Deber No. 3: REPASO- ESPECTROFOTOMETRA.

1) Cul es la concentracin de una solucin de NADH (coeficiente de

absorcin molar a 340 nm igual a 6220 M -1 cm-1), 1 mL de la cual tiene una
absorbancia de 0,16 en una cubeta de 1 cm de paso ptico?

2) Una solucin de NADH tiene una absorbancia a 340 nm de 1,24. Cuntos

mL de esta solucin se debern tomar para preparar 10 ml de una solucin 1
M? Qu absorbancia tendra la solucin as obtenida?

3) Cuntos moles de NADH hay en 10 mL de una solucin que tiene una

absorbancia de 0,31 a 340 nm?

4) A 0,3 mL de una muestra de protena de concentracin desconocida se le

agregaron 0,7 mL de agua y 4,0 mL de reactivo de Biuret y se esper hasta
desarrollo de color. La absorbancia a 540 nm fue de 0,221 en un tubo de 1 cm
de dimetro. A 0,3 mL de una solucin standard (5 mg de protena/mL), se le
agregaron 0,7 mL de agua y 4,0 mL de reactivo de Biuret. Esta mezcla dio
como resultado una absorbancia de 0,161 en un tubo de iguales
caractersticas. El blanco de reactivo fue 0,041. a) Calcular la concentracin de
protena en la solucin desconocida. b) Si empleara 0,5 mL de la misma
muestra, qu volumen de agua y de reactivo de Biuret debera agregar?
Qu absorbancia obtendra?

5) El cido pirvico puede determinarse colorimtricamente por conversin en

su 2,4 dinitrofenilhidrazona. Se realiz una curva de calibracin con diversas
cantidades de cido pirvico, obtenindose los siguientes resultados:

Acido pirvico (g) 20 40 60 80 100 125 150

Lecturas 0,175 0,302 0,435 0,560 0,673 0,795 0,900

Fue analizado un blanco de reactivo por triplicado dando respectivamente:

0,040, 0,050 y 0,045. Se analizaron tres soluciones desconocidas de cido
pirvico que dieron las siguientes lecturas de absorbancia: a) 0,280; b) 0,555 y
c) 0,919. Qu concentracin de cido pirvico tienen dichas soluciones si el
volumen de muestra empleado fue 3 mL?

10) Disee un protocolo de laboratorio para realizar una curva de calibracin

para determinar concentracin de protena empleando la tcnica del Biuret
descripta en el problema 8 teniendo en cuenta que este mtodo posee un
rango de sensibilidad entre 1 y 2,5 mg mL-1.

RESPUESTAS
1) 0,026 mM
2) 0,05 mL
0,006
3) 0,5 moles
4) a) 7,5 mg/mL b) 0,5 mL de H2O, 4 mL de rvo de Biuret, A= 0,341
5) a) 12,2 g/mL b) 26,7 g/mL c) fuera de la curva de calibracin.