelli 2006).

En la costa este de los Estados Unidos, Thorrold et al. (1998) fueron capaces de determinar el
origen de merluza adulta explotada comercialmente (consulte men interactivo en Cohen y
Thorrold, 200430). En la primera etapa del estudio se realiz para caracterizar las zonas
estuarinas, consideradas reas de cra, que contribuyen a los stocks pesqueros de adultos. En el
segundo paso, los adultos fueron colectados en las reas de pesca adyacentes al estuario y la
composicin qumica de los ncleos de otolitos fue comparada con la composicin de los
otolitos de peces juveniles, permitiendo una determinacin confiable del origen de los peces
presentes en los stocks de adultos. El anlisis muestra que diferentes stocks pueden ser
originados en diferentes reas de la costa y la importancia relativa de cada rea de cra al stock
pesquero adulto es variable. Por ejemplo, los adultos en el rea de Chesapeake son
homogneamente provenientes de otros sistemas estuarinos. Con una caracterstica opuesta, al
stock de Peconic Bay que es casi enteramente dependiente de sistema estuario local. Adems de
permitir la identificacin de las reas de cra ms importantes de cada stock, este tipo de
estudios permite hacer inferencias acerca de la fragilidad ambiental de cada sistema estuarino
con relacin a los stocks de merluza. Explicando Peconic Bay tiene 90% de su stock de merluza

30
http://www.whoi.edu/oceanus/viewArticle.do?id=2466

158
proveniente de juveniles criados en esta baha. Luego, si hay un accidente que daa a la zona de
cra de merluza, los stocks de adultos podran deteriorarse. La baha de Chesapeake, por el
contrario, recibe contribuciones muy similares de cinco sistemas estuarinos de la regin. Si
existe cualquier problema ambiental que perjudica a la zona de cra local, el stock de merluza
adulta ser poco afectado porque todava existe la contribucin de los otros cuatro sistemas
estuarinos.
Es importante tener en cuenta que la aplicacin del anlisis qumico de los otolitos para la
diferenciacin y determinacin de reas de cra est todava en desarrollo, tanto en trminos de
qumica analtica, como del anlisis estadstico aplicado para este propsito (Tanner et al.
2015). Cada ao se crean nuevas tcnicas con mayor poder de detalle espacial y temporal que
permitirn entender ms claramente la dinmica ecolgica de los stocks pesqueros, lo que
posibilitar la elaboracin de medidas de manejo cada vez ms eficaces para la conservacin de
los peces.

6.4 Otolitos como indicadores de caractersticas ambientales

Adems de la evaluacin de la migracin, el uso del hbitat y de los recursos pesqueros, una de
las aplicaciones del anlisis qumico de los otolitos ha sido la reconstruccin de las
caractersticas ambientales de los medios acuticos actuales y en perodos geolgicos pasados
(Schloesser et al. 2009, West et al. 2012). Esta aplicacin hace uso del conocimiento que
tenemos sobre los factores ambientales que influencian la constitucin qumica elemental de los
otolitos para hacer inferencias sobre las condiciones ambientales reales en los lugares donde los
peces analizados se desarrollan. Diversos experimentos se han realizado durante aos para
determinar los efectos especficos de las variables ambientales sobre la incorporacin de varios
elementos en otolitos, pero la fuerte interaccin entre temperatura y la salinidad han dificultado
la comprensin de la magnitud de la influencia de cada una de estas variables aisladas (Elsdon y
Gillanders 2002). Para dificultar ms aun, existe una variabilidad interespecfica en la magnitud
de la influencia de estos factores, adems de la variabilidad intraespecfica por ejemplo, el
estadio de desarrollo, que generan la necesidad de estandarizacin de las etapas de la vida para
posibles inferencias ambientales a partir de los de otolitos. Vamos a discutir este asunto
abordando algunos elementos utilizados en la reconstruccin ambiental a partir de otolitos y
posibles fuentes de interferencia para la interpretacin de sus resultados.

6.4.1 Reconstruccin de salinidades

Posiblemente los elementos ms utilizados para la evaluacin del uso de hbitat son Sr y Ba.
Las concentraciones de Sr en los ocanos son relativamente altas, con un promedio de alrededor

159
de 7,8 ppm (partes por milln). En agua dulce, su concentracin puede variar de 1 a 3.000 ppb
(partes por mil millones), es decir, la concentracin de Sr en ros y cuerpos de agua dulce
tienden a ser unos pocos rdenes de magnitud menores que la observada en los ocanos (Bernat
et al. 1972, Davidson et al. 2005). Como ya se mencion, no es la concentracin absoluta de Sr
que importa para su incorporacin a los otolitos, pero si su cantidad relativa de Ca, una vez que
ambos elementos son bivalentes positivos y compiten por los mismos sitios de unin en la
estructura cristalina de los otolitos. Lo contrario ocurre con Ba las concentraciones en agua
dulce son mucho mayores que en agua de mar. Una vez que las aguas dulces y ricas en Ba2 + son
se encuentran con aguas saladas y ricas en sulfatos, forman sulfato de bario que precipita,
removiendo la forma biodisponible del Ba (Ba2+) del agua (Dehairs et al. 1980). De esta forma,
cuanto ms salada es el agua menor ser la cantidad de Ba en su forma biodisponible para la
absorcin por los peces y la consecuente incorporacin a los otolitos. Sin embargo, existen
casos en que el patrn, como el incremento de la concentracin de Ba en las aguas hipersalinas
de la laguna de Coorong, en Australia (Gillanders y Munro 2012). Este comportamiento
anmalo de Ba puede complicar la reconstruccin ambiental en ciertas regiones, sobre todo
cuando no se sabe la curva de mezcla del elemento en cuestin.
Debido a la influencia sufrida por la composicin qumica del agua a lo largo del gradiente de
salinidad, estos elementos pueden tericamente ser utilizados para reconstruir historias de
salinidad del agua donde los peces se han desarrollado. En la prctica, sin embargo, la
determinacin de los valores de salinidad basada en otolitos es difcil debido al efecto
interactivo de diferentes factores que actan sobre la precipitacin del Sr y Ba en otolitos
(Elsdon y Gillanders 2002). Suponiendo que tenemos el perfil de Sr y Ba desde el ncleo al
borde de un otolito particular, qu factores debemos tener en cuenta para tratar de determinan
las variaciones de salinidad? Para facilitar la comprensin, dividiremos estas consideraciones
por factor, los cuales sern tratados seguidamente.

6.4.1.1 Movimientos

Tenemos que tener en cuenta los movimientos que este determinado pez realiz a lo largo de su
vida. En el caso que se trate de una especie eurihalina, es decir, tolerante una gran amplitud de
de salinidad, la interpretacin de los perfiles de Sr y Ba empieza a complicarse, porque una
determinada fluctuacin en el perfil puede indicar un movimiento entre masas de agua
diferentes o un verdadero cambio en la salinidad. De esta manera, para reconstruir salinidades
en un rea determinada, es importante que la especie sea oligohalina, sedentaria, o de
preferencia est quieta en una determinada rea.

160
6.4.1.2 Ontogenia

Los peces de una misma especie pueden presentar modificaciones fisiolgicas a lo largo de su
desarrollo que pueden provocar cambios en las concentraciones de elementos en sus otolitos
(Fowler et al. 1995, Sadovy y Severin 2004), sin que estos cambios indiquen variaciones
ambientales o incluso de movimiento entre diferentes masas de agua. Adems, especies que
presenten una fuerte variacin ontogentica en la precipitacin de elementos deben evitarse o la
influencia ontogentica debe ser por lo menos comprendida antes de intentar reconstrucciones
ambientales. La tasa de crecimiento es quizs el factor ms importante para producir variaciones
qumicos en la constitucin de los otolitos (Sadovy y Severin 2004).

6.4.1.3 Interacciones entre la temperatura y la salinidad

La temperatura y la salinidad producen efectos complejos sobre la incorporacin de elementos

qumicos en los otolitos (Fowler et al. 1995, Martin et al. 2004, Sturrock et al. 2012). La
temperatura puede presentar efectos negativos para el Sr en algunas especies y positivos en otras
(Campana 1999). Adems, dentro de una misma especie, el efecto de la temperatura puede ser
mayor para determinados niveles de salinidad que para otros (Albuquerque 2008). Al considerar
la salinidad, es importante verificar cul es el patrn de mezcla de los elementos a lo largo del
gradiente de salinidad. La determinacin de este patrn, llamado curva de mezcla, es esencial
para inferencias futuras.
Como podemos observar hasta ahora, diversos factores interfieren en la incorporacin de Sr y
Ba en otolitos. Estos factores no impiden que los patrones generales de uso de hbitat sean
inferidos, ms hacen que sean muy difcil de estimar los valores de salinidad experimentados
por los peces en el ambiente.

6.4.2 Reconstruccin de temperaturas

Las relaciones isotpicas de oxigeno (18O:16O) se han utilizado para la evaluacin de los
cambios de temperatura del agua en ncleos de hielo que representa a unos 800.000 aos en la
historia de nuestro planeta. La idea de esta tcnica se basa en las diferencias qumicas entre
istopos de un mismo elemento. Recordando que los istopos son tomos de un mismo
elemento que tienen el mismo nmero de protones y diferente nmero de neutrones. El oxgeno
se produce naturalmente con diferentes masas atmicas. La forma ms liviana y ms comn es
el istopo 16O (8 protones + 8 neutrones), con abundancia natural de 99,76% en la atmsfera
terrestre.
Otros istopos de oxgeno ocurren naturalmente, pero en mucha menor abundancia. El 8O (8

161
protones + neutrones 10) presenta una abundancia natural de 0,2%. Entonces, percibimos que
casi la totalidad del oxgeno de la atmsfera est compuesto por la forma ligera del oxgeno
(16O). Como los istopos ms pesados (18O) tienden a reaccionar ms lentamente, a medida que
el agua de logos y ocanos se calienta, las primeras molculas de agua a evaporar son aquellas
que presentan la forma ms liviana del oxgeno (16O), haciendo que el agua que no se evapora
quede ligeramente enriquecido en 18O y el vapor de agua enriquecida en 16O. Por esta razn los
ros y glaciares, formados a partir de agua de lluvia, son ligeramente enriquecidos en 16O, lo que
deja claro que la variacin en la salinidad en las aguas costeras dificulta la estimacin de la
temperatura.
18
En los estudios de istopos estables, las relaciones isotpicas (para este caso, O:16O) son
medidas en el agua o en otras sustancias y son comparadas con un material de referencia
internacional llamado PDB (Pee Dee Belemnite). La relacin entre las relaciones isotpicas en
la muestra y el material de referencia reciben el nombre de (por ejemplo, 18O), que
representa la notacin estndar para el estudio de istopos estables. Los valores de estn
expresados en y pueden ser positivos, cuando decimos que la muestra es enriquecida en el
istopo particular, negativos, cuando se empobrece y el neutro (cero), cuando la muestra y el
material de referencia tienen el mismo valor.
La lgica para la interpretacin de los istopos de oxgeno en otolitos es un poco diferente a la
presentada anteriormente para agua y vapor. En primer lugar, la disponibilidad del istopo
pesado del oxgeno (18O) en el agua est directamente relacionada con la temperatura local
(Jouzel et al. 1994). Se comprob experimentalmente que las proporciones de istopos de
oxgeno se depositan en otolitos aproximadamente en equilibrio con la disponibilidad de agua
(Thorrold et al. 1997b). Adems, se encontr que la falta de influencia de las tasas de
crecimiento u ontogenia de los peces aumenta la precipitacin de estos istopos, lo que sugiere
18
que el anlisis de O es una herramienta muy slida para la evaluacin de parmetros
ambientales. Finalmente, se determin experimentalmente que existe una relacin positiva entre
la temperatura y la abundancia de la fraccin pesada (18O) en relacin con (16O) en otolitos, lo
que hace posible determinar la temperatura del agua en la que los peces se desarrollaron con
18
precisin de ms o menos 1C, desde que se puede estimar la abundancia de O en el agua
(Thorrold et al. 1997b). Segn determinaciones experimentales de la influencia de la
temperatura de precipitacin de istopos de oxgeno en calcita inorgnica, para cada aumento de
0,3 C en la temperatura del agua, ocurre un aumento de 0,07 en 18O de calcita. La
posibilidad de estimacin de la temperatura del agua mediante el anlisis de istopos de oxgeno
en otolitos ha sido verificada para diferentes especies de peces (Andrus et al. 2002b, Surge y
Walker 2005, Dufour et al. 2008).
En la prctica, se han realizado muy pocos estudios para determinar las temperaturas basadas en

162
el anlisis de istopos de oxgeno en otolitos. Para ejemplificar, la Figura 6.11 presenta los
valores estimados de la temperatura del agua a partir de los otolitos de jvenes de 1 ao de
Alosa pseudoharengus (<1 ao) en dos lagos y una baha de los Estados Unidos (Dufour et al.
2008). Tenga en cuenta que las estimaciones (lneas rectas sin puntos) estuvieron muy cerca de
las medidas reales de las temperaturas del agua durante todo el ao (lneas sinuosas con puntos).
Los autores sugieren que algunos individuos, principalmente provenientes de la Baha (Figura
6.11B), buscaran microhbitats con temperatura un poco ms elevada que las medias medidas, o
indican un comportamiento juvenil ms complejo que el esperado.

Das del ao

Figura 6.11 - Perfiles (lnea serpenteante con puntos) temperatura real y estimadas a partir de
oxgeno (18O) en otolitos de juveniles de un ao de Alosa pseudoharegus (lneas rectas sin
puntos) en el lago Michigan (A), Baha de Esturjo (B) y Lago Muskegon (C), en Estados
Unidos (Fuente: Dufour et al. 2008).

163
Aunque los estudios con istopos de oxgeno en otolitos todava estn en fase de desarrollo,
para la reconstruccin de temperaturas ambientales, esta herramienta es bastante prometedora
tanto para la estimacin de temperaturas actuales como las de muestras colectadas en sitios
arqueolgicos, que posibilitaran reconstrucciones de temperatura de miles o incluso millones de
aos, facilitando la comprensin de la evolucin de la variabilidad climtica a lo largo de la
historia geolgica de nuestro planeta.

6.4.3 Evaluacin de la hipoxia del agua

La hipoxia es una condicin de baja concentracin de oxgeno disuelto en el agua. Esta

condicin est asociada a diversas caractersticas ambientales (Esteves 2011) como el grado de
movimiento del agua (aguas quietas tienden a presentar menos oxgeno disuelto), la temperatura
(el calor disminuye la solubilidad del oxgeno en el agua) y el aporte de nutrientes de origen
antropognico como cloacas (con exceso de nutrientes se produce fuertes floraciones algales y
cuya degradacin por bacterias consumen todo el oxgeno disuelto en el agua). Las regiones
acuticas que presentan hipoxia pueden ser perjudiciales para diversas especies de peces y otros
organismos, que terminan muriendo por falta de oxgeno. No son raras las mortandades de peces
que generalmente son reportados cada ao. Aunque episodios crticos de hipoxia sean
fcilmente observados, las condiciones ms ligeras de hipoxia no lo son, por lo que se adoptan
medidas solamente cuando el problema ya est instalado, por lo que generalmente no se hacen
para minimizar dicho problema. Sin embargo se ha recientemente observado que las
concentraciones de manganeso en otolitos, concretamente sus razones de calcio (Mn:Ca) pueden
indicar si un determinado pez ha experimentado condiciones de hipoxia o incluso anoxia (sin
oxgeno disuelto) a lo largo de su vida (Limburg et al. 2015).
El ciclo biogeoqumico de manganeso es bien conocido (para una revisin, consulte Reddy y
Delaune 2008). En el agua, la forma biodisponible del Mn es bivalente positivo (Mn2+) y es
tambin llamada forma reducida. El ciclo del Mn est estrechamente relacionada con el
sedimento y sufren la influencia directa del pH de la presencia de oxgeno.
Explicando simplemente el proceso en ambientes acuticos bien oxigenados, el Mn2+ se une al
oxgeno formando xido de manganeso (MnO) y ms frecuentemente, el dixido de manganeso
(MnO2), que son compuestos slidos que precipitan hacia el sedimento. Dos situaciones pueden
ocurrir simultneamente en los sedimentos: (i) los xidos se unen a un carbono formando los
carbonatos de manganeso (MnCO3) que se conservan en sedimentos anxicos ms profundos y
(ii) xidos de manganeso son nuevamente reducidos a Mn2+ y puede volver al agua. Si bien el
ambiente es oxigenado, la capa ms superficial del sedimento tambin lo ser habr formas
reducidas de Mn2+ (situacin ii) se unen al oxgeno impidiendo que la forma biodisponible
vuelva hacia el agua. En ambientes pobres en oxgeno, los xidos y el dixido de manganeso se

164
reducen a Mn2+ y no hay suficiente oxgeno para producir xidos de nuevo, es decir, parte del
Mn2+ vuelve al agua y se vuelve biodisponible para los peces. El Mn2+ entra en el organismo por
las branquias o los intestinos, siendo por fin incorporado en la estructura cristalina de los
otolitos en sustitucin del Ca2+, semejante a lo que ocurre con el Sr y el Ba.
Es importante entender que la presencia de mayores relaciones Mn:Ca en los primordia de los
otolitos es una caracterstica comn que no est necesariamente relacionada con las condiciones
anxicas del agua, ms es una herencia materna de Mn (Ruttemberg et al. 2005). Un segundo
punto importante, es que el proceso de incorporacin de la Mn en los otolitos es influenciado
por la tasa de crecimiento, que a su vez es influenciada por la temperatura y por otros procesos
desencadenantes de estrs (Martin y Thorrold 2005). La influencia de la tasa de crecimiento
dificulta la determinacin de las condiciones ambientales de anoxia siendo necesario, por lo
tanto, evaluar el crecimiento de la especie estudiada, lo que puede ser realizado en base al
anlisis del espesor de los anillo diarios de crecimiento en el mismo otolito en que se analiza las
relaciones Mn:Ca (Limburg y Walther 2015). En la Figura 6.12, Limburg y Walther (2015)
analizaron otolitos de tres especies de peces: la perca amarilla de un lago de Estados Unidos, un
lenguado del Mar Bltico y una corvina del Golfo de Mxico. Incluso para las tres especies de
distintos ambientes se encontr que todas muestran mayores valores de Mn:Ca cuando los
individuos se colectaron en reas de baja concentracin de oxgeno disuelto. Note que la
magnitud de la diferencia cambia entre las especies y los ambientes, pero el efecto es
consistente con los valores ms altos de Mn:Ca en reas anxicas.

Buena oxigenacin Hipoxia

Distancia del ncleo (m)

Figura 6.12 Relaciones Mn:Ca en otolitos de (A) Perca flavescens colectadas em el Lago Erie
(EUA), (B) Platichthys flesus colectado en el Mar Bltico y (C) Micropogonias undulatus
colectados en el Golfo de Mxico. Los grficos de la izquierda representan reas con buena
oxigenacin y los de la derecha reas de hipoxia (Fuente: Limburg y Walther 2015).

165
Junto con Mn, otros elementos pueden ayudar a aclarar preguntas sobre hipoxia, incluyendo el
sulfuro y el yodo. Se trata de un rea de investigacin en desarrollo inicial y se espera que en
algn tiempo los peces puedan ser utilizados como monitores mviles de condiciones de hipoxia
en el ambiente.

6.5 Conclusiones

Los otolitos pueden ser considerados las "cajas negras" que almacenan informacin sobre el
ciclo de vida de los peces, ayudando en la comprensin de los aspectos bioecolgicos de las
poblaciones y de los stocks de peces. La composicin qumica de los otolitos es influenciada de
manera predecible por factores ambientales como la temperatura, la salinidad, la disponibilidad
de oxgeno y la composicin qumica del agua. Esto significa que, a medida que la influencia de
cada factor se entienda mejor, mejor podemos estimar la variabilidad ambiental experimentada
por los peces a lo largo de su vida, lo que los pone como potenciales herramientas de monitoreo
ambientales. Diferentes elementos (por ejemplo: Sr, Ba, Ca, Mn, S, etc.) pueden utilizarse para
responder a diferentes preguntas acerca de los ciclos de vida de los peces y las fluctuaciones
ambientales en el agua que frecuentan. Otros elementos no fueron mencionados aqu (Zn, Fe,
Mg), pero tambin ofrecen potencial para estudios ecolgicos de uso de hbitat y como
indicadores de la condicin del agua. La idea de este texto es presentar al lector diversas
aplicaciones del anlisis qumico de los otolitos de forma de promover un primer contacto
terico con la tcnica y posibles situaciones donde el estudio de los otolitos puede ayudar en la
comprensin de la ecologa de peces y las condiciones ambientales.

Agradecimientos

Me gustara agradecer a los colegas autores que amablemente cedieron las figuras utilizadas en
este captulo. Me gustara tambin dar las gracias al Profesor Norbert Miekeley, que muri slo
hace dos aos, a quien considero mi padre de la ciencia que me permiti entrar en el mundo de
la qumica analtica siempre cediendo su laboratorio, equipamientos e interminables lecciones
para desarrollar mi Tesis de Doctorado y que posteriormente continu con la investigacin en
qumica de otolitos.

166
7. MTODOS CUANTITATIVOS APLICADOS AL ESTUDIO DE OTOLITOS

Andr Martins Vaz-dos-Santos

Sumario
7.1 Introduccin........................................................................................................................167
7.2 Programas de computacin.................................................................................................169
7.3 Algunos mtodos cuantitativos...........................................................................................169
7.3.1 Obteniendo el n muestral de otolitos............................................................................169
7.3.2 Identificacin de datos discrepantes.................................................................................172
7.3.3 Pruebas de frecuencias.....................................................................................................174
7.3.4 Comparacin de coeficientes con un valor referencial.....................................................176
7.3.5 Ajuste de modelos con el mtodo iterativo no lineal de mnimos cuadrados...................177
7.3.6 Anlisis de residuos..........................................................................................................178
7.3.7 Comparacin de modelos: anlisis de covarianza............................................................180
7.3.8 Utilizando tcnicas paramtricas versus no paramtricas................................................182
7.4 Conclusiones.......................................................................................................................185
Agradecimientos.......................................................................................................................185

7.1 Introduccin

El uso y aplicacin de tcnicas cuantitativas es inherentemente y est estrechamente vinculado a

las ciencias naturales (biologa, ecologa, fisiologa, oceanografa, limnologa) a la pesca y a la
acuicultura. Durante los cursos de graduacin, muchas veces las disciplinas que se ocupan de
mtodos cuantitativos no reciben debida atencin de los estudiantes, porque estn desconectadas
de sus actividades diarias y/o porque tienen poca afinidad (o bien aversin!) al tema en el
momento de la eleccin profesional. Adems, como muchas veces son de reas comunes, se
llevan a cabo colectivamente en varios cursos diferentes, impidiendo el direccionamiento del
contenido y de ejemplos y hacindolos, de esta manera inocuos en la formacin del estudiante.
Mientras tanto, cuando la participacin acadmica en proyectos como el estudio de los otolitos,
demanda un anlisis del tema con conocimiento de los mtodos cuantitativos. El advenimiento y
la facilidad del uso de las computadoras y los programas de anlisis tambin favorecieron un
rpido avance en estas tcnicas; por otra parte, creo un problema en el uso indiscriminado sin
conocimiento de sus bases, requisitos y procedimientos. Vale la pena recordar algunas premisas
bsicas:

167
- mtodos cuantitativos son herramientas que ayudan al acadmico e investigador en la
ejecucin del anlisis de los datos; no son, por lo tanto, para aumentar la complejidad y
dificultad de un tema bajo estudio, sino ms bien lo contrario;
- el mejor mtodo cuantitativo no expresa necesariamente el mejor resultado biolgico;
- los mtodos cuantitativos son parte de las ciencias exactas, mientras que estudios de otolitos
son parte de un campo interdisciplinario de la ciencia que presenta gran variabilidad;
- el mtodo cientfico tiene varias caractersticas (Marconi y Lakatos 2003, Cervo et al. 2006),
incluyendo la sistematizacin, el anlisis y la verificabilidad. Los mtodos cuantitativos
aseguran estos aspectos, pero el sentido comn y la experiencia, elementos subjetivos, son
tambin parte de la eleccin de la aplicacin e interpretacin de las tcnicas. Luego es
fundamental combinar racionalidad y objetividad.

Considerando estas premisas, a nivel de los cursos de graduacin31 se espera que los siguientes
temas sean vistos y abordados, capacitando al acadmico en el uso y aplicacin de estas
tcnicas Batschellet 1978, Callegari-Jacques 2003, Vieira 2008, Magurran 2013):
- clculo diferencial e integral, mtodos de integracin;
- estadstica: grficos, tablas, medidas, distribuciones, test de hiptesis, comparacin de
muestras (p.ex., test t, ANOVA, test no paramtricos, correlaciones);
- mtodos de enumeracin;
- funciones y modelos de regresiones;
- ndices de diversidad e de similaridad.

Al actuar como un investigador y acadmico profesional, se espera que esta base est
consolidada para ampliar la perspectiva del uso y detalles, y se agregan nuevas posibilidades
analticas (Sokal y Rohlf 1995, Abuabara y Petrere 1997, Chambers y Hastie 1997, Dryden y
Mardia 1998, Legendre y Legendre 1998, Krebs 1999, Hernndez 2007, Hair et al. 2009, Zar
2010, Gotelli y Ellison 2011, Valentin 2012), entre ellas:
- anlisis de varianza, sus diversos modelos y modelos lineales generalizados;
- anlisis de covarianza;
- estadsticas circulares;
- anlisis de Monte Carlo;
- mtodos de verosimilitud y estadstica Bayesiana;
- mtodos multivariados, como anlisis de componentes principales, escalamiento
multidimensional, anlisis de correspondencia, modelaje de ecuaciones estructurales, etc.;
- test de hiptesis multivariados, como MANOVA y PERMANOVA;

31
Observar que conjuntos, potencias, logaritmos, progresiones, matrices, determinantes, funciones trigonomtricas,
geometra y lgica son contenidos inherentes a etapas anteriores de la enseanza superior.

168
- mtodos geomtricos y de anlisis de deformaciones.

Obviamente, cualquier investigador/acadmico experimentado que trabaje en otolitologa podr

agregar fcilmente ms referencias y tcnicas de anlisis a esta lista, no mencionadas aqu! De
esta forma, el objetivo de este captulo no es la repeticin exhaustiva de los mtodos
cuantitativos, descriptos con las propiedades en sus referencias originales, sino ms bien
demostrar algunas de estas tcnicas y su aplicacin en el estudio de los otolitos.

7.2 Programas de computacin

En la actualidad existe una gran variedad de programas de computacin para aplicar las diversas
tcnicas de anlisis cuantitativo. Cul elegir? Esta pregunta debe tener en cuenta: (i) la
disponibilidad del programa, (ii) si es gratuito o es pago, (iii) los recursos que el programa posee
y (iv) las demandas del anlisis. De todos modos, aprender el uso de un programa requerir un
gran investimento de tiempo, con pruebas, simulaciones, lectura del manual, participacin en
grupos de discusin, acceso a soporte online, etc. Este estudio debe realizarse cuando se sabe y
se dominan las tcnicas que se utilizarn, para que la computadora funcione como una
herramienta real y no como un malicioso elemento de conduccin a caminos desconocidos.
Luego, el programa de computador es una eleccin personal.

7.3 Algunos mtodos cuantitativos

7.3.1 Obteniendo el n muestral de otolitos

La estimacin del tamao (n) de la muestra es un elemento que no debe considerarse como
una "camisa de fuerza" en la vida del investigador o acadmico, sino que debe orientar su
esfuerzo en trminos de cuantidad y representatividad. Debe tenerse en cuenta, cules son los
objetivos del estudio y la viabilidad de realizar el anlisis. A pesar de no actualizados, tome
como ejemplo los valores en dlares presentados por Campana (2001) para la validacin de las
edades: se trata de un poderoso cuello de botella en las ciencias!
La mayora de las tcnicas ecolgicas y estadsticas posee a partir de simulaciones y de los
principios del intervalo de confianza, mtodos para estimar el "n" muestral (Krebs 1998, Zar
2010). El muestreo aleatorio simple (Gulland 1966) ha demostrado ser un punto de referencia
bueno para estimar el tamao de la muestra.
Asumimos que el propsito del estudio es la caracterizacin morfomtrica de los otolitos a fin
de discriminar los stocks pesqueros de dos reas. Luego, cuntos peces (y, por consiguiente,
otolitos) deben ser obtenidos en cada rea? Tomemos como ejemplo Micromesistius australis,

169
un Gadiforme distribuido en el Ocano Atlntico y en el Ocano Pacfico Sur, extremo sur de
Sudamrica y cuya mayor longitud corporal fueron entre 480 y 540 mm (Cousseau y Perrotta
2004) y la primera madurez ocurre entre 350 y 380 mm (Whler et al., 2000). Podemos simular
la obtencin de una muestra aleatoria de M. australis a partir las capturas de la flota pesquera,
considerando, para estimar inicialmente 30 datos de longitud total (FL), un promedio de 380
mm y desviacin estndar de 65 mm FL, con distribucin normal. El resultado es una muestra
de 30 individuos con longitud entre 223 y 489 mm, con media y desviacin estndar de 376.04
63,8 mm (Figura 7.1).

Figura 7.1 Distribucin de frecuencias de individuos por clase de longitud total (FL) para la
simulacin realizada con Micromesistius australis (n = 30).

Como verificar si este n es suficiente? Consideremos la frmula del test t una muestra:

x
t=
sx
Donde:
t = estadstico del test;
x = media aritmtica;
= media poblacional;
sx = error estndar de la media, dada por la desviacin estndar s dividida la raz cuadrada del
nmero de observaciones n.
Reescribiendo:
x
t=
s
n

170
La media poblacional es desconocida, ms la distancia entre la media poblacional y muestral
est dada por:
s
t = x
n

Para que esta igualdad sea verdadera, podemos pensar en el error ( ) que existe asociado a la
estimacin de la x , normalmente adoptado por el investigador como 0,05 (5%):

s
t = x
n

Reordenando, tenemos la frmula de Gulland (1966) para calcular el "n" muestreal en un

muestreo aleatorio simple:
2
t .s
n = 2 ( 0 , 05 ),n1
x
Donde:
n = tamao muestreal ha ser estimado;
t = valor terico bicaudal (2) de probabilidad de la distribucin t con n-1 grados de libertad;
x = media aritmtica de muestra piloto o de una simulacin;
s = desvo estndar de la muestra piloto o de la simulacin

Aplicando la frmula anterior en el ejemplo sobre Micromesistius australis, tenemos:

2
2,045.63,8
n= = 48
376,04.0,05

De esta manera, debe intentar conseguir al menos 48 especmenes de M. australis para analizar
la morfometra de otolitos y diferenciar los stocks de la especie. Este valor debe ser aplicado,
con sentido comn, a todas las categoras que se estudiaron (rea, edad, sexo). Legu et al.
(2013) constituyen un ejemplo aplicado del tema, habiendo centrado su muestreo de M.
australis en el perodo reproductivo, cuando los grupos estn separados y delimitado un
intervalo de tamao corporal, minimizando errores. Estos autores analizaron un "n" de otolitos,
que de acuerdo a la simulacin que se llev a cabo aqu, fue ms que suficiente.
Otro criterio que puede ser adoptado es la regla de 10 (Gotelli y Ellison 2011), considerando las
categoras del estudio.

171
7.3.2 Identificacin de datos discrepantes

El anlisis de datos cuantitativos implica en la identificacin de datos discrepantes

(observaciones inusuales u outliers), es decir, los valores extremos que se diferencian de los
dems. Esto puede ocurrir como una funcin de la biologa (es una excepcin en la muestra) o
debido a errores de medicin, errores tipogrficos, etc. La conservacin de un dato discrepante o
no en el estudio debe ser ponderado con sentido comn y experiencia, habiendo dos criterios: a
travs del clculo de outliers o a travs de la puntuacin Z.
Consideremos los datos de longitud (OL) y altura (OH) de los otolitos de Bembrops heterurus
(Vaz-dos-Santos et al. 2007b). La variacin de estas medidas puede ser descripta mediante un
grfico de caja (box plot) (Figura 7.2), originalmente constituido por cinco valores: (i) la caja
representa el primero (Q1) y el tercer cuartil (Q3); (ii) la barra que a divide es la mediana (Q2);
(iii) las lneas verticales, que se extienden entre los datos que no los pasan 1,5 veces la amplitud
intercuartil (Q3-Q1) (Zar 2010). Los datos discrepantes, definidos como datos espurios
(outliers), son los que estn fuera del intervalo dado por el clculo del item (iii), siendo
sealados por asteriscos. Observando los datos de B. heterurus se comprueba que en la longitud
de otolitos (OL) no ocurrieron observaciones inusuales, mientras que en el altura (OH) s.
Teniendo en cuenta la variabilidad de los datos y conocimientos sobre la especie, se puede decir
que estas ocurrencias son datos reales detectados sobre la base de los clculos, pero que
pueden/deben guardarse para anlisis posteriores. Vea que, en este caso, la identificacin de
datos discrepantes fue en funcin de la posicin de los cuartiles. Por eso, se debe tener cuidado
para mantener o remover los datos diagnosticados en esta manera cuando se est probando, por
ejemplo, promedios de los datos: es una mezcla de conceptos que puede ser perjudicial a los
anlisis.

172
 6,5

6,0

5,5
OL (mm)

5,0

4,5

4,0

3,75

3,50

3,25
OH (mm)

3,00

2,75

2,50

Figura 7.2 Grficos de caja para la longitud (OL) y altura (OH) del otolito sagitta de
Bembrops heterurus (Datos de Vaz-dos-Santos et al. 2007b, Fuente: LABESC-UFPR).

Un segundo anlisis de datos discrepantes considerando la media puede ser hecho a travs del
clculo de la puntuacin Z (Callegari-Jacques 2003):
xi x
Z=
s
Donde:
xi = cada dato del individuo i;
x = media aritmtica;
s = desvo estndar.

El clculo de la puntuacin Z se llama normalizacin de datos, porque convierte los datos

originales en proporciones de una distribucin normal estndar (media cero y desviacin
estndar 1) (Figura 7.3). Permite colocar los datos en relacin con la media y aquellas que estn
ms all de 1,960 desviaciones estndar con respecto a la media, antes o despus de ella, se
consideran datos discrepantes y raros, porque caen en el rea de probabilidad P < 0,05.

173
 0,4

0,3
densidad normal

0,2
0,95

0,1

0,025 0,025
0,0
-1,960 0 1,960
promedio

Figura 7.3 Curva de distribucin normal estndar que muestra la posicin de la media central
(cero) y las puntuaciones Z -1,960 y +1,960, para delimitar el rea de 0,95, observaciones que
son comunes y las dos reas de 0,025, observaciones inusuales.

En el caso del ejemplo de Bembrops heterurus, pudimos comprobar que las observaciones
inusuales detectadas en la tcnica del diagrama de caja tambin son discrepantes desde la
perspectiva de la puntuacin Z. Calculando la puntuacin Z para los valores del altura de los
otolitos (OH) 2,44 mm (n = 1), 3,61 mm (n = 1), 3,72 mm (n = 3) y 3,78 mm (n = 1) con la
media 3,039 mm y con el desviacin estndar 0,258 mm:
Z2,44 = -2,32
Z3,61 = +2,21
Z3,72 = +2,64
Z3,78 = +2,87

Teniendo en cuenta este otro anlisis, estas seis observaciones tambin son consideradas valores
atpicos (outliers); una vez ms, podramos mantener estos datos en el anlisis, ya que no
exceden de 3 desviaciones estndar con respecto a la media, que corresponde a 0,01 de
probabilidad, datos que son extremamente raros.

7.3.3 Pruebas de frecuencias

La descripcin de la morfologa de los otolitos por las clases de la longitud total es

indispensable para la verificacin de variaciones ontogenticas (Vaz-dos-Santos et al. 2007b,
Tuset et al. 2008, Rondon et al. 2014, Carvalho et al. 2015), recordando que los otolitos son

174
inicialmente redondeados y, a lo largo de la vida, adquieren su forma especfica debido al
crecimiento en diferentes ejes (Smale et al. 1995). De este modo, comparar las proporciones de
individuos a lo largo del desarrollo de diferentes caractersticas (cf. Captulo 2) es fundamental
para comprender esta variabilidad de forma que si pueda sealar una forma que sea
caracterstica de los otolitos.
El test Chi-cuadrado (2) fue desarrollado originalmente para escalas nominales (Zar 2010), ms
puede ser aplicado para escalas categricas ordinales (Siegel y Castellan 2006). En este caso, la
muestra que constituye cada clase de longitud no es aleatoria (fueron elegidos 10 otolitos), lo
que permite aplicar el test sin perjuicio de las conclusiones. La hiptesis nula es que la cantidad
de individuos en cada lnea (clase de longitud) por categora de atributos de otolitos sigue la
proporcin establecida por el investigador/acadmico y, para el test de heterogeneidad, que
vienen de la misma poblacin. La aplicacin del test de heterogeneidad se hace con la frmula
(Zar 2010):

( f ij fij ) 2
=
2

f ij

Donde:
2 = estadstico del test;
f ij = frecuencia observada en la categora i (lnea) del atributo j (columna);

fij = frecuencia esperada en la categora i (lnea) del atributo j (columna).

Hecho el clculo para cada clase de longitud (lneas i), smanse estos valores y sus grados de
libertad. Tambin si calcula el Chi-cuadrado para el total de las lneas. La suma de Chi-
cuadrado y el cChi-cuadrado total se restan, obteniendo as el valor del test de heterogeneidad y
su grado de libertad. El valor de Chi-cuadrado calculado puede compararse a una valor crtico
de la tabla o ser analizado con la probabilidad; siendo P < 0,05, si rechaza la hiptesis nula.
Tenga en cuenta que la hiptesis nula se puede estructurar de dos maneras: teniendo en cuenta
proporciones iguales en cada atributo analizado del otolito o, verificando la proporcin del total,
establecindose como referencia para la comparacin.
La aplicacin del test de Chi-cuadrado presenta algunas limitaciones (Callegari-Jacques 2003,
Zar 2010), siendo recomendado tambin el test G como una alternativa metodolgica.

175
7.3.4 Comparacin de coeficientes con un valor referencial

El anlisis del crecimiento relativo a travs del modelo alomtrico y=axb (Braga 1986, Huxley
1993, Froese 2006) consiste en estimar el coeficiente b, cuyo valor expresa el patrn de
desarrollo de una variable en relacin a otra, por lo general las medidas de otolitos en relacin
con la longitud del cuerpo y entre ellas (Perin y Vaz-dos-Santos 2014). Como se describe en el
Captulo 3, si la longitud, la altura, el espesor y el peso de los otolitos presentan isometra o
alometra implica en probar el coeficiente en relacin a un valor de referencia que puede ser
lineal ( = 1), cuadrtico ( = 2) o volumtrico ( = 3), a establecer segn la naturaleza de las
variables (Quinn II y Deriso 1999).
La regresin entre la longitud y la altura del otolito sagitta de Eucinostomus argenteus fue
calculada y el coeficiente b (0,9246) estimado (Figura 7.4). Este valor indica que los otolitos
crecen proporcionalmente menos en altura en relacin a la longitud y sugieren alometra
negativa, siendo necesario comprobar si es significativa o no.

Figura 7.4 Diagrama de dispersin del modelo alomtrico ajustado a la longitud (OL) y altura
(OH) de los otolitos sagitta de Eucinostomus argenteus (Fuente: LABESC-UFPR).

Para comparar el valor obtenido en el ejemplo de la Figura 7.4 con un punto de referencia, en el
caso = 1, puesto que son dos mediciones lineales, debe utilizar una prueba de t una muestra
(Zar 2010):
b
t=
sx
Donde:
t = estadstica del test;
b = coeficiente estimado del modelo;

176
 = valor referencial del coeficiente;
sx = error estndar del coeficiente.

En el caso del ejemplo:

0,9246 1
t= = 2,712
0,0278

El valor de t en el mdulo puede ser comparado con una tabla con n-1 grados de libertad o
evaluado con el valor de la probabilidad; en el caso P = 0,004 y pudindose considerar que era
significativa la alometra negativa.

7.3.5 Ajuste de modelos con el mtodo iterativo no lineal de mnimos cuadrados

Tradicionalmente el ajuste de una regresin, es decir, la estimacin de los valores de sus

coeficientes, siempre se hizo por el mtodo lineal de mnimos cuadrados (Callegari-Jacques
2003). Esta tcnica obligatoriamente implica que el modelo sea lineal (y = a+bx) y el ajuste de
curvas no lineales dependa de linealizar previamente las mismas. El mtodo iterativo no lineal
de mnimos cuadrados (Gallant 1987) es una alternativa ms eficiente para estos ajustes, porque
se puede aplicar a prcticamente cualquier tipo de modelo de regresin y usualmente resulta en
valores ms pequeos de la suma de cuadrados residuales (RSS) e del valor del error estndar de
la regresin (S). Parte del principio de las sucesivas iteraciones, es decir, varios valores son
testados a partir de un valor inicial (que debe ser bueno y cercano a la realidad) con el fin de
obtener el mejor ajuste.
Los pasos para ejecutar el ajuste son:
- establecer los pares de datos (x, y) y graficarlos en un diagrama de dispersin;
- establecer valores iniciales para las constantes del modelo;
- calcular el valor esperado ( y ) de la variable dependiente con el modelo y las constantes
inicialmente arbitradas;
- calcular la suma de los cuadrados residuales (RSS):
n
RSS = ( y y ) 2
i =1

- iterar el modelo, buscando el valor mnimo de RSS con la variacin de los valores de las
constantes iniciales.

177
El modelo alomtrico (Huxley 1993) fue ajustado por los dos mtodos a los datos de la longitud
corporal total y el peso del otolito de Trachurus lathami (Figura 7.5). La suma de los cuadrados
residuales fue inferior en el ajuste iterativo (RSS = 0,000305) indicando que este modelo
describe mejor el conjunto de datos. Sin embargo, cabe destacar que los coeficientes de ambas
regresiones fueron diferentes, lo que puede dar lugar a diferentes interpretaciones en algunos
casos.

Figura 7.5 Diagrama de dispersin del modelo alomtrico ajustado a la longitud total (FL) y al
peso del otolito sagitta (OW) de Trachurus lathami a travs dos mtodos (A) lineal de
cuadrados mnimos y (B) iterativo no lineal de mnimos cuadrados (Fuente: LABESC-UFPR).

7.3.6 Anlisis de residuos

Los residuos representan la diferencia entre un valor observado y un valor esperado, es decir: es
una medida de cunto los datos de la muestra variaron en relacin a un determinado valor
referencial, la media o la regresin, por ejemplo. Los residuos pueden ser analizados en el test
Chi-cuadrado, en la anlisis de varianza (ANOVA), en modelos lineales generalizados (GLM) y
en regresiones, un caso especial de ANOVA (Sokal y Rohlf 1995, Venables y Ripley 1997, Zar
2010). En la mayora de estos casos, la interpretacin sobre el significado estadstico de los
residuos implica su conversin a puntuaciones Z32, llevando los datos a una escala de tamao
conocido, es decir, 1, 2 o 3 desviaciones estndar.

32
Cada residuo individual restado de la media de los residuos y divido por el desvo estndar de los residuos.

178
Consideremos, por ejemplo, el anlisis de los residuos del modelo alomtrico ajustado entre la
longitud total (FL) y el peso del otolito (OW) de Trachurus lathami: OW = 0,000000058 FL
2,4523
(Figura 7.5B). La suma de los cuadrados residuales (RSS), el valor del pseudo-coeficiente
de determinacin (r2)33 o el error estndar de la regresin (S) indican si el ajuste fue bueno o no,
pero an as es indispensable analizar los residuos. Los presupuestos de los mtodos pueden
comprobarse en los residuos, independientemente de su condicin en los datos originales
(Vieira 2006). Segn esta autora, el anlisis de residuos debe considerar: (i) observaciones
inusuales (datos discrepantes), (ii) independencia, (iii) homogeneidad de la varianza y (iv) si la
distribucin es normal. Para ello, podemos combinar el diagnstico grfico y algunas pruebas de
hiptesis (Vieira 2006), tratados abajo en el texto.
Para verificar datos discrepantes, un diagrama de dispersin entre los valores esperados del peso
de los otolitos ( y - es la regresin) y entre los residuos estandarizados ( Z y y ) permite

comprobar cules son los valores fuera del intervalo entre -1,960 y +1,960 desviaciones
estndar; adems, la dispersin de los residuos debe ser totalmente al azar (Figura 7.6A). Se
nota una tendencia al principio de la curva, relacionada con la variabilidad de los pesos ms
pequeos de otolitos y la capacidad de registro de la balanza analtica; es un problema insoluble.
Por otro lado, slo 5 datos eran discrepantes, lo que denota un adecuado ajuste del modelo.
Cuanto al presupuesto de independencia, esto no puede ser violado sin ser un serio
comprometimiento de los anlisis realizados (Vieira 2006); una grfica de los residuos en orden
creciente (en este caso, en el orden de peso de los otolitos) puede revelar las tendencias, porque
tiene que ser al azar. Por la figura (Figura 7.6B), de hecho, el nico problema que existe es al
principio de la curva, con los pesos pequeos. Para analizar la varianza, hay varias maneras;
grficamente, un histograma que muestra simetra y mesocurtosis revela la homogeneidad de
varianzas (Figura 7.6C), que puede ser debidamente probada; en este caso, podemos verificar un
leve desplazamiento a la izquierda, en funcin de la ausencia de pesos en algunos tamaos,
entre ejemplares pequeos y grandes. El anlisis de la normalidad se hace despus de la
homogeneidad de varianzas y puede combinar un grfico de residuales y su porcentaje
acumulado con respecto a la curva normal con una prueba de normalidad (Figura 7.6D). En
nuestro ejemplo con T. lathami, los valores extremos ms escasos tienden a afectar a los
residuos y esto es lo que pasa en la mayora de las situaciones reales, como la presentada aqu,
en que los datos no presentan perfeccin estadstica, pero reflejan la realidad biolgica de pez y
el desarrollo del otolito.

33
No siempre es recomendado en ajustes no lineales e iterativos, ms no entraremos en esta discusin en este texto.

179
Figura 7.6 Anlisis de residuos de la regresin entre la longitud total y peso de los sagitta de
Trachurus lathami: (A) diagrama de dispersin entre el peso esperado del otolito (OW
esperado) y los residuos estandarizados, (B) grfico lineal entre peso esperado del otolito (OW
esperado) en orden creciente y los residuos estandarizados, (C) histograma de residuos, (D)
grfico de probabilidad normal de residuos (Fuente: LABESC-UFPR).

An sobre el anlisis de residuos, esta constituye una importante herramienta en la deteccin del
crecimiento polifsico de los otolitos, descripto para Micropogonias furnieri (Bervian et al.
2006) y posteriormente aplicado a diversas especies (Vaz-dos-Santos et al. 2014) y para Anchoa
tricolor (Carvalho et al. 2015).

7.3.7 Comparacin de modelos: anlisis de covarianza

El anlisis de covarianza (ANCOVA) combina los elementos de un anlisis de varianza con el

anlisis de regresin, se utiliza por ejemplo, para comparar los ajustes de los modelos machos y
hembras, de diferentes reas o en diferentes pocas. Pensemos, por ejemplo, en la longitud de
cuerpo y en la longitud del otolito para cuatro estaciones distintas: para comparar la longitud del
cuerpo entre las cuatro estaciones se puede utilizar una anlisis de varianza un factor (ANOVA);
para asociar la longitud del cuerpo y la longitud de los otolitos, se utiliza una anlisis de
regresin. La combinacin de ambos anlisis resulta en el ANCOVA. Tenga en cuenta que la
longitud del cuerpo es la variable independiente x, elemento comn a los dos anlisis, siendo la
covariable (Sokal y Rohlf 1995).

180
De modo sencillo, en el anlisis de covarianza de los diferentes modelos compara entre s a
travs de los valores de sus coeficientes b y a con el modelo general (con todos los datos
juntos), representado por el coeficiente bp (Sokal y Rohlf 1995). Puede ser utilizado para dos o
ms modelos.
Consideremos las regresiones entre la longitud corporal (FL) y la longitud del otolito lapillus
(OL) de Cathorops spixii obtenidas en dos ecosistemas costeros de la costa sur de Brasil,
Ocano Atlntico Sudoccidental, el Complejo Estuarino de Baixada Santista (CEBS) y el
Complejo Estuarino Lagunar de Iguape-Cananeia (CELIC) (Figura 7.7). Visualmente parece
haber diferencias en los otolitos de la especie en las dos reas, ms es necesario realizar un
ANCOVA, usando datos logaritmizados.

Figura 7.7 Diagrama de dispersin de los modelos alomtricos ajustados a la longitud total
(FL) y a la longitud del otolito lapillus (OL) de Cathorops spixii en dos sistemas costeros de
costa sur de Brasil, Ocano Atlntico Sudoccidental (Fuente: LABESC-UFPR).

La aplicacin de la ANCOVA a los dos modelos de C. spixii result en diferencias significativas

(Tabla 7.1). Las pendientes fueron diferentes (P = 0,0075) y tambin los interceptos u ordenada
al origen (P = 0,0001), es decir, el crecimiento de los otolitos en relacin con la longitud del
cuerpo en las dos reas es significativamente diferente, mismo con la regresin conjunta siendo
significativa.

181
Tabla 7.1 Resultados el anlisis de covarianza para la comparacin entre los modelos
alomtricos ajustado a la longitud total (FL) y la longitud del otolito lapillus (OL) de Cathorops
spixii en dos sistemas costeros de costa sur de Brasil, Ocano Atlntico Sudoccidental (F =
estadstico del test, df = grados de libertad, P = probabilidad) (Fuente: LABESC-UFPR).

Comparaciones F df P
Coeficiente b 7,29 1 , 228 0,0075
Coeficiente a 19,06 1 , 229 0,0001

Modelo conjunto F df P
607,05 1 , 229 < 0,001
Coeficiente bp 0,625

7.3.8 Utilizando tcnicas paramtricas versus no paramtricas

La estadstica paramtrica y la no paramtrica son dos caminos para el anlisis de datos

cuantitativos. La primera se basa en parmetros, fundamentalmente la media y la varianza 2,
lo que implica que los datos sigan una distribucin normal (Figura 7.3) (Zar 2010). En pocas
palabras, la media, como una medida de tendencia central, es una buena representante de la
muestra slo si tiene un buen poder de centralizacin y si la variabilidad de los datos alrededor
de la misma son homogneos, lo que implica en homocedasticidad de varianzas, es decir, que
las varianzas de los diferentes grupos comparados son iguales (Vieira 2006). Por otro lado, los
mtodos no paramtricos no presentan requerimientos sobre la distribucin de que los datos
(Siegel y Castellan 2006), siendo llamados tests de distribucin libre (Callegari-Jacques 2003);
pueden aplicarse a muestras con tamaos pequeos y datos cualitativos. Las tcnicas no
paramtricas se basan en la asignacin de atributos para los datos.
Ambas lneas metodolgicas presentan ventajas y desventajas y su uso no debe ser una eleccin
arbitraria, por el contrario, debe estar basado en fuerte apoyo terico, es decir, en la literatura
estadstica. Se debe tener tambin cuidado con los fundamentos que poseen: Sokal y Rohlf
(1995) y Zar (2010) son las dos referencias ms comunes en el rea de las ciencias naturales y
acucolas y, en muchos casos presentan visiones muy diferentes sobre un mismo tema. Muchos
programas de computacin no traen en sus defaults las mejores pruebas estadsticas y, por lo
tanto, la ejecucin de una prueba no debe ser realizada solamente por estar disponible.
En general, para las variables cuantitativas el camino paramtrico siempre es anterior al no
paramtrico. Recuerde que los peces y los otolitos estn sujetos a factores endgenos y
exgenos, mostrando variabilidad intraespecfica (individuo, poblacin) e interespecfica
(Morales-Nin 2000, Popper y Lu 2000). Luego, las decisiones deben tomarse con sentido comn
y no slo a la luz del rigor estadstico.

182
Inicialmente se prueban los grupos de datos en cuanto a normalidad y homocedasticidad; y
habiendo pequeas desviaciones y/o violacin de supuestos, los tests paramtricos pueden
ejecutarse y los residuos pueden ser analizados en relacin a los supuestos. Si los datos no
cumplen con los supuestos de las pruebas, estos deben ser transformados34 y probados,
pudindose de la misma manera aplicar los anlisis a los residuos. Si aun as no atendieren a los
supuestos de las pruebas, si toman los datos originales y se analiza con estadstica no
paramtrica.
Tomemos como ejemplo el anlisis de la razn entre el altura del otolito y la longitud del otolito
(OH/OL) para analizar la variacin geogrfica de Merluccius hubbsi en el Ocano Atlntico
Sudoccidental, en seis reas entre 22 y 34S, en la costa de Brasil. Es conocido que M. hubbsi,
en esta rea, presenta dos stocks (Vaz-dos-Santos y Schwingel 2015). Para ello, el efecto de
tamao fue removido (cf. Captulo 3), siendo la razn OH/OL ploteada contra la longitud
estndar (FL) para la verificacin visual de los datos (Figura 7.8)

Figura 7.8 Diagrama de dispersin entre la longitud estndar (FL) y la razn del tamao
(OH/OL) de Merluccius hubbsi (Fuente: LABESC-UFPR).

Verificada la independencia de la longitud, los promedios de la razn del tamao del otolito
(OH/OL) fueron comparados entre las seis reas, a travs de una prueba de comparacin
mltiple, en el caso de un anlisis de varianza un factor (ANOVA) (Zar 2010). Para ello, fue
esencial probar la normalidad (test de DAgostino Pearson) para las razones de cada rea (Tabla
7.2).En todos los casos, P > 0,05, es decir, los datos presentaran una distribucin normal. Sin
embargo, cuando se hice la prueba de las varianzas, el test de Bartlett35 result en P < 0,05, es
decir, las muestras son heterocedsticas. Considerando que estas muestras no son balanceadas

34
Existen varios tipos de transformaciones de datos, cada uno relacionado con diferentes propiedades de los mismos
(cf. Sokal y Rohlf 1995, Krebs 1999, Siegel y Castellan 2006, Zar 2010).
35
La prueba de Levene es recomendada para muestras no normales (Zar 2010).

183
(Tabla 7.2), es decir, la cantidad de datos es diferente entre las reas, por lo tanto no es
apropiado realizar el ANOVA, violando los supuestos y testear los residuos. En este caso, los
datos fueron transformado (logaritmo) y nuevamente analizados, resultando en varianzas
diferentes (P = 0,001) (Figura 7.9). De esta manera, la comparacin entre las razones para las
seis reas requiere una prueba no paramtrica a ser realizada con los datos crudos, siendo
aplicado el test de Kruskal Wallis (Siegel y Castellan 2006). La aplicacin de este test para la
razn OH/OL M. hubbsi dio como resultado H = 9,398 y P = 0,094, no habiendo diferencias
significativas en este ndice entre las seis reas. En trminos analticos, sabiendo que hay dos
stocks (Vaz-dos-Santos e Schwingel 2015), observando que el valor de P fue alrededor de 0,05,
considerando que las muestras estaban desbalanceadas y que fue utilizado un nico criterio
(razn OH/OL), se debe sealar que este resultado, aislado, no permite un diagnstico sobre el
tema (variacin geogrfica), ms apenas sobre el carcter a analizado.

Tabla 7.2 Resultado del test de normalidad de DAgostino Pearson (K2) para la razn OH/OL
de Merlucccius hubbsi para seis reas del Oceno Atlntico Sudoccidental entre 22 e 34S (n =
nmero de observaciones, df = grados de liberdad, P = probabilidad) (Fuente: LABESC-UFPR).

rea
1 2 3 4 5 6
n 110 202 42 81 92 21
K2 1,537 2,705 5,720 1,732 4,141 0,441
df 2 2 2 2 2 2
P 0,464 0,259 0,057 0,421 0,126 0,802

3
Area

0,010 0,015 0,020 0,025 0,030 0,035 0,040 0,045

intervalo de confianza de Bonferroni para las desviaciones estndares

Figura 7.9 Media e intervalos de confianza en la comparacin entre las varianzas por el test de
Bartlett para la razn OH/OL de Merlucccius hubbsi para seis reas del Ocano Atlntico
Sudoccidental entre 22 e 34S (Fuente: LABESC-UFPR).

184
7.4 Conclusiones

En este texto se presentaron algunas tcnicas cuantitativas aplicadas al estudio de los otolitos.
Cabe destacar que el alcance de los anlisis aqu comentados est asociado a la etapa acadmica
y profesional considerada que este trabajo es decir, estudios a nivel de graduacin y/o posgrado
inicial. Eventuales dificultades en la comprensin de los contenidos presentados indica la
necesidad de revisar y consolidar los conocimientos bsicos que constituyen requisitos previos
para la comprensin de este texto. Se recomienda, siempre que sea posible, durante el
aprendizaje de las diferentes tcnicas que se realicen las mismas paso a paso, al igual que los
programas de computacin que se ejecutan directamente, para la reafirmacin de conceptos.

Agradecimientos

La capacidad y legitimidad para escribir este captulo, aunque simple, se debe a aquellos que me
ensearan y animaran a trabajar con mtodos cuantitativos en diferentes momentos y etapas, los
profesores36 Dr. Cerino Everton de Avellar (UFSCar), Dr. Jos Roberto Verani (UFSCar), Dr.
Edison Pereira dos Santos (IP), Dr. Antnio Olinto vila-da-Silva (IP), MSc. Marcos Antnio
Santos de Jesus (UNISANTA), MSc. Ins Esteves (UNISANTA), Dra. Lisbeth Kaiserlian
Cordani (IME-USP), Dr. Miguel Petrere Jnior (UNESP), Dr. Jean Louis Valentin (UFRJ) e Dr.
Anbal Aubone (INIDEP).

36
Orden cronolgico.

185
186
8. BASES QUMICAS PARA EL ESTUDIO DE LOS CUERPOS DE AGUA

Alicia Fernndez Cirelli

Sumario
8.1 Propiedades del agua y de los cuerpos de agua...................................................................187
8.2 Calidad, cantidad y qumica................................................................................................188
8.3 Disolucin de gases en agua................................................................................................189
8.4 Equilibrio entre dos fases....................................................................................................191
8.5 Composicin de las aguas naturales: iones mayoritarios, minoritarios y trazas.................193
8.6 Procesos geoqumicos: el patrn bsico de Gibbs...............................................................194
8.7 Proceso cido-base en agaus naturales................................................................................196
8.7.1 Equilibrios cido-base: el sistema dixido de carbono-carbonato...................................196
8.7.2 Equilibrio entre el carbonato de calcio y el agua.............................................................197
8.7.3 Equilibrio entre el carbonato de calcio y el gas carbnico atmosfrico con el agua........200
8.7.4 Alcalinidad, basicidad, acidez y dureza...........................................................................201
8.8 Muestreo, anlisis, interpretacin y confiabilidad de los datos qumicos...........................203
8.8.1 Colecta de muestras..........................................................................................................203
8.8.2 Calidad de las mediciones qumicas.................................................................................204
8.8.3 Balance inico..................................................................................................................205
8.8.4 ndices de saturacin........................................................................................................205
8.9 Conclusiones.......................................................................................................................208

8.1 Propiedades del agua y de los cuerpos de agua

El agua es la fuente y el sustento de la vida, contribuye a regular el clima del mundo y con su
fuerza formidable modela la Tierra. El agua posee propiedades nicas que la hacen esencial para
la vida (Fernndez Cirelli 2000):
- es un material flexible, pero no muy compresible;
- tiene propiedades fsico-qumicas fuera de lo comn. Es un solvente extraordinario por la
variedad de sustancias que puede disolver;
- tiene propiedades electroqumicas que la convierten en un reactivo ideal en muchos procesos
metablicos;
- posee una gran capacidad calorfica. Un gramo de agua absorbe una calora para elevar su
temperatura en 1C. Debido a esta elevada capacidad calrica, se precisa una gran cantidad de
calor para cambiar apreciablemente la temperatura de una masa de agua y, por lo tanto, un

187
cuerpo de agua puede tener un efecto estabilizante sobre la temperatura de las regiones
geogrficas cercanas. Esta propiedad impide grandes cambios sbitos en la temperatura de los
cuerpos de agua, protegiendo a los organismos acuticos del shock que supondran abruptas
variaciones de temperatura. El contenido del agua de las clulas es aproximadamente el 80% y
esta propiedad del agua protege a las molculas que estn disueltas o contenidas por ella;
- tiene las propiedad de expandirse cuando se congela (en realidad la expansin comienza a los
4C). Esto permite que el hielo flote. Si eso no sucediera y quedara debajo del agua no podra
derretirse tan fcilmente;
- tiene la propiedad de moverse y as puede modelar el paisaje y afectar el clima.

Los ocanos dan cuenta de ca. 97,5 % del agua del planeta. nicamente un 2,5 % es agua dulce.
Los glaciares, la nieve y el hielo de los cascos polares representan casi el 80% del agua dulce, el
agua subterrnea 19% y el agua de superficie accesible rpidamente slo el 1%. Esta baja
cantidad de agua de superficie fcilmente accesible, se encuentra principalmente en lagos (52%)
y humedales (38%).

8.2 Calidad, cantidad y qumica

Los procesos qumicos se encuentran por doquier en el mundo que nos rodea y han tenido lugar
en el planeta desde el inicio mismo de su existencia. En tiempos recientes, el hombre y sus
actividades se han convertido en factores a tener en cuenta sobre el equilibrio natural del medio.
El estudio detallado de los procesos qumicos involucrados es de vital importancia para conocer
el estado de integridad o de deterioro de los diferentes sistemas, realizar diagnsticos, prevenir
daos y elaborar soluciones.
La Qumica Ambiental consiste en el estudio de: fuentes, reacciones, transporte, efectos y
destinos de las especies qumicas en los tres medios: agua, aire y suelo. Los problemas qumicos
ambientales suelen ser de naturaleza compleja y el anlisis qumico requiere bajos lmites de
deteccin (Colin 2001).
El estudio de las aguas o Hidrologa se divide en dos ramas: la Limnologa, que estudia las
caractersticas fsicas, qumicas, geolgicas y biolgicas del agua dulce y la Oceanografa, que
estudia las mismas caractersticas pero de los ocanos.
Los cuerpos de agua presentan distintas especies qumicas en solucin. Cuando una sustancia,
que puede ser slida, lquida o gaseosa, llamada soluto se distribuye de forma homognea en un
lquido, se obtiene una solucin. Una medida de la cantidad de una determinada sustancia (ya
sea de origen natural o un contaminante) presente en aguas naturales es la concentracin. La
concentracin puede expresarse como porcentajes, que pueden estar referidos a datos en peso o
en volumen. Este tipo de informacin tambin puede darse como masa por unidad de volumen,

188
como por ejemplo, miligramos por litro (mg.L-1). Si consideramos que 1L de agua pesa 1.000g
y que la masa de soluto es despreciable, una concentracin de 2 mg.L-1 se convierte en 2
mg/1.000 g, es decir 2 ppm o partes por milln:

2 mg.L-1 = 2 mg/1.000 g = 2 mg/1.000.000 mg = 2 ppm

Otra forma corriente de expresar la concentracin de una solucin es la a concentracin en

cantidad de materia (mol.L-1)37, y que se define como la cantidad de moles de un soluto
existentes por cada litro de solucin:

Dnde la cantidad de moles se calcula dividiendo la masa de soluto por su masa molecular.
Tambin se puede expresar la concentracin de una solucin en funcin del nmero de
equivalentes grama por litro de solucin, lo que se conoce con el nombre de normalidad (N),
hoy en da poco utilizado. Anlogamente al nmero de moles, se define nmero de equivalentes
grama como la masa molecular de soluto dividido por el nmero de electrones transferidos. El
nmero de electrones transferidos de una sustancia vara de acuerdo con el comportamiento
analizado (redox, cido base).
Un caso particular de expresar la concentracin de una especie qumica es la concentracin de
iones hidrgeno. De acuerdo con la definicin de Brnsted-Lowry, un cido es una sustancia
que libera iones H+ en solucin acuosa, mientras que una base los acepta. Dado que las
magnitudes de concentracin en cantidad de materia de protones ([H+]) se mueven en un amplio
rango de rdenes de magnitud, es ms conveniente la utilizacin de un parmetro ms
manejable, el pH, que se define como:

pH = - log [H+]

8.3 Disolucin de gases en agua

Los cuerpos de agua tienen distintas proporciones y composicin de gases disueltos,

predominando los gases atmosfricos. Existen dos gases que son cruciales para el desarrollo de
la vida en los sistemas acuticos y son el oxgeno (O2) y el dixido de carbono (CO2).
El oxgeno disuelto proviene de dos fuentes posibles: la produccin fotosinttica de las algas y
el reoxigenamiento del sistema por contacto con el aire. La primera de estas fuentes no es

37
Anteriormente referida como Molaridad y calculada como mol de soluto/mol de solucin.

189
realmente significativa, debido a que su aporte es pequeo. Por otra parte, cuando las algas
mueren, su degradacin consume oxgeno, por lo cual es mayor la cantidad que consumen que
la que aportan. La solubilidad de oxgeno en agua es la concentracin mxima que puede
alcanzarse en condiciones de equilibrio, y se puede calcular a travs del coeficiente de
distribucin de Henry (KH). La ley de Henry establece que, a temperatura constante, la
solubilidad de un gas en un lquido es proporcional a la presin parcial del gas en contacto con
el lquido.
La solubilidad de los gases disminuye con el aumento de la temperatura.

[O2] agua = KHpO2

Si representamos la materia orgnica como [CH2O], su degradacin por medio de oxgeno

puede formularse como:

[CH2O] + O2 ' CO2 + H2O

Se produce una disminucin de los niveles de oxgeno en cursos de agua, que puede provocar
incluso la mortandad de peces.
A diferencia del oxgeno o el nitrgeno atmosfrico, hacer clculos acerca de la solubilidad del
dixido de carbono en agua es bastante complicado debido a que, por sus caractersticas
acdicas, interacciona con el agua de manera compleja. La proporcin de CO2 en la atmsfera es
de slo 0,035 %, por lo tanto si consideramos agua pura en equilibrio con el aire, la cantidad de
CO2 disuelto ser realmente baja. Sin embargo, en sistemas naturales se deben considerar otros
factores en la evaluacin del CO2 disuelto en agua, por ejemplo, las algas producen CO2 durante
una fase de sus procesos metablicos en ausencia de luz, y tambin se produce CO2 a raz del
proceso de decaimiento de la materia orgnica, mientras que las algas lo consumen en la fase
fotosinttica para sintetizar biomasa. La presencia de carbonatos minerales tambin modificar
la concentracin de CO2 disuelto:

CO2 (agua) ' CO2 (atmsfera) MCO3 ' M2+ + CO3 2-

Por otra parte, la presencia de CO2 en el agua que se infiltra a travs del suelo permite la
disolucin del carbonato de calcio al atravesar piedra caliza segn la siguiente reaccin:

CaCO3 (s) + CO2 (aq) + H2O ' Ca2+ + 2 HCO3-

Siendo ste el proceso por el cual se forman las cavernas calcreas.

190
8.4 Equilibrio entre dos fases

Las constantes de equilibrio (termodinmicas) no slo se utilizan para tratar equilibrios de

sustancias en solucin o para la descripcin de reacciones en un medio fluido, sino que tambin
se utilizan para la estimacin de cmo se distribuyen diferentes sustancias entre dos fases, las
que pueden ser: (i) una fase slida y una solucin (equilibrio de solubilidad); (ii) dos fases
lquidas (equilibrio de distribucin entre dos lquidos, por ejemplo agua y un lquido orgnico),
(iii) una fase lquida y otra gaseosa (equilibrio de distribucin entre un gas y un lquido, por
ejemplo, sistemas del tipo agua/atmsfera). Tambin existe distribucin entre los gases y las
fases slidas, determinados por procesos de adsorcin superficial (Stumm y Morgan 1995).
En el caso (i) cuando se tiene un slido que se disuelve en una solucin acuosa, esta disolucin
proseguir hasta un cierto punto (saturacin) en el cual no se disuelve ms slido. Supongamos
el siguiente caso:

CaCO3 (s) ' Ca2+ + CO3 2-

La expresin de la constante de equilibrio se expresa como:

[Ca2+] [CO32-] = Kps

Donde Kps es el producto de solubilidad.

Situaciones como las descriptas en el tem (ii) se aplican por ejemplo, en el caso de derrames de
sustancias orgnicas en cursos de agua. El equilibrio que se establece en estas situaciones es el
siguiente:

[X] (aq) ' [X] (org)

y se describe mediante la siguiente ley de distribucin, donde la constante recibe el nombre de

coeficiente de distribucin o coeficiente de particin:

[X] (org)/ [X] (aq) = Kd

La distribucin de sustancias orgnicas no polares entre agua y slidos naturales u organismos

puede visualizarse como un proceso de particin entre la fase acuosa y la materia orgnica
presente en suelos o biota.

191
Ya en 1900 investigadores que estudiaban el comportamiento de drogas no polares descubrieron
que podan usar solventes como el n-octanol como un modelo para simular organismos o
partes de organismos en lo referente a acumulacin de frmacos. Si bien la particin entre una
solucin acuosa y estos solventes no es idntica a lo que pasa con los organismos es
directamente proporcional. Es decir, una acumulacin mayor en un organismo corresponde a
una particin ms favorable en el solvente orgnico. Ms recientemente, los qumicos
ambientales han encontrado relacin entre el humus del suelo y otras fases orgnicas naturales.
Se utiliza la constante de particin octanol-agua (KoW):

KoW = Co / Cw
Donde:
Co = concentracin de un soluto determinado en octanol;
Cw = concentracin de un soluto determinado en agua.

La biota acutica no slo degrada contaminantes qumicos, tambin los acumula. Uno de los
modelos usados para medir bioconcentracin38 es el de particin, que supone un estado de
equilibrio entre el sistema acuoso y el organismo vivo. Esta suposicin es vlida para
compuestos hidrofbicos que se intercambian ms rpido entre el organismo y el agua, que a la
velocidad a la que son excretados o metabolizados por el organismo. Un organismo como un
pez es modelado como si fuera una bolsa de agua y aceite y podemos determinar el valor del
factor de bioconcentracin a travs de KoW. Esta constante, KoW est relacionada con la toxicidad
que un contaminante puede tener en el organismo (LD50).
Los casos que se encuadran dentro de los mencionados en el tem (iii) son de gran importancia
porque es uno de los procesos claves que afectan el transporte de muchos compuestos qumicos
y la transferencia de los mismos entre la atmsfera y los cuerpos de agua. La constante de
distribucin entre estos dos medios se conoce como constante de Henry, ya que la solubilidad de
los gases en agua obedece a dicha ley, siempre que no se produzcan reacciones qumicas. Existe
una influencia de la temperatura para la K de Henry (KH) en un sistema determinado, sin
embargo no es el nico factor que la afecta, sino que tambin depende de la salinidad del
sistema considerado. De hecho, el aumento de la concentracin salina puede reducir la
concentracin de una determinada sustancia, haciendo que la KH disminuya hasta en un factor
de 2 entre el agua destilada y el agua de mar.

38
De acuerdo con Montone (2015), "la bioconcentracin ocurre cuando las sustancias son absorbidas por los
organismos en concentraciones superiores al ambiente. Biomagnificacin se produce cuando hay una acumulacin
progresiva de sustancias de un nivel trfico a otro a lo largo de la cadena alimenticia. Bioacumulacin es el aumento
de la concentracin de una sustancia en los tejidos u rganos de los organismos".

192
8.5 Composicin de las aguas naturales: iones mayoritarios, minoritarios y trazas

La salinidad total de las aguas superficiales continentales est determinada normalmente por la
presencia de los cationes sodio, calcio, magnesio y potasio y de los aniones cloruros, sulfato y
bicarbonato-carbonato. La media mundial de salinidad de las aguas continentales es de
alrededor de 120 mg/L pero vara de un continente a otro (Livingstone 1963) y se debe
principalmente a los procesos de meteorizacin de rocas de la cuenca de drenaje, a la
precipitacin atmosfrica y al equilibrio precipitacin-evaporacin. A su vez, la meteorizacin
se produce mayormente como consecuencia de procesos de disolucin, hidrlisis, de xido
reduccin y de formacin de complejos con sustancias inorgnicas u orgnicas (Kilham 1990).
Las relaciones de equivalentes entre los principales iones en el orden mundial (Tabla 8.1) ,
tienden a ser, Ca2+ > Mg2+ > Na+ > K+ y HCO3- > SO42- > Cl-, aunque en regiones costeras estas
relaciones pueden variar significativamente. Las concentraciones de K+ y Cl- son relativamente
conservativas, es decir sufren pequeas variaciones inducidas por cambios ambientales o por su
utilizacin por seres vivos (Manaham 1991a,b). En cambio, las concentraciones de HCO3-, el
SO42- y el Ca2+ dependen de procesos de precipitacin-disolucin, del metabolismo microbiano
y de cambios climticos. Algunos elementos traza como el silicio, el nitrgeno, el fsforo, el
hierro, tienen una gran importancia desde el punto de vista biolgico, aunque no influyen en
forma significativa en la salinidad de un cuerpo de agua (Wetzel 1983). La rapidez de los
procesos biolgicos, en contraste con los procesos inorgnicos, hace que el tiempo de residencia
de estos nutrientes en los cuerpos de agua sea mucho menor que el de los iones responsables de
la salinidad.
En general, un elemento es considerado minoritario en medios naturales cuando su
concentracin est comprendida entre el 1 y el 0,01 %, de la misma manera, se denomina traza
al elemento cuya concentracin es menor del 0,01 % (Stumm 1995). El trmino elemento traza
se usa algo descuidadamente en la literatura cientfica y tiene a menudo distintos significados
dependiendo de la disciplina en que se lo utilice. A menudo designa a un grupo de elementos
presentes en la naturaleza en concentraciones mnimas. Otras veces se define como aquellos
elementos usados por los organismos en pequeas cantidades pero que son esenciales para su
nutricin. Sin embargo, muchas veces se incluyen dentro de los denominados elementos traza, a
algunos de los cuales se desconocen sus funciones fisiolgicas. Los elementos traza que se han
estudiado en mayor medida en suelos, son aquellos necesarios para la nutricin de las plantas:
B, Cu, Fe, Mn, Mo y Zn. De manera similar elementos ms estudiados en animales son As, Cu,
Co, Fe, Mn, Mo, Zn, Cr, F, Ni, Se, Sn y V.

193
Tabla 8.1 Elementos mayoritarios en diferentes cuerpos de agua (STD = slidos totales
disueltos).
Ca Mg Na K Cl SO4 HCO3 STD
Ros
ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm
Norte Amrica
Mississippi 34,0 8,9 11,0 2,8 10,3 25,5 116,0 208,5
Mackensie 33,0 10,4 7,0 1,1 8,9 36,1 111,0 207,5
Columbia 19,0 5,1 6,2 1,6 3,5 17,1 76,0 128,5
Colorado 83,0 24,0 95,0 5,0 82,0 270,0 135,0 694,0
Grande 109,0 24,0 117,0 6,7 171,0 238,0 183,0 848,7
Europa
Danubio 49,0 9,0 9,0 1,0 19,5 24,0 190,0 301,5
Rhin(superior) 41,0 7,2 1,4 1,2 1,1 36,0 114,0 201,9
Sud Amrica
Amazonas(inferior) 5,2 1,0 1,5 0,8 1,1 1,7 20,0 31,3
Orinoco 3,3 1,0 1,5 0,65 2,9 3,4 11,0 23,75
Paran 5,4 2,4 5,5 1,8 5,9 3,2 31,0 55,2
frica
Congo 2,4 1,3 1,7 1,1 2,9 3,0 11,0 23,4
Niger 4,1 2,6 3,5 2,4 1,3 1,0 36,0 50,9
Nilo 25,0 7,0 17,0 4,0 7,7 9,0 134,0 203,7
Asia
Yangtze 45,0 6,4 4,1 1,2 4,1 17,9 148,0 226,7
Mekong 14,2 3,2 3,6 2,0 5,3 3,8 58,0 90,1
Ganges 24,5 5,0 4,9 3,1 3,4 8,5 105,0 154,4
Promedio mundial 14,7 3,7 7,2 1,4 8,3 11,5 53,0 99,8

8.6 Procesos geoqumicos: el patrn bsico de Gibbs

Gibbs (1970) estudiando la salinidad de las aguas superficiales mundiales concluy que los
principales procesos que determinan la composicin qumica de las mismas son: (i) la
meteorizacin de las rocas de la cuenca de drenaje, (ii) la precipitacin atmosfrica y (iii) el
equilibrio precipitacin-evaporacin. Gibbs obtuvo una figura tipo boomerang (Figura 8.1) al
representar la variacin de la relacin en masa de Na+/(Na++ Ca 2+) en el eje x de coordinadas en
funcin del contenido de slidos totales disueltos (STD) en ppm en el eje y.

194
 Gibbs

105
STD

4
10
EV-PR

103

CR
102

Pr A
10

0.1 0.3 0.5 0.7 0.9

Na+ / (Na++ Ca 2+)

Figura 8.1 - Grafico de Gibbs (CR = composicin de las rocas, Ev-Pr = evaporacin-
precipitacin, PR A = precipitacin atmosfrica).

Cualquier cuerpo de agua superficial cuya qumica est influenciada por las precipitaciones, se
ubicar en la zona inferior derecha del grfico de Gibbs presentando valores bajos de STD y alta
relacin Na+ / (Na+ + Ca 2+
). En general, se puede decir que corresponden a zonas de
precipitaciones elevadas y de bajo relieve, donde el aporte debido a la meteorizacin de rocas no
es importante.
Cuando el proceso que predomina en la determinacin de la composicin qumica de las aguas
es el proceso de meteorizacin, la composicin qumica de las aguas va a depender del clima, de
la geomorfologa, de la biota y de la composicin del material parental. En general, en ellas
predominan los iones calcio y bicarbonato, presentan valores medios de STD y ocupan
aproximadamente la primera mitad del eje Na+ / (Na++ Ca 2+) en la zona central del grfico de
Gibbs (Conzonno 2010).
Si bien hemos tratado los dos procesos anteriores en forma separada, debe aclararse, que no se
excluyen mutuamente, y muchos cuerpos de agua superficial tienen composicin qumica
comprendida entre las dos composiciones extremas. Por lo tanto, es ms realista pensar en la
composicin qumica de las aguas determinadas por los procesos de meteorizacin y
precipitacin atmosfrica como los extremos de una serie continua de composiciones.
El tercer mecanismo importante en el control de la qumica de las aguas superficiales es el de
evaporacincristalizacin. Este proceso es el ms significativo en zonas ridas y trridas donde
la evaporacin supera a la precipitacin atmosfrica y la composicin del agua tiende a la

195
composicin del agua marina. La composicin qumica de los cuerpos de agua determinada por
este proceso se ubica en la zona superior derecha del grfico de Gibbs formando una serie
continua entre la composicin qumica de los cuerpos de agua dominados por el proceso de
meteorizacin y la composicin qumica del agua de mar.
A pesar que el agua marina es el miembro extremo de esta serie, debe notarse que la simple
evaporacin y la precipitacin del carbonato de calcio no son suficientes para convertir agua
dulce de ro o lagunas en agua marina, pues deben intervenir otros procesos para cambiar las
proporciones de los distintos iones presentes. Sin embargo, en vista de que el agua de lluvia
proviene del agua de mar, no es sorprendente encontrar que tienen la misma relacin Na+ /
(Na++ Ca 2+) a pesar de que sus valores de STD son muy diferentes.

8.7 Proceso cido-base en aguas naturales

Los procesos qumicos normales en fase acuosa, caractersticos de este medio debido
fundamentalmente a las condiciones excepcionales de este fluido, permiten entender las
circunstancias que conducen a la contaminacin de los cuerpos de agua. Los fenmenos
qumicos incluyen procesos cido-base, solubilizacin-precipitacin, xido-reduccin,
complejacin y particin. Estos procesos se analizan normalmente desde el punto de vista
termodinmico, sin embargo, en la aplicacin ambiental de estos principios bsicos no debe
descuidarse en ningn momento el factor cintico, dado que las velocidades de reaccin son
fundamentales en la qumica acutica. Por otra parte, la existencia de vida en los sistemas
estudiados hace que los procesos biolgicos jueguen un rol clave.
Las aguas naturales contienen iones disueltos. La media mundial de salinidad de las aguas
continentales es de alrededor de 120 mg/L y su pH es raramente igual a 7, el valor esperado para
el agua pura. El sistema dixido de carbono-carbonato determina los procesos cido-base que
ocurren en los sistemas acuosos.

8.7.1 Equilibrios cido-base: el sistema dixido de carbono-carbonato

La qumica de los procesos cido-base de muchos ecosistemas acuticos est dominada por la
interaccin del ion carbonato CO32-, que es una base moderadamente fuerte, con el cido dbil
H2CO3, el cido carbnico. Este cido se forma por la disolucin del dixido de carbono
atmosfrico gas en el agua; habitualmente, existe un equilibrio entre el gas y el cido acuoso:

CO2 (g) + H2O (aq) ' H2CO3 (aq)

Reaccin (1)

196
De hecho, buena parte del dixido de carbono disuelto existe como CO2 (aq) en lugar de H2CO3
(aq), pero siguiendo la prctica convencional se renen las dos formas en una sola que se
representa igual que la ltima.
El cido carbnico en el medio acuoso est, tambin, en equilibrio con el in bicarbonato (o
hidrgeno carbonato), HCO3-, y con el ion hidrgeno:

H2CO3 ' H+ + HCO3-

Reaccin (2)

Las rocas calizas estn constituidas mayoritariamente por carbonato de calcio, CaCO3, que se
disuelve en baja proporcin en contacto con agua:

CaCO3 ' Ca2+ + CO32-

Reaccin (3)

El ion carbonato acta como una base, produciendo iones bicarbonato e hidrxido en el agua:

CO32- + H2O ' HCO3- + OH-

Reaccin (4)

Estas reacciones ocurren en el sistema natural de tres fases aire, agua y rocas.

8.7.2 Equilibrio entre el carbonato de calcio y el agua

Para tener un conocimiento cualitativo de este complicado sistema, consideramos primero el

efecto del ion carbonato slo, tomando como modelo un reservorio de agua que est en
equilibrio con un exceso de carbonato de calcio slido, y en el que todas las otras reacciones son
de importancia despreciable. El nico proceso de inters es la reaccin 3. La constante de
equilibrio para este proceso, que involucra la disolucin de una sal muy poco soluble en agua, es
el producto de solubilidad (Kps) que se relaciona con la concentracin de los iones, mediante la
siguiente ecuacin:

Kps = [Ca2+][CO32-]

Para el CaCO3, a 25C, el valor numrico de Kps es 4,6 x 10-9, donde [...] se refiere a la cantidad
de materia. Segn la estequiometra de la reaccin 3, se producen tantos iones calcio como
carbonato y, en este sistema simplificado la concentracin de ambos iones es igual a S, la
solubilidad de la sal:

197
 S = solubilidad del CaCO3 = [Ca2+][CO32-]

Despus de sustituir S por las concentraciones inicas en la ecuacin de Kps, se obtiene:

S2 = 4,6 x 10-9

con lo que el valor de la solubilidad es:

S = 6,8 x 10-5 mol.L-1

Este es el valor de la solubilidad, suponiendo que las otras reacciones son despreciables.
De acuerdo con la reaccin 4, el ion carbonato disuelto acta como base en el agua; la constante
de equilibrio relevante para este proceso es Kb:

Kb (CO32-) = [HCO3-] [OH-] / [CO32-]

Debido a que el equilibrio en esta reaccin se encuentra desplazado hacia la derecha en

disoluciones que no son muy alcalinas, se puede obtener una aproximacin del efecto global
resultante de que ocurran, simultneamente, las reacciones 3 y 4, sumando ambas reacciones. El
proceso global es:

CaCO3 (s) + H2O (aq) ' Ca2+ + HCO3- + OH-

Reaccin (5)

As pues, la disolucin del carbonato de calcio en agua neutra da lugar a la produccin de iones
calcio, bicarbonato e hidrxido.
Como es sabido, la suma de varias reacciones da lugar a otra combinada con una constante de
equilibrio K que es el producto de las constantes de equilibrio de los procesos individuales. As
pues, la reaccin 5 es la suma de las reacciones 3 y 4, su constante de equilibrio debe ser igual al
producto de las constantes de equilibrio de las reacciones 3 y 4, KpsKb. Puesto que Ka = 4,7 x 10-
11
para el HCO3- y puesto que para cualquier par cido base conjugado tal como HCO3- y CO32-,

KaKb = Kw = 1,0 x 10-14

se sigue que para la base conjugada CO32- se tiene,

198
 Kb (CO32-) = Kw / Ka (HCO3-)

con lo que
Kb = 1,0 x 10-14 / (4,7 x 10-11) = 2,1 x 10-4

As pues, ya que K5 para la reaccin global 5 es KpsKb, su valor es

4,6 x 10-9 x 2,1 x 10-4 = 9,7 x 10-13

La constante de equilibrio para la reaccin 5 se relaciona con las concentraciones por medio de
la ecuacin:

K5 = [Ca2+] [HCO3-] [OH-]

Si se hace la aproximacin de que la reaccin 5 es el nico proceso de relevancia en el sistema,

entonces a partir de su estequiometra, se obtiene una nueva expresin para la solubilidad del
CaCO3:

S = [Ca2+] = [HCO3-] = [OH-]

sustituyendo S por las concentraciones, se obtiene

S3 = 9,7 x 10-13
S = 9,9 x 10-5

As pues, la solubilidad calculada del CaCO3 es 9,9 x 10-5 mol.L-1, en contraste al menor valor
de 6,8 x 10-5 mol.L-1 obtenido cuando se ignor la reaccin del ion carbonato. La solubilidad del
CaCO3 ahora es mayor que la estimada teniendo en cuenta nicamente la reaccin 3, ya que
buena parte del ion carbonato que se produce desaparece por reaccin con las molculas de
agua. En otras palabras, la reaccin de equilibrio 3 de desplaza hacia la derecha, ya que una gran
fraccin de su producto reacciona despus (reaccin 4).
En los clculos anteriores, se ha utilizado la aproximacin de una simple reaccin (5), para
representar el sistema de dos reacciones. Alternativamente, se podra llegar al mismo resultado
aplicando un procedimiento iterativo a la solucin de las ecuaciones algebraicas implicadas en
las reacciones originales 3 y 4, en lugar de combinarlas (Tabla 8.2). La disolucin saturada de
carbonato de calcio es moderadamente alcalina (pH = 9,9).

199
Tabla 8.2 - Concentraciones inicas calculadas para los sistemas acuosos en equilibrio.
CaCO3 CaCO3
In CO2 y CaCO3
Ecuacin simple Clculo iterativo
[HCO3-] 9,9 x 10-5 mol.L-1 8,8 x 10-5 mol.L-1 1,0 x 10-3 mol.L-1
[CO32-] - 3,7 x 10-5 mol.L-1 9,0 x 10-6 mol.L-1
[Ca2+] 9,9 x 10-5 mol.L-1 1,25 x 10-4 mol.L-1 5,1 x 10-4 mol.L-1
[OH-] 9,9 x 10-5 mol.L-1 8,8 x 10-5 mol.L-1 1,9 x 10-6 mol.L-1
[H+] 1,0 x 10-10 mol.L-1 1,1 x 10-10 mol.L-1 5,3 x 10-9 mol.L-1
pH 10,0 9,9 8,3

8.7.3 Equilibrio entre el carbonato de calcio y el gas carbnico atmosfrico con el agua

La aproximacin realizada no considera las otras especies de carbono importantes en agua: el

dixido de carbono y el cido carbnico, as como las reacciones que las involucran. El agua
pura en equilibrio con el dixido de carbono atmosfrico es ligeramente cida debido a estos
dos procesos. Estas reacciones se van a considerar ahora en el contexto de un reservorio de agua
que est, tambin, en equilibrio con carbonato de calcio slido, es decir, un sistema de tres
fases.
La reaccin 2 suministra otra fuente de ion bicarbonato, entonces por el principio de Le
Chatelier, la produccin de bicarbonato a partir de la reaccin entre el ion carbonato y el agua
debera estar reprimida. Sin embargo, una consideracin an ms importante es que la reaccin
2 produce ion hidrgeno, el cual se combina con el ion hidrxido que se produce en la reaccin
4 gracias a la interaccin del ion carbonato con el agua:

H+ + OH- ' H2O

Reaccin (6)

En consecuencia, las posiciones de equilibrio de ambas reacciones que producen ion

bicarbonato se desplazan hacia la derecha, debido a la desaparicin de uno de sus productos por
la reaccin anterior.
Si las reacciones que van de 1 a 4, ms la 6, se suman se obtiene la siguiente reaccin:

CaCO3 (s) + CO2 (g) + H2O ' Ca2+ + 2 HCO3-

Reaccin (7)

En otras palabras, combinando cantidades equimolares de carbonato de calcio y dixido de

carbono atmosfrico, se obtiene una disolucin de bicarbonato de calcio, sin produccin o

200
consumo aparente de acidez o alcalinidad. Las aguas naturales, en las que ocurre este proceso
global, pueden considerarse como el lugar donde se realiza una valoracin gigante de un cido
que se origina en el CO2 del aire con una base que se forma a partir del ion carbonato de las
rocas. Si bien es una aproximacin, ste es el proceso dominante y permite estimar la disolucin
del CaCO3 y el CO2 cuando ambos estn presentes.
A partir de estos equilibrios, puede calcularse el valor de la concentracin del in hidrgeno,
resultando en un valor de pH 8,3, ligeramente alcalino para aguas de ros y lagos a 25C, cuyo
pH est determinado por la saturacin con CO2 y CaCO3. Generalmente los valores de pH de
aguas calcreas se encuentran en el rango de 7 a 9, en razonable acuerdo con el valor calculado.
Debido a la cantidad ms pequea de bicarbonato en las aguas no calcreas, sus valores de pH
son usualmente prximos a 7.

8.7.4 Alcalinidad, basicidad, acidez y dureza

La alcalinidad de una solucin acuosa se define como su capacidad para aceptar protones. Las
aguas alcalinas tienen alto pH y elevados niveles de slidos disueltos, lo que las hace
especialmente inapropiadas para su utilizacin en calentadores, procesado de alimentos, etc.
Las principales especies qumicas que contribuyen a la alcalinidad del agua son el bicarbonato,
el carbonato y el hidrxido:

HCO3- + H+ ' CO2 + H2O

CO32- + H+ ' HCO3-
OH- + H+ ' H2O

Existen tambin otras especies que contribuyen a la alcalinidad pero en menor medida, tales
como las bases conjugadas de cidos como el fosfrico, silcico, brico y cidos orgnicos.
Se definen dos tipos de alcalinidades, de acuerdo a como se tome el punto final de la titulacin
de la misma:
(i) La determinacin de la alcalinidad a la fenolftalena utiliza este indicador para determinar el
punto final, y por lo tanto se alcanza un pH en el cual se neutralizaron los iones hidrxido y el
carbonato se convirti en bicarbonato.
(ii) La determinacin de alcalinidad total utiliza como indicador al naranja de metilo, y por lo
tanto se alcanza un pH en el cual, tanto carbonato como bicarbonato se han convertido en CO2.

La diferencia principal entre basicidad y alcalinidad tiene que ver con la constante de
disociacin de las bases involucradas: mientras que una alta basicidad est asociada a un

201
elevado valor de pH, una alta alcalinidad se asocia con una alta capacidad de aceptar H+. Por
ejemplo, una solucin de NaOH de concentracin 10-3 mol.L-1 tiene un pH final de 11, mientras
que una solucin 100 veces ms concentrada de HCO3- (10-1 mol.L-1) tiene un pH de slo 8,34,
por lo tanto, la solucin de NaOH ser ms bsica que la de HCO3-. Sin embargo, cuando se las
utilice para neutralizar un cido, la solucin de NaOH solamente podr neutralizar 10-3
equivalentes de cido, mientras que la de HCO3- neutralizar una cantidad 100 veces mayor. Por
lo tanto, la solucin de HCO3- es ms alcalina que la de NaOH. La alcalinidad acta como un
regulador del pH de la solucin (sistema buffer), adems de funcionar como reservorio de
carbono inorgnico, lo que resulta una medida de la fertilidad del agua, de acuerdo con su
capacidad de sustentar vida.
La dureza de una muestra de agua est asociada a la concentracin de iones calcio y magnesio
principalmente, aunque tambin cuenta en algunos casos la presencia de hierro (II).
Qumicamente, la dureza se define como:
dureza = [Ca2+] + [Mg2+]

Tradicionalmente, la dureza se expresa, no en concentracin de la cantidad de iones, sino como

la masa en miligramos (por litro) de carbonato de calcio que contiene el mismo nmero de iones
bivalentes (+2). As por ejemplo, una muestra de agua que contenga un total de 0,0010 moles de
Ca2+ + Mg2+ por litro, tendra un valor de la dureza de 100 mg de CaCO3, ya que la masa molar
del CaCO3 es 100 gramos y, por tanto, 0,0010 moles tienen la masa 0,1 g o 100 mg.
La manifestacin ms evidente de la dureza del agua es el corte de jabn, lo que se produce
por precipitacin de sales insolubles de los cidos grasos. Una de las formas de eliminar la
dureza de las aguas es utilizar resinas intercambiadoras de iones o bien por ebullicin del agua,
formndose un depsito de carbonatos que se debe al desplazamiento hacia la derecha del
siguiente equilibrio:

Ca2+ + 2HCO3- ' CaCO3 (s) + CO2 (g) + H2O

Al aumentar la temperatura, la solubilidad del CO2 en agua disminuye y se lo pierde como gas,
precipitando el calcio como carbonato.
La acidez de los sistemas acuosos naturales se define como la capacidad del agua de neutralizar
OH-. Las aguas acdicas no son frecuentes, siendo los contribuyentes ms comunes los cidos
grasos, protenas, H2PO4-, CO2, H2S y metales acdicos. La determinacin de la acidez de una
muestra de agua suele ser complicada, debido sobre todo a que los principales contribuyentes
(CO2 y H2S) son voltiles. Tambin puede encontrarse la presencia de cidos minerales libres,
tales como H2SO4 y HCl, los cuales son comunes en aguas contaminadas por actividad minera.
Al igual que la alcalinidad, la acidez se puede determinar utilizando dos indicadores diferentes:

202
la acidez total se determina por titulacin con base hasta el viraje de la fenolftalena (punto final
en pH 8,2), mientras que los cidos minerales libres se titulan hasta el viraje del naranja de
metilo (punto final en pH 4,3).
Otros contribuyentes a la acidez del agua son algunos iones con tendencia a hidratarse como el
aluminio y el hierro. El comportamiento acdico de los iones aumenta con la carga y disminuye
con el radio atmico. Se da particularmente con aquellos con carga +3:

Al (H2O)63+ Al (H2O)5OH2+ + H+

Algunas soluciones de uso industrial, como por ejemplo la que se utiliza para eliminar la
corrosin del acero, contienen cationes metlicos acdicos.
La tendencia de los iones hidratados a comportarse como cidos tiene un gran efecto en el
medio acutico, por ejemplo en el drenaje cido de las minas:

Fe (H2O)63+ ' Fe (HO)3 (s) + 3H+ + 3 H2O

8.8 Muestreo, anlisis, interpretacin y confiabilidad de los datos qumicos

Los contaminantes qumicos son de variada naturaleza y estructura (Colin 2001,

Schwarzembach et al. 1993). Los mtodos para su determinacin estn debidamente
estandarizados y las metodologas existentes permiten su determinacin a nivel de trazas. En el
caso de trazas inorgnicas, los mtodos de determinacin por absorcin atmica o
espectrometra de emisin por induccin de plasma acoplado (ICP-OES) permiten la deteccin
de partes por billn.

8.8.1 Colecta de muestras

La toma de muestras o muestreo debe ser representativa del conjunto total que se quiere medir,
es decir, debe ser estadsticamente representativa, para que los resultados que se obtengan de su
anlisis permitan conclusiones objetivas y defendibles. Para desarrollar un plan de muestreo
debe decidirse cundo y dnde deben ser tomadas las muestras. El diseo del muestreo
depender de los objetivos.
En muestreos bidimensionales, se debe determinar la posicin (coordenadas espaciales) y lo
podemos hacer de varias maneras: (i) muestreo al azar: la zona a muestrear se divide en reas
mnimas representativas (p.ej. parcelas de 1m y se eligen n posiciones al azar); (ii) muestreo en
transecta: se elige la posicin de partida y la longitud de la transecta y luego las muestras se
toman sobre ella; (iii) muestreo en dos etapas: se divide la zona de muestreo en subunidades

203
regulares, por pendiente, tipo de suelo u otra caracterstica fsica, y luego se toman muestras en
cada subunidad; (iv) muestreo en grilla: se toman muestras a intervalos regulares de espaciado
fijo.
En el caso de muestreos tridimensionales, debe adems tenerse en cuenta la dimensin vertical,
como es el caso para muestras en profundidad o en la atmsfera. La distribucin temporal
tambin ofrece variantes. Muchos fenmenos tienen caractersticas cclicas, las muestras
afectadas por actividad biolgica pueden exhibir grandes cambios en el tiempo.
El sistema de toma de muestra variar segn el origen del agua. Por ejemplo, para el anlisis
fsico-qumico, en el caso de una cisterna o de un depsito, la botella ser sumergida a una
cierta distancia del fondo (50 cm) y de la superficie, bastante lejos de las orillas o de los bordes,
as como de los obstculos naturales o artificiales, evitando remover el fondo. En el caso de un
lago, de un ro o de un cuerpo de agua natural, hay que escoger varios puntos de toma, y en cada
uno de ellos, tomar varias muestras a diferentes profundidades. En el caso de una bomba, las
tomas se harn normalmente, al trmino de una prueba de bombeo ininterrumpida. En el caso
que el agua sea proveniente de un grifo ser indispensable dejar correr el agua durante por lo
menos 10 minutos y lavar el grifo con alcohol antes de tomar la muestra. En cuanto al
recipiente, se utilizan botelllas de plstico, lavadas y enjuagadas tres veces con el agua de
muestreo. El tapn se ha de poner de tal forma que no quede ninguna burbuja de aire. En todos
los casos, la muestra debe ser representativa y homognea. Las muestras debern conservarse en
la heladera (4C) hasta su envo al laboratorio.
Para anlisis especiales, como por ejemplo de metales pesados o contaminantes orgnicos,
deben consultarse los protocolos especficos.

8.8.2 Calidad de las mediciones qumicas

Se denomina exactitud de un anlisis qumico a la diferencia entre el valor de la magnitud

obtenido en la determinacin qumica y el valor verdadero, mientras que la precisin de una
serie de mediciones de una misma magnitud describe la diferencia entre los valores individuales
de cada medicin39. En general, se distinguen 2 tipos de errores con respecto a los anlisis
qumicos: los errores en la precisin o errores estadsticos, que se reflejan en fluctuaciones en
los procedimientos analticos y errores en la exactitud, o errores sistemticos que se deben a
procedimientos errneos o a la presencia de interferencias durante los anlisis. La precisin
puede ser calculada repitiendo los anlisis de una misma muestra, la exactitud slo puede ser
comprobada analizando muestras de patrones de referencia o por comparacin de los resultados
de distintos laboratorios. Cuando las concentraciones son muy bajas, los anlisis por duplicado
igual pueden presentar variaciones cuando la sensibilidad del mtodo es insuficiente.
39
No mesclar con el concepto estadstico de exactitud y precisin.

204
Se acepta internacionalmente que la calidad de las mediciones qumicas y la comparabilidad de
los resultados estn basados en los siguientes aspectos:
- uso de mtodos analticos validados;
- equipos debidamente mantenidos y calibrados;
- uso de materiales de referencia para las calibraciones;
- control de calidad interno efectivo;
- participacin en esquemas de ensayos interlaboratorio;
- auditoras independientes de los procedimientos;
- personal debidamente entrenado.

8.8.3 Balance inico

La exactitud del anlisis de iones mayoritarios puede estimarse de la condicin de

electroneutralidad (E.N.) ya que la suma de las cargas positivas y negativas en el agua debe
estar balanceadas:

. 100
. .%

Donde los cationes y aniones estn expresados en meq.L-1.

Las sumas se realizan considerando a los cationes Na+, K+, Ca2+, Mg2+, y los aniones Cl-, SO42-,
HCO3-, CO32- y NO3-. Valores de E.N. % de hasta 2 % son inevitables en la mayora de los
laboratorios, y valores de hasta 5 % son aceptables.

8.8.4 ndices de saturacin

Teniendo en cuenta la importancia del equilibrio carbonato / bicarbonato en la composicin

qumica de las aguas, es importante estudiar el grado de saturacin de las mismas respecto a dos
fases minerales, calcita y dolomita. Las reacciones de disolucin - precipitacin de minerales
son reacciones heterogneas regidas por una constante de equilibrio Kps. Consideremos la
siguiente reaccin de disolucin:
AzBy (s) z Ay+ + y B z+

cuando el sistema est en equilibrio (la fase slida con los iones constituyentes de la misma), se
define:
Kps = [Ay+] z [Bz+ ]y

205
donde los parntesis indican actividades y la actividad de la fases slida se considera unitaria.
Para soluciones diluidas, el coeficiente de actividad tiende a 1 y la actividad de las especies
inicas puede considerarse igual a la concentracin.
Si el sistema no est en equilibrio, se denomina producto de actividades inico (PI) al producto
de las actividades de los iones:
PI = [Ay+] z [Bz+ ]y

Slo cuando el sistema est en equilibrio, Kps = PI y por consiguiente:

PI / Kps = 1
log (PI / Kps) = 0

Por el contrario, fuera del equilibrio:

PI / Kps >1 log (PI / Kps) > 0

PI / Keq <1 log (PI / Kps) < 0

Estas relaciones son utilizadas para indicar cunto se aparta del equilibrio un determinado
sistema. Sin embargo, el uso ms habitual es para describir el grado de sobresaturacin o
subsaturacin de una solucin con respecto a una determinada fase slida. El trmino ndice de
saturacin (IS) se usa normalmente en relacin con reacciones de precipitacin-disolucin de un
slido:
IS = og (PI / Kps)

IS > 0 indica que la fase slida tiende a precipitar;

IS < 0 indica que la fase slida tender a disolverse.

Como un ejemplo de caso en la Tabla 8.3 se observan los valores de IS para calcita y dolomita
calculados por el programa de computacin WATEQF, as como los valores de - log pCO2 para
la atmsfera en contacto con las aguas de las lagunas Encadenadas de Chascoms (Conzonno y
Fernndez Cirelli 1997, Fernndez Cirelli et al. 2000, Miretzky et al., 2000, 2001).

206
Tabla 8.3 - Valores de IS para calcita y dolomita para distintos cuerpos de agua (i = invierno, v
= verano).
Laguna pPCO2 IS dolomita Ca/Mg IS calcita
Chascoms (i) 2,74 1,38 0,64 0,61
Chascoms (v) 4,13 3,18 0,50 1,36
del Burro (i) 2,89 1,61 0,48 0,66
del Burro (v) 4,13 3,40 0,47 1,44
Chis-Chis (i) 2,91 1,63 0,81 0,78
Chis-Chis (v) 3,34 2,75 1,13 1,30
Las Encadenadas (i) 1,38 -1,52 0,71 -0,82
Las Encadenadas (v) 2,61 2,36 0,56 0,96
La Salada (i) 2,59 0,72 0,48 0,20
La Salada (v) 5,50 3,13 0,36 1,22
La Segunda (i) 3,32 2,07 0,77 0,98
La Segunda (v) 3,33 2,54 0,68 1,10
Yalca (i) 1,92 -1,81 0,72 -0,96
Yalca (v) 3,32 2,21 1,05 1,05
Vitel (i) 2,58 0,73 1,19 0,41
La Viuda (i) 3,97 3,23 0,40 1,38
Adela (i) 2,55 1,29 0,65 0,57

Los valores de pCO2 resultaron menores en verano que en invierno (valor medio 10 -3,77 y 10 -2,69
respectivamente) debido a la disminucin de CO2(aq) por al aumento de temperatura en verano
(la solubilidad de los gases en agua disminuye con el aumento de la temperatura) y al consumo
de CO2(aq) por la actividad fotosinttica del fitoplancton.
Se observa que las aguas de las lagunas estn sobresaturadas con respecto a la calcita y a la
dolomita tanto en verano como en invierno, con la excepcin de las lagunas Yalca (pH 7,28) y
Las Encadenadas (pH 6,85) en invierno.
Las ecuaciones de equilibrio para el sistema carbonato a 25C son:
CO2 (g) ' CO2 (aq) KH = 10-1,5
CO2 (aq) + H2O ' H2CO3 Km = 10-2,8
H2CO3* HCO3- + H+ K1 = 10- 6,3
HCO3- ' CO32- + H+ K2 = 10-10,.3
CaCO3(s) ' CO32- + Ca2+ Kps = 10- 8,34
CaMg(CO3)2(s) ' 2 CO32- + Ca2+ + Mg2+ Kps = 10-17,2

La atmsfera normal contiene 10-3,5 atm de CO2 por lo que de acuerdo a la ley de Henry, [CO2
(aq)] = 10-5 mol.L-1.
El programa de computacin WATEQF resuelve simultneamente todos los equilibrios
mencionados para cada muestra de agua, partiendo de la composicin qumica de la misma y de

207
los datos de pH, temperatura y concentracin de O2 disuelto. En particular: (i) corrige los
valores de las Keq a los de la temperatura de la muestra usando la ecuacin de Vant Hoff o un
polinomio emprico; (ii) calcula la especiacin, o distribucin de especies para cada elemento
resolviendo matrices que consisten en la constante de estabilidad de cada complejo y la
ecuacin de conservacin de masa de cada elemento. Por ejemplo la concentracin total de
2+
calcio ser la debida a la de Ca , CaSO4, CaHCO3+, etc.; (iii) calcula los coeficientes de
actividad usando la ecuacin extendida de Debye-Hckel o la de Davies para la fuerza inica;
(iv) calcula las actividades de todas las especies presentes; (v) calcula el estado de saturacin de
la solucin con respecto a todas las fases slidas de su base de datos que contienen los
elementos que se introdujeron al poner la composicin de la muestra.
Se observa en la Tabla 8.3 que los valores de IS de calcita de verano son mayores que los de
invierno. En verano, disminuye la solubilidad del CO2(g) en el agua debido a la mayor
temperatura, y la actividad fotosinttica consume CO2(aq). Estos dos procesos provocan un
aumento del pH del agua, y tambin de la relacin [CO32-] / [HCO3-], de forma tal que el PI
supera el Kps del carbonato de calcio, siendo posible desde el punto de vista termodinmico la
precipitacin del mismo. En el caso de la calcita, se ha comprobado que los cidos hmicos
adsorbidos sobre la superficie del carbonato de calcio, limitan el crecimiento de los ncleos de
cristal de carbonato impidiendo la consecuente precipitacin (Suess 1970, Otsuki y Wetzel
1973, Reynolds 1978, Conzonno y Fernandez Cirelli 1995), lo que explica los altos valores de
IS obtenidos. En el invierno, aumenta la solubilidad del CO2(g) en el agua y por consiguiente el
pH disminuye, disminuye la relacin [CO32-] / [HCO3-], a pesar de ello, las aguas de las lagunas
estn sobresaturadas, es decir el producto de las concentraciones de calcio y carbonato son
mayores que el Kps.
Tambin se observa que las aguas de las lagunas estn sobresaturadas con respecto a la dolomita
La dolomita precipita de soluciones donde la relacin molar Ca / Mg 0,3 (Hanshaw et al.
1971). Se observa que dicha relacin es > 0,3 para todas las lagunas, y por consiguiente, las
condiciones no son favorables para la precipitacin de la misma.

8.9 Conclusiones

El estudio de los cuerpos de agua y de los procesos qumicos que en los mismos suceden es
fundamental para comprender la dinmica de los mismos y por ende la relacin con los
organismos que habitan en los mismos. La qumica de los cuerpos de agua debe ser considerada
como un pilar bsico, ya que muchos de los cambios que ocurren en estos ambientes se reflejan
en los organismos, aunque este reflejo no necesariamente es simple o directo, por ejemplo en los
otolitos de los peces como se present en los captulos de este libro.

208
9. ESTUDIO DEL SITIO DE PUESTA, DISPERSIN DE LAS LARVAS Y EL
RECLUTAMIENTO DE CONGRIO EUROPEO COSTERO (Conger conger),
UTILIZANDO EL ANLISIS ESTRUCTURAL Y QUMICA DE LOS OTOLITOS: UN
ESTUDIO DE CASO.

Alberto Teodorico Correia

Sumario
9.1 Estado de la tcnica acerca de la especie............................................................................209
9.2 Ciclo de vida del congrio europeo resultante del estudio microestructural y de la
microqumica de otolitos de larvas............................................................................................212

9.1 Estado de la tcnica acerca de la especie

El congrio Europeo, Conger conger (Linnaeus, 1758), es un pez comn en el Ocano Atlntico
Nororiental, desde Noruega a Senegal, incluyendo las Azores, Madeira y las Islas Canarias.
Tambin se encuentra en el oeste del Mar Mediterrneo y el Mar Negro (Bauchot y Saldanha
1986). Son animales marinos bentnicos y se distribuyen en la plataforma continental, desde la
costa hasta profundidades de 500 m, por lo general asociados con fondos rocosos y arenosos
(Smith 1981, Bauchot y Saldanha 1986, Bauchot 1987). A menudo se oculta en agujeros u otras
estructuras submarinas (Lythgoe y Lythgoe 1971, Bagenal y Kenney 1973, Wheeler 1985,
Hayward y Ryland 1995). Es una especie importante para la pesca comercial y recreativa, se
captura principalmente con redes de arrastre de fondo, trampas y palangre (Figueiredo et al.
1996). La captura total mundial registrada para la especie en 2012 fue de 13.203 toneladas. Los
pases con las mayores capturas fueron Espaa (4.740 t), Francia (4.225 t) y Portugal (1.726 t).
Se comercializa principalmente fresco o congelado (Moura 1995).
Los congrios son telesteos primitivo perteneciente al superorden Elopomorpha y clase
Anguilliformes (De Pinna 1996). Los elopomorfos, que tambin incluye el gnero Anguilla,
comparten una importante caracterstica en comn, la presencia de una etapa larval leptocfala
(Hulet y Robins 1989). Las larvas de congrio (familia Congridae) varan mucho en la forma, y
por lo tanto son difciles de identificar. Las larvas se identifican principalmente por la posicin
relativa de las aletas dorsales y anales, el patrn de pigmento cuerpo, la forma de la cabeza y
posicin del ojo, el nmero de mimeros, y la posicin del extremo posterior del rin y de la
arteria renal, entre otros personajes (Smith 1989). La metamorfosis de las larvas leptocfalas es
un proceso profundo y no instantneo, sin embargo los cambios ocurren dentro de un tiempo
relativamente corto. Este proceso incluye trastornos morfolgicos, fisiolgicos y de
comportamiento (Smith 1989, Yamano et al. 1991).

209
Poco se sabe sobre la nutricin de los congrios en su fase larval leptocfala, al igual que otros
anguiliformes (Smith 1989), ya que nunca fueron observados cuerpos reconocibles en su tracto
intestinal (Hulet y Robins 1989). Sin embargo, estudios recientes sugieren una alimentacin
basada en materia disuelta orgnica y particulada, al menos en su etapa larval premetamrfica
(Otake et al. 1993). Durante la metamorfosis, los glicosaminoglicanos corporales, previamente
acumulados, se utilizan como reservas de alimentos endgenos (Pfeiler 1986). Slo cuando los
individuos completan la metamorfosis se inicia la alimentacin exgena (Smith 1989). En
cuanto a su etapa de la vida juvenil, los congrios son carnvoros y se alimentan principalmente
de noche, y su dieta consiste principalmente de peces, crustceos y cefalpodos (Lythgoe y
Lythgoe 1971, Bagenal y Kenney 1973, Smith 1981, Cau y Manconi 1984, Wheeler 1985,
Bauchot y Saldanha 1986, Bauchot 1987, Saldanha et al. 1995). Si bien no hay variacin
estacional significativa en su dieta, sta parece variar de acuerdo al hbitat y la profundidad.
Estudios sugieren que los individuos dejan de alimentarse, en particular las hembras, cuando
comienzan su migracin pre-reproductiva a aguas ms profundas (Cau y Manconi 1984).
La especie C. conger es conocida porque tener los peces ms grandes en la familia Congridae,
con registros que llegan a 2,7 metros y un peso de 65 kg (Bigelow y Schroeder 1953, Wheeler
1985). Se sabe que las hembras son ms grandes que los machos, y rara vez estos superan el
metro de longitud (Cau y Manconi, 1983). Por otra parte, existe una asimetra en la relacin
sexual como una funcin de la profundidad de la columna de agua: las hembras se encuentran
en aguas costeras poco profundas, mientras que los machos se encuentran en aguas ocenicas
profundas (Cau y Manconi 1983). Las vrtebras y otolitos se utilizaron con xito para la
construccin de curvas de crecimiento de las especies (Fannon et al. 1990, Sbaihi et al. 2001,
Sullivan et al. 2003). Las estimaciones de la longitud asinttica (FL) de 214 y 271 cm parecen
ser realistas porque el congrio puede alcanzar estos tamaos. Los ejemplares capturados hasta el
momento tenan una edad estimada de entre 2 a 11 aos, lo que sugiere una tasa de crecimiento
somtico de 10 cm por ao. Se cree que cuando el congrio Europeo alcanza la madurez sexual
alrededor de 5 a 15 aos de edad, se dirige a aguas profundas en el verano (Julio, Agosto y
Septiembre), donde realiza un desove terminal (Lythgoe y Lythgoe 1971, Wheeler 1985). De
hecho, la ausencia de individuos maduros o en situacin posterior a la postura en las aguas
costeras, sugiere que la maduracin sexual ocurre durante su migracin a sus lugares de desove
en profundidad (Cau y Manconi 1983, 1984, Sbaihi et al. 2001, Sullivan et al., 2003).
Los primeros registros de captura de larvas pequeas leptocfalas (9-20 mm) de congrio
Europeo en el Mar de los Sargazos, el Ocano Atlntico Nororiental y el Mar Mediterrneo,
sugirieron un comportamiento migratorio similar a la anguila europea (Anguilla anguilla), es
decir, el desove ocurre en el Mar de los Sargazos seguida de una migracin transocenica de las
larvas a la costa de Europa y del norte de frica (Schmidt 1931). Sin embargo, esta hiptesis ha
sido contestada ms tarde (McCleave y Miller 1994), al parecer porque las larvas de C. conger

210
capturadas en el Mar de los Sargazos seran en realidad perteneceran en realidad a la especie C.
triporiceps, una rara especie de congrio estadounidense que fue descripta posteriormente
(Kanazawa 1958), y que aunque con diferente forma adulta, las larvas son morfolgicamente
similares a las de C. conger.
Hasta la fecha, el nico lugar conocido como zona de desove para la especie se encuentra en
aguas profundas al sureste de la isla de Cerdea (entre 600 y 800 m) en el Mar Mediterrneo, ya
que en esta rea fueron capturados machos y hembras sexualmente maduros y en condicin de
post-desove (Cau y Manconi 1983). Esta hiptesis est apoyada por la longitud y la edad
estimada de larvas leptocfalas premetamrficas capturados en varios cruceros de investigacin
en el Ocano Atlntico Nororiental y en el Central (Strehlow et al. 1998). Otro sitio de desove
situado en el Ocano Atlntico Nororiental, en algn lugar entre Gibraltar y las Azores, a
profundidades de entre 3.000 y 4.000 m, ha sido sugerido para esta especie (Lythgoe y Lythgoe
1971, Bagenal y Kenney 1973, Hayward y Ryland 1995). Este sitio de puesta puede funcionar
como una zona de reclutamiento para la poblacin del norte de Europa (Lythgoe y Lythgoe
1971), aunque no hay datos que apoyen esta hiptesis.
Se cree que despus del desove, la dispersin de las larvas a travs de las corrientes ocenicas
hacia zonas costeras de alimentacin puede llevar uno o dos aos (Lythgoe y Lythgoe 1971,
Bagenal y Kenney 1973, Strehlow 1992). Un periodo larval largo podra explicar la amplia
gama de dispersin al principio de la metamorfosis (Strehlow et al. 1992). La duracin del
estadio larval se estim en alrededor de 300 das en base a la microestructura de los otolitos de
larvas pre-metamrficas (100 mm de largo) (Antunes 1994). Recientemente, y en base a las
colecciones histricas de larvas pre-metamrficas capturada en varios cruceros en el Ocano
Atlntico Central y Nororiental, se sugiri basado en la edad y el tamao de estas larvas, un
escenario para la dispersin y migracin de las larvas de congrio (Strehlow et al. 1998). El
desove se produce en el Mar Mediterrneo y despus de un corto perodo de crecimiento, las
larvas (> 30 mm) alrededor de noviembre, dejan el estrecho de Gibraltar e inician una migracin
en direccin noroeste, al sur de Portugal y Espaa, extendindose luego a toda la zona del
Ocano Atlntico Oriental y Central. En esta rea las larvas tienen un segundo periodo de
crecimiento que dura hasta el comienzo del prximo verano (llegando 130-150 mm y 165 mm
de longitud mxima), seguido de una nueva migracin hacia aguas costeras del talud
continental, con un posible regreso al Mar Mediterrneo. Se cree que esta migracin costera
puede inducir la metamorfosis. Sin embargo, la ubicacin y la duracin de la metamorfosis son
an desconocidas.
Aunque los congrios son un importante componente ictcola del ecosistema marino de la
plataforma continental del Ocano Atlntico Nororiental y el Mar Mediterrneo, se sabe poco
sobre los sitios de puesta, la migracin y el reclutamiento de especies costeras. Aunque se ha
sugerido en algunos libros de texto cientficos que el congrio Europea, C. conger, desova en

211
algn lugar del Ocano Atlntico Nororiental, situado entre el Estrecho de Gibraltar y las
Azores (Lythgoe y Lythgoe 1971, Bagenal y Kenney 1973, Wheeler 1985, Ryland y Hayward
1995), no hay datos que apoyen esta informacin. Actualmente, la nica zona de desove
conocida para la especie se encuentra al este de la cuenca central del Mar Mediterrneo (Cau y
Manconi 1983).

9.2 Ciclo de vida del congrio europeo resultante del estudio microestructural y de la
microqumica de otolitos de larvas

Las larvas de congrio, capturadas en una amplia zona geogrfica a las cuales se puede atribuir
una edad contando incrementos diarios de otolitos, junto con informacin sobre el patrn de
circulacin de las corrientes en el rea, permite asignar las trayectorias de dispersin y
migracin. Con base en la edad estimada de las larvas y la velocidad de las corrientes
superficiales y el retro-clculo de la fecha de eclosin larval permite inferir sobre la ubicacin
del rea de desove. Mientras que las capturas de larvas leptocfalas en el medio ambiente
marino son difciles y costosas y requiere el uso de los buques de investigacin y artes de pesca
privado, el acceso a muestras procedentes de las colecciones histricas o directamente obtenidos
por la captura en el Ocano Atlntico, han demostrado ser de suma importancia para dilucidar el
ciclo de la vida del congrio europeo.
La dispersin del congrio Europeo desde sus zonas de desove en el Mediterrneo a travs del
Estrecho de Gibraltar, hacia la regin de Centroamrica y el noreste del Ocano Atlntico,
puede explicarse en parte por medio de un transporte pasivo por contracorriente de la costa
portuguesa. Durante el flujo predominante en invierno, la dispersin de larvas puede tener lugar
en la direccin noroeste. Sin embargo, esto no puede explicar cmo llegan algunas pequeas
larvas pre-metamrficas a las Azores desde el Mar Mediterrneo basado en el patrn de flujo
predominante del Ocano Atlntico NE. No es cientficamente plausible que las pequeas larvas
leptocfalas (unos 50 mm) hayan dejado el Mar Mediterrneo para migrar hacia las Azores,
recorriendo una distancia de alrededor de 3.000 kilmetros en lnea recta por unos 2-3 meses
(edad estimada de las larvas) cuando las corrientes oceanogrficas de esta zona tienen la
direccin opuesta (Figura 9.2). Esta ruta de migracin slo podra ser posible para los
especmenes mayores a travs de una dispersin accidental impulsada por las corrientes
generadas por remolinos de mesoescala, o si las larvas tuviesen un comportamiento de natacin
orientado y muy activo (aproximadamente 35-44 km/da). Estos datos sugieren otro lugar la
postura del congrio cerca de las Azores (Correia et al. 2002 a).

212
 Oceno
Atlntico Europa

Azores

Madeira
latitud (N)

frica

Canarias

longitud (W)

Figura 9.1 Ubicacin en las islas de las Azores donde se captur larvas pre-metamrfico
leptocfalas de Conger conger en noviembre de 1999 y junio de 2000 a bordo del buque de
investigacin Archipilago (Adaptado de Correia et al. 2002a).

Espaa
Azores Portugal
latitud (N)

Madeira

Oceno Islas Canarias

Atlntico Africa

longitud (W)

Figura 9.2 - Patrn de circulacin actual en el Ocano Atlntico Nororiental: (AC), Corriente
de las Azores, (CC) Corriente de las Canarias, (PC) Corriente Portuguesa, (PCCC) Contra
Corriente Costera Portuguesa, (MW) Aguas Mediterrneas (Adaptado de Correia et al. 2003).

213
La tasa de deposicin de los microincrementos en los otolitos en varios peces anguiliformes
emparentados con los congrios es diaria en su fase larvaria (Mochioka et al. 1989, Tsukamoto
1989, Umezawa et al. 1989, Umezawa y Tsukamoto 1991, Martin 1995, Arai et al. 2000a, Cieri
y McCleave 2001, Sugeha et al. 2001). Suponiendo que en esta especie los incrementos se
depositan sobre una base diaria, la edad estimada de las larvas pre-metamrfica capturadas en
las Azores oscil entre 69 y 275 das (Figura 9.3). Esto significa que la temporada que desove
de esta especie se extiende en el tiempo, y ocurre entre diciembre y julio, con un pico anual al
comienzo del verano. Estos resultados son consistentes con la captura de pequeas larvas
leptocfalas de C. conger en el Mar Mediterrneo (Schmidt 1931) y la distribucin temporal y
espacial de larvas pre-metamrficas en el Ocano Atlntico Nororiental y Central (Strehlow et
al. 1998). Aunque las estimaciones para la temporada de desove por medio de larvas
leptocfalas capturadas en el Ocano Atlntico Nororiental son ligeramente diferentes (de abril
a octubre), ambos estudios sugieren un perodo de desove extendido para el congrio europeo.
pocas de desove relativamente extendidas en el tiempo tambin se han reportado para C.
myriaster (septiembre a febrero) y C. oceanicus (octubre a diciembre) en base a las fechas de
muestreo y edades estimadas por medio del conteo de incrementos primarios otolitos de larvas
leptocfalas (Lee y Byun 1996, Cooper et al. 2003).

Figura 9.3 - Microfotografa de microscopia electrnica de barrido mostrando la microestructura

de un otolito de una larva de pre-metamrfica de Conger conger, donde se observan los
incrementos primarios (puntos blancos), (P) primordium, (HC) marca de eclosin larval, y
(FFC) marca de la primera alimentacin exgena (Adaptado de Correia et al. 2003).

La correlacin significativa entre el tamao de los otolitos y la edad de las larvas en fase de
desarrollo, sugiere el uso potencial de los otolitos para representar la edad de los peces. Sin
embargo, como ya se ha observado para C. myriaster (Byun y Lee 1996), el crecimiento

214
somtico y el crecimiento de los otolitos se desacopla durante la fase metamrfica para C.
conger (Correia et al. 2006) y C. oceanicus (Correia et al. 2004). La tasa de crecimiento
somtico de larvas leptocfalas en desarrollo de C. conger estimadas a partir de la lnea de
regresin fue 0,31 mm/da. Aunque este valor cae dentro de la tasa de crecimiento reportado por
varios autores para otras especies, en particular, para el gnero Anguilla (Boetius y Harding
1985, Kleckner y McCleave 1985, Castonguay 1987, Tesch 1998), parece algo bajo y
probablemente, asumir que es una regresin lineal simple no sea adecuado para una curva de
crecimiento de leptocfalas. Recientemente se observ una longitud total de 2,5 mm para las
larvas de C. myriaster recin eclosionadas artificialmente y se obtuvo una relacin curvilnea
entre la talla y la edad para larvas de ms de 19 das, con una tasa de crecimiento aproximada de
0,9 mm/da durante los primeros 7 das despus de la eclosin (Horie et al. 2002).
Aunque el congrio es un pez exclusivamente marino durante toda la vida, se puede ver desde
fines de octubre hasta mediados de junio que las larvas metamrficas de C. conger ingresan en
la desembocadura de los ros portugueses transportadas por la marea durante la transicin de
marea baja a alta (Corea et al. 2002). Lo mismo se describi para congrio japons (C. myriaster)
y americano (C. oceanicus), aunque en diferentes momentos del ao (Tanaka et al. 1987, Able y
Fahay 1998). Esto permite obtener algunos ejemplares como resultado de la captura incidental
de otras pesqueras, en particular, de la pesca de angulas en el ro Mio, que se encuentra al
norte de Portugal, por medio del uso de artes de pesca especializadas (Antunes y Correia 2003).
Las larvas capturadas son identificadas por su morfologa externa, patrn de pigmentacin y
contando sus mimeros (D'Ancona 1931). Es particularmente importante el uso de relaciones
entre el nmero de mimeros pre-anales/nmero de mimeros totales y talla pre-anal/talla total
como criterios para diferenciar los estadios pre-metamrficos y metamrficos de las leptocfalas
de congrio (D'Ancona 1931, Schmidt 1931, Castelo 1970, Strehlow et al. 1998, Correia et al.
2002 a, b).
La microestructura de los otolitos de leptocfalas de C. conger durante su desarrollo larvario es
similar a la observada en otras larvas de peces anguiliformes, es decir, Anguilla sp. (Tabeta et
al. 1987, Lecomte-Finiger y Yahyaoui 1989, Antunes 1994, Wang y Tzeng 1998, 2000, Arai et
al. 2001a). Es especialmente llamativo el cambio en el espesor de incrementos primarios, que se
supone son anillos de crecimiento diario, a lo largo del radio de los otolitos de larvas, debido a
la influencia de factores endgenos y exgenos. El grosor de los anillos de crecimiento diario es
relativamente constante y estrecho en la fase de premetamrfosis, pero se incrementan
bruscamente, y dependiendo de los individuos, en torno a los 170 - 280 das despus de la
eclosin de las larvas (Figura 9.4).

215
Figura 9.4 - Microfotografa de microscopaelectrnica de barrido mostrando la microestructura
de otolitos de una larva metamrfica de Conger conger. Se puede observar en A el ncleo (c)
con el primordium en el centro (*), la zona de los incrementos cuantificables (CZ) y la zona
difusa (DZ). En B se observa a mayor aumento la transicin entre la zona de incrementos
cuantificables y la zona difusa donde se observa una zona de incrementos en espesor (Adaptado de
Correia et al. 2002 a,b).

Varios estudios han demostrado que la historia ambiental de los peces anguiliformes puede ser
reconstruida a partir del anlisis de la relacin de Sr:Ca. Los cambios en la relacin Sr:Ca han
sido asociado con factores ambientales tales como la temperatura (Tzeng 1994), salinidad
(Tzeng y Tsai 1994) y qumica del agua (Otake et al. 1994), as como factores fisiolgicos
endgenos (Tzeng 1996, Arai et al. 1997, Otake et al. 1997). El patrn de variacin de la
relacin Sr: Ca a lo largo del radio del otolito de larvas del congrio europeo es similar a la
observada en las larvas de otras leptocfalas, en particular Anguilla sp. y Conger sp. (Otake et
al. 1994, 1997, Tzeng 1994, 1996, Tzeng y Tsai 1994, Arai et al. 1997, 1999ab, 2000b, 2001b,
2002, Wang y Tzeng 1998, 2000, Marui et al. 2001). La relacin Sr:Ca es menor en el ncleo y
el borde de los otolitos. Aunque se ha sugerido que el bajo contenido de Sr observado en los
ncleos de las anguilas es probablemente debido al origen dulceacucola del saco vitelino
(Tzeng y Tsai 1994, Wang y Tzeng 2000), los resultados obtenidos con especies estrictamente
marinas muestran que esta caracterstica no puede estar asociada con un cambio en la salinidad,
sino que probablemente reflejan la composicin qumica orgnica del ncleo. Por otro lado, la
relacin Sr:Ca que aumenta gradualmente a lo largo de la fase pre-metamrfica registra una
fuerte disminucin con el aumento del espesor de las micro-incrementos (Figuras 9.5 y 9.6). Se
considera que esta marca corresponde al comienzo de la metamorfosis de las larvas y es
observado en varias especies de peces, incluyendo anguiliformes como C. myriaster y C.
oceanicus (Mochioka et al. 1989, Lee y Byun 1996, Otake et al. 1997, Correia et al. 2004).

216
Varios investigadores (Tzeng 1994, Tzeng y Tsai 1994, Wang y Tzeng 2000) propusieron que la
disminucin de la relacin Sr:Ca en otolitos de anguilas despus de la metamorfosis refleja el
cambio repentino en la salinidad ambiental asociado comportamiento migratorio catdromo de
las anguilas, o la entrada en hbitats de agua dulce menos ricos en el Sr. Sin embargo, los
individuos de C. conger y C. oceanicus utilizados en nuestro estudio fueron capturados en
ambientes de agua halada y por este motivo es poco probable que estos ambientes den como
resultado un cambio en la relacin Sr:Ca. Esta rpida cada en la relacin Sr:Ca representa
probablemente una movilizacin de componentes minerales asociado al desarrollo de huesos
que se produce durante el final de la metamorfosis de las larvas leptocfalas, en particular, la
reduccin de los niveles de estroncio en el cuerpo como resultado del catabolismo de GAG40
durante la metamorfosis (Otake et al. 1997). Estos estudios sugieren que los cambios son una
caracterstica comn de peces con una fase larval leptocfala y pueden estar asociados con los
cambios morfolgicos y fisiolgicos notables que se producen durante la fase de desarrollo
larvario.

DLGZ WIZ DZ

Sr:Ca
(x 1.000)

Ancho del
incremento (m)

Figura 9.5 - Microfotografa de microscopa electrnica de barrido mostrando la microestructura

de un otolito de una larva metamrfica de Conger conger. Se puede observar el espesor de los
incrementos primarios y las depresiones causadas por la microsonda que nos permiti obtener
los cocientes de Sr:Ca aprox. Zona pr-metamrfica (DLGZ), zona de incrementos espesos
(WIZ) y zona difusa (DZ). La flecha muestra el comienzo de la transicin (Adaptado de Correia et al.
2002 a, b).

40
Glicosaminoglicanos.

217
 DLGZ WIZ DZ

Ancho del incremento (m)

Sr:Ca (x 1.000)
n puntos

Figura 9.6 Incrementos de espesor y relacin Sr:Ca en funcin del largo del radio de otolitos
de una larva metamrfico de Conger conger. Zona pre-metamrfica (DLGZ), zona de
incrementos espesos (WIZ) y zona difusa (DZ). Las flechas indican la metamorfosis temprana
marcada por el brusco aumento del espesor de los incrementos que emparejan con una cada de
la relacin Sr:Ca (Adaptado de Correia et al. 2002, b).

Aunque la fuerte cada en la relacin Sr:Ca est asociada con la disminucin de los niveles de
estroncio del cuerpo como resultado del catabolismo GAG durante la metamorfosis (Otake et al.
1997); hasta el momento, no se ha dado ninguna explicacin para el aumento del grosor de los
incrementos observados en la conocida zona de incrementos espesos (WIZ) (Figura 9.7).
Cuando la metamorfosis se inicia antes de que las larvas alcancen su tamao mximo, el rea de
microincrementos espesos puede ser consecuencia de un ltimo perodo de crecimiento de las
larvas leptocfalas (con duracin de 30 a 70 das, es decir, el nmero de microincrementos
correspondientes a WIZ) antes de iniciar el acortamiento del cuerpo, lo que debera ocurrir en
torno a 150 mm de longitud (D 'Ancona 1931). Aunque las larvas leptocfalas dejan de
alimentarse al inicio de la metamorfosis (Pfeiler 1986), pueden tener algunas reservas de energa
corporales remanentes, lo que les permite mostrar temporalmente algn crecimiento somtico.
De hecho, es generalmente aceptado que la deposicin de los anillos de crecimiento en el otolito
no es afectado por la privacin de alimento, siempre y cuando las reservas de energa del cuerpo
sean suficientes para permitir el crecimiento, aunque limitado, del esqueleto (Marshall y Parker
1982, Campana 1983, Volk et al. 1984, Neilson y Green 1985).

218
 Primordium

Zona de incrementos
contables (ICZ)

Zona difusa
(DZ)

AGC

ICZ DZ

Figura 9.7 - Microfotografas de microscopia electrnica de barrido mostrando la

microestructura de un otolito de una larva metamrfica de congrio americano. Zona de
incrementos contables (ICZ), zona difusa (DZ) y centros accesorios de crecimiento (AGC y
flechas) (Adaptado de Correia et al. 2003).

En una etapa avanzada de la metamorfosis, los microincrementos dejaran de ser visualmente

reconocibles y desaparecen con el tiempo en la zona borde del otolito, llamada zona difusa
(DZ). Se cree que la frecuencia diaria de deposicin de microincrementos cesa, probablemente
como resultado de las condiciones de crecimiento desfavorables, ya que es probable que las
larvas metamrficas hayan agotado sus reservas de energa asignadas a crecimiento somtico y
comenzaron a reducirse (Correia et al. 2006). Esta zona perifrica difusa y sin anillos de
crecimiento reconocible, tambin est asociada a un cambio claro en la direccin de crecimiento

219
de los otolitos. Esto tambin se observ en etapas avanzadas de la metamorfosis leptocfalas de
C. oceanicus (Correia et al. 2004). Curiosamente varios autores han descrito el crecimiento
microestructural de otolitos de C. myriaster durante la metamorfosis, pero ninguno ha
identificado la existencia de una zona perifrica difusa, aunque todos ellos han reportado varios
problemas en la lectura de los otolitos (Tanaka et al. 1987, Mochioka et al. 1989, Lee y Byun
1996, Otake et al. 1997). Una zona difusa similar, probablemente como resultado de un perodo
de crecimiento muy lento y compuesta de anillos de crecimiento diarios muy delgados para ser
contados, fue previamente descripta en leptocfalas de la anguila europea, A. anguilla, previo a
la metamorfosis (Antunes y Tesch 1997). Sobre esta base, se estim sobre la edad total de
alrededor de 483 y 736 das, para dos larvas de congrio metamrficas capturadas en el ro Mio
en abril y noviembre de 1998 respectivamente, usando lo que supuestamente parecan ser
pequeos fragmentos de estructura de anillos dentro de la DZ. Inicialmente se sugiri que
independientemente de factores externos favorables, especialmente las altas temperaturas a
finales de verano y principios de otoo, la zona difusa podra representar un adelgazamiento de
incrementos debido al crecimiento casi completo de las larvas antes del inicio de la
metamorfosis. Sin embargo, un anlisis ms detallado de la relacin de Sr:Ca en la WDS41 en
otolitos de larvas metamrficas de congrio, mostr que esta zona se forma en ltima instancia,
durante una etapa avanzada de la metamorfosis. Se han propuesto otras hiptesis para explicar
la formacin de esta zona, en particular en angulas A. anguilla, como un detenimiento en la
migracin vertical diaria de leptocfalas (Williamson et al. 1999), un proceso de reabsorcin de
calcio en la porcin marginal otolito durante la metamorfosis como parte del metabolismo
corporal (Cieri y McCleave 2000) o un artefacto resultante de la mala preparacin de los
otolitos (Arai et al. 2000b). En relacin a la ltima hiptesis, usando diferentes agentes y los
tiempos de abrasin qumica de la matriz de aragonita de otolitos, incluyendo el uso de una
proteasa, se demostr que la zona difusa no era un artefacto ptico resultante de la mala
preparacin de la otolitos, sino que era una estructura real y permanente ubicada en la parte
perifrica del otolito en una etapa tarda de la metamorfosis de las leptocfalas (Correia et al.
2006).
Sin embargo, la complejidad microestructural de otolitos de C. conger incluye la aparicin de
centros de crecimiento accesorios (AGCs) en una etapa tarda de la metamorfosis de las larvas
leptocfalas. Estas estructuras estn generalmente presentes durante o despus de la
metamorfosis en varias especies de peces (Campana 1984, Gartner 1991, Sgrd 1991, Cowen y
Hare 1994, Volk et al. 1995, Modin et al. 1996, Wilson y McCormick 1997, Fischer 1999,
Brown et al. 2001, Neuman et al. 2001, Plaza et al. 2001), incluyendo C. myriaster (Byun y Lee
1996) y C. oceanicus (Correia et al. 2004). Son considerados accidentes morfolgicos normales
de otolitos y parecen actuar como ncleos de cristalizacin para la deposicin de nuevas
41
Espectroscopia dispersiva de longitud de onda de rayos x (WDS).

220
material calcreo (Campana 1984). El mecanismo asociado con la aparicin de estas estructuras
an no se entiende completamente, pero algunas hiptesis han sido propuestas para explicar el
origen asociado con la metamorfosis: transicin de hbitat (Sgrd 1991), el cambio de dieta
ontogentico (Marks y Conover 1993) y/o cambios fisiolgicos (Hare y Cowen 1994). Se sabe
que el congrio sufre cambios morfolgicos, fisiolgicos y de hbitat en su transicin de larvas a
juveniles (Yamano et al. 1991, Bell et al. 2003). Por lo tanto, la aparicin de centros de
crecimiento accesorios en los otolitos puede ser consecuencia de un cambio de hbitat pelgico
a bentnico, un cambio en la temperatura y/o salinidad del medio ambiente y/o cambio de dieta,
variables que se sabe, influyen la apariencia de los otolitos. Un otolito en transformacin y que
dar lugar a una morfologa ms elptica en adultos, puede servir para navegar a travs de
diferentes ambientes, perseguir presas y detectar depredadores que se acercan (Brown et al.
2001). De hecho, el rango de frecuencia de sonido al que los otolitos responden depende de su
forma (Gauldie 1988), y la variacin intraespecfica de la forma es observable en los otolitos de
muchos peces (Lombarte y Castelln 1991), y esto se atribuye a menudo a la adaptacin a
diferentes hbitats (Wilson 1985).
Se ha sugerido que la etapa larval del congrio es de larga duracin (Bauchot y Saldanha 1986), y
que despus de la eclosin demoran aproximadamente de uno a dos aos de deriva en el ocano
para llegar a las zonas costeras donde se convierten en juveniles (Lythgoe y Lythgoe 1971,
Wheeler 1985, Strehlow 1992). En cuanto a la ubicacin exacta de las distintas etapas larvales,
las larvas pre-metamrficas de C. conger parecen estar restringidas al talud continental, lo que
sugiere que no entran en las aguas costeras de la plataforma continental, a menos que hayan
comenzado la metamorfosis. Los resultados sugieren que las larvas leptocfalas del congrio
europeo demoran cerca de 6-9 meses desde la eclosin hasta el comienzo de la metamorfosis.
Esta estimacin es ms corta que los 15 meses (1 aos) propuestos inicialmente para el final
de la fase de premetamrfica (Strehlow et al. 1998). C. oceanicus aparentemente puede requerir
menos tiempo, 2 a 4 meses, para llegar a la metamorfosis (Cooper et al. 2004). En C. myriaster
el comienzo de la metamorfosis se produce entre los 4 y 8 meses de edad (Otake et al. 1997).
Las diferencias interespecficas en la duracin de la etapa larval pre-metamrfica pueden estar
relacionadas con las diferentes distancias de la zona de desove a las zonas costeras de los
juveniles y/o la dinmica de las corrientes marinas en las distintas reas geogrficas.
La duracin de la fase larval leptocfala y sobre todo la edad en que comienza la metamorfosis
parecen ser factores determinantes en las propiedades de dispersin geogrfica de peces
anguiliformes (Cheng y Tzeng 1996) y pueden haber sido responsables de la segregacin de las
especies dentro del gnero Anguilla (Tzeng y Wang 2000). La corta duracin de la fase
leptocfala puede promover la retencin ocenica junto a la zona de desove, mientras que la
larga duracin puede favorecer la dispersin de las larvas (McCleave 1993). El comienzo de la
metamorfosis se puede retrasar hasta que las condiciones ambientales sean adecuadas (Tzeng

221
1990), como ha sido sugerido para C. oceanicus (Bell et al. 2003). Las larvas con existencias
pelgicas largas pueden ser ms susceptibles a ser transportadas por diferentes corrientes y estn
ms sujetas a diferentes condiciones de crecimiento (Benot et al. 2000).
Si la metamorfosis es desencadenada por algn estmulo ambiental, o se produce de forma
espontnea a una cierta edad o tamao es an desconocido. La talla a la cual las larvas
leptocfalas de C. conger inician la metamorfosis parece estar entre 155 y 165 milmetros
basado en el registro de las larvas premetamrficas y metamrficas ms grandes. Las larvas
metamrficas de congrio capturadas en el ro Mio y mantenidas artificialmente en acuarios con
temperaturas 15-16C, completan la metamorfosis en aproximadamente 1 a 2 meses y
alcanzan una longitud final de 70 a 80 mm, con una razn talla preanal/talla total de TL 0.37
(Correia et al. 2002 a,b). En comparacin, la duracin estimada de la metamorfosis de C.
myriaster vara entre diferentes estudios: 23-31 das (Kubota 1961); 22 das a temperaturas de
18 a 22C (Asano et al. 1978); 53-75 das a temperaturas de 10 a 16C (Byun y Lee 1996); y 71
das a temperaturas de 11 a 15C (Otake et al. 1997). La temperatura de la zona de muestreo, la
dificultad o ambigedad en la identificacin de inicio y fin de la metamorfosis y las condiciones
de cautiverio artificiales pueden resultar en estimaciones inexactas en la duracin de la
metamorfosis en relacin a lo que ocurre en la naturaleza. Adems, algunos datos indican que,
en condiciones artificiales, la tasa de crecimiento de los otolitos de larvas metamrficas es
superior a la observada en la naturaleza. Las condiciones de cautiverio y/o estrs causado por la
manipulacin parecen producir un desequilibrio en el control endocrino de la metamorfosis, lo
que lleva a una anormal alta tasa de crecimiento de los otolitos. Aunque el ensayo con animales
es uno de los mejores mtodos para el estudio del crecimiento de larvas de peces, junto con el
uso de sustancias fluorescentes, tales como la tetraciclina y la alizarina, como marcadores
cronolgicos para estudiar la tasa de crecimiento diario en la zona difusa de los otolitos, estas
metodologas no fueron exitosas para esta especie (Correia et al. 2006).
La edad a la cual ocurre la metamorfosis es inversamente proporcional a la tasa de crecimiento
somtico, tanto en C. conger como en C. oceanicus, sugiriendo que los peces de crecimiento
ms lento comienzan la metamorfosis tardamente (Correia et al. 2002 a,b, 2004). Este
fenmeno tambin se observ en A. japonica (Tsukamoto y Umezawa 1990, Tzeng 1990,
Cheng y Tzeng 1996) y Megalops cyprinoides (Tzeng et al. 1998), lo que sugiere que el tiempo
necesario para la migracin de las larvas desde su lugar de desove ocenico hacia a las aguas
costeras es probablemente ms corto para las larvas de crecimiento rpido. En general, las larvas
de crecimiento rpido metamorfosean antes y nadan ms rpido hacia su hbitat preferido
(Hunter 1972, Miller et al. 1988). En contraste, las larvas con tasas de crecimiento inferiores
son incapaces de nadar tan rpido, lo que prolonga la duracin de la etapa larval y el retraso de
la metamorfosis y reclutamiento costero (Victor 1986).
La relacin positiva entre la edad de reclutamiento y la edad en que se produce la metamorfosis

222
sugiere que los individuos de C. oceanicus que metamorfosean en una etapa precoz tienden a
desplazarse hacia la zona costera a edades ms tempranas (Correia et al. 2006). Varios autores
encontraron el mismo patrn en anguilas templadas y tropicales (Tsukamoto 1990, Tsukamoto y
Umezawa 1990, Arai et al. 1999ab, 2000b, 2001b, Wang y Tzeng 1998, Marui et al. 2001). Esta
relacin no se pudo establecer en C. conger debido a que todas las larvas metamrfica
mostraron una zona difusa, lo que impide determinar con precisin la edad de reclutamiento
costero. Sin embargo, los datos indirectos (talla corporal y razn talla pre anal/talla total)
muestran que las larvas ms grande en una etapa ms avanzada de la metamorfosis, se
desplazaron tempranamente hacia las aguas costeras portuguesas. Por lo tanto, el mecanismo de
migracin del congrio se puede resumir de la siguiente manera: las larvas con una mayor tasa de
crecimiento y metamorfosis temprana, son las primeras en desplazase hacia las zonas costeras,
probablemente a una edad ms prematura, con un tamao ms grande y una etapa ms avanzada
de desarrollo (Correia et al. 2002 a, b). Esta va de reclutamiento costero de larvas parece ser
comn en peces anguiliformes.
Sobre la base de evidencias indirectas (duracin de la fase de premetamrfica, fecha de captura
y el estadio de la metamorfosis) se supone que la duracin total de la etapa larval de esta especie
es de dos aos (Correia et al. 2006). Sin embargo, la determinacin de la edad exacta de las
larvas metamrficas a travs del recuento de los anillos de crecimiento diario es imposible
debido a la existencia de una zona difusa, y los valores observados durante la duracin de la
metamorfosis y la edad total de las larval son, por desgracia, especulativos para el congrio
europeo. Adems, los mecanismos de la formacin de la zona difusa y centros accesorios de
crecimiento en los otolitos de congrio, ya sea de carcter ambiental y/o fisiolgico, todava no
se entienden. Nuevos estudios deben ser realizados para determinar las vas y mecanismos
asociados. Por otro lado, la influencia relativa de los factores endgenos y exgenos en el
espesor de los anillos de crecimiento y las transiciones observadas en la superficie de los
otolitos sigue siendo poco clara. Los escenarios que se describen en este trabajo, tratando de
explicar diferentes aspectos microestructurales de crecimiento en los otolitos de C. conger en su
etapa larval, los diversos eventos ambientales, fisiolgicos y de comportamiento que se
producen durante su ciclo de vida (Figura 9.8), necesitan ms investigacin para confirmar o
rechazar algunas de las hiptesis presentadas.

223
 Primera alimentacin exgena
Eclosin larval Zona incrementos espesos Centros accesorios crecimiento

Primordium Metamorfosis Zona difusa

Fase
embrionria Fase premetamrfica Fase metamrfica

Plataforma
Talud continental continental y aguas
costeras

Figura 9.8 - Correspondencia entre la microestructura de otolitos en la fase larval de Conger

conger y su correspondencia con los fenmenos biolgicos que ocurren en su ciclo de vida.

Aunque el anlisis preliminar ADNmt de larvas leptocfalas sugiere la existencia de una

diferenciacin gentica significativa entre las poblaciones locales (Correia et al. 2006), la
cuestin de sobre si C. conger tiene varias poblaciones o una sola poblacin panmtica sigue sin
ser respuesta. En un trabajo futuro se debe incluir el muestreo y anlisis de larvas leptocfalas
en una amplia zona geogrfica durante un perodo de tiempo, que a la luz de los conocimientos
oceanogrficos actuales, puede dar nuevas pistas sobre el lugar y el momento de desove, y
ofrecera una nueva visin sobre migracin de las larvas del congrio europeo. Adems, el
anlisis de los ejemplares adultos obtenidos de una amplia zona del NE del Ocano Atlntico
(incluyendo Madeira y Canarias) y el Mar Mediterrneo, son esenciales para entender la
estructura de la poblacin y la variacin gentica de esta especie. Un enfoque multidisciplinario
que incluya el uso de la huella elemental e isotpica de otolitos combinados con tcnicas de
biologa molecular contribuira a dilucidar la estructura poblacional y la conectividad entre
hbitats (Correia et al. 2011, 2012).

224
MTODOS DE ESTUDOS COM OTLITOS:

PRINCPIOS E APLICAES

225


226
 PREFACIO

A motivao para elaborar este livro surgiu da necessidade de brindar aos universitrios
de graduao e ps-graduao, interessados no uso de otlitos nas cincias ambientais e
agrrias, uma ferramenta de consulta til e rpida para um primeiro contato com as
tcnicas de estudos destas estruturas.
Este livro resultado do esforo dos coordenadores (Dra. Alejandra Volpedo da
Argentina e Dr. Henry Spach do Brasil) e dos professores participantes do projeto
CAFP-BA 043/13 (rea de Produo Animal: Pescarias, do Programa Centros
Associados para o Fortalecimento da Ps-graduao Brasil-Argentina - CAFP-BA).
Atravs dos cursos ministrados em ambos os pases, foi detectada a necessidade de
produzir para a regio uma obra que reunisse os conceitos e mtodos mais importantes
no estudo de otlitos.
Esta obra bilngue rene em seus captulos os diferentes aspectos de estudo dos otlitos.
Estes captulos foram escritos por renomados especialistas em nvel regional e
internacional.
O Captulo 1 apresenta os aspectos gerais dos otlitos no contexto dos estudos
internacionais e da regio, destacando a importncia de situ-los em relao riqueza
ictica e biologia dos peixes.
O Captulo 2 revisa os aspectos mais importantes relacionados a morfologia dos trs
pares de otlitos, bem como a obteno dos mesmos, a anlise morfolgica e
morfomtrica associada e a aplicao dos ndices mais comumente utilizados. Apresenta
ainda um anexo detalhado da morfologia dos otlitos, que permitir ao leitor a
realizao de descries detalhadas de otlitos de diferentes espcies, utilizando a
nomenclatura adequada.
O Captulo 3 apresenta diferentes aspectos da morfometria de otlitos (biometrias,
anlises de forma e de contorno) e suas aplicaes, que permitiro ao leitor imerso
completa neste tema.
O Captulo 4 apresenta os conceitos fundamentais e os diferentes mtodos de anlise
para estudos de idade e crescimento utilizando otlitos. Este captulo compreende ainda
a a preparao dos dados para anlises, as anlises estatsticas bsicas e a interpretao
dos resultados, brindando ao leitor um marco referencial amplo sobre como comear um
estudo de idade e crescimento em peixes.
O Captulo 5 compreende o estudo da microqumica dos otlitos e suas aplicaes.

227
Neste captulo se apresentam os principais fatores que influenciam a microqumica dos
otlitos, as vantagens e resoluo das diferentes tcnicas de anlises e, finalmente a
anlise e interpretao dos resultados sobre composio qumica dos otlitos. Para
ilustrar estas aplicaes, um estudo de caso de microqumica de otlitos de uma espcie
andromas apresentado.
No Captulo 6 se detalha a aplicao direta da microqumica de otlitos no estudo da
histria de vida e deslocamentos dos peixes. Tambm so apresentados diferentes
conceitos relacionados a microqumica como consequncia do ambiente frequentado
pelo peixe.
No Captulo 7 so analisados os coneitos fundamentais de estatstica para anlise e
interpretao de dados, incluindo suas etapas de aplicao, pressupostos e
recomendaes. Este captulo permite que o leitor disponha de informaes bsicas para
a anlise de dados quantitativos aplicada a otlitos.
O Captulo 8 apresenta as bases conceituais qumicas necessrias para a interpretao de
resultados associados a composio qumica dos otlitos e da gua. Nele esto
detalhadas as propriedades da gua, os equilbrios e processos de composio das guas
naturais, assim como metodologias associadas a amostragem de agua e interpretao de
resultados.
O Captulo 9 consiste em um estudo de caso no qual se analisa o local de desova, a
disperso de larvas e o recrutamento do congro europeu (Conger conger), atravs da
anlise estrutural e qumica dos otlitos. Este captulo mostra um caso real de aplicao
integral dos otlitos como instrumento de estudo.
A realizao deste livro foi possvel graas ao apoio do Programa Centros Associados
para o Fortalecimento da Ps-graduao Brasil-Argentina (CAFP-BA), a Secretara de
Polticas Universitarias (SPU) del Ministerio de Educacin e a CAPES, assim como a
Facultad de Ciencias Veterinarias da Universidad de Buenos Aires, ao Instituto de
Investigaciones en Produccin Animal (INPA-UBA-CONICET), ao Centro de Estudos
do Mar e ao Departamento de Biodiversidade da Universidade Federal do Paran
(UFPR).

228
1. PANORAMA SOBRE OS OTLITOS

Alejandra Vanina Volpedo e Andr Martins Vaz-dos-Santos

Sumrio
1.1 Riqueza e diversidade ictica em ambientes aquticos........................................................229
1.2 rgos dos sentidos dos peixes...........................................................................................230
1.3 O ouvido interno dos peixes e a posio dos otolitos..........................................................231
1.4 Usos e aplicaes dos otlitos.............................................................................................233

1.1 Riqueza e diversidade ictica em ambientes aquticos

O grupo popularmente conhecido como peixes engloba, entre as aproximadamente 30.000

espcies viventes, um conjunto de vertebrados distribudos nas classes Myxini (feiticeiras)
(0,25%), Petromyzontida (Cephalaspidomorphi) (lampreias) (0,14%), Chondrichthyes
(tubares, raias e quimeras) (3,47%), Actinopterygii (peixes sseos) (96,12%) e Sarcopterygii
(peixes pulmonados) (0,03%) (Nelson 2006, ITIS 2015). Os aspectos sistemticos do grupo e a
riqueza de espcies um tema em constante mudana, devido dinmica da cincia na
descoberta de novas espcies, na re-descrio de outras, na identificao de espcies crpticas,
entre outros elementos. Catlogos online como o FishBase (Froese e Pauly 2015) e o Catalog of
Fishes (Eschmeyer e Fricke 2015) fornecem bases sobre o status quo de estudos sobre as
espcies e de sua sistemtica, respectivamente.
Em termos de biologia, existem vrios livros texto nos quais possvel estudar as caractersticas
anatmicas, fisiolgicas, morfofuncionais, evolutivas, ecolgicas e comportamentais destes
grandes grupos de peixes (Moyle e Cech 2004, Zavala-Camin 2004, Pough et al. 2008, Helfman
et al. 2009). Peixes constituem o grupo que apresenta o maior nmero de espcies de
vertebrados e que colonizou amplamente os mais variados ambientes aquticos do planeta. As
guas ocupam uma rea de 510.000 . 103 Km2, com um volume de 1.385,984 . 103 Km3, dos
quais 97,5% esto nos oceanos e 2,5% so reservas de gua doce (Tundisi e Tundisi 2008). A
heterogeneidade destes ambientes aquticos e de suas propriedades extremamente variada e,
exceto nas guas subterrneas, geleiras e calotas polares, em todos encontramos peixes.
Uma abordagem aplicada sobre ictiofauna e ocupao de hbitats foi feita por Lowe-McConnell
(1999) e Moyle e Cech (2004). Lowe-McConnell (1999) analisou vrios casos ao redor do
mundo sobre a estrutura de comunidades icticas e de seus ambientes, citando entre seus
diversos exemplos os rios Zaire, Nger e lago Chade na frica, o sistema amaznico, os recifes
de coral, os peixes de ressurgncias, os epipelgicos ocenicos, entre outros. Adicionem-se a

229
este rol os peixes estuarinos, polares e de profundidade estudados por Moyle e Cech (2004).
notvel verificar a versatilidade dos peixes e de suas adaptaes a diferentes modos de vida e
ambientes.
O sucesso de colonizao desta gama variada de hbitats pelos peixes deve-se em parte ao seu
sistema sensorial, especializado na percepo de estmulos em um meio cujas caractersticas so
bem distintas daquelas do ar: a gua nica em suas propriedades (Schmiegelow 2004, Zavala-
Camin 2004, Tundisi e Tundisi 2008, Fernandez Cirelli cf. Captulo 8). Desta forma,
fundamental entender os peixes enquanto mquinas sensoriais extremamente eficientes, cujos
otlitos so uma pequena pea nesta complexa engrenagem.

1.2 rgos dos sentidos dos peixes

Em termos sensoriais, os peixes possuem mecanismos para: fotorrecepo, quimiorrecepo,

percepo eletromagntica e mecanorrecepo (Helfman et al. 2009) (Figura 1.1).

Viso
Ouvido
interno

Olfato
(receptor qumico)

Paladar
(receptor qumico)
Linha lateral

Figura 1.1 Aspectos gerais dos rgos dos sentidos nos peixes sseos (ilustrao do peixe modificada

de Menezes e Figueiredo 1980).

A fotorrecepo (viso) garantida pelos olhos dos peixes que, em geral, possuem os mesmos
componentes de todos os vertebrados (Zavala-Camin 2004). Segundo este autor, os olhos
captam as imagens e as transduzem; alm disso, de modo diferenciado, peixes enxergam cores
e, em algumas espcies, luz ultravioleta e infravermelho. Entretanto, cabe lembrar que o
ambiente visual na gua pode ser extremamente varivel, em funo de luminosidade, partculas
em suspenso e outros elementos. Deste modo, a viso nem sempre o sentido mais til aos
peixes.

230
A quimiorrecepo envolve o olfato e o paladar dos peixes. A olfao depende da dissoluo de
substncias qumicas na gua e seu contato com a roseta olfatria, um epitlio sensorial
localizado dentro das narinas (Moyle e Cech 2004). O paladar, por sua vez, est relacionado
percepo do alimento e as clulas sensoriais esto localizadas na boca, nos barbilhes e lbios,
principalmente (Helfman et al. 2009). A percepo qumica extremamente importante nos
peixes e est relacionada a diversas funes biolgicas, como reconhecimento de parceiros,
identificao de reas em espcies com filopatria natal, para evitar predadores, etc.
O eletromagnetismo em peixes reside na capacidade de perceber campos magnticos e eltricos
e, no segundo caso, emiti-los e utiliz-los para comunicao, ataque e defesa (Helfman et al.
2009). Depende de clulas especializadas localizadas no tegumento. O biomagnetismo ainda
um tema extremamente controverso no apenas em peixes, mas nos vertebrados em geral.
Entretanto, h consenso entre os autores que a truta (Onchorhynchus spp.), o salmo (Salmo
trutta), a enguia (Anguilla japonica) e o atum (Thunnus albacares) usam campos magnticos
para orientao espacial (Zavala-Camin 2004, Helfman et al. 2009). No caso da eletricidade,
esta j foi mais bem estudada, principalmente nos elasmobrnquios, que apresentam ampolas de
Lorenzini e uma sequncia relativamente bem estabelecida de uso de seus rgos sensoriais
(Hickman et al. 2004).
A mecanorrecepo em peixes est relacionada aos rgos que percebem som, equilbrio e
presso (Zavala-Camin 2004). O sistema da linha lateral, constitudo por clulas pilosas
organizadas em neuromastos, permite a deteco de vibraes (ondas) com origens diversas e
respostas a elas. Por sua vez, audio e equilbrio so funes do aparato vestibular dos peixes,
com suas clulas pilosas localizadas no ouvido interno42 (Moyle e Cech 2004), comentados a
seguir.

1.3 O ouvido interno dos peixes e a posio dos otlitos

Em termos estruturais, evolutivos e de anatomia comparada, a evoluo do aparato vestibular

dos peixes est pormenorizadamente descrita em Romer e Parsons (1985), Hildebrand e Goslow
(2006) e Kardong (2011), sumarizados a seguir.
O aparato vestibular (ou labirinto membranoso) dos peixes telesteos um rgo de equilbrio
que se origina filogeneticamente do sistema da linha lateral. Um tecido conectivo o suspende na
cpsula tica, que possui endolinfa e, externamente, rodeada por perilinfa. Ambos os fluidos
possuem uma constituio similar linfa. O aparato vestibular contm os canais semicirculares
(ou dutos endolinfticos) e possuem trs cpsulas ticas43 denominadas sacculus (ventral),

42
Em portugus a nomenclatura atual recomenda a aplicao do termo orelha interna, mas nesta obra ainda nos
referirmos como ouvido interno.
43
Em Myxini h somente uma cpsula tica e em Petromyzontida duas.

231
lagena (um divertculo do sculo) e utriculus (dorsal), orientados em trs planos espaciais. Cada
cpsula contm um par de otlitos (sagitta, asteriscus e lapillus) (Figura 1.2).

Canais semicirculares

Utriculus

Lapillus

Lapillus Lagena
Lagena Asteriscus
Sacculus Sagitta
Asteriscus
Sagitta Sacculus

Crebro

Figura 1.2 - Vista lateral do ouvido interno de um peixe telesteo e vista superior de sua
localizao na cabea (modificada de Secor et al. In Stevenson e Campana 1992).

No labirinto auditivo se encontram os receptores de equilibrio. Nestas cpsulas h clulas

receptoras pilosas, que se agrupam em mculas e em cuja cpula se encontra os otlitos. No
caso dos elasmobrnquios, estes no tm otlitos, mas sim otocnias, grnulos (cristais) de
carbonato de clcio. Os movimentos da cabea do peixe fazem com que a posio dos otlitos
varie, pressionando as mculas e informando o animal sobre sua posio. O equilbrio do peixe
depende do ngulo de incidncia e da intensidade da luz, pois sua orientao resulta da
decomposio da fora da gravidade da direo da luz (von Holst 1950).
Os otlitos dos telesteos so complexos policristalinos compostos principalmente de carbonato
de clcio precipitado na forma de aragonita e pequenas quantidades de outros minerais, imersos
dentro de uma matriz proteica (Campana 1999). Os trs pares de otlitos esto relacionados com
funo de equilbrio e audio (Popper e Fay 1993, Popper e Lu 2000). O acrscimo de clcio
um processo extracelular regulado por hormnios e influenciado por variaes na temperatura
ambiental (Morales-Nin 1986). A taxa de acumulao de clcio mais rpida em temperaturas
menores (Casselman 1990).

232
1.4 Usos e aplicaes dos otlitos

Os otlitos tem sido aplicados a diferentes tipos de estudos, associados a mltiplas disciplinas:
ecologia trfica, paleontologia, arqueologia, ecomorfologia, filogenia e biologia pesqueira. A
evoluo dos estudos com otlitos pode ser especialmente verificada atravs dos livros de
resumos e volumes especiais decorrentes da realizao dos International Otolith Symposium,
cuja primeira edio foi em Hilton Head (EUA) em 199344, depois em 199845 em Bergen
(Noruega), em 200446 em Townsville (Austrlia), em 200947 em Monterey (EUA) e 201448 em
Mallorca (Espanha) (Vaz-dos-Santos, no prelo).
Na ecologia trfica, devido a forma e estrutura dos otlitos serem especficos para cada espcie
(Koken 1884, Chaine e Duvergier 1931, Schmitd 1969, Torno 1976, Hecht 1987, Balds et al.
1997, Volpedo e Echeverra 2000, Campana 2004, Tuset et al. 2008, Furlani et al. 2007,
Baremore e Bethea 2010), so utilizados para identificar presas em contedos estomacais e em
fezes de ictifagos (Pierce e Boyle 1991, Bustos et al. 2012, 2014). Esta associao especfica
entre a morfologia dos otlitos e a espcie a qual pertencem permite determinar com exatido os
componentes das dietas de animais predadores de peixes. Geralmente se utiliza nestes estudos a
sagitta, por seu maior tamanho em relao aos outros otlitos (Pierce et al. 1991), permitindo
uma melhor observao de sua morfologia, alm de no sofrerem com a reabsoro de clcio
(Casselman 1990).
Na paleontologia, os primeiros estudos morfolgicos da face interna das sagittae foram
realizados por Koken (1884) e Chaine e Duvergier (1931). Posteriormente, outros autores
utilizaram estas estruturas para determinar espcies fsseis (Bassoli 1906). Nas ltimas dcadas,
os otlitos tm sido utilizados para estudar a paleofauna e suas comunidades (Nolf 1985, 1995,
2013, Elder et al. 1996, Andrus et al. 2002a, Reichenbacher et al. 2007, 2014, Aguilera 2010).
No campo da arquelologia o uso de otlitos se desenvolveu para a identificao de espcies h
mais de um sculo. Em 1891, no Rio Grande do Sul, Brasil, espcies fsseis foram identificadas
a partir desta estrutura (Ihering 1891 apud Fitch 1972). Na ltima dcada houve um
fortalecimento dos estudos arqueolgicos utilizando otlitos na Amrica do Sul (Scartascini et
al. 2008, 2015, Scartascini e Volpedo 2013), assim como revises de seus mtodos e aplicaes
nesta rea (Castello 1986, Campana 1999, 2005, Van Neer et al. 2002, Disspain et al., 2015).
Os estudos com otlitos mais representativos na rea de filogenia so os de Gaemers (1984),
Nolf (1985), Sasaki (1989), LAbee-Lund e Jensen (1993), Monteiro et al. (2005) e
Reichenbacher et al. (2007). Na dcada de 1990 foram desenvueltos estudos asociados ao

44
Secor, D.H., Dean, J.M., Campana, S.E., Miller, A., 1995. Recent developments in fish otolith research. The Belle
W. Baruch Institute for Marine Biology and Coastal Research by the University of South Carolina Press, Columbia.
45
Fisheries Research 46 (2000).
46
Marine and Freshwater Research 56 (5) (2005).
47
Environmental Biology of Fishes 89 (3) (2010).
48
ICES Journal of Marine Science 72 (7) (2015).

233
monitormaneto ambiental utilizando otolitos (Papalopoulou et al. 1980, Kalish 1990, Gauldie
1990, Radtke e Shafer 1992, Burke et al. 1993).
Na ecomorfologia o foco dos estudos nas ltimas dcadas foi o estabelecimento das reales
entre forma e tamanho dos otlitos com o meio ambiente e o comportamento dos peixes (e.g.
Gauldie 1988, Lombarte 1992, Popper e Platt 1993, Aguirre e Lombarte 1999, Lychakov e
Rebane 2000, Ramcharitar et al. 2001, 2004, Aguirre 2003, Tuset et al. 2003b, Volpedo e
Echeverra 2003, Cruz e Lombarte 2004, Lychakov et al. 2006, Lombarte e Cruz 2007, Volpedo
e Fuchs 2010, Volpedo et al. 2010, Jaramillo et al. 2014).
Entretanto, entre todas estas reas, seguramente as cincias pesqueiras foi aquela na qual os
otlitos forame so mais utilizados. O primeiro aspecto estudado foi a idade e o crescimento dos
peixes atravs de anis anuais, estacionais e dirios. Inicialmente estes estudos utilizaram
escamas (Creaser 1926, Fry 1943, Carlander 1950). Depois, com otlitos, o tema foi estudado
por diferentes autores (Pannella 1971, Yaez Arancibia e Leyton de Yaez 1977, Chilton e
Beamish 1982, Bori 1986, Casselman 1990, Sadovy e Severin 1992, Stevenson e Campana
1992).
Outro ponto fundamental para o manejo pesqueiro a identificao de estoques. Este um
conceito complexo, com diferentes definies e constitudo por vrios elementos (cf. Vaz-dos-
Santos et al. 2007a). Seguramente a melhor definio de estoque que se trata de um grupo
homogneo biologicamente para o manejo (Begg e Waldman 1999, Vaz-dos-Santos et al.
2007a). Neste contexto, o crescimento, a morfometria e a microqumica dos otlitos tm sido
aplicadas por diferentes autores, com sucesso (Cadrin et al. 2014).
Em nvel mundial os estudos de microqumica dos otlitos tm sido amplamente utilizados para
o estudar a biologia ambiental dos peixes e a identificao de estoques (Kerr e Campana 2014).
A maioria dos estudos se concentra em espcies comerciais do hemisfrio Norte, principalmente
Estados Unidos, Canad, pases do oeste e noroeste da Europa, Japo e China, sendo estas
metodologias pouco desenvolvidas nos pases do hemisfrio Sul, com exceo da Austrlia.
Particularmente na Amrica Latina, na ltima dcada estes estudos tem-se aprofundado, com
aplicaes em espcies marinhas e andromas da costa dos oceanos Atlntico e Pacfico
(Volpedo e Fernandez Cirelli 2006, Volpedo et al. 2007, Albuquerque et al. 2010, 2012, Mai et
al. 2014, Avigliano et al. 2016), sendo limitados os estudos em peixes de gua doce (Collins et
al. 2013, Pouilly et al. 2014, Avigliano et al. 2015a,b, Garcez et al. 2015, Hegg et al. 2015).
Vale ressaltar que o material da maioria destes estudos, nos seus diferentes temas, estpa
depositado em colees de referncia das diferentes reas e que, muitas esto apresentadas em
catlogos, como por exemplo Smale et al. (1995) para peixes da frica do Sul, Harkonen (1986)
para peixes do Atlntico Norte, Hecht (1987) e Williams e McEldowney (1990) para peixes da
Antrtida, Harvey et al. (2000) para peixes do Pacfico Nororiental, para os peixes da costa
portuguesa (Assis 2000, 2004), do Mediterrneo e do Atlntico Norte (Tuset el al. 2008), para

234
espcies estuarinas e de gua doce da Amrica do Norte (Campana 2004) e para espcies de
peixes temperados da Austrlia (Furlani et al. 2007). Houve ainda o desenvolvimento de
catlogos digitais de otlitos, como o criado por Baremore e Bethea (2010) para o Golfo do
Mxico e a base AFORO, que inclui um sistema automtico de identificao de espcies
baseado em descries matemticas do contorno dos otlitos (Lombarte et al. 2006).
Na Amrica do Sul os catlogos esto limitados a peixes da Argentina (Volpedo e Echeverra
2000), do Brasil (Braga e Goiten 1985, Bastos 1990, Corra e Vianna 1992/93, Lemos et al.
1992/93, Abilha e Corra 1992/93, Monteiro et al. 2005, Rondon et al. 2014, Rossi-
Wongtschowski et al. 2014) e da costa peruana (Godos 2001). No caso de peixes fsseis,
Aguilera (2010) apresentou um catlogo de otlitos e outras estruturas de peixes do Caribe da
Venezuela.
Outro ramo do uso de otlitos, no contemplado nesta obra, o da biomedicina, na qual tem-se
estudado o potencial de otlitos como biominerais, para regenerao ssea e dentria (Valido et
al. 2010, Oliveira et al. 2011, Costa et al. 2012, Bastos et al. 2013, Xavier-Filho et al. 2013).
A diversidade de aplicaes dos otlitos e todas suas potencialidades demandaram a
necessidade de instrumentar, de forma padronizada, os mtodos que permitam desenvolver
trabalhos de qualidade e que contribuam para o conhecimento e manejo dos recursos pesqueiros.
Esta obra, em seus diferentes captulos, apresenta os aspectos mais relevantes do estudo de
otlitos, buscando disseminar estes estudos em todos os pases de lngua espanhola e
portuguesa.

235
236
2. MORFOLOGIA DE OTLITOS

Carmen Lcia Del Bianco Rossi-Wongtschowski

Sumrio
2.1 Introduo...........................................................................................................................238
2.2 A forma dos otlitos: como e o que analisar.......................................................................241
2.3 Obteno de amostras de otlitos........................................................................................242
2.4 Anlise morfolgica dos otlitos.........................................................................................244
2.5 Anlise estatstica de dados morfolgicos...........................................................................245
2.6 O otlito sagitta...................................................................................................................250
2.7 O otlito asteriscus.............................................................................................................250
2.8 O otlito lapillus.................................................................................................................251
2.9 Bases da anlise morfomtrica de otlitos..........................................................................252
2.10 Anlise manual de otlitos................................................................................................252
2.10.1 rea e Permetro............................................................................................................252
2.10.2 Retangularidade..............................................................................................................254
2.10.3 Circularidade..................................................................................................................254
2.10.4 Fator de forma................................................................................................................254
2.10.5 Elipsidade.......................................................................................................................254
2.10.6 Outros ndices de forma.................................................................................................255
2.11. Ecomorfologia..................................................................................................................255
Agradecimentos.........................................................................................................................256
ANEXO 1. Classificao dos otlitos sagittae.........................................................................257
Formato do otlito.....................................................................................................................257
Regio anterior do otlito..........................................................................................................258
Regio posterior do otlito........................................................................................................258
Borda do otlito.........................................................................................................................259
Posio do sulcus acusticus.......................................................................................................260
Orientao do sulcus acusticus.................................................................................................260
Formato do sulcus acusticus.....................................................................................................261
Abertura do sulcus acusticus.....................................................................................................262
Formato do colliculum..............................................................................................................263
Ostium.......................................................................................................................................263
Cauda........................................................................................................................................264

237
Rostrum.....................................................................................................................................265
Antirostrum...............................................................................................................................265
Perfil do otlito.........................................................................................................................265
Orientao do rostrum e do antirostrum...................................................................................266

2.1 Introduo

O ouvido interno muito importante para os peixes, apresentando um mecanismo que mede o
movimento e o posicionamento da cabea em relao gravidade, sendo tambm um rgo de
deteco do som (Manley e Clarck 2004, Popper et al. 2005). Est localizado na parte ventral do
crebro, nos lados direito e esquerdo da cabea, sendo o labirinto membranoso composto por
trs canais semicirculares e trs cmaras conhecidas como rgos otolticos, denominados
sculo (sacculus), utrculo (utriculus) e lagena (lagena) (Popper e Lu 2000). Em cada uma
destas cmaras existem trs pares de estruturas calcrias, os otlitos, que so denominados
sagittae, lapilli e asterisci, respectivamente. Estes pares de otlitos ocorrem em todos os peixes
Teleostei, mas cada espcie apresenta caractersticas especficas no que diz respeito sua forma
e tamanho (Secor et al. 1992, Assis 2000).
Os otlitos so concrees formadas pela precipitao de substncias presentes no fluido
endolinftico, no sendo ossos verdadeiros, pois, diferentemente destes, no apresentam
ostecitos e osteoclastos49 e so formados por carbonato de clcio ao invs de fosfato de clcio
(Assis 2000, Wright et al. 2002a, Green et al. 2009). Todos os otlitos so compostos por
cristais de carbonato de clcio suspensos em uma matriz proteica, sendo que diferentes tipos de
cristais esto ligados a cada tipo de otlito: o carbonato de clcio normalmente depositado na
sagitta e no lapillus na forma de aragonita, enquanto que no asteriscus ocorre na forma de
cristais de vaterita. A vaterita tambm encontrada em muitos otlitos sagittae, anormais ou
cristalizados (Gauldie et al. 1997).
A funo especfica de cada rgo otoltico ainda no est totalmente esclarecida, mas o sculo
considerado o receptor de sons em muitos telesteos (Popper e Fay 1999, Popper e Lu 2000).
O utrculo est geralmente associado funo de equilbrio, embora tambm sirva para a
audio em muitas espcies (Denton et al. 1979, Blaxter et al. 1981, Popper et al. 2003). A
funo da lagena no est totalmente definida, embora se pense que tenha funo auditiva (Lu
et al. 2003, Meyer et al. 2004). Cada rgo otoltico contm um epitlio sensorial com muitas
clulas ciliadas mecanorreceptoras, sendo que a relao entre os movimentos desse epitlio e os
dos otlitos estimula tais clulas, dando informao ao peixe sobre sua posio em relao ao
ambiente que o rodeia (Popper e Lu 2000, Popper et al. 2003, Ladich e Popper 2004).

49
Clulas do tecido sseo.

238
O mecanismo auditivo dos peixes vem sendo exaustivamente investigado e tudo leva a crer que
ele se d atravs da interao entre movimentos dos otlitos e a vescula gasosa, que utilizada
como caixa de ressonncia (Hawkins 1993, Popper e Platt 1993).
Quanto aos conhecimentos atualmente existentes sobre a morfologia dos otlitos, apesar do
reconhecimento da importncia de todos os trs pares, existe uma enorme desproporo entre os
trabalhos que tratam de cada um deles, seja em nmero, seja em qualidade, o que gera um
deficiente conhecimento das caractersticas do asteriscus e do lapillus. Tambm o fato destes
dois pares de otlitos no serem comumente encontrados em estratos geolgicos faz com que
nem mesmo os paleoictiologistas tenham se dedicado a seu estudo (Assis 2000, 2004). Assim,
por seu tamanho e facilidade de extrao, os otlitos sagitta so os mais utilizados.
Os otlitos so muito importantes para estudos ictiolgicos, etnobiolgicos, paleontolgicos,
estratigrficos, arqueolgicos, zoogeogrficos, ecolgicos e biolgico-pesqueiros (Assis 2000,
Campana 2005, Morales-Nin e Panfili 2002a, Miller et al. 2010). Por serem resistentes a aes
qumicas e mecnicas do estmago e do intestino, so encontrados em fezes, bolos fecais,
intestinos e estmagos de animais ictifagos, revelando relaes presa-predador e, portanto,
permitindo a anlise da estrutura trfica de ecossistemas (Pascoe 1986, Corra e Viana 1992/93,
Pansard 2009, Rossi-Wongtschowski 2014). Por sua durabilidade e resistncia aes de
intempries, permanecem em sambaquis e em estratos fsseis (Voguel 1987, Corra e Viana
1992/93, Oliveira 2010, Schwarshans 2012, 2013, 2014). Por sua alta especificidade, os otlitos
so usados como caracteres taxonmicos consistentes na identificao de espcies de peixes (R
1986, Corra e Viana 1992/93, Lemos e Corra 1992/93, Volpedo e Echeverra 1997, 2000,
Assis 2000, 2004, Campana 2004, Tuset et al. 2008). Por apresentarem deposio peridica de
anis (La Mesa et al. 2010), tem enorme importncia nos estudos sobre idade e crescimento de
populaes naturais, informao importante para a cincia pesqueira.
Levando em conta: (i) sua relativa homogeneidade em cada espcie e considervel variao
entre espcies distintas, ainda que prximas filogeneticamente (possivelmente por fazerem parte
de um rgo sensorial extremamente conservador e estreitamente associado ao sistema
nervoso); (ii) por serem formados em uma fase muito inicial do desenvolvimento dos peixes e;
(iii) por sofrerem um processo de crescimento microestrutural fortemente influenciado por
variaes ambientais, os otlitos contm informaes que podem ser analisadas atravs de sua
morfologia e das caractersticas fsico-qumicas de elementos neles presentes.
Os otlitos apresentam forma bem definida, caractersticas do grupo taxonmico ao qual o peixe
pertence, sendo que as diferenas morfolgicas entre espcies distintas so tanto mais
acentuadas quanto mais afastados eles forem sob o ponto de vista filogentico (Assis 2004).
Vrias publicaes incluram um histrico sobre a evoluo dos conhecimentos relacionados ao
estudo dos otlitos de peixes, podendo-se citar dentre as mais completas Hecht (1987), Assis
(2004) e Tuset et al. (2008).

239
Desde o final dos anos 1970, inmeros trabalhos foram publicados contendo desenhos ou
fotografias detalhadas destas estruturas. A estes trabalhos foram recentemente adicionados
catlogos tornando possvel a identificao das espcies a qual pertencem. Neste rol, pode-se
mencionar: Schmidt (1968) um catlogo de otlitos de peixes do Atlntico leste; Morrow (1977,
1979), de peixes da costa americana do Atlntico norte; Nolf (1985), de espcies com ampla
distribuio e tambm otlitos fsseis; Hrknen (1986), de peixes do Mar do Norte; Hecht
(1987) e Smale et al. (1995), de espcies da frica do Sul; Williams e McEldowney (1990), de
espcies da regio Antrtica australiana; Rivaton e Bourret (1999), do Indo Pacifico; Naveda
(2001), do Peru; Volpedo e Echeverra (2000) da Argentina; Assis (2000, 2004), de regies
costeiras, estuarinas e rios de Portugal; Campana (2004), de espcies da Amrica do Norte;
Furlani et al. (2007) para a Austrlia; Rossi-Wongtschowski et al. (2014), para peixes da regio
sudeste-sul do Brasil. Recentemente, Nolf (2013) publicou um compndio apresentando a
diversidade de otlitos recentes e aqueles encontrados em stios arqueolgicos.
A estes trabalhos, que tratam especificamente da forma dos otlitos, muitos outros autores,
reconhecendo a importncia da morfologia dessas estruturas, incluram em seus estudos, embora
direcionados a outros objetivos, imagens e descries detalhadas dos mesmos. Dentre eles
podem ser citados: Rodriguez-Roda (1980), Gauldie (1988), Messieh et al. (1989), Lombarte e
Castelln (1991), Lombarte (1992), Popper e Platt (1993), Campana e Casselman (1993),
Lombarte e Morales-Nin (1995), Nielsen (1995), Aguirre e Lombarte (1999), Lychakov e
Rebane (2000), Volpedo e Echeverra (2000, 2003), Ramcharitar et al. (2001, 2004), Morales-
Nin e Panfili (2002a), Tuset et al. (2003a, 2003b, 2006), Assis (2003, 2004, 2005), Aguirre
(2003), Cruz e Lombarte (2004), Lychakov et al. (2006), Lombarte e Cruz (2007), Cardinale et
al. (2004). O mais inovador estudo sobre a morfologia dessas estruturas consta do
desenvolvimento de um sistema de scanner para a obteno de imagens em 3D (Lombarte et al.
2006).
Durante o 5th International Otolith Symposium50, realizado em 2014, em Palma de Mallorca,
Espanha, foram apresentados diversos estudos que permitiram avaliar a multiplicidade de
aplicaes dos otlitos nos seguintes campos: taxonomia, filogenia, diversidade, comparao do
tempo de vida e budgets de energia em diferentes populaes, cronologia de eventos ambientais
direta (metabolismo) ou indiretamente (disponibilidade de alimento), disperso de larvas,
perodos e mortalidade larvais, falhas de recrutamento, padres de reteno larval, tempo de
exposio dos peixes a contaminantes, processos antropognicos (causando alterao na
abundncia e na diversidade de componentes do ecossistema), bioindicadores de
pulsos/mudanas ambientais, avaliao do efeito de reas de proteo e manejo de pescarias,
discriminao da origem de espcies, diversidade de colonizao de ambientes, introduo e
invaso de espcies novas, identificao da dieta de outros animais, metamorfose, proporo de
50
Ver IOS2014 Book of Abstracts.pdf

240
populaes distintas, histria de vida, geolocao (retrospectiva de deslocamentos,
principalmente para peixes estuarinos), arqueologia, fisiologia, contaminao (por selnio,
mercrio e outros elementos), relaes entre as caractersticas dos otlitos e nicho trfico,
ecomorfologia, efeitos de mudana na dieta (em aquicultura), panmixia, migraes
transocenicas, marcas de assentamento e de reas de berrio, reconstruo da histria de
migrao de juvenis, segregao, parasitismo, compreenso do estado das pescarias (sries
temporais), posio trfica, diferenciao entre formas de espcies vivendo em guas rasas ou
profundas, estrutura de populaes, estimativa de mortalidade (natural tag) e conectividade
entre populaes. Finalmente, vale citar a importncia destas estruturas para a avaliao de
mudanas climticas causadas pela acidificao dos oceanos, como mostra estudo de Checkley
et al. (2009) publicado na revista Science e muitos outros apresentados naquele simpsio.

2.2 A forma dos otlitos: como e o que analisar

Segundo Assis (2000), enquanto que a variabilidade intraespecfica ao nvel dos otlitos est
essencialmente relacionada com pequenos detalhes da organizao (e.g. o recorte das margens
ou o relevo superficial) e com ndices biomtricos, de espcie para espcie, de gnero para
gnero, e ainda mais de famlia para famlia, existem diferenas mais ou menos pronunciadas
de tamanho, forma geral, orientao e constituio, as quais permitem uma identificao at
espcie e, em alguns casos, at ao nvel da populao. A este respeito, os otlitos de algumas
espcies, em particular a morfologia do seu perfil e alguns aspectos da sua estrutura e
composio qumica, tm-se revelado importantes auxiliares na delimitao de unidades
populacionais de peixes ocenicos. Alm disso, pode-se ainda mencionar a existncia de
referncias ocorrncia de dimorfismo sexual mais ou menos acentuado em espcies de
algumas famlias de peixes, como nos Ciclidae e Ophidiidae.
A ttulo de exemplo apresentamos na Figura 2.1 variaes nas formas dos otlitos de diversas
espcies.

241
Figura 2.1 Variao das formas dos otlitos. (A) Bregmaceros atlanticus. (B) Micropogonias
furnieri. (C) Stellifer brasiliensis. (D) Gadella imberbes. (E) Cynoscion virescens. (F)
Merluccius hubbsi (G) Urophycis brasiliensis. (H) Menticirrhus littoralis. (I) Serranus
atrobranchus. (J) Malacocephalus occidentalis. (L) Oligoplites saliens (Foto: Cesar Santificetur e

Alexandre Arackawa. Fonte: LABIC- IOUSP51,).

2.3 Obteno de amostras de otlitos

Inicialmente, a identificao taxonmica correta dos exemplares de peixes coletados deve ser
realizada com base em chaves de identificao atualizadas, fator da maior importncia para
estudos com otlitos. Entre elas podemos citar o Catalog of Fishes, de Eschmeyer52 (Eschmeyer
e Fricke 2015).
Os peixes destas amostras podem ser obtidos em campanhas cientficas dirigidas sua captura,
em estabelecimentos comerciais ou junto a pescadores, bem como atravs de contatos com
pessoas e grupos de trabalho de outras instituies. Em todos estes casos importante obter,
sempre que possvel, toda a gama de tamanhos da espcie a ser analisada (representatividade
ontogentica), fato que permitir a anlise da variabilidade intraespecfica das caractersticas
morfolgicas dos otlitos, bem com a aplicao de anlises estatsticas aos dados obtidos.

51
Laboratrio de Ictiofauna e Crescimento Instituto Oceanogrfico da Universidade de So Paulo.
52
http://research.calacademy.org/research/ichthyology/catalog/fishcatmain.asp

242
Subamostras podem ser organizadas quando as amostras forem muito grandes, devendo ser
realizadas de modo estratificado, contendo um mesmo nmero de exemplares para cada classe
de comprimento, de preferncia, 10 peixes.
De cada peixe da amostra/subamostra preciso obter o comprimento total, o comprimento
padro e o peso total. Deve-se evitar a escolha de exemplares que apresentem deformaes. O
sexo de cada exemplar deve ser identificado, porque pode ocorrer variao na forma dos otlitos
de fmeas e de machos (Wilson et al. 1991, Cardinale et al. 2004).
A extrao dos otlitos depende da habilidade do pesquisador/acadmico, bem como do
tamanho do peixe e, portanto de seu otlito. Vrias so as tcnicas utilizadas, podendo-se
consultar, dentre outros, os manuais de Holden e Raitt (1975), Secor et al. (1991) e Panfili et al.
(2002). A ttulo de exemplo apresentamos a retirada de otlitos da abrtea, Urophycis
brasiliensis (Figura 2.2). Aps extrao, os otlitos devem ser lavados em gua ou etanol (70%)
para retirada das membranas que os envolvem e, depois de completamente limpos, devem ser
secados e armazenados, individualmente, em envelopes de papel ou frascos adequadamente
etiquetados.

243
Figura 2.2 Extrao dos otlitos sagittae da abrtea, Urophycis brasiliensis. (A) Biometria do
comprimento total (440 mm). (B) e (C) Vista ventral da abertura do oprculo. (D) Vista ventral
da base do crnio. (E) Vista ventral da caixa craniana fechada. (F) Extrao dos otlitos sagittae
aps corte da caixa craniana; setas indicando a localizao dos otlitos nas cmaras do ouvido
interno (Fotos: Alexandre Arackawa. Fonte: LABIC-IOUSP).

2.4 Anlise morfolgica dos otlitos

Esta anlise feita em estereomicroscpio ou microscpio com luz incidente e segue as

seguintes etapas:
- verificao da semelhana entre o otlito direito e o esquerdo do par, e escolha de qual deles
usar;
- separao de, pelo menos, 10 otlitos por classe de comprimento dos peixes. Quando este
nmero no estiver disponvel deve-se usar o maior nmero de otlitos disponveis na classe;
- escolha das feies a serem analisadas (diferentes autores usam feies distintas). Procurando

244
padronizar e tornar possvel comparaes sugerimos o uso de 15 feies, baseadas em Tuset et
al. (2008) e Assis (2004) as quais so apresentadas no Anexo 1;
- anlise do otlito quanto s feies escolhidas;
- estimativa das porcentagens de cada caracterstica/feio;
- elaborao da descrio das feies analisadas;
- organizao de chaves de identificao para cada espcie, a partir das feies analisadas;
- fotografia ou desenho de pelo menos um exemplar de cada tamanho dos otlitos; nesta fase o
uso de grafite para realar feies opcional.

A ttulo de exemplo, apresentamos resultados de estudos realizados com Malacocephalus laevis

(Figura 2.3).

2.5 Anlise estatstica de dados morfolgicos

Os dados morfolgicos dos otlitos devem ser dispostos em tabelas de frequncias, contendo o
nmero de indivduos por tipo de classificao/caracterstica/feio e por classe de comprimento
total (Tabela 2.1). Em seguida calcula-se a porcentagem de indivduos que apresentam uma
mesma varivel morfolgica, por classe de comprimento (Figura 2.4).
Um teste qui-quadrado de heterogeneidade aplicado para aquelas feies nas quais ocorre
mais de uma classificao, sendo analisadas as diferenas dentro e entre as classes de
comprimento total e para o total amostrado. Esse teste tem a funo de verificar se a distribuio
dessas caractersticas ou no homognea dentro de cada classe de comprimento e se ocorre
variao ontogentica (cf. Captulo 7).

245
Figura 2.3 Ilustraes (acima) e fotografias (abaixo) de otlitos de Malacocephalus laevis com
comprimento total de: (A) 294 mm (REV.AF.1002.2), (B) 345 mm (REV.AF.1142.1) e (C) 424
mm (REV.AF.1129.1). Face interna A1, B1 e C1; Face externa A2, B2 e C2; e Perfil ventral
A3, B3 e C3. (Ilustradora: Jssica Falchi Caador, Fotos: Cesar Santificetur. Fonte: LABIC-IOUSP).

246
Figurra 2.4 Grfico de setoores represeentando a vaariao ontogentica da borda dorsaal dos
otlittos sagitta dee Urophycis mystacea. No
N foram obtidas
o amostras para as classes 580--599 e
600-6619 mm (Fontte: LABIC-IOUSPP).

247
 Tabela 2.1 Exemplo para o clculo do 2 para a borda dorsal do otlito sagittae de Urophycis mystacea (Fonte: LABIC-IOUSP).

Frequncia absoluta de indivduos (RA) Frequncia esperada Clculo do 2 de cada categoria

Classes de Graus de P valor
Lobada a Lobada Sinuosa Lobada a Lobada Sinuosa Lobada a Lobada Sinuosa 2 Liberdade (< 0,05)
comprimento Lobada Sinuosa Lisa Total Lobada Sinuosa Lisa Lobada Sinuosa Lisa
sinuosa a lisa a lisa sinuosa a lisa a lisa sinuosa a lisa a lisa
padro (mm)
180-199 0 0 2 0 0 0 2 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 8,33 0,33 0,33 0,33 10,00 5 0,08
200-219 1 0 2 0 0 0 3 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 4,50 0,50 0,50 0,50 7,00 5 0,22
220-239 0 0 3 0 0 0 3 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 12,50 0,50 0,50 0,50 15,00 5 0,01
240-259 0 0 1 0 0 0 1 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 4,17 0,17 0,17 0,17 5,00 5 0,42
260-279 0 0 0 0 1 0 1 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 4,17 5,00 5 0,42
280-299 0 0 0 0 5 0 5 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 0,83 20,83 25,00 5 0,00
300-319 0 0 0 1 1 0 2 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 1,33 1,33 1,33 5,00 5 0,42
320-339 0 2 0 0 3 5 10 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 0,07 1,67 1,67 1,67 1,07 7,80 5 0,17
340-359 0 1 0 2 3 4 10 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 0,27 1,67 0,07 0,07 1,07 4,80 5 0,44
360-379 0 0 0 1 1 8 10 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 0,27 0,27 0,27 5,80 5 0,33
380-399 0 0 0 0 2 8 10 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 0,07 8,40 5 0,14
400-419 0 3 0 0 1 6 10 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,67 1,07 1,67 1,67 1,67 0,27 8,00 5 0,16
420-439 0 1 0 0 0 5 6 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 0,00 1,00 1,00 1,00 1,00 5,00 5 0,42
440-459 0 0 0 0 0 6 6 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00 6,00 5 0,31
460-479 0 0 0 2 0 2 4 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 2,67 2,67 0,67 8,00 5 0,16
489-499 0 0 0 1 1 7 9 1,50 1,50 1,50 1,50 1,50 1,50 1,50 1,50 1,50 0,17 0,17 0,17 5,00 5 0,42
500-519 0 0 0 0 0 2 2 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 2,00 5 0,85
520-539 0 0 0 0 0 4 4 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 0,67 4,00 5 0,55
540-559 0 0 0 0 0 1 1 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 1,00 5 0,96
560-579 0 0 0 0 0 2 2 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 2,00 5 0,85
620-639 0 0 0 0 0 1 1 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 0,17 1,00 5 0,96
Total 1 7 8 7 18 61 102 17,00 17,00 17,00 17,00 17,00 17,00 15,06 5,88 4,76 5,88 5,88 0,06 37,53 5 0,00
Porcentagens 0,98 6,86 7,84 6,86 17,65 59,80 100,00 16,67 16,67 16,67 16,67 16,67 16,67 14,76 5,77 4,67 5,77 5,77 0,06 140,80 105 0,01
2 heterogeneidade 103,27 100 0,39

248
Atualmente, as anlises da forma dos otlitos so facilmente realizadas utilizando tcnicas de
imagem (Figura 2.5) com equipamentos que permitem fotografar, digitalizar e analisar as
estruturas detalhadamente e com grande preciso.

Figura 2.5 Equipamentos utilizados para captao de imagens ampliadas dos otlitos. (A)
Discovery V.8 Estereomicroscpio, Carl Zeiss. (B) Discovery V.12 Estereomicroscpio, Carl
Zeiss (Fotos: Cesar Santificetur. Fonte: LABIC-IOUSP).
2.6 O otlito sagitta

So os mais utilizados, pois: (i) apresentam dimenses e facilidade de extrao na maioria das
espcies; (ii) so frequentes em registros fsseis e nos contedos estomacais de predadores; (iii)
apresentam relativa homogeneidade dentro de uma mesma espcie, mas variam
consideravelmente entre espcies; (iv) possuem elevado nmero de caractersticas facilmente
identificveis, e; (v) so de grande utilidade em estudos sobre idade e crescimento.

2.7 O otlito asteriscus

Os asterisci frequentemente so os otlitos mais frgeis e, por isto, os mais difceis de extrair e
limpar sem que se quebrem. Alm disso, por apresentarem dimenses reduzidas e poucas
caractersticas morfolgicas marcantes, tem sido pouco utilizados na diagnose de taxa icticos.
Para este par de otlitos poucos so os estudos morfolgicos detalhados que permitem a
identificao e designaes de suas partes e estruturas, como os de Assis (2000, 2004).
Entretanto, nos peixes Pleuronectiformes (linguados e afins), os asterisci, apesar de diminutos,
so dotados de considervel dureza e, nos Ostariophysi (com exceo dos Siluriformes) eles so
os mais desenvolvidos e volumosos (Mollo 1981, Assis 2000, 2004). Assim, nos estudos
referentes aos Ostariophysi, os asterisci que so utilizados, pois neles as sagittae so muito
difceis de extrair e manusear.
Assis (2000) alerta para o fato de que: em termos estruturais possvel encontrar uma
marcada semelhana entre os asterisci e os sagittae da maioria dos peixes, o que sugere a
possibilidade da utilizao de uma terminologia semelhante para os dois pares de otlitos, mas
o facto de se tratar de peas anatmicas distintas, entre as quais existem frequentemente
marcadas diferenas na orientao e topografia das partes e estruturas que as constituem, a
semelhana em forma e posio relativa entre sagittae e asterisci apenas circunstancial, no
existindo qualquer homologia entre as estruturas dos dois pares de otlitos. Consequentemente,
uma total coincidncia de nomes, mesmo entre estruturas com aspecto e posio relativamente
semelhantes nos dois pares de otlitos, alm de ilegtima, pode suscitar confuso em obras que
abordem os dois pares simultaneamente.
Este autor, como forma de assinalar a semelhana estrutural entre sagittae e asterisci, no
criando demasiada disrupo na terminologia j empregue por vrios autores, optou pela
atribuio, a algumas partes e estruturas dos asterisci, de uma terminologia correspondente
sagittae, as quais poderiam, caso se entendesse salientar a semelhana, ser designadas de
forma idntica. No entanto, uma vez que as designaes correspondem a estruturas de otlitos
diferentes, distingui-las mantendo as referentes aos sagittae inalteradas, e acrescentando s
dos asterisci o nome do otlito no caso genitivo singular.

250
2.8 O otlito lapillus

Os lapilli so normalmente muito pequenos e, morfologicamente possvel distinguir dois

tipos: o clupeiforme e o no clupeiforme. O primeiro tipo, presente nos peixes Clupeiformes53,
apresenta forma tetradrica enquanto o segundo, que ocorre na maioria dos demais taxa
arredondado e volumoso (Assis 2000, 2005).
Entre os trs pares de otlitos, os lapilli so os que tm forma mais regular e mais homognea
em todos os peixes sseos e, consequentemente, o menor nmero de caractersticas utilizveis
para a diagnose das espcies. A grande maioria dos trabalhos em que os lapilli so empregados
est relacionada aos Ostariophysi, em particular aos Siluriformes (Assis 2000, 2005, Martnez e
Monasterio de Gonzo 1988, 1991, Volpedo e Fuchs 2010).
A face ventral dos lapilli aquela que, por permitir a visualizao de um maior nmero de
caractersticas, a mais adequada para a observao e descrio dessas estruturas. As
caractersticas morfolgicas mais relevantes para anlise esto descritas em Mollo (1981),
Volpedo e Echeverra (2000) e Assis (2000, 2005).
A ttulo de exemplo, apresentamos os trs pares de otlitos da espcie Urophycis brasiliensis,
representado na Figura 2.6.

Figura 2.6 Exemplo dos trs otlitos esquerdos de Urophycis brasiliensis. (A) Sagitta. (B)
Asteriscus. (C) Lapillus (Foto: Cesar Santificetur. Fonte: LABIC-IOUSP).

53
Pequenos pelgicos, como as sardinhas, manjubas e anchovas.

251
2.9 Bases da anlise morfomtrica de otlitos

Esta anlise deve ser realizada em esteromicroscpio ou microscpio, que neste caso devem
possuir oculares micromtricas. Hoje em dia existem vrios equipamentos pticos que permitem
realizar as medidas diretamente. Esta anlise compreende as seguintes fases:
- medio do comprimento do otlito (OL): a maior distncia ao longo de uma reta paralela ao
eixo anterior-posterior do otlito;
- medio da altura do otlito (OH): esta medida refere-se maior distncia, na perpendicular,
no eixo dorso-ventral do otlito;
- medio da espessura do otlito (OT): a distncia mxima entre duas linhas paralelas
tangentes aos pontos mais interior e mais exterior do otlito;
- obteno do peso do otlito (OW);
- clculo de ndices biomtricos ou de forma: rea, permetro, circularidade, retangularidade,
elipsidade.

2.10 Anlise manual de otlitos

2.10.1 rea e Permetro

Antigamente, antes do desenvolvimento dos atuais aparelhos pticos que fazem isto
diretamente, o clculo da rea dos otlitos (OA) era realizado atravs de imagem obtida em
cmara clara, projetada em papel milimetrado. O valor do aumento utilizado era anotado. A
somatria dos valores dos quadradinhos, divididos pelo valor do aumento utilizado, permitia
uma avaliao aproximada da rea do otlito.

Qi + Qt
OA =
2
Onde:
OA = rea do otlito;
Qi = quadrados inteiros (cinza claro);
Qt = quadrados totais (cinza claro + cinza escuro).

252
Assim como em relao rea, nas primeiras anlises o permetro (OP) era calculado com o
valor do contorno dos otlitos, muitas vezes utilizando um barbante, que depois era esticado,
para se obter a medida encontrada.
Atualmente, nos equipamentos e programas utilizados, h softwares que fazem estes clculos
diretamente, no importando o formato do otlito. Abaixo apresentamos exemplos destes
clculos para a rea e o permetro, respectivamente:

OA( x ) = g ( xi , yi )
if

Onde:
OA(x) = rea do otlito;
g = rea do quadrado;
x = eixo x;
y = eixo y.
, 1
, 0

4 2

Onde a soma dos pixels da borda do otlito em diferentes direes d a medida do permetro:
OP = permetro do otlito;
a = tamanho do pixel;
N0, N90, N45 e N135= soma de pixels para os ngulos 0, 90 , 45 e 135, respectivamente.

253
2.10.2 Retangularidade

OA
Re =
OL OH
Onde:
Re = retangularidade;
OA = rea do otlito;
OL = comprimento do otlito;
OH = altura do otlito.

2.10.3 Circularidade

OP 2
Ci =
OA
Onde:
Ci = circularidade;
OP = permetro do otlito;
OA = rea do otlito.

2.10.4 Fator de forma

4 OA
Ff =
OP2
Onde:
Ff = fator de forma;
OA = rea do otlito;
OP = permetro do otlito.

2.10.5 Elipsidade

OL OH
El =
OL + OH
Onde:
El = elipsidade;
OL = comprimento do otlito;
OH = altura do otlito.

254
2.10.6 Outros ndices de forma

Na literatura sobre morfometria, existem ainda outros ndices de forma (cf. Captulo 3). Entre
eles, destacamos trecho retirado de Lombarte e Tuset54: nas ltimas dcadas, foram
desenvolvidos vrios ndices de forma para determinar a similaridade do otlito com uma
forma geomtrica (Russ 1990, Rosin 2003). Os mais empregados tem sido a retangularidade
(neste caso, calculada como a razo entre a rea do otlito em relao ao retngulo mnimo
que o compreende), a convexidade A (razo entre a rea do otlito e da polgono mnimo que
compreende todo o otlito) e a convexidade L (razo entre o permetro e o polgono mnimo
que compreende o otlito).

2.11. Ecomorfologia

Estudos recentes tem mostrado a importncia da forma dos otlitos para avaliar a estrutura
funcional de comunidades de peixes. Volpedo e Echeverra (2003), Langerhans et al. (2004),
Monteiro et al. (2005), Clabaut et al. (2007), Volpedo et al. (2008) e Lombarte et al. (2010)
desenvolveram anlises para testar o significado e valor das relaes entre a forma do corpo (e
dos otlitos) e as caractersticas ecolgicas de peixes. Ao mesmo tempo, anlises foram
utilizadas para medir a variabilidade da biodiversidade no tempo e no espao (Neige 2003,
McClain et al. 2004, Lombarte et al. 2012). A distribuio espacial das formas dos peixes (e de
seus otlitos) permite avaliar a complexidade estrutural de comunidades e tambm mudanas
resultantes de perturbaes naturais e antropognicas (Lombarte et al. 2012). Tais estudos
utilizam conceitos de morfologia geomtrica baseada em anlises de marcos anatmicos (cf.
Captulo 3), os quais descrevem o formato de um peixe atravs da posio de caracteres
morfolgicos (Rohlf e Marcus 2003).
A ecomorfologia ou morfologia ecolgica baseada na premissa de que a ecologia de um
organismo est relacionada sua forma, ou seja, existe forte interao entre os fatores
endgenos e do meio em que ele vive, permitindo o estudo da diversidade em diversos nveis:
(i) entre indivduos da mesma espcie; (ii) entre espcies diferentes; (iii) entre guildas e (iv)
entre comunidades. As diferenas morfolgicas presentes (no corpo ou nos otlitos) indicam
estratgias adaptativas distintas, pois a forma de um organismo (e de seu otlito) est fortemente
relacionada sua taxonomia, devido influncia de fatores filogenticos.
Recentemente, Recasens et al. (2006), Lombarte et al. (2012), Farr et al. (2013)
desenvolveram ndices morfogeomtricos (Ecomorphological Diversity Index - EDI,
Morphological Richness - MR) para peixes, incluindo a caracterizao geral da forma do corpo,
cabea, olhos, boca e a posio e comprimento das nadadeiras, os quais fornecem uma viso da
54
Originalmente integrado ao Captulo 3 Morfometria de otlitos.

255
estrutura das assembleias, os processos ecolgicos e evolutivos que as estruturam.
Em adio anlise morfofuncional dos peixes, novos ndices morfolgicos, baseados em
anlises do contorno de otlitos sagitta tem possibilitado a avaliao da diversidade das
assembleias de peixes em diferentes escalas temporais. Por sua funo na audio e na natao
dos peixes, os otlitos preservam elementos qumicos da gua, cuja absoro influenciada
pelos fatores ambientais, filogenticos e funcionais (Nolf 1985), refletindo nas suas feies de
forma. A anlise de contorno em otlitos tem sido amplamente utilizada para a identificao de
ecotipos como ferramenta para discriminao e manejo de estoques, como por exemplo, na
China (Agera e Brophy 2011), na Austrlia (Fergusson et al. 2011) e no Mar Mediterrneo
Oeste (Radhakrishnan et al. 2012). Capoccioni et al. (2011) avaliaram os efeitos ontogenticos e
ambientais na variabilidade morfolgica de otlitos de enguias na Itlia. Tuset et al. (2014)
usaram os otlitos sagittae e o dimetro do olho para caracterizar duas espcies de peixes de
profundidade do gnero Aphanopus spp.. Vignon (2012) analisou a interao entre o
crescimento do otlito de Lutjanus kasmira e as variveis ambientais na Polinsia Francesa.
Durante um workshop realizado dentro do 5th International Otolith Symposium55, foram
divulgados vrios estudos que esto sendo desenvolvidos visando anlise da morfologia
geomtrica de otlitos, usando diferentes tcnicas, dentre elas: anlises de contorno, anlise de
Fourier, marcos anatmicos, ondaletas, simulao de Monte Carlo, classificao automtica e
ndices de forma. Devido ao elevado grau de complexidade, recomenda-se leitura aprofundada
no tema nos artigos originais.

Agradecimentos

A todos os pesquisadores do LABIC-IOUSP que vem trabalhando arduamente nas diversas

reas ligadas ao estudo dos otlitos e, especialmente, a aqueles que contriburam na preparao
deste captulo: Cesar Santificetur, Valria Conversani, Carolina Siliprandi, Marina Brenha-
Nunes e Alexandre Arackawa.

55
Ver IOS2014 Book of Abstracts.pdf

256
ANEXO 1. Classificao dos otlitos sagittae

Com a devida permisso dos autores e procurando utilizar uma classificao que torne
comparvel diferentes estudos, abaixo apresentamos 15 caractersticas que permitem descrever
a morfologia das sagittae (baseada em Tuset et al. 2008 e Assis 2004).

Formato do otlito

As linhas que marcam a silhueta do otlito, no levando em conta pequenos detalhes e entalhes
nas bordas e relevos das faces, definem o formato geral do otlito. Os otlitos tm o seu formato
bastante variado podendo ser classificados em vinte e quatro tipos diferentes, como apresentado
na Figura 2.7. Entretanto, alguns otlitos podem no se encaixar em um nico tipo, sendo
intermedirios entre duas formas. Neste caso, acrescenta-se o artigo a entre duas
classificaes indicando que o otlito em questo apresenta caractersticas de ambos os
formatos.
1 2 3 4

5 6 7 8

9 10 11 12

13 14 15 16

17 18 19 20

21 22 23 24

Figura 2.7 Classificao do formato do otlito. Adaptado de Tuset et al. (2008). 1: ampulheta,
2: lobado, 3: piriforme, 4: alto, 5: cuneiforme, 6: irregular, 7: quadrado, 8: triangular, 9:
discoidal, 10: elptico, 11: oval, 12: semicircular, 13: romboidal, 14: pentagonal, 15: hexagonal,
16: fusiforme, 17: sagital, 18: lanceolado, 19: retangular, 20: forma de bala, 21: trapezoidal, 22:
forma de lana, 23: reniforme, 24: oblongo.

257
Regio anterior do otlito

a poro que vai da parte mais anterior at o centro do otlito. A Figura 2.8 ilustra as dez
classificaes usadas para classificar os tipos de regio anterior, abaixo descritas:
- irregular: a regio no tem uma forma definida;
- lanceolada: a regio simtrica apresenta ponta longa, semelhante a uma lana;
- oblqua: a regio apresenta assimetria marcante, com pice claramente desviado para a regio
dorsal ou para a regio ventral;
- redonda: a regio regular e curva;
- pontiaguda: a regio tem apenas uma ponta que forma claramente um ngulo agudo;
- bico duplo: forma semelhante pontiaguda, porm tem dois ngulos agudos;
- achatada: a regio bem plana;
- angular: a regio apresenta uma curva acentuada e curta que forma um ngulo quase reto ou
obtuso;
- entalhada: na regio o otlito apresenta rostrum e antirostrum bem definidos e uma excisura
notvel entre eles;
- partida: a regio prolongada e progressiva terminando em ponta plana.

Regio posterior do otlito

A regio posterior a poro que vai da parte mais posterior ao centro do otlito, e sua
classificao igual a da regio anterior, podendo ocorrer pseudorostrum, pseudoantirostrum e
excisura caudalis, estruturas que, como as da regio anterior, ajudam a classificao.

258
 1 2 3 4

5 6 7 8

9 10 11

Figura 2.8 Classificao da regio anterior e posterior do otlito. Adaptado de Tuset et al.
(2008). 1: pontiagudo, 2: angular, 3: entalhada, 4: partida, 5: bico duplo, 6: redonda, 7:
achatada, 8: obliqua, 9 e 10: lanceolada, 11: irregular.

Borda do otlito

O nmero de bordas varia de acordo com a espcie, sendo possvel distinguir duas ou mais
bordas que so classificadas de acordo com o seu recorte, como mostra a Figura 2.9.

1 2 3

4 5

6 7

Figura 2.9 Classificao das bordas dos otlitos. Adaptado de Tuset et al. (2008). 1: lisa, 2:
irregular, 3: lobada, 4: denteada, 5: sinuosa, 6: serrilhada, 7: crenulada.

- lisa: borda sem qualquer estrutura visvel;

259
- irregular: borda composta apresentando diferentes formatos visveis, espaados
irregularmente;
- lobada: borda composta por lbulos redondos e separada por profundos entalhes;
- denteada: borda composta por projees mais largas na poro marginal, semelhantes a um
dente;
- sinuosa: borda formada por estruturas mais ou menos regulares;
- serrilhada: borda com dentes semelhantes a uma serra;
- crenulada: borda formando ondas mais ou menos visveis.

Posio do sulcus acusticus

O sulcus acusticus uma estrutura com profundidade varivel, porm normalmente bem
marcado, que divide o otlito longitudinalmente em duas partes (regio ventral e regio dorsal).
Em relao a sua posio no otlito o sulcus acusticus pode ser classificado de trs maneiras,
como mostra a Figura 2.10.

1 2 3

Figura 2.10 Classificao da posio do sulcus acusticus. Adaptado de Tuset et al. (2008). 1:
inframediano, 2: mediano, 3: supramediano.

- inframediano: o sulcus acusticus est mais prximo da borda ventral do otlito;

- mediano: o sulcus acusticus est equidistante da borda ventral e dorsal do otlito;
- supramediano: o sulcus acusticus est mais prximo da borda dorsal do otlito.

Orientao do sulcus acusticus

A tendncia ou direo geral que o sulcus acusticus apresenta denominada de orientao do

sulcus acusticus e pode se apresentar de trs maneiras (Figura 2.11).

260
Figura 2.11 Classificao da orientao do sulcus acusticus. A. horizontal (Decapterus
punctatus); B. descendente (Selene vomer) e C. ascendente (Menticirrhus americanus) (Ilustradora:
Silvia de Almeida Gonsales. Fonte: LABIC-IOUSP).

- horizontal: ostium e cauda na mesma linha;

- descendente: cauda est mais baixa que o ostium;
- ascendente: cauda est mais alta que o ostium.

Formato do sulcus acusticus

O formato do sulcus acusticus, pode apresentar 4 padres diferentes, que levam em conta o
formato do ostium e da cauda e a presena ou no de constrictione sulci (um estrangulamento
dorsoventral do sulcus acusticus). Essas classificaes so ilustradas na Figura 2.12:

Figura 2.12 Classificao da morfologia do sulcus acusticus. A. arqueossulcide (Urophycis

mystacea); B. pseudoarqueossulcide (Pellona harroweri); C. homossulcide (Malacocephalus

261
laevis) e D. heterossulcide (Ctenosciaena gracilicirrhus) (Ilustradores: A. e C. Jssica Falchi Caador; B. e
D. Silvia de Almeida Gonsales. Fonte: LABIC-IOUSP).

- arqueossulcide: sulcus no apresenta uma diviso clara entre o ostium e cauda j que a
constrictione sulci praticamente inexistente;
- pseudoarqueossulcide: sulcus com uma constrictione sulci pouco evidente, porm com o
ostium e cauda claramente distinguveis;
- homossulcide: sulcus com o ostium e cauda bem evidentes, semelhantes e simtricos;
- heterossulcide: sulcus com ostium e cauda bem evidentes, mas com diferentes formatos.

Abertura do sulcus acusticus

O sulcus acusticus classificado de acordo com o tipo de abertura que apresenta (Figura 2.13).

Figura 2.13 Classificao da abertura do sulcus acusticus. Adaptado de Tuset et al. (2008). 1:
ostial, 2: caudal, 3: pseudo-ostiocaudal, 4: mesial, 5: pseudo-ostial, 6: para-ostial, 7: ostiocaudal.

- ostial: abertura do sulcus acusticus ampla na regio anterior do otlito e na regio posterior
fechada. quando o colliculum passa das bordas do otlito o sulcus considerado aberto;
- caudal: abertura na regio posterior do otlito e na regio anterior fechada;
- pseudo-ostiocaudal: as duas extremidades so muito prximas das bordas da regio anterior e
posterior do otlito, podendo no existir aberturas ou serem reduzidas a canais muito estreitos,
denominados canalis ostii e canalis postcaudalis;
- mesial: no h abertura e os limites do sulcus esto longe da borda do otlito;
- pseudo-ostial: no h abertura, porm os limites do sulcus acusticus na regio anterior se
confundem com a borda do otlito;
- para-ostial: a abertura se reduz a um pequeno canal na regio anterior do otlito;
- ostiocaudal: ocorrem aberturas tanto na regio anterior como na regio posterior do otlito.

262
Formato do colliculum

O colliculum um depsito de carbonato de clcio com espessura varivel, que pavimenta o

sulcus acusticus. A figura 2.14 ilustra os tipos de classificao utilizados.

Figura 2.14 Caracterizao do formato do colliculum. A. Urophycis brasiliensis; B.

Malacocephalus occidentalis; C. Scomber japonicus. (Ilustradores: A. e B. Jssica Falchi Caador; C. Silvia de
Almeida Gonsales. Fonte: LABIC-IOUSP).

- unimrfico: colliculum plano e indivisvel;

- homomrfico: colliculum com dois collicula separados, porm semelhantes;
- heteromrfico: colliculum com dois collicula de forma e/ou dimenses bastante diferentes.

Ostium

Ostium a regio anterior do sulcus acusticus delimitada pelo collum na sua poro mais
posterior. Pode ser classificado em nove tipos diferentes (Figura 2.15).

1 2 3

4 5 6

7 8 9

Figura 2.15 Caracterizao do ostium. Adaptado de Tuset et al. (2008). 1: dobrada-cncava, 2:

dobrada, 3: tubular, 4: lateral. 5: discoidal. 6: em forma de funil, 7: retangular, 8: oval-circular,
9: elptica.

263
- dobrada-cncava: uma das paredes do ostium reta ou tem uma curva regular, enquanto a
outra apresenta uma dobra visvel cncava;
- dobrada: semelhante a anterior, porm em uma das paredes h uma dobra no cncava;
- tubular: as duas paredes do ostium so paralelas;
- lateral: as paredes se abrem perto do collum em um ngulo prximo de 90 graus;
- discoidal: forma semelhante a um disco;
- forma de funil: forma semelhante a um funil;
- retangular: forma semelhante a um retngulo;
- oval-circular: forma arredondada, semelhante a um ovo;
- elptica: tem uma forma semelhante a uma elipse.

Cauda

A cauda uma estrutura localizada aps o collum, na regio posterior do sulcus acusticus. Essa
estrutura classificada em dez tipos (Figura 2.16):

1 2 3

4 5 6

7 8 9 10

Figura 2.16 Classificao da cauda. Adaptado de Tuset et al. (2008). 1: tubular, 2: elptica, 3:
oval-circular, 4: reta, 5: curva, 6: sinuosa, 7: levemente curva, 8: moderadamente curva, 9:
fortemente curva, 10: dobrada.

- tubular: as paredes dessa cauda so paralelas, podendo ser reta ou curva. Esse tipo de cauda
ainda subdividido em:

264
- reta: no h nenhuma curva;
- sinuosa: h curvas pouco sinuosas;
- curva: dividida em quatro tipos;
- levemente curva: curva com ngulo at 30;
- moderadamente curva: curva entre 30 e 60 ;
- fortemente curva: curva entre 60 e 100 ;
- dobrada: curva maior de 100 ;
- elptica: a cauda longa e elptica;
- oval-circular: forma circular, semelhante a um ovo.

Rostrum

O rostrum uma protuberncia normalmente afilada e ventral na regio anterior do otlito.

Quando presente na regio posterior do otlito denominado pseudorostrum. O rostrum,
quando no est ausente, pode ser classificado como: pouco desenvolvido, desenvolvido e muito
desenvolvido.

Antirostrum

uma protuberncia arredondada angulosa ou afilada, geralmente menor que o rostrum,

localizada na parte mais dorsal do otlito. O rostrum e o antirostrum so separados por uma
reentrncia denominada excisura. Na regio posterior esse mesmo tipo de estrutura chamada
de pseudoantirostrum, e sua classificao igual a do rostrum.

Perfil do otlito

A classificao do perfil do otlito feita atravs da relao existente entre suas faces externa e
interna, podendo ter quatro formas, como mostra a figura 2.17.

265
Figura 2.17 Classificao do perfil do otlito. A. achatado (Merluccius hubbsi); B. biconvexo
(Ctenosciaena gracilicirrhus); C. plano-convexo (Stellifer brasiliensis); e D. cncavo-convexo
(Selene setapinnis) (Ilustradores: A. Jssica Falchi Caador; B. C. e D. Silvia de Almeida Gonsales. Fonte: LABIC-IOUSP).

- achatado: quando as duas faces so planas;

- biconvexo: quando as duas faces so convexas;
- plano-convexo: onde uma das faces convexa e a outra plana;
- cncavo-convexo: onde uma das faces cncava e a outra face convexa.

Orientao do rostrum e do antirostrum

A relao de direo entre o rostrum e antirostrum quando examinados pelo perfil dorsal do
otlito, pode ser classificada como (Figura 2.18):

266
Figura 2.18 Classificao da orientao do rostrum e antirostrum. A. concordante (Engraulis
anchoita); e B. discordante (Sardinella brasiliensis) (Ilustrador: Alexandre Arackawa. Fonte: LABIC-IOUSP).

- concordantes: quando rostrum e antirostrum esto orientados na mesma direo;

- discordantes: quando rostrum e antirostrum esto orientados em direes diferentes.

267
268
3. MORFOMETRIA DE OTLITOS

Antoni Lombarte e Vctor Tuset

Sumrio
3.1 Introduo...........................................................................................................................269
3.2 Medidas...............................................................................................................................270
3.2.1 Medidas lineares...............................................................................................................270
3.2.2 rea, permetro e peso.....................................................................................................274
3.2.3 Relao entre medidas......................................................................................................275
3.2.4 ndices biomtricos e de forma........................................................................................279
3.3 Anlise da forma.................................................................................................................280
3.3.1 Forma e tamanho..............................................................................................................280
3.3.2 Obteno do contorno......................................................................................................281
3.3.2.1 Qualidade da imagem....................................................................................................281
3.3.2.2 Extrao do contorno....................................................................................................283
3.3.2.3 Coordenadas polares.....................................................................................................284
3.3.2.4 Coordenadas cartesianas...............................................................................................285
3.3.2.5 Reflexo parcial.............................................................................................................285
3.3.3 Extrao de caracteres ou anlise do contorno.................................................................286
3.3.3.1 Descritores de Fourier...................................................................................................286
3.3.3.2 Ondaletas (Wavelets).....................................................................................................289
3.3.4 Anlise de marcos anatmicos.........................................................................................291
3.5 Eliminao do efeito do tamnho nas anlises do contorno..................................................294
3.6 Aplicaes da morfometria de otlitos................................................................................295
3.6.1 Variaes interespecficas: identificao de espcies e suas aplicaes..........................295
3.6.2 Variaes intraespecficas: a identificao de estoques pesqueiros.................................297
3.6.3 Ecomorfologia e morfologia funcional............................................................................297
3.6.4 Ecologia de comunidades e biodiversidade......................................................................299
3.6.5 Momento atual e perspectivas futuras: a anlise em 3 dimenses j est aqui!...............300
Agradecimentos.........................................................................................................................301

3.1 Introduo

O uso de morfometria aplicada a organismos e estruturas biolgicas, como os otlitos, est

269
associado ao desenvolvimento tecnolgico na aquisio, processamento e anlise de imagens
digitais, assim como as melhorias na velocidade e capacidade dos computadores, o que trouxe
maior complexidade nas medies e anlises matemticas. A biometria ou otolimetria56 se
dedica a quantificao da variabilidade e da similaridade dos otlitos, permitindo a descrio, a
padronizao e a integrao de dados morfolgicos, fisiolgicos, moleculares e ecolgicos. Este
campo da cincia tem sido amplamente aplicado identificao de estoques (Bird et al. 1986) e
espcies (Lombarte 1991), na identificao do sexo e da idade dos peixes telesteos (Cardinale
et al. 2004), no estabelecimento de relaes filogenticas (Gaemers 1984), em estudos
paleontolgicos (Nolf 1985), no estabelecimento de redes trficas (Frost e Lowry 1981), na
anlise da variabilidade decorrente de adaptaes ou ecomorfologia (Gauldie 1988) e na
caracterizao da diversidade de comunidades (Tuset et al. 2015a).

3.2 Medidas

3.2.1 Medidas lineares

Historicamente, os primeiros estudos biomtricos com otlitos se basearam em medidas

lineares, obtidas a partir de uma projeo ortogonal do otlito sem levar em conta sua curvatura,
que pode ser muito pronunciada em alguns grupos de telesteos, como nos lutjandeos (Famlia
Lutjanidae) (Figura 3.1A). A partir desta projeo, se determinam os dois maiores eixos: o
comprimento e a altura mxima do otlito. Devido ao erro que se pode produzir com um
projeo ortogonal incorreta, importante utilizar sempre a mesma face do otlito, sendo
comum o uso da face interna ou medial, que se caracteriza pela presena do sulcus acusticus
(Figura 3.1B).

56
Termo criado por Gaertner (1982).

270
Figura 3.1 - Otlito sagitta de Lutjanus argentimaculatus. (A) Viso dorsal onde se mostra a
curvatura do otlito. (B) Projeo ortogonal da face interna. A = face anterior, D = posio
dorsal, I = face interna.

Se estas medidas forem tomadas a partir das tangentes dos pontos mais extremos, estamos nos
referindo ao dimetro de Feret, que so as medidas mais utilizadas (Figura 3.2). Estas medidas
podem ser obtidas com uma ocular micromtrica ou com sistemas digitais muito simples, com
calibrao prvia do aumento utilizado. Em todos os casos, fundamental padronizar a posio
do otlito antes das medies. Outras medidas lineares tambm se baseiam em caractersticas
anatmicas dos otlitos, especialmente do sulcus acusticus, como por exemplo: o comprimento
do rostrum, definido como a distncia entre o extremo anterior do otlito e a projeo do
extremo mais interno da excisura ostii, o comprimento e a altura do sulco, o comprimento da
cauda (parte posterior do sulco) e o comprimento do ostium (parte anterior do sulco) (Lombarte
e Lleonart 1993, Volpedo e Echeverra 2000, 2003) (Figura 3.2B,C). Estas outras medidas esto
associadas a caracteres morfofuncionais dos otlitos, sendo utilizadas em estudos
ecomorfolgicos (ver seo 3.4.3). Em espcies como otlitos grossos, como as corvinas
(Sciaenidae), em Gadiformes e em Ophidiiformes (Gaemers 1984, Nolf 1985), interessante
medir adicionalmente a espessura mxima, ou seja, a distncia mxima entre a face lateral
externa (extremo distal) e a face lateral interna (extremo medial) do otlito (Figura 3.2D).

271
Figura 3.2 - Medidas biomtricas mais comumente utilizadas. (A) Representao do contorno
externo e do sulcus acusticus do otlito sagitta de Lutjanus argentimaculatus, face interna. (B)
Medidas do otlito, OL = comprimento do otlito, OH = altura do otlito, RL = comprimento do
rostrum, OP = permetro do otlito, OA = rea do otlito. (C) Medidas do sulcus acusticus, SsL

272
= comprimento do sulcus, SH = altura do sulcus, L ostium = comprimento do ostium, L cauda =
comprimento da cauda, SP = permetro do sulcus, SA = rea do sulcus, A ostium = rea do
ostium, A cauda = rea da cauda. (D) Vista dorsal do contorno do otlito sagitta do ciendeo
Otolithes ruber, GO = espessura do otlito. A = posio anterior, D = posio dorsal, I = face
interna.

Existe uma nova gerao de medidas lineares a partir de marcos anatmicos que definem as
caractersticas mais importantes dos otlitos (Reichenbacher et al. 2007, Reichenbacher e
Reichard 2014): o comprimento da linha situada entre o ponto mais proeminente do rostrum
(Figura 3.3: l-l); o comprimento da linha situada no ponto mais proeminente do antirostrum
(Figura 3.3: d-d); o comprimento da linha horizontal situada no ponto mais interno da excisura
ostii (Figura 3.3: m-m); o comprimento da linha vertical situada entre o ponto mais alto da
margem dorsal (Figura 3.3: h-h), o comprimento da interseco do ponto mais interno da
excisura ostii e da margem dorsal (Figura 3.3: m-a); o comprimento da interseco do ponto
mais interno da excisura ostii e a margem ventral (Figura 3.3: m-r). Estas medidas podem ser
complementadas com outras medidas lineares secundrias e com valores de ngulos gerados
entre elas.

Figura 3.3 - Medidas lineares propostas por Reichenbacher et al. (2007) no otlito sagitta de
Lutjanus argentimaculatus baseadas em marcos anatmicos do contorno do otlito. A = posio
anterior, D = posio dorsal.

273
3.2.2 rea, permetro e peso

Apesar de desenhos de otlitos realizados com cmara clara permitirem a medio da rea, foi
somente com a revoluo digital, no final da dcada de 1980, que se comeou a medir rea e
permetro (Gauldie 1988, Lombarte 1992). Estas medies requerem calibrao prvia, na qual
se estabelece o nmero de pixels contidos em uma unidade de medida unidimensional, que
corresponde a escala em milmetros dada em funo da dimenso dos otlitos. Isto implica que
as imagens sejam fotografadas com uma referncia ou escala. Como comentado anteriormente,
a imagem tambm deve ser posicionada de forma ortogonal e padronizada.
Uma vez que a imagem foi obtida, as principais medidas a serem tomadas so: rea total do
otlito (da face interna ou medial), rea do sulcus acusticus, rea da cauda e rea do ostium
(Figura 3.2B,C). A obteno de dados do sulcus acusticus pode ser complexa e normalmente
requer trabalhar com desenhos obtidos com a cmara clara ou a partir de sua imagem
digitalizada, j que muito difcil obter o perfil ntido do mesmo com uma fotografia e separ-
lo com um sistema de anlise de imagens do restante da superfcie do otlito. Outro problema
que existe a mudana do contorno do sulcus devido ao ngulo de incidncia da luz quando se
captura a imagem (Figura 3.4). Os permetros podem ser obtidos automaticamente atravs de
diversos programas, desde que as imagens apresentem um bom contraste em relao ao fundo.
Assim como ocorre com a medida da rea, para obter o permetro do sulco necessrio
desenh-lo previamente.
Finalmente, o peso se obtm com o otlito completamente limpo e seco em uma balana
analtica com preciso de microgramas. O peso uma boa varivel para estimar a idade
(Boehlert 1985, Cardinale et al. 2004) e, devido a influncia dos fatores ambientais no
crescimento do otlito (Mosegaard et al. 1988), tambm tem sido empregado como parmetro
fundamental na determinao de estoques e populaes (Stransky et al. 2003, Tuset et al. 2006).
Alm disso, constitui uma excelente varivel para melhorar a classificao e identificao de
espcies (Sadighzadeh et al. 2012a, Tuset et al. 2013).

274
Figura 3.4 Diferenciao do sulcus acusticus segundo a incidncia da luz (seta branca) em um
otlito sagitta de Trachurus mediterraneus. (A) Com luz incidente no eixo anteroposterior do
otlito, o sulcus pouco perceptvel. (B) Com luz incidente no eixo dorsoventral, a forma do
sulcus est mais definida.

3.2.3 Relaes entre medidas

O crescimento pode ser definido como o aumento das medidas corporais de um indivduo em
relao ao tempo ou idade. A variao na forma do indivduos com a idade pode ser expressada
atravs das variaes entre as diferentes medidas do corpo, conhecida como crescimento
relativo. A frmula geral que expressa a relao entre duas medidas dada por uma equao
potencial (Huxley e Teisser 1936):

y= axb
Onde:
a e b = parmetros da equao;
x = varivel independente;
y = varivel dependente.

275
Porm, esta equao somente uma relao formal entre duas variveis biomtricas. Por
exemplo, ao se comparar o dimetro de uma esfera com seu volume, est-se confrontando uma
medida unidimensional (comprimento) com uma volumtrica (tridimensional). Neste exemplo
da esfera, o parmetro b expressa a proporo entre ambas as medidas, dimetro e volume,
sendo seu valor igual a 3. Para expressar uma ordem de grandeza entre uma medida
unidimensional e outra de duas dimenses, o parmetro b equivale ao valor 2 e, no caso, da
relao entre duas medidas unidimensionais, o valor de b tende a 1. Se esta relao constante
ao longo do tempo, significa que a forma no se altera e a relao isomtrica, tendo o valor de
1, 2 ou 3, dependendo da magnitude entre as medidas estudadas. Entretanto, em muitos casos a
forma de um organismo ou de um rgo pode mudar ao longo de seu ciclo de vida57, o que leva
a uma relao alomtrica. Se a relao entre uma dimenso estudada e outra de referncia
(varivel independente, como por exemplo o comprimento corporal do peixe) fica
proporcionalmente menor ao longo do crescimento, h alometria negativa e o valor de b ser
significativamente menor que o de isometria. Por outro lado, se a dimenso estudada aumenta
sua proporo em relao ao referencial, h alometria positiva. Neste caso, o valor de b
significativamente maior que o da isometria. A alometria pode ser verificada de modo simples
com um teste t uma amostra (cf. Captulo 7).
Consequentemente, a existncia de variaes no tamanho absoluto ao longo do crescimento (no
caso dos otlitos, seu tamanho aumento a medida que o peixe cresce) leva, em muitas situaes,
a variaes na forma consequncia da alometria (Figura 3.5). Nestes casos, as variaes
individuais no tamanho e as variaes alomtricas podem produzir efeitos indesejveis em
anlises multivariadas, mascarando diferenas entre grupos de estudo (espcies, populaes,
estoques ou sexos). Por isso, convm utilizar mtodos que eliminem ambos os efeitos, tamanho
e alometria, como uma etapa preliminar na anlise multivariada de dados biomtricos.

57
Este processo se denomina mudanas ontognicas.

276
 altura do otlito (mm)

comprimento do otlito (mm)

Figura 3.5 - Crescimento do otlito sagitta de Lampanyctus crocodrilus. (A) Crescimiento

absoluto. A barra branca corresponde a 1 mm. (B) Crescimento relativo da altura do otlito em
relao ao seu comprimento. O coeficiente b = 0,826, significativamente inferior a 1, indica
crescimento alomtrico negativo, de modo que em exemplares maiores a altura relativa do
otlito diminui em relao ao seu comprimento, modificando sua forma general.

Tradicionalmente este problema tem sido solucionado dividindo as medidas pela varivel
independente. Com este procedimento, a variao alomtrica ao longo do comprimento se
mantm. Outros mtodos partem do pressuposto que a primeira componente de uma anlise
componentes principais representa o tamanho (Jolicoeur e Mosimann 1960) de modo que,
eliminando a primeira componente se elimina o efeito do tamanho. Alm disso, o primeiro
componente pode conservar tambm fatores relacionados com a forma e no se pode ter certeza
absoluta que os outros componentes tambm no sejam influenciados pelo tamanho (Mosimann
e James 1979). Uma terceira famlia de mtodos (Lombarte e Lleonart 1993, Lleonart et al.
2000) consiste em transformar as variveis iniciais em variveis normalizadas a um determinado
tamanho, tendo em conta a variao alomtrica do grupo. Para isto, se realizam os seguintes
passos:
- se calcula o crescimento relativo da varivel dependente y em relao a varivel independente
x (Figura 3.6A);
- se transforma cada ponto x-y em um novo ponto normalizado com a funo potencial, atravs
da frmula y= y (x0/x)b, onde x0 o valor de normalizao, por exemplo um tamanho

277
normalizado para todo o grupo (Figura 3.6B);
- os dados finais correspondem a indivduos com o mesmo tamanho normalizado. Esta
normalizao deve ser repetida para cada medida e grupo estudado (Figura 3.6C).

rea do otlito (mm2)

Comprimento total do peixe (mm)

B
rea do otlito (mm2)

Comprimento total do peixe (mm)

C
rea do otlito (mm2)

Comprimento total do peixe (mm)

Figura 3.6 - Eliminao do efeito do tamanho e da alometria em medidas biomtricas. (A) Se

calcula o crescimento relativo para cada medida y (rea do otlito) em relao a uma varivel
independente x (comprimento do peixe) seguindo uma equao potencial. (B) Se transforma
cada ponto em um novo ponto normalizado seguindo a variao alomtrica. (C) Os dados
transformados passam a corresponder a indivduos com um mesmo comprimento de referncia
(no exemplo, 250 mm).

Na Figura 3.7 se observa como os otlitos de cada espcie de Merluccius apresentam uma
menor disperso depois da normalizao proposta por Lleonart et al. (2000), na qual foram
eliminados os efeitos do tamanho e da alometria.
Na literatura existem outros procedimentos diferentes, mas que compartilham a mesma filosofia

278
que o mtodo aqui apresentado, baseados em inclinaes (b) comuns ou particulares, bem como
a utilizao de resduos destas relaes (Begg et al. 2005, Stransky e MacLellan 2005).

eixo 2 (1,9%)

eixo 1 (96,5%)

guas temperadas guas frias

B
eixo 2 (10,7%)

eixo 1 (79,5%)

guas temperadas guas frias

Figura 3.7 - Anlise biomtrica de otlitos sagittae de seis espcies de merluza (Merluccius
spp.). (A) Com medidas no normalizadas em relao ao tamanho e alometria, toda
variabilidade se concentra no eixo 1 (96,5% da variabilidade total), que representa o tamanho
absoluto do otlito; nesta anlise no se detectava diferenas entre as espcies. (B) Com
medidas normalizadas em relao ao tamanho e alometria, se observa uma maior coeso na
distribuio de pontos para cada espcie, diferenciando-as em funo do tamanho relativo em
relao ao tamanho do peixe.

3.2.4 ndices biomtricos e de forma

ndices so valores obtidos a partir da relao entre variveis. Foram desenvolvidos para
caracterizar melhor as particularidades da morfologia dos otlitos. O ndice mais simples a
razo de aspecto (Templeman e Squire 1979), que estabelece a relao entre a altura em relao
ao comprimento do otlito (Figura 3.2B). Se o otlito to alto quanto comprido, a razo de

279
aspecto tende a 1; se mais comprido, o valor inferior a 1, e; se mais alto que comprido, o
valor superior a 1. Outros ndices de fcil interpretao so:
- comprimento relativo do otlito L = (OL/FL) 100, sendo OL o comprimento do otlito e FL o
comprimento corporal do peixe (Volpedo e Echeverra 2003);
- ndice IORS = (OA/FL2) 1000, sendo OA a rea normalizada do otlito a um comprimento
padronizado FL0 (Lombarte y Cruz 2007);
- ndice R = (RL/OL) 100, sendo RL o comprimento do rostrum (Volpedo e Echeverra 2003).

H ainda outros ndices mais complexos (Messieh 1972, Yefanov e Khorevin 1979), baseados
em distncias e ngulos entre determinados pontos dos otlitos, que foram utilizados para
diferenciar estoques, mas que no mais empregados atualmente. Outros ndices podem ser
verificados no Captulo 2, incluindo nossa seo inserido l sobre o assunto (ver seo 2.10.6).
H tambm outro grupo de ndices derivados da anlise de contorno de Fourier (Tuset et al.
2006). Esta famlia de ndices se aproxima bem da forma geral do otlito, mas pouco sensvel
a caractersticas locais do contorno, que podem ser fundamentais na caracterizao do otlito.
Por outro lado, diferentemente dos ndices mais simples, so difceis de interpretar e os
resultados diferem pouco daqueles obtidos diretamente atravs das medidas normalizadas dos
quais so derivados. De qualquer modo, no so recomendados para estudos mais detalhados
em vista de tcnicas melhores disponveis hoje em dia.

3.3 Anlise da forma

3.3.1 Forma e tamanho

Quando nos referimos a forma e ao tamanho de um objeto, importante definir previamente

ambos os termos. Tamanho a relao absoluta ou relativa entre duas propores, enquanto
forma a configurao de um objeto. Tradicionalmente o tamanho se expressa com unidades de
medidas, mas quais unidades definem a forma? Sua expresso matemtica muito mais
complexa e se baseia em geometria, conforme a definio de Thompson em 1917. As primeiras
tentativas para definir a forma dos otlitos (Gaertener 1974) se basearam no emprego de
medidas lineares e de seus ndices que, seguramente, no descrevem a forma de um otlito, mas
somente expressam sua similaridade com uma forma geomtrica ideal. Por outro lado, ndices
geram ambiguidades, de modo que, um mesmo valor de ndice (como, p.ex., a razo de
aspecto), pode corresponder a formas distintas (Figura 3.8).

280
 A

Figura 3.8 Ambiguidade das medidas lineares clssicas na definio da forma do otlito. (A) 3
formas distintas com o mesmo comprimento e altura do otlito. (B) 2 formas distintas com
comprimento, altura, rea e permetro idnticos.

Na dcada de 1980, com a substituio de imagens desenhadas por imagens digitalizadas,

comearam a se desenvolver mtodos de anlise de forma baseados na decomposio do
contorno, fundamentalmente a anlise de Fourier (Kuhl e Giardina 1982). Seu desenvolvimento
metodolgico se fundamenta na simplificao de uma imagem em 2 dimenses em uma imagem
unidimensional, que mais fcil de analisar matematicamente. Duas dcadas depois comeou a
se difundir uma segunda famlia de anlises, baseada na comparao de marcos anatmicos
(landmarks) (Bookstein 1991). Ambas as anlises tem demonstrado grande eficincia para
reproduzir matematicamente uma forma e, atualmente, so amplamente empregadas no estudo
de otlitos, com mais xito que a biometria multivariada.

3.3.2 Obteno do contorno

3.3.2.1 Qualidade da imagem

Antes de planejar um estudo com base em imagens de otlitos necessrio obter estas imagens
com alta qualidade e em uma posio anatmica padronizada que facilite anlises ulteriores.
fundamental que haja um bom contraste nas imagens, pois os otlitos so de cor clara: logo, se
recomenda digitaliza-los contra um fundo escuro, preferencialmente preto e homogneo (Figura
3.1), o que facilitar a determinao correta do contorno. O contraste de um otlito pode
melhorar com luz polarizada incidente e, posteriormente, pode ser tratada de forma digital.

281
Tambm se deve homogeneizar o fundo com a cor preta absoluta, ajustando o padro RGB
(vermelho, verde e azul, de red, green e blue) em R=0, G=0, B=0, para evitar problemas
posteriores com a delimitao do contorno. O uso de grafite no recomendado, pois elimina o
contraste entre o objeto e o fundo. Por outro lado, deve-se evitar que a curvatura do otlito
produza algum desvio ou erro nos resultados. Este problema pode ser solucionado com o uso de
um fundo mole que permita posicionar o otlito ortogonalmente (Figura 3.9). Outras questes
que se devem levar em conta no trabalhar com otlitos quebrados ou com restos de epitlio
(sujos) que possam alterar o contorno e sempre analisar o mesmo lado anatmico do otlito
(Lombarte et al. 2006). Mesmo que estas observaes paream bvias e desnecessrias,
lamentvel a publicao de imagens ruins ou sujas. No caso de espcies simtricas os dois
otlitos do par podem ser utilizados, inclusive podendo-se utilizar um deles na falta do outro
(no de forma sistemtica, somente ocasional), sempre convertendo a imagem com uma
inverso horizontal. Entretanto, esta opo no se recomenda em espcies com otlitos
assimtricos, como os linguados (Lychakov et al. 2008).

Figura 3.9 - Erro na forma ortogonal do otolito, induzido por sua posio na lupa binocular. No
exemplo se mostra o mesmo otlito sagitta de Lutjanus argentimaculatus fotografado em trs
posies distintas. D = posio dorsal, V = posio ventral. A seta branca indica o ngulo da luz
incidente.

282
3.3.2.2 Extrao do contorno

A caracterizao do contorno dos otlitos se baseia em dois procedimentos bsicos: extrao do

contorno, que implica em obter uma representao matemtica da forma e, extrao de
caracteres a partir de um conjunto de descritores numricos que o caracterizem (Piera et al.
2005).
A extrao do contorno a partir da imagem original implica em vrios passos (Figura 3.10A):
segmentao, que permite separar o otlito (objeto) do restante da imagem (fundo); binarizao,
que consiste em determinar a representao da silhueta do objeto ou do contorno (Figura
3.10B); extrao, que determina a seleo dos pontos que delimitam o contorno entre a silhueta
do objeto e o restante da imagem (fundo) (Figura 3.10C), e; codificao, que leva a
representao unidimensional do limite ou contorno de um determinado ponto, que deve ser
sempre o mesmo (Messieh e McDougall 1985, Bird et al. 1986, Doering e Ludwing 1990).
Nesta fase recomenda-se comear por um ponto de referncia fcil, situado em uma
extremidade da imagem, como o rostrum. A codificao pode ser realizada seguindo trs
mtodos distintos: coordenadas polares, coordenadas cartesianas (Piera et al. 2005) ou por
reflexo parcial do contorno (Reig-Bolao et al. 2010).

283
Figura 3.10 - Extrao do contorno a partir de una imagem. (A) Imagen digital do otlito sagitta
esquerdo de Scomber scombrus visto a partir de sua face interna. (B) Imagem segmentada e
binarizada separarando o objeto (branco) e o resto da imagen ou fundo (preto). (C) Extrao do
contorno do objeto, ou seja, seleo dos pontos que marcam o limite entre o objeto e o fundo.

3.3.2.3 Coordenadas polares

o mtodo de extrao do contorno mais utilizado e consiste no clculo da distncia entre o

contorno e o centro de gravidade58 da figura. Cada distncia se calcula a partir de ngulos iguais
(Figura 3.11A) e o resultado final um valor para cada ponto do contorno (Castonguay et al.
1991). Este mtodo permite uma fcil reconstruo da imagem a partir dos dados obtidos,
apesar das limitaes para otlitos com fortes irregularidades (concavidades ou projees), que
podem gerar erros na linearizao e, posteriormente, na reconstruo da imagem (Piera et al.
2015). Uma variante o clculo da distncia entre o centro de gravidade e o contorno a partir de
distncias equidistantes do limite (Lombarte e Castelln 1991). Neste caso, as concavidades dos
otlitos so adequadamente detectadas, mas a posterior reconstruo da imagem muito mais
complexa.

58
Mdia aritmtica de todos os pontos x e y.

284
 pontos amostrados [n] ngulos [n]

Figura 3.11 - Codificao de um objeto a partir da qual se passa de uma representao de duas
dimenses a una representao numrica unidimensional. Existem dois mtodos bsicos de
codificao: (A) coordenadas cartesianas, no qual cada ponto se descreve com um valor
determinado de x e y; (B) coordenadas polares, no qual cada ponto reflete a distncia entre o
permetro e o centride ou centro de gravidade da figura (mdia dos pontos x e y) para ngulos
equidistantes.

3.3.2.4 Coordenadas cartesianas

Cada objeto definido pela combinao de coordenadas x-y, usando dois nmeros reais para
cada ponto (Figura 3.11B). Com este mtodo os resultados so mais precisos, produzem menos
erros e solucionam o problema das irregularidades e da reconstruo (Piera et al 2005).

3.3.2.5 Reflexo parcial

Esta nova proposta de extrao de contorno parte de imagens padronizadas em tamanho e

orientao (Reig-Bolao et al. 2010, Harbitz y Albert 2015). Para tal, se reorienta o otlito em
sua posio horizontal, criando uma imagem especular horizontal da figura inicial. Elas se unem
pela extremidade horizontal mais distante do centro de gravidade (geralmente o rostrum).
Posteriormente, se constri um contorno linear entre a metade superior do otlito e a imagem
especular da metade ventral (Figura 3.12).

285
 A

Figura 3.12 - Codificao do contorno de um otlito sagitta de Diplodus cervinus mediante o

mtodo de reflexo parcial. (A) Contorno do otlito esquerdo. (B) Criao de uma imagen
especular (reflexo). (C) Seleo do perfil dorsal da imagem original e do perfil ventral da
imagem especular (reflexo parcial).

3.3.3 Extrao de caracteres ou anlise do contorno

A segunda fase da anlise de contornos consiste na extrao de dados numricos que

caracterizem a forma dos contornos e que permitam anlises estatsticas. Desde as ltimas
dcadas do sculo XX distintos mtodos de anlise foram desenvolvidos, tratados sucintamente
nas sees posteriores. Os mtodos mais difundidos se baseiam nos descritores de Fourier, suas
variaes (EFD, FFT) e ndices derivados e, mais recentemente, de descritores multiescala.

3.3.3.1 Descritores de Fourier

Os descritores, coeficientes ou harmnicos de Fourier tem sido utilizados desde 1980 para
descrever a forma de organismos e de estruturas biolgicas (Rohlf e Ferson 1983, Rohlf e

286
Archie 1984) e, entre elas, os otlitos (Bird et al. 1986, Doering e Ludwing 1990, Castonguay et
al. 1991, Campana e Casselman 1993, Torres et al. 2000a, Stransky 2005). Este mtodo parte
do processo de linearizao de uma imagem bidimensional a uma unidimensional. Estes dados
(distncias ou coordenadas polares) se expressam matematicamente atravs de uma srie de
Fourier, um polinmio para os componentes x e y de um ponto, como definido por Kuhl e
Giardina (1982):

2nt 2nt
x(t ) = a0 + an cos + bn sin
n =1 T T

2nt 2nt
y(t ) = c0 + cn cos + d n sin
n =1 T T
Onde:
t = tempo peridico;
T = tempo peridico em um espao determinado do contorno;
a y b = parmetros do componente x do contorno;
c y d = parmetros do componente y do contorno.

A partir dos coeficientes do polinmio h uma reduo dos dados utilizados, buscando aqueles
que tenham uma contribuio mais significativa na anlise geral da forma. Apesar de um nico
descritor fornecer pouca informao sobre a forma do otlito, a medida que se juntam vrios
descritores a informao sobre a forma do objeto se torna mais precisa (Figura 3.13). Assim,
com a anlise de Fourier se pode descrever a forma do otlito com poucos descritores, sendo
esta sua maior vantagem. Por outro lado, as sries de Fourier so uniescalares, ou seja, para cada
forma s existe uma escala de dados. Tambm conveniente que os descritores estejam pouco
influenciados pela ontogenia, ou seja, deve-se descartar aqueles correlacionados com o tamanho
ou com a idade do organismo (Castonguay et al. 1991, Stransky 2005, Stransky et al. 2008,
Tuset et al. 2012). Deve-se utilizar somente os descritores que apresentem caractersticas
prprias do grupo estudado (estoque, populao, espcie) ao longo do crescimento. Alm disso,
pode-se padronizar os dados utilizando as tcnicas da seo 3.3.5.

287
 5descritores 10descritores

25descritores 50descritores

75descritores 100descritores

Figura 3.13 - Reconstruo atravs dos descritores de Fourier de um contorno do otlito sagitta
de Scomber scombrus. Pode-se observar que, ao se agregar descritores, a forma obtida se
aproxima da forma original.

Uma variao destes descritores a transformada rpida de Fourier (FFT, de Fast Fourier
Transform), mtodo que considera as coordenadas x-y como nmeros complexos (a + ib), sendo
a a componente real e ib a componente imaginria, que representam a amplitude do cosseno e o
seno, respectivamente (Christopher e Waters 1974, Parisi-Baradad et al. 2005).
A partir dos descritores de Fourier foram criados tambm diversos ndices morfomtricos
aplicados na anlise de otlitos (Tuset et al. 2006), tais como a elipticidade ou circularidade,
calculada a partir da distncia entre a elipse e o crculo gerado pelos eixos maiores e a elipse
criada a partir da transformao de Fourier.
Os mtodos baseados em sries de Fourier e suas derivaes se mostraram muito eficientes para
a diferenciao de estoques (Bird et al. 1986, Castonguay et al. 1991, Campana e Casselman
1993, Stransky et al. 2008), apesar de apresentarem alguns inconvenientes, especialmente na
interpretao morfolgica do resultado. O principal problema que apresentam que no h
correspondncia entre um coeficiente ou harmnico e uma caracterstica morfolgica concreta.
As anlises morfolgicas so globais e no especficas e somente o conjunto de coeficientes
apresenta correspondncia com a forma analisada. Iwata e Ukai (2002) indicam que este dficit
pode ser compensado comparando-se as representaes grficas do contorno mdio dos grupos
estudados. Por outro lado, considerando que normalmente se utilizam coordenadas polares de

288
ngulos equidistantes, a anlise pouco sensvel a concavidades profundas, informao que
acabam se perdendo. A simplificao da forma em poucas variveis uma das principais
vantagens da anlise de Fourier, mas com o aumento da capacidade de processamento
matemtico dos computadores, surgiram novos sistemas e anlises mais detalhadas da forma,
como as anlises multiescala.

3.3.3.2 Ondaletas (Wavelets)

As transformadas de ondaletas (WT, de wavelets) so anlises multiescala de pontos especficos

de um contorno. As ondaletas so o resultado da expanso de um sinal em uma famlia de
funes (Mallat 1991) que representam as dilataes e translaes de uma funo ondaleta me:

1
s(x) =
s s
Onde:
= funo com suporte local em uma amplitude limitada no eixo das abscissas;
= filtro do passo inferior;
S = parmetro de escala.

Isto permite s WT detectar irregularidades de diferentes tamanhos na funo analisada. Em

termos prticos, isto implica que as ondaletas no apenas detectem singularidades (concavidades
e convexidades), mas tambm podem estabelecer sua posio. Deste modo, possvel comparar
contornos distintos ponto a ponto, indicando no apenas a dissimilaridade, mas tambm a
posio onde gerada (Figura 3.14). Sua aplicao em otlitos se mostrou muito eficiente para
a identificao de estoques (Parisi-Baradad et al. 2005, 2010; Sadighzadeh et al. 2014). A
vantagem de ser uma anlise multiescala a possibilidade de se trabalhar com todos os nveis de
singularidades, desde pequenas escalas que detectam mudanas sutis no contorno at grandes
escalas que so sensveis a forma geral do otlito. Alm disso, pode-se selecionar somente uma
escala ou um conjunto pequeno de escalas que contenha a informao morfolgica que se quer
analisar (Figura 3.14). Outra vantagem das ondaletas sua condio de anlise especfica, razo
pela qual se pode analisar a forma de um contorno parcialmente e concentrar-se em uma
determinada rea (Figura 3.15) que seja tpica dos grupos em estudo (Sadighzadeh et al. 2014)
ou que tenha uma caracterstica funcional especfica, como o rostrum ou a excisura ostii (Tuset
et al. 2015b).

289
 A

ondaleta 1 ondaleta 4 ondaleta 7

ondaleta 2 ondaleta 5 ondaleta 8

ondaleta 3 ondaleta 6 ondaleta 9

Figura 3.14 - Extrao de caracteres numricos do contorno a partir da anlise multiescala de

ondaletas. (A) Processo de codificao do contorno a partir de 512 pontos. A codificao deve
comear no mesmo ponto em todos os otlitos analisados (no exemplo, no rostrum). (B)
Contorno codificado a partir de coordenadas polares. (C) Representao das 9 escalas de
ondaletas. Cada escala sensvel a distintas caractersticas da forma.

290
 Setor de contorno
comparado

ondaleta 5

Figura 3.15 - Seleo de um segmento do contorno de um otlito sagitta de Lutjanus

argentimaculatus, a partir de uma ondaleta de escala 5.

Outras anlises de contorno menos empregadas so as anlises de curvatura (em ingls,

curvature scale space, CSS) e a anlise de desdobramento (em ingls, bending) que mapeiam a
evoluo dos pontos de inflexo de um contorno que se suavizam com o aumento das escalas de
aproximao (Mokhtarian e Mackworth 1992). At o momento, s foi utilizada
experimentalmente, fornecendo resultados semelhantes a outras anlises multiescala, como as
ondaletas (Parisi-Baradad 2005). Uma vantagem da anlise de desdobramento sua
sensibilidade ao grau de rugosidade do contorno do objeto (Piera et al. 2005).

3.3.4 Anlise de marcos anatmicos

A primeira tentativa de interpretar mudanas morfolgicas na ontogenia e evoluo como

mudanas matemticas foi feita por DArcy Thompson em 1917 na obra On growth and form.
Neste magnfico livro foram estabelecidos os princpios das aplicaes matemticas nos estudos
morfolgicos, sendo introduzidos conceitos como o de marcos anatmicos, fundamentais para o
desenvolvimento da segunda grande linha de anlise da forma dos objetos, a morfologia
geomtrica. Outro conceito introduzido foi o da anlise de deformaes (em ingls, thin-plate
spline), na qual um objeto se deforma (warped) em outro (Adams et al. 2004), o que muito til
para analisar mudanas entre marcos anatmicos.
Estas ideias no se desenvolveram at a dcada de 1980, quando Fred Bookstein combinou

291
aspectos da anlise de marcos anatmicos com a biometria na anlise de redes de trelias59 (box-
truss), definindo uma estrutura a partir das distncias lineares entre marcos anatmicos
(Bookstein 1991). Na ltima dcada do sculo XX, a anlise de marcos anatmicos evoluiu com
o conceito de morfologia geomtrica, na qual se analisam as variaes entre marcos anatmicos
de forma global e no a partir de distncias lineares. O mtodo de anlise bem complexo e
explica-lo no est entre os objetivos deste captulo. Para tal, recomenda-se a leitura detalhada
do tema em Mitteroecker e Gunz (2009), Webster e Sheets (2010), Adams et al. (2013) e
Monteiro (2013), entre outros. Ainda assim, de forma simplificada, com uma anlise
generalizada de Procrustes (GPA), se produz uma superposio da configurao dos marcos
anatmicos em uma escala de tamanho e posio comuns (Rohlf e Marcus 1998). Com estes
dados pode-se ento analisar as distncias de Procrustes propriamente ditas ou realizar uma
anlise de componentes principais para a comparao relativa das formas estudadas (Rohlf
2001, Meloro et al. 2008). Outro conceito que surgiu tambm foi o de pseudomarcos
anatmicos60 (semilandmarks) (Zelditch et al. 2004), equivalente a pontos equidistantes do
contorno e que so muito teis em estruturas com poucos marcos anatmicos ou com pontos
equidistantes entre os marcos anatmicos. Aplicada a otlitos, apesar da anlise de marcos
anatmicos no ter-se difundido tanto como a anlise de contornos, est linha de estudo vem
sendo aplicada desde 2005 (Monteiro et al. 2005, Ponton 2006, Lombarte et al. 2010, Vignon e
Morat 2010), combinando marcos e pseudomarcos anatmicos (Figura 3.16A). Os resultados
obtidos so similares ao da anlise de contornos, com o valor agregado de se obter tambm
informaes sobre a forma do sulcus acusticus, que traz informaes da espcie e de sua
funcionalidade (Gauldie 1988, Lombarte 1992, Volpedo e Echeverra 2003).

59
Estrutura composta por mais de tres linhas conectadas transversalmente e de forma diagonal entre as partes de um
objeto.
60
Pontos de um objeto no relacionados com reas homlogas, mas que podem nela ser representados.

292
 A

Figura 3.16 - Morfologia geomtrica, mtodos de determinao de marcos anatmicos e

pseumarcos anatmicos. (A) Mtodo tradicional, no qual se usam poucos marcos anatmicos,
indicados por letras, e muitos pseudomarcos anatmicos do contorno. (B) Nova proposta, na
qual o nmero de marcos do contorno do otlito e do sulcus acusticus est mais compensado; lo
= marcos anatmicos do otlito, los = marcos anatmicos da interseco entre otlito e sulcus,
so = pseudomarcos anatmicos do otlito, ls = marcos anatmicos do sulcus, ss = pseudomarcos
anatmicos do sulcus.

O principal inconveniente deste mtodo a pouca contribuio que os marcos anatmicos do

sulcus acustiscus possuem nas anlises multivariadas em relao aos pseudomarcos anatmicos
do contorno, muito mais numerosos. Este problema pode ser resolvido com o mtodo de
determinao de marcos de Reichenbacher (2007), que reduz o nmero de pseudomarcos
anatmicos do contorno (Figura 3.16B). Os resultados obtidos em anlises mutlivariadas com
uma quantidade de pontos equivalentes entre o sulcus e o contorno foram mais sensveis
variabilidade interespecfica e funcional (Tuset et al. 2015a).

293
3.5 Eliminao do efeito do tamnho nas anlises do contorno

Assim como nas medidas lineares, os resultados podem ser influenciados pelos atributos dos
dados, basicamente diferentes tamanhos e idades dos peixes. Para dados derivados de Fourier ou
ondaletas, existem dois tipos de ajuste: mediante inclinaes ou atravs de resduos. No
primeiro caso, se comparam as inclinaes (b) da varivel dependente e o comprimento corporal
do peixe de cada grupo atravs de uma anlise de covarincia (ANCOVA, Winer et al. 1991).
Dependendo do resultado (diferena significativa entre as inclinaes ou no), necessrio
eliminar o efeito do tamanho com a equao proposta por Bergenius et al. (2005), que apresenta
vrias solues:

Oij adj = Oij + b ( FLij MFLj )

Onde:
Oij, adj = varivel morfolgica do otlito do indivduo i ajustado ao comprimento mdio do grupo
j;
Oij = varivel morfolgica original do indivduo i do grupo j;
b = inclinao da relao Oij:FLij comum de todos os grupos;
FLij = comprimento corporal do indivduo i do grupo j;
MFLj = comprimento corporal mdio do grupo j.

Se as inclinaes forem iguais (ANCOVA, P > 0,05), se usa o coeficiente b comum para
eliminar o efeito do tamanho; se so distintas, se corrige de forma independente, com o valor de
b de cada grupo.
Este mtodo comparvel ao explicado na seo de medidas lineares e ambos so igualmente
vlidos, sendo recomendado quando os comprimentos dos peixes so muito parecidos. Quando
h muita variabilidade de tamanhos, a melhor opo uma anlise multivariada das variveis
dependentes com o comprimento corporal do peixe e posterior uso dos resduos destas relaes
(Stransky e MacLellan 2005, Jnsdtir et al. 2006).
Na morfologia geomtrica o efeito do tamanho tambm pode ser testado atravs da relao
linear entre o centroide61 e o comprimento corporal (Ravosa e Profant 2000). Se os resultados
indicarem uma correlao, o efeito do tamanho dos valores derivados da anlise de
componentes principais das distncias de Procrustes deve ser eliminado atravs da anlise de
resduos.

61
Raiz quadrada da soma ao quadrado das distncias do conjunto de marcos anatmicos em um objeto.

294
3.6 Aplicaes da morfometria de otlitos

Diversos autores evidenciaram que a forma dos otlitos possui caracteres especficos (Schmidt
1968, Gaemers 1984, Nolf 1985, LAbe-Lund 1988) e, em muitos casos, a morfologia varia
sensivelmente entre populaes, como em arenques (Messieh 1972, Postuma 1974), em
salmondeos (McKern et al. 1974, Neilson et al. 1985) e lutjandeos (Smith 1992). A forma do
otlito tambm pode ser eficiente para a separao de estoques (Casselman et al. 1981, Bird et
al. 1986, Castonguay et al. 1991, Campana e Casselman 1993, Friedland e Reddin 1994, Rtz
1994, Colura e King 1995, Stransky et al. 2008). A variabilidade morfolgica dos otlitos
sagittae tem sido relacionada com diversos fatores endgenos, como sexo, ontogenia e gentica
(Lombarte et al. 2003, Cardinale et al. 2004) e fatores ambientais, como temperatura,
profundidade e salinidade (Wilson 1988, Lombarte e Lleonart 1993, Begg e Brown 2000,
Cardinale et al. 2004).
Alm disso, nos estudos com otlitos deve-se sempre considerar sua funcionalidade, pois
formam parte do ouvido interno dos peixes telesteos. Deste modo, a determinao da relao
entre forma, funo e ambiente essencial para compreender, detalhadamente, as causas da
variabilidade morfolgica dos otlitos (Platt e Popper 1981, Gauldie 1988, Lombarte e Fortuo
1992, Lychakov e Rebane 2000, Paxton 2000, Volpedo y Echeverra 2003).

3.6.1 Variaes interespecficas: identificao de espcies e suas aplicaes

A forma dos otlitos possui um alto grau de variao interespecfica, que pode ser utilizado para
a identificao de espcies. Tradicionalmente, as diferenas entre as espcies tem considerado
caracteres anatmicos, disponveis em atlas atravs de desenhos e fotografias, como clssicos
principalmente da primeira metade do sculo XX (Koken 1884, Frost 1925, Sanz-Echeverra
1926, Chaine e Durvergier 1931, Bauz-Rulln 1954) e, mais recentes, conhecidos e utilizados,
os de Schmidt (1968), Nolf (1985), Hrknen (1986), Smale et al. (1995), Volpedo e Echeverra
(2000), Assis (2003, 2005), Campana (2004), Tuset et al. (2008), Lin e Chang (2012),
Sadigzadeh et al. (2012b) e Rossi-Wongtschowski et al. (2014).
A resistncia da aragonita dos otlitos degradao permite a identificao de espcies atravs
de otlitos, imprescindvel em situaes em que outras partes do peixe tenham se degradado,
como no caso dos contedos estomacais (Fitch e Brownell 1968, Neves et al. 2012, Otlora-
Ardila et al. 2014, Rosas-Luis et al. 2014), sedimentos fsseis (Schwarzhans 1980, Nolf 1985,
Nolf e Sterbaut 1989), restos arqueolgicos (Van Neer et al. 2002) e para estabelecer hipteses
filogenticas (Post e Hecht, 1977, Gaemers 1984, Reichembacher et al. 2007). Seguramente,
como comentado anteriormente, o uso de caracteres anatmicos no matemticos requer alto
grau de experincia do pesquisador/acadmico, por sua ambiguidade. Para evitar a subjetividade

295
dos caracteres anatmicos, a biometria de otlitos em espcies similares comeou a ser realizada
nos anos 1980 (Gaertner 1982, Akkiran 1985, Bori 1986, LAbe-Lund 1988) ou a sua relao
com o comprimento do peixe entre 1950 e 70 (Templeman e Squire 1956, Botha 1971). Apesar
das anlises biomtricas fornecerem bons resultados, as tcnicas de anlise de imagens deram
um novo impulso a identificao de espcies atravs de otlitos, com o uso das distncias entre
o contorno e o centro de gravidade (Lombarte e Castelln 1991), a anlise de Fourier (Stransky
2005), as ondaletas e anlises de curvatura (Parisi-Barad et al. 2005), a anlise de
desdobramento (Piera et al. 2005), os marcos anatmicos (Monteiro et al. 2005) e a reflexo
parcial (Reig-Bolao et al. 2010). Estes estudos consideraram essencialmente o otlito sagitta,
que apresenta maior variabilidade morfolgica, mas tambm h estudos com o asteriscus (Assis
2003), com o lapillus (Assis 2005) e com os trs pares de otlitos simultaneamente (Schulz-
Mirbach et al. 2012).
A eficincia dos mtodos de anlise de contorno aumenta quando se utiliza, de forma
combinada, dados biomtricos como o peso dos otlitos (Sadigzadeh et al. 2012a). Todos estes
mtodos so recomendados para grupos de espcies pequenos e com proximidade taxonmica, e
tambm para a identificao de espcies crpticas (Tuset et al. 2010), sendo maior sua eficincia
quando se dispe de um nmero elevado de exemplares por espcie. A complexidade aumenta
quando se trata de analisar grupos faunsticos amplos, o que requer profundo conhecimento
morfolgico e ampla representao de espcies (Nolf 1985, 2013) ou uma grande base de dados
(Lombarte et al. 2006). Para tal, foram desenvolvidos sistemas de classificao que permitem
identificar espcies a partir de imagens e com poucos dados por espcie. Estes sistemas se
baseiam em anlises iterativas de contornos para cada uma das escalas de detalhes com as
ondaletas (Parisi-Baradad et al. 2010), favorecendo a comparao de pontos especficos (Figura
3.17).

Figura 3.17 - Classificao automtica a partir das ondaletas extradas de um contorno de otlito
sagitta de um exemplar de Scomber scombrus comparado com otlitos de uma base de dados
preexistente. Os crculos indicam os pontos de diferenciao mxima entre os otlitos
comparados. FL = comprimento furcal do peixe, D = distancia euclidiana.

296
3.6.2 Variaes intraespecficas: a identificao de estoques pesqueiros

Devido necessidade da gesto de recursos pesqueiros (Cushing 1968), a identificao de

estoques foi o ramo da cincia pesqueira que sustentou o desenvolvimento da otolitometria de
forma prtica e aplicada (Cadrin e Friedland 1999). As variaes intraespecficas se devem
influncia que os fatores ambientais (profundidade, temperatura e salinidade) exercem no
crescimento e forma dos otlitos, assim como os fatores endgenos (taxas de crescimento e
sexo) (Simkiss 1974, Wilson 1985, Morales-Nin 1987, Mosegaard et al. 1988, Secor e Dean
1989, Lombarte et al. 2003, Cardinale et al. 2004, Vignon y Morat 2010, Vignon 2015),
especialmente quando o fluxo gentico suficiente para mascarar a existncia de populaes
separadas (Stransky et al. 2008, Gholami et al. 2015). Os primeiros estudos sobre identificao
de estoques se basearam na comparao entre curvas de crescimento e ndices de forma dos
otlitos (Templeman e Squire 1956, Yefanov e Khorevin 1979, Gaertner 1982). O maior
problema que estes autores encontraram foi a compensao das diferenas em comprimento e
alometria (Templeman 1935), que distorciam os resultados finais, o que se resolveu com a
aplicao dos mtodos previamente comentados (ver seo 3.5). Ainda que indivduos de
diversos comprimentos e idades possam ser utilizados, se recomenda delimitar a amostra ou
trabalhar com grupos de idade de forma independente, especialmente em espcies pelgicas
(Castonguay et al. 1991).

3.6.3 Ecomorfologia e morfologia funcional

Os trs pares de otlitos foram parte do ouvido interno, estando relacionados ao equilbrio e
audio (Popper e Fay 1993, Popper e Lu 2000). Deste modo, qualquer estudo com otlitos
deve considerar sua funo real no peixe e no apenas sua utilidade cientfica. Alm disso,
ainda no est devidamente claro como a variabilidade morfolgica afeta a capacidade auditiva
dos peixes (Platt e Popper 1981, Popper e Lu 2000, Popper et al. 2005).
A ecomorfologia dos rgos sensoriais, entre eles os rgos otolticos, a cincia que compara
os dados morfofuncionais e ecolgicos das espcies (Karr e James 1975, Bock 1990, Motta et
al. 1995, Norton et al. 1995, Weissburg 2005). Para tanto, sua aplicao em otlitos permite
estabelecer relaes entre determinadas caractersticas da forma e caractersticas ecolgicas-
funcionais, como alimentao, locomoo, hbitat, profundidade e comportamento (Volpedo e
Echeverra 2003, Lombarte e Cruz 2007, Colmenero et al. 2010). Sua aplicao tem-se
concentrado em espcies de uma mesma comunidade ictica sejam mesopelgicas (Paxton
2000), de plataforma (Volpedo e Echeverra 2003) ou costeiras (Lombarte e Cruz 2007), em
espcies filogeneticamente prximas mas com claras diferenas ecolgicas como as merluzas

297
(Lombarte e Fortuo 1992), em gobdeos (Arellano et al. 1995), em salmonetes (Aguirre e
Lombarte 1999), em guarus (Schulz-Mirbach et al. 2008), em peixes-sapo (Colmenero et al.
2010) e para analisar variaes ontogenticas em merluzas (Lombarte e Popper 1994, 2004).
Com exceo de alguns estudos com base no lapillus de corvinas (Ramcharitar et al. 2014) e de
peixes otofisi (Volpedo e Fuchs 2010), quase todos estes estudos enfocaram os otlitos sagittae,
que possui um papel muito importante na funo auditiva, apesar de outras estruturas otolticas
estarem mais relacionadas funo de equilbrio (Platt e Popper 1981, Popper e Fay 1993,
Popper e Lu 2000). Nestes estudos se considerou tamanho e espessura do otlito, a relao entre
a mcula sensorial e o otlito (razo S:O), as conexes entre o otlito e a vescula gasosa, as
variaes morfolgicas entre os trs pares de otlitos e a sua forma geral (Gauldie 1988,
Lombarte 1992, Paxton 2000, Lombarte et al. 2003, Volpedo e Echeverra 2003, Lombarte et al.
2010, Schulz-Mirbach et al. 2011, Tuset et al. 2015b).
Como comentado anteriormente, a forma geral do otlito est associada a caractersticas
ecolgicas como profundidade, hbitat, tipo de locomoo e alimentao (Wilson 1985, Gauldie
e Crampton 2002, Lombarte et al. 2003, Volpedo e Echeverra 2003, Sadigzadeh et al. 2014,
Tuset et al. 2015b). As espcies pelgicas como atuns e cavalas tem otlitos relativamente
pequenos (Lombarte e Cruz 2007, Lombarte et al. 2010), com forma alargada, rostro
prolongado e uma razo S:O maior que das formas bentnicas (Volpedo et al. 2008). Uma
exceo ocorre em processos evolutivos de pelagizao a partir de formas bentnicas, como em
gobdeos e nototendeos, nos quais houve pedomorfose e os otlitos conservam caractersticas
larvais, como sua forma arredondada (Lombarte et al. 2010). Recentemente, a partir da anlise
especfica do contorno de otlitos sagittae em distintos grupos de Perciformes (Sadigzadeh et
al. 2014, Tuset et al. 2015b), se associou a variabilidade da regio dorso-rostral, relacionada ao
desenvolvimento do ostium, variabilidade ambiental e funcional (Sadigzadeh et al. 2014,
Tuset et al. 2015).
H tambm correspondncia entre otlitos de tamanhos relativamente grandes e a emisso de
sons por espcies que apresentam rica comunicao acstica (Luczkovich et al. 1999, Holt
2002). Muitas dessas espcies so de guas profundas, turvas ou de hbitos noturnos (Paxton
2000, Lychakov e Rebane 2000, Ramcharitar et al. 2006, Lombarte e Cruz 2007, Colmenero et
al. 2010). Nestas espcies a reduo do campo visual, devido perda da luz ambiental, foi
compensada por sistemas sensoriais alternativos como mecanorreceptores e quimiorreceptores
(Lombarte e Fortuo 1992, Kuciel, 2013, Warrant e Locket 2004). Por outro lado, espcies com
colorao brilhante e atividade diurna, como os labrdeos, possuem otlitos relativamente
pequenos (Cruz e Lombarte 2004). H tambm casos em que um tamanho relativamente grande
acompanhado por uma forte tridimensionalidade, como nos ciendeos (Ramcharitar et al.
2004). O espessamento da face externa do otlito produz um efeito de focalizao sobre um
ponto da face interior, no qual se situa a mcula sensorial (Figura 3.1). Nos linguados

298
(Pleuronectiformes), foi observada uma conspcua assimetria funcional, sendo o otlito sagitta
situado em uma posio inferior e de maior tamanho (Lychakov et al. 2008).
O sulcus acusticus, cuja forma e tamanho esto relacionados com a mcula sensorial62,
caracterstico de cada espcie (Schwarzhans 1980, Smale et al. 1995, Tuset et al. 2008) e foi
objeto de numerosos estudos comparativos (Popper e Coombs 1982, Lychakov e Rebane 2000,
Ramcharitar et al. 2006, Schulz-Mirbach et al. 2011, 2013). Foi observado que a relao entre a
rea da mcula sensorial (ou do sulcus acusticus) e a rea do otltio (razo S:O) varia em
funo de caractersticas ecolgicas e funcionais das espcies (Gauldie 1988, Lombarte 1992,
Arellano et al. 1995) e de populaes da mesma espcie (Schulz-Mirbach et al. 2011). Estes
ltimos autores verificaram em populaes de Poecilia mexicana adaptadas a vida caverncola
otlitos com um sulcus acusticus mais profundo do que as que vivem no exterior.
Paralelamente aos estudos ecomorfolgicos foram desenvolvidas outras linhas de pesquisa de
carter fisiolgico e comportamental (Popper e Coombs 1982, Fay e Popper 2000, Yan 2001,
Tellechea et al. 2010). A presena de conexes entre o ouvido interno e a vescula gasosa,
atravs do aparelho de Weber, bolhas ou conexes diretas, implica em uma aumento da
sensibilidade e da percepo de sons com frequncia superior a 1,5 kHz (Popper et al. 2003).
Estas espcies so denominadas especialistas acsticos e pertencem ao grupo dos Otophysi e
dos Clupeiformes (Platt e Popper 1981). Algumas destas conexes esto associadas a formas
especiais de otlitos, como nos Gadiformes (Lombarte y Popper 2004), ciendeos (Ramcharitar
et al. 2004, 2006) e em todos os melanfdeos (Deng e Popper 2014), cujos otlitos apresentam
expanses largas e delgadas.

3.6.4 Ecologia de comunidades e biodiversidade

As caractersticas morfolgicas observadas nos otlitos de uma comunidade refletem sua

estrutura ecolgica e funcional (Paxton 2000, Gauldie e Crampton 2002, Lombarte e Cruz 2007,
Volpedo et al. 2008, Tuset et al. 2015a). Em muitos casos, o conhecimento taxonmico de
faunas fsseis de peixes telesteos est exclusivamente embasado em dentes isolados e otlitos
(Schawrzhans 1980, Nolf 1985, Reichenbacher et al. 2007); o estudo da variabilidade
morfolgica destas estruturas ajuda a entender as caractersticas ecolgicas da comunidade
fssil e sua evoluo ao longo do tempo (Tuset et al. 2015a).
Por outro lado, as comunidade tambm podem se caracterizar pelo nmero e complexidade de
espcies atravs de ndices de biodiversidade (Margalef 1982). A complexidade e versatilidade
dos ndices de diversidade tem crescido com a incluso de dados taxonmicos (Webb 2000,
Clarke e Warwick 2001), funcionais (McClain et al. 2004, Petchey e Gaston 2006, Villger et
al. 2008) e morfolgicos (Zelditch et al. 2003, Recasens et al. 2006, Farr et al. 2013).
62
rea do ouvido interno na qual esto as clulas sensorias ciliadas mecanorreceptoras.

299
Consequentemente, a partir das caractersticas morfolgicas dos otlitos de uma comunidade
tambm se pode elaborar ndices de diversidade desta comunidade (Tuset et al. 2015a).

3.6.5 Momento atual e perspectivas futuras: a anlise em 3 dimenses j est aqui!

Em estudos morfomtricos, o principal desafio melhorar a preciso das medidas de forma,

gerando objetos em trs dimenses (Figura 3.18). Algumas tentativas de obteno de imagens
tridimensionais de otlitos utilizando microtomografias de raios-X (Hamrin et al. 1999,
Ramcharitar et al. 2004, Schulz-Mirbach et al. 2011, 2013, Kver et al. 2014), microfotografias
(Zitek et al. 2014) e escaneamentos baseados em LEDS de luz branca (Marti-Puig et al. 2015)
foram realizadas, apesar de ainda no existir um mtodo padronizado. O maior problema reside
na configurao de um sistema que permita trabalhar com otlitos grandes e com outros muito
pequenos. Espera-se que o desenvolvimento das tcnicas de anlise de objetos 3D se difunda,
facilitando a obteno de dados para melhorar a classificao dos otlitos, a obteno de
caracteres morfolgicos significativos especialmente do sulcus acusticus e a elaborao de
modelos biomecnicos que permitam estudar como se realiza a transmisso acstica.

Figura 3.18 - Imagens tridimensionais de um otlito sagitta do ciendeo Argyrosomus regius.

300
Finalmente, continua sendo crucial o desenvolvimento de grandes bases de dados
morfomtricos, assim como de imagens de otlitos, para o desenvolvimento de estudos de
mbito ecofilogentico e ecomorfolgico em uma perspectiva evolutiva (Lombarte et al. 2006),
assim como a publicao de atlas especficos geogrficas pouco estudadas.

Agradecimentos

Os autores so especialmente gratos aos editores do volume, Alejandra V. Volpedo e Andr M.

Vaz dos Santos, por sua dedicao e ajuda na realizao do captulo.

301
302
4. OTLITOS EM ESTUDOS DE IDADE E CRESCIMENTO EM PEIXES

Andr Martins Vaz-dos-Santos

Sumrio
4.1 Introduo...........................................................................................................................303
4.2 O modelo de crescimento....................................................................................................306
4.3 Esclerocronologia................................................................................................................307
4.4 Preparao de otlitos e obteno de dados para anlise do crescimento...........................309
4.4.1 Amostras de otlitos.........................................................................................................309
4.4.2 Representatividade dos otlitos para o estudo do crescimento........................................310
4.4.3 Preparao de otlitos......................................................................................................311
4.4.4 Leitura de anis em otlitos.............................................................................................313
4.5 Anlise do crescimento.......................................................................................................316
4.5.1 Comparao entre leituras de anis..................................................................................316
4.5.1.1 Consistncia entre o nmero de anis...........................................................................316
4.5.1.2 Anlise de coincidncia do tipo de borda......................................................................318
4.5.1.3 Anlise dos raios dos anis............................................................................................319
4.5.2 Representatividade das leituras de otlitos......................................................................320
4.5.3 Validao..........................................................................................................................322
4.5.3.1 Incremento marginal.....................................................................................................322
4.5.3.2 Porcentagem do tipo de borda.......................................................................................324
4.5.3.3 Outras tcnicas de validao.........................................................................................324
4.6 Eatimativa dos parmetros de crescimento e estrutura etria..............................................326
4.7 Retroclculo........................................................................................................................329
4.8 Concluses..........................................................................................................................329
Agradecimentos.........................................................................................................................331

4.1 Introduo

O crescimento um importante componente da histria de vida dos peixes, que crescem

continuamente. No aspecto individual, o crescimento a expresso quantitativa do
desenvolvimento (Fonteles Filho 1989), se processando e provocando mudanas desde a
fertilizao at a morte do indivduo, passando pelas fases ovo, larva, juvenil e adultos (Csirke
1980). Decorre de uma srie de mudanas fisiolgicas desencadeadas e controladas por
hormnios (Weatherley e Gill 1987, Weatherley 1990). Depende da energia disponvel ao

303
organismo para crescer obtida via alimentao, da reproduo e da mortalidade, que determinam
diretamente a competio intraespecfica, um fator que influencia muito o crescimento
(Saborido-Rey e Kjesbu 2005, Longhurst e Pauly 2007). Em termos fisiolgicos, o crescimento
individual pode ser pensado a partir da equao que descreve o balano da energia disponvel
(E) em um determinado perodo de tempo (Wootton 1998):

E=G+M+F+U

Este balano consequncia da energia direcionada para o crescimento somtico (corporal) e

reprodutivo (gametas) (G), daquela que gasta atravs do calor metablico (M) e das perdas
relacionadas s fezes (F) e excreo (U). Pensando no balano bioenergtico individual,
podemos rearranjar a equao acima, obtendo uma expresso que defina o crescimento:

G=EM(F+U)

Na perspectiva das cincias pesqueiras, a dinmica de populaes foi pensada em um modelo

descritivo por Russel (1931), considerando que a variao de biomassa (B) se d em funo do
crescimento (G), do recrutamento (R) e da mortalidade total (Z):

B = G + R Z

Deste modo, se pensarmos em como quantificar o crescimento de um peixe, a maneira mais

fcil atravs do comprimento e do peso corporais, medidas que podem ser facilmente tomadas
de um indivduo (Weatherley e Gill 1987). O comprimento corporal uma medida com maior
independncia da reproduo e da alimentao, fatores que podem promover consubstanciais
alteraes de peso em diferentes escalas de tempo. Uma merluza (Merluccius hubbsi) com 25
cm de comprimento pesa em torno de 120 g e o peso do seu estmago pode chegar a 10% de seu
peso total. No caso de gnadas, principalmente ovrios, a variao maior, por exemplo em
uma betara (Menticirrhus americanus) com 36 cm e peso 620 g, os ovrios podem chegar a
55% do peso corporal total. Estes so alguns exemplos de situaes reais, mas com valores que
podem apresentar muito mais variaes entre diferentes indivduos e populaes. Sendo assim,
o comprimento corporal tem sido usualmente usado para quantificar o crescimento.
O crescimento pode ser avaliado de forma relativa ou absoluta. Quando no dispomos de uma
medida de tempo e mensuramos o crescimento em funo de outra varivel, temos o que se
denomina crescimento relativo. Huxley em 1932 formalizou os conceitos do tema em sua obra
On the Relative Growth (Huxley 1993), apresentando o modelo potencial (y=axb), que at hoje
utilizado para estimar as relaes comprimento-peso de peixes e tambm serve para

304
morfometria de otlitos (cf. Captulo 3). Entretanto, se dispomos de informaes sobre
tempo/idade, estamos tratando do crescimento absoluto (Bagenal e Tesch 1978).
A varivel tempo abre um novo universo na compreenso do ciclo de vida dos peixes, mas a
pergunta : qual a importncia de se converter comprimentos em idades? Por que no basta
saber em quais comprimentos se processam os diferentes eventos biolgicos (primeira
maturao gonadal, migraes etc.)? A resposta muito simples: considere dois peixes com o
mesmo tamanho. Se um vive durante 16 anos e outro apenas 4 anos, com certeza o comprimento
no o melhor descritor de seu ciclo de vida. Da mesma forma no caso de dimorfismo sexual:
muitas espcies apresentam marcantes diferenas nas taxas de crescimento de machos e de
fmeas (Martins e Haimovici 2000, Newman et al. 2000, Yoneda et al. 2002). A idade de
primeira maturao gonadal outro aspecto a ser considerado: quanto tempo o organismo leva
para atingi-la (se um ano, se trs anos, etc.)? Alm disso, idade permite construir a pirmide
etria das diferentes populaes, entendendo seu estado no momento do estudo, seu uso do
espao e do tempo (Ricker 1975, Berkeley et al. 2004). A sardinha-verdadeira (Sardinella
brasiliensis) uma espcie que se distribui sobre a plataforma continental entre 22S e 2840S,
no Oceano Atlntico Sudoeste, litoral do Brasil: veja como as diferentes idades esto
distribudas de modo heterogneo ao longo da rea (Figura 4.1).

Figura 4.1 Distribuio da sardinha-verdadeira (Sardinella brasiliensis) no Atlntico

Sudoeste, mostrando a diferena na estrutura em idade em trs reas (delimitadas pelas barras
negras): os indivduos jovens se concentram mais ao sul e os mais velhos mais ao norte (Fonte:

LABESC-UFPR ).
63

63
Laboratrio de Esclerocronologia Universidade Federal do Paran.

305
Existem ainda outras importantes aplicaes decorrentes do estudo de idade e crescimento em
peixes. Na cincia pesqueira, clculos como os de longevidade, das taxas de mortalidade e dos
modelos de avaliao de estoques (i.e., modelos que permitem avaliar diferentes situaes de
explotao de recursos pesqueiros) dependem da disponibilidade de dados de crescimento
(Beverton e Holt 1993, Sparre e Venema 1998). A modelagem ecolgica tambm usa
parmetros de crescimento, entre outras informaes, para quantificar a contribuio das
diferentes espcies de peixes nos diversos compartimentos (caixinhas) do modelo (Walters e
Martell 2004, Spounagle 2010, Methot e Wetzel 2013).
Deste modo, a idade e o crescimento so fundamentais para compreenso da biologia da espcie
(o desenvolvimento individual), da dinmica de populaes (como o conjunto de indivduos
cresce e sua abundncia), da estrutura da comunidade (cada populao cresce de uma maneira) e
do funcionamento do ecossistema (quais classes etrias so predadas/pescadas, etc.).

4.2 O modelo de crescimento

Entendida a importncia do estudo do crescimento, surge a questo: como associar

comprimento corporal, a varivel disponvel, com idade? Matematicamente isto feito atravs
de modelos e, entre os vrios disponveis para peixes (Moreau 1987, Gamito 1998, Haddon
2001, Vaz-dos-Santos no prelo), aquele que tem sido mais utilizado o modelo de von
Bertalanffy (von Bertalanffy 1938). Este modelo um caso especial de curva exponencial e
considera a idade como a varivel independente (x) e o comprimento corporal na idade a
varivel resposta (y). Tem sido eficiente para descrever o crescimento de vertebrados, com
ampla aplicao em peixes. constitudo por trs constantes (a, b, c), os parmetros de
crescimento.
O modelo de von Bertalanffy dado por:

FL t = FL [1 e k ( t t 0 ) ]

Onde:
FLt = comprimento corporal do peixe na idade t (varivel y);
FL = comprimento mximo terico (constante a);
k = taxa de crescimento (constante b);
t = idade no comprimento FLt (varivel x);
t0 = idade terica no comprimento zero (constante c).

A idade terica de comprimento zero (t0) representa o incio da curva, sendo um valor negativo
que representa o tempo entre a fertilizao, o desenvolvimento inicial at a ecloso: na idade
zero, o peixe j possui um tamanho corporal! A taxa de crescimento (k) representa a velocidade

306
do incremento em comprimento. Quanto maior a taxa, maior a velocidade de crescimento, sendo
o inverso verdadeiro. O comprimento mximo terico, como o prprio nome diz, aquele
comprimento baseado nas medidas dos peixes mais velhos, sendo um ajuste do final da curva de
crescimento, representando o tamanho mdio64 dos peixes mais velhos. Taxa de crescimento e
comprimento mximo terico guardam uma proporcionalidade entre si (Pauly e Munro 1984):
geralmente, maiores taxas de crescimento esto relacionadas aos menores comprimentos
mximos tericos, sendo o inverso verdadeiro (Figura 4.2).

50 120
45
comprimento corporal (cm)

comprimento corporal (cm)

40 100
35 80
30
25 60
20
15 Balistes capriscus (eixo 1) 40
10 Engraulis anchoita (eixo 1)
20
5 Lopholatilus villarii (eixo 2)
0 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
idade (anos)

Figura 4.2 Curvas de crescimento de von Bertalanffy para diferentes espcies, estimadas com
os parmetros obtidos por Castro et al. (2005) para Balistes capriscus, Castello (2005) para
Engraulis anchoita e vila-da-Silva e Haimovici (2005) para Lopholatilus villarii.

O passo inicial para ajustar o modelo a obteno de uma tabela entre idade (x) e comprimento
corporal (y), para construo do diagrama de disperso e posterior estimativa dos parmetros do
modelo de von Bertalanffy (ou de outros modelos, cf. Moreau 1987, Haddon, 2001, Vaz-dos-
Santos no prelo). Entretanto, como estimar o comprimento na idade?
Existem quatro mtodos diferentes que permitem relacionar idade e comprimento (Fonteles
Filho 1989): atravs de criao em cativeiro, da anlise de distribuio de frequncias de
comprimentos, de marcao e recaptura e atravs da leitura de anis em estruturas rgidas. Neste
texto nos ateremos leitura de anis em estruturas rgidas, especificamente nos otlitos, cujas
propriedades so extremamente vantajosas para se estudar idade e crescimento.

4.3 Esclerocronologia

64
Mdio no sentido popular, no estatstico.

307
A interpretao da idade e do crescimento a partir de estruturas rgidas chamada de
osseocronometria ou esclerocronologia. Esclerocronologia o estudo das variaes fsico-
qumicas na formao de estruturas rgidas de organismos, no contexto de sua formao (IFAS
2007). Aplicada a peixes, otlitos, escamas, vrtebras, espinhos e alguns ossos tm sido as
estruturas mais utilizadas, sejam inteiras, cortadas ou parte delas (Meunier e Panfili 2002).
Baseia-se no princpio que, ao longo de um ciclo de crescimento somtico do indivduo, h
fases com maior ou menor deposio de carbonato de clcio, matria orgnica e dos outros
elementos constituintes dos otlitos (Morales-Nin 2000). Estes ciclos podem ser dirios
(Pannella 1971) ou sub-dirios, o que nos leva a anlise microestrutural do crescimento ou
anuais, conceituados como anlise macroestrutural do crescimento (Brothers 1987). H ainda
marcas que se formam estacionalmente ou de acordo com eventos como fases lunares, cuja
anlise pode envolver os dois tipos de anlise mencionados (Wright et al. 2002a).
Na anlise macroestrutural as variaes no crescimento somtico podem ser devidas a diversos
eventos como reproduo (direcionamento da energia para o desenvolvimento de gnadas),
migrao (gastos com deslocamento), menor disponibilidade de alimento (condies de
inverno), entre outros (Weatherley e Gill 1987, Busacker et al. 1990, Wootton 1998, Saborido-
Rey e Kjesbu 2005). Estes eventos alteram o esforo fisiolgico e a energia direcionada para o
crescimento somtico e, como consequncia, altera-se a taxa de deposio dos otlitos,
promovendo a formao de zonas mais calcificadas (opacas, relacionadas a maior acrscimo de
material) e outras menos calcificadas (translcidas, decorrentes da menor calcificao) (Figura
4.3) (Secor et al. 1991). Atente que estes termos esto relacionados natureza fsica da
estrutura, no nos aspectos de visualizao ao estereomicroscpio ou microscpio. Se
conseguirmos periodizar a formao destas marcas e relacion-las a eventos biolgicos,
logramos sucesso na atribuio de idade e, consequentemente, na estimativa do crescimento.
Desta maneira, visualizar bem os anis nos otlitos fundamental para um bom estudo de
crescimento.

308
 A Dorsal B
Foto: Aline Giombelli da Silva

Foto: Anglica Arruda Justino

Ventral

Figura 4.3 - Otlitos sagittae inteiros de Mugil curema (A) e de Haemulopsis corvinaeformis
(B) mostrando o ncleo opaco (seta) e as sucessivas zonas translcidas e opacas. Marcas e
imperfeioes foram mantidas nas imagens, evidenciando a realidade de visualizao de anis
(Fonte: LABESC-UFPR).

4.4 Preparao de otlitos e obteno de dados para anlise do crescimento

A escolha da melhor tcnica de visualizao de anis pode ser muito trabalhosa, mas deve ser
executada com ateno, calma e detalhe. Existem diversas obras que mostram didaticamente os
passos na preparao de otlitos (FAO 1981, Gjsaeter et al. 1984, Secor et al. 1991, Morales-
Nin 1992, Vanderkooy 2009). Particularmente em 2002, Jacques Panfili, um cientista francs do
IFREMER65, junto com diversos renomados otolitlogos, editou o Manual of Fish
Schlerochronology, reunindo tcnicas para a conduo de diversos estudos com otlitos (Panfili
et al. 2002). Posteriormente, aspectos tcnicos e, principalmente analticos, foram apresentados
no livro Tropical fish otoliths: information for assessment, management and ecology (Green et
al. 2009).
Destas tcnicas, o que deve ser avaliado, para visualizao dos anis: se a anlise macro ou
microestrutural; se os anis sero visualizados inteiros ou seccionados; se h necessidade de
polimento ou no; se preciso aplicar alguma tcnica de realce dos anis; se haver montagem
em lminas. Esta etapa, de deciso sobre tcnicas, envolve tempo e material que possa ser
perdido sem prejuzo das amostras. Observar tambm, como j mencionado nesta obra, se
otlito simtrico ou no.

4.4.1 Amostras de otlitos

A quantidade de otlitos (n) a ser analisada em um estudo de crescimento deve contemplar: (i)
representatividade ontogentica, asseverando que grande parte das fases de vida estejam
65
Institut Franais de Recherche pour L'exploitation de la Mer.

309
representadas e (ii) representatividade temporal ao longo de um ciclo, idealmente dois (Panfili e
Morales-Nin 2002a). Outros elementos qualitativos que sejam analisados, como diferenas entre
machos e fmeas, variaes geogrficas, entre outros, devem ser considerados de acordo com o
objetivo do estudo. Anlises microestruturais geralmente possuem objetivos especficos que no
apenas a idade e o crescimento per se (Geffen 1987, Stevenson e Campana 1992, Morales-Nin
1992, Campana 2001), o que faz com o n amostral possa ser pensado de modo diferenciado.
Anlises macroestruturais, entretanto, devem procurar contemplar os requisitos da seguinte
forma:
- estabelecer classes de comprimento corporal seguindo, por exemplo, o teorema de Sturges
(Vieira 2008);
- determinar a temporalidade ideal das anlises66, em funo de viabilidade: quinzenal uma
periodicidade benvinda, principalmente em regies tropicais e para espcies que apresentem
longos perodos de desova. Entretanto, como raramente isto factvel, amostras mensais so as
mais indicadas e, caso o n ainda assim seja insuficiente, pode-se pensar em agrupar os dados em
bimestres ou trimestres;
- estimar o n de indivduos a partir de uma amostra piloto ou de uma simulao, calculando o
tamanho amostral mnimo (Gulland 1966) ou aplicando a regra dos 10 (Gotelli e Ellison 2011),
procurando-se obter 10 otlitos por classe de comprimento corporal por perodo de anlise (cf.
Captulo 7).

4.4.2 Representatividade dos otlitos para o estudo do crescimento

Em uma primeira etapa fundamental conhecer a posio dos otlitos dentro da cpsula tica
do peixe. Muitas vezes os otlitos esto depositados em colees e o estudo do crescimento ser
realizado a partir de materiais previamente coletados. Busque obter alguns exemplares frescos
para dissecar. Por que esta etapa importante? Os otlitos apresentam diferentes formas (cf.
Captulo 2) e tendem a crescer proporcionalmente forma corporal (cf. Captulo 3), i.e, otlitos
de peixes compridos crescero mais no eixo anterior-posterior, em peixes mais rombudos os
otlitos crescero mais tridimensionalmente, etc. Desta forma, o crescimento do otlito
diferenciado, em suas diferentes partes: compreender estes aspectos nos leva a pensar em eixos
de leitura e tcnicas de preparao.
Entendida a morfologia e o desenvolvimento do otlito, de forma emprica, cabe quantificar o
crescimento do otlito em funo do crescimento do peixe (Brothers 1987). Nesta etapa,
medidas do otlito em posio natural, normalmente o comprimento (OL, maior distncia no
eixo anterior-posterior), a altura (OH, maior distncia no eixo dorsal-ventral) e o peso do otlito

66
As amostragens podem ser realizadas diariamente, semanalmente etc. Entretanto, aqui estamos nos referindo a
como os dados e materiais das amostragens sero utilizados para compor as amostras.

310
(OW) so utilizadas como varivel dependente (y) contra o comprimento corporal (x),
ajustando-se aos dados modelos de regresso (cf. Captulo 3). O objetivo desta etapa verificar
se e como o otlito acompanha o crescimento dos indivduos.

4.4.3 Preparao de otlitos

Com os otlitos medidos, cabe definir a melhor tcnica de visualizao dos anis (cf. FAO
1981, Secor et al. 1991, Stevenson e Campana 1992, Panfili et al. 2002). Em otlitos inteiros
normalmente no possvel visualizar todos os anis de crescimento, havendo tendncia de
subestimativa da idade, principalmente em idades iniciais e em peixes mais velhos. Entretanto,
esta tcnica vlida e ainda aplicada a vrias espcies. Normalmente, em funo das
propriedades da luz ao estereomicroscpio, seja refletida (fonte de luz superior) ou transmitida
(fonte de luz inferior), usual a submerso do otlito em algum fluido (gua destilada, lcool
etlico 70%, xilol, leo cosmtico para bebs, blsamo do Canad se montado em lmina)
combinada ou no com alguma tcnica (queima, colorao) que realce os anis. O uso de fluido
pode ser instantneo ou depender de um perodo de tempo anterior (geralmente at 24h antes)
para clareamento. Deve-se ter o cuidado de verificar se a tcnica de realce ser irreversvel e/ou
se causar dano ao otlito, o que delineia muito do uso do material (se raro e com necessidade
de ser preservado, se abundante e passvel de uso).
As tcnicas mais acuradas de anlise de otlitos, em uma perspectiva macroestrutural, envolvem
seco transversal ou longitudinal (sagital) e polimento. Seces transversais dependem da
disponibilidade de uma cortadora metalogrfica de baixa rotao. Otlitos pequenos e/ou com
formas arredondadas normalmente so includos em resina, maiores podem ser cortados
diretamente (Figura 4.4).

311
 A B C

D E

Figura 4.4 (A) Cortadora metalogrfica de baixa rotao (Foto: IsoMet Low Speed Saw disponvel em

https://shop.buehler.com/). (B) Otlito sagitta de Hoplostethus occidentalis emblocado em resina (Foto:

Brbara Gris). (C) Posicionamento do bloco com o otlito na cortadora metalogrfica (Foto: Anglica

Arruda Justino). (D) Bloco sendo cortado na cortadora metalogrfica (Foto: Anglica Arruda
Justino). (E) Corte transversal mediano do tlito sagitta de Hoplostethus occidentalis (Foto: Aline
Giombelli da Silva) (Fonte: LABESC-UFPR).

Da mesma maneira que nos otlitos inteiros, tcnicas de realce de anel (queima, colorao),
podem ser aplicadas:
- a queima pode ser realizada com os otlitos inteiros em chama no bico de Bunsen, sobre papel
alumnio (Figura 4.5) ou em assadeira no forno. Para processar vrios otlitos simultaneamente
no forno, o ideal que possuam tamanho similar.
- a colorao pode ser realizada antes ou depois da seco, dependendo da tcnica.

312
 mplo de queiima de otlittos em chama do bico de Bunsen. Os otlitos ficaam em
Figurra 4.5 Exem
camaas de papel allumnio sobrre tela de amianto (Foto: Anndr Martins Vazz dos Santos. Fontte: LABESC-UFPPR).

No caso
c da prepparao de otlitos
o paraa anlises microestrutura
m ais, geralmennte so utiliizados
otlittos inteiros ou
o seces, polidas em am
mbas as facess com linhas metalogrficcas a base dee gua
(12m
m, 9m, 3m
m) e com paastas de polim
mento (0,5m
m, 0,3m), das
d de maiorr grana para as de
menoor.

4.4.4 Leitura de anis em otlitos

Uma vez que a tcnica de preparao e visualizao tenha siddo definida,, parte-se en
nto a
interppretao doss anis nos otlitos.
o Funndamentalmeente, a interppretao da idade comeea no
primrdio, definido como o ponto
p iniciall da formao do otlito, decorrente da deposio dos
primeeiros grnuloos de carbonato de clcioo, ainda na faase ovo (Wriight et al. 20002a) (Figuraa 4.6).
Muitaas vezes, principalmen
p nte em anlises macro
oestruturais, o primrdiio no pod
de ser
deviddamente visuualizado, maas existe umaa grande reg
gio central opaca,
o o nccleo, que pod
de ser
utilizzada como reeferencial parra as leiturass (Figura 4.3)). O que no se deve connfundir, ao an
nalisar
o otlito, se o primrdio
p estt definido e,
e a partir deele, h uma zona
z de cresccimento do otlito
o
sem incrementoss aparentes, ou se o otlito
o mu
uito opaco e os increm
mentos no esto
visuaalizveis. Funndamentalmeente, deve-see estabelecerr o ponto reeferencial connsiderado co
omo o
incioo de formao da estrutuura seguir estte critrio em
m todo o matterial analisaado. Quando no
possvel estabelecer de form
ma clara o prrimrdio/nccleo, podemoos utilizar ouutros referen
nciais,
comoo a posio do
d sulcus acuusticus, paraa definir este incio. Alm
m disso, em algumas esp
pcies,
comoo nos clupeddeos, com
mum ncleos serem opaccos ou transllcidos, reveelando a con
ndio
iniciaal de crescim
mento dos inddivduos (Rosssi-Wongtschowski et all. 1982).

313
 50 m

Figura 4.6 Otlito sagitta de Anchoa tricolor polido em suas faces interna para anlise
microestrutural do crescimento, com a seta indicando o primrdio (Foto: Brbara Gris. Fonte: LABESC-

UFPR).

Seguindo com a anlise dos otlitos, deve-se definir o eixo de leitura, no qual os sucessivos
anis sero contados e medidos at a borda. A escolha do eixo de leitura depende de uma srie
de variveis, devendo-se levar em conta o eixo de crescimento que melhor represente a estrutura
e a visualizao de anis. Por este motivo, antes de analisar a idade em si, importante avaliar a
morfometria do otlito.
A observao dos otlitos implica em definir o que um anel de crescimento. Diversos autores
conceituam de forma diferente o chamado anel e, por este motivo, imprescindvel esclarecer
em cada estudo o que est sendo considerado como anel. O anel representa o ciclo que est
sendo avaliado. Usualmente se considera o conjunto de uma zona opaca e outra translcida
como um anel (Morales-Nin 1992). No bagre Cathorops spixii, cujo lapillus o otlito
utilizado, a zona opaca estreita e a zona translcida mais larga (Figura 4.7). Nas sagittae
usualmente ocorre o contrrio, com zonas translcidas estreitas e opacas largas, como em Mugil
curema e Haemulopsis corvinaeformis (Figura 4.3).

314
Figura 4.7 Seco transversal do otlito lapillus de Cathorops spixii evidenciando as zonas
opacas estreitas e as zonas translcidas largas (Foto: Anglica Arruda Justino. Fonte: LABESC-UFPR).

Considerando o padro das sagittae, como realizada a leitura? A zona translcida representa
perodos de crescimento lento; logo, ela pode ser assinalada como o referencial de formao do
anel. Ao longo do eixo de leitura, os raios dos anis (Rn) so medidos no incio da zona
translcida, sendo anotado tambm o raio do otlito (Ro). Fique atento unidade da medida
inicial e converta-a depois se for o caso, como por exemplo quando tomada em escala
micromtrica. A natureza da borda tambm deve ser assinalada se houver uma zona
translcida (TR) na borda do otlito, o peixe foi capturado em uma poca de menor
crescimento, quando o anel estava sendo formado. Se a borda for opaca (OP), a captura se deu
em um momento de crescimento rpido. Ateno nesta etapa em como ser assinalado o grupo
de anel na planilha (Figura 4.8).

Figura 4.8 Exemplo de planilha de leitura de anis em otlitos, mostrando os campos que
devem ser anotados.

No exemplo da Figura 4.8, observe que o indivduo 001 possui dois anis completos e um em
formao, na borda, enquanto que o indivduo 002 possui trs anis completos formados. Isto
implica em grupos de anel diferentes e provavelmente idades diferentes, mesmo que seja uma
diferena de meses! Em leitores com grande experincia, comum o uso de zonas translcidas e

315
opacas estreitas e largas (ICSEAF 1983), quantificando estas diferenas; entretanto, quando se
tem pouca experincia esta distino no recomendada.
Quando ainda da interpretao de anis, cabe lembrar que o crescimento individual diminui ao
longo do tempo/idade. Apesar de a taxa de crescimento (k) do modelo de von Bertalanffy ser a
mesma, quanto mais velho o peixe maior a razo FLt/FL. Logo, a distncia entre os anis de
crescimento tende a diminuir com a idade, apesar de isto nem sempre ser observado. Alm
disso, apesar da variabilidade individual, de se esperar que em uma mesma populao os
eventos relacionados ao crescimento se processem de modo semelhantes nos diferentes
indivduos.
Com todas estas informaes e ponderaes, ao menos trs leituras cegas e independentes dos
otlitos devem ser realizadas (Campana 2001). A leitura cega implica em no conhecer o
comprimento corporal, o sexo, a data e o local de captura, elementos que podem levar
tendenciosidade. Da o cuidado no caso de um mesmo leitor realizar as leituras: procure um
intervalo de ao menos 15 dias entre cada uma delas.

4.5 Anlise do crescimento

Uma vez que trs leituras de otlitos tenham sido realizadas, inicia-se ento uma importante e
trabalhosa etapa de atribuio da idade e de modelagem do crescimento. A primeira etapa
consiste em consolidar a informao das trs leituras de otlitos em uma nica, o que implica
em compar-las.

4.5.1 Comparao entre leituras de anis

O produto das leituras de anis so trs informaes distintas: nmero de anis, tipo de borda e
posio dos anis.

4.5.1.1 Consistncia entre o nmero de anis

A comparao do nmero de anis est consolidada e estabelecida na literatura sobre anlise de

estruturas rgidas desde que Beamish e Fournier (1981) apresentaram o erro percentual mdio
(EPM), calculado individualmente para cada peixe (j) e dado por:

1 R NAi NA j
EPM j = NA 100%
R i =1 j

316
Onde:
R = nmero de leituras realizadas;
NAi = nmero de anis na leitura i;
NAj = nmero de anis mdio.

Em 1982, Chang props uma modificao deste ndice, apresentando o coeficiente de variao
(CVj):

R ( NAi NAj ) 2

i =1 R 1
CV j = 100%
NAj

Considere, p.ex., um exemplar de manjuba (Anchoa tricolor) para o qual foram realizadas trs
leituras de anis dirios:

Leitura NAi NAj |NAi - NAj| |NAi - NAj| / NAj

1 65 7,67 0,106
2 79 72,67 6,33 0,087
3 74 1,33 0,018
Soma 0,211
1/R 1/3
Soma x 1 / R 0,070
EMP (%) 7,03

O erro percentual mdio deste indivduo foi 7,03%, correspondente a um coeficiente de variao
de 9,76%. O clculo do EMP e do CV feito para cada peixe e, posteriormente, calcula-se uma
mdia, que pode ser interpretada da seguinte maneira, de forma emprica (Campana 2001):

Atente para o termo utilizado: leituras precisas! Preciso um termo estatstico que indica a
proximidade de valores quando se repete a leitura, ou seja: no estamos avaliando a acurcia, se
a leitura reflete a verdade sobre a idade do peixe.
Outra ferramenta para comparar a preciso das leituras o grfico de desvio da idade67
(Campana et al. 1995). Desenvolvido para dirimir os problemas apresentados em outras tcnicas
de comparao de leituras (regresso e testes estatsticos pareados), ele se baseia na plotagem da

67
Age bias plot.

317
idade atribuda em uma leitura (x) com e a mdia (y) e o intervalo de confiana da outra leitura
(Figura 4.9). A funo do intervalo de confiana verificar desvios em relao a bissetriz,
referencial de equivalncia (Campana et al. 1995).

A B

Figura 4.9 Grfico de desvio de idade para comparao da preciso entre duas leituras. (A)
Nesta espcie houve grande preciso, havendo desvios mnimos em relao bissetriz. (B)
Nesta outra espcie houve grande inconsistncia entre as leituras, o que no significa que uma
delas esteja errada, mas apenas que o padro foi diferente, o que implica em rever o critrio de
leitura de anis.

4.5.1.2 Anlise de coincidncia do tipo de borda

A comparao entre os tipos de borda no algo comum na literatura sobre anlise de otlitos,
entretanto deve ser considerado. No basta haver a mesma contagem do nmero de anis, uma
vez que identificar se h uma zona translcida ou no no momento da captura fundamental
para atribuir a idade dos exemplares. Uma maneira de verificar esta variao atravs da anlise
de coincidncia do tipo de borda, computando as frequncias de bordas nas diferentes leituras.
No exemplo abaixo, para o parati, Mugil curema, houve diferena em 22% das bordas entre
leituras, sendo que em 17% foram lidas bordas opacas na leitura 1 e translcidas na 2 e, em 5%,
o inverso (Figura 4.10). Aplicando um teste qui-quadrado de aderncia a estes dados (Zar 2010),
verifica-se que a variao foi significativa ao nvel de 5%, com acentuado predomnio de bordas
analisadas igualmente nas duas leituras.

318
Figura 4.10 Anlise de coincidncia do tipo de borda para o parati, Mugil curema, com
resultado do teste qui-quadrado de aderncia.

4.5.1.3 Anlise dos raios dos anis

Quantificar a variao nos raios dos anis (Rn) entre leituras outro tema pouco abordado em
estudos sobre crescimento a partir de estruturas rgidas. Entretanto, mesmo que nmero de anis
e o tipo de borda sejam similares entre leituras, se os raios dos anis forem muito diferentes
entre si no h consistncia entre estas leituras. Uma maneira de comparar os raios entre leituras
atravs de distribuies de frequncias (adaptado de Morales-Nin e Panfili 2002a). Para este
mtodo, constroem-se distribuies de frequncia por intervalos de classe para os raios de cada
anel. A comparao entre leituras feita duas a duas, atravs da aplicao de um teste de
Kolmogorov-Smirnov. Os raios do primeiro anel da merluza, Merluccius hubbsi, foram
comparados entre duas leituras, no havendo diferena entre elas (P > 0,05) (Figura 4.11). Esta
uma maneira de identificar inconsistncias, apesar de no levar em conta variaes
individuais. Uma maneira tentativa de sobrepujar este problema seria aplicar o erro percentual
mdio (Beamish e Fournier 1981) e o coeficiente de variao (Chang 1982) para comparar os
raios do mesmo anel, substituindo o nmero de anis pelos raios. Isto permite analisar todas as
leituras simultaneamente e verificar varries superiores a 5%. No caso do nosso exemplo, a
aplicao destes ndices aos raios do primeiro anel considerando trs leituras de otlitos resultou
em EMPR1 = 4,10% e CVR1 = 1,13%, indicando alta preciso.

319
Figura 4.11 Distribuio de frequncia dos valores dos raios do anel 1 para a merluza,
Merluccius hubbsi, com resultado do teste de Kolmogorov-Smirnov.

4.5.2 Representatividade das leituras de otlitos

As etapas descritas na seo 4.5.1 servem para a comparao entre leituras e consolidao de
um conjunto nico de informaes (nmero de anis, tipo de borda, raios dos anis, raio do
otlito) que ser utilizado nas etapas subsequentes do estudo. Considera-se que, a partir deste
momento, h um conjunto depurado de informaes nico para anlise.
O uso das contagens (NA) e dos raios dos anis (Rn) como indicadores do crescimento implica
que os anis representem este crescimento. Caso contrrio, no h porque utilizar a informao
e seguir com a atribuio da idade e o estudo do crescimento.
A construo de um diagrama de disperso entre as medidas dos raios dos otlitos (Ro) e o
comprimento corporal (FL), ajustando-se uma regresso entre os dados, a primeira maneira de
conferir se o eixo de leitura representa o crescimento da espcie (Figura 4.12A). Observe que
foi utilizado um exemplo real, do parati (Mugil curema), cujos otlitos inteiros foram analisados
no eixo posterior e no qual nem todos os comprimentos estavam bem representados na amostra.
Independentemente disto, o ajuste foi bom, indicando que o eixo de leitura cresce em uma
proporo maior que a do comprimento (b > 1), o que vantajoso para a anlise de anis.
O grfico de constncia (Vaz-dos-Santos e Rossi-Wongtschowski 2007) consiste na plotagem
individual dos valores dos raios dos anis (Rn), por grupo de anel, em funo do comprimento
total (Figura 4.12B). Permite averiguar se os raios dos anis apresentam a mesma posio ao
longo de todas as idades, o que inerente s propriedades dos otlitos, que uma vez formados
no so reabsorvidos (Morales-Nin 2000).

320
A anlise da posio de cada anel, atravs das medidas de seus raios (Rn), outra tcnica que
permite verificar se os anis representam o crescimento. Deve-se utilizar o grfico de caixa
(Figura 4.12C) para apresentar a variao a partir dos elementos da estatstica descritiva. No
exemplo com M. curema, nota-se pouca sobreposio entre as caixas, o que refora a adequao
das anlises dos otlitos. No se recomenda aqui o uso de mdia e intervalo de confiana, pois o
objetivo verificar a preciso dos dados amostrais e no da mdia em si; para efeito de teste
estatstico, pode-se aplicar uma anlise de varincia um fator (ou o teste de Kruskal Wallis) (Zar
2010), seguido por um teste a posteriori para identificar se as medidas dos anis so diferentes
entre si. No caso de nosso exemplo, houve variao significativa entre as mdias (ANOVA F =
1.887,46, P < 0,001), no havendo diferena significativa apenas entre os raios mdios dos anis
4 e 5 (P > 0,05).

A B

anel

Figura 4.12 Exemplo com dados de Mugil curema. (A) Diagrama de disperso e regresso
potencial entre os raios dos otlitos (Ro) e comprimento total (FL), indicando proporcionalidade
no eixo de leitura. (B) Grfico de constncia indicando consistncia na posio dos anis (Rn)
em relao aos diferentes comprimentos totais (FL). (C) Grfico de caixa indicando pouca
sobreposio entre as medidas dos raios dos anis (Rn), que acompanham o crescimento (ponto
= mdia; barra central = mediana; caixa quartis; barras = 1,5 x intervalo interquartil; asterisco
= observao espria).

321
4.5.3 Validao

A validao consiste na determinao da periodicidade e poca de formao dos anis nos

otlitos. Deve ser realizada para cada anel etrio em separado, ou seja, por grupo de anel. Se a
formao de cada anel for validada, ento a idade absoluta do peixe tambm ser validada
(Campana 2001). um conceito diretamente relacionado acurcia da leitura de otlitos, ou
seja, o quanto que aquelas informaes de fato indicam a idade do peixe (Geffen 1992). Muitos
estudos sobre idade e crescimento apresentam a validao com todos os anis juntos (e por isto
no os citaremos), sem que isto seja discutido, ponderado e explicado, levando a uma situao
pior do que a ausncia de validao: a validao involuntariamente frgil e equivocada.
O artigo de Campana (2001), com as devidas atualizaes em seu site68, bem como o Manual of
Fish Schlerochronology (Panfili et al. 2002), apresentam e discutem diversas tcnicas de
validao, seja da idade absoluta ou apenas da formao de anis, como um indicador de idade
absoluta. Neste texto nos focaremos naquelas que so mais comumente utilizadas69, devido
sua viabilidade. Validaes diretas (formao de marcas em peixes com idades conhecidas)
(Wright et al. 2002b) tem sido aplicadas principalmente para a validao de anis dirios ou do
primeiro anel.
Seguramente os mtodos de validao semi-direta (Panfili e Morales-Nin 2002a) so os mais
amplamente aplicados, apesar de suas limitaes tcnicas, analisadas com extremo criticismo
(Campana 2001). Estes autores reforam a importncia de se ter dois ciclos completos e de se
analisar cada grupo de anel em separado para aplicao destas tcnicas. Adicione-se a estas
observaes que uma resoluo temporal detalhada (quinzenal ou meses) o ideal para o uso
destas tcnicas. Recomenda-se tambm uma abordagem holstica na validao, com o uso de
mltiplas tcnicas simultaneamente.

4.5.3.1 Incremento marginal

A anlise de incremento marginal (MI) uma tcnica que quantifica a distncia do ltimo anel
formado em relao borda do otlito, sendo uma ferramenta til para indivduos com mais de
um ano de idade, jovens (e adultos novos) e com longevidade baixa (Campana 2001, Panfili e
Morales-Nin 2002a). Em peixes muito velhos e longevos, devido proximidade dos anis junto
borda, uma ferramenta pouco til. Tem como pressuposto bsico que a distncia entre os
anis se reduza paulatinamente ao longo do desenvolvimento. O valor do incremento marginal
varia entre zero e um e os menores valores indicam formao do anel.

68
http://www.bio.gc.ca/otoliths/
69
Principalmente no espectro da produo desta obra, originria da Amrica Latina.

322
A quantificao do incremento marginal pode ser realizada de forma absoluta (MIA) ou relativa
(MIR) (Panfili e Morales-Nin 2002a), sendo utilizadas para tal as frmulas de Mio (1961):

Ro Rn Ro Rn
MIA = MIR =
Ro Rn Rn1
Onde:
Ro = raio do otlito;
Rn = raio do anel mais adjacente borda;
Rn-1 = raio do penltimo anel mais adjacente borda.

Estas frmulas permitem o clculo do incremento marginal individual e, posteriormente, as

mdias por perodo por grupo de anel so analisadas (Figura 4.13). Distribuies de frequncia
de incrementos marginais por classes de MI, por perodo, tambm podem ser utilizadas, para
avaliar o deslocamento de modas ao longo do ano entre valores altos e baixos, indicativos de
formao do anel (Haimovici e Reis 1984, Vieira e Haimovici 1993).

Figura 4.13 Exemplo generalizado do clculo do incremento marginal para os grupos de anel
2 e 3 ao longo de dois ciclos. Note que o incremento no grupo 3 foi proporcionalmente menor
que no grupo 2, como era de se esperar. Os vales nos meses de maio-junho-julho sugerem que
este o perodo de formao dos anis.

A aplicao do incremento marginal deve considerar que: (i) em otlitos seccionados h maior
acuidade na identificao e mensurao de anis junto borda (Hyndes et al. 1992); (ii) so
fontes de vis no clculo do incremento marginal a insuficincia amostral, a anlise conjunta de
peixes capturados longo de perodos muito longos e diferentes e em espcies com um longo

323
perodo reprodutivo e vrias datas de nascimento (Lessa et al. 2006); (iii) alimentao e
temperatura podem influenciar a largura dos incrementos nos otlitos (Fey 2005).

4.5.3.2 Porcentagem do tipo de borda

A anlise da porcentagem do tipo de borda por perodo e por anel (Figura 4.14) deve ser
realizada em conjunto com a anlise de incremento marginal (Morales-Nin 1992, Panfili e
Morales-Nin 2002a). um mtodo que tem sido amplamente utilizado (Quddus et al. 1984,
Rtz 1994, Norbis et al. 1999, Hie et al. 2009, Vaz-dos-Santos e Rossi-Wongtschowski 2007,
Cardoso e Haimovici 2011, Hssy et al. 2011, Scartascini et al. 2015). Entretanto, vale ressaltar
que os pressupostos de sua utilizao so os mesmos daqueles observados para o incremento
marginal, o que exige cautela na interpretao de dados com peixes de diferentes grupos de anel
agrupados.

Figura 4.14 Exemplo generalizado da anlise do tipo de borda para um grupo de anel ao longo
de dois ciclos. Note que a elevada porcentagem de bordas translcidas nos meses de maio-
junho-julho sugerem que este o perodo de formao dos anis.

4.5.3.3 Outras tcnicas de validao

A validao da formao dos anis e da idade absoluta pode ser realizada atravs de diversas
outras tcnicas, algumas delas confundidas com tcnicas de corroborao, i.e., aquelas utilizadas
para reforar a acurcia da tcnica de validao (Campana 2001). Validao e corroborao so
temas atuais e de vanguarda: basta verificar que no 5th International Otolith Symposium,
realizado em Palma de Mallorca em 2014, no Reino da Espanha, houve um workshop inteiro
dedicado ao tema.

324
Entre as outras tcnicas de validao, mais comumente aplicadas em estudos no hemisfrio
norte, constam aquelas que: (i) utilizam peixes com idades conhecidas (Morales-Nin et al. 2010;
Koenigs et al. 2015); (ii) atravs de marcao e recaptura (Eveson et al. 2015, Etherton 2015);
(iii) com datao por radiocarbono (carbono 14) (Kalish 1993 depende do peixe ter sido
exposto aos testes nucleares); (iv) atravs de datao radioqumica, com uso de istopos
associado a variveis ambientais (Kastelle et al. 2014); (v) progresso de modas de
comprimento (Carbonara et al. 2014), e; (vi) criao em cativeiro (Freshwater 2014). A maioria
destas tcnicas apresenta maior eficincia em espcies de guas temperadas e frias, com ciclos
de vida marcados, alm de dependerem de amostragens muito eficientes em termos de resoluo
espao-temporal e, em muitos casos, envolverem custos altos.
Semelhante aos conceitos gerais que norteiam o uso e aplicao da progresso de modas de
comprimento de peixes (item v pargrafo acima), a anlise do comprimento corporal mdio por
grupo de anel ao longo de um ciclo (idealmente dois) permite verificar o momento em que se
forma um novo anel ocorre posterior aumento do comprimento (Yamaguti e Santos 1966,
Vazzoler 1981, Saccardo et al. 1988).
Campana (2001) informa ainda que, quando no possvel validar a idade absoluta em uma
anlise macroestrutural, deve-se procurar validar a formao do primeiro anel anual ou
macroestrutural (combinando, p. ex. com tcnicas de anis dirios), delimitando assim o marco
inicial da anlise de anis. Exemplos para Mugil curema (Santana et al. 2009), Trachurus
murphy (Goicochea et al. 2013) e Thunnus albacares (Shih et al. 2014) ilustram estas situaes.
Como ferramenta auxiliar no diagnstico sobre a formao dos anis em otlitos, pode-se
calcular o fator de condio mdio (Le Cren 1951, Froese 2006), por perodo por grupo de anel.
O fator de condio, enquanto medida de bem estar do indivduo (Bagenal e Tesch 1978), pode
ser eficientemente utilizado nos estudos de dinmica de populaes, auxiliando diagnsticos
sobre crescimento, reproduo alimentao. Desta forma, pode-se utilizar o fator de condio
alomtrico (Kt) e/ou o relativo (Kn):

FW FW
Kt = Kt =
FLb FW '
Onde:
FW = peso total do indivduo;
FL = comprimento total do indivduo;
b = constante exponencial da relao comprimento peso;
FW = peso total esperado, calculado a partir da relao comprimento peso.

325
O uso do fator de condio alomtrico recomendado por sua independncia do comprimento
corporal (Braga 1986). O fator de condio relativo possui como vantagem o valor referencial 1
(Andrade-Talmelli et al. 2001).

4.6 Estimativa dos parmetros de crescimento e estrutura etria

A validao da formao dos anis e da idade absoluta permite converter os grupos de anis em
idades. Observe que a atribuio da idade no um processo simples; depende de quantos anis
so formados ao ano, quando eles so formados, qual a data de captura do peixe e quando
ocorre o recrutamento (FAO 1981, Morales-Nin e Panfili 2002b). Elementos adicionais na
interpretao de otlitos (anis pr-anuais), marcas associadas a eventos especficos (mudana
de hbitat, primeira maturao, etc.) devem ter sido diagnosticados; veja que deter-se sobre os
otlitos e o significado de sua estrutura fundamental.
Tomemos como exemplo para atribuio de idade a sardinha-verdadeira, Sardinella
brasiliensis: so reportados dois anis pr-anuais nos jovens do ano (Rossi-Wongtschowski et
al. 1982) e a formao de dois anis ao ano, um no perodo de novembro, quando do incio do
perodo reprodutivo, e outro em maro, no final da desova (Saccardo et al. 1988). Deste modo,
uma sardinha capturada em abril de 2015 com trs anis completos e borda translcida
apresenta um ano de idade: o anel do final da reproduo est sendo formado (borda), o anel de
incio de reproduo est completo (final de 2014) e outros dois decorrem do primeiro ano de
vida (o indivduo produto do final da desova de 2013-2014). Atendo-se a estes aspectos, a
idade pode ser assinalada, de forma cuidadosa e com muito critrio.
Finalmente obtm-se ento a correspondncia entre a idade (x) e o comprimento (y). Esta a
base para a estimativa dos parmetros de crescimento, do modelo de von Bertalanffy e de outros
modelos, que no sero aqui tratados. A estimativa dos parmetros de crescimento pode ser feita
atravs de todos os dados de idade e comprimento ou com as mdias de comprimento por idade.
A escolha do melhor ajuste deve levar em conta: o ajuste do modelo aos dados (anlise visual
do grfico), adequao biolgica das estimativas e critrios estatsticos, como a varincia (S2) ou
o erro padro (S) da regresso (Zar, 2010) ou o critrio de informao de Akaike (Quinn II e
Deriso 1999). Para estimar os parmetros do modelo, recomenda-se o uso de mtodos iterativos
de minimizao da soma dos quadrados residual (Sparre e Venema 1998) ou de mxima
verossimilhana (Aubone e Whler 2000).
No caso de Sardinella brasiliensis, foi aplicado o mtodo de minimizao da soma de
quadrados residual (cf. Captulo 7), para todos os dados de comprimento (A) e para suas mdias
por idade (B), sendo obtidos os seguintes modelos de crescimento (Figura 4.15):

FLt = 255,82 {1 - e [-0,3557 (idade + 1,1494)]} S = 27,895 (A)

326
 FLt = 297,59 {1 - e [-0,2584 (idade + 1,3215)]} S = 4,249 (B)

250 250
A B
200
200
(mm)

(mm)
Ct (mm)

Ct (mm)
150
150
FL

FL
100
100
50
0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 5
idade (anos) idade (anos)

Figura 4.15 Curvas de crescimento do modelo de von Bertalanffy para Sardinella brasiliensis,
estimadas com todos os parmetros aleatrios. (A) Comprimentos totais por idade. (B)
Comprimentos totais mdios por idade.

No exemplo acima, qual modelo escolher para representar o crescimento de Sardinella

brasiliensis? Visualmente, a curva B ajustou-se melhor aos dados, assim como pelo menor valor
do erro padro da regresso (S). Em termos biolgicos, o maior comprimento corporal na
amostra foi de 242 mm e, por este atributo, o modelo A foi melhor. Entretanto, note que em
ambos os modelos o valor da idade terica de comprimento zero (t0) foi um valor absurdo e sem
qualquer significado biolgico, pois est expresso em anos. Se tomssemos o valor de 1,1494 e
multiplicssemos por 365 dias, teramos antes da ecloso uma fase ovo com durao de cerca de
420 dias!
Existem vrias opes para solucionar este problema e, estes caminhos, envolvem critrio,
parcimnia, bom senso e habilidade em modelar. Por exemplo, possvel estimar apenas o FL
e o k do modelo de von Bertalanffy, sem o t0.
Neste exemplo, optou-se por estimar o comprimento mximo terico com a frmula de Pauly
(1983) e fix-lo, sendo FL = FLmximo / 0,95, resultando em 254,74 mm. Esta opo deveu-se a
pouca quantidade de peixes maiores e mais velhos na amostra, apesar do referencial disponvel.
Mesmo conhecendo o tempo de incubao da sardinha-verdadeira, cerca de 24h e
correspondente a um t0 = -1/365 = -0,003 ano, optamos por no fixar este valor na estimativa,
por no termos peixes pequenos disponveis e dados sobre esta parte da curva. Por sua vez, os
peixes da idade zero tambm foram removidos da estimativa, por apresentarem uma varincia
muito grande e serem indivduos que ainda no tem um ano, mas no idade zero propriamente
dita. Poder-se-ia utilizar os anis pr-anuais para estimar uma idade fracionada, mas aqui
optamos por simplificar a anlise. A nova estimativa resultou no modelo abaixo (Figura 4.16),
que apresenta a melhor adequao biolgica e um bom ajuste estatstico (S) (apesar de no ser o

327
melhor, mas este no o nico critrio de escolha) para descrever o crescimento da amostra de
S. brasiliensis analisada. Obviamente que neste caso o valor de t0 no apresenta qualquer
significado biolgico.

FLt = 254,74 {1 - e [-0,4135 (idade + 0,8358)]} S = 7,659

250

225
(mm)

200
Ct (mm)
FL

175

150

1 2 3 4 5
idade (anos)

Figura 4.16 Curva de crescimento do modelo de von Bertalanffy para Sardinella brasiliensis,
estimada com o comprimento mximo terico fixado.

Com as idades atribudas ou extrapolando-as para a amostra analisada com o modelo inverso de
von Bertalanffy (da qual os otlitos foram subamostrados), possvel construir uma chave
idade-comprimento (Ricker 1975). Esta tabela permite converter comprimentos em idades e,
desta forma, acessar a estrutura etria da amostra/populao:

Chave idade-comprimento de Sardinella brasiliensis.

limite Idade (anos)
inferior
Total
Classe FL 0 1 2 3 4 5
(mm)
60 100% 100%
70 88% 13% 100%
80 75% 25% 100%
90 78% 22% 100%
100 17% 83% 100%
110 56% 44% 100%
120 55% 45% 100%
130 64% 36% 100%
140 33% 67% 100%
150 23% 50% 27% 100%
160 11% 57% 32% 100%
170 21% 55% 24% 100%

328
 180 25% 46% 25% 4% 100%
190 6% 65% 29% 100%
200 35% 60% 5% 100%
210 41% 47% 12% 100%
220 26% 61% 13% 100%
230 18% 53% 29% 100%
240 100% 100%

Apesar de ser tratar apenas de um exemplo para este livro, vale salientar que a alta variabilidade
biolgica observada na tabela acima normal, principalmente em espcies tropicais e
subtropicais, com prolongados perodos de desova e tendncia a ser r-estrategistas.
Dificilmente, anlises sob estas circustncias produzem exemplos ideiais...

4.7 Retroclculo

Retroclculo o conjunto de tcnicas que permite reconstituir o padro de crescimento

individual do peixe a partir dos anis nos otlitos (Vigliola e Meekan 2009). Depende da relao
entre o raio do otlito (Ro) no eixo de leitura (varivel independente x) e do comprimento
corporal (varivel dependente y), a partir da qual se pode estimar, com os diferentes mtodos, os
comprimentos corporais na poca de formao dos anis. Isto til para: (i) gerar dados de
comprimentos em idades mal representadas nas amostras, como peixes em idades mais jovens;
(ii) aumentar a quantidade de dados para estimar o modelo de crescimento, melhorando o ajuste,
e; (iii) verificar a coerncia da leituras de anis (p. ex., se um anel gerar um comprimento
retrocalculado com valor negativo, h algo muito errado!) (Vaz-dos-Santos e Rossi-
Wongtschowski 2007).
Existem diversos estudos sobre tcnicas de retroclculo, mas so clssicos imprescindveis
Francis (1990, 1995) e Campana (1990). Posteriormente a eles, destacamos Jones (2000),
Wilson et al. (2009) e Vigliola e Meekan (2009). No nos ateremos ao retroclculo neste texto,
dada a especificidade do tema, que exige aprofundamento do leitor.

4.8 Concluses

O uso de otlitos uma das ferramentas mais acuradas para estudos sobre idade, crescimento e
estrutura etria. Esta rea tem-se aprimorado e envolvido a combinao de mltiplas tcnicas,
como marcao-recaptura, anlises morfomtricas, uso do peso do otlito como indicador de
idade, anlises macro e microestruturais e anlises qumicas (istopos, microqumica) como
indicadores ambientais e do ciclo de vida. Os modelos ecolgicos-ecossistmicos, elaboradas
ferramentas de uso, manejo e conservao de ambientes e organismos aquticos, tambm

329
demandam bons e acurados estudos de idade e crescimento, que adquirem maior importncia
alm de sua motivao inicial, as cincias pesqueiras. Tambm os anis no anuais, como anis
pr-anuais formados ao longo do primeiro ano de vida, marcas relacionadas migrao entre
diferentes ambientes ou a eventos especficos (El Nio, chuvas, intruso de massas dgua,
starvation, etc.) tem sido exploradas na atribuio da idade. Logo, as perguntas/hipteses que
motivam o uso de otlitos em idade e crescimento se expandiram e ganharam complexidade.
Duas tendncias contrastantes se notam no atual momento em relao ao uso de otlitos para
estudos de idade e crescimento, em diferentes pases e grupos de pesquisa ao redor do mundo.
No hemisfrio norte, principalmente, v-se um cenrio positivo, no qual estes estudos
continuam sendo realizados, desenvolvidos e aprimorados (reviso constante dos protocolos e
mtodos, com inovaes), quer seja para monitoramento pesqueiro ou para as cincias da
natureza (biologia, ecologia, fisiologia, oceanografia, limnologia, ...). Por outro lado, em um
cenrio preocupante, ou os otlitos tm sido utilizados em uma rotina aptica e inquestionvel
de idade e crescimento, para o monitoramento pesqueiro, ou so utilizados apenas para outros
estudos (morfometria, microqumica, istopos, etc.), relegando a idade e o crescimento a uma
cincia menor e antiquada. Pode-se conjecturar algumas razes para tal, comentadas a seguir.
Estudos de idade e crescimento envolvem a anlise de grandes quantidades de otlitos, de
centenas a milhares, o que depende de um grande esforo (amostral, financeiro, analtico) que,
fora de uma estrutura e rotina institucional de amostragem, de difcil viabilizao. Alm disso,
a qualidade de um cientista/acadmico medida principalmente por suas publicaes em
revistas com alta qualificao e fator de impacto; um trabalhoso estudo de idade e crescimento,
que no observe rigorosamente a metodologia aqui elencada e no traga grandes hipteses,
dificilmente ser aceito nestes peridicos. Logo, pessoal e profissionalmente um pesquisador
tende a optar por outras reas da otolitologia que, com dezenas de otlitos, permitem a
publicao nestas revistas (mas no respondem s questes da idade e do crescimento). Some-se
a estes fatores que anlises de otlitos, idade e crescimento exigem desenvolvimento, facilidade
e familiaridade com tcnicas quantitativas, como clculo diferencial e integral, bioestatsticas
clssica (paramtrica e no paramtrica), Bayesiana e de verossimilhana, modelagem e anlises
multivariadas.
O cenrio descrito acima traz algumas consequncias prejudiciais para os estudos de idade e
crescimento com base em otlitos, aqui diagnosticadas pelo constante acompanhamento do tema
em publicaes e eventos:
Para muitas espcies de peixes, h a sndrome do parmetro eterno ou seja: uma vez que
exista uma estimativa dos parmetros de crescimento para a espcie, em um determinado local e
rea, ela deixa de ser interessante para estudo. Obviamente que esta percepo contraria os
princpios bsicos da ecologia, sobre plasticidade biolgica, denso-dependncia populacional,

330
efeitos ambientais e biolgicos sobre indivduos e populaes. Logo, estude e reestude os
otlitos, a idade e o crescimento, pois sempre haver perguntas a serem respondidas.
O uso de otlitos em outras tcnicas (descritas neste livro), com perguntas/hipteses inerentes a
elas, podem demandar que a idade dos peixes seja conhecida. Na falta de parmetros de
crescimento atualizadas para a populao em questo, j observamos o aproveitamento de
estimativas para a espcie em outras reas/localidades ou, pior ainda, a adoo de parmetros
estimados para espcies congenricas! Isto no pode ser feito e, neste caso, deve-se utilizar a
contagem de anis (peixes designados por grupo de anel) e as medidas dos raios dos anis ao
longo do eixo de leitura para a realizao do estudo; quando finalmente o crescimento da
espcie for estudado, ser fcil converter os resultados em idade.
H muitos estudos de idade e crescimento publicados em diversas revistas (inclusive nas
altamente qualificadas!) que apresentam uma sucesso involuntria de erros, no observando o
rigor metodolgico apresentado neste captulo. Possuem resultados frgeis e discusses
inapropriadas. Parte disto se deve ao efeito bola de neve: como muitos erros esto publicados,
servem como referncia bibliogrfica para outros autores, perpetuando-se e consolidando-se
como verdade! Outro elemento que pode contribuir para este acontecimento o reducionismo
de alguns acadmicos: buscam na literatura apenas os parmetros de crescimento da espcie,
sem atentar nos artigos para sua preciosa e correta discusso.
Como considerao final, o presente texto apresentou de forma objetiva e direta os principais
aspectos dos estudos de idade e crescimento com otlitos; jamais teve a inteno de ser um
referencial pleno sobre o tema e, por isso mesmo, serve como uma referncia inicial para esta
rea da esclerocronologia.

Agradecimentos

Aos meus alunos de graduao e ps-graduao que, nestes vrios anos, estiverem ao meu lado
constituindo um time no estudo de otlitos em suas diversas reas. MSc. Nayra Nicolau dos
Santos Cruz, com quem iniciamos a morfologia e morfometria de otlitos na UNISANTA, em
2005, e que foi a primeira enviada Buenos Aires, para o curso de otlitos da Dra. Alejandra
Volpedo. MSc. Adrielen da Silva Rondon, que encarou o desafio de consolidar o espao
fsico do laboratrio na USJT, em 2009. Aos meus atuais braos direitos, que me socorreram na
preparao deste captulo: Brbara Gris, Aline Giombelli da Silva e Anglica Arruda Justino.

331
332
5. MICROQUMICA DE OTLITOS: CONCEITOS, MTODOS E APLICAES

Esteban Avigliano e Alejandra Vanina Volpedo

Sumrio
5.1 Introduo...........................................................................................................................333
5.2 Quais fatores influenciam a composio qumica dos otlitos?..........................................334
5.3 Mtodos para determinar a composio qumica de otlitos..............................................336
5.3.1 Espectrometria de absoro atmica (AAS)....................................................................337
5.3.2 Espectrometria de emisso atmica por plasma acoplado indutivamente (ICP-OES).....338
5.3.3 Anlise de ativao neutrnica (NAA)............................................................................339
5.3.4 Microssonda eletrnica (EPMA)......................................................................................340
5.3.5 Emisso de raios X induzida por micro partculas (Micro-PIXE)...................................341
5.3.6 Espectrometria de massas por plasma acoplado indutivamente (ICP-MS)......................341
5.3.7 Espectrometria de massas por plasma acoplado indutivamente com ablao a laser (LA-
ICPMS).....................................................................................................................................342
5.4 Como analisar os resultados estatisiticamente para a discriminao de reas de criao,
desova e estoques pesqueiros utilizando a microqumica de otlitos?......................................343
5.5 Anlises de dados de composio qumica de otlitos........................................................343
5.5.1 Tratamento de dados com distribuio normal e homocedasticidade: estatstica
paramtrica................................................................................................................................343
5.5.2 Tratamentos de dados que no se ajustam distribuio normal e a homocedasticidade:
estatstica no paramtrica........................................................................................................345
5.6 Aplicao da composio qumica dos otlitos na anlise dos padres de migrao do bagre
Genidens barbus a travs de LA-ICP-MS.................................................................................346
5.7 Concluses..........................................................................................................................347

5.1 Introduo

Otlitos so compostos principalmente por carbonato de clcio (97-99%) em uma matriz

orgnica (Campana 1999). O carbonato de clcio se apresenta predominantemente na forma de
aragonita e depositado continuamente ao longo da vida na maioria dos peixes telesteos
(Campana 1999, Campana e Thorrold 2001). Para alguns peixes dipnoicos, o carbonato de
clcio dos otlitos pode ser polimrfico, composto por vaterita e aragonita para espcies como
Lepidosiren paradoxa e Propterus sp., ou aragonita e calcita para Neoceratodus sp. (Gonzalez

333
Naya et al. 2008).
A deposio de clcio nos otlitos um processo extracelular regulado hormonalmente e
influenciado por variaes ambientais (Morales-Nin et al. 1998). Estas estruturas so
conservativas, uma vez que o material que as compe no reabsorvido ou alterado com o
tempo. Desta forma, otlitos so quimicamente (metabolicamente) inertes.
Os elementos qumicos disponveis na gua entram no sangue atravs das brnquias ou do
intestino, passam pela endolinfa e so finalmente cristalizados nos otlitos (Campana 1999,
Sturrock et al. 2012). Estes elementos podem ser incorporados aos otlitos por cristalizao
direta, por substituio ao clcio e tambm preenchendo os espaos intersticiais da matriz
proteica (Campana 1999). A incorporao de elementos foi revisada por Campana (1999) e
Sturrock et al. (2012).

5.2 Quais fatores influenciam a composio qumica dos otlitos?

A composio qumica dos otlitos influenciada por fatores endgenos e exgenos ao peixe.
Entre os fatores exgenos constam a composio qumica da gua, as condies ambientais (por
exemplo, temperatura e salinidade) e as fontes de alimento (Kalish 1991, Thorrold et al. 1997,
Campana 1999, Secor e Rooker 2000, Elsdon y Gillanders 2002, Sturrock et al. 2012).
A composio qumica da gua regulada por processos fsico-qumicos e influenciada pelas
diferenas geolgicas das rochas subjacentes, pela precipitao, pela eroso, por processos
microbianos e pela influncia antrpica (Kerr et al. 2007, 2014, Volpedo e Fernndez Cirelli
2013). A avaliao da composio qumica dos otlitos tem-se mostrado uma excelente
ferramenta para avaliar a variabilidade espacial da composio qumica da gua em diferentes
escalas espaciais (Secor e Zdanowicz 1998, Gillanders e Kingsford 2000, Gillanders 2002,
Dorval et al. 2005, Miller 2007, Walther e Thorrold 2008, Scartascini e Volpedo 2013e
Avigliano e Volpedo 2013, Avigliano et al. 2014) e temporais (Campana et al. 2000, Gillanders
2002, Mateo et al. 2010).
A anlise da microqumica de otlitos possibilita gerar um perfil da histria de vida (Campana e
Thorrold 2001) e informaes sobre as caractersticas ambientais s quais cada peixe foi
submetido ao longo da vida (Wells et al. 2003, Dufour et al. 2005, Whitledge et al. 2006).
Particularmente, a anlise de elementos trao em combinao com anis de crescimento
constituem um importante arquivo no qual esto registradas, de maneira temporalmente
organizada, as mudanas ambientais e a exposio a contaminantes ao longo da ontogenia dos
peixes (Halden e Frierich 2008). Embora os estudos sobre a composio qumicas de otlitos
tenham sido originados nas ltimas dcadas, as relaes entre a concentrao de alguns
elementos nos otlitos e sua disponibilidade no ambiente (gua, sedimento e dieta da espcie)
ainda no so claras (Elsdon et al., 2008) e poderiam ser devidas a variaes interespecficas,

334
tornando difcil generalizar resultados. Entre os elementos trao mais estudados esto o
estrncio (Sr) e o brio (Ba) (Campana 1999, McCulloch et al. 2005, Elsdon y Gillanders 2005,
Tabouret et al. 2010, Avigliano et al. 2014, 2015a,b).
A variabilidade da concentrao de Sr nos otlitos se deve principalmente composio
qumica da gua e, em menor escala, temperatura (Campana 1999, Wells et al. 2003). Existe
uma relao positiva entre a concentrao de Sr nos otlitos e na gua. A concentrao de Sr na
gua, por sua vez, costuma ser positivamente relacionada salinidade (Kraus e Secor 2003,
Avigliano e Volpedo, 2013).
Inversamente, a concentrao de Ba nos otlitos apresenta correlao negativa com a salinidade
da gua (Tabouret et al. 2010). Estas particularidades fazem com que o Sr e o Ba sejam os
elementos mais utilizados no estudo de movimentos e discriminao de estoques de peixes que
habitam ambientes com salinidades variveis (Secor et al. 1995, Kraus e Secor 2004, Zlokovitz
et al. 2003, Schuchert et al. 2010, Tabouret et al. 2010, Holbach et al. 2012, Reis-Santos et al.
2012, Avigliano e Volpedo 2013, Avigliano et al. 2014, Avigliano et al. 2015c,d,f).
A influncia da temperatura sobre as quantidades de Sr depositadas nos otlitos varia de
maneira interespecfica (Campana 1999). Em linhas gerais, contudo, a relao Sr:Ca nos otlitos
tende a aumentar com a temperatura (Campana 1999). Diferentemente de Sr e Ba, a
incorporao de outros elementos, como ltio (Li), mangans (Mn), magnsio (Mg) e zinco (Zn)
nos otlitos depende de diferentes fatores, como temperatura, salinidade, concentrao destes
elementos na gua, alimentao e fatores fisiolgicos (Martin e Thorrold 2005, Bouchard et al.
2015). Alm disso, j foram documentados efeitos sinrgicos entre temperatura e salinidade na
qumica de otlitos, que podem afetar a interpretao das histrias ambientais experienciadas
pelos peixes (Elsdon e Gillanders 2002, Kerr e Campana, 2014).
Outros fatores que influenciam a composio qumica dos otlitos podem estar associados
diretamente aos peixes, como bioecologia (alimentao, fisiologia, reproduo), gentica e
histria evolutiva. A contribuio da dieta tem sido escassamente estudada tanto na natureza
quanto em laboratrio. Acredita-se que elementos como o sdio (Na), o potssio (K), o clcio
(Ca), o cobre (Cu), o Mg e o Mn seriam incorporados mais pelo ambiente que pela dieta
(Buckel et al. 2004, Marohn et al. 2009), enquanto que o Zn estaria mais relacionado ao
alimento (Ranaldi e Gagnon 2008).
As diferenas fisiolgicas entre espcies podem resultar em diferenas na incorporao de
elementos nos otlitos. Por exemplo, diferenas ontogenticas nas taxas de crescimento influem
nas concentraes de Mg, Sr, e Ba em otlitos (Kalish 1989, Fowler et al. 1995, Secor et al.
1995), apesar destes processos no serem completamente compreendidos. A reproduo
tambm pode influenciar a composio qumica dos otlitos, podendo provocar variaes nas
taxas de incorporao de alguns elementos (Fuiman e Hoff 1995). Estudos recentes sugerem que
fatores especficos como diferenas genticas entre populaes podem ser determinantes para a

335
composio qumica dos otlitos (Martin e Thorrold 2005, Clarke et al. 2011).

5.3 Mtodos para determinar a composio qumica de otlitos

Considerando a pergunta biolgica que se quer responder sobre os peixes, os otlitos podem ser
analisados basicamente de trs formas distintas: (i) anlise de otlitos inteiros (digesto cida),
(ii) anlise de seces do otlito, do ncleo at a borda, (iii) ou ponto a ponto, dependendo da
rea da estrutura que se quer analisar.
No caso de dissolver o otlito, o mesmo deve ser limpo com gua MiliQ logo aps sua extrao,
pesado em balana analtica e dissolvido atravs de cido ntrico (HNO3) de mxima pureza. A
concentrao do cido depender da massa dos otlitos e da metodologia de determinao dos
elementos (Avigliano et al. 2015c, Bailey et al. 2015).
No caso da anlise de diferentes pores dos otlitos, de acordo com a tcnica sugerida por
Avigliano et al. (2015c, d), necessrio incluir os otlitos em resina cristal epxi e seccion-los
transversalmente atravs do ncleo (Figura 5.1), de maneira semelhante ao empregado para
estudos de crescimento. Posteriormente as pores a serem analisadas so obtidas por mtodos
de micropolimento. As pores obtidas devem ser descontaminadas com cido ntrico e gua
MiliQ para posterior digesto cida (Arslan e Secor, 2008).
Outras metodologias como LA-ICP-MS (Ablao a laser e espectrometria de massas por plasma
acoplado indutivamente) permitem determinar a microqumica do otlito de forma contnua
desde o ncleo at a borda, ou em regies especficas dos otlitos com elevada preciso
(Albuquerque et al. 2012).
Estas metodologias de anlises esto estreitamente associadas ao tipo de tcnicas utilizadas na
determinao da composio qumica e aos protocolos de preparao de amostras e resoluo
dos mesmos. As tcnicas analticas mais empregadas nos ltimos trinta anos so: (i)
Espectrometria de Absoro Atmica (AAS), (ii) Espectrometria de emisso atmica por
plasma acoplado indutivamente (ICP-OES), (iii) Anlise de ativao com nutrons (NAA), (iv)
Microssonda eletrnica (EPMA), (v) Emisso de raios X induzida por micropartculas (Micro-
PIXE), (vi) Espectrometria de massas por plasma acoplado indutivamente (ICP-MS), (vii)
Ablao a laser e espectrometria de massas por plasma acoplado indutivamente (LA-ICP-MS).

336
Figura 5.1 - Processo de separao de pores de otlitos lapillus de Genidens barbus atravs da
tcnica de micropolimento. A-B: processo de corte. C: sees transversais. D: duas pores
separadas (4 anis incluindo o ncleo e 4 anis incluindo a borda) (Fonte: Avigliano et al. 2015c).

5.3.1 Espectrometria de absoro atmica (AAS)

Esta anlise se baseia no princpio de que os tomos livres em estado fundamental podem
absorver a luz em um determinado comprimento de onda. A absoro especfica, ou seja, cada
elemento absorve comprimentos de onda nicos. uma tcnica analtica aplicvel
determinao de metais em baixas concentraes em diferentes tipos de matriz, neste caso, o
carbonato de clcio dos otlitos.

Figura 5.2 - Espectrmetro de Absoro Atmica Perkin-Elmer 2100 (Fonte:

http://www.icv.csic.es/node/38).

337
A fonte mais utilizada para gerar a luz que ser absorvida pelos tomos para as medies a
lmpada de ctodo oco, que consiste em um cilindro de vidro fechado que contm um gs inerte
(geralmente argnio). As amostras so inseridas no equipamento em meio gasoso, ento
necessria uma fonte de calor para gaseificar a amostra, o que feito a partir de uma chama ou
forno de grafite.
Para usar chama (atomizador de chama) como fonte de calor para AAS, necessrio que as
amostras estejam em estado lquido, ou seja, os otlitos precisam sofrer digesto cida antes de
serem analisados. Para amostras slidas, se faz uso do forno de grafite, que capaz de analisar
tanto amostras slidas quanto lquidas.
Um atomizador de chama consiste em um nebulizador, o qual transforma a amostra lquida em
um aerossol que alimenta o queimador. Um atomizador eletrotrmico garante alta sensibilidade
porque atomiza a amostra em sua totalidade. A atomizao ocorre em um forno cilndrico de
grafite aberto em ambos os lados e com um espao vazio no centro, para a introduo da
amostra. Para evitar que o ar entre no forno, so utilizadas duas correntes de gs inerte com
presso positiva. Essas mesmas correntes possibilitam a extrao dos vapores gerados a partir da
combusto das amostras. Os comprimentos de onda desejados para medio so separados
atravs de monocromadores. A luz no comprimento de onda escolhido passa ento por um
fotomultiplicador, que converte a luz em sinais eltricos. Um equipamento de AAS pode ser
visto na figura 5.2.
O mtodo de AAS j foi utilizado para determinar a composio qumica de otlitos de
diferentes espcies, tais como Sciaenops ocellatus (Hoff e Fuiman 1995, Townsend et al. 1995)
e Morone saxatilis (Secor et al. 2001).

5.3.2 Espectrometria de emisso atmica por plasma acoplado indutivamente (ICP-OES)

Esta tcnica permite a determinao de concentraes de elementos trao em otlitos, sendo as

molculas dissociadas em tomos livres atravs de uma fonte de calor do tipo plasma. Mais
recentemente, outros tipos de descargas eltricas, chamadas plasma, tem sido utilizadas como
fonte de excitao para o OES. O plasma pode ser acoplado indutivamente ou diretamente,
apresentando vantagens sobre outros mtodos de queima, uma vez que permite determinar
mltiplos elementos em um amplo gradiente de concentraes. O plasma pode ser gerado
indutivamente atravs do direcionamento da energia de um gerador de frequncia de rdio para
um gs, normalmente argnio. Gases como hlio (He) e nitrognio (N) tambm podem ser
usados para produzir o plasma. importante que o gs utilizado seja puro, pois contaminantes
podem apagar a tocha.

338
Figura 5.3 - Espectrmetro de emisso ptica por plasma acoplado indutivamente (ICP-OES)
Perkin Elmer 2000.

A temperatura do plasma varia de 6.000 a 10.000 K. Esta energia suficiente para ionizar
tomos de argnio e da amostra por excitao de choque. A intensidade da luz emitida
separada por um sistema ptico de prismas e quantificada por um detector. O ICP-OES permite
analisar uma grande quantidade de amostras em um perodo curto de tempo, com bons limites
de deteco para a maioria dos elementos. Este mtodo tambm j foi utilizado para a
determinao da composio qumica de otlitos de diferentes espcies (Avigliano e Volpedo
2013, Avigliano et al., 2014, 2015).

5.3.3 Anlise de ativao neutrnica (NAA)

Esta tcnica permite analisar uma pequena amostra ao exp-la a um fluxo de nutrons trmicos
provenientes de um reator. Muitos dos ncleos gerados so radioativos e se desintegram
posteriormente com a emisso de um fton. Os distintos raios so caractersticos de cada
desintegrao particular. Portanto, analisando os raios emitidos pela amostra ativada pelo
fluxo de nutrons, possvel determinar os elementos presentes (de acordo com o tipo de
energia) e sua quantidade (de acordo com a intensidade dos raios). Essas energias so
determinadas automaticamente atravs de ordenadores e analisadores multicanais (Figura 5.4).

339
Figura 5.4 - Sistema de espectroscopia de raios gama (Fonte: http://serc.carleton.edu/details/images/8971.html).

O mtodo NAA no destrutivo, portanto bastante til para a anlise de amostras nicas, por
exemplo, otlitos de espcies de importncia arqueolgica e foi utilizado por Suzuki et al.
(2005) e Gao et al. (2010).

5.3.4 Microssonda eletrnica (EPMA)

A anlise de microssonda eletrnica uma tcnica de grande preciso e sensibilidade, cujo

princpio consiste em bombardear a amostra com um feixe de eltrons e medir os comprimentos
de onda e intensidade dos raios X emitidos. Na Figura 5.5 apresentado um equipamento
EPMA. Essa tcnica permite realizar determinaes em transectos ou regies pontuais do otlito
e tem sido usada por diversos autores nas ltimas dcadas (e.g. Secor et al. 2007, Lin et al.
2012, Panfili et al. 2012).

Figura 5.5 - Microssonda eletrnica (EPMA) Jeol modelo JXA-8230 (Fonte:

http://www.directindustry.es/prod/jeol/product-20754-695697.html).

340
5.3.5 Emisso de raios X induzida por micro partculas (Micro-PIXE)

Esta tcnica serve para caracterizao mineral e se aplica geralmente em explorao e

explotao mineral. O Micro-PIXE uma microssonda protnica. So analisados os raios X
produzidos ao bombardear uma amostra atravs de um feixe de prtons que pode ser focalizado
em escala micromtrica. A tcnica consiste basicamente em um acelerador que produz um feixe
de prtons com energia de 3 MeV (podendo ser varivel) e um sistema de focalizao
magntico que direciona o feixe de prtons atravs de um tubo horizontal at uma cmara onde
se encontra a amostra. O bombardeamento precisa ser realizado no vcuo para evitar o
espalhamento do feixe de prtons. Da mesma forma que o mtodo de EPMA, a anlise por
Micro-PIXE permite medir regies especficas do otlito com elevada preciso e utilizada
para determinar elementos-trao em otlitos j h alguns anos (Babaluk et al. 2002, Saquet et al.
2002, Zhong et al. 2007, Jiang et al., 2012).

5.3.6 Espectrometria de massas por plasma acoplado indutivamente (ICP-MS)

A espectrometria de massas (MS) utiliza o movimento de ons em campos eltricos e

magnticos para classific-los de acordo com sua relao massa-carga. uma tcnica pela qual
as substncias qumicas so identificadas separando os ons gasosos em campos eltricos e
magnticos.

Figura 5.6: Espectrmetro de massas com plasma acoplado Agilent 7500 series (Fonte:

http://www.agilent.com/about/newsroom/lsca/imagelibrary/images/lsca_66_icpms.jpg).

O espectrmetro de massas garante medies qualitativas e quantitativas sobre a composio

atmica e molecular de materiais inorgnicos e orgnicos. Os espectrmetros de massas so
compostos por quatro partes bsicas: Um sistema de introduo de amostra para anlise, uma
fonte de ons na qual se produz um feixe de partculas provenientes da amostra, um analisador

341
que separa partculas de acordo com sua massa e um detector no qual os ons separados so
recoletados e caracterizados. O espectrmetro requer um trajeto libre de colises par os ons e,
portanto, precisa funcionar sob vcuo ou em condies de quasi-vcuo. A fonte de ons cria
fragmentos de ons gasosos da amostra. O objetivo do espectrmetro de massas separar os ons
que so produzidos pela fonte de acordo com as diferentes relaes massa-carga. Na Figura 5.6
observa-se um espectrmetro de massas. Esse mtodo foi utilizado para determinar a
composio qumica dos otlitos de diversas espcies (Swan et al. 2003, Patterson et al. 2004,
Fairclough et al., 2011).

5.3.7 Espectrometria de massas por plasma acoplado indutivamente com ablao a laser
(LA-ICPMS)

Esta tcnica tem os mesmos princpios utilizados no ICP-MS, porm o espectrmetro de massas
acoplado a um ablador a laser (Figura 5.7). Da mesma forma que as tcnicas EPMA e Micro-
PIXE, esta tcnica permite determinar elementos trao de forma pontual sobre seces de
otlitos. Contudo, proporciona maior sensibilidade, principalmente para elementos como
cdmio (Cd), cobre (Cu), chumbo (Pb) e zinco (Zn) (Arslan e Secor 2008). provavelmente a
metodologia mais utilizada para anlise de otlitos nos ltimos anos (Arai et al. 2007,
Albuquerque et al. 2012, Geffen et al. 2013, Mai et al. 2014, Avigliano et al. 2015a,b).

Figura 5.7 - Espectrmetro de massa com multicoletor, plasma acoplado indutivamente e

sistema de ablao a laser (LA-MC-ICP-MS) (Fonte:

http://www.cega.ing.uchile.cl/cega/index.php/es/noticias?start=60).

342
5.4 Como analisar os resultados estatisiticamente para a discriminao de reas de
criao, desova e estoques pesqueiros utilizando a microqumica de otlitos?

A anlise de dados obtidos na determinao da composio qumica de otlitos to importante

quanto a determinao analtica em si. A concentrao dos elementos trao deve ser apresentada
em funo do Ca. Isto est relacionado a dois fatores: (i) alguns elementos divalentes em
soluo como Sr e Mg podem precipitar no otlitos substituindo o Ca, que apresenta raio
atmico semelhante (Carlstrom 1963); (ii) o CaCO3 o elemento que se encontra em maior
abundncia nos otlitos (Campana 1999) e os elementos-trao representam menos de 1% da
massa total. Desta forma, apresentar os elementos trao em funo da concentrao de Ca
diminui o efeito destes fatores sobre as variveis a serem avaliadas. A maioria dos estudos
apresenta a relao elemento:Ca em milimol por mol (mmol/mol), sendo escassos os estudos
que utilizam a relao miligrama por grama (mg/g) ou micrograma por grama (g/g).

5.5 Anlises de dados de composio qumica de otlitos

5.5.1 Tratamento de dados com distribuio normal e homocedasticidade: estatstica

paramtrica

A seguir so apresentados os procedimentos detalhados de anlise estatstica necessrios para

realizar comparaes de diferentes elementos trao entre grupos cujos valores se ajustam a uma
distribuio normal e homocedstica:

- Em primeiro lugar necessrio comprovar que os dados dentro de cada grupo de estudo (por
exemplo, locais de coleta) seguem os pressupostos de normalidade e homogeneidade de
varincias. Para avaliar a normalidade usamos o teste de Shapiro-Wilk. Neste caso, a hiptese
nula que a amostra proveniente de uma populao que apresenta distribuio normal, sendo
rejeitada para P < 0,05. Os testes de Bartlett e Levene so indicados para testar a
homogeneidade de varincias. Neste caso, se testa a hiptese nula de que todas as varincias de
populao k so iguais, contra a hiptese alternativa de que pelo menos duas so diferentes entre
si. Caso os dados no cumpram os dois pressupostos, transformaes matemticas como ln(x)
ou log10(x) podem ser aplicadas, ou ln(x+1) ou log10(x+1) se as concentraes forem inferiores a
um. As transformaes devem ser aplicadas por elemento e para todos os grupos (mesmo que
somente um grupo no cumpra os pressupostos).

343
- Identificar e eliminar os dados claramente atpicos (outliers) (valores que superem 1,5x a
amplitude interquartil). Neste caso, so importantes a experincia e o critrio do pesquisador,
uma vez que alguns valores que aparentam ser dados discrepantes podem na verdade estar
associados a exemplares que migram, ou por exemplo, peixes de tamanhos extremos.

- As relaes elemento:Ca podem covariar com a massa do otlitos. O efeito da massa do otlito
sobre a concentrao de alguns elementos trao pode confundir diferenas espaciais ou
temporais na composio qumica, levando a concluses incorretas. Por exemplo, no caso do
peixe-rei, Odontesthes bonariensis, foi observada uma relao negativa entre massa do otlito e
relao Sr:Ca. Neste caso, o efeito da massa foi eliminado utilizando a massa do otlito como
covarivel atravs de uma anlise de covarincia (ANCOVA) (Avigliano et al. 2014). Porm, a
correo pela ANCOVA deve ser aplicada somente quando as variveis elemento:Ca e massa
dos otlitos apresentam relao linear e com bom ajuste. Se houver relao linear significativa,
mas o ajuste no for bom, deve-se abrir mo desta correo. Em situaes onde houver um bom
ajuste funes no lineares, outras alternativas devem ser utilizadas para remoo do efeito da
massa. Por exemplo, Campana et al. (2000) encontraram uma relao curvilnea entre as
relaes ln(Mg), Mn e Sr com a massa do otlito. Neste caso o efeito da massa foi suprimido
subtraindo o termo [elemento:Ca]=b0+(b1/peso), onde b0 representa a relao Sr:Ca original e b1
o coeficiente obtido da ANCOVA.

- Anlises univariadas (para cada elemento) como ANOVA, teste t, etc., so recomendadas para
avaliar diferenas entre grupos.

- Anlises multivariadas como anlise multivariada de varincias (MANOVA) so teis parar

avaliar diferenas entre assinaturas qumicas de trs ou mais grupos de estudo. Caso se
encontrem diferenas significativas, testes de comparaes de pares como T2 Hotelling ou T2
Hotelling modificado por Bonferroni podem ser aplicados para identificar os grupos que
diferem entre si. No caso de comparar assinaturas qumicas entre grupos, o teste T2 Hotelling
pode ser aplicado diretamente para avaliar as diferenas (Avigliano et al. 2015f). Este teste
tolerante violao dos pressupostos de normalidade e homogeneidade de varincias e pode ser
aplicado a amostras relativamente pequenas.

- Anlises de ordenamento, como a anlise discriminante cannica (ACD), podem ser utilizadas
para identificar as variveis que mais contribuem para a diferenciao das assinaturas qumicas
entre grupos. A representao grfica das primeiras funes discriminantes proporciona
informao visual sobre a classificao. Por ltimo, deve-se utilizar a matriz de classificao
cruzada parar avaliar se foram obtidas boas porcentagens de classificaes corretas de

344
indivduos a seus respectivos grupos previamente definidos. A ACD tambm pode ser usada
para indicar a origem de amostras conhecidas mediante a utilizao de funes discriminantes
(Brown 2006, Hegg et al. 2015).

- Para avaliar estoques mistos, quando no se conhece com certeza qual a origem dos peixes
(classificao preliminar no conhecida), a anlise de mxima verossimilhana ou anlises
mistas bayesianas proporcionam um bom poder de classificao, em detrimento da anlise
discriminante, que apresenta baixo poder de classificao neste caso. Por exemplo, possvel
prever a rea de berrio de peixes adultos de um estoque misto que foram capturados em mar
aberto (longe das reas de berrio). Para isso, necessrio contar com uma amostra de
referncia, por exemplo juvenis ou larvas capturadas nas diferentes reas de berrio. Essas
amostras de referncia sero comparadas s amostra de adultos provenientes do estoque misto
para determinar a provvel origem de cada indivduo adulto. O programa computacional mais
utilizado para estes caso o HISEA, desenvolvido por Millar (1990).

5.5.2 Tratamentos de dados que no se ajustam distribuio normal e a

homocedasticidade: estatstica no paramtrica

Quando os dados no atendem aos pressupostos de normalidade e homocedasticidade, mesmo

aps aplicar transformaes matemticas e analisar os resduos, necessrio utilizar estatstica
no paramtrica. Os testes no paramtricos, frente falta de normalidade, apresentam maior
poder discriminatrio que os paramtricos. A seguir so apresentados procedimentos detalhados
de anlises estatsticas necessrias para realizar comparaes de diferentes elementos trao entre
grupos quando a distribuio no normal nem homocedstica:

- Identificar e eliminar os dados discrepantes.

- A ANCOVA pode ser utilizada para corrigir o efeito de massa dos otlitos sobre as razes
elemento:Ca, quando necessrio. Este teste robusto mesmo quando no cumprido o
pressuposto de normalidade (Olejnik e Algina 1984).

- Anlises univariadas (para cada elemento) como Kruskal Wallis (anlogo no paramtrico da
ANOVA), so recomendadas para avaliar diferenas entre trs ou mais grupos. No caso de se
comparar dois grupos independentes entre si, indicado o teste de Mann Whitney. Para
amostras no independentes ou pareadas (por exemplo ncleo do otlito versus borda), as
diferenas entre grupos podem ser avaliadas atravs do teste de Wilcoxon.

345
- Anlises multivariadas no paramtricas como a anlise de similaridades (ANOSIM) ou
PERMANOVA so recomendadas para avaliar diferenas entre assinaturas qumicas entre dois
ou mais grupos de estudo. Com relao ao ANOSIM, os ndices mais utilizados so Jaccard e
Bray-Curtis. Para quantificar a contribuio de cada varivel para a diferena entre grupos, pode
ser aplicada a anlise de porcentagem de semelhana de Bray-Curtis (SIMPER).

- Uma das anlises no paramtricas de ordenamento mais utilizadas o escalonamento

multidimensional (MDS). Este mtodo estatstico baseado em uma matriz de similaridades
estabelecida sobre um conjunto de observaes. O MDS tem como objetivo modelar as
proximidades entre indivduos de forma a represent-los dentro de um espao bi ou
tridimensional (geralmente bidimensional). Existem variadas medidas de similaridade, contudo,
para amostras biolgicas, a mais utilizada a distncia de Sorensen (Bray-Curtis). O MDS gera
coeficientes de stress de Kruskal que permitem medir a veracidade da representao
bidimensional dos diagramas. Clarke (1993) sugeriu que valores de stress inferiores a 0,1
correspondem a uma boa ordenao e inferiores a 0,2 indicam uma interpretao til dos dados.

5.6 Aplicao da composio qumica dos otlitos na anlise dos padres de migrao do
bagre Genidens barbus a travs de LA-ICP-MS

Normalmente existe interesse em classificar diferentes padres comportamentais dos peixes de

acordo com a forma que usam o espao ao longo de suas vidas. Por exemplo, distinguir entre
comportamentos andromos, catdromos ou residentes. Esta classificao pode apresentar um
forte carter subjetivo e resultar em uma diferenciao artificial. Na tentativa de eliminar esta
subjetividade e comprovar a validade da classificao, podemos usar uma anlise cannica
discriminante ou MDS para dados que no apresentam distribuio normal.
Os padres Sr:Ca e Ba:Ca so frequentemente apresentados em funo da distncia do ncleo
de cada otlito em m, sendo, portanto, necessrio analis-los individualmente. Alm disso, o
desvio padro mdio de cada relao elemento:Ca deve tambm ser utilizada como varivel, o
que permite diferenciar os perfis comportamentais que so diferentes mas que apresentam
mdias globais similares.
Por exemplo, na Figura 5.8 so apresentados perfis de Sr:Ca do bagre andromo sul-americano
Genidens barbus obtidos atravs de LA-ICP-MS. A linha escura corresponde a um peixe
estuarino dependente de 14 anos, enquanto a clara corresponde a um bagre andromo que migra
aps os 9 anos de idade. Neste caso, as mdias totais das razes Sr:Ca so muito similares (0,83
x10-3 y 0,84 x10-3, respectivamente) e o desvio padro seria til para distinguir os dois
comportamentos. O desvio padro tambm foi utilizado por Mai et al. (2014) para diferenciar
objetivamente diferentes padres migratrios de manjubas Lycengraulis grossidens, obtendo

346
bons percentuais de classificao entre peixes residentes em gua doce, residentes marinhos,
residentes estuarinos e andromos.
Adicionalmente, diferentes algoritmos especficos podem ser aplicados para diferenciar padres
migratrios mais complexos. Informaes detalhadas sobre este assunto podem ser encontradas
em Hedger (2008).

9 anos

14 anos

distncia do ncleo (m)

Figura 5.8 - Exemplo de dois comportamentos migratrios distintos do bagre marinho Genidens
barbus. A linha escura indica as razes Sr:Ca de um peixe estuarino residente e a clara de um
peixe andromo.

5.7 Concluses

A aplicao da anlise qumica de otlitos no estudo de diferentes aspectos biolgicos dos

peixes, como uso de hbitat, rotas de migrao, zonas de reproduo e estudos de determinao
de estoques pesqueiros, fundamental para o manejo dos recursos aquticos. Existem diferentes
mtodos de preparao de amostras e determinao analtica que devem ser empregados de
acordo com a pergunta que se pretende responder. Estudos com qumica de otlitos vm sendo
aplicados com sucesso no hemisfrio norte da Amrica do Sul e vm sendo intensificados no
hemisfrio sul nos ltimos anos. Mesmo assim, esta ferramenta dever ser fortalecida para a
compreenso de inmeros aspectos biolgicos das diversas espcies de peixes que habitam uma
regio megadiversa como a Amrica do Sul.

347
348
6. OTLITOS COMO INDICADORES DO CICLO DE VIDA, DE PADRES
POPULACIONAIS, DE CARACTERSTICAS AMBIENTAIS E DE USO DOS
ECOSSISTEMAS
Cristiano Queiroz de Albuquerque

Sumrio
6.1 Introduo...........................................................................................................................349
6.2 O que determina a composio qumica dos otlitos?........................................................350
6.2.1 Meio ambiente..................................................................................................................350
6.2.2 Biodisponibilidade, absoro e transporte de ons...........................................................351
6.2.3 Processos na formao dos cristais..................................................................................351
6.3 Aplicaes em estudos bioecolgicos.................................................................................352
6.3.1 Migrao e uso de hbitat.................................................................................................352
6.3.2 Identificao de estoques pesqueiros...............................................................................362
6.4 Otlitos como indciadores de caractersticas ambientais....................................................369
6.4.1 Reconstruo de salinidades.............................................................................................369
6.4.1.1 Movimentos...................................................................................................................370
6.4.1.2 Ontogenia......................................................................................................................371
6.4.1.3 Interaes entre temperatura e salinidade.....................................................................371
6.4.2 Reconstruo de temperaturas..........................................................................................371
6.4.3 Avaliao da hipxia da gua...........................................................................................374
6.5 Concluses..........................................................................................................................376
Agradecimentos.........................................................................................................................376

6.1 Introduo

Os otlitos tm sido vastamente utilizados para a determinao da idade em peixes adultos, em

jovens e em larvas. Porm, estas estruturas permitem avaliar ainda outras informaes sobre da
histria de vida dos peixes, que tambm fazem uso do conhecimento j existente sobre idade e
crescimento destes animais.
Trs caractersticas fazem dos otlitos estruturas de grande interesse para os cientistas na
atualidade. Primeiramente, eles crescem de maneira concntrica, produzindo um padro de anis
de crescimento (Reibish 1899) que, dependendo da espcie e do tamanho, podem ser
observados por transparncia ou em seces histolgicas (cf. Captulo 4). Logo, possvel
determinar a idade de peixes coletados na natureza. A segunda caracterstica est relacionada
presena nos otlitos de elementos qumicos que se encontram em menores concentraes

349
quando comparados ao clcio, ao carbono e ao oxignio. Estes elementos menores guardam
certa proporo com as condies fsico-qumicas da gua na qual um determinado peixe se
desenvolveu (Campana 1999). Diversos elementos qumicos j foram detectados nos otlitos,
porm, nos concentraremos no estrncio (Sr), no brio (Ba), no mangans (Mn) e em algumas
87
razes isotpicas como Sr:86Sr e 18
O:16O, que representam os elementos qumicos mais
estudados na ecologia de peixes atravs de otlitos. A terceira caracterstica importante a
inrcia qumica. Otlitos so considerados estruturas quimicamente inertes, ou seja, uma vez
que os elementos qumicos so depositados eles no so reabsorvidos nem retrabalhados e ficam
ligados estrutura cristalina virtualmente para sempre (Campana 1999). Ento, se os otlitos
apresentam anis de crescimento, recebem informaes ambientais atravs de elementos
qumicos e so quimicamente inertes, razovel supor que possam conter toda a histria de vida
dos peixes na forma de informaes qumicas, funcionando como verdadeiras caixas-pretas
desses animais.
O marco para o incio de estudos de microqumica de otlitos tem sido atribudo ao trabalho
pioneiro de Richard Radtke (Radtke 1985), que associou estudos de anis dirios com perfis de
Sr:Ca ao longo de seces de otlitos de peixes donzela Dascyllus albisella, com a inteno de
reconstruir histrias ambientais vivenciadas pelas larvas dessa espcie. Embora seus resultados
tenham sido inconclusivos, o estudo de Radtke levantou a questo e diversos outros trabalhos
foram publicados posteriormente, reforando a ideia de que possvel avaliar migraes,
diferenciar estoques e avaliar caractersticas ambientais atravs de estudos que analisem a
constituio qumica dos otlitos (ex. Thorrold et al. 1997a, Rooker et al. 2004). O
desenvolvimento de novas tcnicas analticas tem permitido anlises cada vez mais detalhadas
da composio qumica dos otlitos. Como consequncia, o conhecimento sobre a histria de
vida dos peixes e sobre o ambiente em que viveram aumentou consideravelmente.

6.2 O que determina a composio qumica dos otlitos?

Atualmente ainda temos um entendimento limitado sobre os mecanismos fundamentais que

determinam a composio dos otlitos e como estes mecanismos so influenciados pelo
ambiente. Mesmo assim, alguns fatores tm sido mencionados como os principais determinantes
da composio elementar dos otlitos.

6.2.1 Meio ambiente

As caractersticas fsico-qumicas da gua na qual os peixes se desenvolvem so consideradas

um dos principais fatores para a determinao da absoro de determinados elementos pelos
peixes e consequente deposio nos otlitos. Diversos estudos indicam que para Sr:Ca, por

350
exemplo, a concentrao destes elementos na gua apresenta um efeito dominante, com
temperatura e salinidade apresentando efeitos de importncia secundria (Secor e Rooker 2000,
Martin et al. 2004, Sturrock et al. 2012). Sendo assim, embora diversos estudos indiquem uma
correlao entre a razo Sr:Ca nos otlitos e a salinidade da gua, se as concentraes de Sr:Ca
na gua no mudarem ao longo do gradiente de salinidades, provvel que tambm no mudem
nos otlitos de peixes sujeitos a diferentes salinidades. Este fato tem uma implicao
importante, tornando clara a necessidade de estudos paralelos sobre a composio da gua ao se
estudar otlitos de uma determinada populao de peixes.
Estudos tm indicado que diferentes elementos podem facilitar ou inibir a deposio uns dos
outros nos otlitos (Vries et al. 2005), o que sugere a existncia de efeitos de interao entre
elementos. Razes isotpicas de oxignio (18O:16O) apresentam relao direta com a
temperatura e razes isotpicas de oxignio na gua, mas este efeito pode ser mascarado pelo
efeito da salinidade (Patterson et al. 1993, Thorrold et al. 1997a). De maneira geral ainda
sabemos muito pouco sobre o efeito do ambiente na maioria dos elementos-trao encontrados
nos otlitos.

6.2.2 Biodisponibilidade, absoro e transporte de ons

Elementos livres em sua forma inica podem ser absorvidos diretamente da gua atravs dos
epitlios branquiais, ou pela gua ingerida, atravs do epitlio intestinal (Flik e Verbost 1993).
A disponibilidade de formas biodisponveis de Sr, Ca e Ba na gua considerada o fator mais
importante para sua deposio nos otlitos (Thorrold e Swearer 2009). ons presentes em forma
orgnica que foram ingeridos atravs da alimentao podem ser absorvidos pelo intestino se
forem adequadamente degradados durante a digesto. Tambm pode ocorrer discriminao de
elementos durante os processos de transporte do plasma sanguneo para a endolinfa. Devido a
esta discriminao, as concentraes de determinados elementos podem ser bastante diferentes
entre o sangue e o fluido endolinftico. A concentrao de ons livres no plasma sanguneo
tambm influenciada pela presena de protenas especiais que se ligam aos metais e impedem
seu transporte para a endolinfa (Ruttenberg et al. 2005), e cuja concentrao depende dos
estdios de maturao, taxas de crescimento e ontogenia durante o ciclo de vida dos peixes.

6.2.3 Processos na formao dos cristais

Uma vez que os diferentes elementos qumicos chegaram ao fluido endolinftico e esto em
contato com a superfcie de crescimento dos otlitos, eles podem ser incorporados sua
estrutura cristalina de diversas formas (Thorrold e Swearer 2009). Os ons podem ser
incorporados, por exemplo, atravs da substituio pelo clcio presente na estrutura cristalina do

351
carbonato de clcio, como ocorre tipicamente com os elementos bivalentes positivos,
semelhana dos ons Ca2+. Outras formas de incorporao incluem adsoro superfcie
cristalina, o aprisionamento de fraes lquidas ou slidas de endolinfa dentro da estrutura
cristalina, ou ainda a ligao dos ons a protenas, carboidratos ou lipdios presentes na matriz
orgnica que tambm compe os otlitos. A forma de incorporao importante, pois a qumica
da gua est relacionada composio qumica dos otlitos principalmente para aqueles
elementos que so incorporados por substituio ao Ca (como Sr e Ba).

6.3 Aplicaes em estudos bioecolgicos

6.3.1 Migrao e uso de hbitat

Migrao e disperso so movimentos de indivduos ou grupos de indivduos que ocorrem

naturalmente ao longo de diferentes escalas espaciais, para diversas espcies animais. Estes
movimentos podem ter direo, poca e destino especficos. As taxas de migrao e disperso
de determinada populao so caractersticas ecolgicas importantes que influenciam a
propagao, a colonizao e o intercmbio entre diferentes populaes para uma vasta gama de
espcies de diferentes grupos de organismos (Milner-Gulland et al. 2011). Devido a esta
importncia ecolgica, os pesquisadores esto sempre buscando entender e explicar os
mecanismos fisiolgicos e pistas ambientais que levam a estes movimentos populacionais.
Migraes so frequentemente necessrias quando os requerimentos ambientais de uma
determinada espcie (e.g. alimentao, reproduo) so maiores do que seu hbitat original pode
prover. Simplificadamente, quando isto ocorre alguns indivduos buscam novas reas para
completar seu ciclo de vida. Se a estratgia for evolutivamente bem sucedida, com o passar das
geraes o nmero de indivduos que migram tende a aumentar na populao e a espcie em
questo vai se tornando migratria com o passar do tempo.
Considerando esta ideia para o ambiente marinho, migraes e disperso so ainda mais crticas,
uma vez que, em sua maior parte, as espcies marinhas apresentam pelo menos uma fase com
mobilidade. Esta mobilidade pode ser passiva, atravs da disperso de formas planctnicas ao
livre sabor das correntes, ou ativa, na forma de migraes verdadeiras realizadas por peixes,
rpteis e mamferos marinhos. Estima-se que aproximadamente 2,5% das espcies de peixes
realizem alguma forma de migrao. As escalas espaciais sobre as quais estas migraes se
estendem variam de poucas centenas de metros - para espcies costeiras que utilizam arroios - a
milhares de quilmetros - como ocorre tipicamente com enguias. De acordo com a origem,
destino e motivo, as migraes de espcies aquticas podem ser classificadas em diversas
categorias, como andromas, catdromas, etc.
O entendimento sobre o papel ecolgico dos movimentos populacionais, ativos ou passivos, tem

352
mudado ao longo dos anos. Na dcada de 1980 muitos cientistas acreditavam que as populaes
marinhas eram limitadas pelo recrutamento e questionava-se se este processo era ou no funo
da densidade populacional (Sinclair 1987). Acompanhando este pensamento, surgia a noo de
que as populaes marinhas eram bem misturadas ao longo de grandes reas e,
consequentemente, abertas ao repovoamento proveniente de disperso e migraes. No incio do
sculo XXI, os esforos cientficos aumentaram no sentido de melhor compreender migraes e
disperso e foram surgindo informaes que comprovavam o auto-recrutamento e o retorno de
adultos a seus locais de nascimento (Thorrold et al. 2001, Green et al. 2012). Logo, as unidades
populacionais passaram a ser vistas como unidades de fato, com capacidade de auto-
perpetuao, mas o foco mudou ainda mais no sentido de identificar o grau de conectividade
entre metapopulaes, ou seja, o grau de movimentao ativa e passiva entre unidades
populacionais. Este foco permanece e estudos sobre conectividade entre populaes marinhas
esto bastante em alta at o presente momento.
Apesar da clara importncia ecolgica e interesse cientfico em avaliar movimentos de disperso
e migrao em organismos marinhos, os padres de movimentos so vastamente desconhecidos
para a maior parte das espcies, em particular para os peixes. A explicao para isso de carter
fundamentalmente prtico. Por exemplo, impossvel seguir larvas de peixes em tempo real ao
longo de sua disperso. Mesmo que existissem equipamentos microscpicos para telemetria, a
mortalidade larval muito alta, inviabilizando experimentos pelo nmero amostral que seria
requerido. Por outro lado, juvenis e adultos podem migrar por reas muito extensas, o que
dificulta seu acompanhamento atravs de tecnologias tradicionais. Um dos principais avanos
para a determinao de padres de movimentos populacionais a avaliao de assinaturas
geoqumicas em estruturas calcificadas, a exemplo da qumica de otlitos.
Sabemos que guas marinhas e/ou doces de diferentes localidades tendem a apresentar
diferenas fsico-qumicas que variam em funo da salinidade, temperatura, composio
geolgica das bacias hidrogrficas e de outras caractersticas que podem influenciar a
composio dos otlitos. De maneira geral, as razes isotpicas de Sr:Ca tendem a aumentar
com o incremento da salinidade, ocorrendo o contrrio para as razes Ba:Ca. Os otlitos
guardam essas informaes ambientais na forma de composio qumica e as armazenam de
maneira temporalmente organizada. Essa composio qumica pode ser acessada pelos cientistas
atravs de equipamentos especficos (cf. Captulo 5) e quanto mais diferentes as propriedades
fsico-qumicas da gua, mais diferentes devem ser as constituies qumica de otlitos de
diferentes ambientes. Por exemplo, no Sul do Brasil (Figura 6.1), podem ser encontrados
sistemas aquticos costeiros de diferentes caractersticas. Na Figura 6.1 podemos observar uma
laguna costeira de gua doce (Lagoa Mirim, o esturio da Lagoa dos Patos e a regio costeira
adjacente). Estas trs reas apresentam propriedades salinas distintas, que foram observadas nos
otlitos de corvinas (Micropogonias furnieri) coletadas nestas reas (Albuqueque et al. 2010).

353
 Lagoa dos Patos

Canal de So
Gonalo

Lagoa Esturio
Mirim
Rio Grande
Oceano
Atlntico
Sul

Chu

Figura 6.1 Regio Sul do Brasil, Atlntico Sudoeste, indicando trs sistemas costeiros
distintos utilizados por Micropogonias furnieri (Fonte: Albuquerque et al. 2010).

Em otlitos de exemplares de M. furnieri de guas de diferentes salinidades verificou-se que as

concentraes de Sr e Ba na borda dos otlitos, indicador de deposio recente, tambm
mudaram (Albuquerque et al. 2010) (Figura 6.2). Observe que as concentraes de Sr tendem a
aumentar para guas mais salinas enquanto as concentraes de Ba tendem a aumentar para
guas mais doces.

354
Figura 6.2 Concentraes de Sr e Ba medidas em otlitos de corvinas (Micropogonias
furnieri) coletadas em guas doces, estuarinas e marinhas na regio da Lagoa dos Patos, Sul do
Brasil (Fonte: Albuquerque et al. 2010).

Com este exemplo mostramos que as concentraes de alguns elementos nos otlitos variam
conforme as caractersticas ambientais do meio em que os peixes se desenvolvem. Ainda, para
alguns ambientes, as concentraes de Sr e Ba nos otlitos esto relacionadas salinidade de
maneira positiva e negativa, respectivamente. Agora vamos aumentar um pouco a complexidade
deste raciocnio lembrando que otlitos crescem de maneira temporalmente organizada e so
quimicamente inertes. Logo, provvel que um determinado peixe que passou certo tempo em
gua doce e mudou para gua salgada apresente em seus otlitos variaes qumicas de Sr e Ba
que representem essas mudanas de hbitat. Ento, se seccionarmos esses otlitos e analisarmos
um perfil perpendicular aos anis de crescimento desde o ncleo at sua borda, obter-se-ia um
perfil de dados qumicos representativo do histrico de massas de gua experienciadas pelo
peixe ao longo da sua vida. Exemplificando, na Figura 6.3 podemos observar o perfil de
concentraes de Sr em um corte transversal de dois otlitos sagittae de corvinas: uma coletada
em gua doce (esquerda) e outra coletada em gua salgada (direita). Note que as concentraes
de Sr so bem mais altas no otlito da corvina proveniente de gua salgada.

355
Figura 6.3 Perfil de concentraes de Sr em otlitos de corvina (Micropogonias furnieri)
coletados em gua doce e salgada no Sul do Brasil. As concentraes foram determinadas
atravs de ablao a laser e espectrmetro de massas com plasma indutivamente acoplado (LA-
ICPMS) (Fonte: Albuquerque et al. 2010).

Ainda na Figura 6.3, possvel observar que as corvinas coletadas em gua doce apresentam
concentraes mais altas na regio do ncleo dos otlitos, indicando uma possvel origem
estuarina, uma vez que esturios tendem a apresentar razes Sr:Ca mais altas que gua doce.
Logo, se ocorrem migraes entre ambientes com diferentes caractersticas fsico-qumicas,
estas migraes devem estar quimicamente impressas nos otlitos dos peixes, sendo possvel
situar esta migrao em um contexto temporal. Para o caso da corvina de gua doce, por
exemplo, a migrao ocorreu bem no incio da vida.
Contudo, nem todas as flutuaes nas concentraes de elementos qumicos em otlitos so
resultantes de movimentos executados pelos peixes entre diferentes hbitats. Particularmente no
incio da vida, os peixes apresentam um sistema osmorregulatrio ainda pouco desenvolvido
que pode ser bastante permevel a determinados elementos qumicos, sendo comum a
observao de altas concentraes de determinados elementos no ncleo dos otlitos
(Ruttenberg et al. 2005). Explicaes alternativas para variaes nas concentraes de
elementos em otlitos de peixes jovens tambm incluem a influncia da composio dos ovos e
do saco vitelnico, a influncia de taxas de crescimento e as diferenas na estrutura cristalina
(Thorrold e Sweaer 2009). Esta ltima pode ocorrer devido presena nos otlitos de regies
predominantemente compostas por calcita que, por sua vez, tem maior afinidade com alguns
elementos (ex. Mn) em comparao com a aragonita (estrutura cristalina mais comum nos
otlitos sagittae). Qualquer flutuao qumica nos otlitos que no seja derivada de mudanas
de hbitat produz uma importante fonte de erro, dificultando a interpretao dos resultados e
potencialmente mascarando o sinal qumico produzido por mudanas reais de habitat. A Figura
6.4 mostra a anlise de otlitos de enguias do Japo Anguilla japonica (Aoyama 2009). Esta
espcie considerada catdroma, ou seja, nasce nos oceanos, migra para gua doce e depois
volta aos oceanos para desovar. A Figura 6.4 mostra otlitos de trs indivduos que apresentam
padres distintos de uso de hbitat. Todas nasceram no oceano, contudo a primeira permaneceu
no oceano, a segunda migrou para reas estuarinas e a terceira para guas doces. Note que a

356
razo Sr:Ca bem maior no ncleo de todas, mesmo naquela proveniente do oceano, o que
sugere que essa flutuao inicial de Sr seja ontogeneticamente induzida e no resultante de
mudanas de hbitat. Como uma concluso secundria, mas tambm de grande importncia,
verifica-se que nem todas as enguias japonesas so catdromas, ou seja, elas so na verdade
catdromas facultativas.

Figura 6.4 Mapas de razes Sr:Ca em otlitos de Anguilla japnica coletadas no Japo
(esquerda) e perfis Sr:Ca do ncleo borda de cada otlito (Fonte: Aoyama 2009).

Antes da consolidao dos otlitos como marcadores naturais em peixes, a avaliao de seus
movimentos era realizada com tcnicas de marcao-recaptura e telemetria (Britton et al. 2007,
Koster e Crook 2008). Ambas as tcnicas no permitem trabalhar com indivduos de tamanho
pequeno, como larvas e juvenis, dificultando a compreenso de padres individuais de
migrao, essenciais para enquadrar uma dada espcie dentro de uma das categorias de
migrao (ex. anadromia, catadromia, diadromia, etc.). Desta forma, o entendimento
possibilitado pela Figura 6.4 de que nem toda enguia japonesa catdroma seria muito difcil de
provar h 20 anos. quela poca se buscava caracterizar as tendncias gerais de migrao entre
diferentes espcies. Hoje, com o advento da anlise qumica de otlitos, o foco de estudo tem
mudado para a avaliao de tendncias migratrias individuais e dentro da mesma populao.

357
Como resultado dos estudos dentro de populaes especficas, temos observado que, embora
uma determinada espcie seja considerada migratria, suas populaes so compostas por
grupos de indivduos que migram e grupos que so residentes. Assim, a aplicao de novas
tcnicas analticas tem permitido contestar as classificaes de espcies atualmente consideradas
migratrias. Espcies de peixes cujos indivduos exibem circuitos migratrios diferenciados nos
quais alguns migram e outros so residentes so denominadas migrantes parciais (Chapman et
al. 2011). Hoje sabemos que migrantes parciais representam uma estratgia alternativa de vida
muito mais comum do que pensvamos no passado.
Migraes parciais podem ocorrer nos principais grupos de vertebrados, em alguns grupos de
invertebrados e entre os principais ecossistemas do planeta. Em peixes, migraes parciais tm
sido estudadas principalmente entre salmes, bacalhaus e enguias (Bohlin et al. 2001, Hendry et
al. 2004, Daverat et al. 2006). Acredita-se que migraes parciais podem influenciar a dinmica
de populaes, bem como sua persistncia ao longo do tempo, uma vez que elas podem conferir
sobrevivncias diferenciadas resultantes das diferenas em risco de predao e disponibilidade
de alimento entre diferentes hbitats. Alm destes dois fatores, estudos recentes indicam que
migraes parciais tambm produzem melhores taxas de crescimento para os indivduos
migrantes, o que ajuda a reduzir seu risco de predao (Chapman et al. 2011).
Estudos recentes no Sul do Brasil indicaram que a tainha (Mugil liza) enquanto juvenil muito
comum na regio costeira adjacente Lagoa dos Patos e que alguns indivduos eram
encontrados em sangradouros (corpos de gua doce de origem continental que se comunicam
com o mar atravs de arroios). Otlitos destes juvenis foram analisados e apresentaram padres
qumicos de Sr:Ca tpicos (Oliveira 2015 - Figura 6.5), indicando que juvenis coletados nos
sangradouros tinham origem marinha (Figuras 6.5A,B), representada por razes Sr:Ca mais
altas em seus ncleos. Os indivduos exclusivamente marinhos apresentavam razes uniformes
de Sr:Ca ao longo de todo perfil de borda a borda dos otlitos, passando pelo ncleo, o que
indica que no migraram para os sangradouros (Figuras 6.5C,D). Como apenas parte dos
indivduos migraram, caracterizada a ocorrncia de migraes parciais para essa populao.
Um fato interessante que resultou desta anlise foi a compreenso de que os indivduos que
entram nos sangradouros tambm podem sair, pois foram encontrados alguns exemplares na
rea marinha com sinal qumico de sangradouros em seus otlitos. Em outras palavras, os
sangradouros possivelmente no constituem um sumidouro para os juvenis que entram neles.

358
 A B
razo 86Sr:43Ca

C D

Distncia borda-borda (mm)

Figura 6.5 Perfis de razes Sr:Ca em otlitos de tainhas (Mugil liza) juvenis coletadas em
sangradouros de gua doce (A e B) e regio marinha costeira (C e D) do sul do Rio Grande do
Sul, Sul do Brasil. O destaque em cinza representa a rea do perfil correspondente ao ncleo dos
otlitos (Fonte: Oliveira 2015).

A manjuba (Lycengraulis grossidens) tambm se enquadra nesta categoria de migrao (Mai et

al. 2014). Na Figura 6.6 podemos observar perfis de Sr:Ca e Ba:Ca amostrados em otlitos de
manjubas coletadas ao longo da costa do Brasil e Uruguai. Nos grficos possvel verificar os
diferentes padres de elementos entre o ncleo e a borda dos otlitos, indicando diferentes
padres migratrios com diadromia e residncia. Observe as flutuaes de Sr e Ba no grfico do
indivduo didromo e note a tendncia inversa de concentraes entre os dois elementos em
comparao com o indivduo marinho residente. De acordo com a anlise do perfil de
elementos, este indivduo didromo cresceu inicialmente em gua doce (baixas concentraes
de Sr e altas de Ba), migrou para guas marinhas (altas concentraes de Sr e baixas de Ba) e
depois voltou para gua doce. A Figura 6.6 tambm mostra que a ocorrncia de indivduos
didromos cresce em direo ao sul do Brasil, onde a contribuio de gua doce para a
plataforma continental maior.

359
 Marinho residente Didromo

Residente em gua doce Residente em gua doce

BRASIL Esturio de Mampituba

Praia do Pau Lagoa dos Patos

Amarelo

Baa de Todos
os Santos Lagoa Mirim

Rio Esturio
URUGUAI
Uruguai do Ribeira Praia do Cassino
Esturio do Plata

ARGENTINA
Residente em gua doce
Didromos A
Didromos B
Marinho/estuarino residente

Figura 6.6 Avaliao de populaes da manjuba (Lycengraulis grossidens) entre as costas do

Brasil e norte da Argentina atravs da anlise de Sr:Ca e Ba:Ca em otlitos. Os grficos
representam diferentes padres migratrios encontrados para a espcie e o mapa indica a
predominncia de ocorrncia ao longo da costa (Fonte: Mai et al. 2014).

importante lembrar que nem sempre sero distinguveis padres claros de flutuaes de
elementos em perfis ncleo-borda nos otlitos. As flutuaes de Ba costumam ser mais
variveis que as de Sr e nem sempre esto associadas a migraes ao longo de gradientes de
salinidade. nesse momento que fica clara a necessidade de se conhecer tambm as
propriedades qumicas da gua onde vivem as populaes que se pretende estudar. Entre as

360
caractersticas mais importantes destaca-se a concentrao relativa de Sr:Ca, Ba:Ca (ou de
outros elementos que se deseje avaliar) ao longo do gradiente total de salinidades, o que recebe
o nome de curva de mistura de um dado elemento. Para a maioria dos ambientes o Sr apresenta
uma curva de mistura crescente (Figura 6.7), na qual a maior variao ocorre abaixo da
salinidade de 20 PSU70 (Zimmerman 2005, Albuquerque et al. 2012). Isso tem uma implicao
importante para o estudo da migrao. Se as razes Sr:Ca na gua variam pouco acima de 20
PSU, isso significa que peixes vivendo nessas salinidades apresentaro sinais qumicos tambm
muito parecidos. Esta caracterstica apresentada pelos gradientes de salinidade reduz nossa
capacidade de discernir movimentos dos peixes entre reas de salinidades mais altas, como entre
locais costeiros e ilhas ocenicas, por exemplo.
Por outro lado, movimentos de migrao entre ambientes de gua doce e estuarina (ou marinha)
tendem a ser facilmente percebidos, dada a forte variao que frequentemente ocorre nas razes
elemento:Ca entre baixas salinidades ou ao longo de grandes gradientes de salinidade. Para
ajudar a entender esta questo, vamos imaginar um determinado sistema hdrico que abranja
ambientes de gua praticamente doce, com salinidade de 1 PSU, at guas marinhas com
salinidade de 34 PSU. Se pensarmos em salinidade como a quantidade de sal em gramas
presente na gua, perguntamos: o que ocorre entre as salinidades 1 e 2? A resposta que a
quantidade de sal dobra. A quantidade de sais tambm dobra entre as salinidades 2 e 4, entre 4 e
8, entre 8 e 16 e entre 16 e 32 PSU. Ento fica claro que entre a salinidade 1 e 20 a quantidade
de sais (x) aumentou 4 potncia (x4), enquanto o aumento de sais entre as salinidades 20 e 30
sequer chegou 2 potncia (x<2). A mesma ideia pode ser aplicada s curvas de mistura para
diferentes elementos, lembrando que alguns elementos (como Ba) podem apresentar tendncias
inversas, ou seja, decrescentes com o aumento das salinidades. A Figura 6.7 apresenta curvas de
mistura analisadas em duas diferentes regies do continente americano. Neste caso, ambos os
locais apresentaram curvas de mistura semelhantes, com maiores variaes nas razes Sr:Ca
observadas entre salinidades mais baixas (Zimmerman 2005, Albuquerque et al. 2012). Estudos
apresentando curvas de mistura para gradientes de salinidade, contudo, ainda so bastante
escassos.

70
Unidade Prtica de Salinidade (Practical Salinity Unity - PSU).

361
Figura 6.7 - Curvas de mistura de razes molares de Sr:Ca para o gradiente de salinidades (A)
do Esturio da Lagoa dos Patos, Sul do Brasil (Albuquerque et al. 2012) e (B) Baa da
Ressureio, no Alasca, USA (Zimmerman 2005). Observe que nos dois ambientes
apresentados a mudana de razes molares de Sr:Ca maior quando comparada entre
salinidades mais baixas.

importante reforar que no necessariamente a mudana da salinidade promove alteraes na

deposio de Sr, Ba ou outros elementos nos otlitos. A variao da razo elemento:Ca na gua
a principal responsvel pela flutuao destes elementos nos otlitos (Elsdon et al. 2008). Se
esta razo permanecer constante entre diferentes salinidades, provvel que mudanas de
hbitat entre estas salinidades no resulte em mudanas perceptveis na composio dos otlitos,
ou seja, o elemento em questo perde valor como marcador natural de migrao em peixes.

6.3.2 Identificao de estoques pesqueiros

A identificao de estoques representa um tema central para as cincias pesqueiras em todo o

mundo. Estoques pesqueiros so conceituados de vrias formas e, nesta obra, o conceito se
refere a uma unidade populacional de peixes que apresentam caractersticas comuns de
reproduo, migrao e crescimento, ou seja, homogeneidade para efeitos de manejo.
Imaginemos uma situao hipottica, mas bastante comum, de um recurso pesqueiro
comercialmente explorado e para o qual so determinadas medidas de manejo, sendo definidos
o tamanho mnimo de captura e um perodo de defeso para a espcie. Porm, descobre-se
posteriormente que se tratavam na realidade de dois estoques, com caractersticas prprias de
crescimento e reproduo. Logo, as medidas de manejo no so mais efetivas para os dois
estoques, que precisam ser tratados como unidades distintas; suas caractersticas biolgicas
demandam a adoo de medidas de manejo especficas para cada grupo. Ento fica clara a
importncia de identificar ou definir os estoques. Porm, como faz-lo?
Ao longo da histria das cincias pesqueiras diversas ferramentas foram propostas e vm sendo

362
utilizadas para discriminar estoques. Dentre as ferramentas mais comuns destacamos marcao
e recaptura, telemetria, avaliao da morfologia corporal, avaliao da morfologia dos otlitos,
avaliao de caracteres mersticos, avaliao de fauna de parasitas, gentica, dentre outras
(Cadrin et al. 2014). Uma das mais recentes a anlise qumica de otlitos, foco deste captulo.
O potencial da avaliao da constituio qumica de otlitos para a discriminao de estoques
baseado em duas propriedades dos otlitos que j foram mencionadas neste captulo, mas que
merecem um novo destaque. Primeiramente, diferentemente dos ossos, otlitos so
quimicamente inertes, ou seja, o material depositado em sua estrutura no reabsorvido ou
retrabalhado (Campana 1999). Em segundo lugar, sua composio, apesar de sofrer regulao
fisiolgica, reflete as caractersticas fsico-qumicas do ambiente (Thorrold et al. 1997a). O
princpio o mesmo empregado na seo anterior, que aborda a avaliao de migrao e uso de
hbitat atravs da qumica de otlitos. Desta forma, otlitos de peixes de uma mesma espcie
que experimentaram situaes ambientais distintas devem apresentar constituies qumicas
distintas (Campana et al. 2000). Para que dois estoques de uma mesma espcie que habitam
uma determinada rea sejam de fato diferentes, eles precisam ter passado por situaes
ambientais diferentes ao longo de suas vidas, caso contrrio constituiria um estoque nico. Por
exemplo, vamos imaginar que eles possuem rotas de migrao distintas embora apresentem um
destino comum. Se as rotas migratrias so distintas provvel que as condies ambientais
vivenciadas por ambos os grupos tambm sejam distintas, o que acaba produzindo pequenas (ou
s vezes grandes) diferenas na constituio qumica dos otlitos. Com a utilizao de
equipamentos analticos cada vez mais sensveis (cf. Captulo 5), estas diferenas podem ser
medidas, permitindo a discriminao entre os grupos de peixes.
De forma semelhante ao estudo da migrao, vrios elementos podem ser analisados. Quanto
mais elementos com capacidade de discriminao, maior ser a confiana nos resultados. Dentre
estes elementos destacam-se razes isotpicas de Sr, Ca, Ba, O, Zn, dentre outros (Swan et al.
2003, Volpedo e Fernandez Cirelli 2006, Avigliano et al. 2015 a,b,c,d,e,f). Com a finalidade de
avaliao de estoques, duas abordagens distintas podem ser adotadas. Na primeira, mais
simples, busca-se apenas determinar se h mais de um estoque presente em uma determinada
rea. Na segunda, e mais complexa, busca-se determinar quais so os principais berrios
contribuintes para aquele determinado estoque adulto de mistura. Chamamos de estoque de
mistura quele grupo de indivduos sob explorao pesqueira que corresponde a mais de um
estoque. importante saber quais so os berrios contribuintes para que medidas de
conservao eficientes sejam aplicadas s reas corretas.
Iniciando com a primeira abordagem, onde se busca determinar apenas se h mais de um
estoque presente em uma determinada rea, j sabemos que precisamos analisar diversos
elementos em um grupo de otlitos de peixes coletados em uma determinada rea. Estes dados
devem ser analisados utilizando alguma tcnica multivariada, como escalonamento

363
multidimensional ou anlise de agrupamento, que permita a separao de diferentes grupos de
indivduos dentro de um grupo nico de dados. Uma peculiaridade muito importante para a
discriminao de estoques baseada na anlise qumica de otlitos que existem dois resultados
possveis e que devem ser interpretados com muita cautela. O primeiro resultado possvel (e
geralmente mais desejado) a obteno de diferenas significativas na composio qumica de
otlitos de dois grupos de peixes de mesma espcie. Para este resultado, a interpretao
simples e direta e a concluso de que se trata de dois estoques diferentes. O segundo resultado
possvel a similaridade entre as composies qumicas. Neste segundo caso a interpretao
mais complicada e a concluso mais bvia de que se trata de um mesmo estoque. Contudo,
esta interpretao bvia no necessariamente correta. O fato de dois grupos de otlitos
apresentarem composies qumicas semelhantes no garante que os dois grupos constituam um
mesmo estoque. Explicando, diversas variveis (temperatura, salinidade, taxas de crescimento,
razes isotpicas dos elementos na gua, etc.) exercem diferentes influncias na incorporao
dos elementos nos otlitos (Elsdon et al. 2008). Logo, pode existir mais de uma combinao de
fatores ambientais capaz de produzir um mesmo resultado de composio qumica nos otlitos.
Por exemplo, imaginemos duas populaes reprodutivamente independentes de uma mesma
espcie de peixe, a primeira em uma lagoa salgada isolada do oceano e a segunda em uma zona
costeira marinha. Se por acaso a comparao de composio qumica dos otlitos de peixes
amostrados nas duas populaes retornar resultados de similaridade, no podemos dizer que e
trata do mesmo estoque! Quando a situao de similaridade qumica em otlitos ocorre para
peixes que vivem em uma determinada rea, isto significa que temos um indcio que se trate do
mesmo estoque, mas no garante que seja de fato apenas um estoque e, portanto, outras
ferramentas analticas devem ser empregadas para garantir a confiana na concluso de estoque
nico. At aqui falamos da primeira abordagem, que visa apenas examinar a existncia de
diferentes estoques em uma determinada rea.
A segunda abordagem prev tambm a caracterizao das reas de berrio, ou reas de
crescimento inicial, que contribuem para o referido estoque adulto. Se soubermos quem so os
estoques adultos e que reas eles utilizam como berrio, podemos tomar medidas ainda mais
eficazes para a proteo do recurso como um todo (Cadrin et al. 2014). Porm, para determinar
a contribuio de berrios s reas adultas, o nvel de complexidade analtica aumenta um
pouco. Para o desenvolvimento deste tipo de trabalho necessrio coletar amostras em
diferentes reas ao longo de diferentes anos. Explicando, a caracterizao qumica neste caso
deve passar por duas etapas e apresenta trs premissas bsicas (Campana et al. 2000, Kerr e
Campana 2014). A primeira etapa busca caracterizar quimicamente os otlitos de grupos de
peixes juvenis encontrados em diferentes reas de cria. Esta etapa tambm caracteriza a
primeira premissa para que um estudo deste tipo seja realizado com sucesso. De acordo com
esta premissa, todos os berrios que contribuam para um estoque adulto devem ser amostrados.

364
Porm, de nada adianta amostrar todos os berrios se no houver um marcador (ou conjunto)
de marcadores que permitam identificar as diferenas entre eles. Isto leva segunda premissa:
para identificar estoques atravs da qumica de otlitos, devem existir marcadores qumicos que
permitam sua separao. Resumindo, devemos amostrar todos os contribuintes e precisamos que
existam caractersticas qumicas distintas entre eles. Esta primeira etapa tratou apenas de
indivduos juvenis. Agora, para a segunda etapa, precisamos amostrar os adultos na rea do
estoque misturado, analisar o ncleo de seus otlitos e determinar a origem de cada animal com
base na similaridade qumica entre o ncleo dos seus otlitos e os otlitos dos juvenis
caracterizados anteriormente. Surge ento a terceira premissa importante, que pressupe que
no exista forte variabilidade interanual nas caractersticas dos marcadores qumicos utilizados.
Explicando, um estoque pesqueiro normalmente composto por peixes com diferentes idades,
que utilizaram seus berrios em diferentes anos (Hart e Reynolds 2002), com exceo de
espcies anuais. Se um determinado marcador, digamos a razo isotpica Ba:Ca, for muito
varivel entre diferentes anos, o estoque ser composto por peixes com otlitos com diferentes
composies de razes Ba:Ca em seus ncleos (uma vez que tm diferentes idades), criando
grupos de otlitos com assinaturas distintas dentro de um mesmo estoque. Este problema
inviabiliza a classificao dos diferentes estoques a seus respectivos berrios.
Diversos estudos tm sido realizados com sucesso, particularmente aps a publicao do artigo
Otolith elementar fingerprints as biological tracers of fish stocks71 em 2000, de autoria de
Steven Campana e colaboradores. O artigo apresentava resultados da anlise de 2.500 otlitos
de bacalhau (Gadus morhua), indicando haver mistura de estoques na regio do golfo de St.
Lawrence, ao sul de Quebec, Canad. Esse autor tambm foi o primeiro a apresentar as trs
premissas bsicas mencionadas anteriormente para a determinao de estoques atravs da
qumica de otlitos: (i) que existam marcadores (elementos) caractersticos dentro de cada grupo
analisado; (ii) que todos os possveis grupos que contribuem para o estoque de mistura sejam
amostrados; e (iii) que os marcadores caractersticos permaneam estveis entre os perodos de
caracterizao e mistura.
Na Amrica do Sul, alguns estudos j foram realizados na tentativa de diferenciar estoques de
algumas espcies de peixes. Por exemplo, corvinas (Micropogonias furnieri) foram amostradas
entre So Paulo (Brasil) e Baia Blanca (Argentina) (Figura 6.8), incluindo uma lagoa costeira de
gua doce no Rio Grande do Sul, Brasil (Albuquerque 2008).

71
Impresses digitais elementares em otlitos como marcadores de estoques de peixes.

365
 Brasil

Uruguai

Argentina

Oceano Atlntico Sul

Figura 6.8 Mapa incluindo Sul do Brasil, Uruguai e Argentina, onde foram coletados otlitos
de corvina (Micropogonias furnieri) para anlises qumicas e identificao de estoques. BB =
Baia Blanca (El Rincn); SB = Baia de Samborombom; UR = Uruguai; RG = Rio Grande; ML
= Lagoa Mirim; SP = So Paulo (Fonte: Albuquerque 2008).

Os otlitos foram quimicamente analisados sendo quantificadas as razes Sr:Ca, Ba:Ca, Mn:Ca
e Mn:Ca nas bordas dos otlitos. Como pode ser visto na Figura 6.9, o escalonamento
multidimensional (MDS) incluindo os 4 elementos indicou forte diferenciao entre corvinas
vivendo em gua doce e salgada (Figura 6.9A). Quando somente os otlitos provenientes de
corvinas amostradas nas reas costeiras foram amostrados, ficou clara a formao de dois
grupos razoavelmente distintos (Figura 6.9B). O primeiro grupo foi formado por peixes da
Argentina e Uruguai e o segundo por peixes da regio costeira do Sudeste e Sul do Brasil.
Embora a diviso seja interessante, bom lembrar que os peixes no reconhecem fronteiras
polticas! Esse padro foi condizente com as massas de gua presentes em cada regio. Na costa
do Brasil, predomina a corrente do Brasil, quente e oligotrfica. J nas regies costeiras da
Argentina e Uruguai predomina a influncia da corrente das Malvinas, fria e rica em nutrientes.
Essas diferenas de massas de gua certamente foram preponderantes na impresso qumica
gerada nos otlitos analisados.

366
Figura 6.9 Escalonamento multidimensional com dados de razes isotpicas de Sr:Ca, Ba:Ca,
Mn:Ca e Mg:Ca em bordas de otlitos de corvina (Micropogonias furnieri) coletadas entre
Brasil, Uruguai e Argentina. No grfico superior (A) os otlitos foram agrupados entre reas
marinha e de gua doce. No grfico inferior (B) apenas o material de gua salgada foi utilizado,
sendo agrupado por local de amostragem (Fonte: Albuquerque 2008).

importante mencionar que, embora o MDS tenha indicado a presena de um grupo

homogneo entre Sudeste e Sul do Brasil, este resultado no significa a existncia de um
estoque nico para a regio. Estudos recentes com marcadores genticos indicaram a existncia
de trs estoques de corvina ao longo da costa brasileira (Vasconcellos et al. 2015), sendo um na
regio Norte do Brasil, outro no Sudeste (costa do Rio de Janeiro, latitude 23oS) e outro no Sul
do pas (latitude 32oS). Ou seja, para este caso especfico, a anlise qumica de otlitos sozinha
no foi suficiente para detectar a diferena entre os estoques do Sudeste e do Sul do Brasil.
Outro exemplo interessante foi desenvolvido na Argentina, onde foram coletadas a corvina
(Micropogonias furnieri) e a pescada olhuda (Cynoscion guatucupa) para anlise qumica de
otlitos na tentativa de discriminar estoques das duas espcies em trs importantes reas de
pesca do pas (Volpedo e Fernandez Cirelli 2006). Neste estudo, os otlitos foram dissolvidos e
analisados para a quantificao de razes Cd:Ca, Cu:Ca, Mg:Ca, Mn:Ca, Sr:Ca e Zn:Ca. Os
resultados (Figura 6.10) indicaram a existncia de dois grupos bem definidos para ambas as

367
espcies, sendo um ao norte e outro ao sul de Baia Blanca (38oS), regio conhecida por
apresentar a Frente El Rincn feio oceanogrfica formada pela confluncia entre guas
continentais e marinhas naquela regio.

Figura 6.10 Escalonamento multidimensional para otlitos de (A) corvina (Micropogonias

furnieri) e (B) pescada olhuda (Cynoscion guatucupa) coletadas nas regies costeiras de Partido
de La Costa (), Mar del Plata (o) e San Bls Bay (). Para esta anlise foram utilizados as
razes isotpicas Cd:Ca, Cu:Ca, Mg:Ca, Mn:Ca, Sr:Ca e Zn:Ca (Fonte: Volpedo e Fernandez Cirelli 2006).

Na costa leste dos Estados Unidos, Thorrold et al. (1998) conseguiram determinar a origem de
pescadas adultas exploradas comercialmente (consulte menu interativo em Cohen e Thorrold,
200472). Na primeira etapa do estudo foi realizada a caracterizao das reas estuarinas,
consideradas berrios, que contribuem para os estoques adultos. Na segunda etapa, os adultos
foram amostrados nas reas de pesca adjacentes aos esturios e a composio qumica dos
ncleos dos otlitos foi comparada s composies dos otlitos dos juvenis, permitindo uma
determinao confivel da origem dos peixes presentes nos estoques adultos. A anlise mostra
que diferentes estoques podem ser originados em diferentes reas da costa e que a importncia
relativa de cada berrio aos estoques adultos varivel. Por exemplo, adultos da rea de
Chesapeake so homogeneamente provenientes dos demais sistemas estuarinos. Com uma
caracterstica oposta, o estoque da Baa Peconic quase que totalmente dependente do prprio
sistema estuarino local. Alm de permitir a identificao dos berrios mais importantes para
cada estoque, este tipo de estudo possibilita fazer inferncias sobre a fragilidade ambiental de
cada sistema estuarino em relao aos estoques de pescada. Explicando, a Baa Peconic tem
90% de seu estoque de pescadas abastecido por juvenis criados nesta prpria Baa. Logo, se
houver algum acidente que prejudique o berrio de pescadas, os estoques adultos sero

72
http://www.whoi.edu/oceanus/viewArticle.do?id=2466

368
comprometidos. A Baia de Chesapeake, ao contrrio, recebe contribuies muito semelhantes
dos cinco sistemas estuarinos da regio. Se houver algum problema ambiental que prejudique o
berrio local, o estoque adulto de pescadas ser pouco comprometido, pois ainda existe a
contribuio dos outros quatro sistemas estuarinos.
importante ressaltar que a aplicao da anlise qumica de otlitos para a diferenciao de
estoques e determinao de reas de berrio ainda encontra-se em desenvolvimento, tanto do
ponto de vista da qumica analtica, quanto da anlise estatstica aplicada para esta finalidade
(Tanner et al. 2015). A cada ano so criadas novas tcnicas com maior poder de detalhamento
espacial e temporal que permitiro entender de maneira mais clara a dinmica ecolgica dos
estoques pesqueiros, o que possibilitar a elaborao de medidas de manejo cada vez mais
eficazes para a conservao dos peixes.

6.4 Otlitos como indciadores de caractersticas ambientais

Alm da avaliao de migraes, de uso de hbitat e de recursos pesqueiros, uma das aplicaes
da anlise qumica de otlitos tem sido a reconstruo de caractersticas ambientais dos meios
aquticos atuais e em perodos geolgicos passados (Schloesser et al. 2009, West et al. 2012).
Esta aplicao faz uso do conhecimento que temos a respeito dos fatores ambientais que
influenciam a constituio qumica elementar dos otlitos para fazer inferncias sobre condies
ambientais reais nos locais onde os peixes analisados se desenvolveram. Diversos experimentos
vm sendo conduzidos ao longo dos anos para determinar o efeito especfico de variveis
ambientais na incorporao de diversos elementos em otlitos, porm a forte interao existente
entre temperatura e salinidade tem dificultado a compreenso da magnitude das influncias de
cada uma destas variveis em isolado (Elsdon e Gillanders 2002). Para dificultar ainda mais,
existem variabilidades interespecficas na magnitude da influncia destes fatores e ainda
variabilidades intraespecficas por exemplo, estgio de desenvolvimento que geram a
necessidade de padronizao de espcies e estgios de vida para possveis inferncias
ambientais a partir dos otlitos. Iremos discutir este assunto abordando alguns elementos
utilizados na reconstruo ambiental a partir de otlitos e possveis fontes de interferncia para a
interpretao de seus resultados.

6.4.1 Reconstruo de salinidades

Possivelmente os elementos mais utilizados para a avaliao de uso de hbitat so Sr e Ba. As

concentraes de Sr nos oceanos so relativamente altas, com mdia em torno de 7,8 ppm
(partes por milho). Nas guas doces, sua concentrao pode variar de 1 a 3.000 ppb (partes por

369
bilho), ou seja, a concentrao de Sr em rios e lagoas de gua doce tende a ser algumas ordens
de magnitude inferior quela observada nos oceanos (Bernat et al. 1972, Davidson et al. 2005).
Como j mencionado, no a concentrao absoluta de Sr que importa para sua incorporao
aos otlitos, mas sim sua quantidade relativa ao Ca, uma vez que ambos os elementos so
divalentes positivos e competem pelos mesmos stios de ligao na estrutura cristalina dos
otlitos. O inverso ocorre com o Ba, cujas concentraes em gua doce so muito mais altas que
em gua salgada. Uma vez que as guas doces e ricas em Ba2+ se encontram com guas salgadas
e ricas em sulfatos, formado o sulfato de brio que precipita, removendo a forma
biodisponvel do Ba (Ba2+) da gua (Dehairs et al. 1980). Desta forma, quanto mais salgada a
gua menor ser a quantidade de Ba em sua forma biodisponvel para absoro pelos peixes e
consequente incorporao aos otlitos. Existem, contudo, casos que fogem ao padro, como o
aumento da concentrao de Ba em guas hipersalinas da lagoa Coorong, na Austrlia
(Gillanders e Munro 2012). Este comportamento anmalo do Ba pode complicar a reconstruo
ambiental em determinadas regies, particularmente quando no se conhece a curva de mistura
do elemento em questo.
Devido influncia sofrida pela composio qumica da gua ao longo do gradiente de
salinidades, estes elementos podem teoricamente ser usados para reconstruir histricos de
salinidade da gua onde os peixes se desenvolveram. Na prtica, contudo, a determinao de
valores de salinidade com base em otlitos tem se mostrado difcil devido ao efeito interativo de
diferentes fatores que atuam na deposio de Sr e Ba em otlitos (Elsdon e Gillanders 2002).
Supondo que tenhamos o perfil de Sr e Ba do ncleo borda em um determinado otlito, que
fatores devemos levar em considerao para tentar determinar variaes ambientais da
salinidade? Para facilitar o entendimento, vamos dividir essas consideraes por fator, tratados a
seguir.

6.4.1.1 Movimentos

Precisamos considerar os movimentos que este determinado peixe realizou ao longo de sua vida.
Caso se trate de uma espcie eurihalina, ou seja, tolerante a grande amplitude de salinidades, a
interpretao dos perfis de Sr e Ba comea a ficar complexa, pois uma determinada flutuao no
perfil pode indicar um movimento entre massas de guas diferentes ou uma mudana real de
salinidade. Desta forma, para se reconstruir salinidades em uma determinada rea, importante
que a espcie seja oligohalina, sedentria ou de preferncia esteja fixa em uma determinada
rea.

370
6.4.1.2 Ontogenia

Peixes de uma mesma espcie podem apresentar modificaes fisiolgicas ao longo de seu
desenvolvimento que podem provocar mudanas nas concentraes de elementos em seus
otlitos (Fowler et al. 1995, Sadovy e Severin 2004), sem que essas mudanas indiquem
variaes ambientais ou mesmo movimentos entre diferentes massas de gua. Logo, espcies
que apresentam forte variao ontogentica na deposio de elementos devem ser evitadas ou a
influncia ontogentica deve ser pelo menos entendida antes da tentativa de reconstrues
ambientais. A taxa de crescimento talvez o principal fator ontogentico a produzir variaes
qumicas na constituio dos otlitos (Sadovy e Severin 2004).

6.4.1.3 Interaes entre temperatura e salinidade

A temperatura e a salinidade produzem efeitos complexos na incorporao de elementos

qumicos em otlitos (Fowler et al. 1995, Martin et al. 2004, Sturrock et al. 2012). A
temperatura pode apresentar efeitos negativos para o Sr em algumas espcies e positivos em
outras (Campana 1999). Alm disso, dentro de uma mesma espcie, o efeito da temperatura
pode ser maior para determinados nveis de salinidade que para outros (Albuquerque 2008). Ao
se considerar a salinidade, importante verificar qual padro de mistura dos elementos ao longo
do gradiente de salinidades. A determinao deste padro, chamado de curva de mistura,
essencial para inferncias futuras.
Como podemos observar at aqui, diversos fatores interferem na incorporao de Sr e Ba em
otlitos. Estes fatores no impedem que padres gerais de uso de habitat sejam inferidos, mas
tornam muito difcil a estimativa de valores precisos de salinidade experienciadas pelos peixes
no ambiente.

6.4.2 Reconstruo de temperaturas

Razes isotpicas de oxignio (18O:16O) tm sido utilizadas para a avaliao de mudanas de

temperatura da gua em testemunhos de gelo que representam aproximadamente os ltimos
800.000 anos da histria do nosso planeta. A ideia por trs desta tcnica baseada nas
diferenas de inrcia qumica que diferentes istopos de um mesmo elemento apresentam.
Explicando, istopos so tomos de um mesmo elemento que apresentam mesmo nmero de
prtons e diferentes nmeros de nutrons. O oxignio ocorre naturalmente com diversas massas
16
atmicas. A forma mais leve e mais comum o istopo O (8 prtons + 8 nutrons), com
abundancia natural de 99,76% na atmosfera da Terra. Outros istopos de oxignio ocorrem
naturalmente, mas em abundncias muito menores. O 18O (8 prtons + 10 nutrons) apresenta

371
abundncia natural de 0,2%. Ento, percebemos que a quase totalidade do oxignio da
atmosfera composta pela forma leve do oxignio (16O). Como os istopos mais pesados (18O)
tendem a reagir mais lentamente, medida que a gua de lagoas ou oceanos aquece, as
primeiras molculas de gua a evaporar so aquelas que apresentam a forma mais leve do
oxignio (16O), fazendo com que a gua que no evaporou fique ligeiramente enriquecida em
18
O e o vapor de gua enriquecido em 16O. Por esta razo rios e geleiras, formados a partir da
16
gua das chuvas, so ligeiramente enriquecidos em O, o que deixa claro que a variao de
salinidades em guas costeiras dificulta a avaliao da temperatura.
Em estudos de istopos estveis, as razes isotpicas (para este caso, 18O:16O) so medidas na
gua ou em outras substncias e so comparadas razo de um material de referncia
internacional chamado PDB (Pee Dee Belemnite). A relao entre as razes isotpicas na
amostra e no material de referncia recebe o nome de (por exemplo, 18O), que representa a
notao padro para o estudo de istopos estveis. Os valores de so expressos em e
podem ser positivos, quando dizemos que a amostra est enriquecida no determinado istopo,
negativos, quando est empobrecida e neutros (zero), quando amostra e material de referncia
apresentam o mesmo valor.
A lgica para interpretao dos istopos de oxignio nos otlitos um pouco diferente daquela
apresentada anteriormente para gua e vapor. Em primeiro lugar, a disponibilidade do istopo
pesado do oxignio (18O) na gua diretamente relacionada temperatura local (Jouzel et al.
1994). Foi verificado experimentalmente que razes isotpicas de oxignio so depositados nos
otlitos aproximadamente em equilbrio com sua disponibilidade na gua (Thorrold et al.
1997b). Tambm foi se verificou que a ausncia de influncia de taxas de crescimento ou
ontogenia dos peixes sobe a deposio destes istopos, o que sugere que a anlise de 18O seja
uma ferramenta bastante slida para a avaliao de parmetros ambientais. Por ltimo, foi
experimentalmente determinado que existe uma relao positiva entre temperatura e abundncia
da frao pesada (18O) em relao leve (16O) nos otlitos, o que torna possvel determinar a
temperatura da gua na qual o peixe se desenvolveu com preciso de mais ou menos 1C, desde
que se possa estimar a abundncia do 18O na gua (Thorrold et al. 1997b). De acordo com
determinaes experimentais da influncia de temperatura da deposio de istopos de oxignio
em calcita inorgnica, para cada aumento de 0,3 oC na temperatura da gua, ocorre um aumento
de 0,07 no 18O da calcita. A possibilidade de estimativa da temperatura da gua atravs da
anlise de istopos de oxignio em otlitos tem sido verificada para diferentes espcies de
peixes (Andrus et al. 2002b, Surge e Walker 2005e Dufour et al. 2008).
Na prtica, bem poucos estudos foram realizados para determinao de temperaturas com base
em anlise de istopos de oxignio em otlitos. Para exemplificar, a Figura 6.11 apresenta
estimativas de temperatura da gua a partir de otlitos de jovens do ano de Alosa

372
pseudoharengus (< 1 ano) em dois lagos e uma baa dos Estados Unidos (Dufour et al. 2008).
Note que as estimativas (linhas retas sem pontos) foram bem prximas das temperaturas reais
medidas na gua ao longo do ano (linhas sinuosas, com pontos). Os autores sugerem que alguns
indivduos, principalmente provenientes da baa (Figura 6.11B), buscaram microhbitats de
temperaturas um pouco mais elevadas que as mdias medidas, o que indica um comportamento
juvenil mais complexo que o esperado.

Figura 6.11 - Perfis de temperaturas reais (linha sinuosa com pontos) e estimadas a partir de
istopos de oxignio (18O) em otlitos de jovens do ano de Alosa pseudoharegus (linhas retas
sem pontos) no lago Michigan (A), Baia de Esturjo (B) e Lago Muskegon (C), nos Estados
Unidos (Fonte: Dufour et al. 2008).

Embora os estudos com istopos de oxignio em otlitos ainda estejam em fase de

desenvolvimento para reconstruo de temperaturas ambientais, esta ferramenta bastante
promissora tanto na estimativa de temperaturas do presente, como para estimativas de amostras
recolhidas de stios arqueolgicos, que possibilitariam reconstrues de temperatura de
milhares, ou mesmo milhes de anos no passado, facilitando a compreenso da evoluo da
variabilidade climtica ao longo da histria geolgica do nosso planeta.

373
6.4.3 Avaliao da hipxia da gua

Hipxia a condio de baixa concentrao de oxignio dissolvido na gua. Esta condio est
associada a diversas caractersticas ambientais (Esteves 2011) como grau de movimentao da
gua (guas paradas tendem a apresentar menos oxignio dissolvido), temperatura (o calor
reduz a solubilidade do oxignio na gua) e aporte de nutrientes de origem antrpica como
esgotos (com excesso de nutrientes ocorre a forte proliferao de algas e cuja degradao por
bactrias consome todo o oxignio dissolvido na gua). Regies aquticas que apresentam
hipxia podem ser danosas a diversas espcies de peixes e outros organismos, que acabam
morrendo pela falta de oxignio. No so raras as mortandades de peixes que so usualmente
reportadas todos os anos. Embora episdios crticos de hipxia sejam facilmente observados,
condies mais amenas de hipxia no o so, fazendo com que medidas somente sejam tomadas
quando o problema j est instalado, portanto, normalmente no h o que fazer para minimizar o
problema. Porm foi recentemente observado que concentraes de mangans nos otlitos, mais
especificamente suas razes relativas ao clcio (Mn:Ca) podem indicar se um determinado peixe
experimentou condies de hipxia ou mesmo anxia (nenhum oxignio dissolvido) ao longo de
sua vida (Limburg et al. 20115).
O ciclo biogeoqumico do mangans bem compreendido (para reviso, consulte Reddy e
Delaune 2008). Na gua, a forma biodisponvel do Mn divalente positiva (Mn2+) e tambm
chamada forma reduzida. O ciclo do Mn est intimamente ligado ao sedimento e sofre
influncia direta do pH da presena de oxignio. Explicando simplificadamente o processo, em
ambientes aquticos bem oxigenados, o Mn2+ se liga ao oxignio formando xido de mangans
(MnO) ou, mais frequentemente, dixido de mangans (MnO2), que so compostos slidos que
precipitam e vo para o sedimento. Duas situaes podem ocorrer concomitantemente nos
sedimentos: (i) os xidos se ligam a um carbono formando os carbonatos de mangans (MnCO3)
que ficam retidos nos sedimentos anxicos mais profundos e (ii) os xidos de mangans so
novamente reduzidos a Mn2+ e podem voltar para a gua. Se o ambiente bem oxigenado, a
camada mais superficial do sedimento tambm ser e aquelas formas reduzidas Mn2+ (situao
ii) voltam a se ligar ao oxignio impedindo que a forma biodisponvel volte para a gua. Em
ambientes pobres em oxignio os xidos ou dixidos de mangans so reduzidos a Mn2+ e no
h oxignio suficiente para produzir novos xidos, ou seja, parte do Mn2+ volta para a gua e
fica biodisponvel para os peixes. O Mn2+ entra no organismo pelas brnquias ou intestinos
sendo, por fim, incorporado estrutura cristalina dos otlitos em substituio ao Ca2+,
semelhantemente ao que ocorre com Sr e Ba.
importante entender que a presena de maiores razes Mn:Ca nos primordia dos otlitos
uma caracterstica comum que no est necessariamente relacionada a condies anxicas da
gua, mas a herana maternal de Mn (Ruttemberg et al. 2005). Um segundo ponto importante,

374
que o processo de incorporao do Mn aos otlitos sofre influncia das taxas de crescimento,
que por sua vez so influenciadas por temperatura e por outros processos desencadeadores de
stress (Martin e Thorrold 2005). A influncia das taxas de crescimento dificulta a determinao
das condies ambientais de anxia sendo necessrio, portanto, avaliar o crescimento da espcie
estudada, o que pode ser realizado com base na anlise da espessura dos anis dirios de
crescimento nos mesmo otlitos em que se analisa as razes Mn:Ca (Limburg e Walther 2015).
Na Figura 6.12, Limburg e Walther (2015) analisaram otlitos de trs diferentes espcies de
peixes: a perca amarela em um lago dos Estados Unidos, um linguado no Mar Bltico e uma
corvina no Golfo do Mxico. Mesmo para trs espcies e ambientes distintos eles encontraram
que todas as espcies apresentaram maiores valores de Mn:Ca quando os indivduos eram
coletados em regies de baixa concentrao de oxignio dissolvido. Note que a magnitude da
diferena muda entre espcies e ambientes, mas o efeito coerente com valores bem mais altos
de Mn:Ca em reas anxicas.

Figura 6.12 Razes Mn:Ca em otlitos de (A) Perca flavescens amostradas no Lago Erie
(EUA), (B) Platichthys flesus amostrados no Mar Bltico e (C) Micropogonias undulatus
amostradas no Golfo do Mxico. Os grficos da esquerda representam reas com boa
oxigenao e os da direita reas de hipxia (Fonte: Limburg e Walther 2015).

Juntamente com Mn, outros elementos podem ajudar a elucidar questes sobre hipxia, entre
eles enxofre e iodo. Esta uma rea de pesquisa em desenvolvimento inicial e espera-se que em
algum tempo os peixes possam ser usados como monitores mveis de condies de hipxia no
ambiente.

375
6.5 Concluses

Os otlitos podem ser considerados as caixas-pretas naturais que guardam informaes sobre
todo o ciclo de vida dos peixes, auxiliando na compreenso dos aspectos bioecolgicos das
populaes e dos estoques de peixes. A composio qumica dos otlitos influenciada
previsivelmente por fatores ambientais como temperatura, salinidade, disponibilidade de
oxignio e composio qumica elementar da gua. Isso significa que, medida que a influncia
de cada fator for melhor compreendida, melhor podemos estimar as variabilidades ambientais
vivenciadas pelos peixes ao longo de sua vida, o que os coloca como potenciais ferramentas de
monitoramento ambiental. Diferentes elementos (eg. Sr, Ba, Ca, Mn, S, etc.) podem ser
utilizados para responder diferentes perguntas sobre o ciclo de vida dos peixes e flutuaes
ambientais na gua onde eles esto inseridos. Outros elementos no foram mencionados aqui
(ex. Zn, Fe, Mg), mas tambm apresentam potencial para estudos ecolgicos de uso de hbitat e
como indicadores de condio da gua. A ideia deste texto foi apresentar ao leitor diversas
aplicaes da anlise qumica de otlitos de forma a promover um primeiro contato terico com
a tcnica e possveis situaes onde o estudo de otlitos possa auxiliar na compreenso da
ecologia de peixes e condies ambientais.

Agradecimentos

Gostaria de agradecer aos colegas autores que gentilmente cederam as figuras utilizadas ao
longo deste captulo. Tambm gostaria de agradecer ao professor Norbert Miekeley, falecido h
pouco mais de dois anos, a quem considero o pai cientfico que me possibilitou entrar no mundo
da qumica analtica sempre cedendo seu laboratrio, equipamentos e interminveis
ensinamentos para que eu desenvolvesse minha Tese de Doutorado e posteriormente
continuasse com pesquisas sobre qumica de otlitos.

376
7. MTODOS QUANTITATIVOS APLICADOS AO ESTUDO DE OTLITOS

Andr Martins Vaz-dos-Santos

Sumrio
7.1 Introduo...........................................................................................................................377
7.2 Programas de computador...................................................................................................379
7.3 Alguns mtodos quantitativos.............................................................................................379
7.3.1 Obtendo o n amostral de otlitos..................................................................................379
7.3.2 Identificando dados discrepantes.....................................................................................382
7.3.3 Testes de frequncias.......................................................................................................384
7.3.4 Comparao de coeficientes com um valor referencial....................................................386
7.3.5 Ajustando modelos com o mtodo no linear iterativo de mnimos quadrados...............387
7.3.6 Anlise de resduos...........................................................................................................388
7.3.7 Comparando modelos: anlise de covarincia.................................................................390
7.3.8 Utilizando tcnicas paramtricas versus no paramtricas..............................................392
7.4 Concluses..........................................................................................................................395
Agradecimentos.........................................................................................................................395

7.1 Introduo

O uso e aplicao de tcnicas quantitativas so inerentes e indissociveis s cincias da natureza

(biologia, ecologia, fisiologia, oceanografia, limnologia,...) pesca e aquicultura. Durante os
cursos de graduao, muitas vezes as disciplinas que tratam de mtodos quantitativos no
recebem a devida ateno do discente, por estarem desconectadas de suas atividades dirias e/ou
por este ter tido pouca afinidade (ou averso!) ao tema no momento da escolha profissional.
Alm disso, por serem comuns s vrias reas do conhecimento, so ministradas coletivamente
a cursos diferentes, impedindo direcionamento de contedo e exemplos e tornando-as, desta
maneira, incuas. Entrementes, quando do envolvimento acadmico em projetos como o estudo
de otlitos, a demanda analtica do tema requer conhecimentos de mtodos quantitativos. O
advento e facilidade de uso de computadores e programas de anlise tambm favoreceu um
rpido avano nestas tcnicas; por outro lado, criou um problema de seu uso indiscriminado sem
conhecimento de suas bases, requisitos e procedimentos. Cabe lembrar algumas premissas
bsicas:

377
- mtodos quantitativos so ferramentas que auxiliam o pesquisador/acadmico na execuo das
anlises de seus dados; no so, portanto, elementos para aumentar a complexidade e
dificuldade de um tema em estudo, mas sim o inverso;
- o melhor mtodo quantitativo no necessariamente expressa o melhor resultado biolgico;
- os mtodos quantitativos fazem parte das cincias exatas, enquanto que os estudos de otlitos
fazem parte de um campo interdisciplinar das cincias que apresenta enorme variabilidade;
- o mtodo cientfico possui vrias caractersticas (Marconi e Lakatos 2003, Cervo et al. 2006),
entre elas a sistematizao, a anlise e a possibilidade de verificao. Os mtodos quantitativos
asseveram estes aspectos, mas bom senso e experincia, elementos subjetivos, tambm fazem
parte das escolhas de aplicao e interpretao de tcnicas. Logo, fundamental conciliar
racionalidade e objetividade.

Considerando estas premissas, no nvel de cursos de graduao73 espera-se que os seguintes

temas sejam vistos e abordados, capacitando o acadmico no uso e aplicao destas tcnicas
(Batschellet 1978, Callegari-Jacques 2003, Vieira 2008, Magurran 2013):
- clculo diferencial e integral, mtodos de integrao;
- estatstica: grficos, tabelas, medidas, distribuies, testes de hipteses, comparao de
amostras (p.ex., testes t, ANOVA, testes no paramtricos, correlao);
- mtodos de enumerao;
- funes e modelos de regresses;
- ndices de diversidade e similaridade.

Quando da atuao como profissional do acadmico/pesquisador, espera-se que esta base

consolidada se expanda na perspectiva de uso e detalhamento, se agregando novas
possibilidades analticas (Sokal e Rohlf 1995, Abuabara e Petrere 1997, Chambers e Hastie
1997, Dryden e Mardia 1998, Legendre e Legendre 1998, Krebs 1999, Hernndez 2007, Hair et
al. 2009, Zar 2010, Gotelli e Ellison 2011, Valentin 2012), entre elas:
- anlises de varincia, seus diversos modelos e modelos lineares generalizados;
- anlise de covarincia;
- estatsticas circulares;
- anlises de Monte Carlo;
- mtodos de verossimilhana e estatstica Bayesiana;
- mtodos multivariados, como anlise de componentes principais, escalonamento
multidimensional, anlise de correspondncia, modelagem de equaes estruturais, etc.;
- testes de hipteses multivariados, como MANOVA e PERMANOVA;

73
Observar que conjuntos, potncias, logaritmos, progresses, matrizes, determinantes, funes trigonomtricas,
geometria e lgica so contedos inerentes a etapas anteriores ao ensino superior.

378
- mtodos geomtricos e de anlises de deformaes.

Obviamente, que qualquer acadmico/pesquisador experiente que atue em otolitologia poder

facilmente agregar muito mais referncias e tcnicas de anlise a esta lista, aqui no
mencionadas! Desta forma, o objetivo deste captulo no est na exaustiva repetio dos
mtodos quantitativos, descritos com propriedade em suas referncias originais, mas sim
demonstrar algumas destas tcnicas e sua aplicao no estudo de otlitos.

7.2 Programas de computador

Hoje em dia h uma gama variada de programas de computador para a execuo das mais
diversas tcnicas de anlises quantitativas. Qual escolher? Esta pergunta deve levar em conta: (i)
disponibilidade do programa, (ii) se ele gratuito ou pago, (iii) recursos que ele possui e (iv)
demandas de anlise. De qualquer modo, aprender o uso de um programa exigir um grande
investimento de tempo, com testes, simulaes, leitura de manual, participao em grupos de
discusso, acesso a suporte online, etc. Este investimento deve ser feito quando se conhece e
domina as tcnicas a serem utilizadas, para que o computador opere como uma verdadeira
ferramenta, e no como um malicioso elemento de conduo a caminhos desconhecidos. Logo,
programa de computador uma escolha pessoal.

7.3 Alguns mtodos quantitativos

7.3.1 Obtendo o n amostral de otlitos

A estimativa do tamanho (n) amostral um item que no deve ser considerado uma camisa
de fora na vida do acadmico/pesquisador, mas deve nortear seu esforo em funo de
suficincia e representatividade. Deve-se ter em conta quais so os objetivos do estudo e a
viabilidade de execuo das anlises. Apesar de no estarem atualizados, tome como exemplo
os valores em dlares apresentados por Campana (2001) para validao de idades: este um
gargalo poderoso nas cincias!
A maioria das tcnicas ecolgicas e estatsticas possui, a partir de simulaes e dos princpios
do intervalo de confiana, diferentes mtodos para estimar o n amostral (Krebs 1998, Zar
2010). A amostragem aleatria simples (Gulland 1966) tem sido um bom referencial para
estimar o tamanho amostral.
Vamos supor que o objetivo do estudo a caracterizao morfomtrica de otlitos a fim da
discriminao de estoques de duas reas. Logo, quantos peixes (e consequentemente otlitos)
devem ser obtidos em cada rea? Tomemos como exemplo Micromesistius australis, um

379
Gadiforme distribudo no Atlntico e Pacfico Sul, extremo sul da Amrica do Sul, cujos
maiores comprimentos corporais relatados esto entre 480 e 540 mm (Cousseau e Perrotta 2004)
e a primeira maturao se d entre 350 e 380 mm (Whler et al. 2000). Podemos simular a
obteno de uma amostra aleatria de M. australis a partir das capturas da frota pesqueira,
considerando, para estimar inicialmente 30 dados de comprimentos totais (FL), uma mdia em
380 mm e desvio padro em 65 mm FL, com distribuio normal. O resultado uma amostra de
30 indivduos com comprimento variando entre 223 e 489 mm, com mdia e desvio padro de
376,0463,8 mm (Figura 7.1).

Figura 7.1 Distribuio de frequncia de indivduos por classes de comprimento total (FL)
obtida a partir de simulao realizada com Micromesistius australis (n = 30).

Como verificar se este n suficiente? Consideremos a frmula do teste t uma amostra:

x
t=
sx

Onde:
t = estatstica do teste;
x = mdia aritmtica;
= mdia populacional;
sx = erro padro da mdia, dado pelo desvio padro s dividido pela raiz quadrada do nmero de
observaes n.

Reescrevendo:

380
 x
t=
s
n

A mdia populacional desconhecida, mas a distncia entre a mdia populacional e a

amostral dada por:

s
t = x
n

Para que esta igualdade seja verdadeira, podemos pensar no erro ( ) que existe associado
estimativa de x , normalmente adotado pelo pesquisador como 0,05 (5%):

s
t = x
n

Rearranjando, temos a frmula de Gulland (1966) para estimar o n amostral em amostragens

aleatrias simples:

2
t .s
n = 2 ( 0 , 05 ),n1
x
Onde:
n = tamanho amostral a ser estimado;
t = valor terico bicaudal (2) de probabilidade na distribuio t com n-1 graus de liberdade;
x = mdia aritmtica da amostra piloto ou da simulao;
s = desvio padro da amostra piloto ou da simulao.

Aplicando a frmula acima em no exemplo sobre Micromesistius australis, temos:

2
2,045.63,8
n= = 48
376,04.0,05

Desta forma, deve-se tentar obter, ao menos, 48 exemplares de M. australis para analisar a
morfometria de otlitos e diferenciar estoques da espcie. Este valor deve ser aplicado, com
bom senso, a cada categoria que est sendo estudada (rea, poca, sexo). Legu et al. (2013)
constituem um exemplo aplicado do tema, tendo concentrado suas amostragens de M. australis

381
no perodo reprodutivo, quando os grupos esto separados, e delimitado um intervalo de
tamanho corporal, minimizando erros. Estes autores analisaram um n de otlitos que, segundo
a simulao aqui realizada, foi mais do que suficiente.
Outro critrio que pode ser adotado a regra dos 10 (Gotelli e Ellison 2011), considerando as
categorias do estudo.

7.3.2 Identificando dados discrepantes

A anlise de dados quantitativos implica na identificao de dados discrepantes (observaes

incomuns), ou seja, valores extremos que se diferenciam dos demais. Isto pode ocorrer em
funo da prpria biologia ( uma exceo na amostra) ou de erros de mensurao, digitao,
etc. A manuteno de um dado discrepante ou no no estudo deve ser ponderada com bom
senso e experincia, havendo dois critrios estatsticos para sua identificao: atravs do clculo
de outliers ou atravs do escore Z.
Consideremos os dados de comprimento (OL) e altura (OH) dos otlitos de Bembrops heterurus
(Vaz-dos-Santos et al. 2007b). A variao destas medidas pode ser descrita atravs de um
grfico de caixa (box plot) (Figura 7.2), originalmente constitudo por cinco valores: (i) a caixa
representa o primeiro (Q1) e o terceiro quartil (Q3); (ii) a barra que a divide a mediana (Q2); (iii)
as linhas verticais, que so estendidas at os dados que no ultrapassem 1,5 vezes a amplitude
interquartil (Q3-Q1) (Zar 2010). Os dados discrepantes, definidos como dados esprios
(outliers), so aqueles que esto fora do intervalo dado pelo clculo do item (iii), sendo
denotados por asteriscos. Observando os dados de B. heterurus verifica-se que, no comprimento
do otlito (OL) no ocorreram observaes incomuns, enquanto que na altura (OH) sim.
Considerando a variabilidade dos dados e o conhecimento sobre a espcie, pode-se dizer que
estas ocorrncias so dados reais detectados em funo dos clculos, mas que podem/devem ser
mantidos nas anlises subsequentes. Veja que, neste caso, a identificao dos dados discrepantes
se deu em funo de medidas de posio, os quartis. Por isso, deve-se ter cuidado ao
manter/remover dados assim diagnosticados quando se est testando, por exemplo, mdias:
uma mistura de conceitos que se no estiver clara apenas prejudica as anlises.

382
 6,5

6,0

5,5

OL (mm)
5,0

4,5

4,0

3,75

3,50

3,25
OH (mm)

3,00

2,75

2,50

Figura 7.2 Grficos de caixa para o comprimento (OL) e a altura (OH) do otlito sagitta de
Bembrops heterurus (Dados de Vaz-dos-Santos et al. 2007b, Fonte: LABESC-UFPR).

Uma segunda anlise de dados discrepantes, considerando a mdia, pode ser feita atravs do
clculo do escore Z (Callegari-Jacques 2003):

xi x
Z=
s

Onde:
xi = cada dado do indivduo i;
x = mdia aritmtica;
s = desvio padro.

O clculo do escore Z chama-se padronizao de dados, pois converte os dados originais em

propores de uma distribuio normal padro (mdia zero e desvio padro 1) (Figura 7.3).
Permite posicionar os dados em relao mdia e, aqueles que esto alm de 1,960 desvios
padres em relao a ela, antes ou depois, so considerados dados discrepantes e raros, pois
caem na rea de probabilidade de P < 0,05.

383
 0,4

0,3
densidade normal

0,2
0,95

0,1

0,025 0,025
0,0
-1,960 0 1,960
mdia

Figura 7.3 Curva de distribuio normal padro mostrando a posio da mdia central (zero) e
os escores Z de -1,960 e +1,960, que delimitam a rea de 0,95, observaes que so comuns, e
as duas reas de 0,025, de observaes incomuns.

No caso de exemplo de Bembrops heterurus, poderamos verificar se as observaes incomuns

detectadas na tcnica do grfico de caixa tambm so discrepantes na perspectiva do clculo do
escore Z. Calculando os escores Z dos valores de altura do otlito (OH) 2,44 mm (n = 1), 3,61
mm (n = 1), 3,72 mm (n = 3) e 3,78 mm (n = 1) com a mdia 3,039 mm e o desvio padro 0,258
mm:
Z2,44 = -2,32
Z3,61 = +2,21
Z3,72 = +2,64
Z3,78 = +2,87

Considerando esta outra anlise, estas seis observaes tambm so consideradas outliers; mais
uma vez, poder-se-ia manter estes dados na anlise, at porque eles no ultrapassam 3 desvios
padres em relao mdia, o que corresponde a 0,01 de probabilidade, eventos que so
extremamente raros.

7.3.3 Testes de frequncias

A descrio da morfologia de otlitos por classes de comprimento total indispensvel para a

verificao de variaes ontogenticas (Vaz-dos-Santos et al. 2007c, Tuset et al. 2008, Rondon
et al. 2014, Carvalho et al. 2015), lembrando que os otlitos so inicialmente arredondados e

384
que, ao longo da vida, adquirem sua forma especfica devido ao crescimento em diferentes eixos
(Smale et al. 1995). Deste modo, comparar as propores de indivduos ao longo do
desenvolvimento em diferentes feies (cf. Captulo 2) fundamental para entender a
variabilidade da forma e para que se possa assinalar, com segurana, uma forma que seja
caracterstica dos otlitos.
O teste qui-quadrado (2) foi desenvolvido originalmente para escalas nominais (Zar 2010), mas
pode ser aplicado a escalas categricas ordinais (Siegel e Castellan 2006). No presente caso, a
amostra que constitui cada classe de comprimento no aleatria (foram selecionados 10
otlitos), o que permite a aplicao do teste sem prejuzo das concluses. A hiptese nula que
a quantidade de indivduos em cada linha (classe de comprimento) por categoria de atributos de
otlitos segue a proporo definida pelo acadmico/pesquisador e, para o teste de
heterogeneidade, que provm da mesma populao. A aplicao do teste de heterogeneidade
feita com a frmula (Zar 2010):

( f ij fij ) 2
=
2

f ij

Onde:
2 = estatstica do teste;
f ij = frequncia observada na categoria i (linha) no atributo j (coluna);

fij = frequncia esperada na categoria i (linha) no atributo j (coluna).

Feito o clculo para cada classe de comprimento (linhas i), somam-se estes valores e o seus
graus de liberdade. Tambm se calcula o qui-quadrado para o total das linhas. Qui-quadrado da
soma e do total so subtrados, obtendo-se o valor do teste de heterogeneidade, assim como so
subtrados os seus graus de liberdade. O valor de qui-quadrado calculado deve ser comparado
com o crtico de tabela ou ser analisado com a probabilidade; se apresentar P < 0,05, se rejeita a
hiptese nula. Observe que a hiptese nula pode ser estruturada de duas maneiras: considerando
propores iguais em cada atributo de otlito analisado ou, verificando-se a proporo do total,
estabelecendo-a como o referencial de comparao.
A aplicao do teste qui-quadrado apresenta algumas restries (Callegari-Jacques 2003, Zar
2010), o que faz com que o teste G tambm seja recomendado como uma alternativa
metodolgica.

385
7.3.4 Comparao de coeficientes com um valor referencial

A anlise do crescimento relativo atravs do modelo alomtrico y=axb (Braga 1986, Huxley
1993, Froese 2006) implica em estimar o coeficiente b, cujo valor expressa o padro de
desenvolvimento de uma varivel em relao outra, normalmente medidas dos otlitos em
relao ao comprimento corporal e entre si (Perin e Vaz-dos-Santos 2014). Conforme descrito
no Captulo 3, afirmar se comprimento, altura, espessura e peso dos otlitos apresentam
isometria ou alometria implica em testar o coeficiente em relao a um referencial, que pode ser
linear ( = 1), quadrtico ( = 2) ou volumtrico ( = 3), a definir de acordo com a natureza das
variveis (Quinn II e Deriso 1999).
A regresso entre o comprimento e altura do otlito sagitta de Eucinostomus argenteus foi
ajustada e o valor do coeficiente b (0,9246) estimado (Figura 7.4). Este valor indica que o
otlito cresce proporcionalmente menos em altura em relao ao comprimento e sugere
alometria negativa, sendo necessrio testar se a mesma significativa ou no.

Figura 7.4 Diagrama de disperso e modelo alomtrico ajustado ao comprimento (OL) e altura
(OH) dos otlitos sagitta de Eucinostomus argenteus (Fonte: LABESC-UFPR).

Para comparar o valor obtido no exemplo da Figura 7.4 com o referencial, no caso = 1, pois
so duas medidas lineares, deve-se utilizar o teste t uma amostra (Zar 2010):

b
t=
sx
Onde:
t = estatstica do teste;
b = coeficiente estimado do modelo;

386
 = valor referencial do coeficiente;
sx = erro padro do coeficiente.

No caso do exemplo:
0,9246 1
t= = 2,712
0,0278

O valor de t em mdulo pode ser comparado com o de tabela com n-1 graus de liberdade ou
avaliado com o valor de probabilidade; no caso P = 0,004, podendo-se considerar a alometria
negativa significativa.

7.3.5 Ajustando modelos com o mtodo no linear iterativo de mnimos quadrados

Tradicionalmente o ajuste de uma regresso, ou seja, a estimao dos valores de seus

coeficientes, sempre foi feita atravs do mtodo linear dos mnimos quadrados (Callegari-
Jacques 2003). Esta tcnica obrigatoriamente implica que o modelo seja linear (y = a+bx) e o
ajuste de curvas no lineares depende de linearizao prvia das mesmas. O mtodo iterativo
no linear de mnimos quadrados (Gallant 1987) uma alternativa mais eficiente para estes
ajustes, pois pode ser aplicado a praticamente qualquer tipo de modelo de regresso e,
normalmente, resulta em menores valores da soma de quadrados residual (RSS) e do valor do
erro padro da regresso (S). Parte do princpio de sucessivas iteraes, ou seja, testam-se
diversos valores a partir de um chute inicial (que deve ser bom e prximo da realidade) para que
se obtenha o melhor ajuste.
As etapas para a execuo do ajuste so:
- estabelecer os pares de dados (x,y) e lana-los em um diagrama de disperso;
- estabelecer valores iniciais para as constantes do modelo;
- calcular o valor esperado ( y ) da varivel dependente com o modelo e constantes inicialmente
chutados;
- calcular a soma de quadrados residual (RSS):
n
RSS = ( y y ) 2
i =1

- iterar o modelo, buscando o valor mnimo de RSS com a variao dos valores das constantes
iniciais.

387
O modelo alomtrico (Huxley 1993) foi ajustado pelos dois mtodos aos dados de comprimento
corporal total e peso do otlito de Trachurus lathami (Figura 7.5). A soma dos quadrados
residual foi menor no ajuste iterativo (RSS = 0,000305) indicando que este modelo descreveu
melhor o conjunto de dados. No obstante, notvel que os coeficientes de ambas as regresses
foram diferentes, o que pode conduzir a interpretaes bem distintas em alguns casos.

Figura 7.5 Diagrama de disperso e modelo alomtrico ajustado ao comprimento total (FL) e o
peso do otlito sagitta (OW) de Trachurus lathami atravs dos mtodos (A) linear de mnimos
quadrados e (B) iterativo no-linear de mnimos quadrados (Fonte: LABESC-UFPR).

7.3.6 Anlise de resduos

Os resduos representam a diferena entre um valor observado e um valor esperado, ou seja:

uma medida de quanto os dados amostrais variaram em relao a um determinado referencial, a
mdia ou a regresso, por exemplo. Resduos podem ser analisados em testes qui-quadrado, em
anlises de varincia (ANOVAs), em modelos lineares generalizados (GLMs) e em regresses,
um caso especial de ANOVA (Sokal e Rohlf 1995, Venables e Ripley 1997, Zar 2010). Na
maioria destes casos, a interpretao sobre o significado estatstico do resduo implica em sua
converso em escores Z74, trazendo o dado para uma escala de grandeza conhecida, ou seja, de
1, 2 ou 3 desvios padres.

74
Cada resduo individual subtrado da mdia dos resduos e dividido pelo desvio padro dos resduos.

388
Consideremos, para exemplificar, a anlise de resduos do modelo alomtrico ajustado entre o
comprimento total (FL) e o peso do otlito (OW) de Trachurus lathami: OW = 0,000000058 FL
2,4523
(Figura 7.5B). A soma de quadrados residual (RSS), o valor do pseudo-coeficiente de
determinao (r2)75 ou o erro padro da regresso (S) indicam se o ajuste foi bom ou no, mas
mesmo assim fundamental analisar os resduos. Os pressupostos das tcnicas aplicadas podem
ser testados nos resduos, independentemente de sua condio nos dados brutos (Vieira 2006).
Segundo esta autora, a anlise de resduos deve observar: (i) observaes incomuns (dados
discrepantes), (ii) independncia, (iii) homogeneidade da varincia e (iv) se a distribuio
normal. Para tal, possvel combinar diagnstico grfico e alguns testes de hipteses (Vieira
2006), tratados a seguir.
Para verificar dados discrepantes, um diagrama de disperso entre os valores esperados de peso
do otlito ( y - a regresso) e entre os resduos padronizados ( Z y y ) permite verificar quais

valores esto fora do intervalo entre -1,960 e + 1,960 desvios padres; alm disso, a disperso
dos resduos deve ser totalmente aleatria (Figura 7.6A). Nota-se uma tendncia no incio da
curva, relacionada variabilidade dos menores pesos de otlitos, consequncia da capacidade de
registro da balana analtica; um problema insolvel. Por outro lado, apenas 5 dados foram
discrepantes, o que denota um ajuste adequado do modelo. Quanto ao pressuposto de
independncia, este no pode ser violado sem um srio comprometimento das anlises
executadas (Vieira 2006); a plotagem dos resduos em ordem crescente (no caso, em ordem de
peso de otlito) pode revelar tendncias, pois tem de ser aleatria. Pela figura (Figura 7.6B), de
fato, o nico problema que existe est no incio da curva, com os pesos pequenos. Para analisar
a varincia, h diversas formas; graficamente, um histograma que apresente simetria e
mesocurtose revela homogeneidade de varincias (Figura 7.6C), que pode ser devidamente
testada; no caso, podemos verificar um leve deslocamento esquerda, em funo da ausncia de
pesos em alguns tamanhos, entre os pequenos e os exemplares maiores. A anlise de
normalidade subsequente de homogeneidade de varincias e pode conjugar um grfico de
resduos e sua porcentagem acumulada em relao curva normal com um teste de normalidade
(Figura 7.6D). No nosso exemplo com T. lathami os valores extremos, mais escassos, tendem a
afetar os resduos e, isto o que se passa na maioria das situaes reais, como a aqui
apresentada, em que os dados no apresentam perfeio estatstica, mas refletem a realidade
biolgica do peixe e do desenvolvimento do otlito.

75
Nem sempre recomendado em ajustes no lineares e iterativos, mas no entraremos nesta discusso.

389
Figura 7.6 Anlise de resduos da regresso entre o comprimento total e o peso do otlito
sagitta de Trachurus lathami: (A) diagrama de disperso entre o peso do otlito esperado (OW
esperado) e os resduos padronizados, (B) grfico de linha entre o peso do otlito esperado (OW
esperado) em ordem crescente e os resduos padronizados, (C) histograma de resduos, (D)
grfico de probabilidade normal de resduos (Fonte: LABESC-UFPR).

Ainda sobre a anlise de resduos, ela constitui uma importante ferramenta na deteco do
crescimento polifsico atravs de otlitos, como descrito para Micropogonias furnieri (Bervian
et al. 2006) e posteriormente aplicado a diversas espcies (Vaz-dos-Santos et al. 2014) e para
Anchoa tricolor (Carvalho et al. 2015).

7.3.7 Comparando modelos: anlise de covarincia

A anlise de covarincia (ANCOVA) combina os elementos de uma anlise de varincia com os

de uma anlise de regresso, sendo usada, por exemplo, para comparar ajustes de modelos de
machos e fmeas, de diferentes reas ou de diferentes pocas. Pensemos, por exemplo, no
comprimento corporal e no comprimento do otlito para quatro pocas distintas: para comparar
o comprimento corporal entre as quatro pocas, pode-se utilizar uma anlise de varincia um
fator (ANOVA); para associar o comprimento corporal com o do otlito, cabe uma anlise de
regresso. A combinao de ambas as anlises resulta na ANCOVA. Observe que o
comprimento corporal a varivel independente x, elemento comum s duas anlises, sendo
denominado de covariada (Sokal e Rohlf 1995).

390
De modo simples, na anlise de covarincia os diferentes modelos so comparados entre si
atravs dos valores de seus coeficientes b e a e com o modelo geral (com todos os dados juntos),
representado pelo coeficiente bp (Sokal e Rohlf 1995). Pode ser usada para dois ou mais
modelos.
Tomemos as regresses entre o comprimento corporal (FL) e o comprimento do otlito lapillus
(OL) de Cathorops spixii obtidas em dois sistemas costeiros da costa sul do Brasil, Atlntico
Sudoeste, o Complexo Estuarino da Baixada Santista (CEBS) e Complexo Estuarino Lagunar de
Iguape-Cananeia (CELIC) (Figura 7.7). Visualmente parece haver diferenas nos otlitos da
espcie nas duas reas, mas necessrio proceder a uma ANCOVA, usando para tal dados
logaritmizados.

Figura 7.7 Diagrama de disperso e modelos alomtricos ajustados ao comprimento total (FL)
e o comprimento do otlito lapillus (OL) de Cathorops spixii em dois sistemas costeiros da
costa sul do Brasil, Atlntico Sudoeste (Fonte: LABESC-UFPR).

A aplicao da ANCOVA aos modelos de C. spixii resultou em diferenas significativas (Tabela

7.1). As inclinaes foram diferentes (P = 0,0075) e os interceptos tambm (P = 0,0001), ou
seja, o crescimento dos otlitos em relao ao comprimento corporal nas duas reas
significativamente diferente, mesmo com a regresso conjunta sendo significativa.

391
Tabela 7.1 Resultados da anlise de covarincia para comparao entre os modelos
alomtricos ajustados ao comprimento total (FL) e o comprimento do otlito lapillus (OL) de
Cathorops spixii em dois sistemas costeiros da costa sul do Brasil, Atlntico Sudoeste (F =
estatstica do teste, df = graus de liberdade, P = probabilidade) (Fonte: LABESC-UFPR).

Comparaes F df P
Coeficiente b 7,29 1 , 228 0,0075
Coeficiente a 19,06 1 , 229 0,0001

Modelo conjunto F df P
607,05 1 , 229 < 0,001
Coeficiente bp 0,625

7.3.8 Utilizando tcnicas paramtricas versus no paramtricas

A estatstica paramtrica e a no paramtrica so dois caminhos para a anlise de dados

quantitativos. A primeira est baseada em parmetros, fundamentalmente a mdia e a
varincia 2, o que implica que os dados sigam uma distribuio normal (Figura 7.3) (Zar 2010).
De forma simples, a mdia, enquanto medida de tendncia central, ser uma boa representante
da amostra somente se ela tiver um bom poder de centralizao e se a variabilidade dos dados
em torno dela for homognea, o que implica em homocedasticidade de varincias, i.e., que as
varincias dos diferentes grupos que esto sendo comparados sejam iguais (Vieira 2006). Por
outro lado, os mtodos no paramtricos no apresentam qualquer requerimento sobre a
distribuio da qual os dados provm (Siegel e Castellan 2006), sendo chamados de testes de
distribuio livre (Callegari-Jacques 2003); podem ser aplicados a amostras com tamanhos
pequenos e a dados qualitativos. As tcnicas no paramtricas se baseiam na atribuio de
postos (rol ou rank) aos dados.
Ambas as linhas metodolgicas apresentam vantagens e desvantagens e seu uso no deve ser
uma escolha arbitrria, pelo contrrio, deve estar embasada em forte suporte terico, ou seja, na
literatura sobre estatstica. Deve-se ter tambm cuidado com o que estas bases apresentam:
Sokal e Rohlf (1995) e Zar (2010) so as duas referncias mais comuns na rea de cincias da
natureza e agrria e, em muitos casos, apresentam vises muito diferentes sobre um mesmo
tema. Muitos programas de computador no trazem em seus defaults os melhores testes
estatsticos e, desta forma, a execuo de um teste no deve ser realizada apenas por estar
disponvel.
Em linhas gerais, para variveis quantitativas o caminho paramtrico sempre anterior ao no
paramtrico. Lembre-se que peixes e otlitos esto sujeitos a fatores endgenos e exgenos,
apresentando variabilidade intraespecfica (individual, populacional) e interespecfica (Morales-

392
Nin 2000, Popper e Lu 2000). Logo, as decises devem ser tomadas com bom senso e no
apenas luz do rigor estatstico.
Inicialmente testam-se os dados dos grupos quanto normalidade e homocedasticidade; em
havendo pequenos desvios e/ou violao de pressupostos, os testes paramtricos podem ser
executados e os resduos podem ser analisados quanto aos pressupostos. Caso no seja possvel
usar os dados brutos, estes devem ser transformados76 e testados, podendo-se da mesma
maneira, aplicar os testes aos resduos. Se ainda assim os dados no atenderem aos pressupostos
dos testes, retorna-se aos dados brutos e parte-se para anlises no paramtricas.
Vamos tomar como exemplo a anlise da razo de aspecto altura do otlito/comprimento do
otlito (OH/OL) para anlise da variao geogrfica de Merluccius hubbsi no Atlntico
Suodoeste, em seis reas entre 22 e 34S, na costa do Brasil. Sabe-se que M. hubbsi, nesta rea,
apresenta dois estoques (Vaz-dos-Santos e Schwingel 2015). Para tal, o efeito de tamanho foi
removido (cf. Captulo 3), sendo a razo OH/OL plotada contra o comprimento padro (FL) para
verificao visual dos dados (Figura 7.8).

Figura 7.8 Diagrama de disperso entre o comprimento padro (FL) e a razo de aspecto
(OH/OL) de Merluccius hubbsi (Fonte: LABESC-UFPR).

Verificada a independncia do comprimento, as mdias da razo de aspecto foram ento

submetidas comparao entre as seis reas, atravs de um teste de comparao mltipla, no
caso uma anlise de varincia um fator (ANOVA) (Zar 2010). Para tal, foi fundamental testar a
normalidade (teste de DAgostino Pearson) para as razes de cada rea (Tabela 7.2). Em todos
os casos, P > 0,05, ou seja, os dados seguem uma distribuio normal. Entretanto, ao testar as
varincias, o teste de Bartlett77 resultou em P < 0,05, ou seja, as amostras so heterocedsticas.

76
Existem vrios tipos de transformaes de dados, cada uma relacionada s diferentes propriedades dos mesmos (cf.
Sokal e Rohlf 1995, Krebs 1999, Siegel e Castellan 2006, Zar 2010).
77
O teste de Levene recomendado para amostras que no apresentem normalidade (Zar 2010).

393
Considerando que estas amostras no so balanceadas (Tabela 7.2) e que a quantidade de dados
muito diferente entre as reas, no adequado seguir com a ANOVA, violando os
pressupostos, e testar os resduos. Neste caso, os dados foram transformados (log) e novamente
testados, resultando ainda em varincias diferentes (P = 0,001) (Figura 7.9). Deste modo, a
comparao entre as razes para as seis reas requereu um teste no paramtrico a ser realizado
com os dados brutos, no caso o teste de Kruskal Wallis (Siegel e Castellan 2006). A aplicao
do teste para a razo OH/OL de M. hubbsi resultou em H = 9,398 e P = 0,094, no havendo
diferenas significativas neste ndice entre as seis reas. Em termos analticos, sabendo que h
dois estoques (Vaz-dos-Santos e Schwingel 2015), observando o valor de P, prximo a 0,05,
considerando que as amostras foram desbalanceadas e que foi utilizado um nico critrio (razo
OH/OL), deve-se destacar que este resultado, isolado, no permite um diagnstico sobre o tema
(variao geogrfica), mas apenas sobre o carter analisado.

Tabela 7.2 Resultado do teste de normalidade de DAgostino Pearson (K2) para a razo
OH/OL de Merlucccius hubbsi para seis reas do Atlntico Sudoeste entre 22 e 34S (n =
nmero de observaes, df = graus de liberdade, P = probabilidade) (Fonte: LABESC-UFPR).

rea
1 2 3 4 5 6
n 110 202 42 81 92 21
K2 1,537 2,705 5,720 1,732 4,141 0,441
df 2 2 2 2 2 2
P 0,464 0,259 0,057 0,421 0,126 0,802

3
rea

0.010 0.015 0.020 0.025 0.030 0.035 0.040 0.045

intervalo de confiana de Bonferroni para os desvios padres

Figura 7.9 Mdia e intervalo de confiana na comparao entre as varincias atravs do teste
de Bartlett para a razo OH/OL de Merlucccius hubbsi para seis reas do Atlntico Sudoeste
entre 22 e 34S (Fonte: LABESC-UFPR).

394
7.4 Concluses

No presente texto algumas tcnicas quantitativas foram apresentadas aplicadas ao estudo de

otlitos. Cabe ressaltar que o escopo das anlises aqui comentadas considerou a fase
acadmica/profissional a qual esta obra direcionada, ou seja, estudos na graduao e/ou ps-
graduao inicial. Eventuais dificuldades na compreenso dos contedos apresentados indicam
a necessidade de rever e consolidar conhecimentos bsicos que so pr-requisitos para o
entendimento deste texto. Recomenda-se que, sempre que possvel, durante o aprendizado das
diferentes tcnicas, que as mesmas sejam realizadas etapa por etapa, mesmo que os programas
de computador as executem diretamente, para afirmao de conceitos.

Agradecimentos

A habilidade e legitimidade para escrever este captulo, ainda que simples, deve-se aqueles que
me ensinaram e encorajaram nos mtodos quantitativos, em diferentes momentos e etapas, os
professores78 Dr. Cerino Everton de Avellar (UFSCar), Dr. Jos Roberto Verani (UFSCar), Dr.
Edison Pereira dos Santos (IP), Dr. Antnio Olinto vila-da-Silva (IP), MSc. Marcos Antnio
Santos de Jesus (UNISANTA), MSc. Ins Esteves (UNISANTA), Dra. Lisbeth Kaiserlian
Cordani (IME-USP), Dr. Miguel Petrere Jnior (UNESP), Dr. Jean Louis Valentin (UFRJ) e Dr.
Anbal Aubone (INIDEP).

78
Ordem cronolgica.

395
396
8. BASES QUMICAS PARA O ESTUDO DE CORPOS DGUA

Alicia Fernndez Cirelli

Sumrio
8.1 Propiedades da gua e dos corpos dgua...........................................................................397
8.2 Qualidade, quantidade e qumica........................................................................................398
8.3 Dissoluo de gases na gua...............................................................................................399
8.4 Equilibrio entre duas fases..................................................................................................400
8.5 Composio das guas naturais: ons majoritrios, minoritrios e elementos trao...........402
8.6 Processos geoqumicps: o padro de Gibbs........................................................................404
8.7 Equilbrio cido-base emm guas naturais..........................................................................405
8.7.1 Equilbrios cido-base: o sistema dixido de carbono-carbonato....................................406
8.7.2 Equilbrio entre o carbonato de clcio e a gua................................................................406
8.7.3 Equilbrio entre o carbonato de clcio e o dixido de carbono atmosfrico com a gua.409
8.7.4 Alcalinidade, basicidade, acidez e dureza........................................................................410
8.8 Amostragem, anliss, enterpretao e confiabilidade de dados qumicos...........................412
8.8.1 Amostragem.....................................................................................................................412
8.8.2 Qualidade das medies qumicas....................................................................................413
8.8.3 Balano inico..................................................................................................................414
8.8.4 ndices de saturao.........................................................................................................414
8.9 Concluses..........................................................................................................................418

8.1 Propiedades da gua e dos corpos dgua

A gua a fonte e o sustento da vida, funciona como elemento regulador do clima do mundo e
com sua fora extraordinria modela a Terra. A gua possui propriedades nicas que a tornam
essencial para a vida (Fernndez Cirelli 2000):
- um material flexvel, mas no muito compressvel;
- tem propriedades fsico-qumicas incomuns. um solvente extraordinrio para a variedade de
substncias que pode dissolver;
- tem propriedades eletroqumicas que a tornam um reagente ideal em muitos processos
metablicos;
- tem uma grande capacidade calorfica. Um grama de gua absorve uma caloria para elevar sua
temperatura em 1C. Devido a sua elevada capacidade calorfica , depende de uma grande
quantidade de calor para alterar a temperatura de um corpo dgua; portanto, este corpo dgua

397
pode ter um efeito estabilizador sobre a temperatura de reas geogrficas prximas. Esta
propriedade impede mudanas bruscas de temperatura dos corpos dgua, protegendo os
organismos aquticos de choques trmicos. O teor de gua das clulas de aproximadamente
80%, protegendo as molculas dissolvidas e contidas nelas;
- quando congelada, se expande (na verdade, a expanso comea a 4C), permitindo que o gelo
flutue. Se isso no acontecesse, ficaria debaixo dgua e no poderia derreter to facilmente;
- tem a capacidade de mover-se e, assim, moldar paisagens e afetar o clima.

Os oceanos representam cerca de 97,5% da gua de toda a Terra, sendo apenas 2,5% gua doce.
As geleiras, a neve e o gelo das calotas polares so responsveis por quase 80% da gua doce, a
gua subterrnea corresponde a 19% e as guas superficiais, facilmente acessveis, apenas 1%.
Esta baixa quantidade de gua na superfcie se encontra principalmente em lagos (52%) e zonas
midas (38%).

8.2 Qualidade, quantidade e qumica

Os processos qumicos so encontrados em tudo que nos rodeia e esto presentes em nosso
planeta desde o incio de sua existncia. Nos ltimos tempos, o homem e suas atividades se
tornaram fatores intrnsecos ao equilbrio natural do meio ambiente. O estudo detalhado dos
processos qumicos vital para diagnosticar a integridade ou a deteriorao dos diferentes
sistemas, evitar danos e desenvolver solues.
A Qumica Ambiental consiste no estudo de: fontes, reaes, transportes, efeitos e destinos dos
constituintes qumicos nos trs meios, gua, ar e solo. Os problemas qumicos ambientais so
complexos e a anlise qumica exige baixos limiares de deteco (Colin 2001).
O estudo da gua ou Hidrologia dividido em duas reas: a Limnologia, que estuda as
caractersticas fsicas, qumicas, geolgicas e biolgicas da gua doce e; a Oceanografia, que
estuda estas mesmas caractersticas, mas dos oceanos.
Os corpos d'gua tm diferentes constituintes qumicos em soluo. Quando uma substncia,
que pode ser slida, lquida ou gasosa, denominada soluto, se distribui de forma homognea em
um lquido, obtida uma soluo. A medida de quantidade de determinada substncia (seja de
origem natural ou um poluente) presente em guas naturais denominada concentrao. A
concentrao pode ser expressa como porcentagens relativas de massa. Este tipo de informao
tambm pode ser dada como massa por unidade de volume, como por exemplo, miligramas por
litro (mg.L-1). Considerando que 1 L de gua tem a massa de 1.000 g e que a massa de soluto
desprezvel, uma concentrao de 2 mg.L-1 passa a 2 mg/1000 g, isto , 2 ppm ou partes por
milho:

398
 2 mg.L-1 = 2 mg/1.000 g = 2 mg/1.000.000 mg = 2 ppm

Outra forma comum de expressar a concentrao de uma soluo a concentrao em

quantidade de matria (mol.L-1)79, definida como o nmero de mol de um soluto em um litro de
soluo:

O nmero de mol calculado dividindo-se a massa do soluto por sua massa molecular. Pode-se
tambm expressar a concentrao de uma soluo de acordo com o nmero de equivalentes
grama de soluto por litro de soluo, o que conhecido como normalidade (N), atualmente
pouco utilizado. Analogamente ao nmero de mol, o nmero de equivalentes grama definido
como a massa molecular de soluto dividida pelo nmero de eltrons transferidos. O nmero de
eltrons transferidos de uma substncia varia de acordo com o comportamento analisado (redox,
cido-base).
Um caso particular de expressar a concentrao de um constituinte qumico a concentrao de
ons de hidrognio. De acordo com a definio de Brnsted-Lowry, um cido uma substncia
que libera ons H+ em soluo aquosa, enquanto uma base uma substncia que os recebe. Uma
vez que as concentraes em quantidade de matria dos prtons ([H+]) variam em diversas
ordens de grandeza, conveniente utilizar um parmetro mais facilmente aplicvel, o pH,
definido como:

pH = - log [H+]

8.3 Dissoluo de gases na gua

Os gases dissolvidos nos corpos d'gua tm diferentes propores e composio, predominando

os gases atmosfricos. Existem dois gases que so cruciais para o desenvolvimento da vida em
sistemas aquticos, o oxignio (O2) e o dixido de carbono (CO2).
O oxignio dissolvido provm de duas fontes possveis: a produo fotossinttica de algas e a
oxigenao do sistema pelo contato com o ar. A primeira dessas fontes no muito
significativa, porque sua contribuio pequena. Alm disso, quando as algas morrem, sua
degradao consome oxignio em uma proporo muito maior do que a fornecida. A
solubilidade do oxignio na gua est relacionada concentrao mxima obtida em condies
de equilbrio, podendo ser calculada atravs do coeficiente de distribuio de Henry (KH). A lei

79
Anteriormente referida como Molaridade e calculada como mol de soluto/mol de soluo.

399
de Henry estabelece que, a uma temperatura constante, a solubilidade de um gs em um lquido
proporcional presso parcial do gs em contato com o lquido. A solubilidade dos gases
diminui com o aumento da temperatura.

[O2] gua = KHpO2

Se representarmos a matria orgnica como [CH2O], sua degradao pelo oxignio pode ser
formulada como:

[CH2O] + O2 ' CO2 + H2O

Nesta situao, h diminuio dos nveis de oxignio num curso de gua, o que pode causar
mortandades de peixes.
Ao contrrio do oxignio ou de nitrognio atmosfrico, o clculo da solubilidade do dixido de
carbono na gua no simples devido s caractersticas cidas, o que faz com que interaja com
a gua de maneira complexa. A proporo de CO2 na atmosfera de apenas 0,035%, por isso, se
considerarmos a gua pura em equilbrio com o ar, a quantidade de CO2 dissolvido realmente
baixa. No entanto, em sistemas naturais h outros fatores que interferem no CO2 dissolvido na
gua, como por exemplo, a produo de CO2 por algas durante seus processos metablicos na
ausncia de luz, o CO2 produzido como resultado do processo de decomposio da matria
orgnica. A presena de carbonatos tambm altera a concentrao de CO2 dissolvido:

CO2 (gua) ' CO2 (atmosfera) MCO3 ' M2+ + CO32-

Alm disso, a presena de CO2 na gua de percolao atravs do solo permite que a dissoluo
do carbonato de clcio ao passar por pedras calcrias de acordo com a seguinte reao:

CaCO3 (s) + CO2 (aq) + H2O ' Ca2+ + 2 HCO3-

Sendo este o processo pelo qual se formam as cavernas calcrias.

8.4 Equilibrio entre duas fases

As constantes de equilbrio (termodinmicas) so utilizadas no s para tratar o equilbrio das

substncias em soluo ou para descrever reaes em um meio fluido, mas tambm para estimar
se distribuem diferentes substncias entre duas fases, que podem ser: (i) uma fase slida e uma
soluo (equilbrio de solubilidade); (ii) duas fases lquidas (equilbrio de distribuio entre dois

400
lquidos, por exemplo, gua e um lquido orgnico), (iii) uma fase lquida e uma gasosa
(equilbrio de distribuio entre um gs e um lquido, por exemplo, sistemas do tipo
gua/atmosfera). H tambm a distribuio entre os gases e as fases slidas, determinada por
processos de adsoro superficial (Stumm e Morgan 1995).
No caso (i), quando se tem um slido que se dissolve em uma soluo aquosa, esta dissoluo
continuar at certo ponto (saturao) no qual o slido no se dissolve mais. Suponha o seguinte
caso:

CaCO3 (s) ' Ca2+ + CO32-

A expresso da constante de equilbrio expressa como:

[Ca2+] [CO32-] = Kps

Onde Kps o produto de solubilidade.

Situaes descritas no item (ii) se aplicam, por exemplo, em derrames de substncias orgnicas
em cursos d'gua. O equilbrio que se estabelece nestas situaes o seguinte:

[X] (aq) ' [X] (org)

e se descreve mediante a seguinte lei de distribuio, na qual a constante chamada de

coeficiente de distribuio ou coeficiente de partio:

[X] (org) / [X] (aq) = Kd

A distribuio de compostos orgnicos apolares entre a gua e slidos naturais ou organismos

pode ser considerada um processo de partio entre a fase aquosa e a matria orgnica no solo
ou na biota.
J em 1900 os pesquisadores que estudavam o comportamento de compostos apolares
descobriram que poderiam usar solventes, como n-octanol, como um "modelo" para simular
organismos ou partes de organismos em relao ao acmulo de frmacos. Apesar da partio
entre uma soluo aquosa e estes solventes no ser idntica ao que acontece em organismos,
diretamente proporcional, ou seja, uma maior acumulao no organismo corresponde a uma
partio mais favorvel no solvente orgnico. Mais recentemente, os qumicos ambientais
encontraram uma relao entre o hmus do solo e outros compostos orgnicos naturais. O
coeficiente de partio octanol-gua constante (KoW) usado:

401
 KoW = Co / Cw
Onde:
Co = concentrao de um determinado soluto determinado no octanol;
Cw = concentrao de um determinado soluto na gua.

A biota aqutica no s degrada os contaminantes qumicos, mas tambm os acumula. Um dos

modelos utilizado para medir a bioconcentrao80 o de partio, que parte do pressuposto de
um estado de equilbrio entre o sistema aquoso e o organismo vivo. Esta suposio vlida para
os compostos hidrofbicos que so trocados entre o organismo e a gua mais rapidamente do
que a velocidade com a qual so excretados ou metabolizados. Um organismo como um peixe
"modelado" como um contingente de gua e leo para podermos determinar o valor da
bioconcentrao atravs do KoW. Esta constante, KoW, est relacionada toxicidade que um
contaminante pode ter em um organismo (LD50).
Os casos do item (iii) so de grande importncia, pois correspondem aos processos chave que
afetam o transporte de muitos compostos qumicos e sua transferncia entre a atmosfera e os
corpos dgua. A constante de distribuio entre estes dois meios a constante de Henry, uma
vez que a solubilidade de gases em gua segue a lei de Henry sempre que no h reaes
qumicas. A temperatura e a salinidade so dois fatores que exercem importante influncia no
valor de KH de Henry em um dado sistema. O aumento da concentrao salina pode reduzir a
concentrao de uma determinada substncia, fazendo com que o valor de KH diminua at o
fator 2 entre a gua destilada e a gua do mar.

8.5 Composio das guas naturais: ons majoritrios, minoritrios e elementos trao

A salinidade total das guas continentais de superfcie determinada pela presena dos ctions
sdio, clcio, magnsio e potssio e pelos nions cloreto, sulfato e bicarbonato-carbonato. A
mdia mundial da salinidade de guas continentais de cerca de 120 mg/L, apesar da variao
entre continentes (Livingstone 1963), e se deve principalmente a processos de intemperismo das
rochas das bacias de drenagem, da precipitao atmosfrica e do equilbrio precipitao-
evaporao. Por sua vez, o intemperismo decorre principalmente de processos de dissoluo,
hidrlise, oxirreduo e formao de complexos com substncias orgnicas ou inorgnicas
(Kilham 1990).

80
Segundo Montone (2015), bioconcentrao ocorre quando as substncias so absorvidas pelos organismos em
concentraes mais elevadas do que o ambiente circundante. Biomagnificao ocorre quando h acmulo
progressivo de substncias de um nvel trfico para outro ao longo da teia alimentar. Bioacumulao o aumento da
concentrao de uma substncia nos tecidos ou rgos dos organismos.

402
As relaes de equivalncia entre os principais ons na ordem mundial (Tabela 8.1) tendem a
ser, Ca2+ > Mg2+ > Na+ > K+ e HCO3- > SO42- > Cl-, embora em regies costeiras estas relaes
possam variar significativamente. As concentraes de K+ e Cl- so relativamente conservativas,
sofrendo pequenas variaes devido a mudanas ambientais ou por seu uso por seres vivos
(Manaham 1991a,b). No entanto, as concentraes de HCO3-, SO42- e Ca2+ dependem de
processos de precipitao-dissoluo, do metabolismo microbiano e de mudanas climticas.
Alguns elementos trao como o silcio, o nitrognio, o fsforo e o ferro so de grande
importncia do ponto de vista biolgico, apesar de no afetarem significativamente a salinidade
de um corpo de gua (Wetzel 1983). A velocidade dos processos biolgicos, em contraste com
os processos inorgnicos, faz com que o tempo de residncia destes nutrientes nos corpos
dgua seja muito menor do que a dos ons responsveis pela salinidade.
Em geral, um elemento considerado minoritrio no meio natural quando sua concentrao
varia entre 1 e 0,01%, enquanto que uma elemento trao aquele cuja concentrao inferior a
0,01% (Stumm 1995). O termo elemento trao tem sido utilizado de forma descuidada na
literatura cientfica, com diferentes significados de acordo com o tema em questo: em geral,
designam um conjunto de elementos presentes na natureza em concentraes mnimas ou so
conceituados como aqueles utilizados pelos organismos em pequenas quantidades, mas que so
essenciais para sua nutrio (apesar de muitas vezes no se conhecer suas funes fisiolgicas).
Os elementos trao mais estudados foram os dos solos, por serem necessrios para a nutrio
das plantas: B, Cu, Fe, Mn, Mo e Zn. Da mesma forma os elementos mais estudados em animais
so As, Cu, Co, Fe, Mn, Mo, Zn, Cr, C, Ni, Se, Sn e V.

Tabela 8.1 Elementos majoritrios em diferentes corpos dgua (STD = slidos totais
dissolvidos).
Ca Mg Na K Cl SO4 HCO3 STD
Rios
ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm ppm
Amrica do Norte
Mississippi 34,0 8,9 11,0 2,8 10,3 25,5 116,0 208,5
Mackenzie 33,0 10,4 7,0 1,1 8,9 36,1 111,0 207,5
Columbia 19,0 5,1 6,2 1,6 3,5 17,1 76,0 128,5
Colorado 83,0 24,0 95,0 5,0 82,0 270,0 135,0 694,0
Grande 109,0 24,0 117,0 6,7 171,0 238,0 183,0 848,7
Europa
Danbio 49,0 9,0 9,0 1,0 19,5 24,0 190,0 301,5
Rhin(superior) 41,0 7,2 1,4 1,2 1,1 36,0 114,0 201,9
Amrica do Sul
Amazonas(inferior) 5,2 1,0 1,5 0,8 1,1 1,7 20,0 31,3
Orinoco 3,3 1,0 1,5 0,65 2,9 3,4 11,0 23,75
Paran 5,4 2,4 5,5 1,8 5,9 3,2 31,0 55,2

403
 frica
Congo 2,4 1,3 1,7 1,1 2,9 3,0 11,0 23,4
Nger 4,1 2,6 3,5 2,4 1,3 1,0 36,0 50,9
Nilo 25,0 7,0 17,0 4,0 7,7 9,0 134,0 203,7
sia
Yangtz 45,0 6,4 4,1 1,2 4,1 17,9 148,0 226,7
Mekong 14,2 3,2 3,6 2,0 5,3 3,8 58,0 90,1
Ganges 24,5 5,0 4,9 3,1 3,4 8,5 105,0 154,4
Mdia mundial 14,7 3,7 7,2 1,4 8,3 11,5 53,0 99,8

8.6 Processos geoqumicps: o padro de Gibbs

Gibbs (1970), estudando a salinidade das guas superficiais do mundo, concluiu que os
principais processos que determinam sua composio qumica so: (i) intemperismo de rochas
das bacias de drenagem, (ii) precipitao atmosfrica e (iii) e o balano precipitao-
evaporao. Gibbs obteve um diagrama de bumerangue (Figura 8.1) para representar a variao
da proporo em massa Na+/(Na++Ca2+) no eixo x em funo dos slidos totais dissolvidos
(STD, em ppm) no eixo y.
Gibbs

5
10
STD

4
10
EV-PR
3
10

2
CR
10

Pr A
10

0.1 0.3 0.5 0.7 0.9

+ + 2+
Na / (Na + Ca )

Figura 8.1 Diagrama de Gibbs (CR = composio das rochas, Ev-Pr = evaporao-
precipitao, PR A = precipitao atmosfrica).

Qualquer corpo dgua superficial cuja qumica influenciada pela chuva estar na rea inferior
direita do diagrama de Gibbs, apresentando baixos valores de STD e alta relao

404
Na+/(Na++Ca2+). Em geral, pode-se dizer que correspondem a reas de alta pluviosidade e relevo
baixo, onde a contribuio do intemperismo das rochas no importante.
Quando o intemperismo predomina na determinao da composio qumica das guas, os
elementos que interferem diretamente nesta composio so o clima, a geomorfologia, a biota e
a composio do material de origem. Geralmente, predominam ons clcio e bicarbonato, que
apresentam valores mdios de STD e ocupam aproximadamente a primeira metade o eixo
Na+/(Na++Ca2+), na regio central do diagrama de Gibbs (Conzonno 2010).
Apesar de termos tratado os dois processos anteriores separadamente, deve-se ter claro que eles
no se excluem mutuamente e que muitos corpos dgua superficial tem sua composio
qumica entre os dois extremos do diagrama. Portanto, mais realista considerar a composio
qumica da gua determinada pelos processos de intemperismo e precipitao atmosfrica como
os extremos de um gradiente.
O terceiro mecanismo de controle da qumica das guas superficiais a evaporao-
cristalizao. Este processo o mais significativo em zonas ridas e quentes, onde a evaporao
supera a precipitao atmosfrica e a composio da gua tende para a composio da gua do
mar. A composio qumica de corpos dgua formados por este processo se localiza canto
superior direito do diagrama de Gibbs, formando uma srie contnua entre a composio
qumica das guas no qual o intemperismo predomina e a composio qumica da gua do mar.
Embora a gua do mar seja o elemento extremo desta srie, deve-se notar que a simples
evaporao e a precipitao do carbonato de clcio no so suficientes para converter as guas
doces de rios e lagos em gua do mar, pois outros processos interferem nas propores dos
vrios ons presentes. No entanto, dado que a gua da chuva vem da gua do mar, no
surpreendente encontrar a mesma relao Na+/(Na++Ca2+), apesar dos diferentes valores de
STD.

8.7 Equilbrio cido-base emm guas naturais

Os processos qumicos normais que ocorrem na gua decorrem, principalmente, das condies
excepcionais deste fluido, permitindo a compreenso das circunstncias que levam
contaminao de corpos d'gua. Os fenmenos qumicos incluem o equilbrio cido-base, a
solubilizao-precipitao, a oxirreduo, a formao de ons complexos e os processos de
partio. Apesar destes processos serem usualmente analisados sob o ponto de vista
termodinmico, sua aplicao ambiental deve considerar tambm o fator cintico, uma vez que
as velocidades das reaes so fundamentais na qumica aqutica. Alm disso, a existncia de
vida nos sistemas estudados torna os processos biolgicos um elemento chave nestes estudos.
As guas naturais contm ons dissolvidos e, como dito anteriormente, a salinidade mdia global
das guas interiores de cerca de 120 mg/L, com pH raramente igual a 7, o valor esperado para

405
a gua pura. O sistema dixido de carbono-carbonato determina os processos cido-base que
ocorrem nos sistemas aquosos.

8.7.1 Equilbrios cido-base: o sistema dixido de carbono-carbonato

A qumica do equilbrio cido-base de muitos ecossistemas aquticos dominada pela interao

entre o on carbonato CO32-, uma base moderadamente forte, com o cido carbnico, H2CO3, um
cido fraco. Este cido formado pela dissoluo do dixido de carbono atmosfrico na gua,
normalmente, h um equilbrio entre o gs e o cido na gua:

CO2 (g) + H2O (aq) ' H2CO3 (aq)

Reao (1)

A maior parte do dixido de carbono dissolvido existe como CO2 (aq) em vez de H2CO3 (aq),
mas na prtica se juntam as duas formas em uma s, representadas pela ltima.
O cido carbnico do meio aqutico est tambm em equilbrio com o on bicarbonato (ou
hidrogeno carbonato), HCO3- e com o on hidrognio:

H2CO3 ' H+ + HCO3-

Reao (2)

As rochas calcrias so compostos principalmente por carbonato de clcio, CaCO3, que

possuem baixa dissoluo em contato com a gua:

CaCO3 ' Ca2+ + CO32-

Reao (3)

O on carbonato atua como uma base, produzindo ons bicarbonato e hidrxido na gua:

CO32- + H2O ' HCO3- + OH-

Reao (4)

Estas reaes ocorrem no sistema natural no ar, na gua e nas rochas.

8.7.2 Equilbrio entre o carbonato de clcio e a gua

Para uma compreenso qualitativa deste sistema complexo, consideremos em primeiro lugar o
efeito do on carbonato, tomando como exemplo um reservatrio de gua em equilbrio com o

406
excesso de carbonato de clcio slido e no qual todas as outras reaes importantes podem ser
desconsideradas. O nico processo de interesse o da reao 3. A constante de equilbrio para
este processo, que envolve a dissoluo de um sal pouco solvel em gua, o produto de
solubilidade (Kps), que est relacionado com a concentrao dos ons atravs a seguinte equao:

Kps = [Ca2+][CO32-]

Para o CaCO3, a 25C, o valor numrico de Kps de 4,6 x 10-9, onde [...] se refere s
concentraes em quantidade de matria. De acordo com a estequiometria da reao 3, so
produzidos tanto ons clcio como carbonato e, neste sistema simplificado a concentrao de
ambos os ons igual a S, a solubilidade do sal:

S = solubilidade do CaCO3 = [Ca2+][CO32-]

Depois de substituir S pelas concentraes dos ons na equao de Kps, se obtm:

S2 = 4,6 x 10-9

sendo o valor da solubilidade:

S = 6,8 x 10-5 mol.L-1

Este o valor da solubilidade, assumindo que as outras reaes so desprezveis.

De acordo com a reao de 4, o on carbonato dissolvido atua como base na gua; a constante de
equilbrio deste processo Kb:

Kb (CO32-) = [HCO3-] [OH-] / [CO32-]

O equilbrio nesta reao se encontra deslocado para a direita em solues que no so muito
alcalinas, sendo possvel obter uma aproximao do efeito resultante da ocorrncia simultnea
das reaes 3 e 4. O processo global dado por:

CaCO3 (s) + H2O (aq) ' Ca2+ + HCO3- + OH-

Reao (5)

Assim, a dissoluo de carbonato de clcio na gua neutra resulta em ons clcio, bicarbonato e
hidrxido.

407
A soma de vrias reaes resulta em uma combinao com uma constante de equilbrio K que
o produto das constantes de equilbrio de cada um dos processos individuais. Assim, a reao 5
representa a soma de reaes 3 e 4 e a sua constante de equilbrio deve ser igual ao produto das
constantes de equilbrio das reaes 3 e 4, KpsKb. Dado que Ka = 4,7 x 10-11 para o HCO3- e
considerando que para qualquer par cido-base conjugado como HCO3- e CO32-,

KaKb = Kw = 1,0 x 10-14

Segue-se para a base conjugada CO32- obtendo-se,

Kb (CO32-) = Kw / Ka (HCO3-)

Sendo

Kb = 1,0 x 10-14 / (4,7 x 10-11) = 2,1 x 10-4

Desta forma, como K5 para a reao global 5 dado por KpsKb, seus valores so

4,6 x 10-9 x 2,1 x 10-4 = 9,7 x 10-13

A constante de equilbrio para a reao 5 se relaciona com as concentraes atravs da equao:

K5 = [Ca2+] [HCO3-] [OH-]

Se considerarmos que a aproximao da reao 5 o nico processo de relevncia no sistema,

ento com sua estequiometria se obtm uma nova expresso para a solubilidade do CaCO3:

S = [Ca2+] = [HCO3-] = [OH-]

Substituindo S pelas concentraes, se obtm

S3 = 9,7 x 10-13
S = 9,9 x 10-5

Assim, a solubilidade calculada do CaCO3 9,9 x 10-5 mol.L-1, que contrasta com o valor mais
baixo encontrado de 6,8 x 10-5 mol.L-1 obtido quando se ignora a reao do on carbonato. A
solubilidade do CaCO3 maior do que a estimada em funo unicamente da reao 3, uma vez

408
que grande parte do on carbonato produzido desaparece, por reagir com molculas de gua. Em
outras palavras, a reao de equilbrio 3 se desloca para a direita, j que uma vez que grande
parte de seu produto reage depois (reao 4).
Nos clculos anteriores, se utilizou a aproximao de uma reao simples (5) para representar o
sistema de duas reaes. Alternativamente, o mesmo resultado pode ser obtido atravs da
aplicao de um processo iterativo para resolver equaes algbricas envolvidas nas reaes
originais 3 e 4, em vez de combin-las (Tabela 8.2). A soluo saturada de carbonato de clcio
moderadamente alcalina (pH = 9,9).

Tabla 8.2 Concentraes inicas calculadas para os sistemas aquosos em equilbrio.

CaCO3 CaCO3
In CO2 e CaCO3
Equao simples Clculo iterativo
[HCO3-] 9,9 x 10-5 mol.L-1 8,8 x 10-5 mol.L-1 1,0 x 10-3 mol.L-1
[CO32-] - 3,7 x 10-5 mol.L-1 9,0 x 10-6 mol.L-1
[Ca2+] 9,9 x 10-5 mol.L-1 1,25 x 10-4 mol.L-1 5,1 x 10-4 mol.L-1
[OH-] 9,9 x 10-5 mol.L-1 8,8 x 10-5 mol.L-1 1,9 x 10-6 mol.L-1
[H+] 1,0 x 10-10 mol.L-1 1,1 x 10-10 mol.L-1 5,3 x 10-9 mol.L-1
pH 10,0 9,9 8,3

8.7.3 Equilbrio entre o carbonato de clcio e o dixido de carbono atmosfrico com a gua

Nossa aproximao no considera outras espcies importantes de carbono na gua, o dixido de

carbono e o cido carbnico e as reaes que os envolvem. A gua pura em equilbrio com o
dixido de carbono atmosfrico ligeiramente cida por causa destes dois processos. Estas
reaes sero consideradas agora no contexto de um reservatrio de gua que est, tambm, em
equilbrio com o carbonato de clcio slido, isto , um sistema de trs fases.
A reao 2 fornece uma outra fonte de on bicarbonato, ento, pelo princpio de Le Chatelier, a
produo de bicarbonato a partir da reao entre o on carbonato e a gua deveria ter sido
suprimida. No entanto, uma considerao ainda mais importante que a reao 2 produz on
hidrognio, que se combina com on hidrxido produzido na reao 4 pela interao do on
carbonato com a gua:

H+ + OH- ' H2O

Reao (6)

409
Em consequncia, o equilbrio de ambas as reaes que produzem on bicarbonato se deslocam
para a direita, devido ao desaparecimento de um dos seus produtos por meio da reao acima.
Se as reaes 1 a 4 mais a 6 so adicionadas, se obtm a seguinte reao:

CaCO3 (s) + CO2 (g) + H2O ' Ca2+ + 2 HCO3-

Reao (7)

Em outras palavras, combinando quantidades equimolares de carbonato de clcio e dixido de

carbono atmosfrico se obtm uma soluo de bicarbonato de clcio, sem produo ou consumo
aparente de acidez ou alcalinidade. As guas naturais em que este processo global ocorre podem
ser consideradas como o local onde h uma valorao gigante de um cido que se origina do
CO2 atmosfrico com uma base que se forma a partir do on carbonato das rochas. Embora seja
uma aproximao, este o processo dominante que permite estimar a dissoluo do CaCO3 e do
CO2 quando ambos esto presentes.
A partir destes equilbrios pode-se calcular o valor da concentrao do on hidrognio,
resultando em um pH de 8,3, ligeiramente alcalino para guas de rios e lagos a 25C, cujo pH
determinado pela saturao de CO2 e CaCO3. Geralmente os valores de pH de guas calcrias se
encontram entre 7 e 9, semelhantemente ao valor calculado. Devido pequena quantidade de
bicarbonato nas guas no-calcrias, seus valores de pH so geralmente prximos a 7.

8.7.4 Alcalinidade, basicidade, acidez e dureza

A alcalinidade de uma soluo aquosa definida como sua capacidade de aceitar prtons. As
guas alcalinas tem alto pH e nveis elevados de slidos dissolvidos, tornando-as
particularmente inadequadas para utilizao em aquecedores, processamento de alimentos, etc.
As principais espcies qumicas que contribuem para a alcalinidade da gua so o bicarbonato, o
carbonato e o hidrxido:

HCO3- + H+ ' CO2 + H2O

CO32- + H+ ' HCO3-
OH- + H+ ' H2O

Existem tambm outras espcies que contribuem para a alcalinidade, mas em menor grau, tais
como as bases conjugadas de cidos tais como o fosfrico, o silcico, o brico e cidos
orgnicos.
Dois tipos de alcalinidade so definidos, de acordo com o ponto final de titulao obtidos da
mesma:

410
(i) Determinao da alcalinidade com a fenolftalena, que utiliza este indicador para determinar
o ponto final, e, portanto, um pH no qual os ons hidrxido se neutralizam e o carbonato se
converte em bicarbonato.
(ii) Determinao da alcalinidade total, que utiliza como o indicador o alaranjado de metila e,
por conseguinte, se alcana um pH no qual tanto o carbonato como o bicarbonato se convertem
em CO2.

A principal diferena entre a basicidade e a alcalinidade envolve a constante de dissociao das

bases envolvidas: enquanto uma alta basicidade est associada a um elevado valor de pH, uma
alta alcalinidade est associada com uma alta capacidade de aceitar H+. Por exemplo, uma
soluo de NaOH de concentrao de 10-3 mol.L-1 tem um pH final de 11, ao passo que uma
soluo 100 vezes mais concentrada de HCO3- (10-1 mol.L-1) tem um pH de apenas 8,34;
portanto, a soluo de NaOH mais bsica do que a de HCO3-. No entanto, quando utilizadas
para neutralizar um cido, a soluo de NaOH s neutralizar 10-3 equivalentes de cido,
enquanto que a de HCO3- neutralizar uma quantidade 100 vezes maior. Portanto, a soluo
HCO3- mais alcalina do que a de NaOH. A alcalinidade atua como um elemento regulador da
soluo de pH (sistema tampo), funcionando tambm como um reservatrio de carbono
inorgnico, que uma medida da "fertilidade" da gua e de sua capacidade de sustentar a vida.
A dureza de uma amostra de gua est associada com a concentrao de ons clcio e magnsio,
principalmente, mas tambm presena de ferro (II), em alguns casos. Quimicamente, a dureza
definida como:

dureza = [Ca2+] + [Mg2+]

Tradicionalmente, a dureza no expressa em concentrao de quantidade de ons, mas sim

como a massa em miligramas (por litro) de carbonato de clcio que contm o mesmo nmero de
ons bivalentes (+2). Por exemplo, uma amostra de gua contendo um total de 0,0010 mol de
Ca2+ + Mg2+ por litro, tem um valor de dureza de 100 mg de CaCO3, uma vez que a massa molar
de CaCO3 de 100 gramas e, consequentemente, 0,0010 mol tem a massa de 0,1 g ou 100 mg.
A manifestao mais bvia da dureza da gua o corte de sabo, o que causado pela
precipitao de sais insolveis dos cidos graxos. Uma maneira de eliminar a dureza da gua a
utilizao de resinas de troca inica ou por ebulio da gua, formando um depsito de
carbonato devido ao deslocamento para a direita do seguinte equilbrio:

Ca2+ + 2HCO3- ' CaCO3 (s) + CO2 (g) + H2O

Com o aumento da temperatura, a solubilidade do CO2 na gua diminui e ele se perde como gs,

411
precipitando o clcio como carbonato.
A acidez dos sistemas aquosos naturais definida como a capacidade da gua para neutralizar
OH-. As guas cidas so raras, sendo os mais comuns os cidos graxos, as protenas, H2PO4-,
CO2, H2S e metais cidos. A determinao da acidez de uma amostra de gua geralmente
complicada, principalmente pelo fato de que os principais contribuintes (CO2 e H2S) so
volteis. Tambm h a possibilidade de se encontrar cidos minerais livres, como H2SO4 e HCl,
que so comuns em guas poludas por atividades de minerao.
Assim como a alcalinidade, a acidez pode ser determinada utilizando duas tcnicas diferentes: a
acidez total determinada por titulao com uma base at o ponto de viragem da fenolftalena
(ponto final em pH 8,2), enquanto que os cidos minerais livres so titulados at o ponto de
viragem do alaranjado de metila (ponto final em pH 4,3).
Outros contribuintes para a acidez da gua so alguns ons com tendncia de hidratao, como o
alumnio e o ferro. O comportamento cido dos ons aumenta com a carga e diminui com o raio
atmico. Ela ocorre particularmente com aqueles de carga +3:

Al (H2O)63+ Al (H2O)5OH2+ + H+

Algumas solues de uso industrial, como aquelas utilizadas para eliminar a corroso de ao,
contm ctions metlicos cidos.
A tendncia de ons hidratados a se comportarem como cidos tem um grande efeito sobre o
meio aqutico, por exemplo, na drenagem cida de minas:

Fe (H2O)63+ ' Fe (HO)3 (s) + 3H+ + 3 H2O

8.8 Amostragem, anliss, enterpretao e confiabilidade de dados qumicos

Os poluentes qumicos so de a variada natureza e estrutura (Colin 2001, Schwarzembach et al.

1993). Os mtodos para sua determinao esto devidamente padronizados e as metodologias
existentes permitem a sua determinao em nveis vestigiais. No caso de traos inorgnicos, os
mtodos de determinao por absoro atmica ou espectrometria de massas por plasma
acoplado indutivamente (ICP-OES) permitem a deteco de partes por bilho.

8.8.1 Amostragem

A obteno de amostras ou amostragem deve ser representativa de todo o conjunto a ser

medido, ou seja, deve ser estatisticamente representativo, para que os resultados obtidos a partir
destas anlises permitam concluses objetivas e defensveis. Para desenvolver um plano

412
amostral deve-se decidir quando e onde devem ser tomadas as amostras, o que vai depender dos
objetivos do estudo.
Em amostras bidimensionais, deve-se determinar a posio (coordenadas espaciais) e podemos
faz-lo de vrias maneiras: (i) amostragem aleatria: a rea da amostra dividida em reas
mnimas (por exemplo, parcelas de 1m e se sorteiam n posies aleatrias), (ii) transecto: se
define a posio de incio e o comprimento do transecto e, em seguida, se tomam as amostras
sobre o mesmo; (iii) amostragem em duas etapas: a rea de amostragem dividida em
subunidades regulares pela tendncia, do solo ou de outra caracterstica fsica, e em seguida as
amostras so obtidas em cada subunidade; (iv) amostragem de grade (malha amostral): as
amostras so obtidas em intervalos regulares com espaamento fixo.
No caso de amostras tridimensionais, deve-se tambm ter em conta a dimenso vertical, como
o caso da profundidade ou na atmosfera. Este tipo de amostragem tambm apresenta outras
variantes: muitos fenmenos so cclicos e as amostras afetadas por atividades biolgicas
podem apresentar grandes mudanas ao longo do tempo.
O sistema de amostragem pode variar de acordo com a origem da gua. Por exemplo, para
anlises fsico-qumicas, no caso de uma cisterna ou de um tanque, o frasco deve ser submerso a
certa distncia do fundo (50 cm) e da superfcie, longe de arestas ou bordas, de obstculos
naturais ou artificiais, evitando remoo do fundo. No caso de um lago, um rio ou um corpo
dgua natural, deve-se escolher vrios pontos de amostragem e, em cada um, tomar vrias
amostras em diferentes profundidades. No caso do uso de uma bomba, as amostras so tomadas
normalmente aps uma seo de bombeamento contnuo. Se a gua proveniente de uma
torneira, ser necessrio correr gua por pelo menos 10 minutos, tendo-se o cuidado de lavar a
torneira previamente com lcool antes de tomar a amostra. Quanto ao recipiente, tem sido
utilizadas garrafas de plstico, lavadas e enxaguadas trs vezes com gua de amostragem. A
tampa deve ser colocada de modo que no haja bolhas de ar. Em todos os casos, a amostra deve
ser representativa e homognea. As amostras devem ser armazenadas em geladeira (4C) at seu
envio para laboratrio.
Para anlises especiais, tais como poluentes orgnicos ou metais pesados, protocolos especficos
devem ser consultados.

8.8.2 Qualidade das medies qumicas

Em anlises qumicas, a diferena entre o valor obtido na anlise e o seu valor verdadeiro
denominado exatido, enquanto que preciso de uma srie de medies de uma mesma varivel
descreve a diferena entre os valores individuais de cada medio81. Em geral, se reconhecem

81
No confundir com os conceitos estatsticos de acurcia, preciso e exatido, este ltimo a ausncia de erro em uma
medida.

413
dois tipos de erros em anlises qumicas: os erros de preciso ou erros estatsticos, que so
refletidos em flutuaes nos procedimentos analticos e, erros na exatido ou erros sistemticos,
devido a procedimentos errneos ou presena de interferncias durante a anlise. A preciso
pode ser calculada repetindo as anlises de uma mesma amostra, enquanto que a exatido s
pode ser verificada por meio da anlise de padres de referncia ou por comparao dos
resultados de diferentes laboratrios. Quando as concentraes so muito baixas, mesmo
anlises duplicadas podem apresentar flutuaes quando a sensibilidade do mtodo
insuficiente.
Internacionalmente, a qualidade de anlises qumicas e a comparabilidade de resultados
considera os seguintes aspectos:
- utilizao de mtodos analticos validados;
- uso de equipamentos calibrados e com manuteno;
- utilizao de materiais de referncia para a calibrao;
- controle de qualidade eficaz;
- ensaios interlaboratoriais;
- auditorias independentes dos procedimentos;
- pessoal devidamente treinado.

8.8.3 Balano inico

A exatido da anlise de ons majoritrios pode ser estimada a partir da condio de

eletroneutralidade (E.N.), j que a soma das cargas positivas e negativas na gua deve estar em
equilbrio:

. 100
. .%

Onde os ctions e nions esto expressos em meq.L-1.

As somas so calculadas considerando os ctions Na+, K+, Ca2+, Mg2+, e os nions Cl-, SO42-,
HCO3-, CO32- e NO3-. Os valores de E.N. % at 2% so inevitveis na maioria dos laboratrios,
sendo aceitveis valores at 5%.

8.8.4 ndices de saturao

Dada a importncia do equilbrio carbonato / bicarbonato na composio qumica da gua,

fundamental estudar seus graus de saturao em duas fases minerais, calcita e dolomita. As

414
reaes de dissoluo - precipitao de minerais so reaes heterogneas regidas pela constante
de equilbrio Kps. Considere o seguinte reao de dissoluo:

AzBy (s) z Ay+ + y B z+

quando o sistema est em equilbrio (a fase slida com os ons constituintes da mesma), se
define:

Kps = [Ay+] z [Bz+ ]y

onde os colchetes indicam reaes e a atividade das fases slidas considerado unitria. Para
solues diludas, o coeficiente de atividade tende a 1 e a atividade das espcies inicas pode ser
considerada igual concentrao.
Se o sistema no est em equilbrio, se denomina produto inico (PI) o produto das atividades
dos ons:

PI = [Ay+] z [Bz+ ]y

Somente quando o sistema est em equilbrio, Kps = PI, portanto:

PI / Kps = 1
log (PI / Kps) = 0

Quando fora de equilbrio:

PI / Kps >1 ou log (PI / Kps) > 0

PI / Keq <1 ou log (PI / Kps) < 0

Essas relaes so utilizadas para indicar quanto que um determinado sistema est longe do
equilbrio. No entanto, sua utilizao mais comum para descrever o grau de sobressaturao
ou sub-saturao de uma soluo em relao a uma determinada fase slida em particular. O
termo ndice de saturao (IS) normalmente utilizado em relao a reaes de precipitao-
dissoluo de um slido:

IS = og (PI / Kps)

IS > 0 indica que a fase slida tende a precipitar;

415
 IS < 0 indica que a fase slida tende a se dissolver.

Como exemplo de caso, na Tabela 8.3 se observam valores de IS para a calcita e a dolomita
calculados pelo programa WATEQF e os valores de - log pCO2 para a atmosfera em contato
com as guas das lagoas de Encadenadas de Chascoms (Conzonno e Fernandez Cirelli 1997,
Fernndez Cirelli et al. 2000, Miretzky et al. 2000, 2001).

Tabla 8.3 - Valores de IS para a calcita e a dolomita para distintos corpos dgua (i = inverno, v
= vero).
lagoa pPCO2 IS dolomita Ca/Mg IS calcita
Chascoms (i) 2,74 1,38 0,64 0,61
Chascoms (v) 4,13 3,18 0,50 1,36
del Burro (i) 2,89 1,61 0,48 0,66
del Burro (v) 4,13 3,40 0,47 1,44
Chis-Chis (i) 2,91 1,63 0,81 0,78
Chis-Chis (v) 3,34 2,75 1,13 1,30
Las Encadenadas (i) 1,38 -1,52 0,71 -0,82
Las Encadenadas (v) 2,61 2,36 0,56 0,96
La Salada (i) 2,59 0,72 0,48 0,20
La Salada (v) 5,50 3,13 0,36 1,22
La Segunda (i) 3,32 2,07 0,77 0,98
La Segunda (v) 3,33 2,54 0,68 1,10
Yalca (i) 1,92 -1,81 0,72 -0,96
Yalca (v) 3,32 2,21 1,05 1,05
Vitel (i) 2,58 0,73 1,19 0,41
La Viuda (i) 3,97 3,23 0,40 1,38
Adela (i) 2,55 1,29 0,65 0,57

-3,77 -2,69
Os valores de pCO2 foram menores no vero do que no inverno (mdia de 10 e 10 ,
respectivamente), devido a diminuio do CO2(aq) pelo aumento da temperatura no vero (a
solubilidade de gases na gua diminui com o aumento de temperatura) e o consumo de CO2(aq)
pela fotossntese do fitoplncton.
Observa-se que as guas da lagoa so supersaturadas em relao calcita e dolomita tanto no
vero como no inverno, com a exceo das lagoas Yalca (pH 7,28) e Las Encadenadas (pH
6,85) no inverno.
As equaes de equilbrio para o sistema carbonato a 25C so as seguintes:

CO2 (g) ' CO2 (aq) KH = 10-1,5

CO2 (aq) + H2O ' H2CO3 Km = 10-2,8
H2CO3* HCO3- + H+ K1 = 10- 6,3

416
 HCO3- ' CO32- + H+ K2 = 10-10,.3
CaCO3(s) ' CO32- + Ca2+ Kps = 10- 8,34
CaMg(CO3)2(s) ' 2 CO32- + Ca2+ + Mg2+ Kps = 10-17,2

A atmosfera normal contm 10-3,5 atm de CO2 o que, de acordo com a lei de Henry, [CO2 (aq)] =
10-5 mol.L-1.
O programa de computador WATEQ4F resolve simultaneamente todos os equilbrios
mencionados para cada amostra de gua, a partir da composio qumica das mesmas e dos
dados de pH, temperatura e concentrao de O2 dissolvido. Particularmente, o programa: (i)
corrige os valores de Keq para a temperatura da amostra usando a equao de van't Hoff ou um
polinmio emprico; (ii) calcula a especiao ou distribuio de espcies de cada elemento,
resolvendo matrizes que consistem na constante de estabilidade de cada complexo e a equao
de conservao da massa de cada elemento. Por exemplo, a concentrao total de clcio
devida ao Ca2+, CaSO4, CaHCO3+, etc.; (iii) calcula os coeficientes de atividade usando a
equao estendida de Debye-Hckel ou a de Davies para a fora inica;. (iv) calcula as
atividades de todas as espcies presentes; (v) calcula o estado de saturao da soluo em
relao a todas as fases slidas da sua base de dados, que contm todos os elementos que foram
introduzidos para a composio da amostra.
possvel observar na Tabela 8.3 que os valores de IS de calcita no vero so maiores que os do
inverno. No vero, diminui a solubilidade de CO2(g) na gua devido maior temperatura, e a
atividade fotossinttica consume CO2(aq). Estes dois processos resultam em aumento do pH da
gua e tambm da relao [CO32-] / [HCO3-], de modo que a PI excede o Kps do carbonato de
clcio, sendo possvel, do ponto de vista termodinmico, sua precipitao. Para a calcita,
verificou-se que os cidos hmicos adsorvidos sobre a superfcie do carbonato de clcio limitam
o crescimento de ncleos de cristais de carbonato, impedindo sua consequente precipitao
(Suess 1970, Otsuki e Wetzel 1973, Reynolds 1978, Conzonno e Fernandez Cirelli 1995), o que
explica os altos valores de IS obtidos. No inverno, aumenta a solubilidade de CO2(g) na gua e,
portanto, o pH diminui, diminuindo tambm a proporo [CO32-] / [HCO3-]. Apesar disso, as
guas das lagoas so supersaturadas, ou seja, o produto das concentraes de clcio e carbonato
so maiores do que o Kps.
As guas das lagoas tambm esto supersaturadas em relao a dolomita. A dolomita
precipitada a partir de solues em que a relao molar de Ca / Mg 0,3 (Hanshaw et al. 1971).
Observa-se que esta proporo > 0,3 para todas as lagoas e, consequentemente, as condies
no so favorveis para sua precipitao.

417
8.9 Concluses

O estudo dos corpos d'gua e dos processos qumicos que neles ocorrem fundamental para
compreender a dinmica desses ambientes e de suas relaes com os organismos que neles
vivem. A qumica dos corpos dgua constitui um pilar bsico em estudos biolgicos, j que
muitas das mudanas que ocorrem nesses ambientes refletem diretamente nos organismos, no
necessariamente de formas simples e direta, mas por exemplo nos otlitos dos peixes, como
apresentado nos captulos deste livro.

418
9. ESTUDO DO LOCAL DE POSTURA, DISPERSO LARVAL E RECRUTAMENTO
COSTEIRO DO CONGRO EUROPEU (Conger conger) COM RECURSO ANLISE
ESTRUTURAL E QUMICA DOS OTLITOS

Alberto Teodorico Correia

Sumrio
9.1 Estado da arte sobre a espcie.............................................................................................419
9.2 Ciclo de vida do congro europeu resultante do estudo microestrutural e microquimico de
otlitos de larvas.......................................................................................................................422

9.1 Estado da arte sobre a espcie

O congro europeu, Conger conger (Linnaeus, 1758), um peixe comum no nordeste do oceano
Atlntico, desde a Noruega at o Senegal, incluindo os arquiplagos dos Aores, Madeira e
Canrias. tambm encontrado no Mar Mediterrneo ocidental e no Mar Negro (Bauchot e
Saldanha 1986). Os congros so peixes bentnicos marinhos que vivem na plataforma
continental, desde a linha de costa at profundidades de 500 m, usualmente associados a fundos
rochosos e arenosos (Smith 1981, Bauchot e Saldanha 1986, Bauchot 1987), e muitas vezes
escondidos em buracos ou outras estruturas submersveis (Lythgoe e Lythgoe 1971, Bagenal e
Kenney 1973, Wheeler 1985, Hayward e Ryland 1995). Os congros so uma importante espcie
para a pesca comercial e recreativa do oceano Atlntico Nordeste e mar Mediterrneo, sendo
capturados principalmente com redes de arrasto-de-fundo, armadilhas e palangre (espinhis)
(Figueiredo et al. 1996). A captura total mundial registada para a espcie em 2012 foi de 13.203
toneladas. Os pases com as maiores capturas foram Espanha (4.740 t), Frana (4.225 t) e
Portugal (1.726 t). comercializado principalmente fresco ou congelado (Moura 1995).
Os congros so telesteos primitivos, pertencentes superordem Elopomorpha e classe
Anguilliformes (De Pinna 1996). Os peixes da superordem Elopomorpha, na qual se inclui
tambm o gnero Anguilla, compartilham uma caracterstica comum importante que a
presena de uma fase larval leptocfala (Hulet e Robins 1989). As larvas de congro (famlia
Congridae) variam muito na forma e, consequentemente, so difceis de identificar. As larvas
so identificadas principalmente pela posio relativa das nadadeiras dorsal e anal, pelo padro
de pigmentao corporal, pela forma da cabea e posio dos olhos, pelo nmero de mimeros e
pela posio da extremidade posterior do rim e da artria renal, entre outros caracteres (Smith
1989). A metamorfose nas larvas leptocfalas um processo profundo e no instantneo, mas as
mudanas ocorrem num espao de tempo relativamente curto. Este processo inclui alteraes
morfolgicas, fisiolgicas e comportamentais (Smith 1989, Yamano et al. 1991).

419
Pouco se sabe acerca da nutrio dos congros na sua fase de larval leptocfala, semelhana de
outros anguiliformes (Smith 1989), pois nunca foram observados organismos reconhecveis no
seu trato intestinal (Hulet e Robins 1989). No entanto estudos recentes sugerem uma
alimentao base de matria orgnica dissolvida e particulada, pelo menos durante a sua fase
larval pr-metamrfica (Otake et al. 1993). Durante a metamorfose, os glicosaminoglicanos
corporais, previamente acumulados, so utilizados como reserva alimentar endgena (Pfeiler
1986). Apenas quando os indivduos completam a metamorfose ento iniciada a sua
alimentao exgena (Smith 1989). Relativamente sua fase de vida juvenil, os congros so
carnvoros e alimentam-se principalmente noite, sendo que a sua dieta consiste principalmente
de peixes, crustceos e cefalpodes (Lythgoe e Lythgoe 1971, Bagenal e Kenney 1973, Smith
1981, Cau e Manconi 1984, Wheeler 1985, Bauchot e Saldanha 1986, Bauchot 1987, Saldanha
et al. 1995). Apesar de no apresentarem variaes sazonais significativas no seu regime
alimentar, a sua dieta parece variar de acordo com o hbitat e com a profundidade. Alm disso
os estudos sugerem que os indivduos deixam de ser alimentar, em particular as fmeas, quando
iniciam a sua migrao pr-reprodutiva para guas mais profundas (Cau e Manconi 1984).
A espcie C. conger conhecida por ter os maiores peixes dentro da famlia Congridae, com
registos de espcimes atingindo de 2,7 m e pesando 65 kg (Bigelow e Schroeder 1953, Wheeler
1985). Sabe-se que as fmeas so maiores que os machos, sendo que estes raramente
ultrapassam 1 m de comprimento (Cau e Manconi 1983). Alm disso, existe uma assimetria na
proporo dos sexos em funo da profundidade da coluna de gua: as fmeas encontram-se nas
guas costeiras pouco profundas, enquanto os machos so encontrados em guas ocenicas mais
profundas (Cau e Manconi 1983). Vrtebras e otlitos foram utilizados com sucesso para a
construo de curvas de crescimento da espcie (Fannon et al. 1990, Sbaihi et al. 2001, Sullivan
et al. 2003). As estimativas dos comprimentos assintticos (FL) de 214 e 271 cm parecem ser
realistas, pois o congro pode atingir esses tamanhos. Os exemplares at a data capturados
tinham uma idade estimada entre 2 a 11 anos, sugerindo uma taxa de crescimento somtico de
10 cm por ano. Acredita-se que quando o congro europeu atinge a maturidade gonadal, por volta
dos 5 a 15 anos de idade, ele dirige-se para guas profundas, no vero (julho, agosto e
setembro), onde realiza uma desova terminal (Lythgoe e Lythgoe 1971, Wheeler 1985). De fato
a ausncia de indivduos maduros, ou em situao de ps-postura, nas guas costeiras do litoral,
sugere que a maturao sexual ocorre durante a sua migrao em profundidade para as suas
reas de desova (Cau e Manconi 1983, 1984, Sbaihi et al. 2001, Sullivan et al. 2003).
Os primeiros registos da captura de pequenas larvas leptocfalas (9-20 mm) de congro europeu
no mar dos Sargaos, mar Mediterrneo e oceano Atlntico Nordeste sugeriram um
comportamento migratrio semelhante enguia europeia (Anguilla anguilla), ou seja a desova
ocorreria no mar dos Sargaos, seguida de uma migrao transocenica das larvas at s costas
europeias e do norte de frica (Schmidt 1931). No entanto esta hiptese foi contestada mais

420
tarde (McCleave e Miller 1994), pois aparentemente as larvas de C. conger capturadas no mar
do Sargaos seriam afinal C. triporiceps, uma espcie rara de congro americano descrita apenas
mais tarde (Kanazawa 1958), e que embora com forma adulta distinta, as larvas so
morfologicamente muito semelhantes a C. conger.
At h presente data, o nico lugar conhecido como zona de postura para a espcie localiza-se a
sudeste da ilha da Sardenha em guas profundas (entre 600 e 800 m) do mar Mediterrneo, pois
foi nesta zona que se capturou fmeas sexualmente maduras e machos em condio de ps-
desova (Cau e Manconi 1983). Esta hiptese apoiada pelo comprimento e pela estimativa de
idades de larvas de leptocfalas pr-metamrficas capturadas em vrios cruzeiros de
investigao no oceano Atlntico Nordeste e Central (Strehlow et al. 1998). Um outro local de
postura situado no oceano Atlntico Nordeste, algures entre Gibraltar e os Aores, a
profundidades entre 3.000 e 4.000 m, frequentemente sugerido para esta espcie (Lythgoe e
Lythgoe 1971, Bagenal e Kenney 1973, Hayward e Ryland 1995). Este local de postura poder
funcionar como uma zona de recrutamento para a populao do norte da Europa (Lythgoe e
Lythgoe 1971), embora no existam quaisquer dados de suporte para corroborar esta hiptese.
Pensa-se que a aps a postura, a disperso das larvas atravs das correntes ocenicas at as
zonas costeiras de alimentao possa levar de um a dois anos (Lythgoe e Lythgoe 1971, Bagenal
e Kenney 1973, Strehlow 1992). Uma durao larval longa poderia explicar a grande gama de
disperso das larvas at ao incio da metamorfose (Strehlow et al. 1992). Estimou-se em cerca
de 300 dias, a durao da fase larval com base na microestrutura dos otlitos de larvas pr-
metamrficas (com 100 mm de comprimento) (Antunes 1994). Recentemente, com base em
colees histricas de larvas pr-metamrficas capturadas em diversos cruzeiros no Atlntico
Central e Nordeste, sugeriu-se, com base na idade e tamanhos dessas larvas, um cenrio para a
disperso e migrao das larvas de congro (Strehlow et al. 1998). A postura ocorreria no mar
Mediterrneo, e depois de um curto perodo de crescimento, as larvas (> 30 mm), por volta de
novembro, sairiam pelo Estreito de Gibraltar, e iniciariam uma migrao em direo noroeste,
para o sul de Portugal e Espanha, estendendo-se depois a toda a zona do oceano Atlntico Leste
e Central. Nesta rea as larvas teriam um segundo perodo de crescimento que duraria at o
incio do prximo vero (chegando a 130-150 mm e 165 mm de comprimento mximo),
seguindo-se uma nova migrao na direo das guas costeiras do talude continental, com um
possvel regresso ao mar Mediterrneo. Pensa-se que esta migrao costeira possa induzir a
metamorfose. No entanto, a localizao e a durao da metamorfose ainda desconhecida.
Embora os congros sejam um importante componente pisccola do ecossistema marinho da
plataforma continental do Atlntico Nordeste e mar Mediterrneo, pouco se sabe acerca dos
locais de postura, migrao e recrutamento costeiro da espcie. Embora tenha sido sugerido
nalguns livros de texto cientficos que o congro europeu, C. conger, tem um lugar de desova
algures no oceano Atlntico Nordeste, situado entre o Estreito de Gibraltar e os Aores

421
(Lythgoe e Lythgoe 1971, Bagenal e Kenney 1973, Wheeler 1985, Hayward e Ryland 1995),
no h dados que suportem esta informao. Atualmente, a nica rea de desova bem conhecida
para a espcie situa-se a leste da Bacia Central do mar Mediterrneo (Cau e Manconi 1983).

9.2 Ciclo de vida do congro europeu resultante do estudo microestrutural e microquimico

de otlitos de larvas

Larvas de congro, capturadas ao longo de uma ampla rea geogrfica, e s quais pode ser
atribuda uma idade por contagem dos incrementos dirios dos otlitos, conjuntamente com
informao sobre o padro de circulao das correntes nessa rea permitem mapear as
trajetrias de disperso e migrao larval. Com base na idade estimada das larvas capturadas e
na velocidade das correntes superficiais, o retroclculo da data de ecloso larval permite inferir
acerca da localizao da rea de postura. Embora a captura de larvas leptocfalas em ambiente
ocenico seja difcil e dispendiosa, e requeira o uso de embarcaes de investigao e aparelhos
de pesca muito particulares, o acesso a exemplares oriundos de colees histricas ou
diretamente obtidos por captura no oceano Atlntico, revelaram-se de extrema importncia para
elucidar do ciclo de vida do congro europeu.
A disperso do congro europeu da sua rea de desova no mar Mediterrneo, atravs do Estreito
de Gibraltar, para a regio Central e Nordeste do oceano Atlntico pode ser parcialmente
explicada por via de um transporte passivo pela contra-corrente costeira portuguesa. o fluxo
predominante no inverno, a partir do qual a disperso larval pode ter lugar na direo noroeste.
No entanto, isto no pode explicar como algumas pequenas larvas pr-metamrficas tero
chegado aos Aores (Figura 9.1) a partir do mar Mediterrneo com base no padro de circulao
predominante do oceano Atlntico Nordeste. No cientificamente plausvel que larvas
leptocfalas pequenas (com cerca de 50 mm) tenham sado do mar Mediterrneo em direo ao
Arquiplago dos Aores, e que para isso tenham percorrido uma distncia de cerca de 3.000 km
em linha reta em cerca de 2 a 3 meses (idade estimada das larvas), quando as correntes
oceanografias desta rea so na direo oposta (Figura 9.2). Esta via de migrao das larvas s
poderia ser possvel para os espcimes mais velhos e por via uma disperso acidental
impulsionada pelas correntes localizadas gerados por turbilhes de mesoescala, ou se as larvas
tivessem um comportamento natatrio orientado e muito ativo (ou seja, cerca de 35 a 44
km/dia). Estes dados sugerem um outro lugar de postura para o congro perto do arquiplago dos
Aores (Correia et al. 2002 a).

422
 Oceano
Atlntico Europa

Aores
latitude (N)

Madeira
frica

Canrias

longitude (W)

Figura 9.1 - Locais de amostragens no nas Ilhas dos Aores onde se capturaram larvas
leptocfalas pre-metamrficas de Conger conger em novembro de 1999 e junho de 2000 a
bordo do navio de investigao Arquiplago (Adaptado de Correia et al. 2002 a).

Espanha
Portugal
Aores
latitude (N)

Madeira

Oceano Ilhas Canrias

Atlntico frica

longitude (W)

Figura 9.2 - Padro de circulao das correntes no oceano Atlntico Nordeste: (AC) Corrente
dos Aores, (CC) Corrente de Canrias, (PC) Corrente Portuguesa, (PCCC) Contra Corrente
Costeira Portuguesa e (MW) gua Mediterrnica (Adaptado de Correia et al. 2003 a).

423
A taxa de deposio dos microincrementos nos otlitos em vrios peixes anguiliformes
aparentados do congro reconhecidamente diria na sua fase larval (Mochioka et al. 1989,
Tsukamoto 1989, Umezawa et al. 1989, Umezawa e Tsukamoto 1991, Martin 1995, Arai et al.
2000b, Cieri e McCleave 2001, Sugeha et al. 2001). Partindo do pressuposto de que tambm
nesta espcie os incrementos primrios so depositados numa base diria, a idade estimada das
larvas pr-metamrficas capturadas nos Aores variou entre 69 e 275 dias (Figura 9.3). Isto
significa que a poca de postura para esta espcie alargada no tempo, e ocorre entre dezembro
e julho, com um pico anual no incio do vero. Estes resultados so concordantes com a captura
de pequenas larvas leptocfalas de C. conger no mar Mediterrneo (Schmidt 1931) e com a
distribuio temporal e espacial de larvas pr-metamrficas no oceano Atlntico Nordeste e
Central (Strehlow et al. 1998). Embora os valores estimados para a estao de desova por via
das larvas leptocfalas capturadas no Atlntico Nordeste sejam ligeiramente diferentes (abril a
outubro), ambos os estudos sugerem um perodo de desova alargado para o congro europeu.
pocas de postura relativamente alargadas no tempo foram tambm reportadas para C.
myriaster (setembro a fevereiro) e C. oceanicus (outubro a dezembro) tendo por base as datas de
amostragem e as idades estimadas por via da contagem dos incrementos primrios de
leptocfalos (Lee e Byun 1996, Correia et al. 2003).

Figura 9.3 - Microfotografia de microscopia eletrnica de varrimento mostrando a

microestrutura de um otlito de uma larva pr-metamrfica de Conger conger, onde se
observam os incrementos primrios (pontos brancos), (P) Primordium, (HC) marca da ecloso
larval e (FFC) marca da primeira alimentao exgena (Adaptado de Correia et al. 2003).

A correlao significativa entre o tamanho dos otlitos e a idade das larvas em

desenvolvimento, sugere o uso potencial do otlito para representar a idade do peixe. No
entanto, como j observado para C. myriaster (Lee e Byun 1996), o crescimento somtico e o

424
crescimento dos otlitos tornar-se desacoplado durante a fase metamrfica para C. conger
(Correia et al. 2006) e C. oceanicus (Correia et al. 2004). A taxa de crescimento somtico das
larvas leptocfalas em desenvolvimento de C. conger estimadas a partir da regresso linear foi
de 0,31 mm/dia. Embora este valor caia dentro da taxa de crescimento reportada por vrios
autores para outras espcies, nomeadamente para o gnero Anguilla (Boetius e Harding 1985,
Kleckner e McCleave 1985, Castonguay 1987, Tesch 1998), parece um pouco baixa e assumir
uma regresso linear simples no , provavelmente, adequado para uma curva de crescimento
dos leptocfalos. Recentemente observou-se um comprimento total de 2,5 mm para larvas recm
eclodidas artificialmente de C. myriaster e obteve-se uma relao curvilnea comprimento-idade
para os indivduos a partir de larvas com 19 dias de idade, e com uma taxa de crescimento de
cerca de 0,9 mm/dia para os primeiros 7 dias aps a ecloso (Horie et al. 2002).
Embora os congros sejam peixes exclusivamente marinhos durante toda a sua fase de vida,
possvel observar dos finais de outubro a meados de junho a entrada de larvas metamrficas de
C. conger na desembocadura dos rios portugueses por transporte tidal durante a transio da
baixa para a preia-mar (Correia et al. 2002 a,b). O mesmo est descrito para os congros japons
(C. myriaster) e americano (C. oceanicus), embora em pocas distintas do ano (Tanaka et al.
1987, Able e Fahay 1998). Isto permite-nos obter alguns exemplares como resultados de
capturas acessrias de outras pescarias, nomeadamente da pesca do meixo no rio Minho,
localizado a norte de Portugal, com recurso a artes de pesca especializadas, como sejam a tela
(Antunes e Correia 2003).
As larvas capturadas so posteriormente identificados pela sua morfologia externa, padro de
pigmentao e pela contagem dos seus mimeros (D' Ancona 1931). Particularmente importante
a utilizao dos rcios (razes) entre nmero de mimeros pr-anais/nmero de mimeros
totais e comprimento pr-anal/comprimento total, como critrios para diferenciar os estdios de
desenvolvimento pr-metamrfico e metamrfico, das larvas leptocfalas de congro (D' Ancona
1931, Schmidt 1931, Castelo 1970, Strehlow et al. 1998, Correia et al. 2002 a, b).
A microestrutura dos otlitos dos leptocfalos de C. conger durante o seu desenvolvimento
larval semelhante observada em outras larvas de peixes anguiliformes, nomeadamente de
Anguilla sp. (Tabeta et al. 1987, Lecomte-Finiger e Yahyaoui 1989, Antunes 1994, Wang e
Tzeng 1998, 2000, Arai et al. 2001a). Particularmente marcante a alterao da espessura dos
incrementos primrios, assumidos como anis de crescimento dirio, ao longo do raio dos
otlitos das larvas, fruto da influncia de fatores endgenos e exgenos. A espessura dos anis
de crescimento dirios relativamente constante e estreita na fase pr-metamrfica, mas
aumenta de forma bastante acentuada, e dependendo dos exemplares, por volta dos 170 a 280
dias aps a ecloso larval (Figura 9.4).

425
Figura 9.4 - Microfotografia de microscopia eletrnica de varrimento mostrando a
microestrutura de um otlito de uma larva metamrfica de Conger conger. Pode-se observar em
A o ncleo (c) com o primordium no centro (*), a zona de incrementos contveis (CZ) e a zona
difusa (DZ). Em B observa-se em maior ampliao a zona de transio entra a zona de
incrementos contveis e a zona difusa onde se observa a zona de incrementos espessos (Adaptado
de Correia et al. 2002 a, b

Vrios estudos tm demonstrado que a histria ambiental dos peixes anguiliformes pode ser
reconstruda a partir de anlise do rcio Sr:Ca. Alteraes neste rcio tendo sido associadas a
fatores ambientais, como sejam temperatura (Tzeng 1994), salinidade (Tzeng e Tsai 1994) e
composio qumica da gua (Otake et al. 1994), bem como a fatores fisiolgicos endgenos
(Tzeng 1996, Arai et al. 1997, Otake et al. 1997). O padro de variao do rcio Sr:Ca ao longo
do raio do otlito nas larvas de congro europeu semelhante ao observado noutras larvas
leptocfalas, nomeadamente Anguilla sp. e Conger sp. (Otake et al. 1994, 1997, Tzeng 1994,
1996, Tzeng e Tsai 1994, Arai et al. 1997, 1999ab, 2000b, 2001b, 2002, Wang e Tzeng 1998,
2000, Marui et al. 2001). O rcio Sr:Ca mais baixo no primrdio e na borda do otlito.
Embora tenha sido sugerido que o baixo teor de Sr observado no primrdio dos otlitos nas
enguias seja provavelmente devido origem dulaqucola materna do saco vitelino (Tzeng e
Tsai 1994, Wang e Tzeng 2000), os resultados obtidos com espcies estritamente marinhas,
mostram que esta caracterstica no pode ser associada nos congros com uma mudana de
salinidade, mas que provavelmente refletem a composio qumica orgnica do primrdio. Por
outro lado, a relao Sr:Ca que aumenta gradualmente ao longo da fase pr-metamrfica regista
uma diminuio abrupta coincidente com o aumento da espessura dos microincrementos
(Figuras 9.5 e 9.6). Este momento considerado marcar o incio da metamorfose nas larvas e
observado em diversas outras espcies de peixes anguiliformes, inclusive em C. myriaster e em
C. oceanicus (Mochioka et al. 1989, Lee e Byun 1996, Otake et al. 1997, Correia et al. 2004).
Vrios investigadores (Tzeng 1994, Tzeng e Tsai 1994, Wang e Tzeng 2000) propuseram que a
diminuio na relao Sr:Ca nos otlitos das enguias aps a metamorfose reflete a mudana
repentina na salinidade ambiental associada ao comportamento migratrio catadrmico das

426
enguias, ou seja, a entrada em hbitats de gua doce menos ricos em Sr. No entanto os
indivduos de C. conger e C. oceanicus usados nos nosso estudo foram capturados em
ambientes de gua salgada, e como tal pouco provvel que esses ambientes resultem numa
mudana nas relaes Sr:Ca. Esta rpida queda no rcio Sr:Ca a representa provavelmente a
mobilizao rpida de elementos minerais do corpo para desenvolvimento sseo que ocorre
durante o final de metamorfose em larvas leptocfalas, em particular uma diminuio dos nveis
de estrncio no corpo como resultado do catabolismo GAG82 durante a metamorfose (Otake et
al. 1997). Estes estudos sugerem que estas mudanas so uma caracterstica comum aos peixes
com uma fase larval leptocfala e podem estar associadas com as notveis transformaes
morfolgicas e fisiolgicas que ocorrem durante a fase de desenvolvimento larval.

DLGZ WIZ DZ

Sr:Ca
(x 1.000)

Largura do
incremento (m)

Figura 9.5 - Microfotografia de microscopia eletrnica de varrimento mostrando a

microestrutura de um otlito de uma larva metamrfica de Conger conger. Pode-se observar a
espessura dos incrementos primrios e as depresses causadas pela microssonda e que nos
permitiu obter os rcios de Sr:Ca. Zona pr-metamrfica (DLGZ), zona de incrementos espessos
(WIZ) e zona difusa (DZ). A seta mostra o incio da transio. (Adaptado de Correia et al. 2002 a, b).

82
Glicosaminoglicanas.

427
 DLGZ WIZ DZ

Largura do incremento (m)

Sr:Ca (x 1.000)
n pontos

Figura 9.6 - Grfico que combina a espessura dos incrementos primrios com o rcio Sr:Ca ao
longo do raio do otlito de uma larva metamrfica de Conger conger. Zona pr-metamrfica
(DLGZ), zona de incrementos espessos (WIZ) e zona difusa (DZ). As setas mostram o incio
metamorfose marcada por aumento abrupto da espessura dos incrementos coincidente com uma
queda do rcio Sr:Ca. (Adaptado de Correia et al. 2002 a, b).

Embora a queda acentuada do rcio Sr:Ca seja associada a uma diminuio dos nveis de
estrncio corporais como resultado de catabolismo GAG durante a metamorfose (Otake et al.
1997), nenhuma explicao cabaz foi dada, at hoje, para o aumento da espessura dos
incrementos observado na denominada zona de incrementos espessos (WIZ) (Figura 9.7).
Contudo uma vez que a metamorfose tem o seu incio antes das larvas atingirem o seu tamanho
mximo, esta zona de microincrementos espessos pode ser resultado de um ltimo perodo de
crescimento das larvas leptocfalas (com durao de 30 a 70 dias, ou seja, o nmero de
microincrementos correspondentes WIZ), antes de se iniciar o encurtamento do corpo, o que
dever ocorrer em torno dos 150 mm de comprimento (D ' Ancona 1931). Embora as larvas
leptocfalas parem de se alimentar no incio da metamorfose (Pfeiler 1986), eles podem ter
algumas reservas energticas corporais remanescentes, que lhes permita temporariamente exibir
algum crescimento somtico. Alis geralmente aceite que a deposio dos anis de
crescimento nos otlitos no afetada pela privao de alimentos, desde que as reservas de
energia do corpo sejam suficientes para permitir o crescimento, embora limitado, do esqueleto
(Marshall e Parker 1982, Campana 1983, Volk et al. 1984, Neilson e Geen 1985).

428
 Primordium

Zona de incrementos
contveis (ICZ)

Zona difusa
(DZ)

AGC

ICZ DZ

Figura 9.7 - Microfotografias de microscopia eletrnica de varrimento mostrando a micro-

estrtutura de um otlito de uma larva metamrfica de congro americano. Zona de incrementos
contveis (ICZ), zona difusa (DZ) e centros acessrios de crescimento (AGC e setas) (Adaptado de
Correia et al. 2003).

Numa fase mais adiantada da metamorfose os microincrementos deixam de ser visualmente

reconhecveis e acabam por desaparecer na zona mais perifrica dos otlitos, denominada de
zona difusa (DZ). Pensa-se que a periodicidade diria de deposio dos microincrementos cessa,
provavelmente como resultado de condies de crescimento desfavorveis, uma vez que as
larvas metamrficas provavelmente tero esgotado as suas reservas energticas alocadas ao
crescimento somtico e comearam a encolher (Correia et al. 2006). Esta zona perifrica difusa,
sem anis de crescimento reconhecveis, tambm associada a uma clara mudana na direo de

429
crescimento do otlito, foi tambm observada em fase avanada da metamorfose larvas
leptocfalas de C. oceanicus (Correia et al. 2004). Curiosamente vrios autores descreveram o
crescimento microestrutural dos otlitos de C. myriaster durante a metamorfose, mas nenhum
identificou a existncia de uma zona perifrica difusa, embora todos eles tenham relatado
diversos problemas na leitura dos otlitos (Tanaka et al. 1987, Mochioka et al. 1989, Lee e
Byun 1996, Otake et al. 1997). Uma zona difusa semelhante, provavelmente resultante de um
perodo de crescimento muito lento e composta de anis de crescimento dirio demasiadamente
finos para serem destrincveis e contados, foi previamente descrita nos leptocfalos da enguia
europeia, A. anguilla, mas antes do incio da metamorfose (Antunes e Tesch 1997). Com base
neste pressuposto, estimou-se aproximadamente uma idade total de cerca de 483 e 736 dias,
para duas larvas metamrficas de congro capturadas no Rio Minho, respetivamente, em abril e
novembro de 1998, usando o que supostamente pareciam ser pequenos fragmentos de estrutura
de anis dentro da DZ. Inicialmente sugeriu-se que independentemente de fatores externos
favorveis, nomeadamente altas temperaturas do final do vero e incio do outono, a zona difusa
poderia representar uma diminuio da espessura dos incrementos devido ao crescimento quase
completo das larvas antes do incio da metamorfose. No entanto, anlise posterior do rcio
Sr:Ca por WDS83 nos otlitos de larvas metamrficas de congro, mostrou que esta zona afinal
formada durante um estdio avanado da metamorfose. Outras hipteses tm sido sugeridas
para explicar a formao desta zona, nomeadamente nas enguias de vidro de A. anguilla, como
sejam uma paragem nas migraes verticais dirias dos leptocfalos (Williamson et al. 1999),
um processo de reabsoro de clcio na poro marginal do otlito durante a metamorfose como
parte do metabolismo corporal (Cieri e McCleave 2000) ou um artefacto resultante de uma m
preparao dos otlitos (Arai et al. 2000a). Relativamente a esta ltima hiptese, e utilizando
diferentes agentes e tempos de abraso qumica da matriz aragontica dos otlitos, incluindo o
uso de uma proteinase, demonstrou-se que a zona difusa no era um artefacto ptico resultante
de uma deficiente preparao dos otlitos, mas uma estrutura real e permanente localizada na
parte perifrica dos otlitos numa fase tardia da metamorfose dos leptocfalos (Correia et al.
2006).
Contudo a complexidade microestrutural dos otlitos de C. conger inclui ainda a ocorrncia de
centros acessrios de crescimento (AGCs) numa fase tardia de metamorfose das larvas
leptocfalas. Estas estruturas esto normalmente presentes durante, ou aps, a metamorfose em
vrias espcies de peixes (Campana 1984, Gartner 1991, Sgrd 1991, Hare e Cowen 1994,
Volk et al. 1995, Modin et al. 1996, Wilson e McCormick 1997, Fischer 1999, Brown et al.
2001, Neuman et al. 2001, Plaza et al. 2001), incluindo C. myriaster (Lee e Byun 1996) e C.
oceanicus (Correia et al. 2004). So considerados acidentes morfolgicos normais dos otlitos e
parecem funcionar como ncleos de cristalizao para deposio de novo material calcrio
83
Espectroscopia de comprimento de onda dispersivo de raio X (WDS).

430
(Campana 1984). O mecanismo associado ao aparecimento destas estruturas no ainda
totalmente compreendido, contudo algumas hipteses tm sido avanadas para explicar a sua
origem associada metamorfose: transio de hbitat (Sgrd 1991), mudana ontogentica na
dieta (Marks e Conover 1993) e/ou alteraes fisiolgicas (Hare e Cowen 1994). conhecido
que os congros sofrem alteraes morfolgicas, fisiolgicas e de hbitat na sua transio de
larvas para juvenis (Yamano et al. 1991, Bell et al. 2003). Portanto, o aparecimento de centros
acessrios de crescimento nos otlitos pode ser resultante de uma mudana do hbitat pelgico
para bentnico, de uma alterao da temperatura e/ou salinidade ambiental, e/ou alterao do
regime alimentar, variveis que so conhecidas por influenciar a aparncia dos otlitos. Um
otlito em transformao, e que ir resultar numa morfologia mais elptica nos indivduos
adultos, pode ser necessrio para navegar por ambientes diferentes para perseguir presas e
detetar a aproximao de predadores (Brown et al. 2001). Na verdade, a gama de frequncias do
som a que os otlitos respondem depende da sua forma (Gauldie 1988), e a variao
intraespecfica de forma observvel nos otlitos de muitos peixes (Lombarte e Castellon 1991),
muitas vezes atribuda adaptao a diferentes habitats (Wilson 1985).
Tem sido sugerido que o congro tem uma fase larval de longa durao (Bauchot e Saldanha
1986), em que as larvas aps ecloso levam cerca de um a dois anos de deriva ocanica at
alcanar as zonas costeiras e se transformarem em juvenis (Lythgoe e Lythgoe 1971, Wheeler
1985, Strehlow 1992). No que diz respeito a localizao exata para os diferentes estdios
larvales, as larvas pr-metamrficas de C. conger parecem estar restritas ao talude continental,
sugerindo-se que as larvas no entram nas guas costeiras da plataforma continental, a menos j
tenham iniciado a metamorfose. Os resultados sugerem que as larvas leptocfalas de congro
europeu demoram cerca de 6-9 meses desde a ecloso at ao incio da metamorfose. Esta
estimativa mais curta do que os 15 meses (1 anos) inicialmente propostos para o final da
fase pr-metamrfica (Strehlow et al. 1998). O C. oceanicus pode aparentemente necessitar de
menos tempo, 2 a 4 meses, para chegar a metamorfose (Correia et al. 2004). Em C. myriaster o
incio da metamorfose ocorre entre os 4 e 8 meses de idade (Otake et al. 1997). As diferenas
interespecficas observadas na durao do estdio larval pr-metamrfico pode estar relacionada
com as diferentes distncias da rea de desova para a rea costeira juvenil e/ou com a dinmica
das correntes ocenicas nas diversas reas geogrficas.
A durao da fase larval leptocfala, em particular a idade em que se inicia a metamorfose,
parecem ser fatores determinantes na capacidade de disperso geogrfica dos peixes
anguiliformes (Cheng e Tzeng 1996) e pode ter sido responsvel pela segregao de espcies
dentro do gnero Anguilla (Wang e Tzeng 2000). A curta durao da fase leptocfala poder
favorecer a reteno ocenica junto a zona de postura, enquanto uma longa durao pode
favorecer a disperso larval (McCleave 1993). O incio da metamorfose pode ser adiado at que
as condies ambientais adequadas estejam satisfeitas (Tzeng 1990), como tem sido sugerido

431
para C. oceanicus (Bell et al. 2003). Larvas com existncias pelgicas longas podem ser mais
suscetveis a serem transportadas por diferentes correntes e esto mais sujeitas a diferentes
condies de crescimento (Benot et al. 2000).
Se metamorfose desencadeada por algum estmulo ambiental, ou ocorre espontaneamente
numa determinada idade ou tamanho , ainda, desconhecido. O comprimento a partir do qual as
larvas leptocfalas de C. conger iniciam a metamorfose parece ser entre 155 e 165 milmetros
com base no registo das maiores larvas pr-metamrficas e metamrficas. Larvas metamrficas
de congro capturadas no rio Minho e mantidas artificialmente em aqurios com temperaturas a
15-16C, completaram a metamorfose em cerca de 1 a 2 meses atingindo um comprimento
final de 70-80 mm, com um rcio comprimento pr-anal/comprimento total de 0,37 ( a,b). Por
comparao, a durao estimada da metamorfose em C. myriaster varivel entre os
investigadores: 23 a 31 dias (Kubota 1961); 22 dias a temperaturas de 18 a 22 C (Asano et al.
1978); 53-75 dias a temperaturas de 10 a 16 C (Lee e Byun 1996); e 71 dias a temperaturas de
11 a 15 C (Otake et al. 1997). A temperatura da rea de amostragem, a dificuldade ou
ambiguidade na identificao do incio e concluso da metamorfose e as condies de cativeiro
artificiais podem resultar em estimativas imprecisas da durao da metamorfose
comparativamente ao que ocorre em meio selvagem. Alm disso, alguns dados indicam que, em
condies artificiais, a taxa de crescimento dos otlitos em larvas metamrficas superior ao
que acontece na natureza. As condies de cativeiro e o estresse da manipulao, parece
produzir um desequilbrio no controle endcrino da metamorfose, levando a uma anormal
elevada taxa de crescimento do otlito. Embora a experimentao animal seja um dos melhores
mtodos para o estudo do crescimento de larvas de peixe, aliada o uso de substncias
fluorescentes, como a tetraciclina e alizarina, como marcadores cronolgicos para estudar o
ritmo de crescimento dirio na zona de difusa dos otlitos, no foi bem-sucedida para esta
espcie (Correia et al. 2006).
A idade a qual ocorre a metamorfose inversamente proporcional taxa de crescimento
somtico, tanto em C. conger, como em C. oceanicus, sugerindo que os peixes de crescimento
mais lento, iniciam a sua metamorfose mais tardiamente (Correia et al. 2002 a, b, 2004). Este
fenmeno foi tambm observado em A. japonica (Tsukamoto e Umezawa 1990, Tzeng 1990,
Cheng e Tzeng 1996) e Megalops cyprinoides (Tzeng et al. 1998), sugerindo que o tempo
necessrio para a migrao das larvas desde o seu local de postura ocenico at as guas
costeiras provavelmente mais curto para as larvas de crescimento rpido. Em geral, larvas de
crescimento rpido, metamorfoseiam mais cedo larvas e nadam mais rapidamente para o hbitat
preferido (Hunter 1972, Miller et al. 1988). Em contraste, larvas com taxas de crescimento
menores, so incapazes de nadar to rpido, prolongando a durao do estdio larval, e
atrasando a metamorfose e o recrutamento costeiro (Victor 1986).
A relao positiva entre a idade de recrutamento e a idade em que ocorre a metamorfose sugere

432
que os indivduos de C. oceanicus que metamorfoseiam num estdio precoce tendem a recrutar
para a zona costeira em idades mais jovens (Correia et al. 2006). Vrios autores encontraram o
mesmo padro em enguias temperadas e tropicais (Tsukamoto 1990, Tsukamoto e Umezawa
1990, Arai et al. 1999ab, 2000b, 2001b, Wang e Tzeng 1998, Marui et al. 2001). Essa relao
no foi possvel estabelecer em C. conger dado que todas as larvas metamrficas apresentavam
uma zona difusa, o que impede a determinao precisa da idade de recrutamento costeiro. No
entanto, dados indiretos (comprimento corporal e rcio comprimento pr-anal/comprimento
total) mostram que as larvas maiores, num estdio mais avanado de metamorfose, foram
recrutados mais cedo para as guas costeiras portuguesas. Assim, o mecanismo de migrao do
congro pode ser resumido da seguinte forma: as larvas com uma taxa de crescimento maior e
que metamorfoseiam mais cedo, so as primeiras a serem recrutadas para as zonas costeiras,
provavelmente com uma idade mais jovem, com um tamanho maior e um estdio de
desenvolvimento mais avanado (Correia et al. 2002 a, b). Esta via de recrutamento costeiro das
larvas parece ser comum em peixes anguiliformes.
Com base em evidncias indiretas (durao da fase pr-metamrfica, data de captura e estdio
de da metamorfose) foi proposto cerca de dois anos para a durao total da fase larval para esta
espcie (Correia et al., 2006). No entanto, a determinao da idade exata das larvas
metamrficas por via da contagem dos anis de crescimento dirios de momento impossvel
de estabelecer devido a existncia de uma zona difusa, e os valores apresentados para a durao
da metamorfose e idade larval total permanecem, infelizmente, especulativos para o congro
europeu. Alm disso, o mecanismo explicativo da formao da zona difusa e centros acessrios
de crescimento nos otlitos de congro, seja ele de cariz ambiental e/ou fisiolgico, ainda no
compreendido e futuras tentativas devem ser feitas para determinar a via e os mecanismos
associados. Contudo a influncia relativa dos fatores endgenos e exgenos sobre a espessura
dos anis de crescimento e nas transies observadas na superfcie dos otlitos permanece ainda
pouco clara. Os cenrios que se traaram neste trabalho, tentando fazer corresponder, de forma
devidamente consubstanciada, a diferentes aspetos microestruturais observveis no crescimento
dos otlitos de C. conger na sua fase larval, vrios eventos ecolgicos, fisiolgicos e
comportamentais que ocorrem durante o seu ciclo de vida (Figura 9.8), carecem contudo de
mais pesquisas no sentido de se corroborar ou rejeitar algumas das hipteses apresentadas.

433
Figura 9.8 - Correspondncia entre a microestrtutura dos otlitos na fase larval de Conger
conger e sua correspondncia com eventos biolgicos decorrentes do seu ciclo de vida.

Embora a anlise preliminar de mtDNA oriundo de larvas leptocfalas sugira a existncia de

alguma diferenciao gentica significativa entre as populaes locais (Correia et al. 2006), a
questo sobre se C. conger tem vrias populaes ou uma nica populao panmtica permanece
por responder. Trabalhos futuros devem incluir a amostragem e anlise de larvas leptocfalas
numa rea geogrfica ampla durante um intervalo de tempo, que luz do conhecimento
oceanogrfico fsico atual, poder dar novas pistas sobre o local e momento da postura, e
proporcionar uma nova viso sobre a migrao das larvas do congro europeu. Alm disso, a
anlise dos espcimes adultos coletados de uma vasta rea do oceano Atlntico Nordeste
(incluindo Madeira e Ilhas Canrias) e Mediterrneo, so essenciais para entender a estrutura da
populao e da variao gentica desta espcie. Uma abordagem multidisciplinar mais recente
que incluiu o uso de assinaturas qumicas elementares e isotpicas dos otlitos combinadas com
tcnicas de biologia molecular contribuiu para o elucidar da estrutura populacional, padres
migratrios e conectividade entre habitats (Correia et al. 2011, 2012).

434
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