sig

nal
ner
veu
La synapse neuro-musculaire : communication
x (on
de entre deux cellules excitables diffrencies
de
dp
ola membrane prsynaptique (neurone)
ris atio
n = p fente synaptique
ote
ntie
motoneurone l d' membrane postsynaptique (cellule musculaire),
act
ion trs diffrencie, avec de nombreuses
cellule invaginations qui augmentent la surface,
musculaire donc la possibilit de fixation de
strie neuromdiateur, et donc de dpolarisation.
(ext)
(int)
N
N
rapsyne maintenant les
N N rcepteurs Ach
nombreux noyaux : la cellule N N N leur bonne place, en
musculaire strie est un liaison avec le
syncytium. cytosquelette
Seuls les noyaux au Synapse neuro-musculaire
voisinage de la synapse
transcrivent les gnes du
rcepteur Ach. actylcholine qui se
fixe sur le
rcepteur
La cellule prsynaptique met un
neuromdiateur, l'actycholine.
Ce neuromdiateur traverses la fente
synaptique (= espace synaptique),
et agit sur des rcepteurs de la
membrane post-synaptique, en
augmentant la permabilit au entre de Na+ grce
sodium. l'ouverture du rcepteur
(canal chimio-dpendant)
==> dpolarisation de la
membrane
Le rcepteur actylcholine a t purifi vers 1975 grce
l'emploi de matriel biologique spcialis. Les muscles Purification du rcepteur
normaux ont peu de synapses, donc peu de rcepteurs.
Organe lectrique de Torpille (Chondrichtyen
l'actylcholine par
marin voisin de la Raie, pouvant produire des chromatographie
dcharges lectriques de 500 V et 0,5 A.
L'organe lectrique provient par volution d'affinit, grce l'-
d'un muscle, spcialis dans la gnration de
courant lectrique. Le courant vient de
bungarotoxine
l'entre massive de Na+ dans des cellules 1) on verse sur la colonne
(nombreuses cellules en parallle et en un extrait cellulaire
srie). Il y a donc de nombreux rcepteurs colonne de contenant une
actylcholine. chromatographie : multitude d'autres
-bungarotoxine : neurotoxine de serpent voisin phase fixe constituants cellulaires
du Cobra. Elle inhibe spcifiquement, avec sur laquelle mlangs aux
une liaison trs forte, le rcepteur Ach, ce on a fix des molcules recherches
qui provoque la paralysie de la proie. On ligands spcifiques
utilise des toxines marques (ce qui permet des molcules =>capture spcifique
un reprage microscopique) et des toxines recherches. des molcules
fixes sur un support solide, ce qui permet recherches : les
une sparation par chromatographie autres constituants
d'affinit. traversent la colonne et
sortent, alors que les
molcules recherches
Mthode : sont retenues par les
- broyage de l'organe lectrique ligands spcifiques de
- solubilisation des membranes par un la colonne ayant une
dtergent affinit spcifique pour
- chromatographie d'affinit, sur une colonne elles
o est fixe de la toxine de serpent : les
molcules de rcepteur restent fixes la 2) lution des molcules
colonne, alors que les autres constituants recherches : en
cellulaires ne sont pas retenus versant un autre
- lution du rcepteur et analyse biochimiques, liquide, les molcules
se dcrochent, et sont
rcupres.
 2 protomres
, portant O Le rcepteur
chacun un CH3 C
O
CH3 nicotinique
site N+ CH
rcepteur
CH2 CH2
3 actylcholine : un
Ach actyl
(ext)
CH3 canal ionique
choline chimiodpendant
actylcholine = ester de l'acide actique et de
la choline (amino-alcool)
(int)
anneau de 5
leucines
M = 290 kDa (hydrophobes)
canal
ionique ==> tanchit
Le rcepteur a une structure pentamre : 2 , ,
, (ici, le a t enlev) - -
- -
Les divers protomres sont semblables : 4 hlices - -
transmembranaires. L'une des hlice borde le canal, et est - - rsidus acides (-) =>
riche en AA chargs ngativement (GLU-ASP). repoussent les
Chaque protomre porte un site de fixation Ach, ce qui fait anions, et ne
deux sites pour l'ensemble de la molcule. laissent passer
que les cations
Divers ligands possibles pour le rcepteur de l'Ach :
- actylcholine contrle de la permabilit du canal par les rsidus
- nicotine (d'o le nom de rcepteur nicotinique) Fonctionnement normal du rcepteur nicotinique actylcholine :
- bungarotoxine (==> paralysie) - l'tat normal, le canal est ferm
- curare (toxine vgtale entranant aussi une paralysie) - s'il y a fixation de 2 Ach sur les 2 sites rcepteurs, la conformation
- la myasthnie grave est une maladie auto-immune, o change, et le canal s'ouvre, d'o une forte entre de Na+ (plus d'un
l'organisme fabrique des anticorps contre le rcepteur million d'ions par seconde) : c'est un canal ionique
Ach. chimiodpendant.
- l'Ach reste statistiquement fix au rcepteur tant qu'il existe de l'Ach
dans la fente synaptique : il y a un quilibre Ach libre / Ach fix.
- normalement, l'Ach prsente dans la fente synaptique est rapidement
hydrolyse par l'actylcholinestrase qui s'y trouve. Donc l'Ach n'est
plus fixe sur le rcepteur, qui peut revenir l'tat ferm.
- mme si l'Ach reste fixe sur le rcepteur, le canal se referme
spontanment ("tat dsensibilis" ).
Mise en vidence de la dualit d'action de l'actylcholine :
- l'Ach stimule la fibre musculaire strie squelettique, mais inhibe la fibre cardiaque Deux types de rcepteurs
- la nicotine est un agoniste de l'Ach (facilite son action) sur la fibre strie, mais n'a pas
d'effet sur la fibre cardiaque.
l'actylcholine :
- Par contre, la muscarine est un agoniste de l'Ach pour les fibres cardiaques, et n'a pas nicotinique et
d'effet sur la fibre strie squelettique.
=> il existe (au moins) deux types de rcepteurs. muscarinique

cellules musculaires
cellules musculaires stries
cardiaques, cellules
lieux squelettiques musculaires lisses
agonistes nicotine muscarine
atropine (en application sur
curare (flches l'oeil, cause la dilatation de
empoisonnes au curare ==> la pupille par relchement
antagonistes paralysie de la proie) des muscles
rcepteur protines G (un
canal ionique seul protomre, 7 hlices
chimiodpendant (5 transmembranaires). Action
type protomres). Action rapide complexe et lente, en
molculaire par ouverture directe de particulier par ouverture
du rcepteur canaux Na+ indirecte de canaux K+
Dans l'ordre d'importance connatre :
- actylcholine, et ses deux types de rcepteurs, nicotinique et muscarinique.
Diversit des
neuromdiateurs
- noradrnaline et autres catcholamines (adrnaline, DOPA, dopamine...):
agissent toujours par des protines G htrotrimriques, grce un
rcepteur 7 hlices transmembranaires. CHOH CH2 NH3
La fixation du messager provoque un changement de conformation du
rcepteur, donc de la protine G, qui devient capable de fixer le GTP au
lieu du GDP sur son protomre . Les protomres se sparent et vont HO
agir sur d'autres molcules...
OH
noradrnaline = norpinphrine
- GABA = acide gamma-amino-butyrique : synapses inhibitrices, qui
empchent la dpolarisation.
NH
- divers acides amins tels que l'acide glutamique... 2
(ext)

protine
(int) G

COOH

Rcepteur de noradrnaline, 7 hlices transmembranaires. La partie N

terminale est l'extrieur, comme d'habitude, et la partie N terminale
ainsi que la boucle prcdente se lient la protine G.
 L'actylcholinestrase est synthtise par le
L'actylcholine est synthtise par des Inactivation du pricaryon (= corps cellulaire) du neurone,
enzymes de la cellule prsynaptique
neuromdiateur aprs son puis transporte par des vsicules jusqu' la
terminaison synaptique, et exocyte dans la
action sur la cellule post- fente synaptique.
C'est une enzyme trs active : il faut moins de 2
Ach dans des synaptique ms pour inactiver l'Ach de la fente
vsicules synaptique.
prsynaptiques Importance de l'actylcholinestrase :
cellule Ach captur par Des substances toxiques, en particulier des
nerveuse l'actylcholinestrase gaz de combat, ont pour cible l'Ach-
Ach mis dans la estrase
fente ==> blocage de l'hydrolyse ==> perturbation
synaptique du message nerveux.
O
CH3 C CH3
O
espace CH2 CH2 N+
CH3
synaptique
CH3

CH3
O
CH3 C OH CH2 CH2 N+
CH3
cellule musculaire Ach fix sur le
rcepteur =>
OH
CH3
pntration de
Rsultats de l'hydrolyse :
Na+
- acide actique
- choline

L'actylcholine est dtruite en tant hydrolyse, mais les autres neuromdiateurs sont plutt
recycls .
Par exemple, la noradrnaline est rabsorbe par la cellule nerveuse prsynaptique. Ce
recyclage est inhib par la cocane (la cocane a des effets "sympathico-mimtiques")
Expriences historiques de Sutherland vers 1950
Mise en vidence du rcepteur
Le foie est un effecteur important pour rguler la
glycmie : libration de glucose dans le sang par membranaire pour l'action du
glycognolyse, stockage du glucose sous forme de
glycogne par glycognogense.
glucagon sur les hpatocytes
Le glucagon est une hormone hyperglycmiante libre glucagon
par le pancras (ilts de Langerhans). Cette (en bleu) augmentation de l'activit
hormone agit sur le foie, en provoquant la mesure de l'activit glycogne-
phosphorolyse du glycogne par l'enzyme phosphorylase par
glycogne-phosphorylase (enzyme cytosolique) : phosphorylase l'addition de glucagon :
glycogne c'est normal
glycognen + (P)i ---> glycognen-1 + glucose 1(P) phosphorylase
(en rouge) glucagon
(en bleu) pas
d'augmentation,
mesure de l'activit
alors que

n
go
phosphorylase l'enzyme y est

nt gon
a
uc
physiquement

ea ca
gl

ag lu
de

rn g
s u de
n

yla la
tio

au ition

se
or nt
di

ph tie
ad

os on
ad

ph i c
qu
ce
nt

mesure de l'activit augmentation de

rif

Situation des organes broyat de

ug

cellules de l'activit
at

phosphorylase
io

foie phosphorylase
n

remlange
Conclusion :
avec le culot Il y a dans les membranes quelque
chose d'indispensable l'action de
l'hormone (glucagon) sur la cellule-
cible (hpatocyte).
Le rcepteur de l'hormone est sur la
membrane plasmique, et envoie un
second messager vers le cytosol,
o est l'enzyme qui va tre active.
carbone Adnine
5'
CH2 O
HC CH Formation et destruction de l'AMPc
O
O cycle ribose (P) O CH2 Adnine CH2 O Adnine
O normal
O O O CH2 O Adnine
CH CH (P)
(P) (P)
P
OH O O
O- O
carbone 3' (P) adnylate cyclase phosphodiestrase
cycle form par la liaison (enzyme
phosphodiester (entre membranaire)
structure de l'AMPc
5' et 3')
L'AMP cyclique est une molcule "tordue" : l'nergie pour
faire la liaison phosphodiester provient de l'hydrolyse
de l'ATP, et cette liaison phosphodiester peut se
couper spontanment.
Le glucagon se fixe sur son rcepteur, et
en change la conformation, ce qui
change la conformation de la protine
G, dont la sous-unit devient capable
glucagon de fixer le GTP au lieu du GDP.
Le protomre se dtache, et va activer
l'adnylate-cyclase, qui transforme C'est l'AMPc qui va agir l'intrieur de la
l'ATP en AMPc, cellule, en activant ou en inactivant des
(ext) enzymes cellulaires (c'est un effecteur
allostrique de ces enzymes).

rcepteur On dit que l'AMPc est un "second messager",

au ou "messager intracellulaire", par
(int) glucagon GT opposition l'hormone glucagon, qui tait
P le "premier messager", ou "messager
intercellulaire".
GT
P ATP AMPc
GDP
 (trs peu d'hormone)
Cascades d'effecteurs enzymatiques :
---> un peu d'AMPc amplification et diversification du signal

protine kinase active (un Le glucagon est reprsentatif des hormones

protine-kinase hydrosolubles :
inactive peu)
- Peptides et protines (grosse majorit des hormones) :
insuline, glucagon, hormones hypophysaires, hormones
intestinales...
- Catcholamines de la mdullo-surrnale : adrnaline.
phosphorylase-kinase phosphorylase-kinase (P)
inactive active Ncessit de rcepteurs membranaires trs spcifiques :
(un peu plus) Les hormones peptidiques sont de grosses molcules, qui ne
peuvent pas traverser les membranes. Leur rcepteur doit
donc tre membranaire.
phosphorylase (P) active
phosphorylase inactive Elles doivent avoir une forte affinit pour le rcepteur (Km trs
(beaucoup)
faible) : dans le sang, [glucagon] = 100 ng/L, [protines]= 70
g/L ==> il y a 1 g de glucagon pour 700 t d'autres protines.

glycogne glucose(P) De nombreux rcepteurs sont coupls des protines G

(normment) htrotrimriques :
Amplification du signal initial par la cascade d'activation enzymatique : - Le rcepteur est une protine 7 hlices transmembranaires
- Les protines G sont trs varies, et elles sont ancres dans
La petite quantit de glucagon fixe sur son rcepteur permet la formation d'une la membrane par des acides gras.
petite quantit d'AMPc. Cette AMPc active une protine-kinase (en tant - La fixation de l'hormone sur le rcepteur change sa
qu'effecteur allostrique). La protine-kinase active phosphoryle l'enzyme conformation, et dclenche l'change de GDP pour GTP
phosphorylase-kinase, ce qui en active une quantit plus importante. La sur la sous-unit alpha, ce qui spare les sous-units, qui
phosphorylase-kinase phosphoryle la glycogne-phosphorylase, ce qui en vont aller agir sur diverses protines.
active une quantit encore plus importante.
Et finalement, cette grande quantit de glycogne-phosphorylase libre une Ces protines G peuvent avoir diverses actions, en particulier
grande quantit de glucose-phosphate, ce qui permet d'augmenter fortement sur l'adnylate-cyclase ou sur la phospholipase C.
la glycmie.
Diversification du signal :
Cette mme protine-kinase phosphoryle la glycogne-synthtase, ce qui
l'inhibe.
Ainsi, d'une part la libration de glucose est favorise, et d'autre part la
capture de glucose est inhibe.
 H
Une autre action des
PIP2 protines G : activation
de la phospholipase C
rcepteur

phospho-
GT lipase C diacylglycrol,
P pouvant aussi avoir une action
de 2e messager

IP3, soluble,
HO (P) agissant comme 2e messager HO (P) IP3 = inositol
C C C C triphosphate
(P)
(P)
C HO C C HO C
(P) (P)
CH2
OH OH
acide gras -O-CH
OH

CH2O-acide gras CH2

PIP2 = Phosphatidyl-Inositol-diphosphate Diacylglycrol
(bisphosphate)
acide gras -O-CH
Phosphatidyl = diacylglycrol estrifi par un phosphate
Inositol bisphosphate = hexoalcool cyclique, dont 2 OH
sont estrifis par des phosphates
Le phosphate estrifiant le diacylglycrol estrifie aussi un CH2O-acide gras
troisime OH de l'inositol
 Certains rcepteurs
NH2
membranaires sonts des
partie externe se
fixant enzymes
(ext) l'hormone

(int)
partie intracellulaire
avec activit
enzymatique ==>
phophorylation de
COOH protines
membranaires ou
cytosoliques
Structure gnrale d'un rcepteur-enzyme : une seule
hlice transmembranaire

Normalement, les rcepteurs-enzymes ne deviennent actifs

qu'aprs dimrisation.
Cette dimrisation (permise par la fixation du messager) provoque
l'autophosphorylation du rcepteur, qui devient actif en tant que
protine-kinase.
Le rcepteur peut alors phosphoryler des protines-cibles.
Il est finalement inactiv par endocytose par de vsicules
recouvertes de clathrine

exception : le rcepteur de l'insuline, qui est dj dimris.

 I
Hormones liposolubles =
I
O
COOH
strodes + hormones
CH
thyrodiennes (+ rtinodes)
HO I CH2
NH2
I
Hormone thyrodienne T4 = ttra-iodo-thyronine
L'hormone thyrodienne T3 est identique, avec
simplement un iode du cycle de droite en moins.
L'iode n'est pas ionis, donc la molcule est plutt
hydrophobe.

Les rtinodes sont des drivs de la vitamine A

(carotne).

Les hormones strodes sont des drivs du

cholestrol : noyau strol, avec divers
substituants de type alcool (-OH) ou ctone
(=O), d'o leur nom en "...strone" ou "-iol".
HO
Parce qu'elles sont hydrophobes, les
Noyau strol = noyau phnanthrne
hormones liposolubles doivent
(structure de base des strodes)
voyager dans le sang fixes sur des
protines transporteuses plus ou
moins spcifiques. Par exemple, dans
le sang, 99% des hormones
thyrodiennes sont lies des
protines, mais c'est le 1% libre qui
peut agir sur les cellules-cibles.
Exprience
- injection de progestrone radioactive un Cobaye femelle, puis Les hormones liposolubles
autoradiographie des cellules de l'utrus.
- la radioactivit se trouve dans les noyaux de l'endomtre.
agissent sur les noyaux
- c'est donc que l'hormone va agir l'intrieur des noyaux. Le rcepteur cellulaires
est l'intrieur de la cellule.
rcepteur
rcepteur activ
R TATA gne transcrire
site de liaison
Le rcepteur activ va agir sur la chromatine, en stimulant ou en inhibant
l'hormone la transcription des gnes. Il se fixe sur la rgion ERH des gnes-
autres protines, en particulier HSP cibles (Elment de Rgulation Hormonale : rgion du promoteur, en
(protines de choc thermique, = amont du gne).
chaperonines qui maintiennent Les dimres de rcepteur se fixent sur des rgions de l'ADN avec des
la forme) rptitions inverses.
La fixation du rcepteur activ provoque un changement de conformation
rcepteur initialement inactif, dans le cytosol : il ne peut pas se lier de l'ADN, ce qui permet la fixation de l'ARN-polymrase et la
l'ADN ( grosse protine, environ 1000 rsidus) transcription du gne.

NH2 A B C D E COO Importance de la structure du rcepteur :

H Le gne du rcepteur la testostrone est sur le
-
A et B : action C : fixation D : passage E : site de chromosome X. Par mutation, il peut exister un
sur les l'ADN (ERH), dans le liaison rcepteur anormal, ne reconnaissant pas la
facteurs de par des noyau l'hormone testostrone. Les individus mles muts (XY) ont
transcription structures en ==> une morphologie fminine, avec des testicules
doigt zinc dimrisation scrtant la testostrone, mais rests dans
Structure de la molcule de rcepteur l'abdomen : pas de caractres sexuels
secondaires masculins.

R Zn2+ Zn2+
R
protines
rgulatrice
rcepteur dimris s
activ "doigt zinc" : replis de protine,
dtaches
avec des CYS lis des ions
Zn2+ : reconnaissance de l'ADN